ELETROPORAO: UMA REVISO

ELECTROPORATION: A REVIEW
Revista Fisioterapia Ser Ano 2 Nr 2 abr/mai/jun 2007
1

Fernanda Fernandes Iorio, 1Camilla lvares Di Stasi, 2Fbio dos Santos Borges

Programa de ps-graduao lato sensu em Fisioterapia Dermato-Funcional da Universidade Gama Filho So Paulo-SP Mestre em Cincias Pedaggicas, docente da Universidade Estcio de S-RJ e Universidade Iguau-RJ, fisioterapeuta do Hospital Central do Exrcito. Endereo para correspondncia: Fernanda Fernandes Iorio, Rua Nova Jerusalm, 281 ap.64 Tatuap 03410-000 So Paulo-SP. Tel.: (11) 6941-1092 / 9954-7382, E-mail: fernanda.iorio@terra.com.br RESUMO Eletroporao consiste na aplicao de pulsos eltricos curtos de alta voltagem que aumentam o potencial de transporte de membrana, promovendo uma formao transitria de poros aquosos (aquaporinas) na bicamada lipdica, permitindo que macromolculas migrem atravs desses poros. A eficcia do transporte depende dos parmetros eltricos (freqncia de pulso, formato de onda, intensidade do campo eltrico e outros) e das propriedades fsico-qumicas das drogas. Este estudo aborda os princpios da eletroporao, assim como suas possibilidades de aplicao prtica, atravs de uma reviso da literatura. As aplicaes prticas variam desde transferncia gentica para plantas, bactrias, leveduras, at transporte de quimioterpicos. Recentemente, a eletroporao foi inserida no mercado esttico como um mtodo capaz de permear uma ampla gama de ativos em grandes concentraes. Entretanto, a prtica desta tcnica carece de respaldo cientfico que valide seu mtodo de aplicao. Nesta reviso, verificamos a necessidade da realizao de estudos prticos detalhados, envolvendo os produtos transdrmicos e os equipamentos utilizados nas reas de Esttica e Fisioterapia Dermato-Funcional. Palavras-chave: eletroporao, princpios fsicos, transdrmica. ABSTRACT Electroporation is the application of short-high voltage pulses that increase the transmembrane potential, promoting the formation of temporary aqueous pathways (pores) in lipidic bilayer, allowing that molecules driven processes allowing passage through this pores. The efficacy of drive depends of the electric parameters (frequency of pulse, type of wave, electric field power and others) and of chemical-physical proprieties of the drugs. This study broaches the principles of electroporation and the possibilities of practical application, through a literature review. The
2

2 practical applications go from genetic transfer to plants, bacteria, yeast, to transfer of cytotoxic drugs. Recently, the electroporation was inserting in esthetic market like a method able to load a variety of different molecules in high concentration. However, the practice of this technique lack of scientific dates that proves your applications method. In this review, we check that there is the necessity of do detailed practical studies, involving the transdermic products and the equipments used in field of Esthetic and Physiotherapy. Key-words: electroporation, physical principles, transdermical. INTRODUO A pele representa uma importante barreira para a permeao de ativos, contidos em medicamentos de uso tpico, cosmticos e, mais recentemente, em cosmecuticos. A camada mais externa da pele, o extrato crneo, usualmente a principal barreira para a penetrao de medicamentos 1. constituda por vrios planos de clulas mortas intimamente ligadas, e por uma matriz extracelular composta por uma bicamada lipdica, formada primariamente, por ceramidas, colesterol e cidos graxos 2. O passo determinante da absoro cutnea a permeao atravs do estrato crneo. Teoricamente, existem, ento, duas vias potenciais de passagem: a transcelular e a intercelular. Contudo, em ambas as vias de permeao, a estrutura do estrato crneo obriga o frmaco a se difundir atravs das bicamadas lipdicas intercelulares 3. Com o objetivo de facilitar a permeao cutnea, vrios mtodos para remover reversivelmente a resistncia desta barreira tm sido investigados, como o uso de tensoativos, lipossomas, ou mtodos eletrotermoteraputicos, tais como a iontoforese, a fonoforese e, mais recentemente, atravs da eletroporao. A iontoforese utilizada h mais de meio sculo, tendo sido mencionada na literatura desde o sculo XVIII. capaz de aumentar a penetrao de