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Propagao de Plantas Frutferas

Editores tcnicos Jos Carlos Fachinello Alexandre Hoffmann Jair Costa Nachtigal

EMBRAPA

Infra-estrutura para Propagao de Plantas Frutferas

O objetivo de todo viveirista produzir mudas de plantas frutferas com elevado padro de qualidade (morfolgica, fisiolgica e fitossanitria). Essa meta essencial para garantir a competitividade do viveiro e o retorno certo do investimento efetuado no estabelecimento da atividade, alm de assegurar ao cliente, a satisfao de suas necessidades e, ao produtor de mudas, a idoneidade e a estabilidade do empreendimento durante anos. Para que esse objetivo seja alcanado, fundamental adotar um elevado nvel tecnolgico, que inclua todas as etapas da produo, desde a obteno do material propagativo bsico at o transporte da muda ao cliente. Avanos na tecnologia de propagao so cada vez mais visveis e concretos. Em culturas de nvel tecnolgico mais avanado, como na citricultura, na bananicultura e na pomicultura, parte dessa tecnologia j est quase totalmente incorporada prpria exigncia legal, estabelecida pelos rgos oficiais em nvel estadual e federal. Neste captulo, sero abordadas as principais estruturas e meios para propagao de espcies frutferas, indicando algumas das condies que maximizem a qualidade das mudas produzidas. A necessidade em infra-estrutura do viveiro varivel, conforme as exigncias legais, o nvel tecnolgico e o conhecimento da cultura, a escala de produo de mudas, o tamanho do viveiro, a disponibilidade de recursos do viveirista, o destino das mudas e o grau de exigncia do mercado consumidor. Sementeiras e viveiros Para a propagao de plantas frutferas, um dos aspectos de grande importncia a infra-estrutura da rea de produo de mudas. Uma infra -estrutura adequada, racional e tecnificada o primeiro passo para que o viveirista tenha uma atividade eficiente e economicamente vivel. A escolha da infra-estrutura do viveiro de produo de mudas frutferas depende de diversos fatores, tais como: Quantidade de mudas produzidas. Regularidade desejada da oferta de mudas. Nmero de espcies a serem propagadas. Mtodo de propagao. Custos das instalaes. Grau de tecnificao do viveirista. Em relao a esse ltimo fator, vale ressaltar que a propagao de plantas uma atividade muito dinmica e tem tido avanos que possibilitam a produo com qualidade e eficincia. Da, decorre a importncia do viveirista estar em contnuo contato com os rgos de pesquisa, universidades e servios de extenso, para constante aperfeioamento. Entende-se, por viveiro, a rea onde so concentradas todas as atividades de produo de mudas. Quanto durao, os viveiros podem ser classificados em permanentes e temporrios. Viveiros permanentes So aqueles com carter fixo, onde a produo de mudas prolonga se por vrios anos. Por isso, esses viveiros requerem um bom planejamento para a instalao, incluem uma infra-estrutura permanente e geralmente apresentam maiores dimenses. Por mais que o viveiro seja permanente, quando o plantio feito no solo, uma mesma

3 rea pode ser utilizada por, no mximo, 2 anos, devido alta sensibilidade das mudas a pragas, doenas e plantas invasoras, sendo necessria a adoo de rotao de culturas. Viveiros temporrios Destinam-se produo de mudas apenas durante certo perodo e, uma vez cumpridas suas finalidades, so desativados. Embora menos comuns que os viveiros permanentes na produo de mudas frutferas, esses viveiros podem representar menor custo, j que no necessria uma infra-estrutura muito tecnificada. Quanto proteo do sistema radicular, os viveiros podem ser classificados em: Viveiros com mudas de raiz nua . Viveiros com mudas em recipientes. Viveiros com mudas em raiz nua So aqueles feitos em rea de solo profundo, drenado, com textura mdia e bem manejado, para que as mudas para comercializao sejam retiradas com raiz nua (mesmo que, em alguns casos, um torro possa acompanhar a muda). Nesse tipo de viveiro, so feitos canteiros, delimitados por carreadores, por onde transitam os veculos e demais meios de transporte de mudas. Viveiros com mudas em recipientes Geralmente implicam menor necessidade de rea, sendo mais versteis e permitindo que uma mesma rea seja utilizada por muito mais tempo que o tipo anterior, desde que o substrato venha de local isento de pragas, doenas e propgulos de plantas invasoras. A escolha do local o primeiro passo para a instalao do viveiro, sendo de grande importncia. A seguir, diversos aspectos devem ser considerados: Facilidade de acesso conveniente que os compradores de mudas tenham fcil acesso ao viveiro, pois esse um fator que favorece a comercializao e a escolha do viveirista. Assim, deve-se dar especial ateno s estradas que conduzem ao viveiro, possibilitando o fcil trnsito dos veculos que transportam as mudas. Por sua vez, o viveiro deve estar afastado de estradas pblicas de grande movimento, para reduzir o risco de infestao das mudas por pragas e doenas. Suprimento de gua A gua o principal insumo num viveiro. Para irrigao e tratamentos fitossanitrios, o clculo da necessidade de gua depende do nmero de tratamentos fitossanitrios, do consumo de gua por irrigao, das necessidades hdricas das mudas e das precipitaes pluviais mdias. A localizao prxima a fontes de gua, de preferncia com pouco desnvel em relao ao viveiro, reduz os custos com canalizao e bombeamento. A boa qualidade da gua fundamental. Podem ser utilizadas guas de rios, lagos e de origem subterrnea, devendo ser evitada a gua contendo propgulos de algas, de pragas, de doenas e de plantas invasoras. Alm disso, conveniente que a gua apresente baixos teores de partculas suspensas (que reduzem a eficincia dos sistemas de irrigao) e de sais. Altos teores de silte e de argila podem impermeabilizar a superfcie do substrato, reduzindo a aerao e predispondo as mudas a doenas. Distncia da rea de plantio Embora seja aconselhvel que o viveiro seja localizado na mesma regio onde se

4 concentram os pomares, reduzindo o tempo de transporte das mudas e as perdas - devido movimentao - preciso ter o mximo cuidado para que os viveiros no fiquem muito prximos dos pomares. Geralmente, recomenda-se que o viveiro seja localizado a, no mnimo, 50 m de um pomar de mesma espcie, pois quanto maior for a distncia, menor ser o risco de infestao das mudas. Os maiores cuidados quanto ao isolamento do viveiro dizem respeito a vetores de viroses, tanto areos (afdeos) quanto de solo (nematides). Ocorrncia de invasoras O viveiro deve estar localizado em rea livre de plantas invasoras. Viveiros com determinadas plantas invasoras no podem ser utilizados e a comercializao de mudas produzidas nesses viveiros proibida por lei. As principais plantas invasoras includas nessa classe so a tiririca (Cyperus rotundus) e a grama-seda (Cynodon dacty/on). Alm disso, como o controle de plantas invasoras mais difcil em viveiros, deve-se fazer uma contnua vigilncia e erradicao das mesmas. Facilidade de obteno de mo-de-obra Viveiros demandam grande quantidade de mo-de-obra, tanto para a produo de mudas em si, como tambm para o monitoramento e controle de plantas invasoras, pragas e doenas. A disponibilidade de mo-de-obra prxima ao viveiro contribui para a reduo do custo de produo das mudas. Declividade da rea recomendvel que a rea tenha pouca declividade e seja localizada em zona de relevo levemente ondulado. reas muito planas podem acumular a gua das chuvas ou da irrigao. Independentemente do grau de declividade da rea, os canteiros devem estar localizados no sentido perpendicular movimentao da gua, para reduzir os riscos de eroso. Quanto maior a declividade, maiores devem ser os cuidados com relao s prticas conservacionistas, para se evitar a degradao do solo. Aspectos fsicos do solo conveniente a instalao de viveiros em rea com solos profundos e medianamente arenosos. Contudo, como nem sempre isso possvel, devem-se escolher as reas cujo solo apresenta as melhores condies fsicas possveis. Solos muito argilosos dificultam a mecanizao e o desenvolvimento radicular. Solos com elevada porosidade so desejveis. Essa caracterstica pode ser parcialmente melhorada com incorporao de matria orgnica e adubao verde. Especialmente em reas de chuvas intensas, o solo deve ter boa capacidade de drenagem, devendo-se evitar reas encharcadas ou sujeitas inundao, pois isso aumenta o risco de podrides-de-razes e de toxidez por mangans. Para a adoo de sistemas de drenagem, devem-se estudar as caractersticas fsicas do solo, tais como a profundidade do horizonte impermevel, condutividade hidrulica e textura. Aspectos qumicos do solo Embora as condies qumicas dos solos possam ser modificadas, o viveiro deve estar localizado em rea cujo solo no tenha acidez elevada, possua boa fertilidade natural e adequado teor de matria orgnica. Aspectos biolgicos do solo

5 Solos ricos em matria orgnica tm vida micro e macrobiana mais ativa, o que pode favorecer o desenvolvimento das mudas. Contudo, devem-se utilizar reas isentas de nematides, insetos de solo, fungos patognicos (Fusarium sp., Pythium sp., Armilaria sp, Rosellinia sp, Phytophthora sp., entre outros) e bactrias fitopatognicas (Agrobacterium tumefasciens). Por isso, necessrio o monitoramento, por meio de anlises microbiolgicas do solo da rea a ser utilizada como viveiro. A desinfestao do solo pode ser uma boa alternativa no controle de patgenos de solo e de plantas invasoras, mas normalmente de alto custo e acarreta danos sobre toda a vida microbiana do solo. A escolha adequada e o manejo da rea principalmente no que se refere rotao de culturas so fundamentais, pois at o momento, no se encontrou um mtodo de controle eficiente contra podrides-de-raiz. Cultivos anteriores o viveiro deve estar localizado em rea onde no existiram pomares h pelo menos 5 anos, e onde no existiram viveiros h pelo menos 3 anos. Quando se utilizam reas onde, anteriormente, havia mata ou outras plantas perenes, deve ser feita a destoca no mnimo 2 anos antes da implantao do viveiro, cultivando-se gramneas anuais, entre elas o milho, a aveia-preta, o sorgo, entre outras, at que o viveiro seja implantado. Essas gramneas podem ser incorporadas ao solo, para elevao do teor de matria orgnica. Algumas plantas frutferas liberam fitotoxinas no solo, as quais comprometem os cultivos posteriores, implicando a necessidade de ser feita a rotao de culturas. Por exemplo, a nogueira europia libera no solo o jiglone, a macieira libera a floridzina e o pessegueiro e a ameixeira, a prunasina e a amigdalina. Aspectos climticos o melhor clima do local onde o viveiro ser implantado depende da(s) espcie(s) a ser (em) propagada(s). Entre os fatores climticos mais limitantes, esto a temperatura, a luz e a ocorrncia de ventos. No que s refere temperatura, importante que o viveiro esteja localizado em rea o mais livre possvel de geadas. Alm disso, temperaturas mdias mais elevadas reduzem o tempo para a produo das mudas. Como exemplo, pode ser citado o fato de que, no Estado de So Paulo, enquanto mudas ctricas requerem cerca de 24 meses para serem produzidas, no Rio Grande do Sul requerem cerca de 36 meses, exceto se produzidas em estufas. A exposio luz fundamental, especialmente na fase final de propagao. Ventos muito fortes aumentam a quebra no local da enxertia, podendo requerer a implantao de quebra-ventos. A extenso da rea do viveiro depende de diversos fatores, sendo os principais: Quantidade de mudas para plantio e replantio determinada pela capacidade operacional do viveiro e pela demanda por mudas pelos produtores. Densidade de mudas, o que depende da espcie e do tempo de permanncia, de modo a proporcionar as melhores condies para seu desenvolvimento. Perodo de rotao, que se refere ao tempo que a muda permanece, desde o incio de produo at o replantio ou comercializao. Esse intervalo dependente da espcie, do mtodo de propagao e do manejo da muda. Dimenses dos canteiros e carreadores, que dependem da espcie a ser propagada e do grau de mecanizao adotado. Viveiros com maior grau de mecanizao requerem canteiros mais longos, maiores distncias entre linhas e carreadores mais largos. Dimenses das instalaes determinadas, principalmente, pela quantidade de mudas produzidas pelo mtodo de propagao adotado e pelo grau de tecnologia empregado.

6 reas para rotao, fundamentais para produo de mudas sadias, especialmente se a produo de mudas for feita diretamente no solo. Para dimensionamento do viveiro, deve-se considerar a disponibilidade de reas para rotao, de modo que uma mesma rea no seja utilizada para produo de mudas por mais de 2 anos. Um dos aspectos fundamentais a ser considerado no planejamento e dimensionamento dos viveiros a seleo das espcies a serem propagadas. Existem viveiristas especializados em propagar apenas uma espcie, bem como viveiristas extremamente eclticos, que propagam inmeras espcies. Essa escolha depende da capacidade do mercado de absorver a produo das mudas, do tipo de clientela, do grau de especializao e de profissionalizao do viveirista, das condies ambientais do viveiro e das exigncias climticas das espcies. De qualquer forma, os principais cuidados a serem tomados pelo viveirista - quando da seleo das espcies - so procurar trabalhar com uma certa economia de escala, para reduzir os custos unitrios da muda, no abrindo mo da qualidade do produto. Telados e estufas A necessidade de instalaes especiais em viveiros de produo de mudas frutferas depende de diversos fatores e deve-se considerar a mxima eficincia no uso das mesmas, economicidade para construo e facilidade no manejo para produo das mudas. O grau de sofisticao das instalaes depende da interao entre fatores como a espcie a ser propagada, quantidade de mudas a serem produzidas e o poder aquisitivo do viveirista. Atualmente, esto disponveis no mercado, diferentes estruturas como telados, estufas plsticas, ripados e outras, em diversos mdulos de tamanho e de custos. Para algumas espcies frutferas, especialmente as mais sensveis a viroses, torna-se recomendvel - e em certos casos obrigatria - a manuteno das plantas-matrizes em telados, para garantir a sanidade das plantas fornecedoras de enxertos ou outra forma de material propagativo. Entre as instalaes especiais para viveiros, destacam-se as seguintes: Telados uma estrutura - de madeira ou de metal - coberta com tela, que garante o sombreamento e mantm a luminosidade prxima da natural (Fig. 1). O telado til nas seguintes situaes: na manuteno de plantas matrizes isentas de viroses, na aclimatao e na produo de mudas que exigem sombreamento inicial. As telas podem apresentar diferentes graus de sombreamento, sendo importante considerar que, quanto maior for o grau de sombreamento, maior ser a ocorrncia de estiolamento das mudas que permanecerem por longo tempo no telado e maior a facilidade de as mudas morrerem quando forem transferidas para o pomar. O tipo de tela mais utilizado o que permite um sombreamento de 50%. O telado pode ter diferentes dimenses, podendo ser permanente ou temporrio, dotado ou no de sistema de irrigao localizada. No caso de telas prova de afdeos, a dimenso da malha deve ser inferior a 0,4 mm.

Fig. 1. Telado para produo de mudas. Estufas Tambm conhecida como casa de vegetao, a estufa uma estrutura parcial ou completamente fechada, feita de madeira ou de metal (alumnio, ao ou ferro galvanizado), geralmente coberta com plstico especial, para essa finalidade. Pode ainda ser coberta de vidro ou fibra de vidro, o que acarreta maior custo. A grande vantagem do uso de estufas em viveiros a possibilidade de controle ambiental, de modo a maximizar a produo de mudas, reduzindo o tempo necessrio para a propagao e permitindo que as mudas possam ser produzidas em vrias pocas do ano. Normalmente, as estufas possuem sistemas de nebulizao intermitente, o que mantm a umidade relativa do ar elevada, permitindo a propagao por meio de estacas com folhas (tcnica que, em certas espcies, viabiliza a propagao por estaquia). A elevada umidade do ar e a alta temperatura aumentam a velocidade de crescimento das plantas. As estufas podem ser construdas pelo prprio viveirista ou adquiridas de empresas especializadas. Alm do sistema de nebulizao, as estufas podem ser dotadas de sistemas automatizados para aquecimento do substrato e diminuio da temperatura, entre outros. Entre os problemas relacionados com o uso de estufas, podem ser citados os seguintes: Aumento da dependncia da planta em relao ao homem. Elevado custo de implantao. Aumento da sensibilidade. Ocorrncia de doenas. Dificuldades na aclimatao. O enraizamento de estacas de muitas espcies - especialmente as semi-lenhosas e herbceas - muito difcil, se no for adotado um controle ambiental, principalmente em relao a trs pontos: Manter alta umidade relativa do ar com baixa demanda evaporativa, de modo que a transpirao das estacas seja minimizada e a perda de gua seja mnima. Manuteno de temperatura adequada - e suficientemente amena na parte area - para estimular o metabolismo na base das estacas e reduzir a transpirao. Manter a irradiao num limite suficiente, para ocasionar elevada atividade fotossinttica, sem causar aumento excessivo da temperatura nas folhas. As estufas tm essa final idade de controle ambiental. Quanto mais controladas as condies de propagao, maiores as chances de sucesso, especialmente naquelas

8 espcies de difcil propagao. Um dos problemas a serem enfrentados em estufas, nas condies brasileiras, o aumento excessivo da temperatura, o que implica no uso de mecanismos de resfriamento do ar. O uso de tela de alumnio na parte externa, a ventilao forada por meio de argila expandida com gua e tela de sombreamento podem reduzir, significativamente, a temperatura. Mesmo que a luz seja favorvel atividade fotossinttica das mudas, a alta luminosidade no parece ser a condio mais favorvel. Filmes de polietileno mais modernos esto disponveis no mercado com alguns aditivos, tais como acetato de vinil, alumnio e silicatos de magnsio, os quais aumentam a opacidade do plstico s ondas longas (infravermelho), favorecendo o enraizamento. Altas temperaturas geralmente limitam a produo de mudas em estufas na maioria das regies do Brasil. Na literatura, h citaes de que, temperaturas ao redor de 35C a 40C limitam o crescimento das razes da maioria das espcies lenhosas. Por isso, alm de uma boa ventilao, fundamental um bom sistema de resfriamento e de sombreamento. Estufins So pequenas estufas, com maior versatilidade, menor custo e menor tamanho. Normalmente, os estufins so construdos em madeira e com cobertura de polietileno, podendo ser utilizados tanto na produo de mudas por meio de sementes, quanto por meio de estacas semi-lenhosas. Ripados So construes simples, relativamente durveis, baratas e fceis de construir, com o inconveniente de no garantir sombreamento uniforme. Tambm tm a finalidade de proporcionar sombreamento, podendo substituir os telados. Substratos Entende-se por substrato qualquer material usado com a finalidade de servir de base para o desenvolvimento de uma planta at sua transferncia para o viveiro ou rea de produo, podendo ser compreendido no apenas como suporte fsico, mas tambm como fornecedor de nutrientes para a muda em formao. Geralmente, o termo substrato refere-se a materiais dispostos em recipientes, mas pode incluir, tambm, o solo da sementeira ou do viveiro, onde muitas vezes se d o desenvolvimento inicial da muda. O substrato um dos muitos fatores que condicionam o sucesso na propagao de plantas. Na opo por um determinado material como substrato, objetiva-se otimizar as condies ambientais, para o desenvolvimento da planta numa ou mais etapas da propagao. Se for utilizado um material adequado, e se as demais condies tambm forem satisfeitas, o desenvolvimento da muda ser satisfatrio, tendo-se como resultado uma planta com capacidade de expressar, futuramente, o potencial produtivo da cultivar. Por sua vez, o uso de materiais inadequados, alm da sua ineficincia nos mtodos de propagao, originar plantas com problemas de desenvolvimento e com reflexos negativos sobre a futura produo. Inmeros materiais podem ser usados como substratos na produo de mudas frutferas. A escolha do substrato - ou mistura de substratos mais adequada para uma determinada situao - funo da tcnica de propagao, da espcie (em alguns casos), da cultivar, das caractersticas do substrato, do custo e da facilidade de obteno de cada

9 material. Podem estar includos desde materiais que permitam a germinao das sementes e o posterior desenvolvimento das plntulas - at outros que possibilitem o enraizamento de estacas e o desenvolvimento das razes adventcias, bem como materiais que proporcionem condies adequadas para a aclimatizao de plantas propagadas por meio de tcnicas de micropropagao. Em linhas gerais, um bom substrato aquele que: firme e denso o suficiente para manter a estrutura de propagao em condies at a germinao ou o enraizamento. No contrai ou expande com a variao da umidade. Retm gua em quantidade suficiente. suficientemente poroso para permitir a drenagem da gua e a aerao. Est livre de invasoras, nematides ou outros patgenos. No apresenta nvel excessivo de salinidade. Permite a esterilizao a vapor. Na propagao por sementes, o substrato tem a finalidade de proporcionar condies adequadas germinao ou ao desenvolvimento inicial da muda. Conforme a tcnica de propagao adotada, pode-se dispor de um mesmo material durante todo o perodo de formao da muda, bem como utilizar-se materiais diferentes em cada fase (at a germinao, da germinao at a repicagem e da repicagem ao enviveiramento). Considerando que tanto a germinao quanto o desenvolvimento das mudas requerem gua, oxignio e suporte fsico, o bom substrato deve: Proporcionar equilbrio adequado entre a umidade e a aerao. Para tanto, deve haver boa capacidade de drenagem da gua, mas retendo suficiente teor de umidade, que garante gua suficiente para a embebio da semente e o metabolismo da muda. O fornecimento de oxignio ao embrio pode ser limitado pelo substrato, em funo da m drenagem e da baixa taxa de difuso do oxignio na gua. Proporcionar ambiente escuro, em virtude de muitas espcies serem fotoblsticas negativas e das razes serem fototrpicas negativas. Boa capacidade de suporte fsico da muda, bem como aderncia s razes, fato especialmente importante na repicagem da muda para o viveiro ou pomar. Conter nutrientes essenciais para o desenvolvimento sadio da planta. No caso de se utilizar um substrato apenas para a germinao, a presena de nutrientes no necessria, podendo-se somente lanar mo de materiais inertes, pois a germinao ocorre s custas da reserva da semente. Entretanto, to logo as razes passem a ser funcionais, os nutrientes devem estar presentes. Estar isento de inculo de patgenos ou saprfitos, que podem prejudicar a germinao e o desenvolvimento das mudas. A presena de patgenos pode provocar a ocorrncia de dumping off, que ocasiona desde um baixo ndice de sobrevivncia das plantas na repicagem, at a morte das plntulas logo aps sua emergncia. Estar isento de propgulos (sementes ou estruturas vegetativas) de plantas invasoras, especialmente no caso de a muda oriunda desse processo ser comercializada ou levada ao campo com torro. Alm disso, um bom substrato deve ser de baixa densidade e ter uma composio qumica e fsica equilibrada, elevada capacidade de troca catinica (CTC), boa

10 capacidade de aerao e drenagem, boa coeso entre as partculas e adequada aderncia nas razes. Na avaliao de um substrato, podem ser teis parmetros fsicos tais como poros idade total, densidade, proporo do tamanho de partculas, espaos com ar e gua, condutividade hidrulica saturada e insaturada. Na literatura, inmeros materiais so citados como adequados para a germinao ou desenvolvimento de plantas propagadas por sementes. A associao de materiais - especialmente em mistura com o solo permite melhorar as condies para desenvolvimento das mudas. Assim, a grande maioria dos trabalhos com substratos nessa fase inclui misturas de solo, de vermiculita e de materiais orgnicos. aconselhvel misturar areia e materiais orgnicos, para melhorar a textura e propiciar melhores condies ao desenvolvimento das mudas. Em misturas, o solo e a turfa participam como retentores de umidade e nutrientes, enquanto a areia, serragem ou casca de arroz funcionam como condicionadores fsicos. A mistura com materiais orgnicos beneficia as condies fsicas do substrato e fornecem nutrientes, favorecendo o desenvolvimento das razes e da planta como um todo. Numa sementeira, considerando-se o solo como substrato, importante observar os seguintes aspectos: A sementeira deve estar localizada fora da rea de produo e no deve ser usada por mais de 2 anos consecutivos, como forma de diminuir o potencial de inculo de patgenos. Deve haver pequena declividade para exposio luz e boa disponibilidade de gua para irrigao. conveniente que se utilizem solos com textura mdia. Para se evitar problemas com patgenos ou plantas invasoras, pode ser efetuada a esterilizao do substrato. Esta pode ser feita utilizando-se fungicidas, solarizao, tratamento trmico, ou agentes de controle biolgico e qumico, recomendados pela legislao vigente. Deve ser prevista uma rotao de culturas antes da implantao de sementeira, especialmente se na mesma rea foram cultivadas espcies perenes. O suprimento de gua deve ser adequado, pela necessidade de germinao e a sensibilidade das plntulas ao dficit hdrico. Com o uso de corretivos, o pH do solo deve ser ajustado para o nvel adequado espcie a ser propagada. Quanto ao suprimento de nutrientes, devem ser tomados cuidados com o excesso de adubao, especialmente a adubao nitrogenada. O excesso de sais inibe a germinao, alm de o desequilbrio nutricional favorecer a ocorrncia de doenas. O manejo da adubao depende, essencialmente, do tempo de permanncia da muda na sementeira. O substrato um dos fatores de maior influncia na propagao por estaquia, especialmente naquelas espcies com maior dificuldade de formao de razes. O substrato no apenas afeta o percentual de estacas enraizadas, como tambm a qualidade do sistema radicular da muda. Destina-se a sustentar as estacas durante o enraizamento, mantendo sua base num ambiente mido, escuro e suficientemente aerado. Num sentido mais restrito, o substrato deve garantir as condies adequadas apenas para o enraizamento das estacas. Contudo, numa abordagem mais ampla, conveniente que algumas condies sejam oferecidas para que haja o desenvolvimento inicial das

11 razes adventcias, tais como o fornecimento de nutrientes e o uso de materiais orgnicos, que podem favorecer o desenvolvimento radicular e o pegamento, e desenvolvimento no viveiro ou no campo. O substrato mais adequado para o enraizamento varia conforme a espcie, podendo-se considerar que um bom substrato deve reunir as seguintes caractersticas: Reter gua suficiente para manter as clulas trgidas, evitando o murchamento da estaca. Garantir aerao suficiente, por meio de um adequado espao poroso, para a formao das razes e o metabolismo radicular. Aderir bem estaca e s razes formadas. No favorecer a contaminao e o desenvolvimento de patgenos e saprfitos, tanto por ser fonte de inculo, quanto por criar condies favorveis ao desenvolvimento de microrganismos. Permitir que as estacas enraizadas sejam removidas com um mnimo de dano s razes. Ter baixo custo e fcil aquisio. No conter ou liberar quaisquer substncias fitotxicas estaca. Conforme o tipo de ambiente para propagao, deve ser dada ateno diferenciada. No caso de uso de nebulizao intermitente, a drenagem um dos fatores mais importantes, para se evitar a asfixia na base da estaca. Ao se trabalhar com estacas lenhosas em solo ou em recipientes com outro material, mas sem nebulizao, a reteno de gua assume maior importncia. A escolha do substrato feita levando-se em considerao a espcie, o tipo de estaca, as caractersticas do substrato, a facilidade de obteno e o custo de aquisio. A determinao do substrato mais adequado para cada espcie deve ser feita por meio de experimentos. Na Tabela 1, so apresentadas algumas vantagens e desvantagens de alguns substratos que podem ser utilizados em estaquia. O meio de enraizamento no afeta apenas o enraizamento em si. Tem sido obtida grande influncia do substrato sobre a qualidade do sistema radicular adventcio, no que tange a diversos parmetros. conveniente atentar-se para a qualidade do sistema radicular formado, pois essa ir, diretamente, o pegamento no viveiro e o desenvolvimento posterior da muda. Geralmente, razes desenvolvidas em areia so mais grossas, menos ramificadas e mais quebradias, ainda que as caractersticas do sistema radicular tambm sejam funo da espcie. A mistura da areia com turfa ou outros materiais orgnicos permite que se forme um melhor sistema radicular. A permanncia das folhas na estaca tambm pode ser afetada pelo substrato. Substratos com menor contato com a estaca tendem a ocasionar maior queda de folhas e a morte das estacas. A parte da estaca que fica enterrada no substrato poder sofrer asfixia, que desfavorece o enraizamento, podendo causar at mesmo a morte desta. A baixa capacidade de drenagem do substrato na base da estaca pode ocasionar a necrose na base da mesma. Alm disso, o pouco espao poroso poder favorecer a ocorrncia de doenas.

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o teor de oxignio requerido na formao de razes varivel conforme a espcie, mas sempre indispensvel. Por exemplo, para Salix spp., 1 mg.L-l de oxignio suficiente para o enraizamento, podendo o mesmo enraizar em gua, ao passo que para Hedera helix, so necessrios apenas 10 mg. L-l . Em algumas espcies, o aumento do teor de oxignio incrementou o enraizamento de estacas. Assim, importante analisar as caractersticas fsicas do substrato a ser utilizado nessa condio. Espao poroso (macro e microporosidade), oxignio disponvel, aerao, drenagem e excesso de gua no substrato so aspectos interligados entre si, passveis de observao. H menes de que o espao poroso do substrato de enraizamento deve ser de 20%, admitindo-se um intervalo de 15% a 45% de poros idade. As seguintes propriedades fsicas de um substrato de enraizamento so importantes:

13 Forma, textura e tamanho de partculas. Teores de argila e silte. Densidade, espao poroso e capacidade de reteno de gua na saturao e na capacidade de campo. A curva de reteno de gua um parmetro que pode fornecer boas informaes sobre o efeito do substrato no enraizamento. Mesmo em ambiente com nebulizao intermitente, o substrato no se mantm constantemente saturado, especialmente durante o dia, quando as perdas de gua para a atmosfera so mais elevadas. Assim, um material que retm mais gua, em nveis de tenso mais elevados, pode ser mais recomendvel para utilizao, tendo em vista esse atributo fsico. importante que o substrato tenha uma capacidade de reteno tal que permita a planta retirar gua com um gasto mnimo de energia e apresente um espao poroso adequado. A competio do espao poroso pela gua e pelo ar um ponto crucial na escolha do substrato. No que se refere s caractersticas qumicas, o pH e a disponibilidade de nutrientes so importantes. Em algumas espcies, o pH favorece o enraizamento e desfavorece o desenvolvimento de microrganismos. O uso de materiais como a turfa permite que o pH do substrato seja mais baixo. O uso de materiais orgnicos pode favorecer o desenvolvimento das razes adventcias. Geralmente, as caractersticas favorveis de um substrato podem ser complementares s de outro. Assim, a mistura de dois ou mais substratos permite que se associem as vantagens e se complementem as desvantagens de cada material. Irrigao Seja na cultura instalada ou no viveiro de produo de mudas, a irrigao de suma importncia para o fruticultor ou viveirista que deseja obter mudas de qualidade. Durante o desenvolvimento da muda, existem vrias fases crticas, onde a disponibilidade hdrica se faz necessria. Geralmente, o viveirista deseja obter uma muda de crescimento uniforme e ereto, o que vai facilitar todas as operaes do viveiro, seja na enxertia e foragem, ou no desponte e formao das pernadas (ramos primrios emitidos a partir da haste principal da muda). No incio do desenvolvimento das mudas, a irrigao imprescindvel, notadamente aps a semeadura. A gua utilizada pode ser proveniente de rios, lagos ou at de poos subterrneos. A nica exigncia que a gua deve ser limpa, tendo-se o cuidado para evitar a introduo de algas ou sementes de plantas invasoras. Segundo alguns autores, a gua deve ter no mximo 200 mg.L de silte e clcio, menos de 10 mg.L de sdio e 0,5 mg.L-l de boro. Se a gua tiver alto teor de silte ou de colides, corre-?e o risco de impermeabilizao da superfcie do substrato, reduzindo sua aerao e aumentando a predisposio das mudas a doenas e pragas. No planejamento de um viveiro, deve-se ter uma fonte de gua de boa qualidade para irrigao e no depender apenas das chuvas. Quanto ao tipo de irrigao utilizada, depender do local de produo da muda, da disponibilidade de gua, e de recursos, alm do tipo de substrato ou solo, e das condies do local. Quanto freqncia da irrigao, relevante o efeito da quantidade de suprimento de gua, forma e freqncia de aplicao. Logicamente, no caso de as mudas serem produzidas em casa de vegetao, com equipamentos sofisticados, no h necessidade de maior preocupao. Na verdade, os aspectos de quantidade de gua, forma e freqncia esto ligados diretamente s condies atmosfricas, qualidade fsica e qumica do substrato, poros idade e grau de saturao, estao do ano, estgio de desenvolvimento das mudas, alm do tipo e

14 cobertura dos canteiros ou sementeiras. Os vrios tipos de coberturas existentes permitem maior ou menor perda de umidade, sendo que, para cada tipo, deve-se adequar uma metodologia isoladamente. Outro aspecto a ser considerado a espcie, j que cada uma delas se comporta diferentemente da outra. indiscutvel manter o teor de umidade adequado logo aps a semeadura. Do contrrio, corre-se o risco de perdas irreparveis na obteno das mudas. Por sua vez, o encharcamento muito prejudicial, pois alm de permitir a lixiviao de nutrientes e diminuir a aerao, pode favorecer o surgimento de doenas, a exemplo do dumping off. Contudo, calcular a quantidade exata de gua e saber, com preciso, o momento certo de coloc-la, difcil, pois depende de uma srie de fatores. Geralmente, a experincia profissional do produtor de mudas que vai definir a freqncia e a quantidade de gua a ser colocada numa dada sementeira, recipiente ou viveiro. Apesar das poucas pesquisas existentes, sabe-se que a irrigao recomendvel no incio da manh, principalmente em regies e pocas frias, pois permite a rpida condensao do gelo, que eventualmente possa formar-se na superfcie das folhas. A irrigao no final do dia permite que o substrato permanea mido por mais tempo, de modo que o potencial hdrico das mudas mantenha se com valores mais altos durante a noite. Apesar da experincia ser um fator que pode auxiliar o viveirista, este pode lanar mo de recursos tcnicos de baixo custo e timos resultados. Como regra geral, pode-se afirmar que a poca de irrigao mais importante do que a quantidade de gua aplicada. Enfim, verifica-se que h necessidade de pesquisas, direcionadas s diferentes espcies, para determinao da quantidade de gua e freqncia de irrigao para obteno de mudas de alta qualidade. Embalagens Entende-se, por embalagem, todo e qualquer material destinado a acondicionar o substrato durante a produo de mudas. O uso de recipientes tem acompanhado a evoluo tecnolgica dos sistemas de propagao, pois so instrumentos indispensveis na produo intensiva de mudas. medida em que se avana na pesquisa de substrato para propagao, os recipientes assumem cada vez mais importncia. A produo de mudas em viveiros sem uso de recipientes normalmente mais econmica. Mesmo assim, a produo de mudas embaladas cada vez mais vem sendo adotada devido s vantagens que proporciona. Mesmo nesses casos, os recipientes podem tomar parte em alguma das etapas da propagao. o caso de mudas ctricas - o porta-enxerto pode ser inicialmente desenvolvido em tubetes ou bandejas e depois as mudas so transferidas para o viveiro, onde so mantidas at a comercializao. Em outras situaes, toda a produo da muda pode ser feita num ou mais recipientes. Na produo de mudas frutferas, a adoo de recipientes apresenta como principais vantagens: Quando associada ao uso de telados ou estufas, permite o cultivo sob quaisquer condies climticas, o que ocasiona cumprir-se rigorosamente um cronograma de produo. Reduo da utilizao de tratores e carretas na rea de viveiro. Reduo do tempo necessrio para produo das mudas. Em mudas ctricas, no sistema de sementeira, so necessrios 18 a 24 meses para produo das mudas, enquanto com o uso de bandejas ou tubetes so necessrios 12 a 15 meses. Reduo da competio entre as mudas. Reduo da rea necessria de viveiro. Proteo do sistema radicular contra danos mecnicos e desidratao.

15 Proteo da muda contra doenas e pragas de solo, alm de facilitar, quando necessrio, a prtica da esterilizao do substrato. Aumento da facilidade no transporte das mudas. Reduo do estresse no momento do transplante. Permanncia do viveiro por mais tempo, evitando a necessidade de rotao de culturas devido ao risco de doenas e pragas do solo. Quando a produo de mudas feita em recipientes, importante observar os seguintes aspectos: Manuteno da umidade, especialmente em recipientes com pequena capacidade de acondicionamento de substrato. Adubao, pois o substrato pode facilmente ser esgotado quanto disponibilidade de nutrientes. Limitao ao desenvolvimento radicular, aspecto que deve ser constantemente observado, de modo que o recipiente no venha a ser uma barreira para as razes, a ponto de prejudicar o crescimento da muda. Convm que um bom recipiente apresente as seguintes carac;ticas: Ter boa resistncia para suportar a presso devida ao peso do substrato e da muda. Permitir que a planta tenha um rpido desenvolvimento inicial. Acondicionar o volume adequado de substrato. Possuir bom sistema de drenagem. Possibilitar boa reteno da umidade. Permitir boa reteno do substrato. Ter durabilidade, a ponto de resistir durante todo o processo de produo da muda. Ser de fcil manejo, quando da transferncia (leveza e resistncia). Ter baixo custo de aquisio. Ser reutilizvel, ou construdo com material facilmente reciclvel. Mesmo que um recipiente no reuna todas essas qualidades, devese selecionar aquele que reuna o maior nmero de vantagens, pois isso est estreitamente relacionado com a eficincia do sistema de propagao e da viabilidade do uso de recipientes. Assim, a escolha do recipiente deve considerar as qual idades de cada material, o mtodo de propagao e os efeitos que ele proporciona sobre o crescimento da muda. Vrios so os recipientes utilizados na produo de mudas frutferas. Entre esses, podem ser citados: sacos de plstico, tubetes, citropotes, bandejas de plstico ou de isopor, caixas de madeira ou de metal, vasos de plstico, entre outros. A seguir, sero descritos alguns dos principais recipientes utilizados na propagao comercial de plantas frutferas: Sacos de plstico So recipientes que podem apresentar as mais diferentes dimenses, tais como 8 cm (dimetro) x 12 cm (altura) e 25 cm (dimetro) x 25 cm (altura). Normalmente, apresentam colorao preta ou escura, para impedir o desenvolvimento de algas e de plantas invasoras dentro do recipiente e proporcionar melhores condies de desenvolvimento para as razes. Perfurados na base, para drenagem da gua, so muito versteis, adaptando-se a uma grande variedade de situaes, alm de terem baixo custo de aquisio, serem reutilizveis e de fcil manejo (Fig. 2).

