ASPECTOS TERICOS BSICOS DE CROMATOGRAFIA LQUIDA E GASOSA

CROMATOGRAFIA - Histrico
M. TSWEET (1903): Separao de misturas de pigmentos vegetais em colunas recheadas com adsorventes slidos e solventes variados.
mistura de pigmentos
ter de petrleo

coluna
Cromatografia = kroma [cor] + graph [escrever]

CaCO3

Pigmentos separados

CROMATOGRAFIA - Classificao
FM = Lquido Cromatografia Lquida (CL) Cromatografia Gasosa (CG)

FM = Gs

Slida Em CG a fase estacionria pode ser:

Cromatografia Gs-Slido (CGS)

Lquida

Cromatografia Gs-Lquido (CGL)

CROMATOGRAFIA - Princpio Bsico

Separao dos constituintes de uma mistura devido a interao diferencial do soluto entre 2 fases imiscveis, a fase ESTACIONRIA (FE) e a fase MVEL (FM)

SOLUTO FASE MVEL FASE ESTACIONRIA

DEVEM SER INERTES

CROMATOGRAFIA LQUIDA (LC)

SEPARAO

INTERAO DO SOLUTO NAS 2 FASES (EQUILBRIO) INTERAES DE VAN DER VALLS

LIGAES DE HIDROGNIO

INTERAES DIPOLO-DIPOLO
ATRAO ELETROSTTICA

Fases estacionrias
Si

Interaes
van der Waals

C8
Si

PH

van der Waals

Si

C2

van der Waals

Fases estacionrias
O

Interaes
Dipolo/Dipolo

CN

Si

NH2

Si

N H

H O

Ligao de hidrognio

Si

O O O H H H O

2OH

Ligao de hidrognio

Fases estacionrias PRS

Si H3+N SO3

Interaes
Eletrosttica

CBA
Si

H3+N

Eletrosttica
O-

SAX

-O S 3 Si N+(CH 3)3

Eletrosttica

DOIS FATORES IMPORTANTES

MIGRAO DIFERENCIAL

LARGURA DA BANDA

Poro tamanho de partcula Poro em 1 partcula

Disperso Processos fsicos: difuso Tamanho poros 80 120 (micromolculas)

BANDA CROMATOGRFICA

na linha de base

PARMETROS CROMATOGRFICOS

FATOR DE RETENO (k) FATOR DE SEPARAO () NMERO DE PRATOS (N)

FATOR DE RETENO (k)

k=

tr to to

tr = tempo reteno analito to = tempo morto da coluna

Representa a capacidade de distribuio do soluto nas fases No leva em conta o tempo morto da coluna

tr to k = to
Se: t0 = 1,5 min t1 = 3,5 min t2 = 4,2 min

k1 = 1,3 k2 = 1,8

Como ajustar k:
Ajuste da % de solvente orgnico
Metanol Acetonitrila THF

Rs

0 2 4 6 8 10

2- 10
1- 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

2<k< 10 prefervel
k<2 baixa afinidade pela coluna
k>10 tempo longo de anlise alargamento de bandas

FATOR DE SEPARAO ()

k2
k1

AVALIA A SELETIVIDADE

k1 = 1,3

k2
k1
k2 = 1,8

Se:

k1 = 1,3 k2 = 1,8
= 1,38

= 1 no houve separao

NMERO DE PRATOS (N)

N = 5,54

tr w0,5

Mede a eficincia do sistema Depende da coluna, da amostra e do fluxo da fase mvel

Como aumentar N
- nmero de pratos X fluxo e tamanho de partcula
3 mm
5 mm N 10 mm Flow rate 4.0 mmID 4.6 mmID 6.0 mmID 0.6 mL/min 0.8 mL/min 1.0 mL/min Escolha do menor tamanho de partcula e do fluxo correto para cada coluna

Resoluo
funo da Seletividade () Eficincia da coluna (N) Fator de reteno (k)

( t2 t 1) R s = 1,18 ( w1 + w2 )

Resoluo

Rs = 0.8

Rs = 1.0

Rs = 1.25

Fatores que afetam a resoluo

Mudana no modificador orgnico

a

cd

[ MeOH/H2O ] par crtico : c,d

a b

[ THF/H2O ] par crtico : a,b

a
b

[ MeOH/THF/H2O ]

Nomgrafo
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

ACN / H2O
MeOH / H2O

20

40

60

80

100

10

20

30 40

50 60 70

80

90

100

THF / H2O

Mesma fora e diferente seletividade

INSTRUMENTAO
MIXER

detector injector pump column oven

Fase mvel

One pump used to control 4 reservoirs; mixing is done before pump.

data processor

BOMBA
- Fluxo deve ser constante (0,01-10 mL/min)
- Opes: Simples, gradiente binrio, quaternrio

- Mede a presso sobre o sistema

- Manuteno preventiva (selos, pistes, check valves, etc.)

