Apostila Microbiologia II

UNIVERSIDADE CATLICA DE GOIS
CURSO DE BIOMEDICINA MICROBIOLOGIA II
Prof. CLUDIA MARIA DUQUE DE SOUZA
Universidade Catlica de Gois. Departamento de Cincias Biolgicas e Biomdicas
Universidade Catlica de Gois Curso: Biomedicina Disciplina: Microbiologia II Professora: Cludia Maria Duque de Souza
PROGRAMA:
1- Objetivo geral: A disciplina Microbiologia II visa, fundamentalmente, demonstrar as tcnicas micolgicas, princpios dessas tcnicas, identificao dos gneros e espcies e suas patologias, bem como, capacitar o estudante para a pesquisa e o reconhecimento desses microrganismos.
2- Objetivos especficos: Habilitar o aluno de micologia para a pesquisa, reconhecimento e a diferenciao dos microorganismos normais e patognicos nas diferentes partes do organismo humano, tais como: orofaringe, pele e anexos, lquidos corporais, aparelhos auditivo, visual, gastro-intestinal e genito-urinrio.
Prof. Cludia Maria Duque de Souza.
Microbiologia II
MICROBIOLOGIA II - CBB3642 - 4 CRDITOS
CONTEDO: 01- Diagnstico laboratorial dos agentes de micoses superficiais - Dermatfitos. 02- Diagnstico laboratorial dos agentes de micoses superficiais por fungos no Dermatfitos. 03- Diagnstico laboratorial dos agentes de micoses subcutneas. 04- Diagnstico laboratorial dos agentes de micoses profundas. 05- Diagnstico laboratorial dos agentes de micoses oportunistas - Candidase 06- Diagnstico de outras micoses oportunistas e fungos contaminantes do meio ambiente. 07- Bacteriologia da gua (Parte I). 08- Bacteriologia da gua (Parte II, anlise microbiolgica) 09- Microbiologia do leite. 10- Microbiologia dos alimentos. 11- Preveno e controle de infeces hospitalares.
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BIBLIOGRAFIA: 01. Jawetz, Ernerst. Microbiologia Mdica. Guanabara Koogan. 02. Bier, Otto. Microbiologia e Imunologia. Melhoramentos. 03. Pelczar, Reid e Chain. Microbiologia Vol I e II - McGraw-Hill do Brasil. 04. Moura. Microbiologia Clnica. Mc Will Editores. 05. Korting e Gunnter. Dermatologia. Editora Manole. 06. Cecil. Tratado de Medicina Interna. Guanabara Koogan. 07. Dowell, Allen e Koneman. Diagnstico Microbiolgico. Panamericana. 08. Neto, Amato e V. et al. Antibiticos na prtica mdica. Gnemed. 09. Parage, R. Microbiologia Clnica. Panamericana. 10. Miname. Micologia, Diagnstico Laboratorial das Micoses. 11. Reese, Richard E, Sentochnik, Deborah E., Douglas Jr, R. Gordon e Betts, Robert F. Manual de Antibiticos. 12. Roitman, Isaac, Travassos, Luiz R. e Azevedo, Joo Lcio. Tratado de Microbiologia. 13. Mac Faddin. Pruebas bioquimicas para la identificacion de bactrias de importncia clnica. Panamericana. 14. Lennete, Balows, Hausler e Shadony. Manual de Microbiologia Clnica. 15. Hentges, David J. Medical Microbiology. 16. Fundemberg, Hugh. Microbiology and Imunology, a positive statement manual. Guanabara Koogan. 17. Delost, Danessa Maria. Introduction to diagnstic Microbiology, Mosby, 1997. 18. Rowland, S. Sharon. Pathogenic and Clinical Microbiology. Little, Brown and Company , 1994. 19. Crissey, Thorne John. Manual of Medical Micology. 1995. Blackwell science. 20. Tagliavini, Ruggero. Novo Atlas prtico de Dermatologia e Venereologia. 1995, Santos. 21. Konneman, Elmer . 5 edio. Color Atlas - Diagnostic Microbiology, 1997, Lippincott. 22. Dwight R. Johnson. Laboratory of diagnostic of Group A Streptococcal infections. WHO (Organizao Mundial de Sade). 23. Chung, Kwon J. K. Medical mycology. 1992. Lea & Fabiger. 24. Zaitz, Clarisse. Atlas de Micologia. 1995. Medsi. Artigos da Internet : Peridicos: Revista Laes Haes - Mc Will Editores, News Lab, Arquivos de Dermatologia (JAMA). ARSCVRAND, JAMA,
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AULA 1 FUNGOS DERMATFITOS

Infectam pele, plo e unha na espcie humana e animal, produzindo doenas conhecidas como tineas ou tinhas, cujo tratamento, normalmente, feito com TERBINAFINA. Em KOH tem-se hifas hialinas esverdeadas acompanhadas de formas vegetativas (clamidsporos, corpos nodulares, etc.) e, freqentemente, com artrocondeos (fragmentao de hifas). Para a identificao das espcies deve ser observada a presena de micro e macrocondeas, sendo que o aspecto colonial no deve ser utilizado isoladamente. Existem trs gneros de dermatfitos que necessitam de identificao: 1- Microsporum, sp. - Produzem macrocondeas multiseptadas, de paredes grossas, que podem assemelhar-se a fusos ou cilindros e so provenientes de conidiforos. Acometem pele e plo, tendo como espcies de interesse mdico: 1.1- Microsporum audouinii -- Macrocondeas bizarras e de pouca freqncia e raras microcondeas. Apresenta clamidsporos terminais ou candelabros fvicos. Suas colnias crescem em mdia de 7 a 14 dias com miclios areos e aveludados de cor bronze claro; no verso apresentam-se de cor rosa salmo. No cresce em gro de arroz. Causa tinea do couro cabeludo (em criana), transmissvel e os plos acometidos tm fluorescncia em lmpada de Wood. 1.2- Microsporum gypseum -- Macrocondeas septadas (de 4 a 6 septos), com paredes grossas , de formato mais alongado e menos fusiformes do que aquelas do M. canis, e com as extremidades arredondadas. Cresce bem em meio com gro de arroz. 1.3- Microsporum canis -- Macrocondeas fusiformes multiseptadas (8 a 15 septos) e de paredes grossas , muitas das quais tm uma das extremidades curvada, o que uma caracterstica marcante; apresenta poucas microcondeas junto s hifas. Cresce bem em agar de arroz e tem fluorescncia verde clara em lmpada de Wood. um fungo zooflico que acomete ces e gatos, os quais devem ser tratados para evitar reicidiva. 2 - Trichophyton, sp. - Pode haver ou no a produo de macrocondeas que, quando existem, esto em pequeno nmero e so em forma de basto. As microcondeas, por sua vez, esto distribudas em grande nmero ao longo das hifas ou formando cachos. As espcies mais isoladas em infeces humanas so: 2.1- Trichophyton tonsurans -- Est mais associado tinea capitis ou dermatofitose do ponto negro, na qual os cabelos rompem prximo ao couro cabeludo conferindo ao plo o aspecto de ponto negro. As suas condeas so claviformes e largas e as colnias pulverulentas.
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2.2- Trichophyton mentagrophytes -- Comumente isolado na infeco denominada p-deatleta. Suas colnias so pulverulentas e as aleurias em cacho de uva sobre ramos terminais. Diferencia-se do T. rubrum por ser ureia positivo. 2.3- Trichophyton rubrum -- comumente isolado no p-de-atleta juntamente com o T. mentagrophytes . Apresenta raras macrocondeas e grande nmero de microcondeas baloniformes . 3 - Epidermophyton, sp. - No produz microesporos. A diferenciao do gnero se faz com a observao de grandes macrocondeas em forma de clava, com paredes lisas, e que se dividem em 2 a 5 clulas por septos transversais encontradas sobre 1 ou 2 conidiforos curtos. Acomete pele e unha, sendo a espcie mais importante e de interesse mdico o Epidermophyton floccosum , o qual acomete a queratina sem lesar o cabelo.
TINEAS DE IMPORTNCIA MDICA (DERMATOLOGIA) 1- P-de-atleta - Agentes etiolgicos: T. rubrum, T. mentagrophytes ou E. floccosum . Aspecto clnico: fenmenos de descamao, macerao ou vesiculao disidroforme associados formao de rgades ( fissuras) com prurido e dor. 2- Tinea da mo ou desidrose lamenosa seca - Aspecto clnico: alteraes descamativas na regio palmo-plantar. 3- Tineas das unhas, onicomicoses ou Tinea unguium - Agentes etiolgicos: T. rubrum, T. mentagrophytes e E. floccosum. Aspecto clnico: inicialmente, leucopatia ( turvao branco-amarelada da placa ungueal) localizada que, posteriormente, torna-se difusa; a unha fica espessa e porosa. Quando h enegrecimento da placa ungueal sugestivo de simbiose bacteriana. 4- Tinea do corpo ou Tinea corporis - Agentes etolgicos: M. canis ou T. mentagrophytes. Aspectos clnicos: leses sob a forma de herpes circinado no tronco, pescoo e face; tardiamente as leses tornam-se exsudativas na periferia e os plos caem no centro da leso. A transmisso devida ao contato com animais domsticos. 5- Tinea inguinal, tinea cruris (virilha) e tinea glutea - Agentes etiolgicos: T. rubrum e E. floccosum. 6- Tinea barbae - Agentes etiolgicos: T. mentagrophytes e T. rubrum. Aspectos clnicos: supuraes foliculares lembrando uma peneira (sicose parasitria) = inflamao dos plos da barba com formao de ppulas e crostas.
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7- Tineas do couro cabeludo - Agentes etiolgicos: T. tonsurans. M. canis e T. rubrum. Aspectos clnicos: tinea nodulosa (Kerion Celsi) = rea altamente inflamatria; tineas folculo-granulomatosas = nas pernas de mulheres devido ao uso de meia-cala. 8- Tinea favosa do couro cabeludo - Agente etiolgico: T. schoenleinii. Aspecto clnico: tem colorao amarelo-enxofre e odor semelhante ao de urina de rato; provoca a formao de crostas sobre uma regio avermelhada e exsudativa que, posteriormente, cicatriza e causa alopcia (ausncia de cabelos). As unhas tambm podem ser afetadas. 9- Eritrasma - Agentes etiolgicos: Corynebacterium minutissimum = Nocardia minutissimum = Microsporum minutissimum. Localiza-se nas axilas, face interna da coxa e espaos interdigitais. Acredita-se na associaocom um dermatfito. O tratamento feito com eritromicina.
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AULA 2 RECONHECIMENTO DE AGENTES DE MICOSES SUPERFICIAIS POR FUNGOS NO DERMATFITOS