substncias polares atravs da pele sob um gradiente potencial constante 4. Isto ocorre devido capacidade das cargas eltricas de mesma polaridade repelirem-se entre elas, atravs da aplicao da corrente galvnica 5. A fonoforese ou sonoforese um termo que descreve a habilidade do ultra-som em incrementar a penetrao de agentes farmacologicamente ativos atravs da pele. Atualmente, o transporte de substncias mediado por ultra-som tido como um mtodo eficiente de administrao localizada de drogas, genes e outros compostos atravs das clulas e tecidos 4,5. A eletroporao designa o uso de pulsos curtos (microssegundos a milisegundos) de alta voltagem, que ultrapassam a barreira da membrana celular, promovendo um rearranjo estrutural desta membrana e, tornando-a altamente permevel a molculas exgenas, presentes no meio externo. Um progresso significante tem sido obtido adotando a hiptese de que um destes rearranjos consiste na formao de canais aquosos temporrios (poros), por um campo eltrico, capazes de potencializar o transporte inico e molecular atravs da membrana 2,6,7,8,9,10. O fisioterapeuta, assim como a esteticista, tem feito o uso contnuo das tcnicas de iontoforese e fonoforese, objetivando permear cosmecuticos e frmacos, em regies delimitadas. Recentemente, a eletroporao foi inserida no mercado esttico como um mtodo revolucionrio e no-invasivo, capaz de permear uma ampla gama de ativos em grandes concentraes. Entretanto, a prtica da tcnica na esttica carece de respaldo cientfico que valide seu mtodo de aplicao. Em virtude do nmero de artigos publicados envolvendo o uso da eletroporao, seu uso tem crescido de maneira exponencial, desde meados de 1980 e, consequentemente, pela existncia de uma forte necessidade de se compreender os conceitos da eletroporao. Este estudo tem por objetivo abordar os princpios da eletroporao, assim como suas possibilidades de aplicao prtica, descritos na literatura.

3 MATERIAIS E MTODOS O levantamento bibliogrfico abrangeu peridicos, resgatados atravs da Internet, via Bireme/ MedLine e Lilacs, alm de acesso a sites especializados no assunto, onde foram cruzadas as palavras-chave: eletroporao / electroporation; liberao transdrmica de drogas / trandermal drug deliver; e permeabilizao transcutnea / permeabilization transcutaneous. A reviso tambm contou com livros, pesquisados na Biblioteca de Qumica da Universidade de So Paulo-USP e, livros de acervo particular. A pesquisa foi realizada no perodo de Novembro/2004 a Maio/2006, onde foram selecionados materiais datados de 1985 a 2005. RESULTADOS Baseado nos estudos tericos e experimentais com a bicamada das membranas celulares nos anos de 1960 e 1970, a primeira publicao de transferncia gentica em clulas de rato, realizada em uma cmara construda para a eletroporao, foi descrita por Neumann et al. em 1996 11. Nesta fase inicial alguns pesquisadores usaram um aparato de circuitos curtos de eletroforese, como um equipamento de eletroporao primitivo 9. O uso da eletroporao popularizou-se, durante a dcada de 1980, onde diversos estudos do uso da eletroporao para carrear molculas para clulas eucariontes in vitro foram publicados; no incio dos anos 90, estudos de eletroporao in vivo tambm foram relatados 9. Inicialmente desenvolvida para a transferncia gentica, foi ento usada para carrear uma ampla variedade de molculas: de ons a drogas, pigmentos, anticorpos e oligonucleotdeos para DNA e RNA. Aps o primeiro relato do uso clnico da eletroporao, inmeros estudos tm reportado o uso desta tcnica para o transporte de quimioterpicos (eletroquimioterapia) em pacientes com cncer. A eletroquimioterapia consiste na aplicao de pulsos de alta voltagem para permeabilizar drogas citotxicas impermeveis (bleomicina e cisplatina) em clulas tumorais e, tem se mostrado mais eficaz que a quimioterapia isolada na eliminao de tumores locais, como os de pele, por exemplo. Inicialmente, os processos de eletroporao causaram considervel leso celular. Nas ltimas dcadas, observou-se o aprimoramento da tcnica, com a sofisticao dos equipamentos e otimizao dos protocolos 8,9,10,12. A eletroporao consiste na aplicao de pulsos eltricos de alta voltagem que aumentam o potencial de transporte de membrana, promovendo uma formao transitria de