MICROBIOLOGIA DA GUA

1. Microbiologia de efluentes - cintica 2. Eutrofizao 3. Bioindicadores - coliformes 4. Cianotobactrias - cianotoxinas 5. Biofilmes

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EUTROFIZAO

INTRODUO gua: componente de sustentao de vida na Terra

POLUIO

Prejuzo de um ou mais de seus usos ------ HOMEM

Preservao

Contaminao: agrcola: agrotxicos + estercos + fertilizantes

Composio: gases, sais slidos e ons

ORGANISMOS

municipal: lixo, esgoto, produtos txicos (chorume) industrial: resduos diversos TRMICA

POLUIO

Fitoplncton - Baleias

FSICA BIOLGICA QUMICA

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CONCEITOS EUTROFIZAO: processo de fertilizao em um sistema aqutico pela aumento da concentrao de elementos limitantes como P, N, C e, s vezes, K e Si. EU (bom ,verdadeiro) + TROPHEIN (nutrir) Eutrfico x Mesotrfico x Oligotrfico Eutrophication (introduzido em 1956) Eutrofizar x Eutroficar ? TIPOS DE EUTROFIZAO NATURAL: envelhecimento natural (milhares de anos) ARTIFICIAL (ANTROPOGNICA, CULTURAL): poluio (causas somente na dcada de 60)
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FATORES RELACIONADOS EUTROFIZAO FATORES NATURAIS Latitude (durao e incidncia da luz, T gua e ar) Vento (mistura parcial da massa de gua) Precipitaes (eroso-solo e escoamento-gua) Caractersticas da bacia (geologia-material de origem) Declive da bacia FATORES HUMANOS Poluio proveniente de dejetos e outras atividades FATORES ASSOCIADOS PRPRIA MASSA DE GUA Taxa de renovao das guas Sedimentos (C, N, P...)
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[P] da gua acima de 0,02 mg kg-1

EUTROFIZAO kg-1

Pesquisa: combinaes de nutrientes

[P] na soluo do solo para a planta: 0,1-0,3 mg ORIGENS DE N e P FONTES EXGENAS

Eroso, precipitao, lixiviao, resduos, esgotos, etc. NH4+, NO3-, PO43FONTES ENDGENAS Sedimentos (redissoluo) - decomposio de algas e liberao de P devido acidez gerada (redutor)

O PROCESSO DE EUTROFIZAO: EXEMPLO COM O P

P da superfcie Luz solar P fertiliza as algas de superfcie

Processos erosivos e enxurradas = P Multiplicao de algas na superfcie Morte da vegetao submersa (luz) - hbitat Decomposio de algas da superfcie Remoo de O2 da gua (produtos txicos) Elevao da concentrao de NH3 (txica) Morte de outros organismos aquticos

Penetrao de luz reduzida

Vegetao submersa reduzida

Plantas morrem. Quando se decompem, h depleo de O2

** P dos sedimentos = problema de longa durao ! (liberao por processos anaerbios - acidez)
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Morte de animais

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PROBLEMAS NORMALMENTE OBSERVADOS

NOTCIAS COMUNS EUTROFIZAO MATA LAGOAS EM AORES

Aumento dos custos de purificao Reduo do valor de recreao Perda de animais Efeitos sub-letais de toxinas no homem Bloom de algas (cianobactrias) - toxidez Perda de hbitats Morte de peixes e outros organismos aquticos

"So necessrias medidas drsticas, que vo atingir os agricultores e isso no d votos". Ceifeira + oxigenao ="pura cosmtica" Estudos recentes: reflorestamento, proibies, gado...

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NOTCIAS COMUNS COMPROMETIMENTO DE RESERVATRIOS EM SP E PR Reservatrios: PR e SP De 19 (PR): 12 moderadamente degradados e 5 criticamente degradados a severamente poludos IMPACTO AMBIENTAL DOS PESQUE-PAGUE Estudo: 42 em Mogi-guau (SP) - maioria familiar gua de descarte em sistemas de irrigao Educao ambiental! POLUIO ORGNICA EM RIO GRANDE/RS Esgotos domsticos clandestinos Estao de captao: eutrofizao acentuada
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PREVENO E CONTROLE
Poltica de reduo de aporte de nutrientes ($) Remoo de nutrientes no tratamento de esgotos EUA: efluentes urbanos (< 1 mg L-1 de fosfato) Como remover o excesso de P? 1) Precipitao qumica: caro, grande vol. decantado 2) Remoo Biolgica Avanada de Fosfato !!! - Microrganismos acumuladores de fosfato (polifosfato) Tratamento de lodo ativado: condio aerbia Se pH = 5,5-6,5 Remoo de 56 a 142% do fosfato (econmica ?)
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PREVENO E CONTROLE
Presena dentro da clula 3) Hidroponia: cultivo de plantas aquticas

