EXTRAO DNA DE SALIVA EM SWAB (MTODO COM CHELEX 100)

DIANA RIBEIRO DIAS - 201211150016

INTRODUO
A saliva pode ser utilizada como fonte eficiente de DNA para tcnicas de
identificao humana; as quais so aceitas como prova legal; sendo o parecer do
profissional superlativo para a formulao da sentena. Esse material pode ser coletado
de maneira indolor e no invasiva e utilizado mesmo quando armazenado em diferentes
condies.
OBJETIVO
O objetivo da aula prtica foi aprender a tcnica de extrao DNA de salina em
SWAB pelo mtodo com CHELEX 100.
MATERIAIS

Chelex 100
gua estril
Proteinase K -10mg/ml
Chelex 5% (p,v) em gua estril

PROCEDIMENTO
Foram analisado 3 amostras de saliva dos alunos, onde utilizaram o swab na
boca de cada um, fazendo movimentos onde a saliva pudesse se fixar no swab.
Posteriormente transferiram o swab para um tubo de 2,0ml e foi adicionado 1 ml de
gua estril.
Logo a Temperatura/Tempo de incubao: TA por 30 minutos para soltar as
fibras do swab dentro do tubo, misturando por dois minutos para soltar as clulas, para
remover o swab do tubo. Foi levado para centrifugar por 3 minutos a 12000 rpm e
descartar 975 l da soluo.
Foi Ressuspendido o pellet com a pipeta nestes 25 l de soluo e adicionaram
200 l de Chelex 5%, depois adicionaram 2 l de proteinase K 10 mg/ml. Misturaram
levemente e incubaram na: Temperatura/Tempo de incubao: 56C por 15-30 minutos,
foi levado para vrtex por 5 a 10 segundos, novamente foi para centrifugar a 12000 rpm
por 10 a 20 segundos . A Temperatura e Tempo de incubao: ferver a 100 C por

8minutos (exatos) e levaram para o vrtex por 5 a 10 segundos e foi para centrifugar por
3 minutos a 12000rpm. Por fim o DNA extrado.
Observaes: O DNA pode ser armazenado por 1 dia no refrigerador ou
congelado (-15C a -25C) por mais tempo.
CONCLUSO
A aula prtica de biologia molecular que foi ministrada na POLITEC para que
se pudesse aprender a tcnica de extrao DNA de saliva em swab e tivemos um timo
resultado, onde mostrou que a quantidade e a qualidade do DNA advindo de saliva do
swab bucal, bem como as tcnicas empregadas esto adequadas anlise forense do
DNA. Portanto; a saliva humana bastante til como fonte de DNA e pode ser
armazenada; em temperatura e condies ideais; para anlise posterior.