um poro, pelo aumento do momento dipolar das cabeas lipdicas hidroflicas, permitindo que macromolculas carregadas migrem atravs dos poros e, eventualmente alcancem o ncleo, onde podem promover transformaes genticas 13,14. um mtodo no-invasivo, no-qumico e, no altera a estrutura biolgica ou funo das clulas-alvo 6. Sua aplicao na pele tem mostrado aumentar o transporte transdrmico de drogas em diversas ordens de magnitude. Alm disso, a eletroporao, usada sozinha ou em combinao com outros mtodos, aumenta o alcance de drogas (pequenas ou macromolculas, lipoflicas ou hidroflicas, molculas polarizadas ou neutras), que possam ser transportadas via transdrmica. A eficcia deste transporte depende dos parmetros eltricos e das propriedades fsico-qumicas das drogas. O pulso de alta voltagem in-vivo bem tolerado, mas contraes musculares so geralmente induzidas. O eletrodo e o design do aplicador so importantes para reduzir o desconforto do tratamento eltrico em humanos 10. A base do fenmeno da eletroporao , razoavelmente, bem conhecida, entretanto mecanismos moleculares, nos quais campos eltricos interagem com a membrana celular, permanecem em investigao. Basicamente, o potencial de membrana induzido pela aplicao de um campo eltrico externo. O campo eltrico , geralmente, induzido por um pulso relativamente

4 curto. Existem dois tipos de ondas (Figura 1), que pode ser onda quadrada, usualmente com durao menor que 100s, onde sua voltagem e durao permanecem constantes em qualquer que seja a pele ou depsito da droga. O pulso tambm pode ser de onda exponencialmente decrescente, com uma durao na ordem de milisegundos. O pulso de onda quadrada usado para obter o melhor controle e melhor reprodutibilidade do transporte da droga. A onda exponencial decrescente apresenta vantagens, pois mantm ou expande o estado de alta permeabilidade da pele induzido pela eletroporao e, promove o movimento eletroportico. Entretanto, a durao dos pulsos exponenciais depende da resistncia da pele e do sistema de eletroporao (eletrodos, e meio de conduo) 6,10.

Figura 1- Tipos de ondas usadas em aparelhos de eletroporao (quadrada e exponencial decrescente). Fonte: Chang et. al. 6 Segundo Denet et al. 10, a onda exponencial decrescente pode causar: aumento na hidratao da pele, desorganizao nas camadas bilipdicas do extrato crneo, breve falha na funo de barreira (aumento na perda de gua transepidrmica) e um breve aumento no fluxo sangneo. J a onda quadrada foi recentemente estudada in vivo, gerando uma suave falha na funo de barreira da pele, como por exemplo, uma dramtica diminuio da impedncia da pele e aumento da perda de gua transepidrmica, rapidamente reversvel e, transitria diminuio do fluxo sangneo (<10 min). Os autores relataram ainda que dois diferentes tipos de protocolos de pulso, de acordo com sua apresentao, so usualmente descritos na literatura. Alm da forma de onda, eles podem, principalmente, ser distinguidos pela durao do pulso: numerosos (> 100), de curta durao (12ms) e pulsos de alta voltagem; ou em nmero pequeno (< 20), de longa durao (70-1000ms) e pulsos de mdia voltagem. Contnuos esforos para otimizar o carreamento de molculas, preservando a viabilidade das clulas, atravs de vrias tcnicas de otimizao, resultaram em novos equipamentos. Nas ltimas duas dcadas, o equipamento de eletroporao foi refinado, e estes geradores foram construdos podendo modificar o pulso exponencial em pulsos quadrados, onde a amplitude e a durao do pulso podem ser independentemente controladas, um importante pr-requisito para a otimizao do processo 9. Quando o potencial induzido alcana um valor crtico, ele causa um desarranjo eltrico na membrana celular. O valor deste potencial crtico de, aproximadamente, 1V, mas pode variar dependendo da largura do pulso, composio da membrana, etc. Este desarranjo ir proporcionar a formao de canais aquosos na membrana, denominados poros, estes por sua vez iro gerar uma fora local potencializadora do transporte inico e molecular trans-epidrmico. Acredita-se que estes poros criados nas camadas lipdicas, pela aplicao de altas voltagens, so pequenos (<10nm), espaados (0,1% da rea da superfcie) e geralmente de curta durao (s a seg.) 10. Quando a durao e o nmero de pulsos aumentam, o transporte de droga aumenta linearmente. A velocidade do pulso e o fluxo transdrmico aumentam simultaneamente. Um dramtico aumento do transporte foi observado para voltagens entre 30-100 V 10. Segundo Gehl 9,

