CELMGEL

FILME DE AGAROSE GERAL

Filmes de agarose para separao eletrofortica de protenas e lipoprotenas. Somente para uso "in vitro". 12)Ler no scanner ou no densitmetro 520 nm. Pode-se ainda fazer a eluio das bandas com NaOH 2% (2 g NaOH em 100 mL H2O): recortar cada frao e colocar em 2 mL do eluente. Aps a dissoluo, ler a absorbncia em 580 nm.

* No reutilizar o tampo Materiais necessrios no fornecidos:

Artigo No 1801

10 x 10 Determinaes

Tampo Tris 9,5 CELM 1000mL Tampo Tris pH 9,5 Corante - Negro de Amido (Amido Black 10-B - art. 1810 - CELM) 0,1% em cido actico a 5%. Descorante - cido actico a 5%. VALORES DE REFERNCIA % g/dL Albumina 53,70 a 62,9 3,60 a 4,20 Alfa - 1 3,30 a 5,20 0,20 a 0,40 Alfa - 2 7,20 a 11,20 0,50 a 0,80 Beta 10,40 a 14,70 0,70 a 1,00 Gama 10,80 a 19,70 0,70 a 1,40 Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seus prprios valores de referncia.

I. PROTEINOGRAMA INTRODUO
A anlise do quadro protico-plasmtico importante, pois se podem diagnosticar vrias alteraes patolgicas. Entre os mtodos de qualificao e quantificao dessas protenas destaca-se a eletroforese, que se tem tornado um importante meio auxiliar de diagnstico na maioria dos laboratrios clnicos. A eletroforese permite uma avaliao aproximada das concentraes de vrias protenas importantes, cujas alteraes, seja de regulao de suas snteses, ou de seu maior consumo, podem refletir nas suas mobilidades eletroforticas ou nas suas concentraes.

REATIVO FORNECIDO:
Invlucro contendo 2 placas do reativo Agarose; Sacarose; lcool polivinlico 1,5%; Tampo Tris pH 9,5; Filme para Agarose e placa de Poliestireno.

ILUSTRAO DA SEPARAO DE PROTENAS PLASMTICAS

PRECAUES

Somente para uso diagnstico in vitro Conservar entre 2-8 at a data de validade. C

Nome: Paciente

Fraes 1 2 3 4 5 6

Conc. % 0,5 57,8 3,5 7,9 13,6 16,5

6.14 0,031 3,552 0,217 0,487 0,838 1,015

AMOSTRA

Usar soro fresco livre de hemlise por at 3 dias mantidos em geladeira (2 a 8oC). O congelamento desaconselhvel. 1) Colocar 80 mL de * tampo tris pH 9,5 gelado (2 a 8oC) , na cuba. 2) Aplicar 0,4 L de cada soro no filme de agarose. 3) Colocar o filme de agarose no porta-filme coincidindo os plos negativos do filme com a cuba. 4) Colocar o porta-filme na cuba e tamp-la. Deixar por 20 minutos a 100 volts. 5) Retirar a tampa da cuba e o porta-filme, colocando-a sobre uma folha de papel de filtro para eliminar o excesso de tampo das bordas do filme. 6) Retirar o filme do porta-filme. 7) Mergulhar o filme em 200 mL de corante por 5 minutos sem agitao. 8) Retirar o filme do corante e colocar em 200 mL de descorante por 5 minutos. 9) Retirar o excesso de descorante do filme e coloc-lo a 60oC (55oC a 65oC), at que o mesmo fique completamente seco. Sugerimos o uso de secador de cabelos com aquecimento. 10) Colocar o filme de agarose no descorante at o fundo ficar transparente. Se necessrio, trocar o descorante. 11) Secar a 60oC (55oC a 65oC) novamente.

PROCEDIMENTO

Grfico obtido no aparelho DS-35 Observaes

1.

Grfico obtido no sistema SE-250

Em mulheres usurias de contraceptivos orais e gestantes, os valores de albumina e gama-globulina apresentam-se ligeiramente inferiores aos intervalos apresentados. Pela mesma razo, as fraes alfa-1globulina, alfa-2-globulina e beta-globulina apresentam valores ligeiramente superiores aos intervalos citados (vide referncia bibliogrfica 2 no verso desta pgina).