1- Tinea versicolor ou Pitirase versicolor. Agente etiolgico: Microsporum furfur = Malassezia furfur. encontrado no ar (poeira); apresenta-se com miclio verdadeiro ou com estruturas leveduriformes. Alguns estudos tentam identific-lo com o Pityrosporum orbiculare. Aspecto laboratorial: filamentos flexuosos curtos, fragmentados com cachos ou esporos arredondados e com brotos. Histologicamente: filamentos parasitam a camada crnea. Quadro clnico: leses de colorao amarelada ou vermelho - acastanhada, localizadas na metade superior do tronco, com contornos circinados irregulares e superfcie descamante que, quando raspada com esptula ou lmina de bisturi, destaca-se em forma de aparas de madeira. Apresentam despigmentao quando expostas aos raios solares (Pitirase versicolor branca). A sudorese intensa aumenta a predisposio a esta micose cutnea (pacientes tuberculosos, freqentadores de saunas que no se enxugam corretamente aps o banho) que acomete ambos os sexos, sendo mais freqente na faixa etria de 20 a 30 anos, e cuja transmisso pouco conhecida (acredita-se que seja inter-humana ou atravs de vestes ou poeira. Se no tratada evolui indefinidamente. Apresenta fluorescncia em lmpada de Wood. A Ptirase rsea tem evoluo limitada e comea por uma placa caracterstica com leses eritematosas (em medalho) e margens escamosas. Na dermatite seborreica as leses so mais vermelhas e as escamas amareladas. A forma acrmica diferencia-se do vitiligo por ter leses grandes, simtricas, sem escamas e aparecer somente no trax. Tratamento: Consiste na administrao de drogas de efeito anti-hidrtico (lcool e slvia) e antimicticos de amplo espectro como clotrimazol (canasten), Miconazol e Econazol, Diazlicos (atualmente, a droga de primeira escolha a Terbinafina (Lamisil).
2- Tinea nigra.
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Agente etiolgico: Cladosporium werneckii = Pullularia werneckii.= Phaeoannellomyces werneckii= Exophialla werneckii. encontrado nas trs Amricas e atinge os dois sexos em todas as faixas etrias. Quadro clnico: leses palmo - plantares e, mais raramente, no punho, com manchas de colorao castanha ou negra, ligeiramente hiperceratsicas, lisas ou escamosas e com contornos geogrficos. No h dor ou prurido. Aspecto laboratorial: no exame direto das escamas (com KOH) encontram-se hifas flexuosas septadas, ramificadas e fragmentadas, de colorao variando entre o castanhoclaro e o verde-escuro, e, s vezes, clamidsporos. As colnias so negras, unidas, glabras e s, vezes, com penugem cinzento - esverdeada. O exame ps-cultura mostra hifas escuras que contm clulas entumecidas com blastsporos no seu interior (Pullularia werneckii). 3- Tinea Imbricata ou Tokelau Agente etiolgico: Trichophyton concentricum. Aspecto clnico: acomete a camada crnea e invade o tegumento, sendo as leses em forma de rosetas constitudas por crculos concntricos de escamas destacadas e esbranquiadas com bordo interno livre. transmissvel. Aspecto laboratorial: no exame direto aparecem hifas retangulares dispostas em rede, com artrsporos e clamidsporos isolados ou em cadeia. A cultura leva de 20 a 30 dias a 37graus C. e apresenta culturas esponjosas ou cerebriformes brancas e posteriormente mbar. O exame de ps-cultura mostra hifas septadas com filamentos irregulares e clamidsporos intercalados ou terminais. 4- Piedra preta Sinonmia: Piedra negra, tinha nodosa (ndulos duros) ou tricomicose dos estudantes. Etiologia: Piedraia hortae (Brumpt) Fonseca & Area Leo, 1928. Quadro clnico: forma-se um ou mais ndulos duros nos plos do couro cabeludo, no havendo grandes alteraes no plo. Pode acometer tambm macacos e chimpanzs. Aspectos laboratoriais: no exame morfolgico do plo o ndulo escuro e visvel a olho nu. Para o micolgico direto corta-se o plo e coloca-se o mesmo sobre lmina com KOH cobrindo-o, em seguida, com lamnula. Observa-se a superfcie do ndulo parecendo um tecido ou um pseudo-parnquima. Esmagando-se o ndulo previamente podem ser vistos os ascsporos em forma de S (sigmide), com filamento em uma extremidade, so os chamados sigmesporos ou escolesporos que se localizam dentro dos ascos.
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O isolamento em cultura do Piedraia hortae pode ser feito em agar Sabouraud. Crescem temperatura ambiente colnias esverdeadas que vo se tornando escuras, acinzentadas, marrons e chegando at a pretas. Essas colnias so planas e com pequena elevao central, podendo ser lisas ou enrugadas e levemente aveludadas. As hifas so escuras, septadas e com blastsporos quando jovens; mais tarde formam-se artrsporos. No h formao de ascos. 5- Piedra branca Etiologia: Trichosporon beigelii (Rabenhost) Vullemin, 1902. tambm conhecido por Trichosporon cutaneum, Trichosporon ovoide ou Trichosporon cerebriforme (colnia em forma de crebro). Quadro clnico: os ndulos da Piedra branca localizam-se mais comumente nos plos da cabea, porm, podem ocorrer nos plos da barba, bigode e da pubis. Eles so brancoamarelados, moles, geralmente nicos e localizados na extremidade do plo, mas podendo aparecer tambm ao longo do plo. Aspectos laboratoriais: o ndulo da Piedra branca visvel a olho nu. Para o micolgico direto coloca-se o plo em KOH entre lmina e lamnula e verifica-se, aps a digesto, que o ndulo composto de leveduras, as quais podem ser isoladas em Agar Sabouraud com ou sem antibiticos. Microscopicamente o Trichosporon apresenta forma em artrsporo, blastsporos e pseudo-hifa. O T. beigelii no fermenta acares e a sua identificao deve ser feita com o auxonograma de fontes de carbono. 6-Trichomicose palmelina. Etiologia: uma infeco mista por Micrococcus, Corynebacterium tenuis e Serratia marcescens, sendo a ltima a provocadora da cromidrose. Quadro clnico: micose saproftica que se manifesta pela colorao anormal (amarela e mais raramente vermelha ou preta) dos plos axilares e pubianos , os quais apresentam uma bainha formada por massas aderentes. A cromidrose (plos avermelhados) tinge as roupas com a mesma cor dos plos. Tratamento: feito com lcool isoproplico. 7- Micoses superficiais provocadas por Candida, sp. A Candida, sp a mais importante das leveduras pois acomete os tecidos profundos, alm dos superficiais.
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Candidase mucocutnea familiar crnica: se manifesta no decorrer dos primeiros anos de vida sob a forma de sapinho na mucosa bucal, ou seja, sob a forma de membranas e edemas avermelhados, escuros, que sangram facilmente; o dorso da lngua fica semelhante a polvilhado de acar. Os eritemas perianais e intercrurais tm aspecto brilhante e enverrugado, apresentando na periferia uma borda escamosa, solta, em forma de franja e com leses satlites disseminadas. As leses por Candida, sp so pstulas erosivas, eritematosas e, mais raramente, granulomatosas, disseminadas por todo o corpo. Dentre essas leses encontram-se quadros de intertrigo sob a forma de boqueira (perleche) e paronqueas (onicomicoses); manifestaes genitais sob a forma de vulvovaginites, colpites, balanopostitese uretrites; e ainda se discute a urticria crnea devida infeco da mucosa intestinal por leveduras.
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AULA 3 MICOSES SUBCUTNEAS