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Fig. 2. Mudas ctricas obtidas em embalagens de plstico. Contudo, se o plstico for de pouca espessura, esses recipientes rompem-se facilmente com o peso do substrato ou devido ao crescimento das razes. Alm disso, as perfuraes devem estar localizadas prximo base da embalagem. Caso contrrio, no permitem um bom escoamento da gua em excesso, prejudicando o crescimento da muda. No momento da aquisio, importante atentar para a qualidade do plstico, alm do nmero e a posio das perfuraes. Tubetes So recipientes de formato cnico, construdos em plstico rgido e de cor escura. Internamente, apresentam estrias que dificultam o enovelamento das razes. Podem acondicionar diferentes volumes de substrato. Para o uso dos tubetes, necessrio um sistema de suporte, que pode ser uma bandeja de isopor, plstico ou metal, bem como uma bancada com fios de arame distanciados, para possibilitar a colocao dos mesmos. Assim, os tubetes ficam suspensos, de modo que a base destes ficam expostas ao ar, proporcionando a denominada poda das razes pelo vento. Apresentam a vantagem de serem reutilizveis vrias vezes, alm de permitirem a produo de um grande nmero de mudas por unidade de rea. Por serem unidades independentes, os tubetes permitem a seleo das mudas com a embalagem. Por disporem de pequeno volume de substrato, requerem que se retire a muda to logo as razes ocupem todo o substrato. Por isso, so teis para a primeira etapa da propagao, alm de necessitarem de irrigaes peridicas, visto que o substrato facilmente se desidrata. Dependendo do substrato, o tubete pode no reter o mesmo, que perdido pelo orifcio na base (Fig. 3).

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Fig. 3. Porta-enxerto de citros produzidos em tubetes. Bandejas Podem ser confeccionadas em plstico, normalmente apresentando um espao nico e contnuo para acondicionamento do substrato. Tambm podem ser feitas de poliestireno expandido (isopor), constitudas de um nmero varivel de clulas, onde feita a produo da muda. As clulas apresentam forma piramidal invertida, com capacidade de at 120 cm3 de substrato por clula. Na base, a clula apresenta um orifcio para escoamento da gua. As bandejas podem ser reutilizadas vrias vezes. Como os tubetes, elas so teis na primeira etapa da propagao, pois acondicionam pequeno volume de substrato. Preferencialmente, as bandejas devem ficar suspensas, permitindo a poda pelo vento. A durabilidade da bandeja est em funo do ambiente onde feita a propagao e do cuidado no manuseio das mesmas. Para uma dada espcie, em sistemas tradicionais de propagao (viveiros), podem ser produzidas cerca de 25 mil a 30 mil mudas por hectare, enquanto com uso de bandejas, podem ser produzidas cerca de 200 mil mudas por hectare. Citropotes Tambm conhecidos como containers, esses recipientes so assim denominados por serem desenvolvidos e difundidos para produo de mudas ctricas. So confeccionados em plstico preto rgido e acondicionam grande volume de substrato, permitindo que a muda seja mantida nesse recipiente desde a repicagem (produzida em tubetes ou bandejas) at a comercializao. Os citropotes apresentam diversas vantagens, dentre as quais a facilidade de manuseio, a possibilidade de produo de mudas numa mesma rea por vrios anos, desde que o substrato seja oriundo de local isento de patgenos e o plantio da muda no pomar no apresente danos ao sistema radicular. Uma das principais limitaes ao uso do citropote o custo elevado. Na propagao por sementes, usam-se sacos de plstico, bandejas e tubetes. Na propagao por estacas, mais comum o uso de sacos de plstico, embora, at o momento, ensaios feitos com bandejas e tubetes tenham proporcionado resultados bastante promissores.

18 Controle fitossanitrio A dificuldade em encontrar mudas de qualidade tem se constitudo num dos mais srios problemas com que se defronta o produtor de frutas. A qualidade sanitria da muda , sem dvida, um dos componentes mais importantes, tendo reflexo direto no desenvolvimento das plantas e na produtividade do pomar. Uma das dificuldades encontradas que, geralmente, o produtor brasileiro no encontra, no mercado, mudas com garantia de iseno de doenas e pragas. A escaldadura das folhas da ameixeira - causada pela bactria Xylella fastidiosa - um exemplo. Cultivares sensveis a esse patgeno, quando contaminadas, morrem em 3 anos. Como a doena transmitida por cigarrinhas, se existir uma planta contaminada no pomar, a contaminao de outras plantas praticamente inevitvel. A maioria das cultivares de ameixeira japonesa, melhor adaptadas ao clima brasileiro, sensvel a essa bactria, variando apenas o tempo que as plantas levam para morrer. A gravidade dessa doena tanta que vrias regies produtoras tiveram pomares dizimados, s retornando ao cultivo a partir da limpeza c10nal e produo de mudas sadias. Em outras regies do mundo, onde ocorre essa doena, o cultivo da ameixeira praticamente desapareceu, como aconteceu na Regio do Delta, na Argentina, e no sudeste dos Estados Unidos. Em 1975, a escaldadura, doena cujo agente causal uma bactria Xy/ella fastidiosa, foi diagnosticada no Sul do Brasil. Em Santa Catarina, por exemplo, a rea de ameixeiras era de cerca de 400 ha, regredindo para menos de 50 ha, em 1982. Voltou, ento, a crescer, com a obteno de mudas isentas de bactria. Com a pressa de plantar, devido aos altos preos da ameixa no mercado, esqueceu-se de questionar as garantias de sanidade das mudas e os riscos de contaminao, a partir de ameixeiras doentes, nas proximidades do pomar. A freqente incidncia de doenas tem sido responsvel pela baixa qualidade das mudas produzidas, acarretando srios prejuzos, tanto nas fases de sementeira e viveiro, como no plantio definitivo. Apesar de no se manifestarem nas fases de sementeira e viveiro, algumas doenas so introduzidas e disseminadas principalmente por material de propagao. A utilizao de material propagativo sadio de fundamental importncia para a formao de pomares livres de patgenos, que causam queda na produtividade e longevidade das plantas. Com relao ao controle fitossanitrio, recomenda-se usar os tratamentos indicados para todas as pragas e doenas que ocorrem no pomar, por meio de controle integrado ou de medidas como a limpeza e a desinfestao das ferramentas usadas nos viveiros e pomares, at o cuidado com mudas e borbulhas dos novos plantios. Em plantas frutferas propagadas vegetativamente, a importncia das doenas causadas por vrus grande, pois todas as plantas obtidas de uma planta infectada tambm se apresentaro com o patgeno. A maioria dos vrus, virides e fitoplasmas transmitida por enxertos. Contudo, h alguns que so transmitidos por insetos, nematides, sementes ou mecanicamente. Nas espcies frutferas, a transmisso por enxertia mais comum e os cuidados devem ser redobrados para se evitar a infeco de todo o viveiro. Tratando-se de plantas em viveiro, no se pode confiar em inspees visuais, ou seja, na identificao de plantas doentes apenas por sintomas visveis a olho nu, porque muitas doenas no se manifestam no perodo do viveiro, havendo algumas que levam anos para apresentar sintomas visveis, ou mesmo aquelas que nunca os apresentam.

19 A melhor recomendao de controle o uso de material sadio. Para isso, necessrio que se faa a multiplicao apenas a partir de plantas indexadas, isto , testadas e isentas dos vrus que ocorrem na cultura. Se o material infectante for importante como variedade, poder passar por um processo de limpeza, no qual poder ser utilizada a termoterapia ou cultura de meristema. Aps passar por esse processo de limpeza, o material deve ser novamente indexado e, uma vez isento dos supostos patgenos, ser liberado para multiplicao. importante observar que no s as borbulheiras devem ser indexadas, mas tambm os porta-enxertos, pois estes podem estar infectados e transmitir o vrus para a copa. possvel diminuir os danos causados por um vrus pelo uso do fenmeno da proteo cruzada, aquela conferida a uma planta infectada, sistematicamente, por uma estirpe de um vrus contra outras do mesmo vrus. Se a estirpe que infecta a planta em primeiro lugar fraca, isto , causa poucos danos, a planta ficar protegida contra infeco por estirpes fortes. Inoculando-se as mudas no viveiro com uma estirpe sabidamente fraca, consegue-se, ento, obter-se plantas protegidas contra as fortes que ocorrem naturalmente e iro infectar as plantas no campo. Essa a chamada pr-imunizao, largamente usada em pomares ctricos paulistas, para proteg-los contra o vrus-da-tristeza. Nesse caso do vrus-da-tristeza, optou-se pela pr-imunizao, pois o vrus transmitido por pulges e o uso de material sadio no resolveria o problema, uma vez que todas as plantas ficariam expostas no campo, ao ataque do vetor. Assim, s devem ser multiplicadas plantas que tenham sido submetidas a testes de sanidade. Todas as matrizes devem ser testadas periodicamente, pois uma planta considerada sadia pode se tornar infectada. As pragas que atacam as mudas nas sementeiras e viveiros podem causar grandes prejuzos, tanto ao crescimento das mudas quanto sua qualidade final. o crescimento e brotao contnuos das plantas jovens propiciam o ambiente ideal para a rpida expanso das populaes de diversas pragas. Por isso, a ateno em viveiros de mudas indispensvel. De modo geral, pode-se afirmar que o primeiro passo para o controle de uma praga, no pomar, dado no controle fitossanitrio no viveiro, pois isso dificultar a disseminao das pragas por meio das mudas. Dependendo da cultura, as pragas que prejudicam as mudas em viveiros so pulges, lagartas, formigas, cigarrinhas, caros e nematides. s vezes, as pragas de razes e os nematides no so detectados nos viveiros, mas adquirem grande importncia porque so observados apenas depois de alguns anos da formao do pomar, uma vez que as mudas so o principal meio para disperso dessas pragas. Em todos os casos de infestao por nematides, o principal mtodo de controle o preventivo, mediante o plantio de mudas isentas do patgeno. Assim, necessrio o exame de mudas, para evitar a disseminao de nematides em reas no-infestadas. s vezes, a escolha de rgos propagativos sadios suficiente para manter o viveiro livre ou, pelo menos, com baixa populao de pragas. bom lembrar que o controle fitossanitrio em sementeiras, viveiros e em plantasmatrizes fornecedoras de material propagativo feito de acordo com as necessidades. Esse controle deve ser monitorado utilizando se os produtos de forma correta, preservando a integridade do meio ambiente e a sade do trabalhador. Quando da aplicao de controle qumico, deve-se dar preferncia a produtos de baixa toxicidade humana e, em ripados ou viveiros fechados, aos inseticidas granulados

20 sistmicos para controle de insetos sugadores. Detectando-se a presena de inimigos naturais das pragas, deve-se, pelo menos, utilizar produtos qumicos seletivos. Controle de plantas invasoras Uma boa conduo e formao de mudas exige uma srie de operaes que esto estreitamente relacionadas, tais como: seleo das plantas-matrizes, copas e portaenxertos, controle de pragas e doenas, alm de tratos culturais adequados. Dentro desse aspecto, o controle de plantas invasoras, tanto em sementeiras como em viveiros, de grande importncia. Modernamente, tem-se propagado, principalmente, porta-enxertos, como o caso especfico de mudas ctricas, por tubetes, bandejas ou si m i lares. Essa metodologia permite a utilizao de substratos tratados, isentos de plantas invasoras e garante maior controle de pragas e doenas. Entretanto, na segunda fase de propagao, com a utilizao de viveiros, o controle de plantas invasoras fundamental, porque nesse local onde sero realizadas todas as operaes que resultaro numa muda de boa qualidade. Inicialmente definido como rea de terreno destinada produo de mudas, onde as mesmas so formadas at irem para o campo, o termo viveiro, neste caso, tem um conceito mais abrangente por englobar estruturas como sementeiras, valetas para estratificao, reas para plantio de porta-enxertos, casas de vegetao, cmaras de nebulizao e coberturas de tela de plstico. Tambm esto relacionados materiais como sacos de polietileno, tubetes, vasos, bandejas de isopor, componentes de substrato como solo, areia, esterco, compostos orgnicos, cascas e palhas, vermiculita, casca de madeira triturada, terrio, etc. Nesse caso, a correlao entre o enviveiramento de mudas frutferas e os possveis problemas com plantas invasoras tm um sentido amplo, que envolve cuidados e prticas bem distintas, de acordo com a fase de produo da muda e a metodologia utilizada. O conceito de planta invasora ou daninha baseia-se na presena indesejvel de uma planta, em relao ao homem, quando prejudicaria direta ou indiretamente sua sade, a produo agropecuria ou outras atividades de interesse econmico. O conceito de indesejabilidade fica claro em definies como "uma planta que ocorre onde no desejada", ou "uma planta fora do lugar". Assim, uma determinada planta poder ser considerada invasora, indiferente ou til, dependendo do tempo e local onde ela ocorre. No caso especfico de viveiros, a presena de outras plantas, que no sejam as mudas, sempre considerada danosa ou prejudicial. Existem cinco mtodos de controle de plantas daninhas, distintos dos processos de preveno e de erradicao. Preveno a utilizao de mtodos para se evitar uma infestao ou reinfestao, enquanto a erradicao a eliminao de uma populao. Deve-se considerar que viveiros de produo de mudas - em seu sentido amplo, como mencionado anteriormente - podem apresentar peculiaridades que diferem de uma cultura em larga escala em campo, tais como: Os viveiros em campo normalmente ocupam reas reduzidas atingindo, quando muito, alguns poucos hectares. Formao de mudas, em alguns casos, com todas as etapas diretamente em recipientes. Espaamentos reduzidos, quando as mudas esto instaladas em viveiro no campo. Elevado nmero de tratos culturais e prticas especiais, realizados com freqncia, exigindo que durante o enviveiramento as mudas estejam livres de

21 plantas invasoras. Ciclo de produo varivel, de 3 a 24 meses. Limitaes, quanto presena de plantas invasoras impostas pela legislao. As mudas so plantadas jovens e de pequeno porte, sendo mais frgeis e sensveis do que as plantas adultas. Assim, independentemente do mtodo utilizado, as particularidades, inerentes a um viveiro devem ser observadas. Controle manual de plantas invasoras Recomendvel no caso de formao de mudas diretamente em recipientes (sacos de plstico, vasos, tubetes ou bandejas de isopor), bem como em sementeira, fazendo-se o arranquio das plantas invasoras com as mos. O arranquio manual pode danificar as razes da muda, quando as invasoras atingem um estgio de desenvolvimento mais avanado. O uso da enxada tambm apropriado para pequenas reas e espaamentos reduzidos - como no caso de viveiros - podendo ser utilizada como componente de um sistema integrado de controle. Esse mtodo depender, naturalmente, da disponibilidade de mo-de-obra, estimada em 10-15 DH/ha/capina, devendo-se considerar que o nmero de capinas, por ano, poder ser de 6 a 8. Controle mecnico de plantas invasoras O uso de cultivadores de trao animal, de modelos e dimenses variadas, poder ser feito em alguns tipos de viveiros instalados em campo, desde que se observem os cuidados necessrios, considerando-se o porte reduzido das mudas e a fragilidade das mesmas. um mtodo que poder fazer parte de um sistema integrado, de baixo custo, bom rendimento e no-agressivo ao ambiente, mas pouco eficiente para o controle de plantas Invasoras perenes. A utilizao de equipamentos de trao mecnica, tais como enxada rotativa, grades e roadeiras, praticamente descartada em viveiros, pelas particularidades j mencionadas anteriormente. Controle cultural de plantas invasoras Relacionam-se como mtodos culturais, a rotao, a consorciao de culturas, o uso de plantas companheiras (leguminosas) e prticas de manejo. Entre esses, e especificamente em viveiros, seria recomendvel aps o arranquio das mudas, fazer-se a alternncia com outra cultura na mesma rea (1 a 2 anos). Pode-se relacionar a cobertura da superfcie do solo com restos vegetais ou filme de plstico, denominada cobertura morta. Ela mantm a umidade, protege o solo contra eroso, evita o desenvolvimento de plantas invasoras, acumula matria orgnica e nutrientes, e eleva a atividade microbiana. A escolha de resduos orgnicos para coberturas de viveiros deve ser feita mediante as seguintes observaes: Possibilidade de conterem sementes de plantas invasoras. Ocorrncia de fermentao. Liberao de substncias txicas s mudas. Possibilidade de disseminar ou aumentar a incidncia de doenas e pragas. Disponibilidade do material (10 - 20 t/ha). Entre os materiais mais comuns e disponveis, h o bagao de cana, a palha de trigo, o arroz e a casca de arroz. Quanto ao filme de plstico, deve-se avaliar a

22 viabilidade econmica do seu uso. Controle biolgico de plantas invasoras Consiste num mtodo que procura manter uma populao de plantas invasoras que no cause danos econmicos, usando-se um agente biolgico (por exemplo, fungos). A utilizao de bioerbicidas ainda pouco pesquisada e no utilizada em larga escala. Controle qumico de plantas invasoras o uso de herbicidas sintticos, em associao com o mtodo manual, a forma mais utilizada nos vrios sistemas de produo de mudas. Para se escolher um herbicida, vrias caractersticas devem ser consideradas, tais como: Ser ativo biologicamente e de baixo custo/benefcio. Ser ecologicamente seguro ao aplicador e ao pblico. Ser de fcil aplicao. Ser compatvel com outros qumicos. Apresentar alta margem de segurana s culturas. Destaca-se ainda o aspecto relacionado sua seletividade, ou seja, um herbicida seletivo quando matar ou retardar o crescimento de uma planta, sem afetar outras. Quando se diz que o produto seletivo para folhas largas, significa que as espcies de folhas largas so resistentes, ou tolerantes ao produto, e o mesmo ir eliminar as demais. Essa seletividade depende das caractersticas fsico-qumicas do herbicida, da resistncia da planta e do meio ambiente. Deve-se considerar que, em viveiros, trabalha-se com sementes, estacas, gemas e garfos, ou seja, estruturas vegetais que iro originar brotaes e plantas inicialmente frgeis, herbceas e bastante sensveis. Assim, os cuidados devem ser maiores do que quando se aplicam herbicidas em reas com frutferas j adultas e apresentam maior resistncia. A escolha do herbicida funo da recomendao para cada espcie frutfera e da invasora a ser controlada. Para tanto, deve-se tomar todos os cuidados para prevenir a ocorrncia de deriva, contaminao da gua, do solo e do prprio aplicador.

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Formas de Propagao de Plantas Frutferas

Introduo A propagao um conjunto de prticas destinadas a perpetuar as espcies de forma controlada. Seu objetivo aumentar o nmero de plantas, garantindo a manuteno das caractersticas agronmicas essenciais das cultivares. Os mtodos de propagao podem ser agrupados em dois tipos: propagao sexuada, que se baseia no uso de sementes, e propagao assexuada, baseada no uso de estruturas vegetativas. Fundamentalmente, a diferena entre as duas formas de propagao a utilizao e a ocorrncia da mitose e da meiose. Enquanto na propagao assexuada a diviso celular implica na multiplicao simples (mitose), mantendo o nmero de cromossomos inalterado, na propagao sexuada a meiose proporciona a reduo do nmero de cromossomos. A propagao por sementes ocorre na maioria das plantas cultivadas e pode ser utilizada, tambm, na obteno de mudas de plantas frutferas. Esse mtodo responsvel pela variao populacional e pelo surgimento de novas variedades, uma vez que na natureza, predomina a polinizao cruzada, que assegura o maior intercmbio de genes dentro de uma mesma espcie. Na produo comercial de mudas, a propagao assexuada , por vezes, mais importante que a propagao sexuada, especialmente em plantas frutferas, por diversas razes, entre as quais: Normalmente, mais rpida que a propagao por sementes. O perodo improdutivo mais curto. Permite a produo de plantas idnticas planta-me, o que importante na preservao das caractersticas agronmicas desejveis. Isso no ocorre na propagao sexuada, devido recombinao dos genes. A preferncia pela reproduo sexuada ou assexuada dada conforme: A facilidade de germinao da semente. O nmero de plantas que podem ser produzidas pelo mtodo de propagao. A importncia da preservao dos caracteres agronmicos das plantas-matrizes. Os ciclos reprodutivos das plantas podem ser visualizados na Fig. 1, na qual esto especialmente destacadas:

24 Fase juvenil ou juvenilidade A fase juvenil, tambm denominada juvenilidade, o perodo em que a planta tem pouca resposta aos estmulos indutores do florescimento (fotoperodo, frio, fitohormnios e outros). Essa fase um perodo de longa durao (2 anos ou mais), marcado pela ausncia de produo e pela presena de algumas caractersticas, tais como espinhos, elevado vigor e morfologia diferenciada das folhas. Fase de transio Segue-se a essa etapa uma fase de transio, na qual h uma resposta parcial aos estmulos indutores, resultando na produo de poucas flores. Fase adulta Na fase adulta, h uma resposta plena a tais estmulos indutores, resultando em elevao da produo de frutas e de material propagativo, para fornecer estacas, gemas ou outras estruturas de propagao. Assim, plantas propagadas, vegetativamente, apresentaro uma fase improdutiva menor, na qual h uma rea foliar insuficiente, para a percepo dos estmulos indutores do florescimento e para o sustento da produo de frutos. Uma vez superado esse estgio, a planta atingir a fase reprodutiva ou adulta. Entretanto, se forem utilizados propgulos de plantas em fase juvenil ou de transio, ser necessrio superar a juvenilidade e alcanar a rea foliar adequada, o que representa um perodo improdutivo mais longo. Quando uma planta produzida por outro mtodo de propagao, tal como a estaquia, a enxertia, a mergulhia e a micropropagao, em geral, o desenvolvimento segue a mesma seqncia daquela planta obtida por semente, descartando-se a etapa da germinao, embora a durao do perodo vegetativo seja menor. Essa menor durao da fase vegetativa, quando da reproduo assexuada, deve-se utilizao de material cal h ido em partes da planta-matriz, que j ultrapassaram a fase juvenil. Propagao sexuada o processo onde ocorre a fuso dos gametas masculinos e femininos para formar uma s clula, denominada zigoto, no interior do ovrio, aps a polinizao. Esses gametas podem ser provenientes de uma mesma flor, ou de flores diferentes de uma mesma planta (autopolinizao) ou, ainda, de flores pertencentes a plantas diferentes (polinizao cruzada). Do desenvolvimento do zigoto produzida uma semente que originar uma nova planta, com gentipo distinto dos progenitores, devido troca de informao gentica na fecundao. Quando as plantas-matrizes so homozigotas e a autofecundao predominante, os descendentes apresentaro caractersticas muito semelhantes s plantas que os originaram. Entretanto, como na natureza predomina a polinizao cruzada, a segregao gentica induzida pela reproduo sexual assume grande importncia. Na reproduo sexuada, o embrio , obrigatoriamente, proveniente do zigoto. Entretanto, no caso de sementes apomticas, h formao de mais de um embrio, que podem ser oriundos, alm do zigoto, de um conjunto de clulas do saco embrionrio ou da nucela, com a mesma constituio gentica do progenitor feminino. Mesmo que as tcnicas de utilizao de sementes apomticas sejam semelhantes s da propagao sexuada, o mtodo de propagao de plantas por apomixia considerado por muitos autores como um processo de propagao assexuada. Esse processo muito

25 comum em plantas ctricas, e sua utilizao limitada obteno de clones novos ou clones nucelares a partir de plantas que produzem sementes poliembrinicas (Fig. 2 e 3). Na propagao por sementes, comum o uso do termo seedling para designar plantas jovens propagadas desse modo, que podero ser utilizadas como porta-enxertos ou como ps-francos.

A reproduo sexuada o principal mecanismo de multiplicao das plantas superiores e de, praticamente, todos os angiospermas. A populao proveniente da reproduo sexuada apresenta variabilidade gentica, devido segregao e recombinao de genes. Em muitas espcies, esse tipo de propagao o processo natural de disseminao. Mesmo que a variao das caractersticas entre os descendentes possa ser significativa, h casos em que a semente a nica forma de propagao vivel. Quanto menor a manipulao de uma espcie pelo homem, tanto maior a significncia desse tipo de reproduo, fato especialmente observado no caso de frutferas nativas, pouco submetidas ao melhoramento gentico. Em fruticultura, a propagao por sementes tem as seguintes finalidades: Obter porta-enxertos ou cavalos. Criar novas cultivares. Formar mudas de espcies que suportam bem a propagao sexuada,

26 conservando suas caractersticas. Para algumas espcies frutferas, a propagao sexuada ainda til nos seguintes casos: Na obteno de clones nucelares (ou cultivares revigoradas, o que comum em espcies ctricas). Na obteno de plantas homozigotas . Na propagao de plantas que no podem ser multiplicadas por outro meio. A principal desvantagem da propagao por sementes, alm da segregao gentica nas plantas heterozigotas, que provoca dissociao de caracteres, o longo perodo exigido por algumas plantas para atingir a maturidade. Contudo, existem excees, como o caso do maracujazeiro, cujo perodo improdutivo semelhante entre plantas oriundas de propagao sexuada e assexuada. Uma das caractersticas da propagao por sementes a variao que pode existir dentro de um grupo de plntulas. Na natureza, essa propriedade importante, uma vez que torna possvel a adaptao contnua de uma determinada espcie ao meio. Em cada gerao, os indivduos que estejam melhor adaptados a esse ambiente tendem a sobreviver e a produzir a gerao seguinte. A propagao por sementes um mtodo eficiente para produzir plantas livres de doenas. Tem sido observado que vrus, nematides e outros parasitas deletrios (nocivos) so comumente expurgados pela linha reprodutiva prxima meiose ou pela meiose, e que, no entanto, so transmitidos e continuam a acumular em indivduos de um done propagado vegetativamente. As sementes podem ser usadas como um filtro para algumas viroses, pois estas no se transmitem pela semente botnica, com algumas excees. As vantagens e as desvantagens do uso da propagao sexuada em fruticultura encontram-se na Tabela 1.

Plantas propagadas por sementes apresentam o fenmeno da juvenilidade, uma fase normalmente de longa durao, na qual a planta no responde aos estmulos indutores do florescimento. Plantas em estado juvenil tendem a apresentar caractersticas tais como a presena de espinhos, folhas lobuladas, ramos trepadores, fcil enraizamento e menor teor de RNA (cido ribonuclico). Durante a juvenilidade, no h produo de frutos, o que acarreta um prolongamento do perodo improdutivo do pomar. O porte mais elevado pode representar uma desvantagem nas prticas de manejo do pomar, como na poda, no raleio, na colheita e em tratamentos fitossanitrios. Alm disso, a propagao sexuada pode induzir desuniformidade das plantas e da produo, normalmente indesejadas em pomares comerciais. O desenvolvimento vigoroso e a maior longevidade das plantas, propagadas por sementes, podem estar associados formao de um sistema radicular pivotante, mais vigoroso e mais profundo do que o sistema fasciculado, encontrado em plantas

27 propagadas por estacas. Muitos agentes causais de doenas, como vrus, bactrias, fungos e fitoplasmas no so transmitidos por meio das sementes, de modo que plantas obtidas por propagao sexuada tendem a apresentar melhor condio fitossanitria. Mesmo que a longevidade de plantas propagadas por sementes seja maior, um inconveniente da utilizao dessas como porta-enxertos o condicionamento da vida til da copa a uma baixa longevidade do porta enxerto. Isso ocorre na enxertia de ameixeira sobre pessegueiro, na qual a vida til da ameixeira, normalmente de 30 anos, fica reduzida a 15 anos, que a vida til do pessegueiro (porta-enxerto). Propagao assexuada A propagao assexuada, vegetativa ou agmica o processo de multiplicao que ocorre por mecanismos de diviso e diferenciao celular, por meio da regenerao de partes da planta-me. Esse tipo de propagao baseia-se nos seguintes princpios: Totipotencialidade As clulas da planta contm toda a informao gentica necessria para a perpetuao da espcie (totipotencialidade). Regenerao de clulas As clulas somticas e os tecidos apresentam a capacidade de regenerao de rgos adventcios. A propagao vegetativa consiste no uso de rgos da planta, sejam eles estacas da parte area ou da raiz, gemas ou outras estruturas especializadas, ou ainda meristemas, pices caulinares, calos e embries. Assim, um vegetal regenerado a partir de clulas somticas, sem alterar o gentipo, devido multiplicao mittica. O uso desse tipo de propagao permite a formao de um clone, grupo de plantas provenientes de uma matriz em comum, ou seja, com carga gentica uniforme e com idnticas necessidades edafodimticas, nutricionais e de manejo. Enquanto em fruticultura a propagao sexuada tem importncia restrita, a propagao assexuada largamente utilizada na produo de mudas. Isso se deve necessidade de se garantir a manuteno das caractersticas varietais, que determinam o valor agronmico do material a ser propagado, em espcies de elevada heterozigose, como as frutferas. A utilizao da propagao assexuada diz respeito multiplicao, tanto de portaenxertos, quanto da cultivar-copa. A importncia e a viabilidade da utilizao da propagao assexuada so uma funo da espcie ou da cultivar, da capacidade de regenerao de tecidos (razes ou parte area), do nmero de plantas produzidas, do custo de cada processo e da qualidade da muda formada. De modo geral, o uso da propagao assexuada justifica-se nos seguintes casos: Propagao de espcies e cultivares que no produzem sementes viveis, como, por exemplo, limo-tahiti, laranja-de-umbigo e figueira. Perpetuao de clones, pois as frutferas so altamente heterozigotas e perderiam suas caractersticas com a propagao sexuada. A escolha do mtodo a ser utilizado depende da espcie e do objetivo do propagador. Basicamente, um bom mtodo de propagao deve ser de baixo custo, fcil execuo e proporcionar um elevado percentual de mudas obtidas. Dada a sua larga utilizao na multiplicao de plantas frutferas, a propagao assexuada apresenta diversas vantagens, que a torna, muitas vezes, mais vivel que a

28 propagao sexuada. So vantagens da propagao assexuada: Permitir a manuteno do valor agronmico de uma cultivar ou done, pela perpetuao de seus caracteres. Possibilitar que se reduza a fase juvenil, uma vez que a propagao vegetativa mantm a capacidade de florao pr-existente na planta-me. Assim, h reduo do perodo improdutivo. Permitir a obteno de reas de produo uniformes devido ausncia de segregao gentica. Assim, plantas obtidas por propagao assexuada apresentam maior uniformidade fenolgica, bem como resposta idntica aos fatores ambientais, o que permite uma definio mais fcil das prticas de manejo a serem executadas no futuro pomar. Permitir a combinao de clones, especialmente quando a enxertia utilizada. Como desvantagens da propagao assexuada, podem ser apontadas: A possibilidade de transmisso de doenas, especialmente as causadas por vrus e fitoplasmas. A possibilidade de contaminao do material utilizado na propagao vegetativa (estacas, ramos e gemas) por vetores ou pelo uso de ferramentas. O uso prolongado das mesmas plantas-matrizes aumenta o risco de propagao de doenas. Os patgenos associados propagao vegetativa induem fungos (Phytophthora sp., Pythium sp., Rhizoctonia sp.), bactrias (Erwinia sp., Pseudomonas sp. e Agrobacterium tumefasciens), vrus e fitoplasmas. Ainda que a manuteno dos caracteres seja citada como uma vantagem, pode ocorrer, ao longo do tempo, uma mutao das gemas, podendo ser gerado um clone diferenciado e de menor qualidade que a planta-matriz. Entre plantas de um clone, podem ocorrer mudanas que resultam em degenerescncia e variabilidade do mesmo. A exposio a um ambiente continuamente desfavorvel pode conduzir deteriorao progressiva do done, manifestada em perda gradual do vigor e da produtividade, ainda que o gentipo bsico no se altere. A degenerescncia do done causada, principalmente, por doenas de natureza virtica. O uso inadvertido das mesmas matrizes, sem que uma prvia indexagem tenha sido realizada, aumenta o risco de propagao de doenas e de degenerescncia do done. Alm disso, a replicao do DNA (cido desoxirribonuclico), durante a diviso celular no meristema, pode resultar em alteraes no gentipo e originar mutaes. Na variabilidade de um c1one, o efeito da mutao depende da taxa de mutao e da extenso que as clulas oriundas da clula mutante original ocupam dentro do meristema. Entretanto, como as clulas do meristema so relativamente estveis e menos sujeitas a mutaes, a significncia das mutaes, em boas condies fitossanitrias, reduzida. A ausncia de variabilidade gerada no c10ne pode levar a problemas na futura rea de produo, aumentando o risco de danos em todas as plantas por problemas climticos ou fitossanitrios, uma vez que foram fixadas todas as caractersticas varietais e todas as plantas tm a mesma combinao gentica. As principais vantagens e desvantagens da propagao assexuada so resumidas na Tabela 2.

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Geralmente, espcies frutferas que se propagam, assexuadamente, so altamente heterozigotas e segregam amplamente, quando se reproduzem por via sexuada. Assim, a propagao assexuada imprescindvel em casos onde h interesse em se manter a identidade do gentipo, ou seja, obter-se um nmero infinito de plantas, com a mesma constituio gentica, a partir de um nico indivduo. A propagao assexuada especial mente til para manter a constituio gentica de um c10ne ao longo das geraes. O clone definido por Hartmann et ai. (1990) como "o material geneticamente uniforme derivado de um s indivduo e que se propaga de modo exclusivo, por meios vegetativos como estacas, divises ou enxertos". O clone tambm pode ser conceituado como "um grupo de organismos que descendem por mitoses de um antecessor comum". Como o fentipo de um indivduo resultante da interao do gentipo com o ambiente, plantas de um mesmo c10ne podem ter diferentes aspectos, em funo do clima, do solo e do manejo das plantas. Um dos problemas srios apresentados pela propagao vegetativa o chamado envelhecimento dos clones, fenmeno causado pelo acmulo de diversos tipos de vrus, responsveis pela perda de vigor e da produtividade dos clones. Nesse caso, algumas das solues que podem ser apontadas, so: o cultivo de meristemas, a termoterapia e podas drsticas na planta-matriz, a fim de estimular a produo contnua de brotaes juvenis para propagaes subseqentes, entre outros, bem como o uso associado desses mtodos. Um meio de se preservar o clone e de se eliminar um vrus proporcionado pelo cultivo de plntulas apomticas, como tem sido usado em citrus, para obteno de plntulas nucelares, que so a base de novas estirpes, livres de vrus, de variedades antigas que se encontram fortemente afetadas por viroses. Uma vez testados e aprovados, os clones podem ser mantidos em . jardins clonais, que seriam a fonte de material vegetativo para uso subseqente, sem a necessidade de se coletar propgulos de indivduos mais idosos e o conseqente risco de transmisso de doenas. Esses jardins clonais devem ser mantidos em condies que impeam a contaminao e que permitam esdarecer qualquer mudana em relao ao tipo original. Durante as diferentes fases do crescimento vegetativo de um done, ocorrem milhares de divises celulares. Quanto maior o perodo em que o done multiplicado, maior o risco de alteraes genticas. A propagao vegetativa dos indivduos superiores, em grande escala, proporciona vantagens no manejo dos pomares, em funo da uniformidade dos tratos culturais requeridos e da qualidade da matria-prima produzida. Assim como na propagao assexuada, a escolha das matrizes fundamental para o sucesso da propagao e para a qualidade da muda. As plantas-matrizes devem ser obtidas em rgos oficiais de pesquisa (Embrapa, empresas estaduais de pesquisa, universidades, dentre outros) ou em empresas idneas, e caso haja tecnologia adequada, no prprio Viveiro.

30 Materiais importados devem ser submetidos a quarentena, atividade de responsabilidade do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento e de rgos de pesquisa a ele vinculados. Uma vez obtido, o material deve ser testado (caso isso no tenha sido feito previamente), para verificar se no est contaminado por pragas ou doenas, principalmente por viroses . A verificao da ocorrncia de virose numa planta matriz pode ser por meio de trs tcnicas: Indexao por inoculao mecnica sobre plantas herbceas. Indexao por enxertia em plantas indicadoras. Indexao por meio de testes soro lgicos, como o teste de Elisa (Enzyme Linked Immunoabsorbant Assay). A obteno de material livre de doenas pode ser feita por termoterapia (tratamento com ar quente a uma temperatura de 35C a 43C por um tempo varivel entre 7 a 32 dias, dependendo da virose). A cultura de meristemas in vitro outra tcnica de larga utilizao, sendo que os meristemas podem ser extrados de plantas submetidas termoterapia. A micro enxertia tambm outra tcnica bastante eficiente, na qual se utiliza um meristema como enxerto (ou cavaleiro) sobre uma plntula, sob condies in vitro. A propagao assexuada pode ser realizada por meio de diversos mtodos, sendo os principais os seguintes: Estaquia e microestaquia. Enxertia e microenxertia. Uso de estruturas especializadas. Mergulhia.