5 com o uso de pulsos extremamente curtos, na faixa dos nanosegundos, em altssimas voltagens, organelas celulares podem ser eletroporadas, sem que a membrana celular seja permeabilizada. Um dos principais parmetros de modulao ajustados na eletroporao a intensidade do campo eltrico, medida em V/cm. O campo eltrico geralmente criado pela aplicao da diferena de potencial (voltagem) entre os eletrodos 7. Cada transporte de substncias depende da voltagem aplicada. Enquanto o transporte molecular parece ser transcelular nos casos de pulsos curtos de alta voltagem, o mesmo parece ser intercelular, com possvel implicao dos anexos, quando se vai diminuindo a voltagem e a durao do pulso. O peso molecular da substncia eletroporada outro parmetro que influencia a rota de transporte: quanto menor o peso molecular, mais intracelular a penetrao 10. Diversos fatores fsicos podem afetar a eficincia da eletro-transferncia: o potencial de transmembrana criado pela imposio de um campo eltrico pulsado; a extenso da permeabilizao da membrana (nmero e tamanho dos poros ou reas afetadas); a durao do estado de permeabilizao; o modo e durao do fluxo molecular; a tolerncia das clulas; a permeabilizao da membrana e, a heterogeneidade da populao celular 7. Na eletroporao in vitro, outras consideraes devem ser feitas: o tamanho da clula, temperatura do meio externo, manipulao ps-pulso das clulas, composio de eletrodos e meio de pulsao e, aquecimento 9. O design dos eletrodos continua sendo um assunto crtico, tanto em termos de eficcia de transporte de drogas, como de tolerncia 10. Dentre os modelos utilizados, identificamos a existncia de eletrodos em placa, feitos de cobre; e eletrodos-agulha, onde agulhas hipodrmicas so dispostas paralelamente em uma placa sob medida, que assegura bom contato eltrico, assim como estabilidade e paralelismo 9 . A eletroporao in vivo tem sido realizada em diferentes espcies, usando eletrodos de placas ou agulhas. O transporte de drogas e genes in vivo tem sido aplicado em fgado, crebro, msculo e pele 9. O transporte molecular, atravs de uma pele temporariamente permeabilizada pela eletroporao, resulta de diferentes mecanismos em tempos diferentes. Aumento da difuso durante e depois dos pulsos e, transporte direcionado eletricamente (movimento eletroportico e suave eletro-osmose) so os principais mecanismos de transporte. A contribuio da eletroforese e da difuso depende das propriedades fsico-qumicas da molcula. Efeitos trmicos podem estar envolvidos 10. Quando o campo eltrico aplicado pele, este dissipa energia e aquece 7,10. A temperatura no aumenta instantaneamente na superfcie da pele, e sim gradativamente, resultando na propagao do calor. Como a voltagem e a durao do pulso aumentam constantemente, a temperatura tende a um plat. Durante o resfriamento, o sistema multilamelar no se restabelece, deixando a existncia de gua prevalecer, que determina que os caminhos aquosos permaneam, mesmo aps a interrupo do pulso 10. Sintov et al. 15 utilizaram para eletroporar duas molculas hidroflicas polares (hidrocloreto de granisetro e diclofenaco de sdio) um gerador de micro-canais de radiofreqncia. Este gerador era constitudo por dois componentes primrios: um dispositivo eletrnico reutilizvel similar a um fone telefnico, e microeletrodos inseridos na extremidade deste controle. O dispositivo era conectado a um computador, onde eram programados os parmetros utilizados e, ao mesmo tempo, informava os parmetros eltricos obtidos durante a aplicao, assim como: corrente de pico, corrente final, voltagem, tempo e energia. O corpo do dispositivo era feito de policarbonato e eletrodos de ao de 100m de comprimento e 40m de dimetro. Existiam 140 micro-eletrodos espaados a cada 1mm, em uma matriz quadrada. Estes eletrodos eram designados a gerarem micro-canais de 40m de largura e 70m de profundidade. A operao deste sistema era fcil e simples, bastando o contato do dispositivo contra a pele para o gerador de radiofreqncia ser ativado e o tratamento iniciar-se automaticamente.