1- Esporotricose Agente etiolgico: Sporotrix schenckii. Aspecto clnico: leses que praticamente se limitam derme e ao tecido adiposo subcutneo, sendo que o foco primrio apresenta-se sob a forma de ppula ulcerada ou disseminao ascendente linftica(Gomas). observada em pessoas que tenham tido traumatismos leves e permaneam expostas freqentemente (jardineiros, lavradores, mineiros,etc), por isso a esporotricose conhecida como doena do jardineiro. A leso primria geralmente aparece na pele dos dedos, mos e antebraos, desenvolvendo-se, em 1 a 2 semanas, na pele j ferida por espinhos de roseiras ou outro elemento cortante de origem vegetal. A disseminao ocorre atravs de vasos linfticos regionais produzindo ndulos subcutneos que supuram e ulceram. A forma pulmonar da doena rara. A esporotricose mais comum nos Estados Unidos. O tratamento feito com iodeto de potssio para infeces cutneo-linfticas e Anfotericina B endovenosa para casos sistmicos. Aspectos laboratoriais: o fungo se mutiplica rapidamente em meios de cultura, porm, de difcil identificao histolgica, portanto, a inoculao em cobaias aconselhvel. No exame direto observam-se clulas leveduriformes com brotamentos (charutiformes). No exame direto observam-se clulas leveduriformes com brotamentos (charutiformes). No cultivo a TA so observadas hifas hialinas e septadas de pequeno dimetro, conidiforos finos e ramificados que partem das hifas formando ngulo reto, e condeos pequenos que organizam-se como pequenas flores (margaridas) nas extremidades dos conidiforos. A cultura feita a 37 graus C; as colnias tm cor brancocreme e consistncia macia e cremosa. Antgenos podem ser extrados e levados para testes cutneos em homens e animais. H uma anticorpognese variada. 2- Cromomicose ou Cromoblastomicose. Etiologia: a cromomicose provem de diversos fungos pertencentes ao grupo das leveduras de cor marron ou negra, sendo eles: Fonsecaea pedrosoi = Phialophora pedrosoi = Fonsecaea compacta, Phialophora verrucosa, Cladosporium carrionii, Wangiella dermatitidis (esporulao por clamidsporos). Os pases quentes so os locais de preferncia destes fungos.
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Aspectos clnicos: a infeco devida aos ferimentos, razo pela qual as alteraes patognicas localizam-se preferencialmente nos membros (tecido cutneo do p, perna, membros superiores, ombros e costas); as leses tm aspecto verrucoso (couve-flor), pedunculado em placa e os focos papilomatosos podem tornar-se sede de tumores e infeces secundrias. Via de regra os rgos internos no so atingidos. Sinonmia: dermatite verrucosa cromoparasitria, doena de Pedroso e Lane. Exame histolgico: a leso verrucosa pode ser facilmente biopsiada, o fragmento cortado pode ser fixado em formol a 10% em Borax, induzido e cortado. Os cortes devem ser corados em HE (no se recomenda a colorao em PAS ou Gomori) onde observam-se clulas arredondadas formando aglomerados de cor marron-havana, com reproduo por cissiparidade , que so denominadas corpos fumagides. Aspectos laboratoriais: no exame direto deve-se raspar a leso com bisturi ou estilete. O material obtido com a raspagem deve ser colocado em KOH, entre lmina e lamnula, para a observao de clulas arredondadas marrons com divises binrias. A cultura, feita em agar Sabouraud, de crescimento lento e a colnia verde, cinza ou marron., que idntica para todos os agentes demceos envolvidos neste processo infeccioso. A diferenciao vem da observao da predominncia dos esporos especiais que estes fungos produzem em TA em gar Sabouraud: Esporulaes do tipo: Falide, Acroteca (Rhinocladiella), Hormodendrum (Cladosporium). 3- Micetoma. Sinonmia: Maduromicose, Eumicetoma ou p de Madura (nome utilizado devido ao fato de ter sido descoberta na ndia).Pertence ao grupo das molstias fngicas denominadas Micetomas, do qual fazem parte as Nocardioses e Actinomicoses, por apresentarem leses com aumento de volume e eliminao de gros parasitrios. No Brasil encontrada em So Paulo, Rio de Janeiro, Mato Grosso, etc. Aspectos clnicos: uma doena de carter crnico e progressivo, com tumefao e formao de canalculos dentro da leso, o que leva formao de pstulas exsudativas , com lquido claro, aquoso e seroso e presena de gros grandes e duros. A leso inicial um pequeno ndulo fixo, com vescula, que se transforma em abcesso fistuloso; com o tempo h formao de novas fstulas. A sua localizao tpica nos membros inferiores, em especial nos ps, e em seguida nos braos, sendo o local da leso endurecido. A seqncia na pele : tecido subcutneo, msculos, ossos e tendes. A doena freqente em homens adultos e entre agricultores.
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Agentes etiolgicos - grupos dos Eumicetos: 1) Pietriellidium (Allescheria) boydii; 2) Madurella micetomi; 3) Madurella grisea; 4) Exophiala jeanselmi; 5) Acremonium (Cephalosporium) falciforme; 6) Curvularia lunat. Aspectos laboratoriais - exame do gro parasitrio: os gros so retirados das fstulas retendo-os em gaze; quando so escassos, a retirada feita com auxlio de microcureta (ala em anel) escarificando dentro da leso. Para o exame direto rompe-se o gro com estilete e observa-se, em KOH a 10 ou 20% , a presena de hifas, que podem ser hialinas ou escuras, septadas e emaranhadas com raros clamidsporos. A semeadura do gro pode ser feita diretamente se ele no estiver coberto por uma capa dura; se estiver, a capa deve ser desfeita. Quando o material est contaminado com bactrias desinfeta-se com soluo fisiolgica, estreptomicina e penicilina. O cultivo feito, de preferncia, em agar Sabouraud com cloranfenicol mais gentamicina (agar Mycosel), temperatura ambiente e em aproximadamente 30 dias. O exame em HE mostra hifas escuras mais clamidsporos; em colorao de PAS visualizam--se hifas hialinas ( ou impregnao argentia). Temos gros parasitrios que tem como agentes etiolgicos bacterias filamentosas como: Actinomadura madurae, Actinomyces pellietieri, Streptomyces somaliensis, Nocardia brasiliensis e Nocardia asteroides. Estes gro so chamados de actinomicticos e os de origem fngica de Maduromictico.
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AULA 4
MICOSES PROFUNDAS 1- Paracoccidioidomicose Sinonmia - Blastomicose Sul-americana ou Doena de Lutz Etiologia - Paracoccidioides brasiliensis ou Blastomyces brasiliensis (dimrfico). Quadro clnico - tem como localizao a mucosa bucal, faringe, cordas vocais, pulmes, tecido cutneo, gnglios linfticos, SNC, supra-renal, etc. As principais formas clnicas so ulceraes, linfangite, adenites, leses pulmonares, inflamao das supra-renais, laringite, meningite, etc. As leses primrias vm da mucosa nasal com desenvolvimento de lceras que se disseminam pelas mucosas formando leses eritematosas elevadas semelhantes a amoras. A doena pulmonar ocorre em alta porcentagem (induo), rara para sistema linftico, bao, intestinos e fgado e no contagiosa. Os pulmes podem apresentar alteraes de fibrose com formao de cavidades. A populao de risco da rea rural, sendo que acomete mais homens do que mulheres. O fungo geoflico. Tratamento - sulfonamida e anfotericina. Aspectos laboratoriais - os materiais para exame laboratorial so: escarro, pus, raspado de leso, LCR, fragmento de bipsia, etc. A coleta desses materiais feita por eliminao do escarro, bipsia, raspagem ou curetagem das ulceraes. Cada material exige um preparo e mtodo de conservao descritos a seguir: 1) Escarro - digesto enzimtica ou auto-digesto, ou digesto com KOH; 2) Material para corte histolgico - fixao em formol a 5% ou Bouin ==> granulomas com caseificao central = clulas gigantes; 3) Fragmentos de tecidos - macerao; 4) Conservao de pus na geladeira. Para a realizao do exame direto pode-se fazer um exame fresco do escarro, pus e raspado de leso, e exame de tecido macerado ou digerido utilizando as coloraes de Grocott, Gomori (impregnao pela prata), PAS Hatckiss, Mc Manus ou Gridley. A morfologia encontrada a de clulas arredondadas de paredes grossas e refringentes e com brotamentos nicos ou mltiplos. O isolamento do agente feito com cultivo em agar Sabouraud (20 a 25 graus C); se o material estiver com contaminao deve-se cultiv-lo em agar Mycosel, mas o crescimento ser lento (40 dias) e com ferrugem na superfcie. Podem ser feitos exames imunolgicos do tipo reao intradrmica (para fins epidemiolgicos ou de diagnsticos), RFC (para acompanhamento teraputico e
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prognstico vrias tcnicas empregam o Agar polissacride), reao de precipitao, reao de imunofluorescncia (empregada em diagnstico e prognstico). 2- Histoplasmose Sinonmia - Doena de Darling , Histoplasmose capsulata, Reticuloendoteliose histoplasmtica (cresce dentro dos macrfagos e histicitos). Etiologia - Histoplasma capsulatum ou Cryptococcus capsulatum. Quadro clnico - de localizao no fgado, bao, medula, pulmo, mucosa, tecidos cutneos, etc. Apresenta como formas clnicas a Histoplasmose primria aguda, Histoplasmose Mucocutnea localizada, Histoplasmose pulmonar e Histoplasmose disseminada. Atinge mais os pulmes, manifestando-se sob a forma de uma Sndrome do tipo gripal (2 a 3 semanas). Podem apresentar leses cutneas do tipo molusco contagioso em pacientes com AIDS . No momento a micose mais freqente nestes pacientes. A forma crnica tem leses cavitrias ou granulomas localizados que evoluem e calcificam. Os Histoplasmas podem ser removidos cirurgicamente e so encontrados primeiramente nos macrfagos. A forma crnica provoca, ainda, hepatoesplenomegalia e lifadenopatia difusa. A contaminao ocorre por inalao de poeira carregada com excrementos de galinhas, perus, pombos ou morcegos. conhecida como febre das cavernas. Aspectos laboratoriais - podem ser utilizados como material para exames escarro, aspirado medular, material biptico, raspado de lcera cutnea, etc. O escarro deve ser colhido de manh aps lavagem da boca e o aspirado de medula, por puno medular. O micolgico direto feito com esfregao de escarro(pode negativar em at 60%), medula ou fragmento de bipsia, corado pelo Giemsa, aonde pode-se observar clulas circulares pequenas, com paredes grossas e citoplasma retrado, formando aglomerados intracelulares. No exame microscpico de corte histolgico corado por HE, Gomori modificado, Grocott ou PAS, observam-se formas intracelulares com citoplasma circular, aglomerados e clulas com citoplasma retrado parecendo cpsula. O isolamento do agente feito em agar Sabouraud ou Mycosel; o fungo cresce temperatura ambiente, na forma de bolor (filamentosa) em torno de 10 dias. No ps-cultura so observadas condeas grandes, circulares, com expanses nos bordos (esporos mamilonados ou espiculados) dando-lhes o aspecto de coroa (engrenagem de relgio), e tambm microcondeas. Pode ser feita a inoculao de material triturado em camundongo, por via peritoneal, examinando posteriormente o bao e fgado; esse procedimento importante para o isolamento de H. capsulatum a partir do solo. As reaes imunolgicas disponveis so: testes intradrmicos (que tm como antgeno a Histoplasmina), cuja leitura feita em 48 horas e tem importncia como prova
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epidemiolgica; RFC tendo como funo o acompanhamento teraputico e utilizando de rotina dois antgenos (suspenso leveduriforme e histoplasmina); imunodifuso, com a formao de duas linhas de precipitao -- a linha h indicando leso ativa e a linha m indicando infeco ou intradermorreao recente; aglutinao e imunofluorescncia. Tratamento - Anfotericina-B. 3- Coccidioidomicose. Sinonmia - Doena de Posadas e Wernicke, granuloma coccidiodiano de Valey Fever, Desert Rheumatism, Febre de San Joachim (fases evolutivas). Agente etiolgico - Coccidioides immitis. um fungo geoflico que penetra no organismo por inalao de poeira, vai aos pulmes aonde provoca formao de abscessos, e de onde dissemina por via hematognica. Tem como populao de risco agricultores; mais comum nos EUA, Mxico, Argentina, Hava e Itlia. Quadro clnico - A leso primria acontece na rvore respiratria, o perodo de incubao de 10 a 15 dias e as manifestaes iniciais so tosse, dor na respirao, febre moderada, anorexia e sudorese noturna. As leses cutneas aparecem em aproximadamente 3 semanas sob a forma de eritema nodoso ou polimorfo. Acomete tambm o SNC. Aspecto laboratorial - o material para exame pode ser pus, escarro, lquido pleural ou lquido de aspirao gstrica, que, ao microscpio, mostrar quistos esfricos de paredes grossas com esporos encapsulados. A cultura cresce de 5 a 6 dias com colnias redondas com ferrugem branco-cinzenta; em azul de lactofenol mostra hifas em raquete (artrsporos). A inoculao pode ser feita em cobaia, camundongo ou coelho; inoculao no testculo leva orquite em 36 horas e inoculao intraperitoneal, a leses generalizadas. Para exame histolgico faz-se bipsia cutnea de abcessos e leses com grande nmero de esfrulas tpicas contendo esporos. Os esporos tambm esto nos macrfagos e nas clulas gigantes. Tratamento - Anfotericina-B.
4- Criptococose Sinonmia - Blastomicose europia, Doena de Buschke, Torulosis, Meningite fngica .
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Etiologia - Cryptococcus neoformans ou Saccharomyces neoformans, Torula neoformans, Torula histolytica ou Cryptococcus histoliticus. Quadro clnico - localiza-se nas meninges, pulmes, pele (ppulas) e ossos, tendo como formas clnicas a Criptococose do SNC (meningite Criptocccica), Criptococose pulmonar e Criptococose ssea. Quadro laboratorial - o micolgico direto pode ser feito no LCR, escarro, raspado de lcera cutnea e fragmento de tecido. O escarro deve ser coletado de manh aps lavagem da boca e o fragmento de tecido por bipsia. Cada material tem um modo particular para ser examinado: a) LCR - centrifugar, desprezar a parte superior com pipeta conta-gotas, colocar 1 ou 2 gotas de sedimento, misturar com tinta da China, examinar ao microscpio procurando leveduras isoladas ou com brotamento com cpsula formando halo claro ao redor; b) Escarro - retirar o material mucide ou purulento, colocar sobre lmina, misturar com tinta nanquim e procurar ao microscpio por formas capsuladas, ou deixar o escarro autodigerir a 37 graus C durante 24 horas, ou digerir em KOH ou tripsina, centrifugar e examinar o sedimento em tinta nanquim; c) Corte histolgico - fixar o fragmento de tecido obtido por bipsia em formol a 10% ou Bouin, cortar com micrtomo e corar pelo PAS ou colorao pela prata; d) Raspado de leso - raspar a leso com cureta, bisturi ou ala microbiolgica, colocar o raspado sobre uma lmina e misturar com tinta nanquim, procurar ao microscpio por leveduras com cpsulas descoradas. A cultura feita em agar Sabouraud ou Mycosel (sem cicloheximida) e a identificao, pela presena de cpsulas. O crescimento a 37 graus C com produo de urease e assimilao de nitrato. Existem conjuntos comerciais para a identificao de leveduras: Mycotube (Roche), Minitek sistem (BBL). Outros Cryptococcus no patognicos: C. albidus, C. gastricus, C. inigatilatus.
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AULA 5
MICOSES OPORTUNISTAS CANDIDASE: chamada de oportunista porque aproveita de estados de debilitao dos pacientes podendo provocar uma doena sistmica. A Candida albicans a levedura isolada com mais freqncia em amostras clnicas; a produo de pseudohifas e blastsporos encontrada em tecidos e exsudatos. Pode provocar infeces de pele, unha, boca, genitlia feminina, pulmes e pode infectar pacientes leucmicos, diabticos, tuberculosos e viciados. Na poca atual o uso de antibiticos de largo espectro (tetraciclina), corticides, imunodepressores, medicamentos contra Trichomonas e anticoncepcionais orais, explica a relativa freqncia de infeco assintomtica (no TGI, cavidade bucal, genitlia, condutos auditivos) no homem; o tratamento com imunossupressores tambm favorece o aparecimento de candidase. Sabemos atualmente que tanto a deficincia imunolgica humoral, como a celular, favorece instalao da candidase. Antigamente, a freqncia das infeces por Candida ,sp nos pacientes com Diabetes mellitus era atribuda elevada taxa de glicose. A agenesia do timo e o hipoparatireoidismo (Sndrome de Di-George) parecem possuir importncia especial na patogenia, sobretudo na forma granulomatosa da candidase (o exame histolgica mostra que no so granulomas verdadeiros). Outros fatores capazes de favorecer instalao da candidase so os baixos nveis de ferro srico e o hipoadrenalismo. A transmisso das leveduras pode ocorrer no somente por utenslios midos (luvas de lavar), mas tambm o prprio ambiente pode assumir esta funo. Onicomicoses por Candida: Causadas por Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis e, mais raramente por Candida pseudotropicalis. Comeam com uma paronquia (infiltrao da prega ungueal com tumefao), a pele fica fina, vermelha, brilhante e com ligeira descamao; quando o edema pressionado podem sair gotinhas de pus, no qual possvel encontrar as leveduras (exsudato). As alteraes secundrias da unha podem provocar depresses cupuliformes; a lmina ungueal amolece e pode vir a cair. Quando a pele infectada entra em contato com a gua provoca dor intensa. Acomete os dedos dos ps e das mos. de evoluo crnica e o tratamento, que feito com Imidasol, Cetoconazol,Terbinafina e pode durar anos.
Pele -- Intertrigo por leveduras:
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Causado por Candida albicans. Acomete os dois sexos, tendo como fatores que favorecem o pH alcalino da prega, umidade, falta de higiene e Diabetes. Localiza-se nas pregas inguinocrurais, submamrias, axilares, inter e subglteas e abdominais, interdigitais (pododctilos e quirodctilos). As leses so em forma de erupo eritemato--vesiculosa que, posteriormente, torna-se uma placa vermelho - escura, exsudativa, com bordos arredondados limitados com debrum esbranquiado e escamativo. As fissuras (rgades) podem aparecer na parte interna das pregas, sendo exsudativas e recobertas por uma massa esbranquiada. Os sintomas so dor, queimadura e prurido, podendo haver odor ftido quando a pele fica macerada e fermentada (regio genital). Pode haver, ainda, infeco secundria de origem bacteriana, o que prolonga a infeco e pode dar reicidiva. Quadro laboratorial: em KOH as escamas mostram elementos leveduriformes redondos ou ovalados, unicelulares ou somente os microesporos. Em HE (dermopiodermite) tem-se clulas leveduriformes e pseudohifas na camada crnea.Os intertrigos por Candida devem ser diferenciados do intertrigo por bactrias (mais exsudativo), de um eczema de Hebra (menos exsudativo), de uma leso psoritica (mais seca e difusa) e de dermatite seborreica (tpica do couro cabeludo). Sapinho: Est localizado na mucosa bucal, lngua, bochecha, palato, faringe e, excepcionalmente, nas conjuntivas. A leso eritematosa, seca, lisa envernizada e escamativa; na lngua h perda das papilas com surgimento de manchas irregulares esbranquiadas e granulares semelhantes leite coalhado, a mucosa torna-se eritematosa, sangrante e erosiva, podendo cronificar e disseminar. Os sintomas so sede, gosto metlico na boca, secura, mastigao e suco prejudicadas. O exame direto feito na camada esbranquiada aonde sero encontradas estruturas leveduriformes. Boqueira, perleche ou angulos infectiosus: Infeco das comissuras labiais com leses em forma de manchas esbranquiadas, eritematosas, descamativas e com crostas, podendo aparecer tambm edema labial. As leses so dolorosas e podem ser ligeiramente hemorrgicas.
Queilite Eritema e edema dos lbios com dor em queimadura e rgades dolorosas. Geralmente acompanha o sapinho.
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Vulvo-vaginites: A candidase na regio genital aparece como infeco aps tratamento com antibiticos, corticides, anti-Trichomonas, etc. A infeco em adultos d-se por relao sexual ou em; em crianas, pela passagem pelo canal de parto. So mais acometidas mulheres na faixa etria de 20 a 45 anos, gestantes, diabticas e aquelas que fazem uso de anticoncepcionais. A leso em forma de eritema difuso nos grandes lbios (mucosa fina) com formao de vesiculas e pstulas que quando sofrem ruptura provocam eroses, sulcos inter-labiais com fissuras e leucorria cremosa, tornando a rea edemaciada e dolorosa. As seqelas so uretrites, cistites, intertrigo inguino-crural e inter-glteos. Os agentes so : Candida albicans, C. krusei, C. stellatoidea e C. tropicalis. Candidase nos genitais masculinos: 1- Uretrites = Acomete homens com mais de 20 anos e so transmitidas por relaes sexuais e em banheiros. Os sintomas aparecem sob a forma de prurido e formigamento no meato que se torna avermelhado e com uma gota de aspecto mucoso e esbranquiado. Distinguir-se da uretrite por Neisseria gonorrhoeae por ter corrimento mais purulento. 2- Balanites e balanopostites = A comete qualquer idade do sexo masculino e a transmisso se d por foco pr - existente (uretral ou digestivo) ou relaes sexuais. Os sintomas so prurido e formigamento. A leso em placa eritematosa, vesiculosa e com escamas na glande ou sulco balano-prepucial. Consideraes laboratoriais: A demonstrao da presena de colnias aracniformes em EMB ou a produo de clamidsporos em agar-fub so mtodos aceitveis para a identificao de Candida albicans. Entretanto, a maioria dos laboratrios prefere a prova do tubo germinativo que fornece resultados mais rpidos, exceto para C. stellatoidea (variante da C. albicans) e cepas de C. tropicalis.
Tubo germinativo: Extenso filamentosa da cultura de levedura que tenha, aproximadamente, a metade da largura e 3 a 4 vezes o comprimento da clula. O tubo germinativo de
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Candida albicans no apresenta constrico no ponto de origem, em contraste com a C. tropicalis . Tcnica: colnia de levedura (suspeita) + soro humano = suspenso. Incubar a 37 graus C por 3 horas. Suspenso entre lmina e lamnula (azul de lactofenol) = tubo germinativo. uma prova presuntiva para C. albicans, porm h necessidade de provas complementares, hoje com a grande resistncia aos antimicticos est tendo necessidade de se ter ensaios mais acurados para a confirmao das espcies deste gnero. Tem sido relatado, que os sistemas Automatizados como o MICROSCAN tem tido isolamentos mais fidedignos que os sistemas comerciais baseados nas provas bioqumicas e de fermentao de acares. Pode-se ainda inocular a colnia em agarfub e uria (acrescer Tewn 80 = polissorbato) no agar-fub para diminuir a tenso superficial e permitir a tima formao de blastsporos. O TSAQ para fungos ainda no um teste padronizado,porm est tendo uma necessidade do seu uso , devido a resistncia as drogas pelo gnero Candida,sp . Espcies de Candida: 1- C. albicans - glicose positiva, maltose positiva, sacarose positiva, lactose negativa, trealose positiva, urease positiva, tubo germinativo positivo. Cresce a 37 graus C, formam psedohifas e tem cpsula em tinta nanquim. As colnias tm cor creme, so midas, arredondadas, cremosas e em forma de lente biconvexa. Em azul de lactofenol apresenta blastsporos arredondados ou ovais e, s vezes, pseudohifas. 2- C. tropicalis -- as colnias so branco sujo ou amareladas, arredondadas, cremosas, amarrotadas e pregueadas. Em azul de lactofenol apresenta pseudohifas bem desenvolvidas, leveduras em manga ou pequenas cadeias, clulas arredondadas ou alongadas. 3- C. pseudotropicalis - colnias de cor creme, midas, arredondadas e com bordos irregulares. Em azul de lactofenol apresenta numerosos blastsporos alongados ou ovalados e no h pseudomiclio. 4- C. parapsilosis -- colnias branco-creme, arredondadas e midas. Em azul de lactofenol apresenta pseudomicelio bem desenvolvido com poucos blastsporos arredondados ou ovais.
5- C. krusei -- colnias branco-creme, cremosas, pregueadas e com contornos irregulares. Em azul de lactofenol apresenta leveduras alongadas com clulas arredondadas e pequeno nmero de brotos.
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6- Outras sps de Candida: C. glabrata , C. guilliermondii, C. stellatidea , C. lusitaniae, C.kefyr, etc.
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Aula 6 MICOSES OPORTUNISTAS