Taboa (Typha) agente purificador: FILTRO VERDE Aguap (Eichhornia crassipes)

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Elevada absoro/remoo de nutrientes) Rpido crescimento (at 5% ao dia) Facilidade de retirada da gua Aproveitamento da biomassa Razes beneficiam microrganismos

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Aguap

Taboa

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VANTAGENS
Baixo custo Reduzidos gastos energticos Reciclagem da biomassa produzida Fertilizante, rao animal, gerao de energia Fabricao de papel Extrao de protenas para fazer raes Extrao de subst. estimulantes do crescimento vegetal Compostagem

DESVANTAGENS
Sistema de tratamento de rizofiltrao ex situ Criadouro de larvas de mosquitos e pernilongos Absoro de metais ou substncias txicas Grande quantidade de biomassa gerada Odores desagradveis
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AES DO DIA-A-DIA PARA EVITAR

plantio de espcies nativas (baixa exigncia nutricional) reciclagem de podas - reduo de fertilizantes fertilizao mnima (anlise do solo) utilizao de P de baixa solubilidade ou sem P compostagem e aplicao no solo utilizao de detergentes e outros livres de P economia de gua (ex.durante a irrigao) proteo do solo contra eroso (revegetao) coleta de estrume de animais de estimao lavagem de carro na grama e no na rua conscientizao de vizinhos e reunies...
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CONSIDERAES FINAIS
Poluio das guas em pases ricos = consumismo Em pases pobres = pobreza e educao Educao ambiental ! ... Brasil dispe de 15% de toda a gua doce do mundo Quanto melhor a qualidade da gua (preservao)

Melhor e mais barato ser o tratamento (sofisticao de metodologias....) - irracionalidade

De que adianta o progresso se no h qualidade de vida?

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REFERNCIA SUGERIDA
UFMG - Departamento de Engenharia de Transportes e Geoctecnia. Eutrofizao de corpos dgua: http://www.etg.ufmg.br/tim1/eutrofiz.doc
VON SPERLING, M. Introduo qualidade das guas e ao tratamento de esgotos. DESA-UFMG.1996

BIOINDICADORES DA QUALIDADE DA GUA

<Disponvel em maio de 2009>

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BIOINDICADORES DA QUALIDADE DA GUA

Importncia da gua vida Interesses diversos (demanda e escassez) Potabilidade: conjunto de parmetros e padres. Portaria MS no 518 (25/03/2004) Fsico-qumicos, organolpticos e microbiolgicos! Manuteno do padro e vigilncia da qualidade...

DOENAS PROVOCADAS POR AGENTES MICROBIANOS

Normalmente: gua + microrganismos de vida livre e no parasitria Ocasionalmente: microrganismos patognicos (vida limitada na gua) Agrupamento CLSSICO dos patognicos: VRUS, BACTRIAS e HELMINTOS agentes etiolgicos Ex. bactria (clera), protozorios (giardase), helmintos (tenase), etc. Outra classificao: AMBIENTAL nfase: vias de transmisso e ciclo do agente
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A GUA NA TRANSMISSO DE DOENAS

- PROVOCADAS POR AGENTES MICROBIANOS - PROVOCADAS POR AGENTES QUMICOS (agrotxicos e resduos industriais metais pesados) 25

GRUPO I: transmisso hdrica (PREVENO)

O agente est na gua: diarrias (clera, salmonelose), febres entricas (hepatite, febre tifide, ascaridase) = TRATAMENTO DA GUA

Principais doenas associadas com a gua

Doena Disenteria bacilar Clera Leptospirose Salmonelose Febre tifide Disenteria amebiana Giardase Bactria (Salmonella) Protozorio (Entamoeba) Protozorio (Giardia) Vrus (tipo A) Vrus Virus (Poliomielites) Agente causal Bactria (Shigella) Bactria (Vibrio) Bactria (Leptospira) Sintomas Forte diarria Diarria muito forte, desidratao, morte Ictercia, febre Febre, nusea, diarria Febre alta, diarria, ulcerao Diarria prolongada, sangramento Diarria leve a forte, indigesto, flatulncia Ictercia e febre Diarria leve a forte Paralisia 28 GRUPO I - Ingesto de gua contaminada

GRUPO II: transmisso relacionada com a higiene

Ex. escabiose = FORNECIMENTO DE GUA POTVEL

GRUPO III: baseada na gua (contato sem ingesto)

Contato com o agente que se desenvolve na gua Ex. esquistossomose = EDUCAO

GRUPO IV: inseto vetor procria na gua

Ex. dengue, malria, etc. = EDUCAO E RECONHECIMENTO DOS LOCAIS DE CRIAO
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Hepatite infecciosa Gastroenterite Paralisia infantil