FASE MVEL
- Solvente grau HPLC (alta pureza)

- Filtrao (membrana 0.45 m)

- Degaseificao do solvente (ultrassom, borbulhamento de He ou automtico) - Purgar os solventes

MODOS DE ELUIO
ISOCRTICO: Uma nica composio de fase mvel ao longo da corrida
GRADIENTE: - Variao da composio da fase mvel ao longo da corrida - Amostras com ampla faixa de k (0,5 < k < 20)

DETECTORES - Classificao
Dispositivos que geram um sinal eltrico proporcional quantidade eluda de um analito

UNIVERSAIS:
Geram sinal para qualquer substncia eluda.

SELETIVOS:
Detectam apenas substncias com determinada propriedade fsico-qumica.

DETECTORES - LC
POLARMETRO

UV

MS

IR

ELETROQUMICO FLUORESCNCIA

Ultra violeta (UV-visvel):

Princpio: Absoro de luz ultravioleta ou visvel pela amostra, quando nela passa radiao eletromagntica.

- Seletivo (molculas com cromforos) - Comprimento de onda () fixo - varivel (190 600 nm) - Varredura (DAD) - Solventes tambm absorvem

nm 190 gua 210 MeOH 200 ACN 330 Acetona 200 Hexano Clorofrmio 245 215 THF
Solvente

mAU

100

HPLC/UV/DAD
Detector A-318 nm

0 200 250 300

nm

B)
Febalosina c1

Spectrum at time 9,14 min.

O O
9,14 m in

150

Spectrum at time 7,63 min.

300 200
mAU

Spe
Spectrum at time

O
m AU

100

1000
m AU

CM1

7,63 m in

CM2 100
50
m AU

1500 1000 500 0

250

500

Febalosina
300 nm 400

m AU

50

100

0
0
0

0 200

O
300
nm

200

10

Minutes
nm

300

20

400 200

200

Spectrum 5 4 at time 18,97 min.

6 3

Spectrum at time 13,71 min.

150
Detector A-323 nmp6 p1 p5 Fo1F2M S
13,71 m in

Sp

A)
300 CM5 200
mAU

Spectrum at time

18,97 m in

600
mAU

7 8

CM4
m AU
m AU

500

MM
400
mAU

p2 p4 p3 p7 p8

400 200 0

100

250

3 bandas principais:

200

50
0

100

- Carbonila = 300-325 nm 200 300 = 220-270 nm400 - Etileno/carbonila - Anel = 200-210 nm nm

Spectrum at time 14,31 min.

0
300
0 400 200

0 0

200

250

200 300
nm
Spectrum at time

10

nm

20

Minutes

Fluorescncia:
Princpio: Emisso de energia fluorescente de um soluto que foi excitado por radiao UV

- Seletivo (molculas que fluorescem) - Exemplo: Aromticos policclicos e duplas ligaes conjugadas - Mais sensvel que UV por ser emisso - Podem ser feitas reaes de derivao pr ou ps-coluna para que o analito se torne fluorescente.

- Reagentes de derivatizao comuns: fluorescamina e cloreto de dansila

Indice de refrao:
Princpio: Mede a diferena no ndice de refrao da fase mvel e do eluente vindo da coluna

- No- seletivo - Sensvel a variaes de: - Temperatura - Presso - Fluxo - Composio fase mvel - Baixa sensibilidade e difcil de estabilizar - Muito usado em cromatografia preparativa

Polarmetro:
Princpio: Mede o efeito da luz polarizada sobre compostos oticamente ativos.

- Seletivo (compostos quirais)

Eletroqumico:
Princpio: Medem a condutntica do eluente ou a corrente associada com a oxidao ou reduo dos solutos

- Seletivo (molculas inicas, oxidveis ou redutveis)

- Alta sensibilidade

- Manuteno peridica dos eletrodos e clulas

- Complexidade de operao

Espectrometria de massas:
Princpio: Determinao da massa de solutos atravs da ionizao e determinao da relao massa-carga (m/z)

- Destrutivo

- Pode ser extremamente seletivo (SIM e massas tandem MS/MS)

- Interfaces de ionizao mais comuns: ESI, ApCI

- Anlise de micro e macromolculas.

