EXPERIMENTAO NO ENSINO DE QUMICA

Medidor de Fluorescncia Caseiro

Paulo Henrique dos Santos Sartori e lgion Lcio da Silva Loreto

Prope-se a construo de um sistema de medio de fluorescncia de configurao simples que permite

uma anlise quantitativa do fenmeno. Tal instrumento simula, por exemplo, o funcionamento de fluormetros e
clorofilmetros usados em laboratrios didticos e de pesquisa. A sua explorao didtica viabiliza conexes entre
diversos conceitos de qumica moderna por meio de uma abordagem interdisciplinar, envolvendo fotoqumica,
nveis de energia, orbitais moleculares, interao entre radiao e molculas orgnicas e biolgicas, permitindo,
por exemplo, uma melhor compreenso dos mecanismos fotoqumicos da fotossntese.
fluorescncia, fotossntese, material de baixo custo

Recebido em 18/08/08, aceito em 12/03/09

150

uitas molculas possuem

a propriedade de, quando
estimuladas pela energia de
uma radiao eletromagntica de
comprimento de onda adequado,
reemitirem parte dessa energia sob
a forma de uma radiao visvel. Pacotes de energia, conhecidos por ftons, associados a essas radiaes,
interagem com os nveis de energia
moleculares, dando origem ao fenmeno da fluorescncia (Figura 1).
A clorofila, assim como outros pigmentos, pode absorver ftons. Nesse
caso, as cores correspondentes aos
comprimentos de onda absorvidos
desaparecem do espectro eletromagntico visvel, mas a energia no
pode desaparecer. Quando a clorofila
exposta radiao de luz visvel,
a cor azul e a vermelha so as mais
fortemente absorvidas, enquanto que
a verde transmitida, o que lhe d
a cor caracterstica. Quando a configurao eletrnica da molcula de
pigmento ocupa seus orbitais mais
estveis (normais ou caractersticos),

Figura 1: Diagrama do processo de fluorescncia. Na fase de excitao (A), ocorre

o estmulo por um fton de energia especfica. Na fase intermediria (B), inicia-se a
desexcitao, havendo perda de energia. Na fase final (C), o retorno ao estado fundamental ocorre com dissipao energtica atravs da emisso de radiao visvel a
fluorescncia propriamente dita.

considera-se que esteja no seu estado

fundamental. Se algum dos eltrons
da molcula absorver a energia de
um fton excitante, ele ser elevado
para outra regio orbital, produzindo
uma nova configurao eletrnica
denominada estado excitado. Os
nicos ftons absorvidos so aqueles
cujas energias so exatamente iguais

A seo Experimentao no ensino de Qumica descreve experimentos cuja implementao e interpretao contribuem
para a construo de conceitos cientficos por parte dos alunos. Os materiais e reagentes usados so facilmente encontrveis,
permitindo a realizao dos experimentos em qualquer escola.
QUMICA NOVA NA ESCOLA

Medidor de Fluorescncia Caseiro

diferena de energia entre o estado

fundamental e o estado excitado. Tal
diferena varia de um tipo de tomo
ou molcula para outro. Portanto, um
composto especfico absorve somente
ftons correspondentes a determinados comprimentos de onda, o que
explica o fato de cada pigmento ter
um nico espectro de absoro (PittBradford, 2006; InvitrogenTM, 2006).
A energia de um fton absorvido
capaz de elevar um eltron do estado
fundamental para o estado excitado.
Vol. 31, N 2 , MAIO 2009