Doena Escabiose Tracoma

Agente causal Sarna (Sarcoptes) Clamdea (Chlamydia)

Sintomas

GRUPOS II e III - Contato com gua contaminada lceras na pele Inflamao dos olhos, cegueira total ou parcial Diarria, aumento do bao e fgado, hemorragias Febre, suor, grave ou no Febre, dor forte de cabea, dores nas juntas e msculos, erupes Obstruo de vasos, deformao de tecidos Febre, dor de cabea, 29 prostrao, vmitos

AVALIAO DA POTABILIDADE
EXAME BACTERIOLGICO Identificao e quantificao dos agentes: IMPRATICVEL ANLISES TRABALHOSAS BAIXA DENSIDADE NA GUA (INTERMITENTE) Descoberta de microrganismos indicadores! Ex. Agentes patognicos no intestino (Grupo I) - fezes Deciso: anlise de outros habitantes no patognicos que esto em maior densidade... MONITORAMENTO DA QUALIDADE
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Verminoses Esquistossomose Helminto (Schistosoma)

GRUPO IV - Transmisso por insetos Malria Dengue Protozorio (Plasmodium) Vrus

Filariose Febre amarela

Helminto Vrus

MICRORGANISMOS INDICADORES (BIOINDICADORES)

MICRORGANISMOS DO GRUPO COLIFORME

Em grande quantidade nas fezes humanas Somente em fezes de animais de sangue quente Resistncia semelhante aos patognicos Identificao por tcnicas simples e econmicas Geralmente, inofensivo ao homem e outros animais

Tipos de microrganismos cuja presena na gua evidncia de que est poluda/contaminada com material fecal de origem humana ou de outros animais de sangue quente.

PRINCIPAIS SUBGRUPOS
COLIFORMES TOTAIS (CT): (inclui E. coli), Citrobacter, Serratia, Klebsiella, Enterobacter ... (35oC) Qualquer microrganismo patognico que ocorre no trato intestinal desses animais pode tambm estar presente
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COLIFORMES FECAIS (CF) (origem intestinal) - (44oC) ESTREPTOCOCOS FECAIS (EF): no rotina CF/EF > 4 (fecal - humano), CF/EF < 1 (fecal - outros)
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Padro microbiolgico de potabilidade da gua para consumo humano (Portaria 518/2004)

Origem gua para consumo humano em toda e qualquer situao, incluindo poos, minas, nascente e outras gua na sada do tratamento gua tratada no sistema de distribuio (reservatrios e rede): Recoleta no mesmo ponto + jusante + montante, no mnimo. No so tolerados valores positivos. Indicador E. coli Padro AUSNCIA em amostras 100 mL

Nmero mnimo de amostras mensais em sistema de distribuio (reservatrios e rede) para fins de anlises microbiolgicas (Portaria 518/2004)

POPULAO TOTAL
CT E. coli CT AUSNCIA em amostras 100 mL AUSNCIA em 100 mL Sistemas com + 40 am./ms: AUSNCIA em 100 mL em 95% das amostras examinadas no ms. Sistemas com at 40 am./ms: Mximo de 1 amostra positiva em 100 mL. Bactrias heterotrficas Menor que 500 UFC/mL em amostras 100 mL (*)

no amostras para CT 10 1 para cada 500 hab. 30 + (1 para cada 2.000 hab.) 105 + (1 para cada 5.000 hab.) Mximo de 1000

At 5.000 De 5.001 a 20.000 De 20.001 a 250.000 Acima de 250.000

Na sada de cada unidade de tratamento, devem ser coletadas, no mnimo 2 (duas) amostras semanais, recomendando-se a coleta de, pelo menos, 4 (quatro) amostras semanais. Amostras para CT devem ser retiradas no ponto de consumo (mnimo 3 pontos de consumo de gua), em quantidade de 1 para cada 500 hab, semanalmente. 34

(*) UFC = Unidades Formadoras de Colnias. Contagem realizada em 20% das amostras coletadas no ms. Se acima, recoletar, inspecionar e 33 tomar providncias.