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Propagao por Sementes

A propagao por sementes tem aplicao relativamente restrita na fruticultura, embora tenha tido grande utilizao no passado. As principais limitaes do uso comercial da propagao por sementes so a juvenilidade, o vigor elevado e a variabilidade gentica, mesmo entre plantas originadas da mesma planta-matriz. Entretanto, a propagao comercial por sementes de grande importncia: Na produo de porta-enxertos (citros e pessegueiro). Em casos em que a semente a nica forma vivel de propagao (mamoeiro, coqueiro, maracujazeiro, etc.). Em espcies em fase inicial de explorao comercial, como o caso das frutferas nativas. Fatores que afetam a germinao das sementes A germinao abrange todo o processo que vai desde a ativao dos processos metablicos da semente at a emergncia da radcula e da plmula (pice do eixo do embrio ou da plntula dos vegetais com sementes). O percentual de germinao depende de fatores internos e externos. Como fatores internos, podem ser citados o estado de dormncia, a qualidade da semente e o potencial de germinao da espcie. Os fatores externos mais importantes so gua, temperatura, gases e luz (FACHINELLO et ai., 1995; HOFFMANN et ai., 1998; SAMPAIO et ai., 1996). Dormncia A dormncia representa uma condio em que o contedo de gua nos tecidos pequeno e o metabolismo das clulas praticamente nulo, permitindo que a semente seja mantida sem germinar por um perodo relativamente longo. Segundo Hartmann et ai. (1990), a dormncia pode ser classificada em: Dormncia devida aos envoltrios da semente Dormncia fsica - A testa ou partes endurecidas dos envoltrios da semente so impermeveis gua, mantendo-a dormente (quiescente) devido ao seu baixo contedo de umidade. Dormncia mecnica - Os envoltrios impem uma resistncia mecnica expanso do embrio. Em geral, a dormncia mecnica est associada com outras causas de dormncia, como a fsica. Dormncia qumica - Determinada por substncias inibidoras da germinao, tais como fenis, cumarinas e cido abscsico; essas substncias esto associadas ao fruto ou aos envoltrios da semente, como acontece nas sementes de cultivares precoces de pessegueiro. Dormncia morfolgica Embrio rudimentar - Quando o embrio pouco mais do que um pr-embrio envolvido por um endosperma. Embrio no-desenvolvido - Quando, na maturao do fruto, o embrio encontra-se parcialmente desenvolvido. Um crescimento posterior do embrio dar-se- aps a maturao e a senescncia do fruto. Dormncia interna Dormncia fisiolgica - comum na maioria das plantas herbceas. Ocorre devido a mecanismos internos de inibio e tende a desaparecer com o

32 armazenamento a seco. Existem dois casos especiais de dormncia fisiolgica: Dormncia trmica - A germinao inibida em temperaturas superiores a um limite varivel conforme a espcie . Fotodormncia - Ocorre em espcies cujas sementes necessitam de escurido para germinarem. Nesse caso, no h germinao na presena de luz. Dormncia interna intermediria - caracterstica de conferas e induzida pela presena dos envoltrios, ou tecidos de armazenamento da semente. Dormncia do embrio - Ocorre quando o embrio incapaz de germinar normalmente, mesmo que separado da semente . Dormncia do epictilo - Ocorre quando a exigncia do epictilo, para germinao, diferenciada do embrio em relao temperatura ou fitohormnios. Qualidade da semente A qualidade da semente pode ser expressa por dois parmetros: viabilidade e vigor. A viabilidade expressa pelo percentual de germinao, o qual indica o nmero de plantas produzidas por um dado nmero de sementes. O vigor definido como sendo a soma de todos os atributos da semente, que favorecem o estabelecimento rpido e uniforme de uma populao no campo. Uma semente em senescncia caracteriza-se por apresentar uma diminuio gradual do vigor e subseqente perda da viabilidade. Potencial de germinao da espcie As sementes da maioria das plantas perenes apresentam dificuldade de germinao, requerendo a utilizao de mtodos de superao d dormncia. Na maioria das vezes, a diferena de potencial de germinao entre espcies e cultivares devida interao, entre os diversos fatores, que podem afetar a viabilidade da semente. No somente a germinao influenciada pelo fator gentico, como tambm pelo vigor e pela longevidade. gua A gua necessria para ativao do metabolismo da semente no momento da germinao. O teor de gua mnimo para germinao depende da espcie, variando entre 40% e 60%, com base no peso da semente ainda fresca. Temperatura o fator mais importante para a germinao, pois exerce influncia nas reaes metablicas, afetando, tambm, o cresci mento das plntulas. Conforme a espcie, as temperaturas mnimas, timas e mximas so bastante variveis, sendo que a temperatura tima, para a maioria das sementes que no se encontram em repouso, varia de 25C a 30C. Temperaturas alternadas so geralmente mais favorveis do que temperaturas constantes. Gases Geralmente, o oxignio favorece a germinao, por ativar o processo da respirao. Contudo, o CO2, em concentraes elevadas, pode impedir ou dificultar o desencadeamento desse processo. Luz

33 O efeito da luz sobre a germinao das sementes varivel de espcie para espcie, ainda que sempre favorea o crescimento das plntulas. A germinao das sementes da grande maioria das plantas cultivadas no afetada pela luz. Contudo, sementes de muitas plantas daninhas apresentam exigncias variveis de luz, sendo algumas favorecidas e outras inibidas pela presena desta. A presena ou a ausncia de luz s efetiva aps a embebio da semente e atua na remoo de um bloqueio no metabolismo do embrio. Tcnicas de propagao sexuada Para o uso adequado da reproduo sexuada, alguns cuidados devem ser tomados, desde a escolha das plantas-matrizes at o manejo das mudas. Escolha das plantas-matrizes As plantas-matrizes so aquelas destinadas ao fornecimento de sementes. Para a escolha de uma planta-matriz, devem-se considerar alguns critrios, tais como vigor, sanidade, regularidade de produo, qualidade e quantidade dos frutos, idade e representatividade da espcie. Alm disso, necessrio que se escolham plantas com fentipo o mais prximo possvel de um padro desejado. Caractersticas relacionadas ao hbito de ramificao, taxa de crescimento, resistncia a pragas e doenas, e comportamento fenolgico so parmetros importantes na seleo de uma planta-matriz. Tais parmetros so de suma importncia quando se quer obter uma populao relativamente uniforme, com caractersticas adequadas. Para tanto, recomendvel que se mantenha um bloco de plantas-matrizes no qual sejam registradas informaes sobre esses parmetros. No caso especfico do pessegueiro, desejvel o uso de sementes provenientes de cultivares tardias ou de meia-estao, visto que as cultivares precoces apresentam menor perodo para o desenvolvimento do embrio. O uso de cultivares precoces, como matrizes, pode acarretar baixos percentuais de germinao, alm da formao de plntulas anormais e com acentuada variao no porte. Escolha dos frutos A exemplo da escolha das plantas-matrizes, a escolha dos frutos tambm deve obedecer a alguns critrios, como sanidade e maturao. Como regra geral, os frutos atacados por doenas, pragas, ou cados no cho devem ser descartados, a fim de se evitar uma possvel contaminao das sementes. Os frutos tambm devem ter atingido a maturao fisiolgica, de maneira que as sementes encontrem-se completamente desenvolvidas. Extrao das sementes Geralmente, no momento da colheita, as sementes esto envoltas pelos frutos, que de acordo com suas caractersticas, so divididos em dois grandes grupos: secos e carnosos. Os frutos secos liberam as sementes por deiscncia, ou por decomposio das paredes. Quando um fruto carnoso formado por um ou mais carpelos, contendo uma ou mais sementes, como o caso da uva, da ma, da pra, dos citros, do caqui, entre outros, genericamente chamado de baga. Quando um fruto formado por um nico carpelo, que contm no seu interior uma s semente, como o pssego e a ameixa, chamado de drupa. Para extrao das sementes de frutos carnosos, esses devem estar maduros, a fim de facilitar a separao da polpa e da semente. Deve-se tomar cuidado para no deixar

34 restos de polpa aderidos semente, porque uma vez decompostos e fermentados, podem provocar srios danos ao poder germinativo. Caroos com polpa aderida e mantidos amontoados podem ter. sua temperatura aumentada, em virtude da fermentao, a ponto de prejudicar a viabilidade do embrio, reduzindo o poder germinativo das sementes. Por sua vez, em algumas espcies, uma ligeira fermentao da polpa pode facilitar a retirada das sementes, como acontece com caroos de pssego. o intervalo compreendido entre a coleta das sementes e a semeadura deve ser o menor possvel, para permitir alto percentual de germinao. Entretanto, se necessrio, o armazenamento dessas sementes pode ser feito em locais midos e com baixas temperaturas, para que haja a maturao fisiolgica ou a superao da dormncia. Essa prtica muito utilizada em caroos de pessegueiro e em sementes de macieira e de pereira. Escolha das sementes Entre outros fatores, devem-se considerar, principalmente, o tamanho e a sanidade das sementes. Dentro de uma espcie, geralmente sementes de maior tamanho apresentam maior quantidade de substncias de reserva, com reflexos positivos no vigor da planta. Com relao sanidade, sementes atacadas por pragas ou doenas podem ter a germinao comprometida, bem como a sanidade das plntulas. Conservao das sementes A finalidade da conservao das sementes manter sua viabilidade pelo maior tempo possvel, permitindo a semeadura na poca mais adequada/ e garantindo a manuteno do germoplasma na forma de semente. A viabilidade aps o armazenamento resultante dos seguintes fatores: Viabilidade inicial na colheita - Determinada por fatores de produo e mtodos de manejo. No caso de sementes que no requerem superao de dormncia, o armazenamento pode, no mximo, manter a qual idade das mesmas. Taxa de deteriorao das sementes - Tambm denominada de taxa de trocas fisiolgicas ou envelhecimento. Essa taxa determinada pelo potencial gentico de conservao da espcie e pelas condies de armazenamento, principalmente temperatura e umidade. A durabilidade da semente bastante varivel com a espcie. Podem ser encontradas espcies cujas sementes perdem rapidamente seu poder germinativo em condies naturais, como outras que mantm o poder germinativo por longos perodos. As sementes de citros, armazenadas em condies normais, perdem rapidamente seu poder germinativo devido desidratao dos tecidos. Sementes com embries dormentes, como macieira, pereira e videira, possuem maior capacidade de conservao, mesmo em ambiente natural. conveniente lembrar que, quanto maior for o perodo de armazenamento da semente, maior ser o consumo das substncias de reserva, resultando assim numa reduo do vigor do embrio. As caractersticas das sementes podem determinar seu potencial de conservao. Sementes amilceas geralmente apresentam maior longevidade do que sementes oleaginosas. Alm disso, sementes com embries dormentes e envoltrio impermevel apresentam maior tempo de conservao. Em se tratando de condies ambientais, a relao umidade/temperatura muito importante na reduo da taxa de respirao. Para a maioria das espcies, ambientes com baixa umidade e baixas temperaturas oferecem condies adequadas para

35 prolongar a conservao das sementes. Alm disso, a modificao da atmosfera de armazenamento, especialmente na reduo do teor de oxignio, mostra-se favorvel manuteno do poder germinativo da semente. No que se refere umidade da semente, acima de 8% a 9% de umidade, insetos podem entrar em atividade; acima de 12 % a 14%, fungos podem tornar-se ativos; acima de 18% a 20%, pode ocorrer aquecimento devido fermentao; e acima de 40% a 60%, ocorre germinao. Caso a semente seja tolerante desidratao, importante que seja mantida em baixa umidade. As baixas temperaturas prolongam a vida das sementes, sendo que em temperaturas de 0 a 45C, cada diminuio de 5C duplica a vida de armazenamento dessas sementes. Superao da dormncia o tratamento para superao da dormncia varia de acordo com o tipo de dormncia que a semente apresenta. Aumento da permeabilidade dos envoltrios utilizado quando a causa da dormncia a impermeabilidade do tegumento da semente. A escarificao o mtodo indicado para tornar os envoltrios da semente mais permeveis entrada de gua e s trocas gasosas, bem como facilitar a emergncia da radcula ou da plmula, podendo ser feita por mtodos fsicos, qumicos ou mecnicos. Mtodo fsico - Consiste na imerso da semente em gua quente, entre 6SOC e 8SoC, durante Sal O minutos. A temperatura elevada diminui a resistncia dos envoltrios e facilita a germinao. Mtodo qumico - Consiste no tratamento das sementes com hidrxido de sdio ou de potssio, formol e cido clordrico ou sulfrico, geralmente por um perodo entre 10 minutos at 6 horas, conforme a espcie. Assim, os tegumentos so desgastados e a germinao facilitada. importante que sejam eliminados todos os resduos de cido que, aderidos semente, podem prejudicar a germinao, o que pode ser feito por meio de lavagem em gua corrente. Mtodo mecnico - Esse mtodo consiste no uso de uma superfcie abrasiva, agitao em areia ou pedra ou na quebra dos envoltrios, como no caso das sementes de pessegueiro, que podem ser extradas quebrando se os caroos com um torno manual, conforme Fig. 1. Deve-se ter cuidado para que o embrio no seja danificado. As sementes escarificadas tornam se mais sensveis ao ataque de patgenos.

Fig. 1. Extrao de sementes de pessegueiro com o uso de torno manual.

36 Maturao do embrio Destina-se a superar a dormncia da semente, por meio do amadurecimento do embrio, ou do estabelecimento de um balano hormonal favorvel germinao. Isso obtido pelo armazenamento das sementes em ambiente mido e frio, por um determinado perodo (estratificao). Geralmente, o meio adequado para a estratificao aquele que retm adequado teor de umidade e no contm substncias txicas. Como exemplos, podem-se citar o solo, a areia lavada, o musgo, a vermiculita e a serragem, ou a mistura desses. Camadas de sementes so intercaladas com camadas de substrato temperatura ambiente, ou em cmaras refrigeradas, com temperaturas entre 0C e 10e. a perodo de armazenamento varia conforme a espcie, sendo que para a maioria, esse perodo compreendido entre 1 e 4 meses. Durante a estratificao, deve-se ter cuidado com o teor de umidade do substrato e com a eventual germinao das sementes, antes que o perodo previsto para a estratificao das mesmas se expire. Em variedades precoces, nas quais o embrio no est completamente desenvolvido no perodo em que ocorre a maturao do fruto, muitas vezes necessrio cultivar o embrio em meio de cultura adequado, permitindo que seu desenvolvimento seja completado. Esse processo utilizado em cultivares precoces de pessegueiro que se destinam ao melhoramento gentico, bem como no melhoramento gentico de uvas sem sementes. Manejo das sementes e das sementeiras Antes da semeadura em viveiro, importante que se adote um tratamento das sementes com fungicida ou hipoclorito de sdio. Assim, possvel minimizar a ocorrncia de doenas que possam vir a prejudicar as plntulas. A sementeira deve estar localizada fora da rea de produo, de preferncia em terreno bem drenado, com pequena declividade, com plena exposio luz e boa disponibilidade de gua para irrigao. A m drenagem favorece a ocorrncia de uma doena denominada dumping off que afeta a germinao e a sobrevivncia das plantas jovens, provocando queda perece. Na verdade, essa doena causada por fungos pertencentes aos gneros Pythium, Rhizoctonia e Phytophthora, agentes tambm causadores de outras doenas de sementeiras. recomendvel o uso de reas submetidas a uma prvia rotao de culturas, como forma de reduzir o potencial de inculo de doenas. No aconselhvel o uso de uma mesma rea como sementeira, por mais de 2 anos. O tratamento do solo til para reduzir a incidncia de patgenos nas futuras plantas, especialmente considerando-se a sensibilidade das mesmas no estgio de plntula. Esse tratamento pode ser feito com o uso de solarizao (tratamento que consiste na cobertura do solo com filme plstico, sob insolao, para aumento da temperatura), uso de calor (por aquecimento direto, vapor d'gua ou tratamento em autoclaves de alta presso), uso de fungicidas ou de agentes de controle biolgico (Trichoderma, por exemplo). Em alguns casos, pode ocorrer a esterilizao completa do solo, o que pode ser inadequado, considerando-se que organismos benficos tambm so eliminados pelos tratamentos. O tratamento do solo ser tanto mais eficiente quanto melhor a qualidade sanitria do substrato empregado. A semeadura pode ser feita em covas, diretamente na embalagem, a lano ou em linha. A semeadura em linha a mais utilizada em grandes viveiros de pessegueiro e de citros. A quantidade de sementes a ser utilizada deve ser de 3 a 4 vezes o nmero

37 desejado de plantas, para permitir uma seleo rigorosa. Contudo, deve-se evitar uma densidade muito elevada de plntulas, para que no ocorra reduo do tamanho e do vigor, obtendo-se plantas com sistema radicular pouco desenvolvido. A cobertura das sementes pode ser feita com solo ou areia, e a cobertura do canteiro com uma fina camada de palha. O objetivo da cobertura com palha impedir o crescimento de plantas invasoras e conservar a umidade do solo. A palha deve ser removida pouco tempo antes da emergncia das plntulas. Cuidados especiais devem ser dispensados no que se refere irrigao, considerando-se a exigncia de gua para o processo da germinao e a sensibilidade das plntulas falta de umidade do solo. A irrigao deve ser feita por asperso, com uso de regadores ou de qualquer outro sistema de irrigao, no caso de sementeiras de maior porte. O controle da umidade pode ser feito por avaliao visual, uso de trados, tensimetros ou pela estimativa da evapotranspirao. O controle de plantas invasoras pode ser feito por mtodos qumicos' ou mecnicos. A distncia entre as linhas deve possibilitar a utilizao de implementos agrcolas, e o uso de herbicidas pode ser feito em pr ou ps-emergncia. Para definir a forma de controle das plantas invasoras, deve-se considerar a viabilidade econmica de cada mtodo, e a sensibilidade das plantas aos herbicidas. De acordo com a espcie e o tempo de permanncia na sementeira, aconselhvel proceder a adubao de correo e de cobertura. Conforme a exigncia da espcie, importante que o pH seja corrigido, com o uso de calcrio. Se a adubao nitrogenada for necessria, deve ser feita com cautela, pois aplicaes em excesso podem criar um desequilbrio nutricional, que resulta em excesso de crescimento e elevada suscetibilidade a pragas e doenas. Por sua vez, elevadas concentraes de sais, produzidas por excesso de fertilizantes, inibem a germinao. Dada a sensibilidade das plntulas e a elevada densidade na sementeira, necessrio que se adotem medidas eficientes de monitoramento e controle de pragas e doenas. A partir da sementeira, assim que as mudas atinjam um crescimento satisfatrio, so submetidas a uma seleo por tamanho, visando obter-se um padro adequado das plantas destinadas ao viveiro, quando estaro colocadas em maiores espaamentos. No viveiro, as plantas podero ser utilizadas como porta-enxertos ou como mudas destinadas formao de pomares. No caso de mudas, necessrio selecionar as plantas prximas a um padro caracterstico da planta-me.

38 Propagao Vegetativa por Estaquia Introduo Estaquia o termo utilizado para denominar o mtodo de propagao, no qual ocorre a induo do enraizamento adventcio em segmentos destacados da planta-me que, uma vez submetidos a condies favorveis, originam uma muda. A estaquia baseia-se no princpio de que possvel regenerar uma planta, a partir de uma poro de ramo ou folha (regenerao de razes), ou de uma poro de raiz (regenerao de ramos). Assim, a partir de um segmento, possvel formar-se uma nova planta. Entende-se por estaca, qualquer segmento da planta capaz de formar razes adventcias e de originar uma nova planta. A estaquia um dos principais mtodos utilizados na multiplicao de plantas frutferas. Inmeras espcies de interesse comercial podem ser propagadas por esse mtodo, destacando-se a produo direta de mudas de figueira, goiabeira, e a propagao de porta-enxertos de videira. Em espcies no comumente propagadas por outros mtodos (sementes, mergulhia ou enxertia), a estaquia pode ser uma alternativa vivel na produo de mudas. Na propagao comercial, a viabilidade do uso da estaquia funo da facilidade de enraizamento de cada espcie ou cultivar, da qualidade do sistema radicular formado e do desenvolvimento posterior da planta na rea de produo. Muitas espcies de folhas caducas - como o caso do pessegueiro e da ameixeira - no so propagadas comercialmente, por meio de estacas. Contudo, combinando-se uma ou mais tcnicas auxiliares, como a nebulizao intermitente, a aplicao de fitorreguladores, o anelamento, o estiolamento, a dobra dos ramos, entre outras, os resultados podero ser satisfatrios e viveis na maioria das espcies frutferas. Geralmente, as aplicaes da estaquia so: Multiplicao de variedades ou espcies com aptido para emitir razes adventcias. Produo de porta-enxertos c1onais. Perpetuao de novas variedades oriundas de processos de melhoramento gentico. Vantagens e desvantagens Como vantagens da estaquia, podem ser destacadas: Permite que se obtenham muitas plantas a partir de uma nica planta-matriz, em curto espao de tempo. uma tcnica de baixo custo e de fcil execuo. No apresenta problemas de incompatibilidade entre o enxerto e o portaenxerto. Plantas produzidas com porta-enxertos, originados de estacas, apresentam maior uniformidade do que plantas enxertadas sobre mudas oriundas de sementes. A propagao por estacas, praticamente, no apresenta inconvenientes. Entretanto, nem sempre vivel, especialmente quando a espcie ou cultivar apresenta baixo potencial gentico de enraizamento, resultando em pequena percentagem de mudas obtidas. Por sua vez, mesmo que haja formao de razes, seu desenvolvimento pode ser insuficiente e o percentual de mudas que sobrevivem aps o plantio, no viveiro, pode ser muito baixo. Nesses casos, ainda que seja possvel produzir estacas enraizadas,

39 deve-se dar preferncia a outros mtodos de propagao assexuada. Classificao H vrias classificaes para as estacas, estabelecidas por diversos autores, adotando-se diferentes critrios (Fig. 1). Quanto poca de coleta, as estacas podem ser classificadas em: Herbceas - So obtidas no perodo de crescimento vegetativo (primavera/vero), quando os tecidos apresentam alta atividade meristemtica e baixo grau de lignificao (Fig. 2).

Para alguns autores, so consideradas como estacas herbceas aquelas com folhas e com tecidos ainda no lignificados, como no caso de estacas com folhas da goiabeira. Semilenhosas - Quando obtidas no final do vero e incio do outono. Em geral, o termo refere-se a estacas com folhas, porm mais lignificadas que as estacas herbceas. Entretanto, alguns autores consideram estacas semi-lenhosas aquelas que provm de ramos no-lignificados, oriundos de plantas lenhosas. Lenhosas - So obtidas no perodo de dormncia (inverno), quando as estacas apresentam a maior taxa de regenerao potencial e so altamente lignificadas.

A preferncia por um ou outro tipo de estaca depende da espcie, da facilidade de enraizamento e da infra-estrutura do viveirista. Este ltimo item refere-se,

40 especialmente, ao fato de que o uso de estacas semi-lenhosas e herbceas requer instalaes com nebulizao intermitente, que no so necessrias quando se utilizam estacas lenhosas. Princpios anatmicos do enraizamento No momento em que uma estaca preparada, esta consiste de uma ou mais gemas (sistema areo em potencial) e de uma poro de tecido diferenciado, areo ou subterrneo, sem o sistema radicular formado. As razes formadas na estaca sero, portanto, uma resposta ao traumatismo produzido pelo corte. Assim, dois aspectos so fundamentais no enraizamento de estacas: Desdiferenciao - Processo pelo qual clulas de um tecido j diferenciado retornam atividade meristemtica e originam um novo ponto de crescimento. Totipotncia - Capacidade de uma s clula originar um novo indivduo, uma vez que ela contm toda a informao gentica necessria, para reconstituir todas as partes da planta e suas funes. Com o preparo da estaca, h uma leso dos tecidos, tanto de clulas do xilema, quanto do floema. Esse traumatismo seguido de cicatrizao, que consiste da formao de uma capa de suberina, que reduz a desidratao na rea danificada. Geralmente, nessa rea, h a formao de uma massa de clulas parenquimatosas que constituem um tecido pouco diferenciado, desorganizado e em diferentes etapas de lignificao, denominado calo. O calo um tecido cicatricial, que pode surgir a partir do cmbio vascular, do crtex ou da medula, cuja formao representa o incio do processo de regenerao. As clulas que se tornam meristemticas dividem se e originam primrdios radiculares. Depois, clulas adjacentes ao cmbio e ao floema iniciam a formao de razes adventcias (Fig. 3). Pode-se dividir a formao de razes adventcias em duas fases. A primeira fase de iniciao, caracterizada pela diviso celular. Em seguida, vem a fase de diferenciao das clulas num primrdio radicular, que resulta no crescimento da raiz adventcia. Geralmente, esses processos ocorrem em seqncia.

Durante a iniciao das razes, quatro etapas de modificaes morfolgicas podem ser citadas: Desdiferenciao de algumas clulas adultas. Diferenciao de algumas clulas em primrdios de razes prximas aos feixes vasculares.

41 Formao de primrdios radiculares. Desenvolvimento dos primrdios e emergncia, por meio do crtex e epiderme da estaca, das razes adventcias, acompanhada da sua conexo com o sistema vascular da estaca. O local de emisso dos primrdios radiculares bastante varivel, conforme a espcie e o tipo de estaca. Em estacas herbceas - que no possuem um cmbio desenvolvido - os primrdios podem surgir entre os feixes vasculares, e para fora destes, e as razes podem emergir em filas, acompanhando os feixes vasculares. As razes adventcias tambm podem ser formadas a partir da epiderme e do periciclo. Os primrdios se formam em estacas lenhosas, a partir do xilema secundrio jovem, geralmente, num ponto correspondente entrada do raio vascular. Tambm podem ser formados primrdios a partir do cmbio, do floema, das lenticelas ou da medula. medida que o ramo se torna mais lignificado, o local de formao das razes parece se deslocar em direo centrpeta, ou seja, em estacas semilenhosas, originadas do floema, e em estacas lenhosas, do cmbio. Geralmente, as razes adventcias se originam prximas ao cilindro vascular. Em algumas espcies, como Citrus medica e Ribes sp., h primrdios radiculares pr-formados latentes no momento da coleta das estacas, de modo que, uma vez colocadas em condies favorveis, formam razes. Muitas vezes observada, na base da estaca, como resultado de um traumatismo, a formao de calo. Ainda que se trate de fenmenos independentes, na maioria dos casos, a formao do calo e o aparecimento das razes adventcias so influenciados pelos mesmos fatores, e podem ocorrer simultaneamente. Tem sido observado que, ao menos para algumas espcies de difcil enraizamento, a formao de razes se d sobre o calo, ainda que a formao de calo no seja um prenncio seguro da formao de razes adventcias. No h uma relao direta entre formao de calo e enraizamento. O calo pode ser ainda uma barreira protetora ao ataque de microrganismos. possvel que estacas com calo respondam, mais facilmente, ao uso de promotores exgenos de enraizamento do que estacas sem formao de calo. A localizao das razes adventcias varivel, e algumas espcies s formam razes na base da estaca, outras em ns, ao longo do caule, e outras nos ns e entrens. A casca pode constituir-se numa barreira emergncia das razes. Um anel de esclernquima contnuo, altamente lignificado, entre o floema e o crtex, pode ser uma das causas da dificuldade de enraizamento em determinadas espcies. Caso esse esclernquima no seja rompido mecanicamente, as razes podem emergir na base da estaca. Princpios fisiolgicos do enraizamento A capacidade de uma estaca emitir razes funo de fatores endgenos e das condies ambientais proporcionadas ao enraizamento. Para proporcionar o desejado sucesso na produo de mudas, o manejo da estaquia requer o conhecimento e a aplicao desses princpios. Alm disso, o estudo desses aspectos pode auxiliar a caracterizao de uma espcie como sendo de fcil ou de difcil enraizamento. Tem sido observado que a formao de razes adventcias deve-se interao de fatores existentes nos tecidos e translocao de substncias localizadas nas folhas e gemas. Entre tais fatores, os fitohormnios so de importncia fundamental. Outros compostos, alguns deles parcialmente conhecidos, tambm tm influncia indireta sobre o enraizamento.

42 Auxinas As auxinas compem o grupo de fitohormnios com maior efeito na formao de razes em estacas. Possuem ao na formao de razes adventcias, na ativao das clulas do cmbio e na promoo do crescimento das plantas, alm de influenciarem a inibio das gemas laterais e a absciso de folhas e frutos. O AIA (cido indolactico) constitui-se na auxina natural que ocorre nas plantas. Uma das primeiras utilizaes prticas da auxina foi a de promover o enraizamento em segmentos de plantas. Posteriormente, outras substncias de origem sinttica, como o AIS (cido indolilbutrico) e o ANA (cido naftalenactico) mostraram-se mais eficientes do que o AIA, na promoo do enraizamento de estacas. A auxina sintetizada nas gemas apicais e folhas novas, de onde translocada para a base da planta, por um mecanismo de transporte polar. Os pices radiculares tambm produzem auxinas, mas no h acumulao nas razes, devido ao elevado teor de substncias inativadoras de auxinas nessa parte da planta. O aumento da concentrao de auxina exgena, aplicada em estacas, provoca efeito estimulador de razes at um valor mximo, a partir do qual qualquer acrscimo de auxinas tem efeito inibitrio. O teor adequado de auxina exgena, para estmulo do enraizamento, depende da espcie e da concentrao de auxina existente no tecido. No momento em que a auxina aplicada, h um aumento da sua concentrao na base da estaca e, caso os demais requerimentos fisiolgicos sejam satisfeitos, h formao do calo, resultante da ativao das clulas do cmbio, e das razes adventcias. Giberelinas Dentre as giberelinas encontradas na natureza, o AG3 (cido giberlico) a mais importante. Uma vez que a principal ao das giberelinas o estmulo ao crescimento do caule, em concentraes a partir de 10-3 molar, as giberelinas inibem o enraizamento, possivelmente devido interferncia na regulao da sntese de cidos nuclicos. Por sua vez, inibidores da sntese de giberelinas, como SADH (cido succnico 2,2-dimetilhidrazida) e paclobutrazol podem apresentar efeito benfico ao enraizamento. Citocininas As citocininas tm efeito estimulador da diviso celular, na presena de auxinas. Assim, h um estmulo formao de calos e iniciao de gemas. Entretanto, espcies com elevados teores de citocininas, em geral so mais difceis de enraizar do que aquelas com contedos menores, sugerindo que a aplicao de citocininas inibe a formao de razes em estacas. Por sua vez, em estacas de raiz, as citocininas podem estimular a iniciao de gemas. Uma relao auxina/citocinina baixa estimula a formao de gemas ou primrdios foliares, ao passo que uma relao elevada estimula a formao de razes. No cultivo in vitro, uma relao equilibrada promove a formao de calo e permite uma boa regenerao de plantas a partir de meristemas. cido abscsico Embora o cido abscsico, ao inibir a sntese de giberelinas, possa favorecer o enraizamento, os resultados obtidos com esse hormnio so bastante contraditrios, no sendo possvel obter-se uma informao em carter conclusivo. Etileno

43 Em baixas concentraes (prximas a 10 mg L-'), o etileno estimula a formao e o desenvolvimento de razes. Possivelmente, quando da aplicao de auxina, o etileno sintetizado confirma o efeito desta no enraizamento de estacas. Entretanto, o efeito do etileno mais dependente de interaes complexas do que da simples concentrao desse regulador. a estudo isolado do efeito de um regulador no permite explicar satisfatoriamente, sua influncia no enraizamento, de forma que o equilbrio entre esses diferentes compostos pode, realmente, esclarecer os mecanismos fisiolgicos envolvidos. Numa planta, o equilbrio hormonal varia com a poca do ano e com a fase fisiolgica. Alm dos fitohormnios, outras substncias de ocorrncia natural, denominadas co-fatores do enraizamento, que atuam sinergicamente com as auxinas, so necessrias para que se d o enraizamento. Esses co-fatores so sintetizados em gemas e folhas jovens e, em maior quantidade, em estacas provenientes de plantas jovens. So transportados pelo floema, a partir dos locais de sntese. Assim, para muitas espcies, caracterizada a importncia de serem mantidas as folhas e gemas em atividade vegetativa durante a estaquia. Esses rgos atuam como um laboratrio de produo de reguladores de crescimento e nutrientes. As folhas contribuem para a formao das razes, devido sntese de co-fatores ou carboidratos. Ainda que na sua maioria no estejam determinados quimicamente, os inibidores do enraizamento so freqentemente associados no enraizamento em algumas espcies. Em determinadas situaes, a lavagem dos inibidores e sua lixiviao estimulam o enraizamento. De acordo com a facilidade de enraizamento, Hartmann et aI. (1990) classificaram as plantas em trs grupos: Grupo I Todas as substncias necessrias ao enraizamento presentes. Enraizamento rpido, desde que em condies ambientais favorveis, como acontece em espcies como figueira, videira e marmeleiro. Grupo III Co-fatores em quantidades elevadas. Auxina limitante. Forte resposta aplicao de auxina, como acontece com algumas cultivares de videira, goiabeira e porta-enxertos para pereira. Grupo III Um ou mais co-fatores so limitantes. Auxina pode ser ou no limitante. Pouca ou nenhuma resposta aplicao de auxina, devido falta de co-fatores. o caso de rosceas onde, para formar razes, deve se combinar o uso de auxinas com a presena de folhas ou outra tcnica de condicionamento. Em nvel bioqumico, o enraizamento e o desenvolvimento de razes so acompanhados da sntese de protenas e de RNA (cido ribonuclico). Alm disso, h modificaes nos padres e concentraes de DNA (cido desoxirribonuclico) e aumento da atividade enzimtica medida que as razes se desenvolvem. Em estacas de ameixeira, observou-se que o calo e as razes em formao atuam como um dreno dos carboidratos da estaca. Fatores que afetam a formao de razes

44 O conhecimento dos fatores que afetam a formao de razes importante, para que se possa explicar por que uma espcie tem facilidade ou dificuldade de enraizar. Alm disso, o manejo adequado desses fatores permitir que haja mais chance de sucesso na produo de mudas por estaquia. Os fatores que afetam o enraizamento podem ser classificados em: Fatores internos. Condio fisiolgica da planta-matriz. Idade da planta-matriz. Tipo de estaca. poca do ano. Potencial gentico de enraizamento. Balano hormonal. Oxidao de compostos fenlicos. Fatores internos Geralmente, a interao entre fatores - e no o estudo isolado desses - que permite explicar-se melhor as causas do enraizamento. Quanto mais difcil for o enraizamento de uma espcie ou cultivar, tanto maior a importncia dos fatores que o afetam. Condio fisiolgica da planta-matriz Entende-se por condio fisiolgica da planta-matriz, o conjunto das caractersticas internas da mesma, tais como o contedo de gua, e o teor de reservas e de nutrientes, quando da coleta das estacas. Estacas retiradas de uma planta-matriz em dficit hdrico tendero a enraizar menos do que aquelas obtidas sob adequado suprimento de gua. A condio nutricional da planta-matriz afeta fortemente o enraizamento. No que se refere ao teor de carboidratos, tem-se observado que reservas mais abundantes correlacionam-se com maiores percentagens de enraizamento e sobrevivncia de estacas. A importncia dos carboidratos refere-se ao fato de que a auxina requer uma fonte de carbono para a biossntese dos cidos nuclicos e protenas, para a formao das razes. Alm do teor de carboidratos, a relao C/N (carbono/nitrognio) importante. Relaes C/N elevadas induzem a um maior enraizamento, mas com produo de uma pequena parte area, ao passo que estacas com baixa relao C/N, devido a um elevado teor de nitrognio, so pobres em compostos necessrios ao enraizamento e mostram pouca formao de razes. Relaes C/N adequadas permitem que se obtenha um bom equilbrio entre as razes e a parte area formada, alm de maior enraizamento. O teor de carboidratos varia conforme a poca do ano, sendo que em ramos de crescimento ativo (primavera/vero) o teor mais baixo. Ramos maduros e mais lignificados (outono/inverno) tendem a apresentar mais carboidratos. Geralmente, estacas com maior dimetro apresentam maior quantidade de substncias de reserva e tendem a enraizar mais, ainda que, por vezes, um maior dimetro esteja relacionado com mais brotaes e poucas razes. A condio fitossanitria da planta-matriz tambm afeta o teor de carboidratos. Esse teor pode ser avaliado, indiretamente, pelo teste do iodo, permitindo classificar as estacas conforme o teor de amido. Essa classificao mostrou correlao significativa com o enraizamento de estacas de videira, sendo que o percentual de estacas enraizadas foi de 63% nas mais ricas, 35% nas intermedirias e 17% nas pobres em amido.