- Alta sensibilidade

COLUNAS CROMATOGRFICAS

SLICA (suporte + usado):

- Resistncia mecnica - Variedade de forma, tamanho de partculas e poros

- Instabilidade frente a fases mveis cidas ou bsicas - Superfcie no homegnea

SLICA GRUPOS SILANIS

OH Si HO Si OH

OH Si

OH Si

LIVRES

GEMINAL

VICINAIS

influenciam no grau de acidez da slica

MODIFICAO SUPERFICIAL

- QUIMICAMENTE LIGADAS

- HBRIDAS
- RECOBERTAS COM POLMEROS ORGNICOS

QUIMICAMENTE LIGADAS

REAO DE ORGANOSSILANIZAO

anidras

gua

FASES MONOMRICAS

FASES POLIMRICAS

MONOMRICAS

1) ativao por aquecimento (- H2O) 2) reao do organossilano mono, di ou trifuncional com hidroxilas

COLUNAS :

- C8 - C18 - C30

- Phe - CN - NH2

- etc..

Fases Quimicamente Ligadas

C8
C18 (ODS) forte amostra fraca amostra mdia

amostra
C4

C18 TMS Si

C18 Si OTMS C18 OTMS

OH
C18 OH

CAPEAMENTO
(clorotrimetilsilano)

POLIMRICAS
Pr-hidrlise do agente silanizante

- Rede tridimensional mais espessa

- Maior estabilidade - Dificuldade de controlar reaes entrecruzamento

ENTRECRUZAMENTO HORIZONTAL - Presena de gua somente na superfcie - Mistura de reagentes trifuncionais em diferentes propores

- Filme ordenado e denso - Resistente a fase mvel cida ou bsica

FASES ESTACIONRIAS HBRIDAS

Matriz orgnica-inorgnica

(RO)4Si + n(RO)3SiR + (1,5n+2)H2O SiO2 (RSiO1,5)0,5 + (3n+4)ROH

Tetraalcoxissilano alquiltrialcoxissilano

- Mais estveis do que as quim. ligadas convencionais - Menor quantidade de grupos de silanis - Ultra-fast cromatografia

X-Terra - Waters

- 1/3 a menos silanis - pH 1-12 - alto fluxo - alta temperatura

RECOBRIMENTO COM POLMEROS

-RESISTNCIA MECNICA DA MATRIZ INORGNICA - SELETIVIDADE E INRCIA QUMICA DOS POLMEROS ORGNICOS

- Maior recobrimento dos stios ativos do suporte - Maior seletividade (natureza e quantidade dos grupos funcionais nas cadeias dos polmeros, espessura dos filmes, rea superficial e estrutura de poros do suporte)
Poli(etileno) Poli(butadieno) Poli(estireno) Poli(dimetilsiloxano) Poli(metiloctilsiloxano) Poli(metiloctadecilsiloxano) Politeres Polissacardeos Poliaminas Polinucleotdeos Poliamidas Protenas

Slica Zircnia Titnia Alumina

PREPARAO DO COMPSITO SUPORTE-POLMERO

Deposio sobre a superfcie do suporte sem reticulao entre as cadeias do polmero e ligao qumica entre o polmero e o suporte Interaes dipolo dipolo, ligao de hidrognio, eletrostticas Duas maneiras : 1. Mistura-se o polmero, previamente sintetizado, em soluo com o suporte e depois evapora o solvente 2. Polimerizao in situ de monmeros sobre o suporte

Reao de poliestireno com aminas terciria formando fases de troca inica para anlise de carbohidratos com deteco eletroqumica

Journal of Chromatography A, 845 (1999) 401408

FASES MONOLTICAS
Monolitos: polmeros Forma: disco, haste e tubos

- material sinttico orgnico - polmeros naturais Separao analtica e preparativa - material inorgnico de biopolmeros (protenas)

Propriedades hidrodinmicas - Melhora o transporte de massa pois caminho difusional pequeno, a espessura do filme menor e a rea maior

MODOS DE SEPARAO
NORMAL
REVERSO TROCA INICA

MODO NORMAL
MECANISMO DE INTERAO:

ADSORO
Fase estacionria: + POLAR que a fase mvel
Fase mvel: mistura de solventes orgnicos

Colunas: Slica, Ciano, fenil, amino

MODO REVERSO
INTERAO DA PARTE NO POLAR DO SOLUTO E A FASE ESTACIONRIA

HIDROFOBICIDADE

Fase estacionria: APOLAR Fase mvel: H2O, MeOH, CH3CN

REA DE C SOLUTO

RETENO

Tempo de Reteno e Hidrofobicidade

OH

C18 (ODS) forte OH

Interao fraca

Hidrofobicidade
Se

a amostra possui
: cadeia carbnica : grupo aromtico

CH3CH2CH2---

A hidrofobicidade ser forte

Se

a amostra possui
: grupo carboxlico : grupo amino A hidrofobicidade : grupo hidrxi

-COOH -NH2 -OH

ser fraca

Voids
Voids will cause split peaks.
void
Every peak will be split.

Hard to repair!!!

TROCA INICA
MECANISMO DE INTERAO :

ATRAO ELETROSTTICA
Fase estacionria: Resinas trocadoras de ons (catinicas / aninicas) Fase mvel: Tampo (pH, , fora inica, temperatura)

Aninicas: amnio quaternrio, aminas Catinicas: cido sulfnico, cido carboxlico

PREPARAO DA AMOSTRA
1) COLETA/OBTENO (QUANTIDADE, LUGAR, ETC..)

2) ESTOCAGEM E PREPARAO (ESTABILIDADE)

3) EXTRAO:

- LQUIDO-LQUIDO - LQUIDO-SLIDO - SOXHLET - FLUDO SUPER CRTICO - EXTRAO EM FASE SLIDA (EFS / SPE)

Filtrao
necessria, previamente injeo, usualmente com membranas de 0.45 mm mesh para a remoo do material insolvel.

DESENVOLVIMENTO DE MTODO
Fixas as condies operacionais, o tempo de reteno ajustado de um analito uma constante

AMOSTRA

PADRO

Comparao de cromatogramas da amostra e de uma soluo padro do analito suspeito

CROMATOGRAFIA GASOSA (GC)

CROMATOGRAFIA GASOSA - Histrico

1940
CGS rudimentar CGL proposta (Martin e Synge) Separao de cidos orgni-cos por CGL: 1 cro-matgrafo (Martin e James)

1950

Primeiro equipamento comercial (Griffin & George)

Detector por Densidade de Gs (Martin e James) Detector por Ionizao em Chama (McWillian e Dewar) Detector por Captura de Eletrons (Lovelock e Lipsky)

1960

Colunas Capilares (Golay)

Em 1995, vendas de equipamentos e acessrios para CG nos EUA foram estimadas em mais de US$ 750.000.000.

COMPOSTOS ANALISADOS POR GC

Compostos volteis e termicamente estveis cidos graxos leos essenciais Drogas Pesticidas Explosivos Etc.. Compostos derivatizados Aminocidos Acares Etc..

SHIMADZU
Solutions for Science Since 1875

Interaes -

Constante de Distribuio, KC

Srie de estgios independentes onde acontece o equilbrio entre o analito dissolvido na fase estacionria e no gs de arraste.

KC

AS AM

KC = Constante de Distribuio
[A]S = concentrao do analito na FE

[A]M = concentrao do analito no gs

Afinidade pela FE

[A]S

MENOR RETENO !!!

Volatilidade

[A]M

Cromatograma
tR

SINAL

tM
TEMPO

tR = Tempo de Reteno (tempo decorrido entre a injeo e o pice do pico cromatogrfico)

tM (tempo morto) = Tempo de Reteno do Composto No-Retido (tempo mnimo para um composto que no interaja com a FE atravesse a coluna)

A migrao de um analito pela coluna provoca inevitavelmente o alargamento da sua banda:

TEMPO

Efeitos do alargamento excessivo de picos:

EFICINCIA Capacidade de eluio com o mnimo de disperso do analito.

O Cromatgrafo a Gs
1 2 4 6

5 3
1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso. 2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra. 3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna. 4 - Detector. 5 - Tratamento (Amplificao) de Sinal. 6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).
Obs: em laranja: temperatura controlada

Gs de Arraste
Apenas a carrega a amostra atravs da coluna.