Classificao dos corpos de gua superficiais (Cons. Nac. do Meio Ambiente/CONAMA Resoluo 357, 17/03/2005) gua Doce: salinidade 0,5%

Critrios para recreao de contato primrio, conforme CONAMA 274 de 29/11/2000 Recreao Excelente Muito boa Satisfatria Imprpria
a) Coliformes fecais (termotolerantes): bactrias do grupo dos CT, presena da enzima galactosidase, capacidade de fermentar a lactose com produo de gs em 24 horas temperatura de 44-45C. Alm de presentes em fezes humanas e de animais podem, tambm, ser encontradas em solos, plantas ou quaisquer efluentes contendo matria orgnica; b) Escherichia coli: bactria pertencente famlia Enterobacteriaceae, presena das enzimas galactosidase e -glicuronidase. Cresce em meio complexo a 44-45C, fermenta lactose e manitol. abundante em fezes humanas e de animais, tendo, somente, sido encontrada em esgotos, efluentes, guas naturais e solos que tenham recebido contaminao fecal recente; c) Enterococos: bactrias do grupo dos estreptococos fecais, pertencentes ao gnero Enterococcus, alta tolerncia s condies adversas de crescimento, tais como: capacidade de crescer na presena de 6,5% de cloreto de sdio, a pH 9,6 e nas temperaturas de 10 e 45C. A maioria das espcies dos Enterococcus so de origem fecal humana, embora possam ser isolados de fezes de animais. 36

CF E. coli Enterococos (termotolerantes) 250 500 1000 200 400 800 25 50 100

Classes Especial Classe 1

Usos preponderantes
Consumo humano com desinfestao, preservao das comunidades aquticas Abastecimento aps tratamento simplificado, recreao de contato primrio, proteo das comunidades aquticas, irrigao de hortalias e frutas rentes ao solo consumidas cruas Abastecimento aps tratamento convencional, aqicultura, irrigao de hortalias e frutferas e parques e jardins, proteo das comunidades aquticas, recreao de contato primrio Abastecimento com tratamento convencional ou avanado, irrigao de rvores, cereais e forrageiras, dessedentao de animais, pesca amadora, recreao de contato secundrio Navegao, paisagem 35

Classe 2

Classe 3

Classe 4

ANLISE BACTERIOLGICA DA GUA

AMOSTRAGEM: a) a amostra deve ser coletada em frasco esterilizado; b) a amostra deve ser representativa; c) contaminao deve ser evitada durante e aps a coleta; d) deve ser analisada logo aps a obteno; e) pode ser armazenada entre 0-10oC e utilizada o mais rpido possvel (24h). MTODOS: MTODO 1: CONTAGEM EM PLACAS MTODO 2: TESTES PARA O GRUPO COLIFORME MTODO 3: TECNOLOGIA DO SUBSTRATO DEFINIDO
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MTODO 1: CONTAGEM EM PLACA

Plaqueamento: 0,1 ou 1,0 mL de gua em meio gar e incubada por 48h a 35oC (bactrias heterotrficas) Portaria 518 (2004). Contagem das colnias: < 500 UFC/mL, sem discriminar as espcies (patognicas e saprfitas). Indicao: controle de processos como sedimentao, filtrao e clorao. Alterao: passar todo o volume de membrana filtrante colocar sobre saturada com meio de cultura e incubar. Contagem das colnias nas membranas. Vantagens: representa o total do volume de gua, resultados rpidos, usando meios seletivos possvel identificar tipos diferentes de bactrias. 39 gua em almofada

MTODO 1: CONTAGEM EM PLACA

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MTODO 2: TESTES PARA O GRUPO COLIFORME

1) Teste presuntivo (inoculao em caldo lactosado): presena de gs (teste + para coliformes) 2) Teste confirmativo: do caldo lactosado para a) caldo lactosado verde-brilhante bile (CLVBB) ou b) gar eosina azul de metileno (EMB). Se formou gs em (a) o teste +. Em (b): colnias caractersticas: E. coli so pequenas, escuras com centro quase negro e brilho metlico esverdeado. 3) Teste completo: As colnias tpicas do EMB so selecionadas e inoculadas em: a) caldo lactosado (deve produzir gs) b) gar inclinado (fazer teste de Gram: Gram-, bacilos no esporulados).

MTODO 2: TESTES PARA O GRUPO COLIFORME

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MTODO 3: COLILERT PRESENA/AUSNCIA OU QUANTIFICAO DE COLIFORMES TOTAIS e E. coli

Resultados confirmados em 24h Aprovaes internacionais (mtodo padro no Standard Methods for Water and Wastewater, 19a ed.) Aprovao no Brasil: Secretarias de Sade, laboratrios de pesquisa, universidades, companhias de saneamento Facilidade de execuo e leitura Tempo de manipulao da anlise: menor que 1 min Detecta coliformes totais e E. coli (contaminao fecal) simultaneamente em 24h No h necessidade de confirmao No h manipulao de vidrarias ou contagem de colnias Elimina interpretao subjetiva das cores de colnias Detecta 1 coliforme em 100 mL de amostra 43

