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LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

COLESTEROL TOTAL

INSTRUÇÕES GERAIS

1. Neste experimento, você irá aprimorar seus conhecimentos sobre dosagem


bioquímica do colesterol total por meio de uma reação colorimétrica. Esta
técnica é realizada através de um método analítico que se baseia na interação
da matéria com a radiação eletromagnética, calculando o quanto é absorvido e
quanto é transmitido, com o uso do espectrofotômetro.

2. Utilize a seção “Recomendações de Acesso” para melhor aproveitamento da


experiência virtual e para respostas às perguntas frequentes a respeito do
VirtuaLab.

3. Caso não saiba como manipular o Laboratório Virtual, utilize o “Tutorial


VirtuaLab” presente neste Roteiro.

4. Caso já possua familiaridade com o Laboratório Virtual, você encontrará as


instruções para realização desta prática na subseção “Procedimentos”.

5. Ao finalizar o experimento, responda aos questionamentos da seção “Avaliação


de Resultados”.

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RECOMENDAÇÕES DE ACESSO
PARA ACESSAR O VIRTUALAB

ATENÇÃO:

O LABORATÓRIO VIRTUAL DEVE SER ACESSADO POR COMPUTADOR. ELE NÃO DEVE SER
ACESSADO POR CELULAR OU TABLET.

O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB.

SEU PRIMEIRO ACESSO SERÁ UM POUCO MAIS LENTO, POIS ALGUNS PLUGINS SÃO
BUSCADOS NO SEU NAVEGADOR. A PARTIR DO SEGUNDO ACESSO, A VELOCIDADE DE
ABERTURA DOS EXPERIMENTOS SERÁ MAIS RÁPIDA.

1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome;


2. Caso utilize o Windows 7, dê preferência ao navegador Mozilla Firefox;
3. Feche outros programas que podem sobrecarregar o seu computador;
4. Verifique se o seu navegador está atualizado;
5. Realize teste de velocidade da internet.

Na página a seguir, apresentamos as duas principais dúvidas na utilização dos


Laboratórios Virtuais. Caso elas não se apliquem ao seu problema, consulte a nossa seção
de “Perguntas Frequentes”, disponível em: https://algetec.movidesk.com/kb/pt-br/

Neste mesmo link, você poderá usar o chat ou abrir um chamado para o contato com
nossa central de suporte. Se preferir, utilize os QR CODEs para um contato direto por
Whatsapp (8h às 18h) ou para direcionamento para a central de suporte. Conte conosco!

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PERGUNTAS FREQUENTES

1) O laboratório virtual está lento, o que devo fazer?

a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” ->


“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a
opção e reinicie o navegador.

b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de


trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de
máximo desempenho.

Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de


vídeo instalado na máquina.

c) Feche outros aplicativos e abas que podem sobrecarregar o seu computador.

d) Verifique o uso do disco no Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) ->


“Detalhes”. Se estiver em 100%, feche outros aplicativos ou reinicie o
computador.

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2) O laboratório apresentou tela preta, como proceder?

a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” ->


“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a
opção e reinicie o navegador. Caso persista, desative a opção e tente
novamente.

b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de


trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de
máximo desempenho.

Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de


vídeo instalado na máquina.

c) Verifique se o navegador está atualizado.

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DESCRIÇÃO DO LABORATÓRIO

MATERIAIS NECESSÁRIOS

• Banho-maria;
• Caneta marcadora;
• Cubeta;
• Espectrofotômetro;
• Kit Colesterol total (reagente de trabalho e solução padrão de colesterol);
• Micropipeta de 100 µL;
• Micropipeta de 1000 µL;
• Ponteira para micropipeta;
• Recipiente de descarte;
• Suporte para micropipeta;
• Suporte para tubo de coleta;
• Suporte para tubo de ensaio;
• Tubo de coleta com amostra de soro;
• Tubo de ensaio.

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PROCEDIMENTOS

1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO

Higienize as mãos na pia e coloque os equipamentos de proteção individual localizados no


“Armário de EPIs”. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas e óculos de
proteção.

2. IDENTIFICANDO OS TUBOS

Identifique o primeiro tubo de ensaio com a sigla A. Identifique o segundo tubo de ensaio com
a sigla B, o terceiro tubo de ensaio com a sigla P. Em seguida faça a identificação das cubetas.
Identifique a primeira cubeta com a sigla A; identifique a segunda cubeta com a sigla B, e por
fim, identifique a terceira cubeta com a sigla P.