6 DISCUSSO De acordo com os dados apresentados, observamos que a bibliografia consultada mostrou concordncia ao definir o conceito da eletroporao e seus mecanismos de ao, apesar do mtodo apresentar-se como uma forma, relativamente, nova de permear substncias. Quanto aos princpios fsicos da tcnica empregada, encontramos divergncias ao estudar a metodologia empregada por cada autor, ou seja, os artigos abordados diferiram quanto natureza do estudo, in vitro, in vivo ou em pacientes; quanto ao tipo de substncia a ser eletroporada e, suas respectivas propriedades fsico-qumicas; e quanto ao tipo de equipamento, eletrodos, formatos de onda e outros parmetros. Ao comparar a permeao promovida pela eletroporao permeao obtida atravs da aplicao do ultra-som (fonoforese) e da corrente galvnica (iontoforese), alguns fatores devem ser destacados. Segundo Chang et al.6, a eletroporao ocorre por um estado de stress biolgico da clula por alterao do seu potencial de membrana. Isto ocasiona uma eletroporao dos lpides da bicamada celular, originando a formao de poros em sua membrana e, a abertura de seus canais proticos. A abertura e fechamento dos poros ocorrem por rotao das molculas da membrana bilipdica, que d forma s paredes do poro. Os autores relataram ainda que o fenmeno da eletroporao se d no momento em que ocorre o impulso da onda eletromagntica. Com a interrupo do pulso de onda, ocorre a reorientao da camada, com reduo ou fechamento dos poros. Desta forma, a clula retorna novamente ao seu estado de normalidade, funcionando este mecanismo como uma chave de liga e desliga, ou on-off . A fonoforese descreve a habilidade do ultra-som em incrementar a penetrao de agentes farmacologicamente ativos atravs da pele quando estes esto contidos no meio acoplante usado para viabilizar a tcnica 4. Borges 16 fez meno a alguns relatos que indicaram que a fonoforese podes ser efetivamente potencializada a partir dos seguintes pontos: o efeito mecnico do ultra-som, provendo modificaes nas ligaes intercelulares e aumento da permeabilidade da membrana celular, capaz de promover a difuso do produto atravs da pele; o fenmeno de cavitao instvel pode ser responsvel pela introduo do produto fonofortico, medida que as bolhas se rompem influenciando na entrega do produto pela pele; os efeitos trmicos do ultra-som aumentam a permeabilidade dos tecidos, e a presso acstica criada pela transmisso do ultra-som mobiliza o medicamento/cosmtico atravs da pele; o ultra-som capaz de desorganizar o extrato crneo, diminuindo com isso, a resistncia da pele para penetrao de produtos por meio da fonoforese; e a ao do ultra-som no extrato crneo, facilitando a permeao do produto fonofortico, poderia ser representada por uma desnaturao da queratina e remoo de clulas mortas na pele. A iontoforese o uso de corrente contnua para aumentar a administrao transcutnea de substncias ionizveis. No processo iontofortico, a corrente, originria do aparelho, transferida do eletrodo para a pele por meio da soluo de agentes ativos. Os ons do agente ativo so carreados para a pele, atravs da repulso contnua e movimentao do agente ativo por onde haja caminhos, como poros, e possivelmente atravs de frestas do estrato crneo rompido. A finalidade teraputica da iontoforese depender das caractersticas das substncias utilizadas. No devemos esquecer, porm que o galvanismo (efeitos polares da CC) sempre estar presente e poder influenciar os efeitos da iontoforese. As substncias utilizadas se encontram na forma de solues ionizveis e, diante do campo eltrico da corrente contnua, so movimentadas de acordo com sua polaridade, assim como da polaridade do eletrodo ativo. A transferncia de ons ir acontecer principalmente nos dutos das glndulas sudorparas, e em menor extenso nos folculos pilosos e nas glndulas sebceas 17.