ASPERGILOSE: Existem mais de 700 espcies de Aspergillus, porm, apenas trs so de interesse clnico: Aspergillus flavus; Aspergillus niger e Aspergillus fumigatus, sendo que o A. fumigatus , provavelmente, a espcie que mais causa aspergilose pulmonar ou disseminada no homem e, em especial, nos homens debilitados. O Aspergillus fumigatus e o Aspergillus flavus esto comumente associados a doenas pulmonares alrgicas, enquanto que o Aspergillus niger pode estar associado a infeces do tipo bola de fungo nos seios nasais e pulmes, sendo, tambm, o agente mais isolado em casos de otite externa (ouvido de nadador). As outras espcies no causam infeces no homem. O exame direto sempre negativo; para consagrar uma espcie de Aspergillus,sp como agente etiolgico de uma infeco clnica, esse fungo deve ser isolado trs vezes em repetidas culturas da amostra clnica ou sua morfologia deve ser encontrada em cortes histolgicos das leses. Caractersticas: So fungos geoflicos encontrados na poeira e alimentos, em particular no queijo; so inalados na poeira e podem ser encontrados como saprfitas na cavidade nasal. No caso de haverem leucemias, tuberculoses cavitrias ou quaisquer outras doenas debilitantes, o Aspergillus,sp deixa de ser saprfita para ser patognico. As populaes de risco so aquelas que lidam com cereais ou lugares poeirentos. Manifestaes clnicas: Pode apresentar hemoptise, leses traumticas, sinusites maxilares, cutneas e cerebrais; a imagem ao raio-x uma imagem em forma de guizo opaco aonde mostra o aspergiloma. O prognstico geralmente bom , porm, a sua evoluo depende da doena que precedeu a Aspergilose. O quadro clnico pulmonar no fcil de diferenciar das tuberculoses, abcessos pulmonares ou carcinoma. Diagnstico laboratorial: O isolamento do fungo do escarro no fidedigno por ser o Aspergillus ,sp saprfita das vias areas superiores; porm, o aspirado brnquico j seguro. As colnias, em 48 a 72 hs, podem ser aveludadas ou como flocos, inicialmente brancas e tornando-se, posteriormente, cinza-esverdeadas; quando maduras apresentam tons pastis. Em azul de lactofenol mostra conidiforo longo, com prolongamentos em forma de clavas e a parte superior disposta em fila nica (aspecto de chuveiro= A.
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fumigatus). Em HE mostra um infiltrado com clulas gigantes, plasmcitos e polimorfonuceares dentro de macrfagos ou em forma de miclios com condeos. Caractersticas difernciais das trs espcies de Aspergillus: A. fumigatus: a colnia verde, azul-esverdeada ou verde-amarronzada, pulverulenta e com margem branca. Microscopicamente apresenta conidiforos longos com vesculas em clava, esporos na metade superior e hifas hialinas. A. niger: a colnia tem aspecto de sal com pimenta e tem o verso cor de canela clara. Ao microscpio apresenta hifas hialinas e septadas, coniforos longos com a vescula varivel e os esporos negros e esfricos. A. flavus: colnia de cor amarela ou amarelo-castanho. Em azul de lactofenol hifas hialinas e vesculas esfricas com esporos esfricos por toda a vescula.
ZIGOMICOSE Sinonmia: Mucormicose ou Ficomicose. Agentes etiolgicos: Mucor,sp, Rhizopus,sp, Rhizomucor,sp , Absdia, Cunningamella , Syncephalastrum, Saksenaea, Mortierella (Ordem dos Mucorales). Agentes etiolgicos de Zicomicoses subcutneas: Basidiobolus ranarum e Conidiobolus coronatus (subcutnea e mucosas - nasal )=> Ordem dos Entomophthorales Caractersticas: so fungos considerados oportunistas por aproveitarem de estados de debilitao dos pacientes. Podem estar presentes, causando trombose, em doenas como o diabetes, em queimaduras extensas, leucemias e linfomas. As tromboses causadas podem ser sinusides, paranasais, pulmonares ou do trato gastrointestinal, e tm como consequncia uma necrose isqumica. Diagnstico laboratorial: os fungos podem ser visualizados, em cortes histolgicos dos vasos das localidades citadas acima, atravs da colorao de HE. Encontram-se clulas gigantes e polimorfonucleares. e ainda hifa larga cenoctica e tortuosa.,simulando galhos de arvore . Tratamento: Anfotericina B e cirurgia.
RINOSPORIDIOSE
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Agente etiolgico: Rhinosporidium seeberi . um parasita de peixes de guas paradas que, acidentalmente, parasita o homem. A infeco acomete jovens e crianas e mais comum na ndia. Manifestaes clnicas: leses localizadas na mucosa do vestbulo nasal ou, s vezes, na conjuntiva. Inicialmente uma leso papulosa que progride e forma plipos volumosos, vermelhos, ssseis ou pedunculares e de carter invasivo, apresentandose clinicamente sob a forma de granuloma centro facial. A evoluo crnica e a cura espontnea. Diagnstico laboratorial: em KOH, o exame de secrees ou esfregaos de tecidos tumorais mostra grandes esporngios vazios ou cheios de um material sem endosporos. O fungo maoir do que o Coccidioides immites e de difcil cultivo, mas podem ser feitas provas sorolgicas.
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Aula 7
BACTERIOLOGIA DA GUA = PURIFICAO DA GUA gua no potvel = gua com dejetos domsticos e/ou industriais. gua potvel = gua sem dejetos domsticos e/ou industriais. As guas de origem profunda (poos e fontes) so aquelas que devem abastecer residncias e reas rurais; as guas de cisternas (provenientes de chuvas) e as guas de superfcie no devem ser ingeridas sem prvia purificao devido ao perigo de transmisso de agentes infecciosos para a espcie humana. A qualidade sanitria da gua determinada por seu aspecto fsico, isto , se est perfeitamente clara e livre de odores e de sabores (incolor, inodora e inspida). Mas a gua pode apresentar todas essas caractersticas e estar contaminada, o que nos leva a afirmar que a qualidade sanitria da gua se apia em outros processos especiais. Um desses processos a vigilncia sanitria, ou seja, a inspeo no abastecedor de gua, feita por um sanitarista (engenheiro especializado no sistema). Para a anlise dessas guas existem testes qumicos e bacteriolgicos e somente com a liberao dos resultados desses testes que podemos considerar a gua potvel ou no. Bacteriologia da gua: Quando as amostras de gua so encaminhadas para anlise microorganismos deve-se ter o cuidado de transportar a amostra rapidamente para haver morte desses organismos porque, quando os agentes patognicos esto nmero reduzido, podem escapar ao diagnstico. O perodo mdio para a deteco organismos e liberao dos resultados de 24 horas. de no em dos
Os microrganismos patognicos tm acesso s guas atravs de excrees intestinais do homem e de animais. A E. coli, S. faecalis e C. perfringes so componentes da flora autctone do intestino grosso do homem e de animais, portanto, a presena de um destes microorganismos vem afirmar que h uma poluio fecal. Pode-se observar ainda que estes microorganismos fecais vivem por mais tempo na gua do que as espcies enteropatognicas e que a presena de enterobactrias (coliformes) na gua um sinal de alarme. Grupo dos coliformes: esto includos neste grupo os bacilos aerbios e anaerbios facultativos no esporulados, Gram negativos, CO2 positivo, cido positivo, fermentadores de lactose. As bactrias clssicas so a E. coli e o Aerobacter,sp (Enterobacter,sp); porm faremos referncia s Salmonellas, Shiguellas, Proteus, Vibrios, Brucellas, Alcalgenes fecalis e Pseudomonas.
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a) Escherichia coli: considerada habitante normal do TGI e em especial a espcie chamada de oportunista. Apresenta prova de indol positiva, produz cido a partir de glicose, provoca alterao de cor pelo indicador de pH, no forma acetil-metil-carbinol em meios com glicose e peptonas (Vogues-Proskawer), na reao de citrato no utiliza o citrato de sdio como nica fonte de carbono e, portanto, cresce nessas condies, Vermelho de Metila positivo, mvel, TAF positivo (acidula o meio por completo) e CO2 e lactose positivos. A E. coli pode causar doenas no sangue, TGU e feridas. Pode ser separada sorologicamente em 160 grupos antignicos somticos O, 80 sorotipos baseados no antgeno K (bainha ou capsular) e em 56 sorotipos baseados no antgeno H (flagelar). Certos sorotipos de E. coli so conhecidos por invadirem a mucosa intestinal produzindo uma sndrome semelhante causada pela Shiguella,sp. Os sorotipos so produtores de enterotoxinas termolbeis e termoestveis, semelhante do Vibrio cholerae, que resultam em casos espordicos de diarria humana; a produo de enterotoxinas controlada por um plasmdio que pode ser transferido para qualquer cepa de E. coli, podendo esta tornar-se enterotxica. Os sorotipos produtores de enterotoxinas so: O 6, O 8, O 25, O 27, O 78, O 148 e O 159. A sorotipagem, feita antigamente em muitos laboratrios com pools de antisoros A, B e C, considerada enganosa; o Center Diseases Control determinou que somente em cepas provenientes de crianas de berrios (diarrias infantis) deve ser usada a sorotipagem de Farmer Etall que detalhada. Algumas espcies de Escherichia,sp produzem uma toxina denominada colicina e algumas so hemolticas em gar-sangue. Atualmente o conceito dos antgenos K foi redefinido, incluindo a diferenciao de acordo com a natureza qumica, portanto, tem-se duas variedades de ag K: a variedade L, cuja ligao ag-ac inativada pelo aquecimento 100 graus C; e a variedade B, cuja ligao no quebrada. 1) E. coli enteropatognica (EPEC) - em laboratrio clnico, pesquisamos a sua presena em crianas de 0 a 2 anos independente de pedido de exame; os adultos s so afetados quando muito debilitados. O paciente com infeco pode apresentar tenesmo (calafrios e abdomem endurecido) e, no ID, a infeco pode formar abcessos localizados. As fezes apresentam-se lquidas e mucopiosanguinolentas e devem ser semeadas primeiro em meio no inibidor (agar sangue ou agar simples, dando preferncia ao agar sangue), j que os meios seletivos podem impedir o crescimento de algumas desta cepas. 2) E. coli enterotoxinognica (ETEC) - raramente invade a mucosa do ID e/ou IG, porm produz uma exotoxina que atua na mucosa do intestino provocando grande eliminao de gua. As diarrias so copiosas e no contm sinais de picitos, nem hemcias e tm como conseqncia uma desidratao sem febre. Algumas estirpes de E. coli, produtoras de exotoxinas, contm fimbrias (fatores de colonizao e adeso mucosa). As tcnicas de ELISA (imunoabsoro ligada a enzimas) so positivas para os antgenos termolbeis e negativas para os antgenos termoestveis. A E. coli a principal causa de infeco no trato urinrio e se propaga por via hematognica. 3) EIEC (enteroinvasiva)= invade clulas epiteliais (febre + colite + diarria e PMN nas fezes + tenesmos).
Prof. Cludia Maria Duque de Souza. Microbiologia II 28
4) EHEC (enterohemorrgica)= elaborao de citoxinas = diarria com S.G. e sem febre + dor dor abdominal. 5) EaggEC (enteroagregativa)= pode durar at 14 dias o processo diarrico aquoso e promove desidratao grave .Este patgeno adere as clulas epiteliais. b) Shigella,sp: esse gnero constitudo por quatro sorotipos subagrupados como: A (S. dysenteriae); B (S. flexneri); C (S. boydii) e D (S. sonnei). A sorotipagem com antisoros polivalentes ou grupo-especficos o mtodo mais adequado para a identificao de um microorganismo isolado que tenha as caractersticas morfolgicas e bioqumicas parecidas com a Shigella,sp. Existem biotipos de E. coli pertencentes ao grupo do Alkalifascens Dipar, imveis e no produtores de gs, que podem se assemelhar s Shigellas (que so imveis e no produzem gs a partir da glicose, com exceo dos sorotipos Newcastle e Manchester de S. flexneri que diferem dos biogrupos 1-5 por serem indol e arginina negativos e CO2 positivo), portanto, no se deve dispensar a sorotipagem (AD). As Shigellas permanecem restritas ao TGI e a septicemia rara. As Shigellas causam no homem uma doena debilitante, a disenteria bacilar, cujo quadro clnico foi descrito entre os militares no sculo IV A.C.; so menos invasivas do que as Salmonellas; possuem antgeno O especfico e algumas estirpes tm antgeno K termolbil, cuja remoo facilita a aglutinao com soros anti-O (estas no apresentam antgeno H). A identificao fica confusa com outros gneros como a Hafnia alvei, Providencia, Aeromonas e E. coli, sendo que as Shiguellas exigem um nmero maior de provas bioqumicas devido sua quase total negatividade nesses testes. Todas as espcies de Shigella produzem enterotoxinas e uma delas, a S. dysenteriae, produz uma exotoxina conhecida como neurotoxina de Shiga que potente responsvel pela patogenia da espcie. As Shigellas causam desde infeces inaparentes pequenas infeces com algum desconforto e pouca diarria, sendo que o incio das infeces sbito com tenesmo, diarria e febre, aps um perodo de incubao de 1 a 4 dias. Todas as espcies so patognicas para o homem causando leses no epitlio e mucosas, inflamao aguda, restos celulares, sendo a S. flexneri a responsvel pelas leses. As leses superficiais de mucosas do TGI so devidas ineficincia de Ig C. Os anticorpos da classe Ig A tm efeito de proteo. As fezes devem ser colhidas na fase aguda, antes do incio do tratamento, e devem ser colocadas em meio de enriquecimento (caldo selenito) para depois serem semeadas no MacConkey e no agar SS. O seu crescimento ruim, mesmo em casos de disenteria aguda. As Shigellas so anaerbias facultativas, porm crescem bem em aerobiose; apresentam variaes coloniais (lisa - S e rugosa - R no invasiva). H um aspecto a ressaltar sobre a formao de uma pseudomembrana nas reas ulceradas do TGI: esta pseudomembrana composta por fibrina, restos celulares, bactrias e mucosa necrosada e, posteriormente, substituda por um tecido de granulao e conseqentemente por cicatrizao. O paciente que foi acometido por infeco causada por Shigellas est sujeito reinfeco.
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O tratamento feito com Cloranfenicol, Quinolonas que so antibiticos bacteriostticos. A administrao de Lactobacillus acidophilus (250 - 500 mL) produz uma acidulao do meio intestinal tornando-o imprprio para o crescimento do microorganismo patognico ou Leites fermentados. As vacina no tm efeito teraputico. c) Salmonella,sp: suas espcies so mais complexas apresentando mais de 2.200 sorotipos diferentes descritos por Kawffman - White, sendo agrupadas (A, B ... etc.) de acordo com o antgeno H (flagelar). A contaminao ocorre, normalmente, pela ingesto de gua, leite ou alimentos infectados por fezes humanas ou de animais. Os tipos clnicos das infeces podem ser: 1) Gastroenterites - varia desde uma diarria leve a fulminante, febre baixa, nuseas e vmitos; 2) Septicemia ou bacteremia - febre alta com hemocultura positiva (S. cholerae-suis a espcie invasiva); 3) Febre entrica - febre amena e diarria causada por qualquer tipo de Salmonella. Existe uma exceo para a febre tifide (S. typhi) que apresenta febre e constipao, nesses casos, quando a hemocultura positiva e em 7 a 10 dias ocorre diarria sanguinolenta, as culturas de fezes e urina so positivas. H casos de S. typhi nos quais o indivduo continua eliminando o microorganismo um ano aps o desaparecimento da clnica. As Salmonellas no fermentam a lactose e produzem H2S no TAF, so citrato positivo e ureia negativa, so mveis, no crescem em KCN e so lisina negativas. Suas principais espcies so: S. typhi, S. cholerae-suis e S. enteritidis. Os mais de 2.200 sorotipos pertencem S. enteritidis. As espcies podem ser subdivididas em 6 subgrupos (O, A, B, C2 e E), pela maioria dos laboratrios clnicos, atravs da utilizao de antisoros disponveis no comrcio, contudo, tipagens adicionais requerem servios de um laboratrio de referncia. As espcies de Arizona e Citrobacter possuem caractersticas semelhantes s das espcies de Salmonella; a Arizona hinshawii passou a ser subespcie da S. enteritidis e causa gastroenterites no homem e animais e a bactria Citrobacter oportunista no homem. Alguns autores ainda citam outras espcies de Salmonellas: S. pullorum (diarria em pintos), S. galinarum, S. shattmlleri e S. paratyphi A, B e C; porm, a taxonomia atual aceita somente as trs espcies citadas anteriormente. As doenas causadas pelas Salmonellas so denominadas salmoneloses e apresentam-se sob as formas de: 1) Febre tifo - S. typhi; 2) Febre paratifide - no homem provocada pela S. paratyphi B (gastroenterite aguda), nos animais pela S. cholerae-suis ( infeces tipo paratifo em leites). Alguns autores citam antgenos R e Vi (polissacrides resistentes ao calor, lcool e fenol), alm dos antgenos O que so os mais importamtes, e dos antgenos H que so de natureza protica e so termolbeis 100 graus C. A identificao sorolgica feita pingando uma gota de suspenso de Salmonella mais uma gota do antisoro diludo a identificar.
A S. typhi multiplica-se no tecido linfide da submucosa intestinal (placas de Peyer) e linfonodos, propaga-se no fgado, bao e medula ssea e volta ao sangue com liberao de endotoxina. A hemocultura positiva na primeira semana e negativa na segunda semana devido a anticorpos opsonizantes. Na convalescncia a coprocultura fica positiva e o indivduo torna-se um portador. O diagnstico laboratorial compreende duas reaes: a hemocultura e soro aglutinao (reao de Widal - pesquisa de Acs anti O e anti H - que positiva mais tardiamente). Hemocultura - em caldo com bile (200ml) --> 24 a 48 horas --> 37 graus C --> turvou --> esfregaos (Gram) --> placas --> sorologia e bioqumica.Ou em sistema automatizadoa (Bactec 9000). A coprocultura tem valia nos casos de infeces alimentares; a semeadura feita em caldo selenito e depois em agar SS ou agar Sulfito - Bismuto (inibe a E. coli) , ou sistema de automao (Microscan ou Vitek). A imunidade, celular e humoral, slida e duradoura.
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Aula 8 BACTERIOLOGIA DA GUA - II