45 Em relao composio nutricional, um contedo equilibrado de alguns nutrientes como o fsforo, o potssio o clcio e o magnsio favorece o enraizamento. Ainda que o nitrognio seja necessrio para a sntese de protenas e cidos nuclicos, essenciais ao enraizamento, seu teor em excesso pode ser prejudicial. O excesso de mangans tambm pode prejudicar o enraizamento. O zinco ativador do triptofano, precursor da auxina, e deve estar presente para que se d a formao de razes. Cuidados devem ser tomados, especialmente, com o contedo excessivo de nitrognio e de mangans na planta-me, demonstrando a importncia de um adequado manejo de adubao das plantas-matrizes para obteno das estacas. Em estudos realizados para se estabelecer uma relao entre a capacidade de enraizamento de estacas de pessegueiro e o teor endgeno de triptofano, verificou-se que os maiores percentuais de enraizamento, nmero e peso da matria seca das razes foram encontrados nos meses em que havia menores teores de triptofano nos ramos. Isso leva a concluir que o triptofano tenha se convertido para AIA, com maior quantidade de auxina endgena presente. Idade da planta-matriz As estacas provenientes de plantas jovens enrazam com mais facilidade e isso se manifesta com mais freqncia em espcies de difcil enraizamento. Possivelmente, esse fato esteja relacionado com o aumento no contedo de inibidores e com a diminuio no contedo de co-fatores do enraizamento, medida que aumenta a idade da planta. recomendvel a obteno de brotaes jovens em plantas adultas, que mesmo no caracterizando uma verdadeira condio de juvenilidade, apresentam maior potencial de enraizamento. Tipo de estaca Em espcies de fcil enraizamento, a importncia do tipo de estaca na formao de razes tem menor significado. Entretanto, quanto maior for a dificuldade de formao de razes adventcias, maior ser a necessidade da correta escolha do tipo de estaca. O tipo mais adequado de estaca varia com a espcie ou com a cultivar. Como a composio qumica do tecido varia ao longo do ramo, estacas provenientes de diferentes pores do mesmo tendem a diferir quanto ao enraizamento. Assim, em estacas lenhosas, o uso da poro basal geralmente proporciona melhores resultados. Isso pode ser devido ao acmulo de substncias de reserva e um menor teor de nitrognio (resultando uma relao C/N mais favorvel) e presena de iniciais de razes pr-formadas nessa regio. Fato inverso se observa com estacas semilenhosas, para as quais os maiores percentuais de enraizamento so obtidos com a poro mais apical. Nesse caso, isso pode ser atribudo a uma maior concentrao de promotores do enraizamento, pela proximidade dos stios de sntese de auxinas, e menor diferenciao dos tecidos. Estacas com gemas florferas tendem a enraizar menos que aquelas provenientes de ramos vegetativos em fase de crescimento ativo, o que mostra um antagonismo entre a florao e o enraizamento, pois as flores mobilizam as reservas da estaca e abrem antes que o processo de iniciao de razes tenha ocorrido. Estacas mais lignificadas geralmente apresentam maior dificuldade de enraizamento do que estacas de consistncia mais herbcea e semilenhosa. poca do ano

46 A poca do ano est estreitamente relacionada com a consistncia da estaca, sendo que aquelas coletadas num perodo de crescimento vegetativo intenso (primavera/vero) apresentam-se mais herbceas e, de modo geral, em espcies de difcil enraizamento, mostram maior capacidade de enraizamento. Estacas coletadas no inverno possuem um grau de lignificao e tendem a enraizar menos. Entretanto, estacas menos lignificadas (herbceas e semilenhosas) so mais propcias desidratao e morte, requerendo um manejo adequado em relao ao ambiente, ao passo que estacas lenhosas podem at mesmo ser enraizadas no campo. Em muitos casos, especialmente em espcies caduciflias, as estacas lenhosas dormentes so preferidas em funo da sua facilidade de obteno, transporte e manuseio. No que se refere poca mais adequada para obteno das estacas, h diferena entre espcies, sendo que algumas enrazam melhor no incio da primavera e outras, de folhas grandes e persistentes, desde a primavera at o fim do outono. A influncia da poca de coleta das estacas no enraizamento pode ser, tambm, atribuda a condies climticas, especialmente em relao temperatura e disponibilidade de gua. Potencial gentico de enraizamento O potencial que uma estaca apresenta para a formao de razes varivel com a espcie e com a cultivar. Assim, pode ser feita uma classificao como espcie ou cultivar de fcil, mdio ou difcil enraizamento, ainda que a facilidade de enraizamento seja resultante da interao de diversos fatores e no apenas do potencial gentico. Sanidade Em diversas espcies frutferas, tem-se observado que c10nes livres de vrus tm maior facilidade de enraizamento do que o material com vrus, havendo tambm efeito das viroses sobre a qual idade das razes formadas e sobre a variabilidade de resultados, entre diversas estaquias feitas sob as mesmas condies. Da mesma forma que com as viroses, o ataque de fungos e bactrias pode ocasionar a morte das estacas, antes ou aps a formao de razes, podendo afetar a sobrevivncia das mesmas ou a qualidade do sistema radicular da muda. A sanidade durante a estaquia influenciada pelo grau de contaminao do material propagativo, pelo substrato, pela qualidade da gua de irrigao e pelos tratamentos fitossanitrios que venham a ser feitos nesse perodo. Balano hormonal o equilbrio entre os diversos fitohormnios tem forte influncia no enraizamento de estacas. Assim, necessrio que haja um balano adequado, especialmente entre auxinas, giberelinas e citocininas. Uma das formas mais comuns de favorecer o balano hormonal, para o enraizamento, a aplicao exgena de fitorreguladores sintticos, tais como o AIB, o ANA e o AIA, que elevam o teor de auxinas no tecido. Oxidao de compostos fenlicos Em algumas especies, especialmente as pertencentes famlia Myrtaceae, o forte escurecimento dos tecidos na regio do corte da estaca, ocasionado pela oxidao de compostos fenlicos, pode dificultar a formao de razes. Ao entrarem em contato com o oxignio, os diferentes tipos de fenis nos tecidos iniciam reaes de oxidao, cujos produtos resultantes so txicos ao tecido. A oxidao desses compostos pode ser minimizada com o uso de substncias anti-

47 oxidantes, tais como o cido ascrbico, o PVP (polivinilpirrolidona), o cido ctrico e o Dieca (dietilditiocarbamato), alm de outros. Tm sido obtidos resultados preliminares que demonstram a importncia do controle da oxidao no cultivo in vitro. Entretanto, a significncia e a eficincia do controle da oxidao na propagao por estacas ainda carecem de maiores informaes, visto que os resultados obtidos at o momento so incipientes. Fatores externos Temperatura - O aumento da temperatura favorece a diviso celular na formao de razes. Contudo, especialmente em estacas herbceas e semilenhosas, estimula uma elevada taxa de transpirao, induzindo o murchamento da estaca. Alm disso, pode favorecer a brotao das gemas antes que o enraizamento tenha ocorrido, o que indesejvel. O aquecimento do leito de enraizamento ou substrato, com temperaturas que vo de 18C a 21C, estimula o enraizamento. Isso importante para a multiplicao por estacas de espcies de difcil enraizamento. Luz - A importncia da luz no enraizamento est relacionada fotossntese e degradao de compostos fotolbeis, como as auxinas. Geralmente, a baixa intensidade luminosa sobre a planta-me, antes da coleta das estacas, tende a favorecer a formao de razes, provavelmente devido preservao das auxinas e de outras substncias endgenas em detrimento aos compostos fenlicos. Por sua vez, a presena de luz durante o enraizamento de estacas, com folhas, pode favorecer a emisso e o desenvolvimento do sistema radicular. O estiolamento dos ramos, dos quais sero retiradas as estacas, facilita o enraizamento e uma prtica recomendada, especialmente no caso de espcies de difcil enraizamento. Na regio basal da estaca, onde sero formadas as razes, necessrio que se mantenha um ambiente completamente escuro. Umidade - Para que haja diviso celular, necessrio que as clulas se mantenham trgidas. O potencial de perda de gua numa estaca muito grande, seja por meio das folhas seja por meio das brotaes em desenvolvimento, especialmente considerando-se o perodo em que no h razes formadas. A perda de gua uma das principais causas da morte de estacas. Portanto, a preveno do murchamento especialmente importante em espcies que exigem um longo tempo para formar razes e nos casos em que so utilizadas estacas com folhas ou de consistncia mais herbcea. O uso da nebulizao intermitente (Fig. 4) permite a reduo da perda de umidade pela formao de uma pelcula de gua sobre as folhas, alm da diminuio da temperatura e da manuteno da atividade fotossinttica das mesmas nas estacas. Por sua vez, a alta umidade favorece o desenvolvimento de patgenos, para os quais devem ser dispensados cuidados especiais. Substrato - O substrato destina-se a sustentar as estacas durante o enraizamento, mantendo sua base num ambiente mido, escuro e suficiente aerado.

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Os efeitos do substrato, tanto sobre o percentual de enraizamento quanto sobre a qualidade das razes formadas, relacionam-se especialmente com a porosidade, a qual afeta o teor de gua retida e seu equilbrio com a aerao. Diferentes materiais so utilizados como meios para enraizamento, como, por exemplo, areia, vermiculita, casca de arroz carbonizada, turfa, solo ou a mistura de ambos. Condicionamento do ramo antes da estaquia - Em espcies de difcil enraizamento, alguns tratamentos que venham a ser realizados previamente coleta dos ramos antes do preparo da estaca, podem permitir melhores resultados. Em diversos casos, o condicionamento fundamental para que se possa obter um percentual de enraizamento satisfatrio. Como exemplos, podem ser citados o tratamento com fitorreguladores, o anelamento, o estiolamento e a dobra dos ramos, antes da estaquia. Tcnicas de estaquia Para que a estaquia seja feita com sucesso, necessrio que se observem alguns aspectos: Obteno do material propagativo - No momento da coleta das estacas, deve-se selecionar como planta-matriz aquela que possui identidade conhecida, caractersticas peculiares da espcie ou da cultivar, alm de apresentar timo estado fitossanitrio, vigor moderado e no apresentar danos provocados por dficit hdrico, geadas ou outras intempries. A planta-matriz deve estar numa condio nutricional equilibrada. Esses requisitos so necessrios para se obter bons resultados. Na produo comercial de mudas, recomendvel a obteno do material propagativo junto a blocos de matrizes, ou colees de cultivares em instituies de pesquisa para evitar-se o uso de material contaminado por viroses. A posio e o tipo de ramo, de onde sero obtidas as estacas, so variveis

49 conforme a espcie. Recomenda-se o uso de ramos de crescimento vigoroso. No caso de estacas lenhosas, pode ser utilizado o material descartado pela poda, para obteno de material propagativo. poca de coleta das estacas - Conforme citado anteriormente, a poca do ano afeta o potencial de formao de razes, especialmente em espcies de difcil enraizamento. Para cada espcie, so necessrios testes para se verificar, empiricamente, qual a poca mais adequada para a coleta das estacas. Essa poca est mais relacionada com as condies fisiolgicas da planta do que com um perodo fixo do ano. A princpio, desde que se disponha de estrutura com nebulizao intermitente, a coleta de estacas pode ser feita em qualquer poca. Podem ser estabelecidos trs perodos principais de coleta de material para estaquia, quais sejam: Perodo de repouso - Nesse perodo, so utilizadas estacas com alto grau de lignificao, denominadas estacas lenhosas. Em espcies caduciflias, o uso de estacas com gemas dormentes bastante difundido, pela simplicidade, baixo custo e viabilidade de uso em diversas espcies, especialmente aquelas de fcil enraizamento. No necessrio o uso de estruturas especiais (estufas, nebulizao e outras), sendo possvel em alguns casos, como o da figueira, a estaquia diretamente no viveiro. Geralmente, so utilizados ramos de 1 ano, ainda que em algumas espcies possam ser utilizadas estacas - ou pores destas - de 2 anos. mais recomendvel o uso de estacas medianas e basais, porque estas apresentam maior acmulo de reservas, provenientes da estao de crescimento anterior. As estacas podem ser obtidas no fim do outono, no inverno (dormncia plena) ou no incio da primavera. Geralmente, a coleta feita de maio a agosto. A coleta de estacas no fim da dormncia pode causar a brotao das gemas, especialmente devido ao aumento da temperatura nessa poca. Isso provoca a perda de umidade da estaca e, como ainda no houve formao das razes e a absoro de gua, a brotao torna-se prejudicial ao enraizamento. Em algumas espcies pereniflias (com folhagem permanente), o uso de estacas lenhosas tem proporcionado bons resultados. Nesse caso, como as estacas possuem folhas, necessrio o uso de estruturas de propagao, mesmo no perodo de inverno. Isso importante devido variabilidade da temperatura nessa poca . Perodo de intenso crescimento vegetativo (primavera) - Nessa poca, as estacas apresentam baixo grau de lignificao e elevada atividade do cmbio. Resultam da fase mais ativa de crescimento dos ramos e apresentam uma consistncia bastante herbcea. Ainda que estacas com essa consistncia sejam tpicas da primavera, em alguns casos estacas semelhantes podem ser obtidas durante o vero e at mesmo no outono. Em diversas espcies de difcil enraizamento, tm sido obtidos bons resultados com a estaquia nessa poca, como no caso do pessegueiro, da ameixeira e do araazeiro. Estacas desse tipo enrazam com facilidade e rapidez (2 a 5 semanas, na maioria dos casos). Por serem muito tenras, deve-se ter maior cuidado com essas estacas, para se evitar a desidratao e o ataque de microrganismos. Mesmo num sistema de nebulizao, a perda de gua pode ser a causa de grande mortalidade de estacas. Alm disso, a coleta deve ser feita preferencialmente no incio da manh, quando a umidade do ar mais elevada, visando minimizar o murchamento dos ramos e das estacas. Para tanto, recomendvel acondicionar os ramos em baldes ou sacos de

50 plstico at o momento do preparo . Perodo final do crescimento vegetativo (final do vero - incio do outono) Estacas utilizadas nessa poca so denominadas semilenhosas, apresentam mais folhas e so mais lignificadas que na poca anterior. Sua utilizao requer nebulizao intermitente, para evitar o murchamento e a perda das folhas. Podem ser utilizadas pores basais, medianas e apicais dos ramos. Da mesma forma que para a poca anterior, devem ser adotadas medidas que reduzam a perda de gua pelo material propagativo, ainda que sua resistncia desidratao seja maior que a das estacas herbceas. Preparo e manejo das estacas Uma vez selecionados os ramos, necessrio que estes sejam levados a um galpo ou estrutura semelhante, onde as estacas sero preparadas. O preparo pode ser feito com tesoura de poda ou em se tratando de estacas lenhosas em grandes quantidades, com o uso de serras eltricas. Uma vez preparadas, as estacas devem ser mantidas em gua at o momento de serem colocadas no substrato. O comprimento e o dimetro das estacas variam conforme a espcie e o tipo de estaca. Estacas lenhosas podem ter comprimento varivel de 20 a 30 cm e dimetro que, geralmente, se situa entre 0,6 e 2,5 cm. Geralmente, estacas semilenhosas apresentam comprimento de 7,5 a 15 cm, e estacas herbceas podem ser ainda menores. Aps o preparo, conveniente a separao das estacas em grupos, conforme o tamanho. Isso permite a obteno de lotes homogneos de plantas, o que facilitar a realizao de operaes posteriores. ainda recomendvel a identificao dos lotes de estacas por cultivar, para se evitar a mistura posterior no viveiro. Em estacas semilenhosas ou de consistncia mais herbcea, a presena de folhas favorece o enraizamento, provavelmente devido produo de co-fatores do enraizamento nas folhas. Da mesma forma, em estacas lenhosas, a presena de gemas aumenta o percentual de enraizamento em diversas espcies. Por sua vez, a presena de folhas nas estacas representa uma superfcie transpiratria cuja taxa de perda de gua aumentada em condies de elevada temperatura, normalmente observada nas pocas de coleta de estacas menos lignificadas. Por isso, necessrio o uso de nebulizao nas estacas com folhas. Geralmente, so mantidas apenas 2 ou 3 folhas na parte superior da estaca. Quando as folhas forem muito grandes, podem ser cortadas ao meio, para facilitar o manejo e reduzir a perda de gua. O corte superior da estaca deve ser feito logo acima de uma gema e o inferior, logo abaixo. Essa recomendao mais vivel de ser seguida, quando feito o preparo individual das estacas. Quando se trabalha com estacas lenhosas, com corte em feixes de 50 ou 100 estacas, o posicionamento do corte pode no ser o mais adequado. possvel o armazenamento das estacas lenhosas durante o inverno e, em alguns casos, esse procedimento permite a formao de calo ou de iniciais de razes. Para tanto, podem ser utilizados leitos aquecidos ou o simples armazenamento em substrato umedecido. Deve-se evitar a desidratao das estacas armazenadas, bem como acompanhar a brotao das mesmas, pois, caso contrrio, ocorrer uma perda de gua, com prejuzos ao enraizamento. O tratamento com fitorreguladores pode ser feito ainda no armazenamento. O uso de estacas com folha citado na propagao de limoeiro de framboesanegra, de goiabeira e de pessegueiro, alm de outras, mas pouco usado em fruticultura. Utiliza-se um n com uma folha e uma gema por estaca, preferencialmente

51 de material que tenha gemas bem desenvolvidas e folhas sadias em crescimento ativo. Para algumas espcies, cortes laterais na base da estaca favorecem o enraizamento, especialmente naquelas em que o esclernquima se constitui numa barreira fsica emisso de razes. Propiciada por esses cortes, a exposio do cmbio tambm pode facilitar a absoro de substncias promotoras do enraizamento. Estaqueamento O plantio das estacas pode ser feito em recipientes (sacos de plstico, vasos, baldes, caixas, entre outros), em estruturas de propagao ou diretamente no viveiro. O primeiro caso aplicado para estacas com folhas (semilenhosas ou herbceas), as quais necessitam de umidade constante sobre a folha. O plantio direto no viveiro pode ser adequado para estacas lenhosas, especialmente de espcies caduciflias, quando a manuteno da umidade propiciada pela chuva ou por irrigaes espordicas suficiente. Essa prtica, denominada enviveiramento, destina-se, principalmente, propagao de plantas em larga escala e multiplicao de espcies ou cultivares de fcil enraizamento. Nesse caso, devem ser utilizadas reas de solos profundos, bem drenados e com viabilidade de uso da irrigao. A profundidade de plantio varivel conforme o tipo de estaca, sendo que, para estacas de ramos, aconselhvel que dois teros sejam enterrados no substrato. No que se refere a estacas de raiz, importante a manuteno dessas em profundidade de 2,5 a 5,0 cm, na posio horizontal, para manter sua correta polaridade. Como preveno ao aparecimento de doenas, recomendvel a imerso das estacas em soluo fungicida. Para aumentar a sobrevivncia das estacas, pode-se misturar o fungicida com o fitorregulador durante o processo de tratamento das mesmas. No momento do plantio, importante garantir uma boa aderncia do substrato estaca, uma vez que grandes espaos porosos podem aumentar a desidratao desta. Substrato Por ser um dos fatores de maior influncia, especialmente no caso de espcies de difcil enraizamento, deve ser dada ateno especial escolha do substrato. Para cada espcie, necessrio verificar, empiricamente, qual o melhor substrato (ou combinao de substratos). Um bom substrato deve proporcionar reteno de gua suficiente, para prevenir a dessecao da base da estaca e, quando saturado (especialmente no caso de nebulizao intermitente), deve manter uma quantidade adequada de espao poroso, para facilitar o fornecimento de oxignio, indispensvel para a iniciao e o desenvolvimento radicular, e para a preveno do desenvolvimento de patgenos na estaca. Deve-se, ainda, optar por substratos que no sejam fontes de inculo de organismos saprfitos. Alm da vermiculita, da casca de arroz carbonizada, da areia, etc., outros substratos, como o musgo turfoso, o musgo esfagnneo e a gua podero ser utilizados. No caso de utilizao da gua, necessrio um bom sistema de oxigenao, para permitir que as razes se desenvolvam. Tcnicas de condicionamento Estratificao uma prtica que consiste na disposio de camadas alternadas de areia grossa ou solo umedecidos, para proporcionar a formao prvia do calo, alm de permitir a conservao da estaca. O aumento da temperatura e da umidade, at certos limites,

52 aumenta a intensidade de formao de calo. Deve-se evitar o desenvolvimento de fungos ou de bactrias, a acumulao de gua e o dessecamento, que so prejudiciais formao de razes. necessrio que as estacas sejam retiradas da estratificao, logo que tenham formado o calo ou ocorrido a brotao das gemas. Leses na base da estaca Especialmente em estacas que apresentam madeira velha na base, onde os cortes favorecem a formao de calo e de razes nas bordas da leso (Fig. 5 e Fig. 6). A diviso celular estimulada pelo aumento na taxa respiratria e nos teores de auxina, carboidratos e etileno nessa rea lesionada. Essa leso faz com que haja maior absoro de gua e de fitohormnios, aumentando a eficincia no enraizamento.

Por sua vez, as leses permitem que haja rompimento da barreira fsica formada por anis de esclernquima, os quais podem at mesmo impedir a emergncia das razes. Para tanto, efetuam-se 1 ou 2 cortes superficiais de 2,5 a 5,0 cm na base da estaca, removendo-se apenas uma poro da casca das estacas nesse local. Estiolamento - O desenvolvimento de uma planta, ou parte dela, na ausncia de luz, resultando em brotaes alongadas, com folhas pequenas, e no expandidas, e com baixo teor de clorofila. Alm disso, so encontrados em tecidos estiolados teores baixos de lignina e altos de auxinas endgenas e de outros co-fatores do enraizamento, uma vez que esses ltimos compostos so sensveis luz (fotolbeis). Assim, o enraizamento favorecido. Pode-se efetuar o estio lamento de toda a planta, de todo um ramo ou de parte do mesmo (Fig. 7). Para tanto, faz-se uma cobertura dos ramos, em desenvolvimento, com plstico preto ou outro material similar (papel alumnio, fita-isolante e outros), de modo que esses cresam na ausncia de luz.

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O estiolamento parcial feito com a cobertura apenas da base do ramo. O estiolamento feito durante o crescimento dos ramos, por perodos que variam conforme a espcie. Normalmente esses perodos no passam de 30 dias. Um exemplo da aplicao do estiolamento foi avaliado em araazeiro, obtendo-se resultados promissores em funo dessa tcnica (VOLTOLlNE; FACHINELLO, 1977). Anelamento Entende-se por anelamento a obstruo feita por meio de um corte, na regio do crtex. O estrangulamento, que apresenta a mesma finalidade, feito com a toro de um arame em volta do ramo (Fig. 8). A obstruo da casca de um ramo na planta-matriz bloqueia a translocao descendente de carboidratos, fitohormnios e cofatores do enraizamento, permitindo a acumulao desses compostos acima do local da obstruo, regio que ser a base da futura estaca. o acmulo desses compostos favorece a formao e o crescimento das razes. Alm disso, h um aumento da quantidade de clulas parenquimatosas e de tecidos menos diferenciados. O anelamento pode ser feito com um anel de arame, ou com um corte na regio basal ou mediana do ramo de onde ser retirada a estaca. Deve ser feito assim que o comprimento do ramo permita, durante a fase ativa de crescimento vegetativo, para assegurar uma acumulao significativa de compostos. Rejuvenescimento de ramos Estacas oriundas de ramos com juvenilidade tendem a apresentar maior percentual de enraizamento. Assim, qualquer tcnica que permita ao ramo retornar fase juvenil evitar a diminuio do potencial de enraizamento, medida que a planta-matriz envelhece. Uma poda drstica da planta-matriz induz emisso de brotaes juvenis, de maior capacidade de enraizamento. Muitas vezes, essas brotaes so resultantes dos

54 esferoblastos, formaes verrugosas com tecido meristemtico. Em algumas espcies, como a macieira, possvel forar a presena de brotos adventcios juvenis a partir de estacas de raiz. Dobra de ramos Essa tcnica de condicionamento consiste na dobra manual dos ramos na fase de crescimento (Fig. 9). Esses ramos ficam presos planta, por uma poro de lenho e casca, at a poca de utilizao das estacas lenhosas (inverno). Esse tipo de leso provoca o aumento da relao C/N e a formao de um tecido pouco diferenciado, resultante da cicatrizao, na regio da dobra, com aumento da capacidade de emisso de razes. Ainda que a dobra dos ramos no dispense o uso de fitorreguladores, h um favorecimento do potencial de formao de razes.

Fig. 9. Processo de dobra de ramos para obteno de estacas em pessegueiro.

Tratamento com fitorreguladores O uso de fitorreguladores tem a finalidade de aumentar a percentagem de estacas que formam razes, acelerar sua % iniciao, aumentar o nmero e a qualidade das razes formadas e a uniformidade no enraizamento. Algumas dessas substncias, como as auxinas sintticas, podem inibir o desenvolvimento das gemas e dos ramos. Essa prtica estabelece um balano hormonal favorvel ao enraizamento. Geralmente, so utilizadas auxinas sintticas (AIB, ANA, AIA, 2,4-D), que visam elevar o contedo hormonal nos tecidos da estaca. Alm disso, tambm podem ser utilizados inibidores da sntese de giberelinas, que so antagnicas ao processo de iniciao radicular. Como exemplo, pode ser citado o paclobutrazol. O tratamento com citocininas (cinetina, benziladenina e benzilaminopurina) estimula o desenvolvimento das brotaes adventcias, o que importante, caso se trabalhe com estacas de folhas ou de razes.

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A substncia promotora do enraizamento, bem como as concentraes e mtodos de utilizao mais adequados para uma determinada situao, variam com a espcie e com o tipo de estaca. Para verificar sua eficincia, so necessrios testes empricos. Tratamento com fungicidas Uma vez que a estaca, especialmente antes e logo aps o enraizamento, bastante vulnervel ao ataque de microrganismos e se encontra num ambiente favorvel proliferao de doenas, a proteo com o uso de fungicidas constitui-se numa prtica importante para a sobrevivncia das mesmas nesse perodo. Uso de nutrientes minerais Favorece a condio nutricional da estaca no enraizamento. A adio de compostos nitrogenados estimula o enraizamento em diversas classes de plantas, possivelmente pelo fato de que esses compostos intervm em interaes hormonais. O uso do boro em combinao com o AIB pode aumentar a percentagem e a rapidez de formao de razes. A adubao de plantas matrizes de videira, com zinco, resultou em maior enraizamento e desenvolvimento de razes, possivelmente devido ao incremento no teor de triptofano, precursor da auxina, do qual o zinco ativador. A adubao de plantas-matrizes de ameixeira, com zinco e boro, aumentou os teores de triptofano nas estacas e o potencial de enraizamento. Uso da nebulizao A nebulizao intermitente a aplicao de gua na forma de nvoa (gotas de tamanho reduzido) sobre as estacas, criando uma atmosfera para reduzir a perda de gua pelas folhas. A reduo das taxas de transpirao e de respirao pelas folhas, bem como a reduo da temperatura das mesmas, so obtidas pela formao de uma pelcula de gua sobre as folhas, proporcionada pelo ambiente com alta umidade relativa. Isso assegura a destinao de fotossintatos e nutrientes para a formao das razes. importante que a gua seja aplicada em intervalos regulares, durante todo o perodo diurno. Para evitar o excesso de aplicao, pode ser dispensado o funcionamento da nebulizao durante a noite. Nas horas mais quentes do dia, os intervalos entre as nebulizaes devem ser menores. A nebulizao pode ser instalada em telados, estufas de plstico, ou mesmo no ambiente externo. O ambiente protegido o mais adequado para essa tcnica, uma vez que permite uma aplicao controlada da gua, alm de evitar o efeito do vento sobre a irrigao. O controle dos intervalos de acionamento do sistema de nebulizao pode ser efetuado por meio de mecanismos como: Folha mida, na qual h uma superfcie de tela, que simula a superfcie de uma folha. Quando essa superfcie perde gua a um nvel pr-estabelecido, o mecanismo da nebulizao acionado . Temporizador (timer), o qual controla o funcionamento de uma vlvula solenide que, quando desligada, permite a nebulizao das plantas. Pode-se utilizar um timer duplo, que permite trabalhar com dois turnos diferentes de nebulizao, de tal modo que se tenha perodos diferentes do processo durante o dia, quando a necessidade de gua maior, e durante a noite, quando a necessidade de gua menor . Controlador eletrnico de umidade, constitudo de um sistema computadorizado

56 de acionamento da irrigao, com base na temperatura e na umidade relativa do ar. O uso de nutrientes na gua de irrigao pode melhorar a qualidade das razes formadas e o crescimento subseqente das estacas enraizadas. Cuidados durante e aps o enraizamento A diviso celular e o enraizamento s ocorrem em tecidos com clulas trgidas e o principal cuidado a ser tomado durante o enraizamento a manuteno de um adequado teor de gua no substrato e na parte area da estaca. Isso importante tanto quando se trabalha com estaquia direta em viveiro, na qual dever ser prevista a implantao de um sistema de irrigao, quanto com estacas folhosas, como citado no item anterior. Especialmente quando se trabalha com nebulizao, a aplicao de gua para manter as folhas midas implica saturao do substrato com gua e, por isso, a drenagem tambm deve merecer ateno, pois o excesso hdrico prejudica o enraizamento. Por sua vez, deve-se dar ateno ao manejo fitossanitrio, com a utilizao de tratamentos semanais com fungicidas, para reduzir o ataque de patgenos, principalmente fungos saprfitos sobre as estacas, em ambiente com nebulizao. Nesse ambiente, a elevada umidade favorece a proliferao de doenas. Nesse caso, o monitoramento da ocorrncia de doenas muito importante. Para diminuir o potencial de inculo, devem-se eliminar as folhas cadas e as estacas mortas. No caso de estaquia em viveiro, deve-se dar ateno ocorrncia de plantas invasoras e pragas. O manejo aps o enraizamento depende da estrutura de propagao adotada. Se utilizada a estaquia direta no viveiro, deve-se repicar as mudas para um local com maior espaamento, onde essas crescero at atingir o estgio de comercializao. O desplante (extrao das estacas enraizadas) deve ser, preferencialmente, feito em dias com baixa temperatura, nublados e com ventos fracos. Para minimizar a morte das mudas aps o transplante, deve-se prever o uso da irrigao. As mudas podem ser conservadas em trincheiras ou cmaras frigorficas. Os cuidados com as estacas folhosas devem ser maiores, especialmente no que se refere desidratao. Uma vez que o ambiente numa casa de vegetao muito diferente do ambiente externo, to logo tenha-se formado um sistema radicular abundante, deve-se diminuir, gradativamente, a aplicao de gua, reduzindo a umidade sobre as folhas e aumentando a aerao do substrato, que permite a aclimatao das mudas e menor perda de plantas no viveiro. Preparo e uso de fitorreguladores A utilizao de fitorreguladores no enraizamento uma prtica largamente difundida, sendo uma tcnica que, em muitas espcies de difcil enraizamento, pode viabilizar a produo de mudas por estaquia. Os principais fitorreguladores usados com essa finalidade so aqueles do grupo das auxinas. A auxina endgena, naturalmente encontrada nas plantas, o AIA (cido indolactico). As auxinas so essenciais no processo do enraizamento, possivelmente porque estimulam a sntese de etileno que por sua vez favorece a emisso de razes. Os nveis de AIA na planta so variveis conforme a velocidade das reaes de sntese, de destruio e de inativao que, por sua vez, afetada por alguns fatores, como: Idade fisiolgica do rgo e da planta.

57 Condies ambientais - Em plantas perenes de clima temperado, os maiores nveis de auxina so encontrados na primavera e no vero. Parte da planta - As concentraes de AIA so maiores nos locais de sntese (regies de crescimento ativo) e so muito baixas em tecidos j diferenciados. Para se obter estacas enraizadas em qualquer poca do ano, deve se lanar mo de auxinas sintticas, na promoo do enraizamento. Tipos de auxinas sintticas As principais auxinas sintticas e algumas de suas caractersticas constam da Tabela 1.

Mtodos de aplicao P - Podem ser encontradas frmulas comerciais em forma de p. Alm disso, o preparo do fitorregulador em p pode ser feito pelo usurio, mesmo que alguns autores o desaconselhem, em funo da dificuldade de homogeneizao da mistura. Para tanto, utiliza-se a quantidade de fitorregulador desejada para uma determinada concentrao de talco industrial. Aps adicionar o fitorregulador, acrescenta-se acetona ou lcool etlico mistura, em quantidade suficiente para permitir a homogeneizao do talco com o mesmo. A acetona ou o lcool so retirados por evaporao em estufa, em temperatura no muito elevada, preferencialmente em torno de 40C, ou em condio de temperatura ambiente, de modo a no inativar o fitorregulador. Esse mtodo de aplicao

58 adequado para o AIS (cido indolbutricol, por sua estabilidade em temperaturas mais elevadas. Como preparar - Para preparar 500 g da frmula contendo AIB a 2.000 mg.kg-1, utilizam-se 1.000 mg de AIB puro e acrescenta-se talco industrial at completar 500 g. Para melhor homogeneizao, acrescenta-se lcool etlico ou acetona, em quantidade suficiente para formar uma pasta. Homogeniza se a mistura com um basto de vidro e leva-se a uma estufa temperatura de cerca de 40C at a completa evaporao do solvente (FACHINELLO et ai., 1995). 1 ppm = 1 mg L-1 ou 1 mg kg-1 2.000 ppm = 2.000 mg kg -1 ou 2.000 mg L-1 Para preparar 500 g, usam-se 1.000 mg de AIB. O p, contendo a substncia indutora, colocado em recipientes menores, onde a base da estaca pressionada, de forma que o mesmo fique aderido a essa. Para melhor aderncia, recomendvel molhar a base das estacas em gua. O excesso de p deve ser retirado. Depois, as estacas so colocadas no substrato. O p molhado no deve retornar ao recipiente de armazenamento, para evitar alteraes da mistura ao longo do tempo. Como vantagens desse mtodo, podem ser apontadas a facilidade de preparo e aplicao, e a longa durabilidade da mistura. Como desvantagem, h a desuniformidade da quantidade de p aderida estaca, que pode afetar o enraizamento. Essa quantidade afetada pela umidade na base da estaca e pela textura da casca. H indicaes de que, nesse mtodo de aplicao, as concentraes a serem utilizadas devem ser duplicadas. Assim, se na forma de soluo os melhores resultados so obtidos com 1.000 mg L-l, na forma de p so necessrios 2.000 mg kg' Soluo diluda - Entende-se por soluo diluda aquela cuja concentrao do fitorregulador varia de 20 a 200 mg L-'. Algumas substncias so solveis em gua, como os sais potssicos do AIB. Outras, como o ANA, dissolvem-se melhor com algumas gotas de hidrxido de sdio, potssio ou amnio. O AIB requer a diluio num pequeno volume de lcool (etlico, metlico ou isoproplico), ou de hidrxido de sdio ou potssio. Como preparar - Para preparar 500 mL de uma soluo contendo 100 mg L-' de AIB, dissolvem-se 50 mg da substncia pura em 250 mL de lcool. Agita-se bem e adicionam-se os 250 mL de gua destilada restantes, para completar o volume de 500 mL. Essa soluo alcolica a 50% melhor para dissolver o AIB, pois quando se usa uma quantidade muito pequena de lcool, pode ocorrer a precipitao do AIB, ao se adicionar gua destilada. A diluio do AIB em hidrxido de sdio ou potssio normalmente feita em pequeno volume do diluente (5 mg L-1 de AIB), no se observando problemas de precipitao do fitorregulador. A base das estacas (cerca de 2,5 cm) imersa na soluo, em local sombreado, por um perodo de tempo longo, normalmente em torno de 24 horas. O local sombreado necessrio, para que no haja aumento significativo da concentrao da soluo devido evaporao, e para que seja minimizada a perda de gua pela estaca. A quantidade do fitorregulador absorvida depende das condies ambientais que circundam o local do tratamento, do tipo de estaca e da espcie. Deve-se manter uma atmosfera mida durante o tratamento, para que haja uma absoro lenta e contnua. O uso de solues diludas apresenta as vantagens de proporcionar uma boa

59 uniformidade de tratamento das estacas e ter baixo risco de efeitos fitotxicos. Por sua vez, as solues perdem sua atividade em poucos dias, devendo ser preparadas apenas para uso dirio. Soluo concentrada - aquela que apresenta uma concentrao de fitorregulador que varia entre 200 e 10.000 mg L -1 e por isso, o tratamento deve ser mais rpido. O preparo feito de forma semelhante ao caso das solues diludas. A imerso da base das estacas (1,5 a 2,5 cm) feita por um perodo em torno de 5 segundos. A exposio por um tempo mais prolongado, bem como a utilizao de concentraes muito elevadas, podem ocasionar efeitos fitotxicos, como a inibio do desenvolvimento das gemas, amarelecimento e queda de folhas e, at mesmo, a morte das estacas. Isso importante, porque se considera que a melhor concentrao aquela imediatamente inferior ao limite de fitotoxicidade. Esse mtodo apresenta vantagens, como a menor necessidade de equipamentos, a possibilidade de utilizao da mesma soluo por vrias vezes, a pouca influncia das condies ambientais e a uniformidade no tratamento. Alm disso, possvel a conservao da soluo concentrada por um perodo relativamente grande, com a mesma atividade. Para tanto, necessrio que o armazenamento seja feito em recipiente hermeticamente fechado e em local escuro. Como desvantagem, pode ser citado o risco de efeitos txicos sobre a estaca, quando utilizadas concentraes muito elevadas.