7 Estudos com animais registraram penetraes de medicamentos com fonoforese detectada nos tecidos a profundidades de 5 a 6 cm 16. Foi relatado que a tcnica da iontoforese libera a medicao em profundidades que variam de 6 a 20 mm 17. No encontramos estudos referentes eletroporao que apresentassem estes dados. Apesar de no encontrarmos artigos especficos comparando a eletroporao com a iontoforese e/ou fonoforese verificamos que todos esses recursos apresentam limitaes de acordo com suas caractersticas fsicas. Poucos meios acoplantes apresentam as caractersticas apropriadas para a fonoforese, sendo o gel o tipo mais apropriado de formulao para essa terapia. Vrios tipos de drogas, como corticides e antiinflamatrios, tm sido adicionados a uma base gel (usado como meio acoplante) e administrados via fonoforese. Na rea dermatolgica so utilizadas comumente enzimas de difuso, entretanto, seu uso na fonoforese exige que a intensidade do ultra-som deva ser cuidadosamente selecionada, uma vez que as enzimas se desnaturam em temperaturas acima do limite suportvel. Existem evidncias de que o ultra-som possa alterar a conformao tridimensional das enzimas, podendo ento inativ-las. Solues enzimticas foram inativadas por ultra-som na freqncia de 3MHz, com intensidades entre 1 e 3W/cm2 [4]. Os produtos, substncias polares, passveis de serem utilizados na iontoforese se apresentam na forma slida. A concentrao deve ser baixa, geralmente de 1 a 3%, para se obter um coeficiente de ionizao elevado. Com relao intensidade segura, esta tambm se limita a 0,1 mA para cada cm2 da superfcie do eletrodo ativo, sendo a penetrao maior durante os seis primeiros minutos 4. Soriano et al. 5 relataram que esta intensidade no deve ultrapassar 0,05 mA por cm2 de rea do eletrodo. A eletroporao capaz de carrear uma ampla variedade de molculas: de ons a drogas, pigmentos, anticorpos e oligonucleotdeos para DNA e RNA. A compreenso do comportamento eltrico (voltagem, condutncia e capacitncia da membrana), do comportamento mecnico (recuperao ou ruptura de membranas planares), e da compreenso do transporte molecular (nmero de molculas que atravessam a membrana) tem progredido significantemente. Porm, tem havido um progresso relativamente pequeno sobre a compreenso da recuperao de membrana (restaurao da barreira medida que o tempo passa) e o destino final das clulas (sobrevivncia ou morte) 18. Gehl 9 relatou um efeito imunolgico benfico em pacientes com cncer, quando submetidos eletroporao. A natureza deste efeito no bem estabelecida, mas a liberao de anticorpos do citoplasma ou mudanas na membrana celular so possveis hipteses. Alguns relatos fundamentam a eficincia da eletroporao para a permeao transdrmica de substncias em relao aos outros mtodos similares, assim como em relao difuso passiva. Essa et al. 1 aplicaram a eletroporao para aumentar a penetrao transdrmica de uma molcula lipoflica neutra (estradiol), contida em uma vescula lipdica (lipossomada) e, em uma soluo aquosa, comparando-as. Concluiu-se que, no caso do estradiol em soluo aquosa, tanto a difuso passiva como a eletroporao apresentaram grande absoro, sendo maior quando eletroporada. J, no caso do estradiol lipossomado, esperava-se que a eletroporao apresentasse valores consideravelmente maiores de permeao, mas surpreendentemente, a permeao do produto lipossomado foi discretamente maior pela eletroporao, comparada difuso passiva. Isso foi explicado em parte pela dissipao da energia eltrica das vesculas lipdicas e pelo tamanho lipossomal relativamente grande. Denet & Prat 19 realizaram um estudo com o propsito de alcanar fluxos teraputicos de timolol por transporte transdrmico atravs da eletroporao, aplicado em pele retirada de cirurgia plstica, comparada com difuso passiva da substncia. Comparado com a iontoforese, muitos minutos ou horas seriam necessrias para se conseguir os efeitos da eletroporao que se observa em segundos.