d) Campylobacter jejuni: a infeco causada por este microorganismo se apresenta sob a forma de diarria, febre, dor abdominal, dor de cabea, vmitos, mialgia e artralgia; a transmisso por gua e alimentos contaminados e acomete mais indivduos na faixa etria de 20 anos. As fezes diarricas, material para anlise, devem ser transportadas temperatura ambiente se a semeadura for imediata, se no, as fezes devem ficar no refrigerador. Cultura - no cresce a 25 nem a 37 graus C, crescendo somente a 42 - 43 graus C. Requer atmosfera gasosa (de 2 a 3 % de CO2), mas no se deve usar as jarras de anaerobiose porque a quantidade de O2 necessria de 12 a 17 % e no de 3 a6 %. O meio mais utilizado o Campy BAP a 42 graus C e, aps o crescimento de 24 horas, avaliar com 48 e 72 hs; avaliao esta que pode ser feita pelo Gram que mostra bastonetes curvos, Gram negativos caractersticos. S e o material vier de agar no inibidor a 35 graus C , fazer o Gram e a montagem fresco (ver se h motilidade em flecha) para se obter os mesmos aspectos dos microorganismos em estudo. Aps isto, passar o material para o agar sangue e observar se h ou no crescimento (o C. jejuni no cresce em agar sangue, sensvel ao cido nalidixico, cefalotina e hidrolisa o hipurato). e) Helicobacter pylori: um novo microorganismo associado gastrite e lcera gastroduodenal; apresenta-se em espiral, porm mais semelhante ao gnero Spirillum do que ao gnero Campylobacter . Tem susceptibilidade ao bismuto, produz urease com atividades fortes (fator de patogenicidade) no muito ativo bioquimicamente, no fermenta carboidratos e nem reduz o nitrato e no hidroliza o hipurato de sdio. Sua morfologia em espiral vista no tecido gstrico (Gram, HE, Acridina orange), mas a colorao da prata de Warthin-Starry obteve melhores resultados. Para a cultura usado o gar chocolate e o gar Campylobacter de Skirrow (7% de sangue de cavalo, vancomicina, cido nalidixico e trimetropin). Outras sps de Helicobacter,sp : H. cinaedi (swabs retais em homossexuais), H. fennelliae (swabs retais em homo e bissexuais), Flexipira rappini (semelante ao H. pylory), pacientes com ou sem AIDS, Gastropirillum hominis (gastrite em humanos semelhantes a H. pylori). f) Vibrio,sp: a espcie tipo do gnero o V. cholerae que foi causa de diarrias potencialmente graves durante sculos, mas que hoje no aparece com freqncia. As fezes so lquidas, acinzentadas e podem ter cogulos. A doena evolui com diarria, desidratao, choque e morte. Existem cepas que no so de V. cholerae, mas que so causadoras de diarrias severas e infeces intraintestinais que resultam em septicemia
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fatal, tais como: V. parahaemoliticus - frutos do mar contaminados e mal cozidos - V. mimicus - mariscos = diarria - V. alginolyticus - feridas e ouvido. A clera clssica, quando aparece, tem como microorganismo responsvel o V. El Tor, que uma variante ou um biotipo do V. cholerae. Os microorganismos podem ser isolados do vmito quando o indivduo se encontra na fase aguda da doena; para o isolamento deve ser usado o meio TCBS (Tiossulfato - Citrato - Bile - Sacarose). O Vibrio cholerare tem 3 sorogrupos: Inaba (EUA, Peru, Chile, Brasil, Equador = variedades EL TOR) Ogawa (sudeste da sia) e Hikojima. Pode ser tratado com Tetraciclina. As provas ps cultura que so confirmatrias par V.cholerae so: Gelatinase + , aglutinao de eritrcitos de galinha + . g) Clostridium difficile so bacilos gram positivos muito encontrados em adultos hospitalizados (os agentes antimicrobianos implicam na doena gastrointestinal) e esto associados : colite pseudomembranosa, doena intestinal inflamatria inespecfica, obstruo e estrangulamento do intestino; so microorganismos que eliminam a flora normal pela competio, produzem toxina A (enterotoxina) e toxina B (citotoxina). h) Staphylococcus,sp: causam, atravs de uma enterotoxina, uma infeco que fica incubada de 1 a 8 horas e provoca nuseas, vmitos, diarria e convalescncia rpida, no havendo febre. i) Enterobacter,sp: so mveis, alguns tm cpsula, so citrato positivo, CO2 positivo, glicose positiva, VP, VM e H2S positivos. As espcies de interesse so: 1) E. cloacae - mais isolado na urina, escarro, pus, sangue e LCR. D reo cruzada com E. coli; 2) E. sakazaki - presente no meio ambiente e alimentos, causa meningite em recm nascido; 3) E. aglomerans - hemoculturas, aps cateterizao e atos cirrgicos; 4) E. aerogenes - fezes, esgotos, leite, gua, TGU, pus e sangue. Algumas espcies so capsuladas, so mveis, citrato positivo, CO2 positivo, glicose positiva, VP positiva, VM negativa e H2S positivo. Antigamente a espcie tipo era denominada Aerobacter aerogenes; o Enterobacter hafnia agora Hafnia alvei e as espcies de interesse so: E. cloacae, E. aerogenes, E. aglomerans, E. sakazakii e E. gergoviae (E. aerogenes atypical) = uria positiva). O E. cloacae (E. cloacae - like unemed sps 1,2,3) mais isolado na urina, escarro, pus, sangue e lquor; faz reao cruzada com E. coli. O E. sakazakii, que antes era E. cloacae, O E. aglomerans (E. agglomerans complex: Erwinia herbcola, E. melletiae e ainda: Pantoea agglomerans (E.agglomerans HGXIII); Pantoea ananas (E.agglomerans HGVI)
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Pantoea dispersa (E. agglomerans HGIII), aps atos cirrgicos e cauterizao positiva hemoculturas. O E. aerogenes encontrado em fezes humanas, esgotos, leite, gua, VGU, pus e sangue. j) Yersinia enterocolitica: um bacilo Gram negativo (enterobactria). Outras espcies de interesse so: Y. intermedia, Y. frederiksenii e Y. kristensenii (so Y. enterocoliticas atpicas). As manifestaes clnicas dependem do sorotipo, de fatores genticos e das condies do indivduo. Quadro clnico primrio - enterite, linfadenite mesentrica e ilete terminal. Quadro clnico secundrio - eritema nodoso, prpuras, artralgias e glomerulonefrites. A gastroenterite e linfadenite mesentrica so sintomas predominantes em crianas e adolescentes. Quadro laboratorial - a semeadura deve ser feita em meios seletivos como o gar tripticase (TSA), os sorotipos 03, 08 e 09 crescem em gar bismuto-sulfato, MacConckey, gar soja, HE e XLD. O crescimento em 4 graus C com enriquecimento em tampo fosfato frio. Bioqumica - sacarose, uria, ornitina, lisina, arginina e motilidade a 37 graus C. Confirmar com a sorotipagem. Os sorotipos O 3, O 8 e O 9 crescem em gar sulfitobismuto, MacConckey, SS, XLD e Hektoen. H relatos de contaminao por transfuso sangnea e preparados caseiros com tripas e em alimentos dessa natureza que foram armazenados em supermercados. Outras sps de Yersnia,sp: Yersnia pestis, Yersinia pseudotuberculosis (linfadenite mesentrica em crianas, simulando apendicite) k) Clostridium difficile: espcie toxinognica com enterocolite e diarria associada a antibiticos (outra causa o S. aureus do grupo III). um bacilo anaerbio grosseiro, encontrado na gua, intestinos de animais, vagina e uretra de humanos e fezes de crianas sadias, mas em apenas 3% de fezes de adultos sadios. Clostridium difficile so bacilos gram positivos muito encontrados em adultos hospitalizados (os agentes antimicrobianos implicam na doena gastrointestinal) e esto associados : colite pseudomembranosa, doena intestinal inflamatria inespecfica, obstruo e estrangulamento do intestino; so microorganismos que eliminam a flora normal pela competio, produzem toxina A (enterotoxina) e toxina B (citotoxina). l) Pseudomonas,sp: so cocobacilos Gram negativos (no so enterobactrias), mveis (a nica espcie imvel P. mallei que citocromo oxidase positivo) e catalase positiva, cuja espcie mais patognica a P. aeruginosa. So flageladas e o nmero de flagelos serve para separar as espcies, mas no a nvel de rotina laboratorial; contm fmbrias
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que facilitam a fagocitose,. So encontradas nos olhos, urina, lavados broquicos e TGU femino , no homem pode causar estenose de uretra. As espcies de interesse so: P. aeruginosa, P.fluorescentes, P. putido, P. cepatica, P. stuzei e P. malthophila. Produzem pigmentos solveis, a pioverdina (P. fluorescens) e a piocinina (P. aeruginosa - azul) e odor adocicado semelhante ao da uva. As espcies de interesse so: P. aeruginosa (mais patognica, que cresce a 42C), P. fluorescens, P. putida, P. cepacia (Burholderia cepatia, encontrada na putrefao da cebola , em leses lcero-necroticas em humanos, em pacientes com fibrose cstica e pacientes com estenose de uretra, aps o uso de sondas), P. stutzeri (gua e solo, raro em infeces) e P. maltophilia (Stenotophomonas maltophila, encontrada no aparelho respiratrio, sangue, feridas e urina e pacientes com infeces oportunistas), P. pseudomallei (Burkholderia pseudomallei) m) Proteus,sp: so fenil-alanina positivo, VM positivo, H2S positivo e CO2 positivo. As espcies de interesse so: P. mirabilis, P. vulgaris, P. retteri e P. penneri, sendo que as Providencias stuartii e P. alcalifasciens esto includas como P. morganii e foram para o novo gnero Morganela,sp. Recentemente o nome P. peneri foi proposto para o organismos P. vulgaris biogrupo I ou P. vulgaris indol negativo. No TAF apresentam colnias no pigmentadas e em meios seletivos podem ser confundidas com colnias no fermentadoras de lactose. A espcie de Proteus mais relacionada s infeces humanas P. mirabilis, comumente encontrado em pacientes com antibioticoterapia longa, pacientes cateterizados e ps-cirrgicos, alm de estar presente em 25% da populao (portadores sadios que albergam o germe no intestino); encontrado no solo, gua e fezes contaminadas. So bactrias pleomrficas, no capsuladas, mveis e apresentam crescimento em vu. Podem ser encontrados em feridas, olhos e trato respiratrio e so sensveis ampicilina e cefalosporina; o P. vulgaris, por sua vez, resistente penicilina e cefalosporina. A famlia Proteae tem como espcies de interesse: P. mirabillis, P. vulgaris (P vulgaris biogrupo 2), P. rettigeri (passou para P.vulgaris biogrupo 1), P. penerii e P. inconstans. As Providencia stuart e Providencia alcalifaciens esto includas como Proteus inconstans. O Proteus morganii foi transferido para o novo gnero Morganella morganii(subespcie morganii e . Recentemente o nome Proteus penerii foi proposto para o organismo P. vulgaris indol negativo. O P. mirabillis, P. penerii e P. vulgaris so H2S positivos e podem ser confundidos com Salmonella,sp.
EVIDNCIA BACTERIOLGICA DE POLUIO # Pode-se perder as bactrias no transporte das amostras de gua. # As bactrias podem estar em pequeno nmero. #H urgncia nos resultados devido ao fato de indivduos terem ingerido a gua.
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Tcnicas bacteriolgicas para a gua: # A amostra deve ser colhida em recipiente estril; # A amostra deve ser representativa do universo do qual foi colhida; # Deve-se evitar contaminao da amostra durante e aps a coleta; # A amostra deve ser analisada logo aps a sua obteno; # Havendo necessidade de demora para a anlise, a amostra deve ser guardada entre 0 e 10 graus C. Mtodos: Contagem em placa padronizada - pode ser feita antes e depois de um tratamento sanitrio. As gua de boa qualidade tm uma contagem de colnias baixa (menor do que 100 col/ml). um mtodo til para determinar a eficincia das operaes destinadas remoo ou destruio dos microorganismos (tais como sedimentao, filtrao e clorao). Tcnica: transferir 1,0 ml da gua amostra para um frasco contendo 9,0 ml de gua estril, agitar, fazer diluies at 10 elevado a menos 5 ( 1/100000). Vrias amostras de 1,0 ml so semeadas em agar EMB e devem ser contadas as placas que contenham de 30 300 colnias (acima de 300 a placa est cheia demais e abaixo de 30 passa a ter erros nos percentuais). Prova da presena de bactrias coliformes **Teste presuntivo - inoculao no caldo lactosado; se o resultado for positivo h evidncia presuntiva de coliformes e deve-se prosseguir com o exame, caso o teste d negativo indica ausncia de coliformes e o exame no prossegue. **Teste de confirmao - transferir do caldo lactosado para caldo lactose-bile (verde brilhante = gs = coliformes [inibe as bactrias que no so coliformes] ) e para agar EMB (Escherichia = brilho verde metlico e Enterobacter = colnias grandes, mucides e rseas). **Teste completo - colnias mais tpicas vindas do EMB so inoculadas em caldo lactosado = gs = coliformes. Fazer Gram lembrando que os coliformes so Gram negativos, fazer tambm as provas bioqumicas. **Mtodo da filtrao em membrana - grande volume de gua filtrado atravs de um tipo de membrana esterilizadas capaz de reter bactrias na sua superfcie e deixar passar rapidamente partculas menores e gua. Em seguida a membrana transferida para um meio seletivo indicado para bactrias coliformes (EMB), levada para incubao e posteriormente podem ser observadas colnias na superfcie da membrana. A vantagem que o nmero de coliformes determinado para um volume conhecido de gua. Existem ainda os mtodos chamados Testes para a diagnstico de coliformes ou Provas IMVIC:
* Prova de Indol - bactrias que possuem triptofanase hidrolisam o triptofano produzindo indol, cido pirvico e NH3; para enterobactrias esse meio deve conter peptonas ou tripticase, NaCl, gua destilada e pH 7,1. Usa-se reagente de Kovacs ou Erlich. * Vermelho de metila - se baseia no uso de um indicador de pH (vermelho de metila) que em pH 6,0 amarelo e em pH 4,4 vermelho. Este indicador revela se o germe produz ou no grandes quantidades de cido, a partir da glicose, atravs da via cido-mista de fermentao. S os germes que mantm o pH baixo aps 48 a 72 horas e ultrapassam o sistema de tampo do meio so chamados de VM positivos. O meio utilizado de Clarck e Lubs. O controle positivo feito com E. coli e o negativo com Enterobacter aerogenes. * Vogues Proskauer - as bactrias utilizam a glicose para produzir cido pirvico e acetil-metil-carbinol (acetona) em 24 a 48 horas. O meio utilizado o de Clarck e Lubs com pH abaixo de 6,3 (passa de vermelho a amarelo). Utiliza como catalizadores o alfanaftol a 5% (intensifica a cor) e o KOH a 40% (agente oxidante). * Prova do citrato - utilizao do citrato como nica fonte de carbono. O meio passa de verde a azul quando a bactria citrato positiva. Observao: E. coli ( + + - - ) e Enterobactrias ( - - + + ).
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Aula 9 MICROBIOLOGIA DO LEITE