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Propagao Vegetativa por Enxertia

Introduo A enxertia uma forma de propagao assexuada de vegetais superiores, na qual se colocam em contato duas pores de tecido vegetal, de tal forma que se unam e, posteriormente, se desenvolvam, originando uma nova planta (HARTMANN et ai., 1990). Uma planta propagada por enxertia composta, basicamente, de duas partes: o enxerto ou garfo e o porta-enxerto ou cavalo, ainda que eventualmente possa ser utilizada uma poro intermediria ao enxerto e ao porta-enxerto, chamada de interenxerto, enxerto intermedirio ou filtro. O enxerto a parte representada por um fragmento da planta, contendo uma ou mais gemas, responsvel pela formao da parte area da nova planta. O porta-enxerto a parte responsvel pela formao do sistema radicular. O interenxerto usado quando se deseja evitar problemas de incompatibilidade entre o enxerto e o porta-enxerto, para controlar o crescimento da copa ou para se obter caule resistente a baixas temperaturas, entre outros objetivos. Para que se tenha sucesso com a propagao de plantas por meio da enxertia, necessrio que ocorra um bom contato da regio cambial de ambas as partes enxertadas. A regio cambial formada por um tecido delgado da planta, situado entre a casca (floema) e a madeira (xilema) e composto por clulas meristemticas capazes de dividirem-se e formarem novas clulas. Diversas espcies frutferas so propagadas comercialmente por enxertia, como o pessegueiro, a ameixeira, a nectarineira, a macieira, a pereira, a videira, os citros em geral, a mangueira, o caquizeiro, entre outros (FACHINELLO et ai., 1995). Utilizao da enxertia A enxertia pode ser utilizada com as seguintes finalidades: Manter as caractersticas genticas de uma espcie, de uma cultivar ou de um clone A enxertia, bem como os demais mtodos de propagao assexuada, permite que as caractersticas produtivas das plantas sejam mantidas em seus descendentes, garantindo o valor agronmico das mesmas, produzindo plantas mais uniformes quanto ao porte, exigncias edafoclimticas e tratamentos fitossanitrios, entre outros. Propagar plantas que no podem ser multiplicadas por outros mtodos Algumas espcies frutferas produzem sementes com baixo poder germinativo, como o caso da ameixeira (cerca de 2%), e outras simplesmente no as produzem. Por sua vez, em espcies altamente heterozigotas, a propagao por sementes implicaria modificaes genticas nos descendentes. Alm disso, a enxertia utilizada em espcies que apresentam dificuldade de formar razes. Obter benefcios do porta-enxerto Embora os porta-enxertos sejam responsveis apenas pela formao do sistema radicular e sustentao das novas plantas, em muitos casos, podem determinar caractersticas importantes como, por exemplo, conferir maior ou menor vigor copa, como nos casos da macieira, da pereira, da videira e de citros, ou conferir melhor qualidade aos frutos. Alm disso, muitos porta-enxertos so tolerantes a condies desfavorveis, como solos pesados - com excesso ou falta de umidade - ataque de

61 pragas ou doenas, entre outras. Substituir cultivares de plantas estabelecidas Muitas vezes, em pomares estabelecidos com uma determinada cultivar, surgem problemas, como a baixa produtividade, frutos de qualidade inferior, hbito de crescimento inadequado, ou mesmo, suscetibilidade a pragas e doenas. Essas dificuldades podem ser solucionadas com a enxertia de uma nova cultivar mais adequada, sem necessidade de se implantar um novo pomar. Outra situao muito comum de uso da enxertia em plantas j estabelecidas aquela em que se tm pomares com cultivares que necessitam de polinizao cruzada e que, por morte ou nmero insuficiente de plantas polinizadoras, podem ter a produo comprometida e requerem a presena de plantas ou ramos de uma cultivar polinizadora. Em pequenos pomares domsticos, a enxertia possibilita que, numa mesma planta, tenha-se mais de uma cultivar ou mais de uma espcie. Isso possvel, enxertando-se uma cultivar ou espcie diferente em cada ramo principal. Contudo, nesse caso, deve-se ter o cuidado para que as cultivares enxertadas tenham o mesmo vigor, para evitar a dominncia de um ramo sobre outro. Evitar problemas de juvenil idade Muitas plantas frutferas, quando propagadas por sementes, necessitam de um perodo de 5 a 10 anos para superarem o perodo juvenil e entrarem em produo. Esse perodo improdutivo pode ser reduzido, enxertando-se segmentos de plantas que j estejam produzindo ou que foram propagadas por mtodos assexuados, pois essas plantas j superaram o perodo de juvenilidade. Recuperar partes danificadas de plantas Fatores como baixas temperaturas, pragas, doenas, ventos, animais e equipamentos agrcolas podem provocar srios danos s razes ou parte area das plantas. A recuperao total ou parcial possvel, por meio da enxertia. Estudar enfermidades virticas As doenas causadas por vrus podem ser transmitidas de uma planta para outra, por meio da enxertia. Embora seja um grande problema na propagao das plantas, esse fato pode ser benfico no estudo das doenas virticas. Existem plantas bastante sensveis ao ataque de determinados tipos de vrus, manifestando, c1aramente, os sintomas; outras, contudo, so portadoras de viroses e no demonstram qualquer tipo de sintoma. Pela enxertia de um segmento de planta que no apresente sintoma do ataque de vrus em outra planta indicadora, conhecida por ser muito sensvel, pode-se verificar a presena, ou no, de uma determinada virose. Esse tipo de teste pode ser feito mesmo em plantas incompatveis, visto no ser necessria uma perfeita unio das partes enxertadas, para que ocorra a transmisso do vrus. Combinar clones ou cultivares A combinao de clones ou cultivares diferentes, numa mesma planta, permite a explorao das melhores caractersticas produtivas de uma determinada planta, utilizada como produtora, com as melhores caractersticas de um sistema radicular de outra, utilizada como porta enxerto.

62 Unio entre enxerto e porta-enxerto Para uma perfeita unio entre enxerto e porta-enxerto, necessrio que ocorra uma seqncia de eventos, na seguinte ordem: Primeiro passo Quando se colocam em contato os tecidos cambiais do enxerto e do portaenxerto, ambos com grande capacidade meristemtica, ocorre multiplicao desordenada de clulas, irregularmente diferenciadas e agrupadas num tecido denominado calo (Fig. 1).

Fig. 1. Multiplicao desordenada de clulas formando o calo para o incio da unio entre enxerto e porta-enxerto. A temperatura e a umidade podem estimular a atividade celular dos tecidos envolvidos, sendo que o aumento da temperatura, at UIT' determinado limite, favorece a diviso celular. A umidade essencial diviso celular, uma vez que em clulas ou em tecidos desidratados no h diviso. Existem outros fatores que tambm influem na formao de calo, como o potencial gentico, a idade dos tecidos, os patgenos, etc. Segundo passo Com a multiplicao das clulas, ocorre um entrelaamento das mesmas, formando um tecido de calo comum a ambas as partes. Terceiro passo H uma diferenciao das clulas em novas clulas cambiais, promovendo uma unio com o cmbio original do enxerto e do porta enxerto. Quarto passo o novo cmbio produz novos tecidos vasculares, que permitem o fluxo normal de gua e de nutrientes. Com isso, est formada a unio entre enxerto e porta-enxerto. Deve-se ressaltar que, durante a cicatrizao do ponto de enxertia, no h mistura de contedos celulares, pois as clulas produzidas mantm suas caractersticas, sejam provenientes do enxerto ou do porta-enxerto. Fatores que afetam o pegamento do enxerto Vrios fatores, isolado ou em conjunto, podem influenciar na formao da unio entre o enxerto e o porta-enxerto. Os principais fatores que influem nesse processo so

63 descritos a seguir: Incompatibilidade Diz-se que duas plantas so incompatveis quando, por motivos intrnsecos a elas, no so capazes de formar uma unio perfeita, impossibilitando o desenvolvimento normal da nova planta. Os principais sintomas da incompatibilidade so: Falta de unio entre enxerto e porta-enxerto, que pode promover a quebra no local da enxertia . Diferenas no crescimento ou no vigor do enxerto e do porta enxerto, resultando em diferenas entre os dimetros dos mesmos. Desenvolvimento excessivo abaixo, acima ou no ponto de unio. Amarelecimento das folhas, seguido de desfolhamento precoce. Crescimento vegetativo reduzido. Diferena entre enxerto e porta-enxerto, com relao ao incio e ao final do perodo vegetativo. Morte prematura da planta. O principal sintoma da incompatibilidade , sem dvida, a ruptura no local da enxertia, o que pode ocorrer em seguida produo da muda ou alguns anos aps (RODRIGUES et aI., 2004) (Fig. 2).

Fig. 2. Sintomas de incompatibilidade entre diferentes porta-enxertos de pessegueiro com a cultivar de damasqueiro Reale d'lmola. A - Planta compatvel; B - Parcialmente compatvel; C - Incompatvel. Os demais sintomas citados podem ser, alm de conseqncias da incompatibilidade na enxertia, resultados de condies desfavorveis, tais como falta de gua, ataque de pragas ou doenas, distrbios nutricionais, entre outros. Existem trs teorias para explicar as causas da incompatibilidade: A incompatibilidade surge devido a diferenas nas caractersticas de crescimento do porta-enxerto e do enxerto, tais como o vigor e a poca de incio e trmino do ciclo vegetativo. A incompatibilidade devida a diferenas fisiolgicas e bioqumicas entre enxerto e porta-enxerto. Uma das partes da unio do enxerto produz algum material txico para a outra parte da planta. Entre os fatores que afetam a incompatibilidade, podem ser citados os seguintes: Afinidade gentica - Geralmente, os problemas relacionados incompatibilidade surgem quando so enxertadas plantas com classificao

64 botnica diferente. Por isso, recomenda-se que enxerto e porta-enxerto sejam, no mnimo, pertencentes mesma famlia. Fatores fisiolgicos - As plantas envolvidas no processo da enxertia devem apresentar as mesmas exigncias nutricionais. Caso contrrio, a ao seletiva do porta-enxerto a um determinado nutriente poder imped-lo de chegar at a copa, causando distrbios nesta. Fatores bioqumicos - A incompatibilidade pode surgir quando as partes envolvidas apresentam ciclo de vida distinto. Normalmente, espcies de folhas caducas no podem ser enxertadas sobre espcies de folhas persistentes. Consistncia dos tecidos - Plantas com tecido lenhoso so incompatveis com plantas de tecido herbceo. Afinidade anatmica - As partes envolvidas na enxertia devem apresentar clulas com tamanho, forma e consistncia semelhantes, visto que no ocorre intercmbio de clulas, ou seja, cada tecido continua a produzir clulas prprias. Porte e vigor - O elevado vigor do porta-enxerto faz com que a copa tenha um grande desenvolvimento vegetativo, o que pode retardar o incio da frutificao. Por sua vez, quando uma copa vigorosa enxertada sobre um porta-enxerto fraco, pode haver comprometimento do desenvolvimento da mesma. Assim, devem se utilizar plantas que apresentem vigor semelhante (Fig. 3). Em algumas espcies, a enxertia com plantas de vigor diferente uma prtica bastante comum e, normalmente, origina uma grande diferena de vigor entre a copa e o porta-enxerto. Nesse caso, porm, a diferena de vigor no considerada como um sintoma de incompatibilidade, visto que no ocorre reduo na produo, quebra no local da enxertia, morte de plantas, etc. Sensibilidade a doenas - Quando o porta-enxerto suscetvel a uma determinada virose, ocorre morte de toda a planta. Quando a copa suscetvel, a planta desenvolvese inicialmente, mas apresenta declnio com o passar do tempo. O mesmo pode ocorrer com outras doenas.

Fig. 3. Diferena de vigor entre porta-enxerto e enxerto em citros ( esquerda, laranja doce sobre P. trifo/iata e direita, laranja-doce sobre limo-cravo). No que se refere aos tipos de incompatibilidade, a maioria dos casos conhecidos, at o momento, pode ser reunida em dois grupos, a seguir:

65 Incompatibilidade localizada - aquela que surge em decorrncia do contato entre enxerto e porta-enxerto, geralmente apresentando uma unio frgil e com interrupes nos tecidos vasculares e no cmbio. Isso faz com que haja reduo da passagem de seiva do porta-enxerto para o enxerto, e vice-versa. Esse tipo de incompatibilidade provoca tambm a ruptura no ponto de enxertia, em decorrncia do maior tamanho da copa ou de ventos. A incompatibilidade localizada pode ser superada pelo uso de um enxerto intermedirio, que seja compatvel com ambas as partes . Incompatibilidade translocada - Esse tipo de incompatibilidade causa degenerao do floema, caracterizada pela formao de uma linha escura ou de uma zona neurtica na regio do crtex. Isso dificulta o transporte de carboidratos, que se acumulam acima da regio degenerada, com conseqente reduo do teor abaixo dessa regio. Esse tipo de incompatibilidade no pode ser superado com o uso de um enxerto intermedirio. Condies ambientais Temperatura - a temperatura tem influncia marcante no processo da enxertia, mais especificamente na taxa de diviso celular que afeta a formao de novas clulas, responsveis pela unio entre enxerto e porta-enxerto, e no processo de desidratao. De modo geral, temperaturas inferiores a 4C e superiores a 32C dificultam o processo de cicatrizao. Umidade do ar e do solo - as clulas novas que formam o calo e a unio entre enxerto e porta-enxerto apresentam paredes finas e so bastante sensveis desidratao. Alm disso, para que ocorra multiplicao celular satisfatria, necessrio que as paredes celulares estejam trgidas. Isso faz com que haja necessidade de se manter um alto teor de umidade no local da enxertia. O teor de umidade do solo tambm importante no processo da enxertia. No perodo da enxertia, um dficit hdrico provoca reduo na diviso celular na regio do cmbio, tanto do enxerto quanto do porta-enxerto. Com isso, a casca torna-se muito aderida ao lenho, dificultando seu desprendimento e a realizao da enxertia. Oxignio - h intensa atividade respiratria e elevada necessidade de oxignio durante a diviso e o alongamento celulares. O oxignio pode tornar-se fator limitante no pegamento, quando so utilizadas ceras ou outros protetores que no permitem as trocas gasosas, principalmente em plantas com maior atividade respiratria. luminosidade - uma intensa luminosidade pode causar dessecao rpida do enxerto. Assim, recomenda-se fazer a enxertia em dias com baixa luminosidade. Quando a enxertia for feita na primavera/vero, deve-se fazer a dobra da copa do porta enxerto, de modo que a parte dobrada promova o sombreamento do ponto de enxertia. Vento - o vento pode provocar a quebra do enxerto no ponto de unio, alm de acelerar o processo de desidratao, aps a enxertia. Alm disso, poder deslocar o enxerto e prejudicar a coincidncia entre o cmbio de ambas as partes. Por isso, a enxertia deve ser evitada em dias ventosos, principalmente, da enxertia de garfagem. Idade do porta-enxerto - de modo geral, porta-enxertos mais jovens possibilitam maior ndice de pegamento, devido a uma atividade celular mais intensa, que facilita o processo de cicatrizao. poca - a poca mais adequada para a enxertia depende da biologia da planta e do

66 tipo de enxerto a ser feito. Para plantas caduciflias, d-se preferncia ao perodo de inverno, para se fazer a enxertia. J para espcies pereniflias, faz-se a enxertia na primavera/vero. Com relao ao tipo, geralmente a enxertia de garfagem feita no inverno e a enxertia de borbulhia, na primavera/vero e no outono. Classificao botnica - um fator importante que deve ser levado em considerao, quando da escolha das plantas utilizadas como enxerto e porta-enxerto, o grau de parentesco existente entre elas, sendo que, quanto maior for a afinidade botnica, maiores sero as possibilidades de pegamento. Recomenda-se usar plantas que, no mnimo, pertenam mesma famlia. Enxertos feitos em plantas pertencentes a famlias botnicas diferentes dificilmente so executados com sucesso. Sanidade do material- importante que as plantas utilizadas na enxertia estejam livres de pragas e doenas, que podem comprometer o pegamento e o desenvolvimento da nova planta. Tcnica da enxertia - muitas vezes, uma tcnica mal utilizada pode causar srios problemas na cicatrizao do enxerto. Os resultados mais freqentes do uso inadequado de tcnicas de enxertia so a pequena rea de contato entre os cmbios do enxerto e do porta-enxerto, cortes desuniformes, amarrao errada ou demorada, danos mecnicos na retirada da gema, desidratao dos ramos fornecedores de gemas, ferramentas pouco afiadas ou contam i nadas, entre outros. Habilidade do enxertado r - quanto mais rpido for feito o processo da enxertia, melhor ser o ndice de pegamento, uma vez que as partes envolvidas sofrero menor influncia dos fatores externos (sol, temperatura, patgenos, etc.). Outro fator relacionado, diretamente, com a habilidade do enxertador a uniformidade dos cortes, que possibilitam melhor contato entre as partes enxertadas. Polaridade do enxerto - para que ocorra a unio, extremamente necessrio que se mantenha o enxerto na posio normal, principalmente tratando-se da enxertia de garfagem. No caso da enxertia de gema, tanto em T normal como em T invertido, recomenda-se manter a polaridade, mas a inverso da mesma no compromete a formao de uma unio satisfatria. Isso ocorre, porque na enxertia de garfagem, na qual usado um fragmento maior do ramo, com xilema e floema formados, o fluxo de substncias fica totalmente comprometido, enquanto na enxertia de gema, o sistema vascular da nova planta formado mais tarde, com o desenvolvimento da gema . Oxidao de compostos fenlicos - mu itas plantas frutferas, principalmente as pertencentes famlia das mirtceas, como a goiabeira, o araazeiro e a pitangueira apresentam abundante exsudao de substncias txicas ao tecido, por ocasio do corte ou ferimento. Essas substncias so, principalmente, compostos fenlicos que sofrem oxidao ao entrarem em contato com as condies ambientais, o que dificulta a formao do calo e o processo de cicatrizao.

Equipamentos necessrios Diversos so os equipamentos usados na enxertia. A seguir, so descritos os mais importantes e indispensveis na realizao dessa prtica. Canivete Existe grande variedade de tipos de canivetes que podem ser usados na enxertia. Contudo, o importante que esses apresentem lminas de boa qualidade, que possam ser afiadas e que mantenham o fio por maior tempo possvel (Fig. 4). Essas

67 caractersticas so importantes, porque aumentam o rendimento do enxertador e permitem a realizao de cortes, com um mnimo de dano s clulas dos tecidos cortados, o que facilita o processo de cicatrizao. As lminas de ao inoxidvel diminuem os riscos de oxidao. Canivete de lmina dupla Esse tipo de canivete usado para fazer a enxertia de placa e apresenta duas lminas paralelas, distanciadas ao redor de 2,5 cm (Fig. 5). As lminas paralelas possibilitam a manuteno das distncias entre os cortes no porta-enxerto e ao redor da gema, garantindo perfeita coincidncia dos mesmos. Fig. 4. Canivetes de enxertia com lmina simples.

Fig. 5. Canivete de enxertia com lmina dupla. Tesoura de poda A tesoura um equipamento utilizado para coleta dos ramos fornecedores das gemas, preparo dos porta-enxertos e dos garfos, corte final da copa ou aparao do sistema radicular no momento de arranquio da muda. Por isso, deve ser de boa qualidade e estar sempre limpa e bem afiada (Fig. 6). Mquina de enxertar Quando o enxerto e o porta-enxerto apresentam dimetros semelhantes, os cortes podero ser feitos com mquinas manuais ou acionadas por motores. Essas mquinas executam cortes na forma de bisei ou de encaixes, no enxerto e no porta-enxerto (Fig. 7).

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Fig. 6. Diferentes tipos de tesouras utilizadas em fruticultura.

Fig. 7. Enxertia de garfagem feita com uso de mquina manual de enxertar, tipo mega. As mquinas proporcionam um rendimento bem superior ao do enxertador (cerca de 5 mil enxertos por homem/dia), mas seu uso restrito enxertia de garfagem feita em galpes (enxertia de mesa), no perodo de repouso das plantas. O uso da mquina de enxertar bastante freqente na enxertia de garfagem da videira e da macieira. Pedra de afiar um acessrio importante para manter tesouras e canivetes afiados. A pedra de afiar deve apresentar uma textura fina, devendo-se colocar gua ou azeite na superfcie onde ser afiada a lmina, para impedir um desgaste excessivo da mesma. Materiais para amarrao e proteo dos enxertos Diversos materiais podem ser usados com essas finalidades, entre eles os mastiques, a rfia, a fita de polietileno e o filme de Pvc. Mastiques Normalmente, os mastiques so constitudos da mistura de resinas, cera de abelha e sebo, utilizando-se, quando necessrio, um solvente voltil, como lcool metlico ou acetona. Materiais como a parafina, a gelia de petrleo, a tinta plstica e a cola branca tambm podem ser utilizados. Os mastiques tm a finalidade de impedir a entrada ou a perda de gua, a passagem do ar e a entrada de microrganismos no ponto de enxertia e podem ser usados quentes ou frios. Normalmente, no so suficientes para manter a unio do enxerto e do porta-enxerto. Por isso, deve-se fazer, primeiramente, uma amarrao com rfia ou outro material semelhante. Fio de rfia

69 O fio de rfia usado apenas para manter a unio entre as partes, no servindo para impedir a entrada ou a sada de gua, ou as trocas gasosas. Fitas de polietileno As fitas de polietileno (Fig. 8) so os materiais mais utilizados, pois mantm a unio, impedem a entrada de gua, a desidratao da gema, as trocas gasosas e a entrada de microrganismos. A fita de polietileno n 8 a mais indicada para fazer a amarrao, em funo da espessura e da elasticidade, mas pode-se utilizar qualquer fita de polietileno disponvel, at mesmo aquelas provenientes de embalagens vazias (sacos de plstico). Filme de PVC Utilizado para amarrao das enxertias, principalmente enxertia de garfagem em videira, e para embalagem de alimentos. comercializado em bobinas, geralmente com 28 cm x 30 m. Para facilitar a utilizao, as bobinas so cortadas em rodelas com 2,0 a 2,5 cm de largura (Fig. 8). Esse material apresenta boa aderncia e, por isso, no necessrio dar ns, para fixar as extremidades. Dependendo do nmero de voltas envolvendo o material, tambm no necessrio retirar o filme, que se decompe aps 2 ou 3 meses.

Fig. 8. Amarrao em enxertia de garfagem em videira com utilizao de: A - Fitas de polietileno; e B - Filme de PVc. Algumas plantas apresentam baixo ndice de pegamento, quando a enxertia feita na primavera/vero, devido, principalmente, desidratao das gemas. Para reduzir esse tipo de problema, pode-se usar, alm da amarrao ou proteo com mastiques, a cmara mida, que consiste na cobertura do enxerto e do portaenxerto com um saco de plstico transparente amarrado levemente com um barbante na base do porta-enxerto, ou a proteo do local da enxertia com papel, utilizando-se sacos de papel, folhas de jornal, etc. O uso de protees evita a ao direta do vento e do sol, e em alguns casos pode viabilizar a enxertia de garfagem na primavera vero. Etiquetas A identificao dos porta-enxertos, mudas prontas e ramos fornecedores das gemas uma prtica importante, pois a mistura de cultivares poder causar srios problemas, muitas vezes s notados quando as plantas entram em produo. As etiquetas podem ser de madeira, de metal, de plstico ou de outro material resistente s intempries, devendo constar, no mnimo, a cultivar copa e o porta-enxerto utilizados. Um sistema de identificao bastante eficiente e prtico pode ser feito com tinta. Para isso, pintam-se anis com cores diferentes no enxerto e no porta-enxerto, de modo

70 que cada cor caracterize uma determinada cultivar. Esse sistema muito utilizado na cultura da macieira. Produtos para desinfestao A desinfestao de ferramentas, como canivetes e tesouras, uma prtica que deve ser adotada, a fim de se evitar contaminao com microrganismos. Normalmente, o produto utilizado o hipoclorito de sdio de 1,5% a 2% (gua sanitria). Obteno dos porta-enxertos A obteno comercial de porta-enxertos pode ser feita por sementes ou por mtodos vegetativos. O mtodo mais utilizado a propagao por sementes, pela facilidade de se obter um grande nmero de plantas, por proporcionar plantas sadias e vigorosas e pela pouca exigncia de tratos culturais, o que permite a obteno de porta-enxertos a baixo custo. A principal desvantagem da produo de porta-enxertos por sementes sua grande desuniformidade. Os principais mtodos vegetativos utilizados na obteno de porta enxertos so a estaquia e a mergulhia. Apresentam a vantagem de produzir plantas uniformes, alm de manter as caractersticas genticas das mesmas em relao aos pais. A utilizao de sementes ou de mtodos vegetativos funo de uma srie de fatores, tais como facilidade de obteno de sementes, capacidade de enraizamento, variabilidade gentica, custos e suscetibilidade a pragas e doenas, que podem levar preferncia por um ou por outro mtodo. Um aspecto importante na obteno dos porta-enxertos, principalmente quando se deseja fazer a enxertia de primavera/vero, refere-se a proporcionar condies que possibilitem bom desenvolvimento desses. Tais condies vo, desde a escolha do local e a correo do solo, at irrigaes e tratamentos fitossanitrios. Classificao da enxertia A enxertia pode ser classificada de duas maneiras: quanto ao mtodo utilizado e quanto poca de realizao. Quanto ao mtodo utilizado Quanto ao mtodo utilizado, existem trs tipos de enxertia: enxertia de borbulhia, enxertia de garfagem e enxertia de encostia. As demais so variaes desses tipos (chamadas formas). Enxertia de borbulhia - Tambm conhecida como enxertia de gema e consiste em justapor uma pequena poro da casca de uma planta (enxerto), contendo apenas uma gema, com ou sem lenho, em outra planta (porta-enxerto) (Fig. 9).

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Fig. 9. Enxertia de borbulhia feita em pessegueiro.

Conforme o modo de inciso da gema, existem vrias formas de se realizar a enxertia de borbulhia, ainda que o princpio seja o mesmo para todas elas. A seguir, sero descritas as formas mais comuns da enxertia de borbulhia, mesmo que existam outras cujo uso no to difundido. As enxertias em T normal e em T invertido, bem como as demais assinaladas, so subdivises da enxertia de borbulhia e no uma diviso quanto ao mtodo . Enxertia em T normal - Essa forma bastante utilizada na propagao de espcies frutferas principalmente ctricas e rosceas. o porta-enxerto deve apresentar um dimetro de 6 a 8 mm (dimetro de um lpis, no qual, com o auxlio de um canivete, faz-se uma inciso na forma de T (Fig. 10l, ou seja, faz-se um corte vertical com aproximadamente 3 cm de comprimento e, na extremidade superior, um corte horizontal.

Os cortes devem ser feitos a uma altura de 5 a 25 cm do solo, cortando-se somente a casca que ser desprendida do lenho. Uma altura de corte muito baixa poder ocasionar a contaminao no local da enxertia, bem como gerar um futuro enraizamento da cultivar-copa.

72 Por sua vez, uma grande altura de corte implica maior superfcie de retirada de brotaes do porta-enxerto e maior risco de quebra no ponto de enxertia. As gemas so retiradas, preferencialmente, da poro mediana dos ramos da ltima estao de crescimento. Deve-se retirar um fragmento de casca com a gema e sem o lenho. Para isso, necessrio que ocorra fcil desprendimento dos mesmos. Para a retirada da gema, o corte deve ser feito de modo que seja atingida parte do lenho, para no danific-la. Depois, faz-se um corte transversal da casca e, com uma leve presso para a frente ou lateralmente, com o dedo polegar, faz-se a retirada da gema, com cuidado para no causar danos mesma. Aps a retirada da gema, deve-se inseri-Ia, o mais rapidamente possvel, devido desidratao e oxidao, no corte efetuado no porta- enxerto, de modo que fique protegida pelas abas laterais do T. Caso o tamanho da poro da casca com a gema seja maior do que o corte feito no porta-enxerto, deve-se eliminar a parte excedente. Para proteger e fixar a gema enxertada, deve-se amarr-la de cima para baixo, para evitar que a mesma seja empurrada para fora do corte, ainda que isso facilite a penetrao de gua. Durante a amarrao, deve se evitar cobrir a gema com a fita. Caso isso acontea, deve-se retirar a fita, quando a gema comear a brotar. Dependendo da poca da enxertia, que ser vista posteriormente, deve-se fazer a dobra do porta-enxerto . Enxertia em T invertido - A enxertia de T invertido idntica forma anterior, diferindo dessa apenas quanto forma de inciso no porta-enxerto. Nesse caso, o corte horizontal feito na extremidade inferior do corte vertical, da a denominao de T invertido (Fig. 10 B). Esse tipo de insero apresenta algumas vantagens com relao ao anterior. Por exemplo, confere maior resistncia ao broto no primeiro estgio de crescimento e dificulta a entrada de gua, tanto proveniente da chuva, quanto da exsudao de seiva. O excesso de gua no ponto da enxertia causa apodrecimento da gema. A amarrao deve ser feita de baixo para cima, para impedir que a gema seja empurrada para fora do corte e evitar a penetrao de gua . Enxertia em placa ou escudo - Essa forma de enxertia utilizada em espcies que apresentam casca grossa, como o caso da nogueira-pec, do caquizeiro e da goiabeira (Fig. 11). uma forma mais lenta e mais difcil de ser executada do que a enxertia na forma de T (normal ou invertido) (Fig. 10). O porta-enxerto deve apresentar um dimetro de 15 a 25 mm, um pouco maior do que o necessrio para a enxertia em T. Para se fazer a enxertia de borbulhia, deve-se utilizar um canivete de lmina dupla, com o qual se fazem dois cortes paralelos horizontais e dois cortes paralelos verticais, obtendo-se uma placa de casca de formato quadrangular, ou um vazador com cerca de 2 cm de dimetro e com as bordas bem afiadas. Para retirar a gema, procede-se da mesma forma, de modo que a placa contendo a gema tenha as mesmas dimenses da placa retirada do porta-enxerto. Isso permite uma perfeita coincidncia das mesmas. A amarrao feita do mesmo modo que na enxertia em T invertido. Enxertia em anel - Para se fazer essa enxertia, efetuam-se dois cortes horizontais e paralelos, com canivete de lmina dupla, ao redor do portaenxerto, obtendo-se uma poro de casca em forma de anel (Fig. 11). Para retirar a gema, procede-se de maneira idntica enxertia em placa.

73 Quando se utiliza essa forma de enxertia, as partes do porta-enxerto acima do anel tendem a morrer com o passar do tempo, devido interrupo da translocao da seiva.

Enxertia de gema com lenho - Consiste em retirar um fragmento de um ramo com uma gema e parte do lenho (poro mais lignificada do ramo). Outro fragmento, do mesmo tamanho, tambm deve ser retirado do porta-enxerto, devendo-se utilizar ramos fornecedores de gemas e porta-enxertos, com o mesmo dimetro, para possibilitar maior contato cambial (Fig. 12). A enxertia de gema com lenho utilizada, principalmente, quando a casca no se desprende do lenho, o que dificulta a adoo da enxertia em T, seja normal ou invertido. Essa forma de enxertia de borbulhia pode ser empregada, com sucesso, na propagao do caquizeiro. Enxertia de garfagem - A garfagem um mtodo de enxertia que consiste na retirada de uma poro de ramo, chamada de garfo ou de enxerto, em forma de bisei ou de cunha, contendo duas ou mais gemas, para ser introduzida no porta-enxerto ou cavalo (Fig. 13). Geralmente, esse tipo de enxertia feito no perodo de repouso vegetativo, principalmente em julho e agosto. Entretanto, pode-se utilizar a enxertia de garfagem de diversas espcies frutferas na fase de crescimento vegetativo, como na videira, no abacateiro, na mangueira, etc.

Fig. 12. Enxertia de borbulhia em gema com lenho.

Fig. 13. Enxertia de garfagem.

Assim como na enxertia de borbulhia, tambm existem vrias formas de se fazer a enxertia de garfagem. A seguir, sero descritas as mais importantes na propagao de

74 plantas frutferas . Fenda cheia - A enxertia em fenda cheia uma forma de garfagem mais eficiente, quando se tem uma grande diferena de dimetro entre enxerto e porta-enxerto. uma forma fcil de ser executada, na qual faz-se um corte horizontal no porta-enxerto, eliminando se, totalmente, a copa. Depois, faz-se um corte no sentido longitudinal, com 2 a 5 em de comprimento. No enxerto ou garfo, fazem-se dois cortes na parte basal, em forma de bisei, semelhante a uma cunha. A seguir, introduz-se a cunha no corte do porta-enxerto (Fig. 14). Quando o porta-enxerto apresenta dimetro muito superior ao do garfo, pode-se colocar dois garfos, um em cada extremidade do corte. Nesse caso, a enxertia chamada de dupla garfagem ou de duplo garfo. Existe tambm a enxertia de raiz, que feita colocando-se o garfo num porta-enxerto de um fragmento de raiz (Fig. 15).

Fig. 14. Enxertia de garfagem em fenda cheia.

Fenda simples ou ingls simples - Essa forma de enxertia de garfagem consiste em fazer-se um corte em bisei no garfo, e outro no porta-enxerto, de modo que os cmbios fiquem em perfeito contato (Fig. 16).

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A Fig. 16. Enxertia de garfagem em fenda simples (A), dupla fenda (B) e cicatrizao (C). A enxertia em fenda simples apresenta o inconveniente de o enxerto quebrar-se muito facilmente, pois o contato entre as partes enxertadas muito frgil. Aps a enxertia, deve-se fazer uma amarrao com fita plstica, tomando-se o cuidado de no deslocar o garfo . Fenda dupla ou ingls complicado - A forma de fenda dupla a mais utilizada para a propagao da macieira, proporcionando bons resultados. Consiste em cortes em bisei no garfo e no porta enxerto, seguidos de um corte no tero inferior do garfo, e outro no tero superior do porta-enxerto. Para juntar as duas partes, faz-se o garfo deslizar sobre o corte em bisei do porta-enxerto, resultando no encaixe dos cortes (Fig. 16 B e C). Esse tipo de corte proporciona maior rea de contato das regies cambiais, bem como maior firmeza entre enxerto e porta-enxerto. Para obter-se maior ndice de pega, necessrio que o dimetro do garfo seja o mais prximo possvel do dimetro do porta-enxerto . Enxertia com mquina - A enxertia com mquina tambm uma forma de enxertia de garfagem, na qual cortes semelhantes so feitos com mquinas, no enxerto e no porta-enxerto. Existem vrios tipos de mquinas de enxertar, mas as mais utilizadas fazem diferentes cortes, normalmente em forma de mega (Fig. 17). A enxertia com mquina feita em duas etapas. Na primeira, efetua-se o corte do enxerto e, na segunda, o corte do porta-enxerto e a unio entre as partes. A principal vantagem da enxertia com mquina o rendimento da operao, uma vez que uma pessoa capaz de enxertar cerca de 5 mil unidades por dia. Como desvantagem principal, tem-se a necessidade de utilizar enxerto e porta-enxerto com dimetros semelhantes. Enxertia de encostia - A enxertia de encostia, tambm chamada de enxertia de aproximao, consiste na unio lateral de duas plantas com sistemas radiculares independentes, de modo que enxerto e porta-enxerto

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Fig. 17. Mquina pneumtica utilizada para a enxertia. sejam mantidos, por seus sistemas radiculares, at que a unio esteja completamente formada. o mtodo mais simples de enxertia, mas pouco utilizado na propagao comercial de plantas frutferas. A enxertia de encostia pode ser feita em qualquer poca do ano, embora seja mais conveniente faz-la na poca de crescimento vegetativo, o que facilitar a cicatrizao e a unio entre as partes. Existem vrias formas de se fazer a enxertia de encostia. Contudo, por sua pouca utilizao, sero descritas apenas as mais importantes. Lateral simples - a forma mais simples de enxertia de encostia. Consiste em efetuar-se um corte na superfcie da casca, com a finalidade de descobrir o cmbio, tanto no enxerto quanto no porta-enxerto. Depois, unem-se essas superfcies com fita de polietileno, rfia ou qualquer outro material similar. Quando a unio estiver completamente formada, faz-se o corte da parte area do porta-enxerto e do sistema radicular do enxerto, de tal maneira que a nova planta fique constituda do sistema radicular e da copa das cultivares desejadas. Em lingeta ou lateral inglesa - Essa forma semelhante anterior, diferindo pelo fato de ser feito um segundo corte da metade para baixo no porta-enxerto e da metade para cima no enxerto, ocasionando o encaixe de ambos. A enxertia em lingeta tem sido bastante utilizada em trabalhos, para investigar a transmisso de doenas virticas entre as plantas. No topo - feita do mesmo modo que a encostia lateral simples, mas o portaenxerto cortado em bisei, na extremidade, e encostado na planta, para formar uma nova. Quanto poca de realizao A classificao da enxertia quanto a poca mais comum na Regio Sul, onde as estaes do ano apresentam caractersticas climticas mais definidas, principalmente em relao temperatura. Em outras regies que no apresentam essas diferenas, a classificao da enxertia quanto poca no tem a mesma importncia. Enxertia de primavera/vero - Esse tipo de enxertia tambm conhecido como enxertia de gema viva. Geralmente realizada nos meses de novembro e dezembro, podendo ser prorrogada at fevereiro. a poca mais utilizada em fruticultura,

77 principalmente por possibilitar a obteno da muda em apenas um ciclo vegetativo. Por isso, deve-se ter uma serie de cuidados com os porta-enxertos, como adubaes nitrogenadas, controle de pragas e doenas, limpezas e irrigaes, a fim de que eles atinjam o dimetro necessrio dentro do perodo previsto. O mtodo mais utilizado para a enxertia de primavera/vero o de borbulhia em T invertido, mas pode-se utilizar, tambm, os outros mtodos, dependendo das espcies que se desejam propagar. As gemas ou borbulhas devem ser retiradas de ramos da brotao do ano, com bom crescimento e oriundos de plantas sadias. Esses ramos devem ser coletados no mesmo dia em que feita a enxertia. Em seguida, retiram-se todas as folhas, deixandose um pequeno pedao do pecolo ligado ao ramo. Os ramos devem ser conservados na sombra, com a base imersa em gua, para evitar a desidratao. Caso no sejam utilizados no mesmo dia, devero ser enrolados em pano, ou papel midos, ou sacos de plstico e armazenados em geladeira comum, com temperatura em torno de 5 C. Aps se fazer a enxertia, normalmente, faz-se a dobra da copa do porta-enxerto. Essa dobra consiste em quebrar parcialmente o porta enxerto, cerca de 10 cm acima do ponto de enxertia, para forar a brotao da gema enxertada. Outro benefcio dessa dobra permitir o sombreamento do local da enxertia. Decorridos 10 a 15 dias, retira-se a parte dobrada da copa do porta enxerto, por meio de um corte acima da fita usada para amarrao, e eliminam-se as brotaes que surgirem do porta-enxerto. Quando o enxerto estiver medindo em torno de 15 a 20 cm de altura, faz-se um corte em bisei logo acima do mesmo, cortando-se, tambm, a fita da amarrao. Deve-se ter cuidado para que, durante o corte, no ocorra afrouxamento da gema. Durante todo o desenvolvimento do enxerto, as brotaes do porta enxerto devem ser eliminadas, para se evitar que elas exeram competio e prejudiquem o desenvolvimento da muda. Enxertia de vero outono - Tambm conhecida como enxertia de gema dormente. feita no final do vero ou no incio do outono. A enxertia de gema dormente semelhante enxertia de gema viva, mas, nesse caso, no feita a dobra da copa do porta-enxerto logo aps a enxertia. Essa dobra feita somente na primavera seguinte, quando a gema entrar em atividade. Assim, a muda enxertada no vero outono s estar completamente formada aps dois ciclos vegetativos, o que faz com que essa enxertia no seja comumente utilizada. No entanto, quando os porta-enxertos no apresentam o dimetro mnimo que possibilite a enxertia em novembro/ dezembro, a enxertia de gema dormente pode ser uma alternativa para aproveitamento dos mesmos. Uma maneira de se ganhar tempo com a muda enxertada no vero/ outono levla para o local definitivo antes de a gema brotar, ou seja, no inverno subseqente enxertia. Para isso, corta-se o porta-enxerto cerca de 20 em acima do local da enxertia e, na primavera seguinte, quando ocorrer o desenvolvimento da gema, faz-se o corte definitivo. Tal procedimento apresenta, como inconvenientes, a incerteza da brotao da gema e a quebra do enxerto logo aps a brotao, perodo em que a nova planta mais sensvel ao de ventos, animais, mquinas e outros agentes, fazendo com que haja necessidade de substituio dessa muda.