No entanto, esse estado, como todos os de alta energia, instvel e

o eltron no pode permanecer nele
por muito tempo. Em geral, aps o
pigmento absorver luz, seus eltrons
excitados decaem muito rapidamente
cerca de um bilionsimo de segundo (10-9s) , retornando ao orbital do
estado fundamental com liberao
de energia, devido a mudanas nos
estados vibracionais e rotacionais da
molcula, geralmente sob a forma de
calor. Alguns pigmentos, incluindo
a clorofila, emitem luz assim como
calor depois de absorverem ftons.
O eltron salta para um estado de alta
energia e, quando decai para o estado
fundamental, um fton (na maioria
das vezes de maior comprimento de
onda) liberado. A emisso luminosa
(brilho) correspondente denominada
fluorescncia (Pitt-Bradford, 2006; InvitrogenTM, 2006; Atkins e Paula, 2006).
No processo fotossinttico, a
clorofila e outros pigmentos fotossintticos absorvem ftons, fazendo
com que eltrons de suas molculas
saltem para orbitais mais distantes do
ncleo do tomo, ficando em um nvel
energtico mais alto (estado excitado).
Esses eltrons excitados sero transferidos para a cadeia transportadora
de eltrons para serem utilizados na
produo de ATP e, posteriormente,
na sntese de acares. Os pigmentos que perderam eltrons recebero
outros, menos excitados, provindos do
hidrognio da H2O, que se quebrar
em prton + eltron + O2 (este ser
liberado da clula). Quando ocorre
excesso de energia ou mecanismos
que interfiram no processo natural de

fotossntese, parte ou toda a energia

absorvida pelos pigmentos fotossintticos pode ser dissipada na forma
de fluorescncia (Carvalho e ReccoPimentel, 2007).
A anlise da fluorescncia da
clorofila amplamente empregada
no entendimento dos mecanismos da
fotossntese, bem como na avaliao
da capacidade fotossinttica alterada
por estresses biticos ou abiticos
pelos quais as plantas possam passar como temperatura, radiao, deficincia hdrica, salinidade, presena
de insetos ou fungos, herbicidas etc.
Para esse tipo de avaliao, so utilizados fluormetros de luz modulada,
cujas aplicaes variam desde a rpida identificao de injrias causadas
ao aparelho fotossinttico, mesmo
quando o sintoma ainda no visvel,
at a anlise detalhada da alterao
da capacidade fotossinttica da planta (Catunda e cols., 2005).
Atualmente, o uso da fluorescncia tornou-se uma poderosa ferramenta de investigao em diversas
reas. Algumas aplicaes em
pesquisas envolvem, por exemplo,
um incremento no processo de sequenciamento de DNA ou sua quantificao por meio da tcnica de
Reao em Cadeia pela Polimerase
(PCR Polymerase Chain Reaction)
em tempo real; detectores fluorescentes para Cromatografia Lquida
de Alta Eficincia (HPLC High
Performance Liquid Chromatography) usada na identificao, quantificao, separao e purificao de
inmeros compostos; a microscopia
de fluorescncia usada na deteco

de diversas estruturas celulares;

estudos sobre expresso gnica por
meio de DNA Microarray.

Descrio dos principais componentes

do fluormetro proposto
- Fonte de iluminao: usamos
um diodo de emisso luminosa
(LED) cuja faixa de comprimento
de onda emitido situa-se prxima
ao violeta/ultravioleta (aproximadamente 400 nm).
- Sistema de deteco: consiste de
um filtro para permitir a passagem de comprimentos de onda
que se deseja investigar, e de
um fotorresistor (LDR) sensvel
s variaes de intensidade da
luz proveniente da fluorescncia
das amostras. O filtro desempenha o papel de permitir a
passagem dos comprimentos
de onda de interesse, ou seja,
aqueles associados cor da
fluorescncia, bloqueando os
demais.
- Registrador: um multmetro digital
usado na funo de ohmmetro,
que mede o valor da resistncia
eltrica do LDR.
As especificaes tcnicas do
LED e do LDR esto detalhadas nas
Figuras 2 e 3.

Material
Indicamos, a seguir, os materiais
necessrios, onde podero ser
encontrados e o custo aproximado
de cada um (valores aproximados
dos tipos mais comuns, que podero variar bastante dependendo do
modelo).