Requisitos:
INERTE: No deve reagir com a amostra, fase estacionria ou superfcies do instrumento. PURO: Deve ser isento de impurezas que possam degradar a fase estacionria.
Impurezas tpicas em gases e seus efeitos:

H2O, O2 hidrocarbonetos

oxida / hidroliza algumas FE incompatveis com DCE rudo no sinal de DIC

Injetor on-column Convencional

1 2
3

1 - Septo (silicone) 2 - Alimentao de gs de arraste 3 - Bloco metlico aquecido 4 - Ponta da coluna cromatogrfica

Injeo on-column de lquidos

1 - Ponta da agulha da microseringa introduzida no incio da coluna. 2 - Amostra injetada e vaporizada instantaneamente no incio da coluna. 3 - Plug de vapor de amostra forado pelo gs de arraste a fluir pela coluna.

Parmetros de Injeo
TEMPERATURA DO INJETOR: Deve ser suficientemente elevada para que ocorra a vaporizao imediata da amostra (sem decomposio)

VOLUME INJETADO: Depende do tipo de coluna e do estado fsico da amostra

COLUNA
empacotada = 3,2 mm (1/4) capilar = 0,25 mm

Amostras Lquidas
0,2 mL ... 20 mL
0,01 mL ... 3 mL

Amostras Gasosas
0,1 ml ... 50 mL
0,001 ml ... 0,1 mL

Slidos: convencionalmente, dissolve-se em um solvente adequado e injeta-se a soluo

Microsseringas para Injeo

LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 mL, 5 mL e 10 mL

mbolo

agulha (inox 316)

corpo (pirex)

Obs: Seringa de HPLC

INSTRUMENTAO - Forno da Coluna

Caractersticas Desejveis de um Forno: AMPLA FAIXA DE TEMPERATURA DE USO Pelo menos de Tambiente at 400oC.

AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO RPIDO Importante tanto em anlises de rotina e durante o desenvolvimento de metodologias analticas novas.

TEMPERATURA UNIFORME E ESTVEL EM SEU INTERIOR Sistemas de ventilao interna muito eficientes para manter a temperatura homognea em todo forno e preciso de 0,1C.

INSTRUMENTAO - Temperatura da Coluna

TEMPERATURA DA COLUNA

CONTROLE CONFIVEL DA TEMPERATURA DA COLUNA ESSENCIAL PARA OBTER BOA SEPARAO EM CG

Programao Linear de Temperatura

Misturas complexas (constitudas de diferentes fraes volteis) ao serem separadas ISOTERMICAMENTE:

TCOL BAIXA:
- Componentes mais volteis so separados - Componentes menos volteis demoram a eluir, saindo como picos mal definidos

TCOL ALTA:
- Componentes mais volteis no so separados - Componentes menos volteis eluem mais rapidamente

Gradiente de Temperatura

Consegue-se boa separao dos componentes da amostra em menor tempo

Parmetros de uma programao de temperatura: TEMPERAT URA

TINI Temperatura Inicial

TFIM Temperatura Final tINI Tempo Isotrmico Inicial tFIM Tempo Final do Programa R Velocidade de Aquecimento

TFIM R TINI tINI TEMPO tFIM

DETECTORES - Definies Gerais

~ 60 detectores j usados em CG ~ 15 equipam cromatgrafos comerciais 4 respondem pela maior parte das aplicaes

DCT TCD
Detector por Condutividade Trmica

DIC FID
Detector por Ionizao em Chama

DCE ECD
Detector por Captura de Eletrons

EM MS
Detector Espectromtrico de Massas

INSTRUMENTAO - Detectores
Mais Importantes:
DETECTOR POR CONDUTIVIDADE TRMICA (DCT OU TCD) Variao

da condutividade trmica do gs de arraste.

DETECTOR POR IONIZAO EM CHAMA (DIC OU FID) ons gerados

durante a queima dos eluatos em uma chama de H2 + ar.

DETECTOR POR CAPTURA DE ELTRONS (DCE OU ECD) Supresso

de corrente causada pela absoro de eltrons por eluatos altamente eletroflicos.

DETECTOR POR ESPECTROMETRIA DE MASSAS (EM OU MS) Eluatos

so transformados em ons e a relao massa-carga (m/z) medida.