O leite tem sido considerado o alimento humano mais prximo da refeio. O seu excepcional valor nutritivo devido aos seus principais constituintes (protenas, carboidratos, gorduras, sais minerais, vitaminas e gua) e, por este motivo, um excelente meio de cultura para crescimento de vrias bactrias. O leite desnatado estril , inclusive, utilizado em laboratrios para o desenvolvimento e manuteno de bactrias (leite tornasolado). O leite contm microorganismos no momento em que tirado da vaca e pode ser, posteriormente, contaminado durante o seu manuseio e processamento, sendo tambm susceptvel contaminao por germes patognicos. O conhecimento sobre o contedo microbiano do leite pode ser usado no julgamento de sua qualidade sanitria e das condies de sua produo, j que, quando as bactrias do leite causam alteraes qumicas, tais como degradao de gorduras, protenas ou carboidratos, tornam este leite inaceitvel para o consumo. Certos germes produzem alteraes qumicas desejveis na fabricao de laticnios (leite fermentado, queijo, ...), mas as fontes de microorganismos do leite e as precaues devem ser observadas com o objetivo de reduzir a contaminao, os rebanhos devem receber inspeo peridica para analisar a sade de cada animal, o leite deve ser retirado assepticamente e deve conter um nmero pequeno de bactrias de natureza saprfita. Para que tudo isso acontea faz-se necessrio uma constante manuteno na limpeza da rea de ordenha e uma reduo nas operaes que gerem poeira (alimentao, por exemplo). A fonte de contaminao mais importante o equipamento que entra em contato com o leite (latas, canalizaes, tanques, etc.). Utiliza-se para a desinfeco gua quente, vapor, cloro e compostos quaternrios de amnia e o pessoal envolvido no processo de ordenha deve possuir boa sade. TIPOS DE MICROORGANISMOS DO LEITE 1-Tipos bioqumicos: so aqueles que promovem, no leite bruto, a fermentao da lactose em cido ltico, desenvolvendo no mesmo um sabor azedo. Os microorganismos representativos so: Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris, Lactobacilos casei, Lactobacilos plantarum e Microbacterium lacticum, sendo que os Lactobacilos provm das forragens e do estrume e o Microbacterium, que vem de utenslios e estrume, pode resistir temperatura de 80 a 85 graus C. A E. coli e Enterobacter aerogenes so indicadores de qualidade sanitria (lactose - cidos e gases). 2- Tipos trmicos: so aqueles que obedecem a um timo de temperatura para crescer e tambm apresentam resistncia trmica. A temperatura elevada (pasteurizao)
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provoca a reduo dos microorganismos; a temperatura baixa previne modificaes qumicas pelos microorganismos. A bactria do leite pode ser psicrfilas, mesfilas, termfilas e termodricas (resistem pasteurizao e so prejudiciais ao leite - Ex. Streptococcus termophilus, Bacillus subtilis e Clostridium,sp). A perda do leite na geladeira d-se pelo acmulo de produtos metablicos de bactrias psicrfilas. EXAME MICROBIOLGICO DO LEITE As altas contagens bacterianas nem sempre indicam que h bactrias patognicas, mas sim que houve uma refrigerao indequada, armazenamento imperfeito ou contaminao excessiva. Os testes rotineiros do leite bruto foram estipulados pela Standard Methodes for Examination of Dary Products, e neles esto inclusos testes microbiolgicos e qumicos. #Contagem em placa padronizada - utiliza gar em placas para determinao das populaes bacterianas: # diluio da amostra at 10 elevado a menos 5 (100000); # adio de uma quantidade exata da amostra diluda a uma placa de Petri; # acrscimo do meio com gar, liqefeito e parcialmente resfriado a 43-45 graus C; # mistura vigorosa do meio com a amostra; # incubao a 32 graus C aps solidificao do meio; # contagem de colnias aps 48 horas de incubao. O nmero de colnias para ml de leite relatado com a contagem em placa padronizada por unidade de volume. A contagem obtida no representa todas as bactrias viveis presentes , mas sim aquelas que so capazes de crescer no meio fsico particular e na presena do alimento fornecido. Este mtodo fornece uma estimativa da populao total da amostra. #Contagem microscpica direta # marca-se uma lmina com uma rea de 1 cm quadrado; # sobre esta rea espalha-se uniformemente 0,01 ml de leite; # seca o esfregao, cora e leva ao microscpio ptico para determinar o nmero de bactrias. # Resultado: mdia de bactrias contadas em 10 campos multiplicada pela constante microscpica ou fator microscpico, multiplicada pela diluio e multiplicada por 100 (amostra de 0,01). Esta tcnica tem a desvantagem de contar clulas bacterianas, ou seja, conta as bactrias vivas e as mortas. #Teste da redutase - o leite, aps expor-se ao ar, adquire um potencial de xidoreduo de aproximadamente 300mV positivos. Como as bactrias crescem no leite,
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elas consomem oxignio e produzem substncias redutoras que baixam o potencial de oxido-reduo a um valor negativo. A taxa de desvio do potencial de oxido-reduo depende do nmero e da espcie da bactria; esse desvio pode ser acompanhado pela adio de um indicador aproriado amostra de leite e posterior incubao sob condies pre-determinadas. O azul de metileno e a rezasurina so dois indicadores teis no teste da redutase. # Transformaes entre as formas oxidadas e reduzidas destes compostos. 1) Azul de metileno: forma oxidvel do leite = azul - forma reduzida do leite = leuco azul de metileno (incolor). 2) Rezasurina: azul ardsia, forma a resorfina que rosa e em seguida a dihidroresorfina que incolor. O tempo de reduo inversamente proporcional ao contedo bacteriano inicial da amostra. As desvantagens incluem as condies mais favorveis para organismos mesfilos do que psicrfilos e termfilos. #Teste da fosfatase - a fosfatase uma enzima que est presente no leite cru e destruda por uma pasteurizao correta. Pode-se testar a pasteurizao do leite averiguando a presena ou ausncia desta enzima. # leite bruto (enzima fosfatase ?); # acrescenta dissdio-fenil-fosfato (substrato); # forma fenol e fosfato (produto); # a quantidade de fenol liberado pode ser avaliada pela adio de um reagente que se mostra azul na presena do composto. DOENAS TRANSMITIDAS PELO LEITE Diversas doenas podem ser transmitidas pelo leite, sendo as fontes de contaminao a vaca, o homem ou ambos. # Primeira seqncia: agente patognico da vaca infectada -- leite -- homem ou vaca ( brucelose, tuberculose e mastite). # Segunda seqncia: agente patognico do homem (doente ou portador) -- leite -homem (febre tifide, difteria, disenteria e escarlatina). A vaca est sujeita a infeces por Streptococcus dos grupos A e B, Salmonella,sp; Staphilococcus aureus do grupo III e Coxiella burnett (febre Q), que podem sair do bere da vaca para o leite causando mastites nas vacas e gastroenterites no homem; alm das espcies de Brucella: B. melitensis (caprinos), B. suis (sunos) e B. abortus no gado. As Brucella, sp tm crescimento lento e devem ser mantidas por pelo menos 3 semanas para serem decantadas, devem ser semeadas em meios enriquecidos [aconselha-se o uso de gar tripticase - soja (4 a 7 dias); so cocobacilos
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Gram negativos, catalase positiva, citocromo-oxidase positivo, lactose negativa, sacarose negativa, manitol negativo, so mveis e no so hemolticas. Os germes proteolticos (ex. Bacillus subtilis, B. cereus, Pseudomonas,sp e Proteus,sp) degradam a casena at peptdeos que podem ser, ainda, decompostos em aminocidos. A protelise pode ser precedida de coagulao de casena pela ao enzimtica da renina. Os microrganismos lipolticos do leite (ex. Pseudomonas fluorescens, Candida lipolitica e Penicillium,sp) hidrolizam a gordura do leite at glicerol e cidos graxos dando gosto ranoso ao leite.
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Aula 10 BACTERIOLOGIA DOS ALIMENTOS