78 Enxertia de inverno - feita no perodo de repouso vegetativo, ou seja, nos meses de julho e agosto. O mtodo mais utilizado a garfagem, sendo bastante difundido na propagao da macieira, da pereira e da videira. Os ramos que fornecem as gemas devem ser formados no ltimo ciclo vegetativo e podem ser colhidos at 1 ms antes da enxertia, desde que embalados adequadamente e acondicionados em geladeira ou cmara fria, com temperatura de 2C a 4C. Para embalagem, normalmente so utilizados pano, papel ou serragem umedecidos. Contudo, acontece que a umidade pode favorecer o aparecimento de agentes patognicos, principalmente fungos, que atacam as gemas e comprometem a qualidade do material. Para evitar esse problema, possvel armazenar as gemas em embalagens plsticas (sacos ou lonas), bem vedadas e mantidas sob refrigerao. A enxertia de inverno pode ser feita no campo ou em galpes. No caso da enxertia ser feita no campo, os porta-enxertos j se encontram estabelecidos no viveiro, ao passo que na enxertia de galpo, tambm conhecida como enxertia de mesa, os porta-enxertos enraizados so enxertados e, ento, levados para o viveiro. A muda ficar no viveiro durante 1 ano, quando ser levada para o local definitivo. Formas especiais de enxertia Normalmente, a enxertia empregada para a produo de mudas. Entretanto, existem casos em que ela feita em plantas adultas, para corrigir algum tipo de problema que venha a se manifestar. Sobreenxertia - A sobreenxertia uma tcnica bastante utilizada, quando se quer substituir a cultivar-copa de plantas j formadas ou introduzir uma cultivar, para solucionar problemas de polinizao. Normalmente, feita numa ou em todas as pernadas principais, onde se elimina toda a copa por meio de uma poda drstica e enxerta-se a cultivar desejada. Devido grande diferena de dimetro existente entre enxerto e porta-enxerto, recomenda-se usar a enxertia de fenda cheia ou, no caso de a enxertia ser feita em ramos secundrios, o mtodo ingls complicado (Fig. 18). Interenxertia - Essa prtica usada, quando se deseja unir duas plantas que sabidamente so incompatveis, ou quando se pretende diminuir o vigor da cultivar copa, utilizando-se um porta-enxerto vigoroso. Consiste em interpor um fragmento (com 10 a 20 cm de comprimento) de uma planta entre o enxerto e o porta-enxerto. Assim, uma planta com interenxertia apresenta trs partes geneticamente diferentes (enxerto, interenxerto e porta-enxerto) e dois locais de enxertia (Fig. 19).

Fig. 18. Sobreenxertia em macieira.

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Na macieira, comum o uso dessa tcnica, sendo a enxertia ingls complicado a mais utilizada, em ora possa ser usada outra for ma ou mtodo para se fazer a interenxertia. Normalmente, as enxertias so feitas simultaneamente, o que permite a obteno da muda em apenas 1 ano. Subenxertia - A subenxertia utilizada quando se tm problemas no sistema radicular da planta, decorrentes do pequeno desenvolvimento das razes, de danos por doenas, pragas ou equipamentos agrcolas ou de qualquer outro fator. O processo consiste em se colocar, ao lado da planta j instalada, um ou mais porta-enxertos enraizados e enxert-los nessa planta (Fig. 20). Enxertia de ponte - A enxertia de ponte empregada para recuperar plantas que apresentam a casca danificada por doenas, roedores ou implementos agrcolas, mas sem apresentar problemas no sistema radicular. Antes de se fazer o enxerto de ponte, deve-se fazer uma limpeza da rea danificada da casca. Emprega-se a enxertia de encostia, usando-se ramos com 1 ano de idade, oriundos de preferncia da mesma planta (Fig. 21 e Fig. 22). O comprimento do ramo a ser usado como ponte depende do tamanho da rea danificada da casca, mas devem-se eliminar todas as gemas que brotarem do enxerto. Dependendo da extenso do dano, podem-se efetuar um ou vrios enxertos de ponte numa mesma planta.

80 Propagao Vegetativa por Mergulhia Introduo A mergulhia um processo de multiplicao assexuada, em que a planta a ser originada s destacada da planta-me aps ter formado seu prprio sistema radicular. Essa tcnica recomendada para espcies com dificuldades de multiplicao por outros mtodos c10nais ou mesmo por sementes. Baseia-se no princpio de que, pelo sombreamento parcial ou total do ramo ou de outra parte da planta, so proporcionadas condies de umidade, aerao e ausncia de luz, que favorecem a emisso de razes (MIELKE et aI., 1994). Algumas tcnicas de condicionamento da planta, tais como o anelamento ou a dobra do ramo no local da mergulhia, provocam a reduo da velocidade de transporte de carboidratos e fitorreguladores, aumentando as possibilidades de formao de razes no local. A mergulhia feita na primavera ou no fim do vero, ou seja, durante ou no final da estao de crescimento das plantas. Na propagao comercial de plantas frutferas, a mergulhia um processo bastante utilizado na obteno de porta-enxertos de macieira, pereira e marmeleiro, ainda que possa ser usada, tambm, em casos onde as plantas apresentam dificuldade de formar razes nas estacas, ou no possam ser propagadas por outros mtodos. A mergulhia um processo trabalhoso, que exige grande quantidade de mo-deobra, tendo por isso um custo mais elevado do que os outros mtodos de multiplicao vegetativa. Existem espcies, como a framboeseira e a amoreira, nas quais a mergulhia ocorre naturalmente, sendo, por isso, a principal forma de propagao. Fatores que afetam a regenerao das plantas Geralmente, os fatores que afetam a formao de razes na mergulhia so os mesmos da estaquia, diferindo apenas em ordem de importncia. Tal fato devido grande semelhana entre esses mtodos de propagao. Para que ocorra a formao de razes numa determinada parte do ramo ou da planta, necessrio que haja ausncia de luz no perodo de enraizamento. A ausncia de luz provoca o estiolamento do ramo, com acmulo de auxinas e diminuio da lignina e dos compostos fenlicos (FACHINELLO et ai., 1995). As possibilidades de enraizamento so maiores, quando o estiolamento feito em ramos ou partes jovens das plantas. A seguir, sero apresentados os fatores mais importantes: Substrato necessrio que o substrato apresente uma textura leve, com umidade, aerao e temperatura adequadas para a formao das razes. Nutrio Como a planta a ser propagada por mergulhia permanece ligada planta-me, ocorre um fluxo contnuo de gua e de nutrientes, e essa nutrio equilibrada da matriz favorecer a formao de razes. Fisiologia A mergulhia deve ser feita, quando a planta se encontra em fase de crescimento vegetativo, principalmente no final desse perodo, quando ocorre um acmulo de carboidratos e outras substncias importantes para a emisso de razes.

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Idade do ramo Ramos mais jovens geralmente enrazam com maior facilidade do que ramos mais velhos. A poda drstica dos ramos, antes da mergulhia, uma prtica muito utilizada para provocar a emisso de novas brotaes que, assim como no processo da estaquia, tendem a apresentar melhor enraizamento. Fitorreguladores A aplicao de substncias estimuladoras do enraizamento, como o AIS (cido indolbutrico), poder favorecer a formao de razes. Essas substncias so utilizadas, principalmente, na mergulhia area (alporquial, pela facilidade de aplicao. Trabalhos realizados por Castro e Silveira (2003l, no final do inverno, com plantas de pessegueiro e ameixeira por meio de mergulhia area, anelando os ramos e, posteriormente, aplicando uma soluo de AIB na concentrao de 4.000 mg L-l, proporcionaram percentuais prximos a 100%, tanto no enraizamento quanto na sobrevivncia das mudas. Anelamento o anelamento uma prtica que provoca uma interrupo no fluxo de substncias nutritivas elaboradas no caule, produzindo o acmulo de carboidratos, auxinas e outros fatores do crescimento nessa regio, favorecendo o enraizamento. O anelamento pode ser feito, retirando-se um anel de casca com 0,8 a 1,0 cm de largura, ou amarrando-se um arame ao redor do ramo e, em seguida, cobrindo-se o local com substrato adequado. Princpios anatmicos e fisiolgicos Os princpios anatmicos e fisiolgicos, relacionados formao de razes na mergulhia, so semelhantes aos da estaquia, apresentados no Captulo 4. Classificao Existem muitas formas de se executar o processo da mergulhia, mas todas obedecem ao princpio da cobertura parcial do ramo, ou outra parte da planta com solo ou outro substrato com a mesma finalidade. A mergulhia pode ser feita no solo ou fora dele, e classificada segundo o esquema apresentado na Fig. 1.

Mergulhia no solo Mergulhia simples normal - Consiste em curvar-se um ramo, cobrindo uma parte com solo, deixando sua extremidade descoberta e em posio vertical (Fig. 2). Para que o ramo no seja deslocado pela ao do vento ou de outros agentes, devese fix-lo ao solo, pois o movimento do ramo poder danificar as razes, prejudicando o

82 enraizamento. Assim que o ramo formar razes suficientes para sua manuteno, devese deslig-lo da planta-me. Mergulhia simples de ponta semelhante mergulhia simples normal, mas nesse caso, a ponta ou coberta com solo. Ocorre inverso de polaridade das gemas, que brotaro e formaro uma nova planta (Fig. 3). Do mesmo modo que na anterior, aps a formao do sistema radicular, deve-se separar a muda da planta-me. Mergulhia contnua chinesa Consiste em curvar-se um ramo, cobrindo com solo a maior extenso possvel do mesmo, de modo que apenas sua extremidade fique descoberta. Com a cobertura do ramo, as gemas dispostas em sua extenso permanecem sob o solo e emitiro brotaes enraizadas (Fig. 4). Teoricamente, poder-se-ia obter um numero e plantas igual ao numero e gemas enterradas, mas isso dificilmente ocorre devido permanncia de algumas gemas no estado de dormncia.

Mergulhia contnua serpenteada - semelhante mergulhia contnua chinesa, mas a cobertura feita somente em algumas partes do ramo (e no em toda a sua extenso), ou seja, cobre-se uma parte com solo e deixa-se outra descoberta (Fig. 5). A mergulhia contnua, tanto chinesa como ser penteada, permite obter maior nmero de plantas por ramo, se comparada com a mergulhia simples. Quando as novas brotaes emitirem razes, os ramos devem ser desligados da planta-me.

Mergulhia de cepa - Consiste no plantio de uma muda oriunda de semente ou de

83 estaca e, antes do incio da estao de crescimento, faz-se uma poda drstica, para favorecer a emisso de inmeras brotaes. Quando essas brotaes atingirem 10 a 15 cm de altura, faz-se a primeira amontoa com terra ou outro substrato. A segunda amontoa feita com 20 a 25 cm e a terceira, quando as brotaes atingirem em torno de 40 cm (Fig. 6a). A amontoa deve ser feita na primavera, de modo que se forme um camalho com 25 a 30 cm de altura, ao redor dos ramos, para possibilitar um bom desenvolvimento do sistema radicular nas brotaes (Fig. 6b e Fig. 6c). Em muitos casos, deve-se fazer amontoas posteriores, para manuteno da altura desejada. A mergulhia de cepa o principal mtodo de propagao de porta enxertos de macieira e de pereira, e s devem ser utilizadas espcies capazes de emitir gemas adventcias ou dormentes, pois com a poda drstica, elimina-se toda a parte area da planta.

A separao das brotaes enraizadas feita no inverno seguinte, devendo-se desmanchar o camalho com cuidado, para no danificar o sistema radicular. O corte deve ser feito o mais prximo possvel da planta me, que deve ser mantida descoberta para emisso de novas brotaes e to logo essas novas brotaes atinjam 15 cm de comprimento, o processo repetido.

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Propagao Vegetativa por Estruturas Especializadas

Introduo Estruturas especializadas so caules, folhas ou razes modificadas que funcionam como rgos de reserva de alimentos, podendo tambm ser utilizados na propagao vegetativa das plantas. Muitas vezes, esses rgos possibilitam a sobrevivncia das plantas em condies adversas. Em fruticultura, a propagao das plantas por meio de estruturas especializadas usada em algumas espcies, como, por exemplo, o morangueiro, a bananeira, o abacaxizeiro, a framboeseira e a amoreira-preta (FACHINELLO et ai., 1995). Tipos de estruturas Embora existam vrios tipos de estruturas especializadas que podem ser utilizadas na propagao de plantas, no caso das plantas frutferas, as principais estruturas utilizadas so: estoles, rebentos e rizomas. Estoles So caules areos especializados, mais ou menos horizontais, que surgem da axila das folhas, na base ou na coroa das plantas que enrazam e formam uma nova planta. Geralmente, primeiro ocorre a formao de uma pequena planta no segundo n do estolo e s depois que formado o sistema radicular. A formao de estoles geralmente determinada pelo fotoperodo, sendo iniciada em dias com durao de 12 horas de luz solar ou mais, dependendo da sensibilidade da espcie ou cultivar. Um exemplo caracterstico de planta que pode ser propagada por estoles o morangueiro, no qual o nmero de mudas obtidas em cada planta-me dependente da cultivar (Fig. 1).

Fig. 1. Estoles utilizados na propagao do morangueiro. Rebentos So brotaes que surgem a partir de razes, do caule ou dos prprios frutos que, quando enraizados, podem ser utilizados na produo de novas plantas. A framboeseira, a amoreira-preta e o abacaxizeiro so facilmente propagados por rebentos (Fig. 2 e 3).

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Fig. 2. Rebentos utilizados na propagao da amoreira-preta No caso do abacaxizeiro, as mudas produzidas por essas estruturas recebem denominaes dependendo da parte da planta da qual se originam, Meletti (2000) conforme o que se segue: Coroa - Muda originada de um aglomerado de folhas modificadas, localizadas no pice do abacaxi. Apresenta um peso reduzido (200 a 350 g), boa uniformidade, proporciona ciclo mais longo (22 a 24 meses) e no produz frutos tem pores. Normalmente, esse tipo de muda no est disponvel aos produtores, j que os frutos para consumo in natura so comercializados com a coroa, a no ser quando os frutos so destinados s indstrias. Filhote - Muda originria do pednculo do fruto e, por isso, tem a parte basal curva. Apresenta tamanho uniforme (200 a 500 g), raramente produz frutos tem pores e apresenta ciclo um pouco menor (18 a 22 meses) do que as mudas de coroa. Esse tipo de estrutura o mais abundante, na produo de mudas, e o nmero de filhotes varivel com a cultivar. No caso da cultivar Prola, pode-se obter de 5 a 9 filhotes por planta. Rebentes - So mudas originrias a partir de brotaes de gemas do caule localizadas nas bainhas foliares. Apresentam tamanho heterogneo (400 a 1.000 g), frutos tem pores e ciclo mais curto (inferior a 18 meses). Embora exista um grande nmero de gemas, a dominncia apical faz com que apenas 1 ou 2 dessas brotaes se desenvolvam e possam ser utilizadas como mudas. A emisso de rebentes pode ser estimulada, artificialmente, pela eliminao do meristema apical ou tecido geratriz das folhas do abacaxizeiro, pela quebra da inflorescncia ou do fruto em desenvolvimento, e pela poda das folhas e do pednculo, aps a colheita do fruto. Para aumentar o rendimento desse tipo de muda, deve-se colher, tambm, os rebentes, to logo atinjam o tamanho adequado para plantio, ocorrendo a produo de novas mudas.

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Fig. 3. Diferentes tipos de mudas de abacaxizeiro. A) Coroa; B) Filhote; C) Filhoterebento; D) Rebento. O nmero de rebentes pode variar com a cultivar, com a poca de plantio, com a idade da planta na induo floral, com o tamanho da muda plantada, e com a densidade de plantio e de adubao. Quando os rebentes esto inseridos na regio de conexo do talo com o pednculo, podem ser chamados de filhotes-rebentes. Independentemente da parte do abacaxizeiro a ser utilizada, aps a coleta, as mudas so expostas ao solo por 1 ou 2 semanas, num processo denominado cura (Fig. 4), que tem por finalidades acelerar a cicatrizao na regio onde a mesma foi destacada da planta-me, reduzir a quantidade de gua para evitar o apodrecimento, reduzir pragas e evitar fusariose, eliminando-se as mudas com sintomas. Rizomas So caules modificados de crescimento normalmente subterrneo, e que apresentam capacidade de armazenar reservas. As mudas do tipo rizoma so importantes para a propagao da bananeira e, a exemplo do abacaxizeiro, recebem denominaes diferentes de acordo com o tamanho e a forma, o que tem proporcionado algumas confuses, pela adoo de diferentes critrios regionais na separao dos tipos. As denominaes mais comuns dos tipos de mudas originadas de rizomas na cultura da bananeira, segundo Teixeira (2000), so as seguintes: Chifrinho - Mudas medindo 20 a 30 cm de altura, com 2 a 3 meses de idade, e peso em torno de 1 a 2 kg, sem folhas. Chifre - Mudas medindo 50 a 80 cm de altura, com folhas rudimentares na extremidade superior.

88 Chifro - Mudas medindo 6 a 9 meses de idade, com folhas estreitas e peso mdio de 2 a 3 kg. Muda alta - Mudas enraizadas, com folhas inteiras ou definitivas pesando 5 kg ou mais. Esse tipo de muda j constitui uma planta jovem.

Fig. 4. Processo de cura das mudas de abacaxizeiro.

Guarda-chuva ou mudas d'gua - Brotos com pseudocaule fino, folhas largas e rizoma pouco desenvolvido. Normalmente, no so utilizadas, por serem pouco vigorosas, devido menor capacidade de armazenamento de reservas. Alm dos rizomas inteiros, possvel a utilizao de pedaos de rizomas contendo algumas gemas, originados de plantas que j produziram frutos, ou de rebentos. A utilizao de rizomas para propagao da bananeira tem sido um dos grandes problemas da cultura, uma vez que esse tipo de estrutura pode servir como fonte de disseminao de pragas e doenas, principalmente de nematides, de fusariose e de brocas, que podem comprometer seriamente a vida til do pomar. Alm disso, normalmente as mudas so retiradas de pomares comerciais, onde a ocorrncia desses problemas bastante comum (Fig. 5).

Fig. 5. Mudas do tipo rizoma de diferentes tamanhos

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Micropropagao de Plantas Frutferas

Introduo Entre as diversas formas de propagao de plantas frutferas, existe uma que utiliza pequenas partes ou clulas isoladas das mesmas, cultivando-as de forma controlada, ou seja, fornecendo a esses tecidos ou clulas, os elementos responsveis pelo controle do crescimento e desenvolvimento vegetal. O desenvolvimento de uma planta depende da interao de fatores internos, como as substncias orgnicas, os hormnios, que desempenham importante funo na regulao do crescimento, e externos como a luz, a temperatura e o fotoperodo. Na cultura de tecidos vegetais, as correlaes existentes entre os diversos rgos de uma planta intacta so rompidas, sendo necessrio o fornecimento dos fatores que regulem o crescimento e o desenvolvimento: Na micropropagao, feito o cultivo de plantas ou partes de plantas, tambm chamados de explantes, em meio de cultura e ambiente assptico, onde se controlam a temperatura, o fotoperodo, a umidade e a irradincia, em local apropriado, chamado de sala de crescimento. Essa tcnica, tambm conhecida como propagao in vitro, multiplica plantas dentro de frascos de vidro (resultando da o termo in vitro), e a tcnica de maior aplicao prtica dentro da biotecnologia vegetal, sendo utilizada na produo comercial de plantas. O aspecto mais interessante da propagao in vitro est justamente no grau de controle que pode ser exercido sobre, praticamente, todos os estgios de desenvolvimento, do estabelecimento at a multiplicao e enraizamento da planta. Vantagens e desvantagens da micropropagao Conseqentemente, por meio da micropropagao, possvel exercer o controle sobre a produo das mudas, produzindo-as durante todo o ano, obtendo-se um nmero elevado de indivduos, geneticamente idnticos, a partir de uma planta selecionada (c1onagem) e obtendo-se plantas com elevada qualidade sanitria. Na cultura de tecidos, a micropropagao a modalidade que mais se tem difundido e encontrado aplicaes prticas comprovadas, e constitui-se num mtodo de produo de mudas que apresenta vrias vantagens. Entre essas vantagens, a possibilidade de, a partir de um explante inicial, obter-se: Vrias plantas, independentemente das estaes do ano. Reduo do tempo necessrio propagao da espcie. Melhores condies sanitrias por meio do cultivo de meristemas previamente tratados por termoterapia, para eliminao de doenas. Reproduo do gentipo da planta-me, com fidelidade na multiplicao. Propagao vegetativa de espcies vegetais difceis de serem propagadas por outros mtodos. Entretanto, pode acarretar limitaes ao seu emprego em nvel comercial, tais como: Variao somaclonal. Perda de caracteres devido intensa multiplicao. Elevado custo para obteno da muda.

90 Dificuldades tcnicas de aclimatizao. Elevado perodo de juvenilidade aps plantio no campo, entre outras. Em alguns casos, a multiplicao in vitro pode ser obtida em larga escala, resultando na instalao de verdadeiras biofbricas comerciais, baseadas no princpio da linha de produo, e algumas vezes automatizadas. No Brasil, onde a aplicao comercial da micropropagao relativamente recente, existem diversos grupos trabalhando em instituies pblicas de pesquisa e em universidades pblicas e privadas. Entretanto, at o momento, poucas so as empresas privadas que atuam na rea. Considerando-se somente essas possibilidades, a micropropagao torna-se um instrumento extremamente interessante no setor de produo de mudas frutferas, j que a tendncia da fruticultura moderna est voltada para os plantios adensados (que necessitam de grande nmero de mudas por rea) e do uso de mudas certificadas. Metodologia geral Um aspecto fundamental para se fazer a micropropagao de uma frutfera o domnio da tecnologia de propagao em laboratrio, chamada de protocolo, resultado de estudos realizados com os fatores que afetam o crescimento e o desenvolvimento das plantas in vitro, que compreende as seguintes fases: Estabelecimento das culturas in vitro. Multiplicao in vitro. Enraizamento in vitro. Aclimatizao. Estabelecimento das culturas in vitro Para iniciar a micropropagao de uma frutfera, necessrio estabelecer a cultura in vitro, isto , obter as plantas livres de contaminastes visveis e suficientemente adaptadas s condies in vitro para que, numa fase seguinte, possam ser multiplicadas. Assim, para o estabelecimento dos cultivos in vitro, a escolha do explante apropriado constitui o primeiro passo. O explante qualquer segmento de tecido oriundo de uma planta, para iniciar um cultivo in vitro, podendo ser uma gema axilar ou segmento nodal, pice caulinar ou radicular, sendo que esses contm o meristema ou tecidos diferenciados, como as folhas ou pedaos de uma folha, entren, etc. (Fig. 1). Na seleo dos explantes, devem ser considerados aspectos como o nvel de diferenciao do tecido utilizado e a finalidade da micropropagao. Teoricamente, considerando-se a totipotncia das clulas vegetais, qualquer tecido pode ser utilizado como explante. Quando os explantes so de pequenas dimenses (cultivo de meristemas), a multiplicao geralmente visa eliminar viroses. o cultivo de pices de maiores dimenses empregado na multiplicao vegetativa, quando a infeco por vrus no for um problema muito severo. Na maioria dos trabalhos envolvendo micropropagao de frutferas, os explantes escol h idos geralmente so obtidos de gemas apicais ou axilares, mas h variao, conforme a espcie ou a cultivar. No caso do mirtilo, os melhores explantes so os originados do segmento nodal, contendo a gema axilar. Para a pereira, cv. Carrick, podem-se utilizar gemas axilares ou meristemas apicais e laterais, enquanto para a cv. Garber, o melhor explante o meristema. Geralmente, quando a finalidade da micropropagao a c10nagem de cultivares superiores, ou seja, a produo de mudas, utilizam-se como explantes preferenciais gemas apicais ou axilares, pois essas gemas possuem maior nmero de clulas

91 meristemticas e so geneticamente mais estveis.

Fig. 1. Explantes utilizados no incio de cultivos i n vitro de espcies frutferas: A) pice caulinar ou gema apical; B) Gema axilar; C) Segmento nodal; e D) Entren. Quando o objetivo da micropropagao a obteno de plantas para serem utilizadas em estratgias de melhoramento gentico, podem se utilizar tecidos diferenciados como folhas e entrens, que sofrero uma dediferenciao por meio de tratamentos adequados. O estabelecimento in vitro, principalmente no caso de espcies lenhosas, como a maioria das frutferas, apresenta dois problemas principais: a contaminao e a oxidao. A contaminao depende do material vegetal utilizado no isolamento dos explantes, que pode ser oriundo de casa de vegetao ou do campo, e do processo de desinfestao. A manuteno da planta-matriz em casa de vegetao permite que as brotaes novas se desenvolvam em ambiente protegido de intempries e insetos, que provocam ferimentos e permitem a entrada de microrganismos, o que resultar, posteriormente, na obteno de explantes com menor incidncia de fungos e bactrias. Muitas vezes, embora esses contaminantes no sejam visveis nas plantas adultas, quando em contato com o meio de cultura, com temperatura adequada e ambiente estril, onde no sofrero competio, eles se proliferam, rapidamente, causando a morte do explante e prejudicando o cultivo in vitro desse material. A planta de onde ser retirado o explante deve ser bem nutrida, livre de contaminantes e devidamente identificada como a cultivar que se deseja micropropagar (Fig. 2).

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Fig. 2. Plantas-matrizes: A) Macieira cv. Mastergala; e B) Marmeleiro cv. Me, utilizadas como fonte de explantes para o incio de cultivos in vitro. Aps a seleo e os devidos tratamentos fitossanitrios na frutfera, faz-se a coleta do ramo que fornecer os explantes. Em seguida, esse material levado ao laboratrio, onde sofrer uma desinfestao. Na desinfestao dos explantes, so utilizadas vrias substncias com ao germicida. As mais comuns so o etanol - que tambm possui a propriedade de remover a cera dos explantes, aumentar a penetrao dos outros germicidas, geralmente utilizado a 70% e 80% - e os compostos base de cloro (hipoclorito de sdio e hipoclorito de clcio) nas concentraes de 0,5% a 2% de cloro ativo. A ao germicida das solues de hipoclorito devida sua alta capacidade oxidante, que destri a atividade das protenas celulares. As combinaes dos princpios ativos desinfetantes e os tempos de exposio variam muito. Para o estabelecimento in vitro de mirtilo, a desinfestao com hipoclorito de sdio a 1,5% de cloro ativo, durante 20 minutos, foi eficiente. Na desinfestao de meristemas de marmeleiro cv. Me, o hipoclorito de sdio a 1,5%, com tempos de exposio entre 10 e 20 minutos, propiciou bons resultados. Em Prunus cv. Mr. S. 2/5, no foram verificadas diferenas, utilizando-se 0,5% e 2,0% de hipoclorito de sdio, sendo que esse desinfestante mostrou-se superior ao hipoclorito de clcio. A oxidao que ocorre no processo de isolamento de explantes de espcies lenhosas um problema limitante. Essa oxidao ocorre em funo da liberao de compostos fenlicos pelas clulas danificadas com o corte, que so oxidados pelas enzimas polifenases, produzindo substncias txicas. Essas enzimas, alm de escurecer o meio de cultura, inibem o crescimento dos explantes e podem causar a morte deles (Fig. 3).

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Fig. 3 . Escurecimento do meio de cultura por oxidao dos compostos fenlicos liberados pelos explantes de macieira in vitro. Para reduzir a oxidao, as possibilidades tcnicas includas so, entre outras: A lavagem dos explantes coletados em gua corrente, antes da desinfestao, auxiliando a lixiviao dos compostos fenlicos. A utilizao de substncias antioxidantes no meio de cultura ou na forma de banho (cido ascrbico, cido ctrico, PVP polivinilpirrolidona, e carvo ativado), A incubao inicial dos explantes no escuro ou sob intensidade luminosa reduzida. A utilizao de meios bsicos mais diludos e a reduo de concentraes de fitorreguladores, principalmente citocininas. A transferncia freqente dos explantes para novo meio ou para locais diferentes no meio. Esses explantes, depois de selecionados e desinfestados, sero colocados sob condies adequadas in vitro (meio de cultura, temperatura, fotoperodo, etc.), que proporcionaro seu crescimento. As condies de estabelecimento de cada espcie ou cultivar podem variar, em relao s necessidades de fatores endgenos e exgenos, que controlam seu crescimento e desenvolvimento. Aps o estabelecimento das plantas in vitro, a partir dos explantes (Fig. 4), a etapa seguinte a de multiplicar o material que se deseja propagar.

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Fig. 4. Plantas de macieira estabelecidas in vitro a partir de segmentos nodais. Multiplicao in vitro Estabelecida a espcie vegetal in vitro, inicia-se a multiplicao, quando as brotaes so cultivadas com a finalidade de aumentar o seu nmero (Fig. 5).

Fig. 5. Multiplicao in vitro de espcies frutferas A) Marmeleiro e B) Macieira, respectivamente. Os subcultivos so feitos at obter-se o nmero de brotaes desejadas que sero enraizadas. Durante a multiplicao, um aspecto importante a qualidade e a homogeneidade das partes areas produzidas, que podem determinar o sucesso na fase seguinte de enraizamento. As condies controladas, dadas em laboratrio para os explantes, so determinantes para o crescimento e o desenvolvimento das brotaes. O controle feito por meio de cultura e das condies do ambiente da sala de crescimento. Tambm relevante o nmero de subcultivos aps o incio do cultivo in vitro, que deve ser o menor possvel. Geraes subseqentes em grande nmero podem acarretar variabilidade gentica dos explantes e a perda de qualidade das mudas. No meio de cultura, alm das formulaes bsicas dos meios, normalmente utilizadas, como o MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962), WPM - Wood Plant Medium (LLOYD; MCCOWN, 1980), entre outras, o uso de fitorreguladores imprescindvel para que se obtenha sucesso na propagao de culturas in vitro. O tipo de citocinina e sua concentrao so os fatores que mais influenciam o

95 sucesso da multiplicao in vitro, sendo indispensveis para auxiliar a superao da dominncia apical e a induo de proliferao de gemas axilares. Outros tratamentos podem ser dados aos explantes, para estimular maior proliferao, como por exemplo, a exciso do pice e o cultivo na orientao horizontal. Na multiplicao in vitro do porta-enxerto de macieira cv. Marubakaido, o efeito da dominncia apical pode ser superado colocando se os explantes na orientao horizontal no meio de cultura, obtendo-se assim, maior nmero de brotaes e de gemas por explante, e maior taxa de multiplicao. Um adequado balano entre auxinas e citocininas estabelece um eficiente controle no crescimento e na diferenciao das culturas in vitro. Concentraes altas de auxinas favorecem a iniciao radicular, enquanto reprimem a formao de brotos, e concentraes altas de citocininas induzem a iniciao de brotos e suprimem o enraizamento. As concentraes de citocininas para multiplicao esto entre 0,1 a 5/0 mg L-l, e entre as citocininas comercialmente disponveis, a benzilaminopurina (BAP), geralmente apresenta melhores resultados. O thidiazuron (TDZ), um composto do grupo das fenilurias, em muitos casos tem apresentado resultados superiores, em relao s outras citocininas, na induo e na multiplicao de brotos de vrias espcies. Na multiplicao in vitro de macieira cv. Fuji, o TDZ e o BAP apresentaram resultados semelhantes para a taxa de multiplicao. Entretanto, para o nmero mdio de brotaes, o TDZ foi superior, enquanto para o comprimento da brotao mais desenvolvida, o BAP foi superior. Apesar de no promoverem a proliferao de brotaes axilares, as auxinas podem incrementar o crescimento da cultura. No meio de multiplicao, uma das possveis aes da auxina seria a anulao do efeito supressivo das altas concentraes de citocinina sobre a elongao das brotaes axilares, restaurando o crescimento normal das mesmas. Durante a multiplicao, podem-se utilizar auxinas que, com as citocininas, so responsveis pela diferenciao dos tecidos meristemticos. Esses fitorreguladores so comumente utilizados em concentraes baixas nessa fase da micropropagao. Outro grupo de reguladores de crescimento, que pode ser utilizado nessa fase, o das giberelinas, as responsveis pelo alongamento das brotaes produzidas. Enraizamento in vitro Aps a multiplicao, a etapa seguinte a rizognese, cujo propsito a formao de razes adventcias nas partes areas, obtidas no estgio de multiplicao, que permite a constituio de plantas completas (Fig. 6), para posterior aclimatizao s condies ex vitro.