8 Weissinger 20 realizou um estudo sobre a transferncia gentica de clulas-tronco atravs da eletroporao sem a pr-estimulao com citoquinas para evitar mutao gnica que geralmente ocorre quando as clulas so estimuladas. Foi concludo que a pr-estimulao no primordial para a transferncia gentica e que a eletroporao alcana bons resultados tanto em clulas estimuladas quanto nas no estimuladas, j que se sabe que nas estimuladas o risco de mutao gnica grande. Apesar de verificarmos diversos relatos 2,7,9,10,11,13,14 dando conta do uso de equipamentos de eletroporao que utilizam correntes do tipo Alta Voltagem, Sintov et al. 15 mencionaram o uso de equipamentos que utilizam ondas eletromagnticas (radiofreqncia) para eletroporao. Esses autores realizaram estudo pioneiro, ao demonstrar um novo mtodo de criao de poros visveis ou micro canais nas camadas mais externas da pele, atravs de correntes de radiofreqncia. O mecanismo pelo qual estes micro-canais foram criados pode ser explicado pelo calor liberado durante um fluxo rpido de ons na epiderme. Os autores estudaram a penetrao de duas molculas hidroflicas polares (hidrocloreto de granisetro e diclofenaco de sdio) atravs da pele de orelha animal, retirada e tratada devidamente e, tambm atravs da pele abdominal de ratos vivos. A permeabilidade da pele para ambas as drogas foi significantemente aumentada aps a aplicao dos microeletrodos de radiofreqncia, quando comparada ao transporte atravs da pele no-tratada (grupo controle). Um gerador com micro-canais de radiofreqncia foi utilizado com os seguintes parmetros de modulao: voltagem de 200 ou 250V; freqncia de 100 KHz; durao do pulso de 1ms; nmero de pulsos: 5; tempo entre os pulsos de 15ms. No houve nenhum dano pele dos ratos, assim como no fora observado eritema e edema aps o procedimento. As mesmas vantagens so apresentadas por trs recursos eletrotermoteraputicos ultra-som, corrente galvnica e eletroporao: ausncia de efeitos colaterais sistmicos; ao localizada do medicamento, podendo estar em maior concentrao na rea tratada; ao mais efetiva e prolongada do frmaco no stio de aplicao 4, 6,10. As combinaes de mtodos fsicos e qumicos para aumentar o transporte de drogas transdrmicas tm sido mais efetivas, se comparadas ao uso isolado de uma tcnica. O uso da eletroporao associado ao ultra-som seria menos promissor, j que ambos apresentam mecanismos de ao similares. J, a associao com a iontoforese, mostra um bom resultado, uma vez que a eletroporao age desorganizando a camada lipdica da pele e criando novos caminhos de transporte, facilitando ento, a passagem da corrente subseqente da iontoforese e, resultando num aumento do transporte transdrmico 10. Segundo Borges 16 atualmente, alguns aparelhos empregados pelos profissionais que trabalham na rea da esttica so construidos associando ultra-som e corrente galvnica com o objetivo de prover a fonoforese e a iontoforese simultaneamente, principalmente nos casos de celulite. Entretanto, alertamos para o grande apelo comercial da tcnica, por parte dos fabricantes de aparelhos, e principalmente pela falta de fundamentao cientifica desta associao teraputica, principalmente no tocante ao uso da substncia de acoplamento, pois a mesma deve possuir propriedades fonoforticas e iontoforticas, e no encontramos publicaes com dados que comprovem a eficcia de algum produto medicamentoso/ cosmtico com essas caractersticas. CONCLUSO Verificamos atravs desta reviso bibliogrfica que a eletroporao apresenta-se como uma tcnica eficaz para inmeras aplicaes. A perspectiva desta tcnica de que uma grande variedade de molculas, como ons, drogas, pigmentos, DNA, protenas, oligonucleotdeos, possam ser introduzidos diretamente no citoplasma celular in vitro, in vivo e em pacientes, com suas devidas especificaes biofsicas. A tecnologia da eletroporao encontra-se em constante desenvolvimento, devido tanto sofisticao dos equipamentos, como ao desenvolvimento dos protocolos de eletroporao, baseados