Os alimentos passam por vrias etapas de preparao. Numa dessas etapas eles podem ser contaminados por microorganismos e, a menos que o crescimento e metabolismo desses germes possam ser controlados, esses alimentos sofrero um processo de deteriorao (existem vrios tipos de deteriorao). Os alimentos so compostos por protenas, carboidratos e gordura, todos possveis substratos nutritivos para um ou outro tipo de germe, lembrar que alguns microorganismos so teis na preparao de tens alimentares especiais (produtos fermentados como pickles, azeitonas, chucrutes,etc.). Os mtodos de preservao de alimentos empregam processos fsicos ou qumicos. FLORA BACTERIANA DOS ALIMENTOS FRESCOS As superfcies dos vegetais, carnes e frutas so contaminadas por vrios micrbios, sendo que a quantidade desta contaminao mostra a populao microbiana do ambiente, a condio do produto bruto, os mtodos de manipulao, o tempo e as circunstncias de armazenamento do alimento. bom que o nvel de contaminao do alimento bruto seja pequeno porque, se for grande, sugere deteriorao do mesmo. # Carnes - o alimento abatido tem uma contaminao externa pequena e os tecidos internos so estreis. Os microorganismos de carnes cortadas e refrigeradas so os mesmos do ambiente e instrumentos de corte. Bactrias comuns na contaminao de carnes: Pseudomonas,sp; Staphilococcus,sp; Enterobacterias e Coliformes. # Aves - aves depenadas e visceradas possuem flora bacteriana de superfcie (pele), que se origina dos germes normalmente presentes nas aves vivas, e de manipulaes durante o abate. A contagem de colnias para 2 cm quadrado de pele deve ser entre 100 e 1000 col/cm quadrado. A contagem de colnias nunca pode ficar at 100 vezes maior. # Ovos - o interior do ovo estril. Qualquer contaminao se deve s condies sanitrias sob as quais o ovo foi manipulado, ou s condies de armazenamento. Bactrias e bolores podem entrar no ovo atravs de fraturas na casca. Ex:Salmonella,sp # Frutas e vegetais - so normalmente suceptveis s infeces bacterianas, micticas ou virais. A quebra dos tecidos na colheita pode facilitar a entrada de microorganismos. O pH entre 2,3 e 5,0 das frutas ajuda o crescimento de fungos e o pH variando entre 5,0 e 7,0 dos vegetais possibilita o crescimento das bactrias. # Peixes e moluscos - a flora bacteriana destes reflete a qualidade das guas nas quais foram colhidos. Os frutos do mar so grandes transmissores de agentes patognicos. Os
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moluscos podem ser fontes de hepatites virais, os camares e ostras albergam o Vibrio parahaemolyticus, o qual causa gastroenterite. # Po - apesar do cozimento no forno, ainda persistem esporos de Bacillus,sp; Clostridium,sp e fungos que germinaro para produzir uma nova flora caso no haja preservao. DETERIORAO DOS ALIMENTOS A maior parte dos alimentos serve como meio de cultura para o crescimento de muitos microorganismos diferentes. Uma vez garantida a oportunidade de crescimento, os microorganismos produziro alteraes no aspecto, sabor, cheiro e outras caractersticas dos alimentos. Estes processos de degradao podem ser descritos como abaixo: 1) Alimentos proteicos mais germes proteolticos = aminocidos, aminas, amnia e sulfeto de hidrognio. 2) Alimentos carboidratados mais germes fermentadores de carboidratos = cidos, lcool e gases. 3) Alimentos gordurosos mais germes lipolticos = cidos graxos e glicerol. Alguns germes alteram a colorao de alimento produzindo pigmentos e algumas substncias muciloginosas podes se desenvolver em alimentos contaminados por germes capazes de sintetizar polissacrides. OS ALIMENTOS ENLATADOS - TIPOS DE DETERIORAO LIGADOS AO pH #Termfilos - acidificao (flat sour) - pH 5,3 e acima: ex. milho e ervilha (Bacillus stearothermophilus). O lquido torna-se turvo, azedo e com odor levemente anormal. #Anaerbios termfilos - pH 4,8 e acima: thermosacarolyticum). Odor butrico, azedo. ex. milho e espinafre (Clostridium
#Deteriorao sulfdrica - pH 5,3 e acima: ex. milho e ervilha (Clostridium sporogenes). Cheiro de ovo podre. # Mesfilos #Anaerbios putrefativos - pH 4,8 e acima : ex. milho e aspargo (Clostridium sporogenes). Odor ptrido. #Anaerbios butricos - pH 4,0 e acima: ex. tomate e pera (Clostridium butyricum). Alimento fermentado, odor butrico. #Acidificantes (flat sour) - ex. suco de tomate (Bacillus thermoacidurons). Ausncia de odor e sabor.
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#Lactobacilus,sp - pH 3,7 a 4,5: ex. frutas, lata estufada. #Leveduras - pH 3,7 e abaixo: ex. frutas e latas estufadas. Odor de fungos. #Bolores - pH 3,7 e abaixo: ex. frutas, lata plana. Odor de mofo. EXAME MICROBIOLGICO DOS ALIMENTOS Esquema geral - amostra do alimento (preparao do homogeneizado). Exame microscpico - a fresco e corado pelo Gram # Contagem total de colnias - identificao de gneros ou espcies de: Coliformes, S. faecalis, S. aureus, Salmonella,sp; Shiguella,sp; Vibrio parahaemolitycus; Clostridium bolutium; C. perfringes; Bacillus cereus e outros. # Contagem diferencial - categoria de microorganismos. # Tipos fisiolgicos - aerbios, anaerbios, psicrfilos, mesfilos ou termfilos. # Tipos metablicos - proteolticos, lipolticos ou sacarolticos. As tcnicas fluorescentes so altamente seguras e rpidas. CONTROLE DAS BACTRIAS DOS ALIMENTOS * Irradiao ultravioleta ou com raios gama; * Dissecao (desidratao) - uvas, leite em p; * Baixa temperatura; * Calor - 121 graus C por 15 minutos; * Sal - carnes salgadas; * Acar - concentraes elevadas - no cresce bactrias, mas deixa crescer fungos; * Defumao - primeiro salga e depois defuma; * Qumicos - propionato de clcio (po), benzoato de sdio (cidra e vegetais), nitratos (carnes), cido srbico (queijos - no cresce fungo - evita o Aspergillus,sp).
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Aula 11 INFECO HOSPITALAR