DETECTORES- Parmetros Bsicos de Desempenho

QUANTIDADE MNIMA DETECTVEL Massa de um analito que gera um pico
com altura igual a trs vezes o nvel de rudo

SINAL (S)

S N

=3
RUDO (N)

RUDO Qualquer componente do sinal gerado pelo detector que no se origina da amostra

Fontes de Rudo

Contaminantes nos gases Impurezas acumuladas no detector

Aterramento eltrico deficiente

DETECTORES- Parmetros Bsicos de Desempenho

LIMITE DE DETEO Quantidade de analito que gera um pico

com S/N = 3 e wb = 1 unidade de tempo

Mesmo detector, nvel de rudo e massa de analito MAS diferentes larguras de base:

wb

Colunas cromatogrficas

EMPACOTADAS

CAPILARES

COLUNAS EMPACOTADAS - Definies Bsicas

Tubo de material inerte recheado com FE slida granulada ou FE lquida depositada sobre suporte slido.

MATERIAL DO TUBO

ao inox vidro pirex nquel TEFLON

= 3 mm a 6 mm L = 0,5 m a 5 m

MESH

Granulometria do recheio

60 - 80 mesh 80 - 100 mesh 100 - 120 mesh

COLUNAS CAPILARES - Definies Bsicas

Tubo fino de material inerte com FE lquida ou slida depositada sobre as paredes internas. MATERIAL DO TUBO slica fundida vidro pirex ao inox Nylon Silcosteel

= 0,1 mm a 0,5 mm L = 5 m a 100 m

Famlias de Colunas Capilares :

WCOT (Wall coated open tube) FE liquida depositada (ligada // entrecruzada) sobre as paredes
internas.

PLOT (Porous layer open tube) Camada de FE slida presa s paredes internas SCOT (Support coated open tube) Paredes internas revestidas com material de recheio similar
ao das colunas empacotadas

FASES ESTACIONRIAS - Conceitos Gerais

LQUIDOS Depositados sobre a superfcie de slidos porosos inertes

(colunas empacotadas) ou de tubos finos de materiais inertes (colunas capilares)

FE lquida

SUPORTE Slido inerte poroso

Tubo capilar de material inerte

FASES ESTACIONRIAS - Conceitos Gerais

Para minimizar a perda de FE lquida por volatilizao, normalmente ela :

Entrecruzada: as cadeias polimricas so quimicamente ligadas entre si

Quimicamente ligadas: as cadeias polimricas so presas ao suporte por ligaes qumicas

SLIDOS Colunas recheadas com material finamente granulado

(empacotadas) ou depositado sobre a superfcie interna do tubo (capilar)

Colunas Capilares x Empacotadas:

L = N Colunas mais eficientes FC = 1 ... 10 mL.min-1 Controle de vazo mais difcil Vi Dispositivos especiais de injeo

FASES ESTACIONRIAS - Caractersticas de

uma FE ideal

FE Seletiva: separao adequada dos constituintes da amostra

FE pouco Seletiva: m resoluo mesmo com coluna de boa eficincia

Regra geral: a FE deve ter caractersticas tanto quanto possvel prximas das dos solutos a serem separados (polar, apolar, aromtico ...)

FASES ESTACIONRIAS - Caractersticas de

uma FE ideal
AMPLA FAIXA DE TEMPERATURAS DE USO Maior
flexibilidade na otimizao da separao.

BOA ESTABILIDADE QUMICA E TRMICA Maior durabilidade

da coluna, no reage com componentes da amostra

POUCO VISCOSA Colunas mais eficientes (menor resistncia

transferncia do analito entre fases)

DISPONVEL EM ELEVADO GRAU DE PUREZA Colunas

reprodutveis; ausncia de picos fantasma nos cromatogramas.

FASES SLIDAS
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE slida a ADSORO

A adsoro ocorre na interface entre o gs de arraste e a FE slida Slidos com grandes reas superficiais (partculas finas, poros) ADSORO Solutos polares Slidos com grande nmero de stios ativos (hidroxilas, pares de eletrons...)

FASES SLIDAS
- Slidos finamente granulados (dimetros de partculas tpicos de 105 m a 420 m). - Grandes reas superficiais (at 102 m2/g).