COLILERT TECNOLOGIA DE SUBSTRATO DEFINIDO

Anlise simultnea de Coliformes Totais e E. coli Fontes de C: -d-galactopiranosideo+o-nitrofenil (ONPG) = COLIFORMES TOTAIS -d-glucoronideo + 4-metil-umberliferil (MUG) = E. coli Enzimas: -D- Galactosidase (ONPG) -D-Glucoronidase (E. coli)

A maior parte dos microrganismos no-coliformes NO possui estas enzimas Os demais so inibidos pelos antibiticos do meio
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CT

AMARELO

FLUORESCENTE

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AUSNCIA PRESENA

QUANTIFICAO

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SISTEMA SEMI-AUTOMTICO PARA CONTAGEM DE BACTRIAS Adio do substrato amostra (100 mL): pura ou diluda Agitao at dissolver o substrato Colocao da amostra+substrato em cartela especfica Seladora: distribuio simultnea das amostras em cubos Incubao: estufa bacteriolgica a 35oC por 24h Contagem dos cubos amarelos (maiores e menores) nmero mais provvel (NMP) de Coliformes totais Exposio da cartela luz UV: contagem dos fluorescentes NMP de E. coli (contaminao fecal)
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OUTROS BIOINDICADORES DA QUALIDADE DA GUA

Nocivas em sistemas de abastecimento (odor, cor, gosto ...) - EXEMPLOS 1) BACTRIA OXIDANTE DE FERRO E MANGANS gua de cor marrom e mau cheiro 2) BACTRIA REDUTORA DE SULFATO gua com cheiro de ovo podre Criptosporidium: resiste ao cloro (diarria e cibras) 3) BACTRIAS HETEROTRFICAS: lceras, cansao, cncer (idosos e crianas): <500 UFC mL-1 (35oC/48h) Pseudomonas aeruginosa: teste para desinfestao de piscinas, spas, etc. Helicobacter pylori: 90% das lceras (cloro destri)
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REFERNCIA SUGERIDA
PORTARIA MS no 518, de 25/03/2004
Estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de potabilidade, e d outras providncias.

CIANOTOXINAS E SUAS IMPLICAES

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1. OCORRNCIA E HBITAT DAS CIANOBACTRIAS Cianobactrias: bactrias aerbias fotoautotrficas

2. OCORRNCIA DE FLORAES DE CIANOBACTRIAS

Agroindstria + fertilizantes + urbanizao Origem: cerca de 3,5 bilhes de anos (fsseis) Esgotos e resduos industriais e agrcolas Pioneiros na Terra (produtores, liberao de O2) EUTROFIZAO ARTIFICIAL (P) Crescimento em diversas condies: rochas e solos = liquens (fungo e cianobactria) Resposta rpida = FITOPLNCTON gua doce = pH 6-9, T 15-30oC e [N e P]
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Floraes (Blooms): crescimento na superfcie

algas + cianobactrias

perda da diversidade
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3. TOXINAS DE CIANOBACTRIAS Diversos gneros e espcies (blooms) = cianotoxinas Fonte de produtos naturais txicos

Ao:

rpida (neurotxicos) - NEUROTOXINAS lenta (hepatotxicos) - HEPATOTOXINAS

Efeitos na sade (crianas e imunodeficientes): Exposio primria: consumo, recreao e remdios Exposio secundria: resduos em frutas e verduras, consumo de carne (tecido animal)
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Neurotoxinas: Sistema nervoso, pele, fgado e sistema gastrointestinal Paralisia muscular, convulso e morte

NEUROTOXINAS (alcalides): Gneros: Anabaena, Aphanizomenon, Oscillatoria, Trichodesmium e Cylindrospermopsis = 5 TIPOS

ANATOXINA-A (primeira toxina identificada) Hepatotoxinas: tumor, cncer, prostrao, anorexia, vmitos, dores e diarria Potente bloqueador neuromuscular Animais: desequilbrio, respirao ofegante e convulses. Morte por parada cardaca (poucos min). DL50 intraperitoneal em camundongos: 200 mg/kg Sobrevivncia: 1 a 20 min (toxina purificada) Doses orais: mL a poucos L de gua

Microcistinas e Nodularinas: Inibio de enzimas fosfatases, promotores de tumores no fgado. Cilindrospermopsinas: inibio de sntese protica, efeitos txicos no fgado, rins, bao, corao e outros.
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ANATOXINA-A(S): presena de organofosfato (toxina estruturalmente nica), com efeitos mais duradouros. Sintomas anteriores + salivao

ANATOXINA-A(S)

NEUROTOXINAS

DL50 intraperitoneal = 20mg/kg (10x + potente)

ANATOXINA-A

SAXITOXINA - inibio da conduo nervosa 50x mais letal que estriquinina 10.000x mais mortal que os cianetos Gneros: Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbia e Cylindrospermopsis