3. ADICIONANDO A AMOSTRA

Pipete 1000 µL do reagente de trabalho. Transfira a solução pipetada para o tubo de ensaio B
(branco). Em seguida, pipete 1000 µL do reagente de trabalho e transfira para o tubo B. Repita
as etapas de pipetagem e transfira o reagente de trabalho para o tubo de ensaio P e A.
Descarte a ponteira. Ajuste o volume da micropipeta de 100 µL para 20 µL. Pipete 20 µL da
solução padrão e transfira a solução pipetada para o tubo de ensaio P (padrão). Descarte a
ponteira e pipete 20 µL da amostra de soro. Transfira a amostra pipetada para o tubo de
ensaio A (amostra) e descarte a ponteira. Homogeneíze a solução agitando o tubo por 20
segundos. Mova os tubos para o banho-maria. Ligue o banho-maria e aguarde por 10 minutos.
Retire os tubos de ensaio do banho-maria.

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4. REALIZANDO A LEITURA NO ESPECTROFOTÔMETRO

Ligue o espectrofotômetro e configure o comprimento de onda para 505 nm. Abra o


equipamento. Pipete 1000 µL do conteúdo do tubo B e transfira o conteúdo para a cubeta B.
Descarte a ponteira. Coloque a cubeta do branco (B) no equipamento e feche o equipamento.
Zere o equipamento. Abra e retire a cubeta do espectrofotômetro. Em seguida, pipete 1000
µL do conteúdo do tubo P e transfira o conteúdo para a cubeta P. Descarte a ponteira. Coloque
a cubeta com a solução padrão (P) no espectrofotômetro, feche o equipamento e realize a
leitura. Retire a cubeta P. Pipete 1000 µL do conteúdo do tubo A e transfira o conteúdo para
a cubeta A. Descarte a ponteira. Coloque a cubeta com a amostra (A) e realize a leitura. Abra
o equipamento e retire a cubeta. Feche o equipamento. Calcule a concentração de colesterol
na amostra utilizando a seguinte fórmula: Colesterol (mg/dL) = Abs. amostra / Abs. padrão x
200. Preencha o laudo com o resultado encontrado.

5. AVALIANDO OS RESULTADOS

Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, localizada na página 08 deste roteiro, e
responda de acordo com o que foi observado no experimento, associando também com os
conhecimentos aprendidos sobre o tema.

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AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS

1. Qual é o conceito da espectrofotometria?

2. O que é absorbância e transmitância?

3. Explique o tipo de reação bioquímica que ocorreu na realização do teste?

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TUTORIAL VIRTUALAB

1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO

Higienize as mãos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pia.

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Visualize o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o
nome “Armário de EPIs” localizada dentro do painel de visualização no canto superior
esquerdo da tela. Se preferir, também pode ser utilizado o atalho do teclado “Alt+2”.

Abra o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse sobre uma das portas.

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Selecione o EPI necessário para a realização do ensaio clicando com o botão esquerdo
do mouse sobre ele. Nesse experimento, é obrigatório o uso de: jaleco, luvas e óculos.

Feche o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse sobre uma das portas.

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2. IDENTIFICANDO OS TUBOS

Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”.

Identifique a cubeta e os tubos de ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse


sobre a caneta marcadora.

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3. ADICIONANDO A AMOSTRA

Pipete 1000 µL do reagente de trabalho clicando com o botão direito do mouse sobre a
micropipeta e selecione a opção “Colocar em reagente de trabalho”.

Transfira a solução pipetada clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta
e selecione a opção: “Colocar em tubo de ensaio B”.

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Repita os procedimentos anteriores, pipete 1000 µL do reagente de trabalho e transfira


para o tubo de ensaio B.

Repita os procedimentos anteriores, pipete 1000 µL do reagente de trabalho, transfira


para o tubo de ensaio P, pipete 1000 µL do reagente de trabalho e transfira para o tubo
de ensaio P.

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Repita os procedimentos anteriores, pipete 1000 µL do reagente de trabalho, transfira


para o tubo de ensaio A, pipete 1000 µL do reagente de trabalho e transfira para o tubo
de ensaio A.

Descarte a ponteira clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Trocar ponteira”.

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Ajuste o volume da micropipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a


micropipeta e selecione a opção “Reajustar volume”.