9 no maior conhecimento do processo envolvido nesta tcnica. Claramente, isto abre inmeras perspectivas para pesquisadores em vrios campos. No entanto, tamanha cientificidade no est sendo observada no desenvolvimento de equipamentos voltados aplicao no campo da Esttica e Teraputica, onde os parmetros ajustados e a forma de aplicao no condizem com achados da literatura. Existe, portanto, a necessidade da realizao de estudos prticos detalhados, envolvendo os produtos transdrmicos e os equipamentos utilizados nas reas de Esttica e Fisioterapia Dermato-Funcional.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Essa, EA.; Bonner, MC.; Barry, BW. Electroporation and ultraderfomable liposomes; human skin barrier repair by phospholipid. Jornal of Controlled Release 2003; 92: 163-172. 2. Prausnitz, MR.; Bose, VG.; Langer, R; Weaver, JC. Electroporation of mammalian skin: a mechanism to enhance transdermal drug delivery. Proc Natl Acad Sci 1993; 90: 10504-10508. 3. Martins, MRFM; Veiga, F. Promotores de permeao para a liberao transdrmica de frmacos: uma nova aplicao para as ciclodextrinas. Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas 2002; 38: 33-53. 4. Guirro, Elaine; Guirro, Rinaldo. Fisioterapia Dermato-Funcional. 3aed. So Paulo: Editora Manole; 2002. p.129-133; 204-207. 5. Soriano, MC; Prez, SC; Baquz, MIC. Electroestetica profesional aplicada. Barcelona: SOR International; 2000. p.226. 6. Chang, DC; Chassy, BM; Saunders, JA; Sowers, AE. Guide to electroporation and electrofusion. San Diego, California: Academic Press, Inc.; 1992. p.1-10. 7. Nickoloff, JA. Animal cell electroporation & electrofusion protocols. V.48. Totowa, NJ: edited by Jac A. Nickloloff; 1995. p.3, 4,9,10, 30. 8. Burian, M; Formanek, M; Regele, H. Electroporation therapy in head and neck cancer. Acta Otolaryngol 2003; 123: 264-268. 9. Gehl, J. Electroporation: theory and methods, perspectives for drug delivery, gene therapy and research. Acta Physiol Scand 2003; 177: 437-447. 10. Denet, AR; Vanbever, R; Prat, V. Skin electroporation for transdermal and topical delivery. Advanced Drug Delivery Reviews 2004; 56: 659-674. 11. Neumann, E; Kakorin, S; Tsoneva, I; Nikolova, B; Tomov, T. Calcium-mediated DNA adsorption to yeast cells and kinetics of cell transformation by electroporation. Biophysical Journal 1996; 71: 868-877. 12. Glen Burnie, MD. Electropermeabilization. Disponvel em: www.cytopulse.com. Acesso em: 20/11/2004. 13. Quecini, VM; Oliveira, CA; Alves, AC; Vieira, MLC. Factors influencing eletroporationmediated gene transfer to Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw. protoplasts. Genet Mol Biol 2002; 25: 1-12. 14. Ugen, K.E.; Heller, R. Electroporation as a method for the efficient in vivo delivery of therapeutic genes. DNA and Cell Biology 2003; 22: 753. 15. Sintov, A.C. et al. Radiofrequency-driven skin microchanneling as a new way for electrically assisted transdermal delivery of hydrophilic drugs. Journal of Controlled Release 2003; 89: 311-320.

10 16. Borges, F.S. Ultra-Som. In Borges, F. S. Dermato-funcional: Modalidades teraputicas nas disfunes estticas. 1 ed. So Paulo: Editora Phorte; 2006. p.55-59; 252-258. 17. Valentin, E. K.; Borges, F.S. Iontoforese. In Borges, F. S. Dermato-funcional: Modalidades teraputicas nas disfunes estticas. 1 ed. So Paulo: Editora Phorte; 2006. p. 252-258. 18. Weaver, J.C. Diviso de Cincias da Sade e Tecnologia da Harvard MIT. Massachussetts, 1992. 19. Denet, AR; Prat, V. Transdermal delivery of timolol by electroporation through human skin. Journal of Controlled Release 2003; 88: 253-262. 20. Weissinger, F et al. Gene transfer in purified human hematopoietic peripheral-blood stem cells by means of electroporation without prestimulation. J Lab Clin Med 2002; 14: 138-149.