SAXITOXINA

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HEPATOTOXINAS (peptdeos cclicos): Tipo mais comum de intoxicao (tumor, cncer) Morte em poucas horas ou poucos dias Hemorragia intra-heptica (arquitetura do fgado) Gneros: Microcystis, Anabaena, Nodularia, Nostoc, Cylindrospermopsis

Microcistinas e Nodularinas (principais) DL50 intraperitoneal: 60-70 mg/kg (microcistinas) DL50 intraperitoneal: 50-200 mg/kg (nodularinas) Recentemente: cilindrospermopsina
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ESTRUTURA QUMICA DE HEPATOTOXINAS

reas de ocorrncia: Anatoxina-a: EUA, Canad, Europa e China Anatoxina-a(s): EUA, Canad, Europa Saxitoxina: EUA, Austrlia, Brasil, Europa (Portugal) Cilindrospermopsina: EUA, Austrlia, Brasil, Japo, Israel, Europa Microcistina: EUA, Austrlia, Canad, Europa e China Lingbyatoxina: EUA, Austrlia, Ilhas do Pacfico

Microcistinas (+65 variantes): gua doce (Microcystis, Anabaena, Oscillatoria, Nostoc, Anabaenopsis) Nodularinas: gua marinha (Nodularia)
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4. EVIDNCIAS DE INTOXICAES HUMANAS Descritas na Austrlia, Inglaterra, China e frica do Sul. 1988: correlao entre floraes em Itaparica (BA) e morte de 88 pessoas (das 200 intoxicadas)

1996: pacientes submetidos hemodilise em Caruaru (PE) - 123 pacientes com hepatoxicose (54 mortes aps 5 meses do incio dos sintomas) - gua no bem tratada (Cl no prprio caminho)

Anlises em laboratrios brasileiros e americanos: presena de MICROCISTINAS no carvo ativado e em amostras de sangue e fgado dos pacientes.
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5. FATORES AMBIENTAIS QUE INFLUENCIAM A PRODUO DE CIANOTOXINAS

6. NORMA DE QUALIDADE DA GUA PARA CONSUMO HUMANO, NO BRASIL Portaria MS no 518 (25/03/2004)

Variaes temporais, sazonais, anuais e espaciais Alteraes: cepas txicas e no txicas (populao)

Microcistinas: padro < 1,0 g/L Aceitam-se at 10 g/L em at 3 amostras consecutivas ou no, em 1 ano. Recomendao: cilindrospermopsinas e saxitoxinas, com limites de 15 e 3 g/L, respectivamente Anlise: bioensaios em camundongos (OMS) Freqncia: Semanal, se > 20.000 cl./mL e no usar algicidas no controle (lise e liberao de microcistinas) Mensal, se < 10.000 cl./mL
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Questes: 1. Existem cepas geneticamente distintas que no produzem toxinas? OU 2. Fatores ambientais (luz, T, nutrientes) regulam a sntese destas toxinas?

** Cerca de 50% de floraes testadas = TXICOS!

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Padres internacionais: Anatoxina-a: Austrlia (3 g/L) Saxitoxina: Austrlia (3 g/L) Cilindrospermopsina: Austrlia (1-15 g/L) Microcistina: OMS e Brasil (1 g/L) Austrlia (1,3 g/L) Canad (1,5 g/L)

7. AVALIAO: mtodos para deteco No universal devido estrutura diversa...

Anatoxina-a: bioensaios, cromatografia Anatoxina-a(s): bioensaios com rato, enzimas e cromatografia Saxitoxina: bioensaios com rato, imunoensaio e cromatografia

EUA no h padres estabelecidos !

Cilindrospermopsina: bioensaio e cromatografia Microcistina: bioensaio, imunoensaio, fosfatase e cromatografia

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8. TRATAMENTO PARA REMOO DE CIANOBACTRIA E TOXINA Tratamento convencional (coagulao/floculao/sedimentao) Filtrao lenta em areia Carvo ativado granular (p) Mais eficientes aps tratamento convencional

Resumo de tratamentos para cianotoxinas: Anatoxina-a e Anatoxina-a(s): C ativado, O3 e Cl Saxitoxina: C, aquecimento, O3 e Cl (pouco eficiente) Cilindrospermopsina: filtrao, C, Cl, O3 Microcistina: Cl, filtrao, O3 e C Nodularina: Cl, filtrao, O3, C Estudos: degradao microbiolgica... C ativado: eficincia inversa [COD]