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Fig. 6. Plantas de Prunus CV. Mr. S. 1/8 enraizadas in vitro e aparncia do sistema radicular formado. O enraizamento de espcies herbceas geralmente fcil, mas no caso das espcies lenhosas, que inclui a maioria das frutferas, a etapa mais difcil. Tipos e concentraes de auxinas so as variveis que, geralmente, mais influenciam o enraizamento, e variam conforme a espcie e a cultivar, devendo-se ajust-las para cada caso, obtendo-se assim, sucesso no enraizamento. Os tipos mais utilizados de auxina so o AIB (cido indolbutrico), o ANA (cido naftalenactico) e o AIA (cido indolactico). A emisso de razes dos explantes de amoreira-preta cv. bano foi obtida com a adio de ANA ao meio de cultura. Os melhores ndices de enraizamento do porta-enxerto de macieira cv. Marubakaido foram obtidos utilizando-se 0,1 mg L- l de AIB no meio de cultura. Na macieira cv. Fred Hough, o melhor enraizamento foi obtido com a adio de 0,6 mg L-l de AIB ao meio de cultura MS, com a concentrao de sais reduzida a 50%. O AIB ou o AIA, nas concentraes de 0,2 ou 1 mg L-l , foram adequados para obter-se 70% a 100% de enraizamento na macieira cv. Northern Spy. Com a utilizao do ANA, para essa mesma cultivar, observou-se a formao de calos, com razes surgindo a partir destes, mas no apresentando conexo vascular com a base do broto. As melhores percentagens de enraizamento dos porta-enxertos de pereira Pyrus calleryana D-6 e Old Home x Farmingdale 9 foram obtidas, respectivamente, com 1,2 mg L- 1 de ANA e 0,3 mg L-l de AIB, no meio de cultura ou com a imerso da base dos explantes, de ambos porta-enxertos, em 100 mg L' de ANA. Depois, devem ser transferidos para meio de cultura sem regulador de crescimento. O custo da propagao in vitro pode ser diminudo, promovendo se o enraizamento da planta em condies ex vitro, alm de melhorar a qualidade do sistema radicular formado na planta. No enraizamento ex vitro, as brotaes oriundas da multiplicao in vitro so retiradas dos frascos, o meio de cultura aderido lavado, e ento essas brotaes so manipuladas como microestacas, podendo, em alguns casos e de acordo com a necessidade da espcie, tratar-se a base da microestaca com solues de auxinas em talco ou gua, antes da introduo no substrato, para acelerar o enraizamento. Materiais como vermiculita, areia, espuma fenlica, entre outros, podem ser teis como substrato para o enraizamento ex vitro. Do ponto de vista econmico, isso representa uma repicagem que eliminada, economia de espao na sala de crescimento, energia eltrica e meio de cultura. Em termos de qualidade, a regenerao de razes, . diretamente no substrato, tende a

97 produzir um sistema radicular mais funcional e completo. Aclimatizao Nessa fase, as brotaes enraizadas so transferidas para telado ou casa de vegetao, onde precisaro se readaptar s novas condies ambientais. Geralmente, os organismos vivos conseguem regular sua atividade de acordo com o ambiente a que esto submetidos, e essa regulao que torna a aclimatizao possvel. Na aclimatizao, as plantas micropropagadas passam de uma situao, onde os fatores responsveis pelo crescimento e desenvolvimento so controlados, para uma situao de ambiente natural e autotrfico. Essas condies ambientais podem causar estresses, alm de favorecer o ataque de microrganismos e de pragas. As plantas provenientes da cultura in vitro so sensveis e tenras, pois no desenvolvem a cutcula, resultando em alta evapotranspirao, e sua parte celular no apresenta rigidez suficiente para sustentao. As folhas so delgadas e suaves, fotossinteticamente inativas, deixando a planta em franco heterotrofismo. Os estmatos no operam eficientemente, provocando, assim, estresses nas primeiras horas aps sarem dos frascos de vidro. A habilidade de fazer ajustes por meio de mudanas no seu padro de crescimento, devido ao ambiente externo, que vai determinar o sucesso na obteno de plantas micropropagadas. Geralmente, um maior controle nas condies ambientais, como a utilizao de um substrato adequado, manuteno de umidade relativa alta, sombreamento das plantas, controle fitossanitrio e nutrio adequada so suficientes para a sobrevivncia e o desenvolvimento das plantas micropropagadas, que esto sendo aclimatizadas. Na adimatizao do porta-enxerto de macieira cv. Marubakaido, a vermiculita em caixas fechadas com vidro proporcionou maior sobrevivncia (90%). Para a amoreira-preta aclimatizada em vasos na casa de vegetao, os substratos solo + areia + esterco, compostagem orgnica, composto orgnico comercial, e vermiculita em flocos mdios no influenciaram a sobrevivncia das plantas. Deve-se levar em considerao, que as espcies mostram comportamento diferente quanto capacidade de adimatizao. O sucesso na micropropagao de frutferas depende de todas as etapas pelas quais os explantes so submetidos, com a obteno final de plantas desenvolvidas e adaptadas. Cada etapa do processo de micropropagao possui uma forte influncia no resultado final, devendo-se desenvolver metodologias adequadas aos diferentes gentipos utilizados. Aplicaes da micropropagao em plantas frutferas limpeza clonal Por serem propagadas vegetativamente, as frutferas podem acumular durante o perodo em que so multiplicadas, uma quantidade bastante grande de viroses. A utilizao da micropropagao como instrumento para a limpeza da plantamatriz fornecedora de estruturas utilizadas na produo de mudas, como borbulhas e estacas, de grande importncia no sistema produtivo. A propagao vegetativa de plantas constitui-se numa forma eficiente de perpetuao e disseminao de vrus. Isso se deve ao fato de que a maioria das viroses apresenta carter sistmico e o vrus estar presente em todas as partes da planta. Alm disso, a quase totalidade das frutferas arbreas ou arbustivas so propagadas vegetativamente. Assim, quando partes de plantas, obtidas de hospedeiros

98 infectados, so utilizadas para plantio, levam, consigo, os vrus presentes na plantame. Ao contrrio das doenas causadas por fungos e bactrias, que podem ser erradicadas das culturas por tratamentos qumicos, a alternativa mais vivel para obteno de clones sadios (livres das principais viroses), beneficiando a produtividade e a qualidade dos frutos, tem sido a cultura de meristemas ou a termoterapia. Na cultura de meristemas, aqueles com primrdios foliares subjacentes so retirados de gemas vegetativas, terminais ou axilares que, em seguida, so cultivados em meio de cultura, contendo reguladores de crescimento. Ento, se diferenciaro em brotaes, que sero multiplicadas, enraizadas e transferidas para condies de casa de vegetao, onde devero ser indexadas, para demonstrar se esto ou no, infectadas por vrus. O tratamento de termoterapia feito antes da cultura de meristemas, submetendose a planta infectada a temperaturas ao redor de 37C por . um tempo determinado. Normalmente, as plantas devem permanecer por um perodo mnimo de 20 dias, mas preferivelmente, acima de 40 dias expostas a temperaturas superiores aos 30C, para inativar o vrus e, ao mesmo tempo, possibilitar o crescimento das brotaes da planta-matriz. Aps esse tratamento, o explante poder ser excisado das brotaes e cultivado in vitro, ou ento, as brotaes podero ser coletadas e, depois de enraizadas, servir de fonte de material vegetal livre de vrus. Meristemas retirados de plantas submetidas a termoterapia geralmente so livres de viroses que no so eliminadas somente pela cultura de meristemas. A percentagem de inativao de viroses pela termoterapia, como os vrus ACLSV (apple chlorotic leaf spot trichovirus), ApMV (apple mosaic ilarvirus), ASPV (apple stem pitting virus), Rw (rubbery wood agent) e Sgv (apple stem grooving capiflovirus), em macieira e pereira pode variar de 74% a 100% dependendo do vrus. Microenxertia A cultura de meristemas tem sido usada, com sucesso, em espcies herbceas, para multiplicao vegetativa e limpeza dona!. Entretanto, para frutferas e essncias florestais, essa metodologia tem limitaes, pois essas espcies apresentam dificuldade de regenerao a partir de pices caulinares. Como uma alternativa, para superar as dificuldades encontradas na regenerao do meristema, desenvolveu-se o mtodo da microenxertia. A tcnica efetuada in vitro, em condies de laboratrio, e consiste, basicamente, em colocar uma pequena poro retirada do pice caulinar, contendo o meristema e 2 ou 3 primrdios foliares, numa inciso em T invertido, feita num caule estiolado do porta-enxerto. Os porta-enxertos so obtidos a partir de sementes desinfestadas e germinadas in vitro. No pessegueiro, quando a plntula (porta-enxerto) alcana cerca de 5 cm, feita a microenxertia. Aps o pegamento, e quando a combinao enxertada alcanar cerca de 10 cm, faz-se a repicagem, para condies naturais. A microenxertia vem sendo utilizada em diversas espcies frutferas, entre as quais a macieira, a cerejeira, a videira, o damasqueiro, o pessegueiro, o abacateiro, a ameixeira japonesa (Prunus salicina Lind.) e a amendoeira (P. amigdalus Batsch), apesar de, inicialmente, ter sido criada para citros. Alm de ser utilizada na limpeza clonal, atualmente a tcnica de microenxertia vem sendo usada nos estudos sobre fisiologia, histologia e incompatibilidade entre copa/porta-enxerto e em procedimentos quarentenrios.

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Propagao rpida (multiplicao massal) No melhoramento de plantas propagadas vegetativamente, uma vez confirmada a superioridade de indivduos selecionados, a cultura de tecidos pode ser empregada na micropropagao dessas plantas em escala comercial. Os mtodos de propagao in vitro so de grande importncia na fruticultura, tendo em vista a grande necessidade de mudas para abastecer a demanda de mercado, sendo eficientes na multiplicao tanto de plantas matrizes quanto de porta-enxertos. Alm disso, oferecem, tambm, maior segurana, com relao ao aspecto fitossanitrio da muda produzida. Um dos objetivos da micropropagao a maximizao da multiplicao de gemas, originando um grande nmero de brotaes, que depois de enraizadas so transferidas para condies de casa de vegetao. Melhoramento gentico No melhoramento gentico de plantas, as tcnicas de cultura de tecidos so utilizadas de distintas formas numa ou outra etapa do melhoramento, no necessariamente na obteno direta de novas cultivares. Entre as aplicaes da cultura de tecidos no melhoramento gentico de espcies frutferas, merecem destaque: A organognese in vitro, indispensvel na obteno de plantas geneticamente transformadas. O armazenamento e o intercmbio de germoplasma. A cultura de embries ou embriocultura. Organognese in vitro e transformao gentica Por meio da cultura de tecidos, das tcnicas de DNA recombinante e da transformao gentica, a biotecnologia oferece novas oportunidades na obteno de novas cultivares. A transformao de plantas depende de dois requisitos essenciais: a habilidade para introduzir um gene desejvel, de forma estvel, dentro do genoma da planta, e a habilidade para regenerar uma planta frtil por meio de clulas transformadas. A maior dificuldade tcnica para obteno de plantas transgnicas o estabelecimento prvio de um sistema de regenerao eficiente, que no altere as caractersticas genticas do explante inicial. A escolha do explante inicial geralmente funo da sua capacidade de regenerao in vitro (Fig. 7). Na regenerao de plantas lenhosas, geralmente os explantes mais utilizados so folhas e entrens. Outra possibilidade a utilizao direta de tecidos meristemticos, especialmente pices caulinares e radiculares. A organognese pode ocorrer de forma direta ou indireta. Quando a organognese ocorre a partir de tecidos do explante ou de pequena proliferao dos mesmos, ainda sobre o explante original, considera-se organognese direta.

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Fig. 7. Regenerao direta de brotos a partir de folhas (A) a partir de pice caulinar (8) e a partir de entren (e).

Quando a mesma ocorre a partir de tecidos de calo isolados do explante primitivo ou a partir de suspenses celulares e calos da derivados, considera-se organognese indireta. A regenerao direta, via formao de brotaes adventcias, vem sendo amplamente utilizada, principalmente nos trabalhos de transformao de plantas, pois as plantas regeneradas so mais estveis do que aquelas obtidas de calos, com menor risco de quimeras e variao somaclonal. Hoje, existem diversos trabalhos de transformao de plantas, visando melhorar tanto seu desempenho no campo (resistncia a patgenos e a estresses ambientais) quanto a sua qual idade. Em algumas espcies lenhosas importantes, j foram descritos protocolos de obteno de plantas transgnicas, como quivizeiro, nespereira, nogueira, citros, ameixeira, videira, macieira, pereira e caquizeiro. As frutferas resistentes a vrus tambm podem ser obtidas pela transformao gentica. Outras caractersticas de interesse, que podem ser introduzidas nas plantas, via transformao gentica, incluem a resistncia a fungos, resistncia a estresses ambientais e melhoria da qualidade nutricional. Armazenamento e intercmbio de germoplasma Vrios so os mtodos utilizados para conservar o germoplasma, os quais so agrupados em duas formas distintas: conservao in vitu, quando as plantas so conservadas em seus habitats naturais, e conservao ex situ, quando as plantas so mantidas em bancos de germoplasma, fora de seu habitat natural. Entre as tcnicas de conservao ex situ, a conservao in vitro, por meio da cultura de tecidos, indicada de modo especial para plantas que no produzem sementes, que as produzem em pequenas quantidades, ou aquelas onde as sementes sejam recalcitrantes. O material vegetal conservado in vitro pode ser mantido temperatura ambiente,

101 ou em baixas temperaturas, e at mesmo criopreservado (-196C). Os mtodos de criopreservao podem ser ordenados em etapas conhecidas como: Pr-cresci mento. Crioproteo. Resfriamento. Armazenamento. Aquecimento. Crescimento de recuperao. Uma grande aplicao da conservao in vitro o intercmbio de germoplasma. A troca de germoplasma por meio de culturas in vitro representa um importante passo para facilitar as atividades dos servios de quarentena e de vigilncia sanitria, diminuindo, sensivelmente, a possibilidade de introduo de patgenos ou pragas, por meio do intercmbio de material gentico, dentro do territrio nacional ou intercmbio internacional. Cultura de embries A cultura de embries, tambm chamada de embriocultura, uma tcnica utilizada no melhoramento gentico de fruteiras de caroo, principalmente no caso do pessegueiro. feito o cultivo in vitro de sementes provenientes de cruzamentos com cultivares ou selees de maturao precoce, pois estas, devido ao curto perodo de desenvolvimento dos frutos, no conseguem formar completamente o embrio, antes da maturao da polpa. No caso da embriocultura, o material utilizado de origem sexuada, no caracterizando a formao de danes. O meio a ser utilizado depende do desenvolvimento do embrio, mas tambm pode dar resultados distintos, conforme o germoplasma a ser posto em cultura. Atualmente, a fruticultura busca tecnologias que possibilitem a produo de frutos de qualidade com o menor investimento possvel. Assim, a utilizao de mudas com qualidade, sob o aspecto sanitrio e gentico, torna-se um requisito obrigatrio no setor de produo de frutos. Entre os sistemas de propagao vegetativa de plantas, a micropropagao pode ser considerada a de maior contribuio em termos quantitativos e qualitativos na produo de mudas frutferas. Entretanto, no Brasil, a atividade comercial de micropropagao concentra-se, principalmente, na multiplicao de espcies ornamentais e florestais. A maioria dos trabalhos realizados na rea de fruticultura est localizada em empresas de pesquisa pblica e nas universidades. Acredita se que, com o aumento da competitividade no setor de produo de mudas e com a exigncia cada vez maior de plantas padronizadas e isentas de doenas, a micropropagao conquiste um espao maior no setor frutcola. Deve-se considerar, tambm, a dificuldade muitas vezes encontrada para clonagem de plantas lenhosas adultas por meio da cultura de tecidos, cujos resultados so variveis com o gentipo. Entre os fatores considerados problemticos na micropropagao de plantas frutferas, esto: As contaminaes endgenas dos tecidos, principalmente por bactrias, especialmente em explantes advindos de plantas adultas, crescidas a campo. A oxidao dos compostos fenlicos liberados pelos explantes. A malformao das brotaes, tambm conhecida como vitrificao.

102 A perda da capacidade de organognese in vitro, em tecidos retirados de plantas adultas, pois a idade da planta-matriz e o estado de desenvolvimento fisiolgico representam grande limitao na propagao massiva desses materiais.

103 Certificao Gentico sanitria de Mudas A certificao gentico-sanitria consiste em dar garantias de que um determinado produto possui um padro caracterstico, estabelecido por normas regulamentadoras, que o diferencia, ou o habilita, para uso ou consumo. No mbito de um programa de produo de mudas, a certificao tem por finalidade garantir a idoneidade do material vegetal (borbulhas, enxertos, porta-enxertos e mudas formadas), quanto correspondncia varietal e ausncia de agentes patognicos, que possam comprometer a produo, com o uso de tcnicas disponveis e viveis, sob aspecto econmico e ambienta!. Etapas para validao de um programa de certificao de mudas A certificao de mudas frutferas compreende duas etapas principais: Certificao gentica . Certificao sanitria. Essas etapas, mesmo apresentando objetivos diferentes, caracterizando-se pela aplicao de mtodos e tcnicas especficas, inerentes a cada uma, so complementares entre si, num programa de certificao. Certificao gentica Embora o controle do estado sanitrio tenha sido a primeira etapa a merecer ateno especial na produo de mudas, nas ltimas dcadas, o aumento significativo de novas cultivares, das mais variadas espcies de plantas frutferas, tem conduzido necessidade de disponibilizar mtodos capazes de atestar a qual idade gentica das plantas. Para a seleo de novos gentipos com melhores caractersticas agronmicas em cada espcie frutfera, muitas vezes recorre-se a um nmero pequeno de acessos para serem utilizados nas hibridaes. Conseqentemente, parte dos novos gentipos colocados disposio dos viveiristas e produtores possuem caractersticas muito similares, dificultando a diferenciao entre gentipos. Na bibliografia, muitos casos de controvrsia de identidade tm sido relatados, envolvendo cultivares que, sendo iguais, foram multiplicadas com nomes diferentes (sinonmia), ou vice-versa (homonmia). Na certificao gentica de plantas frutferas, buscam-se avaliar e descrever todos os caracteres presentes na planta, por avaliaes subjetivas ou por meio de medidas fsicas, qumicas, bioqumicas e moleculares. Num determinado gentipo, todos os caracteres avaliados normalmente so utilizados na sua descrio. Quando se trata da certificao, um conceito importante a considerar o de cultivar. Essa pode ser definida como variedade cultivada (do ingls - cu/tivated variety) ou, ainda, como o conjunto de plantas cultivadas, caracterizadas por apresentarem um ou mais caracteres em comum, que as diferenciam de outro grupo. Portanto, para se afirmar, com certeza, que uma cultivar diferente, ela deve apresentar estabilidade das caractersticas, homogeneidade e possuir, pelo menos, um carter peculiar que a possa distinguir claramente de outra cultivar. Entretanto, quando a planta de uma cultivar afetada por algum tipo de mutao, fazendo com que ocorra a perda do carter homogeneidade, se essa nova caracterstica se mantiver estvel na planta, quando multiplicada via agmica, a nova planta passar a constituir o que se denomina de cultivar policlonal. Isso verificado na cultura da macieira, na qual plantas das cultivares tradicionalmente cultivadas sofrem mutaes, normalmente a nvel de gema ou de ramo,

104 e passam a apresentar uma ou mais caractersticas diferenciadas dos frutos., Esses ramos ou gemas so, ento, isolados e multiplicados via enxertia e, quando comprovado que a nova caracterstica estvel plantas portadoras dessa nova caracterstica passam a constituir uma nova cultivar, Em todos esses casos, a diferenciao entre gentipos feita por meio de polimorfismo, ou seja, as vrias formas que podem assumir um determinado carter, que determinado pela presena de mais de uma forma allica que pode ser detectada, fenotipicamente, ou geneticamente. Essas diferenas verificadas entre gentipos so comumente denominadas de marcadores genticos, que podem ser classificados em trs tipos: Marcadores morfofenolgicos. Marcadores bioqumicos. Marcadores moleculares. O uso combinado desses marcadores permite revelar a verdadeira identidade da planta, a fim de dar garantias genticas, em todas as etapas do processo de produo de mudas certificadas. Caracterizao com marcadores morfofenolgicos Caractersticas morfofenolgicas so todas aquelas que podem ser avaliadas externamente na planta, como hbito de crescimento, vigor, formato da copa, tipo e forma das folhas, tipo de flor, hbito de frutificao, dados de florao e de maturao, tamanho e forma dos frutos, alm de ndices fsico-qumicos, entre outras. At meados da dcada de 60, as caractersticas que diferenciavam variedades e cultivares eram baseadas somente nas avaliaes morfofenolgicas das plantas e descritas de acordo com o tipo de material a ser avaliado (porta-enxertos c10nais ou seedlings, cultivar copa para frutos destinados ao consumo in natura ou indstria, entre outras). Eram baseadas, tambm, em exemplos pr-definidos por legislao e registradas em fichas pomo lgicas apropriadas, conforme o exemplo apresentado no Anexo 1 . Numa ficha pomolgica, pode ser incluso um nmero variado de caracteres a avaliar como morfolgicos (referentes forma de todos os rgos da planta), biolgicos, principalmente relacionados a processos fisiolgicos (dados fenolgicos) e agronmicos (produtividade, capacidade de fruit set, caractersticas fsico-qumicas do fruto). Nesse mtodo, o avaliador caracteriza a cultivar no seu complexo, comparando e interpretando os dados recolhidos com os de outras cultivares, a fim de traar um perfil completo e fiel da cultivar. Na comparao de duas ou mais cultivares, quando so encontradas diferenas na avaliao de um carter especfico, diz-se que essas diferenas so um marcador e, portanto, podem ser utilizadas para a diferenciao das cultivares. Um exemplo de marcador morfolgico apresentado na Fig. 1, onde a cor avermelhada da folha do porta-enxerto de pessegueiro Nemared um marcador morfolgico, que pode ser usado para diferenci-lo de outras cultivares de folhas verdes, quando ocorrem misturas de cultivares no viveiro.

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Exemplos facilmente identificveis so a presena ou a ausncia de glndulas nas folhas, e o formato das glndulas em folhas de pessegueiro, entre outros. Existem vrios fatores que I imitam o emprego de mtodos descritivos para identificao de cultivares, que esto relacionados complexidade e aos custos, atribudos principalmente a: Exigncia de longos perodos de tempo para o registro das caractersticas, pois somente so completadas aps a produo de frutos (no caso de cultivares) . Necessidade de perodos especficos do ciclo vegetativo para se proceder as avaliaes (perodo de florao, brotao, maturao de frutos, etc.). Influncia do ambiente e de fatores epigenticos agindo sobre as caractersticas morfofenolgicas (Fig. 2).

Influncia de agentes patognicos que podem alterar a poca de florao e de maturao dos frutos, o vigor da planta, entre outras. Quando se trabalha com espcies de baixa variabilidade gentica, onde muitos gentipos possuem caractersticas similares, como o caso do pessegueiro, selees

106 melhoradas de macieira ou cultivares policlonais, a identificao por meio da avaliao do fentipo tambm dificultada. Nesses casos, a variabilidade entre alguns gentipos ou em relao cultivar original mnima e dificilmente quantificvel. Outro ponto considerado como desvantagem desse mtodo que algumas caractersticas utilizadas na anlise so interpretadas subjetivamente. Assim, a possibilidade de ocorrerem diferenas de interpretao, entre avaliadores e entre locais, pode conduzir a erros de identificao. Apesar das I imitaes, esse o mtodo tradicional para a caracterizao de plantas frutferas. Alm disso, o nico capaz de diferenciar cultivares originadas de mutaes, as quais apresentam diferenas apenas de uma ou poucas caractersticas, normalmente nos frutos. Como exemplo, pode-se citar a quantidade de russeting na epiderme de selees de macieira da cultivar Golden Delicious, ou da colorao vermelha da epiderme em selees de Red Delicious e de Gala. Para a certificao de cultivares, onde o fruto o produto final a ser comercializado, a avaliao das caractersticas morfofenolgicas, normalmente, so conduzidas pelo menos por 2 anos aps a produo dos primeiros frutos. Para porta-enxertos de multiplicao c1onal, so observados pelo menos dois ciclos vegetativos de propagao em viveiro, enquanto para porta-enxertos obtidos de sementes, so avaliados um mnimo de 200 plantas por, pelo menos, um ciclo vegetativo em viveiro. Caracterizao com marcadores bioqumicos Buscando-se alternativas para superar as limitaes impostas pelos marcadores mofofenolgicos, o desenvolvimento dos marcadores bioqumicos aumentou, grandemente, a possibilidade de se encontrar caractersticas teis para a diferenciao de gentipos. Essa tcnica consiste na avaliao das protenas de reserva e, principalmente, das isoenzimas, estas ltimas definidas como o conjunto de diferentes formas moleculares de uma enzima resultante da expresso de genes e que possuem o mesmo tipo de atividade cataltica. Considerando-se que as isoenzimas de um mesmo grupo apresentam variaes na seqncia de aminocidos, essas diferenas estruturais permitem, por meio da eletroforese, identificar as diferentes formas da enzima ou isoformas. Portanto, cultivares diferentes apresentam variaes no padro isoenzimtico que podem ser utilizados na caracterizao gentica. Esse tipo de marcador foi utilizado, intensivamente, durante as dcadas de 1970 e de 1980, nos mais variados estudos de gentica, e na identificao de cultivares. Um exemplo da aplicao de isoenzimas a diferenciao de duas cultivares de macieira (A e B) que apresentam dois locus que codificam a enzima fosfoglucomutase PGM (pGM - 1 e PGM - 2). Na Fig. 3, cada um dos dois alelos a e b do mesmo gene PGM determinam a sntese de uma isoforma da enzima. Nesse caso, o polimorfismo observado atribudo ao gene PGM - 1, que se apresenta na forma heterozigota na cultivar A, apresentando uma banda a mais, que visualizada aps a colorao do gel.

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o uso de isoenzimas, como marcadores genticos, tem como vantagens o baixo custo e a rapidez para implementao da tcnica em laboratrio. So marcadores codominantes, caracterstica que permite identificar, numa prognie, os indivduos com locus heterozigotos e homozigotos. Entretanto, os marcadores bioqumicos apresentam a desvantagem de no permitir uma caracterizao completa do genoma. So limitados pelo pequeno nmero de sistemas enzimticos polimrficos, o nvel de polimorfismo detectado por loco pequeno. Alm disso, so influenciados pelas condies ambientais e pelo rgo da planta amostrado. Em espcies frutferas, com maiores nveis de variabilidade gentica, a exemplo da pereira e da ameixeira, o uso de isoenzimas produz, normalmente, um nmero elevado de polimorfismos, que podem ser utilizados na caracterizao das cultivares. Em espcies como o pessegueiro e o damasqueiro, que possuem uma estreita base gentica, o nmero de polimorfismos reduzido, permitindo, em muitos casos, apenas a separao de cultivares em grupos. Caracterizao com marcadores moleculares o uso de marcadores moleculares tem sido integrado ao exame morfofenolgico e bioqumico, como um tipo de impresso digital molecular da planta, tambm denominado de fingerprinting varieta/ ou ONA fingerprinting. Ao contrrio dos demais marcadores, as tcnicas moleculares permitem identificar polimorfismo diretamente do DNA da planta, de maneira que a quantidade de polimorfismo detectada seja teoricamente ilimitada. Os primeiros marcadores moleculares utilizados foram os RFLP (Restriction Fragment Length Po/ymorphism), ou polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrio, que so baseados na hibridizao do DNA com sondas especficas. Tm como vantagens a co-dominncia e a alta repetibilidade, mas necessitam do uso intensivo de mo-de-obra e de material radioativo na anlise. Posteriormente, com a descoberta da tcnica de PCR - reao de polimerizao em cadeia, houve um rpido e importante avano no uso de novas tcnicas para realizao

108 da anlise do DNA, tanto para uso em programas de certificao gentica de plantas, quanto para os demais estudos de gentica. Esse tipo de anlise, alm de no sofrer influncias do ambiente ou do rgo analisado, apresenta grande potencial para reconhecer a identidade das mais variadas espcies de plantas, em qualquer momento da sua vida ou ciclo vegetativo, principalmente em espcies de baixa variabilidade gentica. Isso resulta em segurana para os produtores na aquisio de material, como garantia de correspondncia gentica, e at mesmo como forma de prevenir contestaes que podero surgir aps a instalao de pomares. A identificao varietal por fingerprintingdo DNA no um mtodo substitutivo da tradicional classificao morfofenolgica, mas integrativo ao mesmo, no controle da autenticidade gentica na produo de mudas. Atualmente, para se analisar o DNA de plantas, pode-se optar por um conjunto de marcadores moleculares, com varivel grau de reprodutibilidade e confiana, permitindo o reconhecimento de uma cultivar, ou um grupo de cultivares, de forma rpida e segura, na maioria dos casos analisados. Os principais marcadores moleculares que podem ser utilizados na Anlise de Fingerprinting so os RFLP, Random Amp/ified Po/imorphism DNA (RAPO), microssatlites ou SSR (Simp/e Sequence Repeats), ISSR (lnter-SSR), minissatlites, AFLP (Amp/ified Fragments Lenght Polimorphism), SSCP (Single Strand Conformation Polimorphism), SNP (Single Nuc/eotide Polimorphism), entre outros. Dentre esses diferentes tipos de marcadores, os principais utilizados no processo de certificao so os RAPD, SSR e AFLP, que sero descritos a seguir: RAPD - Dentre os vrios tipos de marcadores moleculares, este um dos mais utilizados. Baseia-se na reao de PCR, onde seqncias de DNA genmico so amplificados ao acaso, utilizando-se seqncia de oligonucleotdeos inicializadores, tambm chamados de primers. Para a anlise RAPO, os primers possuem 10 pb de bases nucleotdicas, so constitudos de seqncia arbitrria e no requerem informaes a respeito da seqncia de DNA, alvo para sua sntese. A anlise com marcadores RAPD tem como principais vantagens o baixo custo, a fcil implementao na rotina do laboratrio, gasta menos tempo na obteno dos resultados e necessita de pequenas quantidades de DNA. Em espcies da alta variabilidade gentica, como macieira, pereira e ameixeira, a quantidade de polimorfismo revelada alta (Fig. 4). Por sua vez, a tcnica tem como fator limitante o carter dominante, a baixa repetibilidade, quando comparados os dados de laboratrios diferentes, alm do baixo polimorfismo revelado em espcies de baixa variabilidade, como em pessegueiro e em marmeleiro (Fig. 5).

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SSR ou microssatlite - Recebem este nome por apresentarem-se na forma de seqncias de 1 a 4 pares de bases, repetidas lado a lado e em nmero varivel, distribudas pelo genoma, e que podem ser reproduzidas pela PCR (Fig. 6). So zonas de DNA no-codificante, que podem ser reveladas utilizando-se primers sintetizados especificamente para amplificar o DNA repetitivo. Esse tipo de marcador, alm de ser co-dominante, tem como vantagens a facilidade de implementao na rotina do laboratrio, o alto polimorfismo, a facilidade na interpretao dos resultados e a alta reprodutibilidade dos resultados, entre laboratrios diferentes. Assim, constitui-se num dos melhores marcadores para Anlise de Fingerprinting para certificao de mudas, principalmente para cultivares de espcies com baixa variabilidade gentica, como o pessegueiro. A potencial idade da tcnica tem sido demonstrada na Anlise de Fingerprinting em vrias espcies frutferas, como videira, pessegueiro, nectarineira, ameixeira, macieira, entre outras. A anlise de microssatlites tem como fator limitante o custo para a obteno dos primers e tipo de gel que utilizam (poliacrilamida), que so de custo elevado. Dependendo do objetivo do trabalho, a eletroforese pode ser conduzida em gel de agarose 3%, mas na Anlise Fingerprinting, o gel de poliacrilamida tem como grande vantagem o poder de separao de fragmentos amplificados (Fig. 7 e 8). AFlP - Essa tcnica permite a obteno de grande nmero de marcadores distribudos pelo genoma, combinando especificidade, resoluo e poder de amostragem, com a velocidade de deteco dos polimorfismos via PCR. Contudo, envolvem maior nmero de etapas em relao anlise RAPD e SSR, exigem maior quantidade de reagentes, so marcadores dominantes e revelam baixo contedo de informao gentica por loco.

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Esse tipo de marcador baseia-se na digesto do DNA genmico com enzimas de restrio, uma de corte raro (EcoR I) e outra de corte freqente (Mse I ou Pst 1), seguido da ligao de adaptadores especficos em cada extremidade dos fragmentos de restrio. Posteriormente, pode-se fazer uma amplificao seletiva ou pr amplificao com primers especficos adicionados de uma base oligonucleotdica conhecida. Para finalizar, realiza-se uma amplificao final, utilizando-se primers de seqncia mais longa, constitudos de uma seqncia complementar ao adaptador adicionado de mais trs bases oligonucleotdicas conhecidas (Fig. 9).

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As etapas de pr-amplificao e amplificao tm por finalidade reduzir o nmero de fragmentos amplificados, em funo da distribuio dos stios de restrio e da amplificao diferencial de fragmentos. Assim, possvel selecionar apenas um subconjunto de fragmentos a serem amplificados, medida que se aumenta o nmero de bases na constituio dos primers. Da mesma forma que os RAPDs, os marcadores AFLPs so dominantes. Tm grande aplicabilidade na Anlise de Fingerprinting, principalmente naquelas espcies que apresentam grande variabilidade gentica, como o caso da ameixeira (Fig. 10), na qual o uso de poucas combinaes de primers permite obter um grande nmero de polimorfismos por anlise, sendo de grande utilidade para a caracterizao gentica de plantas.

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A aplicao de marcadores moleculares, na Anlise de Fingerprinting, j est bastante documentada para as mais variadas espcies de plantas frutferas. Entretanto, valido considerar que, na certificao gentica, alm dos controles realizados sobre o fentipo e sobre os frutos, para cada cultivar deve-se ter o conhecimento sobre a variabilidade gentica, a fim de tomar a deciso correta no uso de diferentes tcnicas de anlise. Em ameixeira e porta-enxertos de Prunus spp., devido alta variabilidade gentica, tanto os RAPDs como os microssatlites e AFLPs podem ser utilizados na Anlise de Fingerprinting. Em cultivares de pessegueiro, os microssatlites so a melhor opo para a caracterizao gentica, principalmente pelo polimorfismo e repetibilidade da tcnica. Exceto para cultivares originadas de mutao, atualmente, para licenciar uma nova cultivar, normalmente anexado o perfil eletrofortico da novidade e dos seus respectivos genitores, para comprovar a descendncia e evitar contestaes futuras. Por meio da anlise molecular, os diversos segmentos do setor frutcola podero desfrutar das vantagens derivadas da aplicao prtica dessas novas tecnologias. Eventuais erros ou controvrsias, que surgem nas diversas fases ou passagens envolvidas na propagao de plantas frutferas, podem ser rapidamente resolvidas, permitindo verificar, com segurana e rapidez, casos em que, por meio da anlise morfofenolgica e pomolgica, levariam anos para a completa avaliao. Ainda com relao certificao gentica, deve-se considerar que a anlise do DNA, sozinha, no permite explorar por completo as caractersticas da planta, mas sim uma pequena poro do genoma, pois conforme a literatura, o perfl de DNA produzido

114 por um nico primer RAPD permite analisar apenas 0,001 % do genoma da macieira. Por sua vez, como a caracterizao por meio do fentipo nem sempre representa toda a expresso do gentipo, mesmo com toda sua capacidade recombinatria, nem sempre o gentipo se expressa no fentipo e nem sempre possvel identificar uma planta por meio da anlise do DNA. o caso das cultivares policlonais, que podem derivar de mutaes genticas puntiformes ou quimricas, devido a uma variao restrita a uma poro muito pequena do DNA. Portanto, para a certificao gentica de plantas frutferas, deve-se sempre optar pelo uso integrado dos diferentes tipos de marcadores, a fim de traar o perfilo mais fiel possvel do gentipo em anlise. Certificao sanitria A certificao sanitria de plantas frutferas tem, por objetivo, garantir a obteno e a utilizao de material propagativo sadio, desde sua origem. Em fruticultura, o uso de plantas certificadas tem desempenhado um papel estratgico na evoluo do setor, em nvel mundial, orientando e controlando a produo de plantas e na difuso de material sadio. Os controles realizados sobre o material vegetal, inseridos em programas de certificao sanitria, dizem respeito a todas as pragas e doenas que comprometem a produo, entre elas: fungos, bactrias, nematides, fitoplasmas, vrus e assemelhados. Entretanto, a principal ateno por parte das viroses que, muitas vezes latentes, so de difcil identificao, causando danos significativos s culturas. No passado, a escolha de material propagativo era feita, sempre, de maneira emprica por viveiristas e fruticultores, com materiais de pomares comerciais e baseado, principalmente, no aspecto visual. No Brasil, exceto o setor citrcola, a grande maioria dos viveiristas ainda adota esse mtodo para obter material propagativo, sem levar em considerao os aspectos sanitrios relacionados, principalmente, s doenas que se difundem por meio das partes vegetativas. o caso de doenas causadas por vrus e assemelhados, muitas vezes latentes nas plantas hospedeiras, sendo disseminadas sem serem percebidos nem mesmo pelos viveiristas e fruticultores mais experientes. Nesse contexto, o setor viveirstico, quando participante de um programa de certificao, desempenha papel importante, pois pode atuar como principal agente de preveno e controle contra emergncias fitossanitrias. Considerando-se que o problema fitossanitrio - que mais afeta as principais espcies frutferas - refere-se a uma variada gama de vrus, em programas de certificao, normalmente, as plantas so obtidas e comercializadas, e enquadradas em duas categorias: plantas testadas para as principais viroses da espcie ou Vrus tested (VT) e plantas completamente livres de vrus de que se tem conhecimento para aquela espcie, ou Vrus free (VF). Importncia do controle de viroses - A infeco viral altera o funcionamento metablico normal da planta, causando permanente estresse, podendo conduzir progressiva degenerao e morte da mesma. Uma planta com vrus, o qual no mostra sintomas de infeco (viroses latentes), constitui-se uma fonte de infeco para cultivares suscetveis, que podem ser contaminadas por intermdio de vetores, com graves conseqncias para a produo, bem como serem fontes de disseminao de material contaminado, na obteno de novas mudas. Alguns agentes patognicos podem alterar as caractersticas fenotpicas das plantas, como o caso do viride causador do mosaico latente do pessegueiro (PLMVd), que modifica a expresso dos genes do comportamento vegetativo, forma e poca de maturao dos frutos. Outro exemplo a presena do vrus-da-mancha-

115 c1ortica (ACLSV), que provoca a formao de caneluras no ponto de enxertia, induzindo desafinidade entre copa e porta-enxerto e alterando o vigor vegetativo em macieira (Fig. 11 A). Entre as graves viroses de carter epidmico que podem comprometer completamente a produo, em frutferas de clima temperado, est o PPV (Plum pox virus) (Fig. 11 B) transmitido entre prunodeas por meio de afdeos; fitoplasmas que causam as doenas conhecidas como Pear decline em pereira (Fig. 11 C) e Apple proliferation (AP) em macieira, ambas transmitidas pelo inseto vetor, conhecido como Cacopsy/la pyri ou ainda por material infectado .

Embora as espcies frutferas possam ser afetadas por uma ampla gama de viroses e assemelhados (virides, micoplasmas) (Tabela 1), muitas viroses so raramente transmitidas para plantas frutferas. Entretanto, outras como PRNV e PDV, podem ter a transmisso facilitada por plen e semente em pessegueiro, damasqueiro e ameixeira. A transmisso de agentes patognicos como bactrias, nematides, vrus ou assemelhados pode ocorrer por intermdio de vetores animais, por plen, por solo contaminado, etc. Entretanto, os maiores ndices de transmisso so causados pelo homem, mediante: Uso de instrumentos de trabalho contaminados (tesouras de podas e canivetes de enxertia). Propagao de estacas e porta-enxertos com infeces crnicas, especialmente latentes. Enxertos com estacas ou gemas doentes. Transporte de plantas de uma rea para outra. Uma forma de controlar essa disseminao por meio de medidas preventivas como: Eliminao de plantas espontneas, hospedeiras naturais de vrus em reas contguas. Limpeza e esterilizao dos equipamentos de trabalho. Quarentena para materiais importados de reas onde esto

116 presentes doenas perigosas. Controle de vetares naturais. Uso de material sadio. Mtodos empregados na seleo varietal e controle fitossanitrio Normalmente, um programa de certificao sanitria tem incio levando se em considerao a importncia agronmica do material vegetal. Em funo disso, as cultivares de maior interesse so selecionadas para fazerem parte de uma lista varietal. Para ser introduzido num programa de certificao sanitria, o material vegetal passa por diversas etapas, como escolha do germoplasma, controle sanitrio das plantas-matrizes, conservao e multiplicao do material pr-bsico e testes peridicos para verificar a sanidade das plantas matrizes (Fig. 12), alm da avaliao das caractersticas morfofenolgicas e a estabilidade gentica, conforme comentado no item sobre certificao gentica.