Mais usados:
-Polmeros Porosos - Porapak (copolmero estireno-divi-nilbenzeno) - Tenax (polixido de difenileno) -Slidos Inorgnicos - Carboplot, Carboxen (carves ativos grafitizados) - Alumina - Peneira Molecular (argila microporosa)

Principais Aplicaes:

- Separao de gases fixos - Compostos leves - Sries homlogas

GASES DE REFINARIA Coluna:Carboxen-1000 60-80 mesh; 15 x 1/8 TCOL: 35oC a 225oC / 20oC. min-1 Gs de Arraste: He @ 30 ml.min-1 Detector: TCD

FASES LQUIDAS
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE lquida a ABSORO

A absoro ocorre no interior do filme de FE lquida (fenmeno INTRAfacial)

Filmes espessos de FE lquida Grande superfcie lquida exposta ao gs de arraste Interao forte entre a FE lquida e o analito (grande solubilidade)

ABSORO

FASES ESTACIONRIAS - Famlias de FE Lquidas

POLIGLICIS Muito polares; sensveis umidade e oxidao; so ainda muito
importantes. Principal: Polietilenoglicol (nomes comerciais: Carbowax, DB-Wax, Supelcowax, HP-Wax, etc.)

Estrutura Qumica:

CH2 CH2

OH n

TCOL: 200oC (isotrmico) Detector: FID

AMINAS ALIFTICAS Coluna:4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH Gs de Arraste: N2 @ 20 mL.min-1 Amostra: 0,01 mL da mistura de aminas

FASES ESTACIONRIAS - Famlias de FE Lquidas

SILICONES (polisiloxanas) As FE mais em-pregadas em CG.
Cobrem ampla faixa de polaridades e propriedades qumicas diversas.

CH3 H3C Si CH3 O

R1 Si R2 O n

CH3 Si CH3 CH3

R1, R2 = qualquer radical orgnico

- Ligao Si-O extremamente estvel = elevada estabilidade trmica e qumica. - Praticamente qualquer radical orgnico ou inorgnico pode ser ligado cadeia polimrica = FE ajustveis a separaes especficas + facilidade de imobilizao por entrecruzamento e ligao qumica a suportes

FASES ESTACIONRIAS - Famlias de FE Lquidas

Separao de pesticidas - FE = 100 % PDMS(polidimetilsiloxano) 1 - TCNB
2 - Dichloram 3 - Lindano 4 - PCNB 5 - Pentacloroanilina 6 - Ronilano 7 - Antor 8 - pp-DDE 9 - Rovral 10 - Cypermetrin 11 - Decametrin

17 min Coluna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x 0,12 mm) TCOL:195oC (6,5 min) / 195oC a 275oC (10oC.min-1) Gs de Arraste: He @ 35 cm.min-1 Detector: FID Amostra: 2mL de soluo dos pesticidas on-column

FASES ESTACIONRIAS - Famlias de FE Lquidas

Separao de fenis - FE = fenilmetilsilicones

50% Ph 50% Me

5% Ph
95% Me

FASES ESTACIONRIAS - FE Quirais Separao de ismeros ticos:

PRODUTOS BIOLGICOS Distino entre produtos

de origem sinttica e natural (natural = normalmente substncias oticamente puras; sinttico = muitas vezes so misturas racmicas).

FRMACOS Em muitos frmacos apenas um dos ismeros

ticos tm atividade farmacolgica.

FASES ESTACIONRIAS - FE Quirais

FE oticamente ativas mais importantes:
CH3 O Si CH3 CH3 O CH3 Si CH2 CH3 NH C C N H C* H CH3 CH3

Derivados de aminocidos: Misturas de compostos formadores de pontes de hidrognio.

CH O C O

CH CH3 CH3

Chiralsil-Val

CH3 O Si CH3 O

CH3 Si CH2 CH2 O Ni

Organometlicos:

Separao de enantimeros formadores de complexos.

Chiralsil-Metal

/2
O C3F7

FASES ESTACIONRIAS - FE Quirais: Aplicaes

leo essencial artificial de limo: separao de terpenos primrios
1 - (+/-) -pineno 2 - sabineno 3 - (+/-) b-pineno 4 - (+/-) limoneno

Coluna: Rt-DEXsm (30 m x 0.32 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 40C / 2C min-1 / 3 min a 200C Gs de Arraste: H2 @ 80 cm.min-1 Detector: FID

FASES ESTACIONRIAS - FE Quirais: Aplicaes

Anfetaminas: resoluo dos ismeros

Coluna: Rt-DEXcst (30 m x 0.25 mm x 0.25 m)

TCOL: 1 min a 120C / 1,5C min-1 / 3 min A 175C

Gs de Arraste: He @ 25 cm.min-1 Detector: MS