Microfiltrao (nano) Oxidantes no clorados (O3) Coagulao/sedimentao/filtrao: remoo de 9099% das bactrias. No remove toxinas (importante quando as mesmas esto restritas na clula-microcistinas), mas no para cilindrospermopsinas (liberadas)
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Oxidao qumica: inativa as toxinas, mas podem surgir outras mais potentes (estudos?) Microfiltrao: remove, mas so caros e o retido extremamente txico
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9. CIANOBACTRIAS E O AMBIENTE
1) Liberao de toxinas: senescncia, morte ou lise so mais importantes que a excreo contnua Quanto mais velho o bloom: > [toxinas] Microcistinas: estveis e resistentes (meses a anos) Anatoxina-a: rpida degradao fotoqumica (alcalino) Cilindrospermopsina: lenta quebra a 50oC. Luz solar quebra em 2-3 dias (90% do total) 2) Aps liberao: Adsoro: <20% em partculas slidas Sedimentao: poucos estudos (liberao posterior) Percolao: f(tipo de argila, CTC, ctions, etc.) 3) BIODEGRADAO: estudos? Bactrias aquticas comuns (Sphingomonas, Pseudomonas, etc.): 2 a 10 dias f(temperatura da gua, [toxinas], clima e corpo aqutico)
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10. CONSIDERAES FINAIS Evitar eutrofizao (Programas de monitoramento) Melhoria nas tcnicas de tratamento de gua Centros de hemodilise e de injetveis Portaria MS no 518 (25/03/2004): CIANOTOXINAS

Seleo para estudos: (I) Prioridade mxima: microcistina, cilindrospermopsina e anatoxina-a (II) Mdia a alta prioridade: saxitoxina e anatoxina-a(s) (I) Mais estudos necessrios: nodularina e lingbyatoxina
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11. REFERNCIAS Revista Virtual de Medicina (v.1, n.3, ano I, jul-set 98) Profa. Dra. Sandra M.F.O. Azevedo (UFRJ)
http: //www.medonline.com.br/med_ed/med3/microcis.htm
Anabaena

<disponvel em maro de 2006>

Aphanizomenon

Portaria MS no 518 (25/03/2004) de qualidade da gua

http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/mnl_ci ano_bacterias.pdf <disponvel em maro de 2006>

75 Cilindrospermopsis 76

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BIOFILMES
Lyngbya Microcystis wesembargii

Microcystis aeruginosa

Planktothrix 77 78

1) O QUE SO BIOFILMES? Complexos ecossistemas microbiolgicos embebidos em uma matriz de polmeros orgnicos, aderidos a uma superfcie (onde h contato com gua). Considerar: 106 a 107 clulas aderidas cm-2 Ex. placas dentrias, limo em rochas de rios, etc. 2) PORQUE ESTUDAR BIOFILMES? Bactrias patognicas - DOENAS Yersinia enterocolitica, Salmonella thyphimurium, E. coli O157:H7, Staphylococcus aureus e Bacillus cereus Problemas de sade pblica e de ordem econmica: Pseudomonas aeruginosa, P. fragi, P. fluorescens, Micrococcus sp e Enterococcus faecium Corroso em sistemas (tubulaes) de metal
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Clula bacteriana com polmeros extracelulares, os quais concentram nutrientes e a protegem de agentes biocidas

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20

3) BENEFCIOS S BACTRIAS: ALIMENTO E PROTEO Mecanismo de sobrevivncia - ADERNCIA nutrientes e proteo contra biocidas

NUTRIENTES: gua potvel: baixa quantidade de nutrientes Como o biofilme ajuda as bactrias obterem nutrientes? Bactrias em biofilmes se unem em uma rede de fibras de polissacardeos a) [ ] de substncias orgnicas nas superfcies b) polmeros extracelulares concentram nutrientes c) colonizadores secundrios usam resduos vizinhos d) diferentes enzimas - comunidade complexa
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PROTEO CONTRA BIOCIDAS: Pode ser 150 a 3000 x mais resistentes ao Cl que a isolada (livre na gua) Resistncia em f (rede de polissacardeos) - escudo Estudos: aumento exopolmeros quando biocidas!

Alta [] nutrientes: reproduo de clulas pioneiras e nova produo de polmeros (gelatinosa e lisa) Biofilme maduro: 75 a 95% do volume do tubo COLONIZAO SECUNDRIA: Uso de resduos gerados pelos colonizadores primrios

4) PASSOS PARA A FORMAO DO BIOFILME SUPERFCIE: adeso de partculas orgnicas ADESO de bactrias pioneiras: atrao eletrosttica e foras fsicas FORMAO DO LIMBO (slime): cimentao das clulas s superfcies e sistema de troca de ons (nutrientes)
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Novos resduos formados BIOFILME FORMADO E FUNCIONAL Tecido vivo na superfcie

COMUNIDADE

Comunidade de dif. espcies (aerbio e anaerbio) Horas ou semanas para desenvolver Ex. P. aeruginosa = 30s de exposio (pioneira)
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Consrcio bacteriano

