Propriedades passivas da membrana neuronal

Biofísica de Membranas — prof. Bóris Marin

Fazendo Funcionar
Para esta atividade, utilizaremos o simulador NEURON, disponível em https://www.neuron.yale.
edu/. Na aba Download desta página, você encontrará instruções de instalação para seu sistema
operacional.
Salve todos os arquivos anexados a esta atividade (estão no Moodle, no mesmo lugar onde você
encontrou este PDF) em algum diretório em seu computador. Trabalharemos com o arquivo
membrana_passiva.hoc. Para carregá-lo no simulador:
• no Windows, duplo clique deve funcionar (se o NEURON tiver sido instalado corretamente).
• no Linux e no OSX, abra um terminal, navegue até o diretório no qual você salvou os arquivos,
e digite nrngui atividade_mebrana.hoc
Devem aparecer 7 janelas em seu monitor (parecido com a figura abaixo):
• NEURON Main Menu
• Run Control
• Graph[0] (potencial de membrana)
• Graph[1] (corrente através da membrana)
• IClamp[0] at soma(0.5) (primeiro eletrodo para injeção de corrente)
• IClamp[1] at soma(0.5) (segundo eletrodo para injeção de corrente)
• Soma(0-1) Parameters (parâmetros da membrana)

Também aparecerá uma janela tipo linha de comando (com título nrniv ou sh). Dependendo da
resolução do seu monitor, talvez você tenha de reposicionar as janelas para para conseguir enxergá-las melhor.

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Explorando o Modelo
Ao seguir este roteiro, tenha em mente a ideia de que simulações no computador não são culinária,
nem laboratório de eletrofisiologia.
Aqui, nada vai explodir, estragar ou desaparecer se você fuçar, modificar ou errar algo. Sempre
é possível reverter à versão original do modelo, livre de quaisquer problemas eventualmente
introduzidos. Basta fechar o simulador e recomeçar!

Entendendo o Simulador
O arquivo utilizado define um modelo para um segmento cilíndrico de membrana com 10 µm de
comprimento, 10 2
π µm de diâmetro e área total de 100 µm .
• Faça um desenho deste segmento de membrana, e explique de onde sai este valor para a área
total.
A membrana contém também uma condutância passiva, cujo potencial de reversão é −70 mV e a
densidade de condutância é 1 × 10−4 S cm−2 . Note que estes valores podem ser alterados na janela
Soma(0-1) Parameters.
Vamos agora explorar o que é possível fazer com o modelo, simulando um experimento de current
clamp (injeção de um pulso de corrente na célula, através de um eletrodo). Os parâmetros da injeção
podem ser controlados da janela IClamp[0] at soma(0.5). Atenção: pode ser necessário apertar
Enter após digitar um novo valor (outra forma é usar o mouse, apertando os botões ▼). Você
▲

também pode voltar um parâmetro ao seu valor original apertando o botão ✓.

Para executar a simulação, vá à janela RunControl, e aperte Init & Run . Observe o que acontece
com os gráficos.
• Altere os parâmetros do primeiro pulso de corrente (janela IClamp[0] at soma(0.5)) e execute
a simulação novamente. O que querem dizer os campos del , dur , amp ?
Caso as curvas vermelhas nos gráficos estejam estourando os limites (ou pequenas demais), você
pode fazer um zoom automático clicando com o botão direito do mouse sobre o gráfico, e escolhendo
View... → View=plot .

Para explorar
• Dada a tabela 1 abaixo — já preenchida com parâmetros usados na simulação do modelo —
complete a tabela 2, prestando atenção às unidades de cada parâmetro. O que significa cada
um destes parâmetros?

parâmetro significado valor

diam diâmetro da membrana 10
π µm
L comprimento da membrana 10 µm
cm capacitância específica da membrana 1 µF cm−2
g_pas densidade de condutância passiva 0.0001 S cm−2
e_pas potencial de reversão da condutância passiva −70 mV

Tabela 1: Valores padrão para os parâmetros da membrana no simulador. Todos estes valores
podem ser alterados diretamente da linha de comando (janela nrniv), ou da janela Soma(0-1)
Parameters.

• Faça um desenho do circuito equivalente à membrana sendo simulada, tomando cuidado

para usar os mesmos nomes da tabela 2 para os valores característicos de cada elemento do
circuito. Escreva então a equação correspondente ao circuito.
• Tome a equação do item acima, e escolha o caso particular em que o potencial de repouso
é zero e a injeção de corrente externa é nula. Supondo que o valor inicial do potencial de

2
 parâmetro significado valor
Am área total da membrana ???
G condutância da membrana ???
Rm resistência da membrana ???
Cm capacitância da membrana ???
Vr potencial de repouso ???
τm constante temporal da membrana ???

Tabela 2: Parâmetros a serem determinados dos valores da tabela. Atenção às unidades! 1

membrana é uma constante V (t = 0) = V0 , qual é a solução da equação? Nota: essa equação

é simples o suficiente para que você a resolva de imediato, sem ter de se preocupar com
técnicas obscuras vistas (e provavelmente esquecidas) em IEDO.
• O que muda na solução se houver uma injeção de corrente diferente de zero? (note que
também não é preciso se agoniar com técnicas de IEDO para responder a esta pergunta).
• Repita os dois itens acima, mas agora usando o simulador (tome V0 = −60 mV, por exemplo,
e injete uma corrente constante de 1 × 10−4 nA). Os resultados batem com o que você obteve
das equações?
• Faça simulações variando a amplitude do estímulo de corrente. Você pode manter as curvas
de uma simulação anterior no gráfico clicando com o botão direito do mouse sobre ele e
escolhendo Keep Lines . Os resultados estão de acordo com a resposta anterior?
• Como você determinou o valor da constante temporal τm na tabela 2? Ele depende da
geometria da membrana? e do potencial de repouso? Uma outra maneira de determiná-la
(e que pode ser facilmente feito com células num laboratório) é através da análise da série
temporal do potencial de membrana: τm é o tempo que um desvio no potencial (em relação
ao repouso) leva para decair a 1/e ≈ 36, 8% do seu valor inicial. Ou, equivalentemente, é o
tempo que a membrana leva para atingir (1 − 1e ) ≈ 63, 2% do novo valor de equilíbrio após a
injeção de uma corrente. Faça simulações destes dois protocolos, e veja se o resultado está de
acordo com o que você calculou para τm .
• Verifique se de fato τm não depende das dimensões da célula, repetindo as simulações do item
anterior para membranas com raio ou comprimento distintos.
• Estude agora o efeito de dois pulsos de corrente (o segundo é controlado pela janela IClamp[1]
at soma(0.5)) sobre a membrana. Escolha vários conjuntos de amplitudes (incluindo negativas)
e durações. A resposta da membrana está de acordo com a noção de neurônios “somarem”
suas entradas? Essa soma depende do arranjo das entradas no tempo? Qual é o papel da
constanta temporal τm neste processo?