INTRODUO: A infeco intra-hospitalar um risco constante e responsvel por altas taxas de morbidade e mortalidade, sendo que os equipamentos e o pessoal so incriminados, freqentemente, como vetores de agentes nasocomiais. Foi realizada uma pesquisa de bactrias nos materiais provenientes de fossas nasais, mos, garganta (amigdalas) e fezes de 62 funcionrios, bem como naqueles provenientes do ambiente fsico de um Hospital Geral em So Paulo. Verificou-se a ausncia de enteropatognicas, porm, a prevalncia de outros bacilos Gram negativos foi elevada entre o pessoal hospitalar, principalmente a copa, cozinha, limpeza e lavanderia. Presenciou-se fagotipos de S. aureus tanto no ambiente, como no pessoal, assim como a alta prevalncia de Bacillus,sp no ambiente. Conclui-se pela participao, tanto do pessoal hospitalar, como do meio ambiente na disseminao de microorganismos, acreditando serem necessrios procedimentos de limpeza mais eficientes e educao mais adequada queles que vo exercer atividades infraestruturais dentro do hospital. A situao no Brasil revelou incidncias de 4,1 a 13,2% , com um nvel de significncia de 356.000 casos anuais, levando 61.000 a bito. Reconhecendo este fato grave, o governo brasileiro, atravs da portaria 196 de 1982 do Ministrio da Sade, tornou obrigatria a existncia de uma Comisso de Vigilncia Epidemiolgica em hospitais. Os equipamentos de uso obrigatrio como catteres, umidificadores, ventiladores, balanas, incubadoras, berrios e banheiros tm sido incriminados como vetores de agentes infecciosos nasocomiais. Em relao ao pessoal hospitalar, a disperso de microorganismos parece ter sido do tipo mos para mos. Ateno especial vem sendo dada aos manipuladores de alimentos, investigando a possvel participao destes na prevalncia de germes envolvidos em infeces intra-hospitalares. Com relao aos microrganismos causadores de processos infecciosos intrahospitalares, tem-se observado uma evoluo interessante: o Streptococcus,sp beta hemoltico foi, durante longos anos, o principal agente etiolgico das infeces hospitalares, especialmente entre as parturientes; de 1950 a 1965, alastraram-se por todo o mundo as infeces por Staphilococcus,sp e a sua transmisso foi objeto de numerosos estudos. Em 1967, MacNamara e cols. j incriminavam os bacilos Gram negativos como germes mais freqentemente isolados de processos infecciosos, prevalncia esta verificada at os dias atuais, deixando a concluso dolorosa de que no houve diminuio no nmero de infeces hospitalares.
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A coleta para as investigaes pode ser feita em portas, maanetas, telefones, mesas, pias, torneiras e em outros pontos diferentes do hospital. Em relao ao pessoal podem ser investigadas as fezes, fossas nasais, mos, etc. Todos estes materiais podem ser inoculados em caldo tripticase-soja ou tioglicolato. Para a pesquisa de bactrias Gram negativas usam-se meios seletivos normais e, posteriormente, so feitas as provas bioqumicas. Para a pesquisa de bactrias Gram positivas usa-se o gar sangue, para os Staphilococcus,sp deve-se seguir o seu fluxograma. Algumas pesquisas mostram que nas mos dos funcionrios predominam as bactrias Gram negativas e em especial o Citrobacter freundii ( infeces alimentares, TGU, ouvido mdio e at meningite). O Pseudomonas aeruginosas, por ser resistente clorao, foi encontrado em pias e torneiras; a Serratia marcenses (pigmento vermelho) foi isolada em nebulizadores, solues intravenosas e catteres; a maior incidncia de Enterobacter cloacae e E. aerogenes foi verificada nas mos e a sua presena indica contaminao fecal. O gnero Bacillus, e em especial o Bacillus subtilis e B. antracis, tem sido encontrado nas mos do pessoal da limpeza. Os Bacillus,sp so bactrias que sobrevivem por longo tempo, na poeira do ar, sob a forma de esporos; o seu achado no pessoal, em mos ou fossas nasais, sugere infeco do ambiente hospitalar. Esses microorganismos, normalmente, no so patognicos, porm, se forem introduzidos no organismo de pacientes portadores de processos graves e imunodeprimidos, podem causar danos fatais. A cirurgia, ou mesmo tcnicas mdicas mais sofisticadas como a hemodilise intermitente, so considerados exemplos das possibilidades de introduo desses microrganismos nos tecidos dos pacientes. O S. aureus esteve presente nas mos e esta prevalncia, apesar de ser baixa na literatura, pode sugerir risco de intoxicao alimentar, portanto, deve ser verificado nas pessoas que preparam o almoo. O S. aureus do grupo III (infeco alimentar por enterotoxina) tambm muito encontrado nas fossas nasais do pessoal de hospital.
ROTINA DE SERVIOS PARA MEIOS CONTAMINADOS E TCNICAS ESPECIAIS PARA A LIMPEZA DE AMBIENTES HOSPITALARES. MATERIAIS DE LIMPEZA Esfreges, panos de cho e escovas devem ser lavados diariamente. Deve haver dois baldes de cores diferentes, ambos contendo soluo a 3 %, sendo o primeiro para aplicaes do produto e o segundo para enxaguar os panos. Os rodos de borracha
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e panos de cho devem ser diferenciados para a lavagem de sanitrios, centro cirrgico, centro obstetrcio, berrio, CTI e PS. As solues desinfetantes e detergentes devem ser aplicadas sem diluio prvia, caso haja necessidade de diluir, esta diluio deve ser feita no momento da limpeza, no prprio local e diretamente no balde. Usar hipoclorito de sdio a 5 % para baldes e pias, o funcionrio dever usar um medidor de 200 ml para ralos e 100 ml para pisos. Nas reas crticas e semi - crticas dever ser utilizado o Tersyl a 3 %. Nenhum material de limpeza dever ser guardado na rea interna do hospital e sim na rea de limpeza. Deve-se fazer a limpeza e desinfeco dos materiais de limpeza aps o seu uso. AGENTES DE LIMPEZA De acordo com a portaria 196 de 24/06/83 do Ministrio da Sade, devem ser usados compostos base de dois ou mais fenois sintticos (ortofenil-fenol paratercirio, bi-fenol) na concentrao de 0,3 %, aps diluio, associados ao sabo ou detergente amnico, EDIA e antioxidantes. USOS: #Centro cirrgico, CTI, berrio e unidade internacional - compostos diquaternrios associados a monoquaternrios de amnio, dicloreto de acetil-dimetil amnio, cloreto de alquil-dimetil-benzil amnio, soluo de hipoclorito de sdio. #Ralos, pias e sanitrios - 200 ml do agente, na concentrao de 5 %, uma vez por semana e, quando houver suspeita ou confirmao de hepatite, usar diariamente. Para a desinfeco de artigos contaminados por vrus us-lo a 1 %. REAS #Centro cirrgico - a limpeza deve ser efetuada: aps o trmino de cada cirurgia e uma vez por dia aps todas as cirurgias programadas, geralmente no perodo noturno ou aps uma cirurgia contaminada. #Vestirios - deve ser feita a limpeza de armrios, paredes, cho, vidros e portas diariamente. A roupa suja no deve ficar exposta no vestirio ou em qualquer rea do centro cirrgico, devendo ser recolhida vrias vezes por dia. A roupa limpa tambm no deve ficar exposta. #Sala de expurgo - lavar diariamente com gua e sabo, enxaguar e passar pano embebido em soluo desinfetante. #Berrio - limpar duas vezes ao dia, recolher os sacos de lixo em um saco nico e grande (os cestos de lixo devem ter tampa e pedal). Para fazer a limpeza dos pisos devese fazer varredura mida: umedecer o pano em soluo desinfetante (dois baldes), passar no piso no sentido do fundo para a porta da frente sem encostar nos beros, que devem ser removidos por outra pessoa que no o faixineiro. Os mveis dos bebs devem ser limpos no local de higienizao dos bebs e com um pano de limpeza embebido em
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desinfetante. Portas e vidros limpar uma vez por semana com gua e sabo, soluo desinfetante da parede ao teto. #CTI - deve ser limpa duas vezes por dia, sala e corredor, o piso deve ser limpo com soluo desinfetante do fundo para a porta e o lixo deve ser recolhido Paredes, portas e vidros devem ser limpos uma vez por semana com gua e sabo, e, diariamente, passar pano com desinfetante.
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CURSO DE BIOMEDICINA MICROBIOLOGIA II

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MICROBIOLOGIA II - CBB3642 - 4 CRDITOS

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AULA 1 FUNGOS DERMATFITOS

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AULA 2 RECONHECIMENTO DE AGENTES DE MICOSES SUPERFICIAIS POR FUNGOS NO DERMATFITOS

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AULA 3 MICOSES SUBCUTNEAS

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4- Criptococose Sinonmia - Blastomicose europia, Doena de Buschke, Torulosis, Meningite fngica .

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Pele -- Intertrigo por leveduras:

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6- Outras sps de Candida: C. glabrata , C. guilliermondii, C. stellatidea , C. lusitaniae, C.kefyr, etc.

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Aula 6 MICOSES OPORTUNISTAS

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