Configure o volume para 20 µL utilizando seu teclado numérico, em seguida, confirme


clicando com o botão esquerdo do mouse em “OK”.

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Pipete 20 µL da solução padrão clicando com o botão direito do mouse sobre a


micropipeta e selecione a opção “Colocar em solução padrão”.

Transfira a solução pipetada clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta
e selecione a opção “Colocar em tubo de ensaio P”.

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Descarte a ponteira clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Trocar ponteira”.

Pipete 20 µL da amostra de soro clicando com o botão direito do mouse sobre a


micropipeta e selecione a opção “Colocar em amostra de soro”.

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Transfira a solução pipetada clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta
e selecione a opção “Colocar em tubo de ensaio A”.

Descarte a ponteira clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Trocar ponteira”.

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Homogeneíze o tubo A clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o tubo indicado.

Repita o procedimento anterior, homogeneíze o tubo de ensaio P.

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Ligue o banho-maria clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o banho-maria.

Mova o tubo de ensaio clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo indicado e
selecione a opção “Colocar no banho-maria”.

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Repita o procedimento anterior, mova os tubos de ensaio B e P para o banho-maria.

Aguarde por 10 minutos ou avance o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse
em “Avançar”.

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Mova o tubo de ensaio clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de ensaio
indicado e selecione a opção “Colocar no suporte”.

Repita o procedimento anterior, mova os tubos de ensaio B e P para o suporte.

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4. REALIZANDO A LEITURA NO ESPECTROFOTÔMETRO

Visualize o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com


o nome “Espectrofotômetro” ou através do atalho do teclado “Alt+5”.

Ligue o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre o aparelho.

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Ajuste o comprimento de onda clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão
indicado.

Configure o comprimento de onda para 505 nm utilizando o seu teclado numérico e


confirme clicando com o botão esquerdo do mouse em “OK”.

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Abra a tampa do espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o


aparelho.

Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”.

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Pipete 1000 µL do tubo B clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e
selecione a opção “Colocar em tubo de ensaio B”.

Transfira o conteúdo clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Colocar em cubeta B”.

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Descarte a ponteira clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Trocar ponteira”.

Mova a cubeta B clicando com o botão direito do mouse sobre a cubeta B e selecione a
opção “Colocar no espectrofotômetro”.

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Tampe o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o


equipamento.

Zere o equipamento clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão indicado.

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Abra o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o


equipamento.

Mova a cubeta para a bancada clicando com o botão direito do mouse sobre a cubeta e
selecione a opção “Colocar na bancada”.

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Pipete 1000 µL do tubo P clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e
selecione a opção “Colocar em tubo de ensaio P”.

Transfira o conteúdo clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Colocar em cubeta P”.

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Descarte a ponteira clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Trocar ponteira”.

Mova a cubeta P clicando com o botão direito do mouse sobre a cubeta P e selecione a
opção “Colocar no espectrofotômetro”.

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Tampe o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o


equipamento.

Realize a leitura clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão indicado. Anote
o valor do resultado da leitura que aparecer no visor do espectrofotômetro.

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Abra o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o


equipamento.

Mova a cubeta para a bancada clicando com o botão direito do mouse sobre a cubeta e
selecione a opção “Colocar na bancada”.

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Pipete 1000 µL do tubo A clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e
selecione a opção “Colocar em tubo de ensaio A”.

Transfira o conteúdo clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Colocar em cubeta A”.

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Descarte a ponteira clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e


selecione a opção “Trocar ponteira”.

Mova a cubeta A clicando com o botão direito do mouse sobre a cubeta A e selecione a
opção “Colocar no espectrofotômetro”.

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Tampe o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o


equipamento.

Realize a leitura clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão indicado. Anote
o valor do resultado da leitura que aparecer no visor do espectrofotômetro.

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Abra o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o


equipamento.

Mova a cubeta para a bancada clicando com o botão direito do mouse sobre a cubeta e
selecione a opção “Colocar na bancada”.

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Visualize o laudo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão indicado.

Insira o resultado do laudo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o campo
indicado e digite utilizando seu teclado numérico, em seguida, confirme em
“Responder”.

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5. AVALIANDO OS RESULTADOS

Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, localizada na página 08 deste roteiro, e
responda de acordo com o que foi observado no experimento, associando também com
os conhecimentos aprendidos sobre o tema.

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