Universidade da Beira Interior

Aula Prática de Biologia Celular e Molecular

Protocolo4 3
Protocolo

Observação de figuras da mitose em ápices radiculares de Allium cepa (cebola)

INTRODUÇÃO

Chama-se ciclo celular às modificações sofridas pela célula desde a sua

formação até à sua divisão em duas células filhas. O ciclo celular consiste em duas
etapas: a mitose e a interfase, que ocorre entre duas mitoses sucessivas.
A interfase divide-se em três períodos, fase G1, fase S e fase G2, como é visível
na figura 1.

Figura 1- Diagrama de um ciclo reprodutivo típico

em células eurarióticas.

A mitose, é um processo que ocorre em todas as células somáticas de

organismos multicelulares e, por meio dela, uma célula divide-se em duas,
geneticamente idênticas à célula inicial.
O crescimento de um organismo depende da formação de novas células,
formação esta que ocorre nas plantes, nas diversas regiões especializadas –
meristemas - os quais, segundo a sua posição podem ser apicais e intercalares.
A multiplicação celular resulta da divisão mitótica do núcleo das células
somáticas – CARIOCINESE – assegurando-se a repartição da cromatina pelos dois
núcleos filhos, cada um dos quais, mantêm o mesmo numero de cromossomas que a
célula mãe (divisão equacional). A divisão do núcleo é acompanhada geralmente pela
divisão do citoplasma - CITOCINESE.

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 Durante a mitose podem ser
consideradas varias fases, embora o
processo seja contínuo (figura 2):

Figura 2- Esquema geral da mitose.

A – profase - os nucléolos e os
cromossomas estão representados por
filamentos finos; no citoplasma é visível
o áster com os pares de centríolos. B -
estádio mais avançado da profase, em
que os cromossomas encurtam. Vê-se
a constrição primária com o cinetocoro
e, no citoplasma, o fuso entre os
ásteres. C - fim de profase ou pró-
metafase em que o invólucro nuclear
se desintegra e os cromossomas se
ligam às fibras do fuso. D - metafase -
os cromossomas dispõem-se na placa
equatorial. E - anafase os
cromossomas filhos, precedidos pelos
centrómeros ou por
cinetocoros, movem-se em direcção aos pólos. F - telofase os núcleos filhos estão
em vias de reconstituição, tendo-se já iniciado a clivagem celular.

Profase – Esta fase caracteriza-se por:

➢ Aparecimento dos primeiros microtúbulos do fuso

➢ Espiralização dos cromossomas e consequente engrossamento e
encurtamento (condensação)
➢ Desorganização nucléolar
➢ Início da fragmentação da membrana nuclear
➢ Alongamento dos microtúbulos, estendendo-se de pólo a pólo (microtúbulos
polares, dando origem ao fuso acromático)

Pró-Metafase (Pré-Metafase)

➢ Fragmentação total e desaparecimento da membrana nuclear

➢ Início do movimento dos cromossomas em direcção ao plano equatorial já
divididos longitudinalmente em dois cromatídeos

Metafase - Esta fase caracteriza-se por:

➢ Máxima Condensação dos cromossomas

➢ Disposição dos cromossomas na plano equatorial do fuso acromático
formando a – placa equatorial
➢ Máximo desenvolvimento do fuso acromático

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Anafase- Nesta fase ocorre:

➢ Divisão do centrómero
➢ Ascensão polar dos cromatídeos (ou seja, dá-se a separação dos dois
cromatídeos de cada cromossoma migrando um dos dois cromatídeos para um
pólo, e o outro cromatídeo para o outro pólo, esta ascensão faz-se ao longo
das fibras do fuso acromático, com os centrómeros voltados para diante).

Telofase – Esta divisão tem inicio com o fim da ascensão polar e é caracterizada
por:

➢ Desorganização das fibras do fuso acromático

➢ Despiralização dos cromossomas
➢ Reorganização da membrana nuclear
➢ Reaparecimento dos nucléolos

No fim da telofase, enquanto que os dois núcleos filhos se reconstituem, a região da

placa equatorial organiza a futura membrana que separará as duas células filhas.
Portanto, a seguir a cariocinese segue-se a citocinese.

Material

- Ácido acético 3:1 (misturando 70ml de álcool absoluto e 30ml de acido acético),
- Ácido clorídrico 1 N,
- Bisturi,
- Lâminas e lamelas de microscopia,
- Lamparina,
- Orceína acética (55 ml ácido acético glacial + 1 g de orceina + 45 ml H 2O
destilada),
- Raízes de cebola,
- Vidro de relógio

Procedimento experimental

1. Observação de figuras de mitose em ápices radiculares de Allium cepa (cebola)

a) Cortar os vértices com 3mm de comprimento e colocá-las na solução de fixação.
b) Fixação do material em álcool acético (3:1) durante 15’.
c) Colocar num vidro de relógio 9 gotas de orceína acética e uma gota de HCl 1N.
d) Aquecer suavemente até á emissão de vapores, mas sem deixar ferver.
e) Colocar numa lâmina de vidro, uma gota de orceína acética.
f) Retirar os vértices do vidro do relógio e colocá-los na gota de orceína acética.
g) Com uma agulha esmagar (squash) o tecido do vértice.

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h) Colocar sobre o material uma lamela e fazer uma ligeira pressão com o cabo da
agulha.
i) Absorver o excesso de corante com papel de filtro.
j) Observe ao microscópio, se necessário utilize a objectiva de imersão. Com esta
técnica os cromossomas ficam corados de vermelho e o citoplasma cora,
ligeiramente, da mesma cor.

2. Determinação da duração das diferentes fases da mitose.

a) O ciclo celular de uma célula de cebola é aproximadamente de 20h. É possível

estimar a duração de cada uma das fases mitóticas, contando o número de células
em cada um dos estádios em vários campos de observação e utilizando a fórmula
seguinte:

Duração da fase = (nº de células em cada fase/nº total de células contadas) x 20 h

Fase Nº de células Duração da fase

Interfase
Profase
Metafase
Anafase
Telofase
Nº total de células