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5) NOVAS DESCOBERTAS Antigamente: crescimento descontrolado (sem estrutura) Atual: estrutura complexa (cidade), com clulas geneticamente distintas (protenas da parede celular alteradas - dificulta a morte por antibiticos)

EVOLUO BACTERIANA: Bactrias mveis Mecanismos para alterar a parede celular (tornou-se hidrofbica) e aumentar a afinidade por superfcies (e encontrar nutrientes) Colonizao desuniforme por bactrias resulta em pontos diferentes de aerao - potencial eltrico
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6) FATORES QUE CONTRIBUEM PARA A FORMAO a) Superfcie do material: pouco efeito (ao, plstico)

b) rea superficial: > rea > formao (chance >)

c) Uniformidade: pouco efeito de irregularidades

d) Velocidade de fluxo: > fluxo < espessura biofilme

Modelo da arquitetura de um biofilme com espcies bacterianas simples - estrutura complexa

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e) Limitao de nutrientes: < nutrientes < biofilme 1ppb MO produo de 9.500 bactrias mL-1
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Rugosidade de ao e clulas de Pseudomonas (0,3-0,8 x 1,0-1,2 m)

leite, alimento e farmacuticos

gua pressurizada

tubo polido 91

Espessura do biofilme em funo da velocidade de fluxo

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Fontes de nutrientes C orgnico: cidos flvicos e hmicos, solventes, plsticos de fibra de vidro, lubrificantes, produtos microbianos, poeiras do ar Nitrognio: N hmico e cidos flvicos, nitratos e nitritos, produtos microbianos, poeiras do ar Fsforo: fosfatos na gua, produtos microbianos, poeiras do ar Enxofre: sulfatos, cido sulfrico, surfactantes, poeiras do ar Elementos-trao e sais: tubulao, fibras-de-vidro, ao, tratamento qumico, poeiras do ar

7) REMOO E DESTRUIO DE BIOFILMES

Tratamentos:

qumicos - oxidao ou no oxidao fsicos - gua quente e esfregao

BIOCIDAS OXIDANTES a) CLORO: mais eficiente e mais barato morte de clulas livres e de biofilmes destruio da rede de polissacardeos se alta [Cl]: melhor e mais rpido - difuso cuidado com corroso pelo prprio cloro
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b) DIXIDO DE CLORO (ClO2): instvel, efeito semelhante, corrosivo, cuidado no manuseio

BIOCIDAS NO OXIDANTES a) COMPOSTOS QUATERNRIOS DE AMNIO: surfactantes eficientes na remoo exige muitas aplicaes para remoo

c) OZNIO (O3): 2x mais oxidativo que o cloro instvel (aplicao in situ) baixa solubilidade materiais devem ser resistentes ao oznio b) FORMALDEDO: sistemas farmacuticos relativamente no corrosivo ao ao efeito questionvel e carcinognico TRATAMENTO FSICO CALOR: gua quente (mais 80oC) para matar bactrias ------ 95oC por 100min No usado em gua potvel !
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d) H2O2 10%: menos eficiente e mais caro que o cloro usado em sistemas microeletrnicos

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8) DETECTANDO E AVALIANDO BIOFILMES CONTAGEM EM PLACAS: volume conhecido de amostra Subestima: bactrias livres (99% esto aderidas) bactrias que sobrevivem no meio de cultura estado vivel e no cultivvel VISUAIS E NO VISUAIS VISUAIS: microscopia (contraste, epifluorescncia e eletrnico) - adeso, interaes com a matriz NO VISUAIS: IMPEDNCIA - alterao da condutividade (turvao) BIOLUMINESCNCIA - mede ATP extracelular gerado
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Vista de biofilmes em microscopia ptica e eletrnica

9) O QUE FAZER? Bactria: evoluo para ADESO e PROTEO Combinao de estratgias: satisfazer as normas!

PURIFICAR SEMPRE! reduz nutrientes (qualidade) AUMENTAR O FLUXO! reduz a espessura e zonas anaerbias e facilita a penetrao de biocidas REDUZIR AS FISSURAS! reduz biofilme e facilita ao de biocidas USAR BIOCIDAS SEMPRE! Exemplo de aplicao de biocidas e nova formao do biofilme
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ESTUDOS MULTIDICIPLINARES

Etapas de desenvolvimento de um biofilme:

CIENTISTA DE COMPUTAO

ENGENHEIRO

BIOFILMES

QUMICO

MICROBIOLOGISTA

101

BIOFILME

102

Concentrao de Oxignio

BIOFILME

103

104

26

Dinmica de Crescimento

Porosidade

105

BIOFILME

106

Quorum Sensing

Exemplos:
Biofilme em dentes

BIOFILME

107

BIOFILME

108

27