Escolha do germoplasma - uma etapa importante e consiste na seleo de variedades e cultivares para a constituio de plantas pr-bsicas. necessrio verificar o estado sanitrio das plantas por meio de inspees, selecionando as melhores sob o ponto de vista produtivo e que no apresentem sintomas de infeco, principalmente infeces por viroses. Quando as plantas que fazem parte da lista varietal esto em pleno campo, so retiradas gemas delas, para serem enxertadas sobre porta-enxertos livres de vrus (VF). Aps a enxertia, as plantas so mantidas em vasos e conservadas em casa de vegetao prova de insetos (screenhouse) (Fig. 13). Avaliao do estado sanitrio das plantas - Para a avaliao do estado sanitrio das plantas, necessrio dispor de equipamentos como estufas c1imatizadas para executar testes biolgicos sobre indicadores herbceos ou lenhosos, equipamentos de laboratrio para realizao de testes sorolgicos e moleculares, casas de vegetao prova de insetos, para manuteno das plantas a serem testadas. Das plantas selecionadas para constituir o material bsico ou de elite, so coletadas amostras de tecidos, normalmente folhas, por uma pessoa devidamente treinada, a partir das quais so executados todos os testes necessrios e disponveis, para se verificar a ausncia de bactrias, vrus e assemelhados de maior incidncia nas espcies em questo.

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Para a verificao de infeces virais latentes, oportuno fazer uma seleo inicial do material por meio de testes rpidos (soro lgicos) que excluam, j no incio da atividade, o material infectado.

118 Aps essa verificao inicial, se o teste for negativo, a cultivar (copa ou portaenxerto) pode ser multiplicada em viveiro, para posterior indexagem, usando-se indicadores biolgicos. Caso existam suspeitas de infeco, conveniente o cultivo temporrio das plantas em estruturas quarentenrias prova de insetos, at a obteno dos resultados da indexagem. Se o resultado da indexagem tambm for negativo, a planta poder ser utilizada como planta-matriz, para constituir material de elite ou bsico. Por sua vez, se o teste sorolgico for positivo, o destino da cultivar depender do tipo de agente infeccioso e da importncia agronmica da mesma. Caso se trate de doenas para as quais a erradicao obrigatria, como o caso do PPV, o gentipo deve ser eliminado ou submetido ao processo de limpeza c1onal, antes de ser utilizado como planta-matriz. Geralmente, para frutferas de clima temperado, a planta-matriz mantida sob observao, pelo menos por dois ciclos vegetativos, durante os quais so executados todos os diagnsticos necessrios. Conservao e propagao do material selecionado - As plantas consideradas bsicas ou de elite so mantidas sob condies controladas, para impedir infeces por agentes patognicos. Uma boa conservao garantida, mantendo-se as plantas em vasos isolados do solo, e protegidas em casa de vegetao com telas prova de insetos, impedindo as vrias formas de transmisso de viroses ou similares a vrus, por meio de vetores. Para cultivares em fase de seleo, essas so sempre enxertadas sobre portaenxertos certificados; so mantidas em estruturas protegidas de insetos e nematides e suficientemente longe de culturas afins, que possam estar infectadas. Normalmente, so mantidas, pelo menos, duas plantas sadias para cada seleo, durante todo o perodo de seleo. No caso dos porta-enxertos, alm do controle sanitrio das estacas, aqueles multiplicados por semente devem ser de origem conhecida e garantida, ou seja, originados de campos de plantas-matrizes especficos para produo de porta-enxertos. A possibilidade de ter porta-enxertos infectados maior, quando a multiplicao feita por estacas do que por sementes. As viroses de maior incidncia, verificadas nos pomares do Rio Grande do Sul, so aquelas causadas por PDV e PNRSV, que podem ser transmitidas, principalmente, por meio da enxertia, mas pode ocorrer transmisso por plen e por meio das sementes. A transmisso de viroses por plen e por sementes pode variar entre espcies, sendo alta em damasqueiro. Testes diagnsticos A diagnose de fundamental importncia para a preveno e controle dos diversos agentes causadores de doenas. O uso de material sadio, a eliminao precoce do material infectado e a esterilizao dos equipamentos de trabalho (com hipoclorito de sdio) so medidas que podem conter, de maneira significativa, a difuso de patgenos. Para diagnose fitopatolgica, existem inmeros mtodos, que permitem verificar a presena de bactrias, fungos, vrus e assemelhados em vegetais. Para plantas frutferas, em geral, podem ser adotados os seguintes mtodos: a indexagem com plantas indicadoras, testes sorolgicos e moleculares. Indexagem - Consiste no uso de plantas indicadoras (herbceas ou lenhosas), colocando-se em contato suco celular ou partes de tecidos da planta que se quer testar, para a presena de uma determinada virose. Os testes sobre plantas indicadoras so complementados com testes sorolgicos e moleculares, que permitem, em alguns casos, obter-se resposta mais rpida e especfica.

119 Indicador lenhoso - O uso da enxertia de borbulhas ou estacas sobre plantas indicadoras, em campo ou em casa de vegetao, o mtodo clssico e mais completo para se verificar o estado sanitrio das plantas frutferas, principalmente de macieira, pereira, pessegueiro, ameixeira, entre outras. Esse mtodo permite revelar agentes patognicos, no ainda identificados, e para os quais no so aplicados outros mtodos diagnsticos. Normalmente, so enxertadas 2 gemas da planta a ser testada e, logo acima, 1 a 2 gemas da planta indicadora, ou somente 1 a 2 gemas da planta a testar, quando o portaenxerto o indicador (Fig. 14). As avaliaes sistemticas sobre plantas indicadoras para patgenos, que induzem sintomas sobre rgos vegetativos, normal mente, so feitas por 2 a 3 anos consecutivos, enquanto os sintomas sobre frutos devem ser avaliados por 2 anos. No passado, os testes sobre indicadores lenhosos eram feitos quase que exclusivamente a campo. Atualmente, buscando-se reduzir custos, os testes tm sido feitos sobre plantas lenhosas conduzidas em estufas termoclimatizadas. Alm de ser de mais fcil execuo, na fase de enxertia e de inoculao, permitem operar em condies de temperatura tima para cada tipo de vrus ou similar, obtendo-se, assim, resultados em perodos de tempo mais curtos. Indicador herbceo - Utilizado para detectar a presena de viroses transmitidas mecanicamente, como ilaviroses e nepovivores em pomceas, ApMV, PDV e PNRSV (ilaviroses), SLRSV (nepoviroses) e ACLSV (trichoviroses) em drupceas. Contudo, o teste no vlido para todas as viroses desses grupos ou todas as cepas de um nico vrus. Os indicadores herbceos mais utilizados so o Chenopodium quinoa e Cucumis sativus. Em drupceas, as espcies Nicotiana occidentalis e N. cavico/a tm demonstrado boa sensibilidade na deteco de vrus de forma alongada. O extrato de suco celular da planta a ser testada preparado e inoculado sobre a planta indicadora herbcea. Essa tcnica permite obter respostas mais rpidas (2 a 3 semanas). uma metodologia de baixo custo e de fcil execuo, podendo ser usada para pomceas e drupceas. Entretanto, a transmisso para indicadores herbceos condicionada por vrios fatores e tende a ser aplicada com menor freqncia. Essa tcnica pode ser utilizada na execuo de testes preliminares ou na diagnose de alguns vrus especficos. Testes sorolgicos - Baseado no uso de anticorpos de vrus, bactria ou origem animal, capazes de ligarem-se especificamente com antgenos (vrus ou fitoplasma presente na planta). O teste sorolgico de maior difuso o de ELlSA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), que se baseia na reao colorimtrica induzida por enzimas conjugadas com anticorpos. Existem algumas outras tcnicas variantes do Teste de ELlSA, como os sistemas DAS-E LISA (Doub/e Antibody Sandwich) e T AS-ELISA (Trip/e Antibody Sandwich), DIBA (Dot Immunobinding Assay), IF (Tissue B/ot e Imunofluorescncia). Cada uma dessas variaes foi adaptada para atender situaes especficas de diagnose (Fig. 15). No Teste de ELlSA, os antgenos so, primeiramente, capturados por anticorpos

120 vrus-especficos e conjugados com a enzima. A exposio a um substrato especfico induz uma reao colorimtrica, na qual est presente um complexo antgeno-anticorpoenzima. A completa realizao do teste dura de 1 a 2 dias. Por sua rapidez, esse teste permite analisar um grande nmero de amostras, sendo til para uma seleo preliminar, reduzindo, assim, o nmero de plantas para testar com indicadores lenhosos. Em pomceas, muito usado para diagnosticar ACLSV, ASGV, ApMV e AP. Em prunideas, pode ser utilizado .para 13 viroses diferentes. A tcnica de grande utilidade para controle massal, pela rapidez do teste e a disponibilidade de anticorpos para as principais viroses. Entretanto, mesmo dando resultado negativo, o teste de ELlSA no substitui o teste biolgico. Alm disso, apresenta algumas limitaes por sofrer influncia de diversos fatores relacionados : Coleta de amostras - Estas sofrem o efeito das condies ambientais (temperatura), podendo alterar os resultados. Em prunideas, as condies timas de coleta so as primeiras semanas aps a retomada do crescimento vegetativo. A grande maioria dos vrus mais facilmente identificada nos tecidos foliares. Entretanto, devem ser evitadas folhas velhas, normalmente mais ricas em taninos e substncias oxidantes.

Variabilidade dos patgenos - Muitos vrus apresentam grande gama de cepas, com grande diferena sorolgica. Assim, na seleo massal, grande o risco de ocorrerem "falsos negativos" devido variabilidade do vrus, que pode ser minimizado com tcnicas adequadas.

121 Um exemplo a diagnose de PPV e PNRSV em prunideas, na qual o uso somente de anticorpo monoclonal aumenta o risco de "falso negativo", pelo excesso de especificidade de um simples anticorpo. Para reduzir o risco, pode-se recorrer s tcnicas variantes do Teste de ELlSA, que utilizam misturas de anticorpos de amplo espectro . Validao e harmonizao das tcnicas de diagnose - Devido s numerosas variveis que podem influenciar o teste sorolgico, cada laboratrio escolhe os reagentes e mtodos que considera mais oportunos para execuo de Teste de ELlSA. Um dos grandes entraves deve-se ao escasso poder imunognico ou falta de uma metodologia eficiente, para purificao de anticorpos para determinados vrus. Em algumas espcies de frutferas, muitas vezes a diagnose em tecidos infectados ineficaz, possivelmente pela presena de inibidores ou devido baixa concentrao do vrus nos tecidos infectados. Por isso, atualmente, a diagnose de alguns vrus est sendo efetuada por tcnicas de eletroforese ou de biologia molecular, por meio da deteco do cido nuclico viral. Diagnose por meio de microscpio tico a fluorescncia com colorao (DAPI) - muito til para a diagnose de infeces por fitoplasma em pomceas. Consiste no uso de uma delgada sesso de tecido longitudinal da planta (ramos de 1 a 2 anos), na qual so aplicadas algumas gotas de corante DAPI (4', 6-diamidino-2 phenyl indole), que age sobre os cidos nuclicos presentes nos tubos crivosos do floema, que so visualizados em microscpio tico a fluorescncia. Para a diagnose de fitoplasmas, a tcnica DAPI tem fornecido timos resultados e, eventualmente, so complementados utilizando-se anlise PCR, para identificao do agente patognico. Diagnose por anlise molecular - Tem como vantagem a rpida execuo em laboratrio. Pode-se utilizar a anlise eletrofortica de RNA dupla-fita ou bicatenrio (dsRNA), aps a hibridao molecular ou a amplificao gnica (por meio da PCR). J o teste soro lgico, baseado na avaliao da protena capsdica. Nesse caso, os genes que codificam a protena capsdica correspondem a apenas 10% do genoma viral e, por esse motivo, a anlise dos cidos nudicos permite identificar pores mais significativas do genoma viral. Entretanto, a aplicao de diagnose molecular tem como limitante a obteno de cidos nudicos virais livres de contaminantes, que inibem a reao enzimtica e reduzem a possibilidade de hibridizao ou replicao, via PCR, dos cidos nudicos. O desenvolvimento de testes baseados na anlise dos cidos nudicos de grande interesse para a certificao sanitria, principalmente para testar plantas em quarentena. Nos ltimos anos, tem sido cada vez maior o nmero de vrus de plantas lenhosas isolados, purificados e caracterizados molecularmente, fato que tem facilitado o uso de tcnicas moleculares nas anlises de controle sanitrio. Limpeza clonal de plantas frutferas Ao contrrio dos fungos e bactrias que possuem metabolismo prprio, sendo por isso controlados com princpios ativos especficos, os vrus se replicam s custas da biossntese celular da planta. Sendo assim, o uso de agentes capazes de interferir na replicao do vrus poderia provocar alteraes na funcionalidade da clula vegetal. A limpeza clonal usada com o objetivo de eliminar agentes patognicos de cultivares, interessantes sob o ponto de vista agronmico. Entretanto, para manter o patrimnio gentico da cultivar, necessrio recorrer a tcnicas que permitam selecionar, a partir da planta infectada, uma poro de tecido no-infectado por

122 patgenos sistmicos. Entre as tcnicas envolvidas na limpeza clonal, esto a termoterapia, a microenxertia e o cultivo de pices meristemticos, que normalmente so utilizados em conjunto para se obter plantas sadias. A termoterapia a tcnica mais antiga, utilizada na limpeza clonal de plantas e consiste em expor a planta a temperaturas ao redor dos 38C, por tempo varivel, dependendo do tipo de vrus e da espcie vegetal. Entre 32C - 38C, a replicao viral reduzida drasticamente e a produo de partculas virais tende a diminuir. Ou, ento, a RNA polimerase, responsvel pela produo de cpias do vrus, pode ser completamente inibida temperatura de 38C, enquanto a atividade das enzimas necessrias ao crescimento e multiplicao celular da planta somente diminuda. Nessas condies, a planta mantm o crescimento vegetativo, embora de modo bastante reduzido, permitindo que o pice meristemtico se desenvolva livre de partculas virais. Assim, pode ser retirado da planta- matriz e reproduzido, diretamente, pelo cultivo dos pices meristemticos, ou por meio da microenxertia in vitro sobre porta-enxertos livres de viroses. Aps a aplicao dessas tcnicas, a planta regenerada submetida a todos os testes diagnsticos necessrios. Se comprovada a ausncia de agentes patognicos, essa planta estar pronta para ser utilizada em banco de germoplasma, como planta-matriz certificada. Mtodos empregados na seleo varietal e no controle fitossanitrio A aplicao dessas tcnicas de caracterizao gentica, limpeza clonal e diagnose do estado sanitrio de plantas constitui-se em elementos bsicos para um programa de produo de mudas de qualidade e, normalmente, so utilizadas por laboratrios pblicos e privados para dar sustentao aos viveiristas envolvidos na produo de mudas certificadas. Contudo, para implementao, deve ser adotada uma srie de procedimentos confiveis e reproduzveis, que em conjunto, permitam a obteno de plantas devidamente caracterizadas quanto aos aspectos genticos e morfofenolgicos e sanitariamente sadias.

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Produo de Mudas Certificadas Introduo Para competir no atual mercado de frutas, necessrio produzir com qualidade e com preo competitivo, obtido com o aumento da produtividade dos pomares. Entre os fatores que afetam, negativamente, a qualidade das frutas e, principalmente, a produtividade dos pomares, destaca-se a infeco das plantas por vrus e assemelhados. Assim, a sustentabilidade do setor produtivo de frutas passa, obrigatoriamente, pela adoo de programas para produzirem mudas de qualidade (FACHINELLO, 1998; FACHINELLO, 2000). As principais regies produtoras de frutas, no mundo, adotaram como estratgia principal, o uso de programas de certificao de mudas, associados a barreiras fitossanitrias que impedem a entrada, trnsito e comercializao de material infectado ou no-certificado. As principais vantagens da certificao de mudas so: melhorar a qualidade dos viveiros, trazer garantias ao produtor e consumidor e simplificar a vida dos viveiristas, j que a responsabilidade maior da entidade certificadora. O processo de certificao de plantas teve incio nos anos 40 do sculo 20, nos Estados Unidos, quando fitopatologistas formularam os princpios da certificao de plantas-matrizes. Em 1955, foi implantado o projeto oficial de mudas certificadas nos Estados Unidos e no Canad. Na Europa, o trabalho foi iniciado com a estao experimental East Malling, na Inglaterra, e hoje, esse sistema vigora em toda a Unio Europia, possibilitando que as mudas transitem de um pas para outro, sem barreiras fitossanitrias. A produo de mudas certificadas passou a ser um excelente negcio em pases como Frana, Itlia, e Holanda, tradicionais produtores de frutas e exportadores de mudas para outros pases, inclusive para o Brasil. A legislao brasileira no trata de certificao de mudas em nacional nem do sistema de mudas fiscalizadas, conforme a Lei 6.5(19 de dezembro de 1997. No Brasil, os programas de certificao estaduais, como o caso da certificao de mudas de citros, inicial 1998, no Estado de So Paulo e no Rio Grande do Sul, conforme a Pc 302/98 da Secretaria da Agricultura do Rio Grande do Sul, que estas normas para a produo de mudas fiscalizadas e mudas certificada As diferenas entre os sistemas de mudas fiscalizadas e certificadas esto resumidas na Tabela 1.

o Rio Grande do Sul sempre foi um grande produtor de mudas de plantas frutferas. Nas dcadas de 70 e de 80 do sculo 20, exportava para outros estados mudas de plantas ctricas, frutferas de caroo, videira, entre outras.

124 Hoje, esse quadro mudou e o estado passou a importar volumes importantes de mudas de outros estados e, principalmente, do exterior, com riscos de introduzir doenas e pragas ainda no existentes nos pomares brasileiros. As importaes mais freqentes tm sido feitas do Chile e da Argentina, de onde so trazidas mudas de morangueiro, quivizeiro e macieira; do Uruguai, plantas ctricas de mesa; da Holanda, chegam os porta-enxertos e as cultivares copa de macieira e, recentemente, da Itlia, Frana e frica do Sul, mudas de videira, em grande quantidade. Do Estado de So Paulo, so enviadas mudas ou material propagativo de plantas ctricas. O Rio Grande do Sul possui tecnologias e a tradio para produzir mudas de alta qualidade, mas no o faz porque o sistema no suficientemente organizado para controlar todas as etapas do processo de produo, limitando-se ao estabelecimento de leis, sem a fiscalizao eficiente da cadeia como um todo e a manuteno de campos de matrizes com controle gentico e sanitrio. Em contrapartida, os viveiristas ainda no assimilaram a importncia do uso de material gentico sadio e controlado, para obteno de mudas de qualidade, nas diversas espcies frutferas. Por sua vez, os produtores compram as mudas pelo preo e no pela qualidade. Assim, cria-se um ciclo vicioso. Nesse processo, muitos produtores, para garantir a qualidade das mudas e reduzir o custo de produo dos novos pomares, buscam mudas de outras regies ou importam de outros pases. At o momento, todas as tentativas no tiveram xito, pois no foi realizado um trabalho cooperativo e continuado no segmento de mudas certificadas. A moderna fruticultura baseada em pomares produtivos, e o sucesso do empreendimento depende da utilizao de mudas com garantias genticas e sanitrias. Isso s possvel com o uso de material propagativo livre de pragas e de doenas severas que podem limitar o crescimento, o desenvolvimento e a qualidade dos frutos (FACHINELLO, 2000). Para criao de um sistema de mudas certificadas, necessrio um esforo conjunto do setor pblico e privado, que oferea, sociedade, muda de alta qualidade, sem a necessidade de se recorrer importao e a todos os riscos dela derivados. A deciso e a implementao de um Programa de Certificao de Mudas no dependem somente de leis e de decretos. Dependem, acima de tudo, de vontade poltica e dos esforos do setor pblico e privado para colocar em prtica algo que j deveria ser uma realidade, pela importncia da fruticultura brasileira. Um programa moderno de certificao de mudas deve permitir que os rgos pblicos e privados tenham condies de trabalhar em parcerias, dispondo de instrumentos capazes de garantir a qualidade do material propagativo, bem como estabelecer critrios de autocontrole em todas as etapas do processo de produo de mudas certificadas. Etapas da produo de mudas certificadas As mudas certificadas so aquelas produzidas de acordo com a legislao especfica, sob controle de uma entidade certificadora, e que obedecem a padres rgidos de qualidade em todas as fases de produo. A justificativa para a produo de mudas certificadas que a propagao vegetativa de plantas faz com que as doenas causadas por vrus e outros patgenos, se disseminem, facilmente, por meio das mudas, quando as plantas-matrizes no so controladas, causando diminuio significativa da produo nos pomares. A maioria dessas doenas no visvel a olho nu, e s aparece quando o pomar inicia a produo de frutos. A produo de mudas certificadas baseada em normas e padres especficos que

125 orientam sobre a escolha do local do viveiro, uso de quebra-ventos, localizao e manuteno de plantas em estufas, desinfestao do material, identificao, indexagem peridica, pedido de registro, inspeo, certificados de garantia, entre outros. Na Fig. 1, est resumida a proposta que poderia ser implementada na produo de mudas certificadas. No caso especfico de plantas ctricas, a presena de vetares de doenas virticas obriga que as plantas-matrizes - e todo o sistema de produo de mudas - estejam sob telados prova de afdeos. O sistema deve prever as seguintes aes:

Criao de um banco de plantas-matrizes bsicas - necessrio que entidades de pesquisa mantenham bancos de plantas-matrizes bsicas em telados prova de afdeos e isolados do solo, identificadas geneticamente e devidamente indexadas, para as principais doenas de origem viral ou assemelhadas, disponibilizando-as para multiplicao. Controle fitossanitrio - Na primeira fase, as plantas-matrizes bsicas so submetidas a uma bateria de testes diagnsticos, com uso de plantas indicadoras ou testes laboratoriais, para verificar se existem ou no, doenas de natureza virtica, fitoplasmas ou bactrias. Se positivo, as plantas podem ser submetidas termoterapia, seguida do cultivo in vitro e, novamente, submetidas aos controles fitossanitrios e genticos. Macro e micropropagao - Depois de assegurada sua sanidade e identidade gentica, as plantas-matrizes bsicas so multiplicadas por meio de mtodos convencionais e in vitro, e passam a ser utilizadas na constituio dos campos de plantas-matrizes mantidos por rgos oficiais ou credenciados. Controle gentico/varietal- Nessa fase, fundamental que se tenha um controle gentico varietal, por meio da verificao da autenticidade das cultivares sanitariamente controladas, evitando-se variaes genticas degenerativas. Para isso, deve ser feita uma verificao feno-pomolgica para cada planta individualmente, por gentipo presente nos campos de plantas-matrizes, verificando-se o mtodo de obteno (cruzamento, seleo clonal, transformao gnica ou outras) para se ter conhecimento da genealogia, para eventual processo de patenteamento e pagamento de

126 raya/ties. Planta-matriz registrada - A partir da multiplicao das plantas-' matrizes, os viveiristas constituem seus campos de matrizes registradas, para obteno do material propagativo utilizado na produo de mudas certificadas, sob a superviso da entidade certificadora. Essas plantas-matrizes tambm devem passar por indexagem peridica. O viveiro tambm examinado, para se verificar a correspondncia entre a cultivar presente nos campos de matrizes registrados e se o nmero de mudas produzidas corresponde ao quantitativo de material existente nos matrizeiros. laboratrios de apoio - A produo de mudas certificadas exige que se tenham laboratrios credenciados e aparelhados, para se fazer os testes diagnsticos previstos, bem como as anlises genticas do material propagativo. A Portaria 302/98, do Estado do Rio Grande do Sul, 1998 estabelece as seguintes classes de plantas e mudas na produo de mudas certificadas: Planta bsica (PB) - Aquela cujas caractersticas genticas e de sanidade sejam mantidas sob responsabilidade da entidade produtora ou depositria, sob a superviso da entidade certificadora e fiscalizadora (ECF). Planta-matriz registrada (PMR) - A proveniente da planta bsica (PB), que apresenta as caractersticas desta, e que atenda aos requisitos estabelecidos pela entidade certificadora e fiscalizadora (ECF). Planta propagada de matriz registrada (PPMR) - A obtida pelo desmembramento de PMR, ou por meio de enxertia, utilizando-se material proveniente de PMR e que apresente as caractersticas desta e atenda aos requisitos estabelecidos pela ECF. Essas plantas constituem lotes registrados de borbulheiras, lotes registrados de sementeiras, lotes registrados de porta enxertos ou lotes registrados de estoles, conforme o caso. Muda micropropagada de planta-matriz registrada (MMPMR) - A obtida da micropropagao in vitro de PMR. Muda certificada (Me) - aquela muda originria de PMR ou PPMR (enxerto, porta-enxerto e filtro) e formada sob controle da ECF. Muda fora do padro morfolgico (MFPM) - A que atenda todos os requisitos de MC, exceto a que est acima ou abaixo do padro morfolgico estabelecido para essa classe de muda, e que poder ser aproveitada comercialmente. No Rio Grande do Sul, a entidade certificadora e fiscalizadora (ECF) a Secretaria da Agricultura e Abastecimento - SAA -, conforme a Lei n10.612 de 28/12/95, regulamentada pelo Decreto n 36.723, de 12 de junho de 1996. Material propagativo de qualidade Cultivares-copa necessria a manuteno de programas cooperativos de melhoramento gentico com a introduo e a obteno de novas cultivares, que produzam frutos de qualidade (tamanho, cor, sabor, resistncia a doenas e ao armazenamento, forma, etc.), buscandose avaliar esses materiais para serem recomendados s condies brasileiras. Porta-enxertos fundamental que, a curto prazo, se disponham de novas alternativas de portaenxertos em substituio aos tradicionais, de preferncia de origem clonal e que possam ser avaliados por uma rede de ensaios nas diversas regies de produo. As aes de pesquisa devem prever: Desenvolvimento de protocolos para multiplicao in vitro de porta-enxertos de origem dona!. Testes diagnsticos para verificar a sanidade do material propagativo

127 disponvel. Identificao gentica, com uso de marcadores moleculares e descritores morfolgicos. Macro e micropropagao daqueles porta-enxertos considerados promissores. Estudos comparativos, por meio de rede de pesquisa desses novos portaenxertos em relao ao vigor, compatibilidade, produtividade, adaptao, resistncia a pragas e doenas, facilidade de multiplicao e qualidade dos frutos. Exemplos de programas de certificao de mudas frutferas Mudas ctricas certificadas Em funo da existncia de doenas transmitidas por insetos, como o caso da dorose-variegada-dos-citros (CVC), da tristeza e do cancro-ctrico transmitido pelo vento, o sistema de produo de mudas certificadas feito em telados com malha de 1 mm2 e com controles rgidos do trnsito de pessoas no local de trabalho. As estufas e telados devem ter pedilvio para desinfestao de calados, instalado na entrada da antecmara (Fig. 2). Plantas-matrizes so mantidas nessas estruturas, acondicionadas em potes apropriados, para fornecerem borbulhas para a enxertia, enquanto os porta-enxertos so obtidos de sementes certificadas. J a germinao feita em substrato esterilizado e sob telados isolados do cho, em bancadas apropriadas, at o momento da comercializao das mudas enxertadas. Para isso, so necessrios completa organizao e controle rgido na circulao de pessoas nos telados, para evitar a transmisso ou a contaminao das mudas por pragas e doenas (Fig. 3).

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Mudas frutferas de caroo As plantas bsicas so mantidas em telados prova de afdeos, para fornecerem o material bsico para a enxertia. Nos viveiros, no necessrio o uso de telados para obteno de mudas e manuteno de plantas-matrizes. Contudo, essas plantas devem ser acompanhadas e receber indexagem peridica (FACHINELLO et aI., 1995) (Fig. 4).

o porta-enxerto obtido a partir de sementes, na indstria conserve ira, no caso de mudas fiscalizadas. Para mudas certificadas, os porta-enxertos devem ser oriundos de pomares especficos com as cultivares Okinawa, Nemaguard e Nemared, entre outras, que possuem resistncia a fitonematides do gnero Me/oidogyne, mesmo quando propagadas por sementes. No entanto, a propagao clonal desses e de outros porta-enxertos a forma preferida em outras regies do mundo, pois oferecem amplas possibilidades de uso para fruteiras de caroo. Nas condies brasileiras, estudos para multiplicao e utilizao desses porta-enxertos necessitam ser realizados. As cultivares-copa, apesar de adaptadas s nossas condies, no sofrem nenhum tipo de controle gentico e sanitrio. Geralmente, os viveiristas no possuem campos de matrizes e, se possuem, no

129 fazem a indexagem peridica das mesmas. Nas frutferas de caroo, so conhecidas doenas de natureza virtica ou vrus assemelhados, que podem limitar o crescimento e o desenvolvimento das plantas, em especial PNRSV (vrus-da-mancha-anelarnecrtica de Prunus) e PDV (vrus-donanismo-da-ameixeira) no pessegueiro e na ameixeira. A doena chamada de sharkadas-frutas-decaroo, provocada pelo vrus PPV (P/um pox virus), muito comum na Europa, ainda no foi encontrada nas condies brasileiras. No caso da ameixeira, deve ser dada uma ateno especial doena chamada de escaldadura (Xylella fastidiosa) que compromete a produo e leva a planta morte. Foi verificado que a indexagem deve ser repetida com freqncia, no material amostrado, pois o tempo de incubao pode demorar longos perodos, e a distribuio da doena na planta no' uniforme. Por isso, essa espcie, obrigatoriamente, deve sofrer um controle efetivo ao longo do ciclo vegetativo, pois existem suspeitas de que a grande maioria das plantas cultivadas esteja contaminada por essa doena. Caso contrrio, ter-se- uma produo itinerante de ameixas. No viveiro, os cuidados devem ser tomados em relao escolha do local, evitando-se solos encharcados, mal drenados, pesados, infestados com prola da terra (Eurhizococcus brasiliensis), nematides (Mesocriconema xenoplax, Meloidogyne incognita e Meloidogyne javanica), bem como reas sujeitas a ventos ou que tenham sido cultivadas com rosceas nos ltimos 3 anos. O viveiro, a estufa e o telado devem ter pedilvio para desinfestao de calados, instalado na entrada (Fig. 2). Os produtores devem proceder desinfestao do material e dos equipamentos utilizados no viveiro, com formol a 2,5%, bem como desinfestao de pisos, paredes e bancadas com hipoclorito de sdio a 1 %, aps a retirada das mudas do viveiro, quando produzidas em estufa ou telado. De acordo com a Portaria 302/98, da Secretaria da Agricultura do Rio Grande do Sul, a condenao de viveiros e mudas de frutas de caroo ocorre conforme a Tabela 2. Padres de qualidade das mudas de frutos de caroo (Portaria 302/98, do Estado do Rio Grande do Sul) A seguir, sero apresentados alguns aspectos relacionados com as exigncias e etapas que devem ser observadas para produo de mudas de frutferas de caroo, que como exemplo podem ser adaptadas para outras espcies frutferas. Padres morfolgicos A enxertia deve ser feita entre 10 e 20 cm de altura, medidos a partir do colo da planta. Ser permitida a produo e a comercializao de mudas de estacas enraizadas da cultivar copa. Apresentar, a 5 cm acima do ponto de enxertia, um dimetro mnimo de 1 cm. No apresentar diferena de mais de 0,6 cm entre os dimetros do enxerto e do porta-enxerto, medidos a 5 cm do ponto de enxertia.

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Apresentar a haste principal com uma altura mnima de 50 cm, medidos a 25 cm do solo, sem apresentar partes lascadas. Apresentar uma nica haste ou com pernadas de comprimento mximo de 25 cm. Sem apresentar partes lascadas. Apresentar o sistema radicular bem desenvolvido, raiz principal com no mnimo 20 cm e razes secundrias abundantes, no enoveladas ou retorci das. O enraizamento ser de acordo com as caractersticas prprias de cada sistema de

131 produo, mas com razes bem formadas, no-enoveladas ou retorcidas. Ter, no mximo, 27 meses de idade. A muda de raiz nua deve ter razes protegidas com material no fermentvel e mido, e ser envolvida com camada vegetal ou com plstico perfurado ou com sacos de aniagem ou equivalente. Mudas produzidas para certificao, caso no atendam aos padres morfolgicos, mas atendam a todos os demais padres de qualidade definidos nas normas gerais e nessas normas especficas, podem ser comercializadas como "Muda fora de padro morfolgico". No se aplicam esses padres morfolgicos para comercializao de portaenxertos produzidos a partir de cultura de tecidos in vitro, quando o material pertencer ao programa de certificao de mudas. Se acordado entre as partes, e com o conhecimento prvio da Entidade Certificadora e Fiscalizadora - ECF -/ podem ser comercializados porta-enxertos produzidos a partir de enraizamento de estacas que no atendam a esses padres morfolgicos, desde que o material pertena ao programa de certificao de mudas. Nesse caso, as partes estabelecero, em contrato, o padro morfolgico do material e as disputas sero resolvidas com base no Cdigo de Defesa do Consumidor. Inspees obrigatrias Para o acompanhamento da produo de mudas e a garantia de qualidade das mesmas, a realizao de inspees torna-se obrigatria, nas seguintes fases: Na pr-enxertia - Inspecionar porta-enxertos e plantas-matrizes (registradas ou no) ou borbulheiras registradas. No perodo vegetativo. Na pr-comercializao. Tanto para a instalao dos viveiros em telado quanto para a instalao de viveiros a campo, exigida a implantao de quebra-ventos. Exigncias especiais para mudas do programa de certificao Plantas-matrizes registradas e borbulheiras tambm registradas devem ser inspecionadas, visualmente, no perodo de florao/incio de brotao e no final de vero/incio do outono e, de todas as plantas que se apresentarem suspeitas de infeco por vrus e assemelhados, ser suspensa a retirada de material. A indexagem feita para se verificar o estado sanitrio e se acusar a presena do agente patognico. O material deve ser eliminado o mais rpido possvel. Nos blocos para certificao, em cada uma das inspees obrigatrias devem ser coletados o solo e razes de 1 % das plantas (amostras oficiais), permitindo-se combinar no mximo 15 amostras para anlise da presena de nematides e Phytophthora spp. Coleta de borbulhas de plantas-matrizes registradas Sero permitidos, no mximo, dez cortes de plantas borbulheiras registradas para a coleta de material propagativo, e depois as plantas devem ser substitudas. Plantas-matrizes registradas devem ser reindexadas, no mximo, a cada 10 anos, se mantidas em telado e a cada 5 anos, se mantidas a campo. Se as plantas-matrizes registradas ou as borbulheiras registradas forem mantidas a campo, a cada ano ser feita a indexagem para deteco de PNRSV, PDV e Xylella fastidiosa. Em caso de suspeita de infeco por quaisquer vrus ou assemelhados, a reindexagem deve ser imediata e suspensa a retirada de material propagativo. Porta-enxertos Ser permitido o uso dos seguintes porta-enxertos: Aldrighi, BR-6, Capdeboscq, Flordaguard, Magno, Nemaguard, Nemared e Okinawa.

132 A propagao por sementes deve ser efetuada com caroos provenientes de pomares plantados com objetivo especfico, utilizando se plantas-sementeiras registradas, em locais isolados e protegidos com quebra-ventos. A propagao vegetativa pode ser feita por meio da tcnica de cultura de tecidos ou do enraizamento de estacas, retiradas de plantas propagadas de matrizes registradas. Copas Ser permitido o uso das seguintes cultivares: Ameixeiras - Amarelinha, Amrica, Frontier, Golden Japan, Irati, Letcia, Methley, Pluma 7, Quinze de Novembro, Reubennel, Rosa Mineira e Sinka. Nectarineiras - Anita, Branca, Cascata, Dulce, Linda, Mara, Sunblaze, Sungen, Sungold, Sunlite e Sunred. Pessegueiros - gata, Ametista, Bolinha, BR-l, BR-2, BR-3, BR-6, Cerrito, Chimarrita, Chinoca, Chirip, Charrua, Chula, Coral, Diamante, Eldorado, Flordaprince, Granada, Granito, Guaiaca, Jubileu, Leonense, Maciel, Magno, Marfim, Marli, nix, Pampeano, Pilcha, Planalto, Precocinho, Premier, Rio-grandense, Sentinela, Sinuelo, Turmalina, Vanguarda e Vila Nova. Sero sumariamente eliminados todos os blocos de mudas que apresentarem infestao por nematides do gnero Meloidogyne (causador de galhas), ou outra espcie de nematides danosos cultura, infestao por fungos dos gneros Phythopthora, Rhizoctonia, Armillaria, Sclerotium e Sclerotinia, infestao por prola-da-terra (Eurhizococcus brasiliensis), infeco por Agrobacterium ou infestao por tiririca (Cyperus rotundus).

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