II. LIPIDOGRAMA INTRODUO

As lipoprotenas do plasma sangneo so complexos macromoleculares constitudos de protenas e lipdeos, como triglicerdeos, colesterol e seus steres. Pela tcnica de eletroforese possvel separar quatro fraes principais de lipoprotenas: quilomcrons, beta, pr-beta e alfa.

Alfa - 20,0 a 35,0 % Pr-beta - 10,0 a 25,0 % Beta - 45,0 a 65,0 % Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seus prprios valores de referncia.

VALORES DE REFERNCIA

Usar soro fresco livre de hemlise, colhido em, no mximo, 12 horas. Deve-se evitar o congelamento da amostra, pois pode ocorrer degradao das lipoprotenas sricas, em especial se sua concentrao estiver aumentada.
Nome: Paciente Fraes 1 2 3 % 38.0 32.0 29.9

AMOSTRA

ILUSTRAO DA SEPARAO DE LIPOPROTENAS

1) Colocar 90 mL de * tampo tris pH 9,5 gelado (2 a 8oC), na cuba. 2) Aplicar 0,5 L de cada soro ou plasma recm-colhido livre de hemlise no filme de agarose. Aguardar alguns segundos para que o soro penetre no filme e aplicar mais 0,5L de amostra. 3) Colocar o filme de agarose no porta-filme coincidindo os plos negativos do filme com a cuba. Colocar o porta-filme na cuba e tamp-la. Deixar por 14 minutos a 100 volts. 4) Retirar a tampa e o porta-filme, colocando-o sobre uma folha de papel de filtro para eliminar o excesso de tampo das bordas do filme. 5) Retirar o filme do porta-filme. 6) Colocar o filme de agarose a 60oC (55oC a 65oC), at que o mesmo fique completamente seco. Sugerimos o uso de secador de cabelos com aquecimento. Este procedimento deve ser realizado antes da colorao do filme. 7) Colocar o filme de agarose seco sobre uma folha de papel de filtro e, com o auxlio de uma pipeta, colocar sobre o filme de agarose 5 mL de corante soluo trabalho. No tocar a superfcie da agarose com a ponta da pipeta. 8) Deixar corando de 2 a 3 minutos, at que o corante comece a precipitar e se torne azulado. 9) Mergulhar o filme de agarose no descorante (metanol 70%) at que o fundo se torne rosa claro (alguns segundos). 10) Retirar o filme de agarose do descorante e colocar numa soluo de glicerol a 2% por 15 segundos, SEM AGITAO. 11) Secar a 60oC (55oC a 65oC) novamente. 12) Ler no scanner ou no densitmetro 520 nm. Pode-se ainda fazer a eluio das bandas com gua/metanol/acetato de etila (2,5 / 7,0 / 0, 5, v/v): dissolver cada uma das fraes recortadas em 2 mL do eluente e ler a absorbncia em 530 nm.

PROCEDIMENTO

Grfico obtido no aparelho DS-35

Grfico obtido no sistema SE-250

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS a 1. Naoum, P.C. Eletroforese Tcnicas e Diagnsticos. 2 ed. So Paulo Livraria Santos Editora, 1999. 2. Rancharam, S., Sponzilli, E.E. e Wingerd, J.C. Serum protein fractions Effects of oral contraceptives and pregnancy. Obstet Gynecol, 48(2):211-5,
1976 AUG.

* No reutilizar o tampo. Materiais necessrios no fornecidos:

Corante - Fat Red 7 - B (art. 0775 - CELM) - 0,225 g/L em metanol p.a. (soluo estoque). Soluo trabalho - 10 mL da soluo estoque + 2 mL de NaOH 0,1N Descorante - Metanol 70%

CELM - Cia. Equipadora de Laboratrios Modernos. Al. Amazonas, 764 - Alphaville - Barueri - SP - CEP 06454-070 Fone: (11) 4133-5200 - Fax: (11) 4133-5237 CNPJ n 61.086.823/0001-76 - IND. BRAS. SACC (Servio de Atendimento ao Cliente CELM): 0800 770 3552

Reviso: P&D Maio/2003