Figura 2: (A) Resposta espectral do LDR: resposta relativa (faixa de 0 a 100%) em funo do comprimento de onda (regio de 350
a 820 nm). (B) Sensibilidade do LDR: Resistncia eltrica (faixa de 0,1 a 1000 k) em funo do iluminamento (faixa de 0,1 a 10.000
lx) (Sunrom, 2008).
QUMICA NOVA NA ESCOLA

Medidor de Fluorescncia Caseiro

Vol. 31, N 2, maio 2009

151

A respeito do filtro, importante

destacar que no dispomos facilmente
de filtros to especficos ou de cor
to prxima da fluorescncia a ser
observada a um custo acessvel e sem
ser necessrio recorrer s empresas
especializadas. Por isso, escolheu-se
o que mais se aproximava do tom azulesverdeado da fluorescncia da gua
tnica. Se fosse escolhido um filtro de
cor azul, por exemplo, este permitiria
maior passagem de comprimentos de
onda da prpria fonte de iluminao
(o LED ultravioleta) que est muito
prxima do sensor. Ento a escolha
recaiu no filtro de cor verde.
Figura 3: Anlise espectrogrfica de um LED violeta/NUV (Near Ultra Violet ultravioleta
prximo) genrico: intensidade (na faixa de 0 a 4000 unidades arbitrrias) em funo do
comprimento de onda (regio de 400 nm a 700 nm) (Led Museum, 2008).

152

a) Lojas de componentes eletrnicos, de variedades ou na sucata

domstica:
- Multmetro analgico ou digital
(R$ 12,00 a R$ 50,00);
- Resistor dependente da luz (LDR
Light Dependence Resistor) de
1,0 cm de dimetro (R$ 4,00);
- Diodo de emisso luminosa ultravioleta, conhecido como LED
violeta ou ultravioleta (LED UV
Light Emission Diode Ultraviolet)
de alto brilho 5,0 mm (R$ 2,00);
- Fonte de corrente contnua de
6,0 V (quatro pilhas tipo AA
em srie) ou carregador de
celular com voltagem similar
(R$ 4,00);
- Resistor de 380 de 1/8 W ou
similar (R$ 0,20);
- Conector para LED ou conector
para drive de disquete (R$ 3,00);
b) Lojas de equipamentos de som
ou de luz:
- Filtro de cor verde, de preferncia
filtro colorido conhecido como
gelatina (R$ 4,00/folha A4).
c) Papelarias, armarinhos, lojas
de variedades ou na sucata
domstica:
- Caixa de papel tipo porta-carretis de aproximadamente 20,0 x
6,0 x 2,0 cm (R$ 0,50);
- Cubeta (recipiente transparente pequeno e incolor como o
depsito de um apontador de
lpis R$ 1,50);
QUMICA NOVA NA ESCOLA

- Folha de EVA (borracha de Etil

Vinil Acetato) de 8 mm de espessura e cerca de 20,0 x 20,0
cm (R$ 2,00).
- Diversos: cola, fios de conexo
eltrica, fita dupla face, tinta
guache preta (R$ 5,00).
d) Mercados:
- gua tnica (garrafinha ou lata
de 350 mL R$ 1,00);
- Cloreto de sdio (sal de cozinha
R$ 0,80/kg).
Custo aproximado total de R$
40,00 a R$ 78,00. Vale ressaltar que
muitos dos materiais podem ser facilmente encontrados na sucata domstica, reduzindo bastante o custo total.
Tambm alguns itens sero usados
em quantidades muito pequenas,
sobrando material para outras atividades ou repeties. J o multmetro
um instrumento permanente e servir
para diversos experimentos que envolvam medies eltricas.

Montagem
Construir uma caixinha de EVA de
tamanho suficiente para comportar a
cubeta, fazendo dois orifcios: um na
lateral para acoplar o LDR e um na frente para entrada do feixe de iluminao.
Pintar as paredes internas com tinta
preta para minimizar reflexes esprias
de luz sobre o sensor. Cortar o filtro no
tamanho da lateral do porta-cubeta e
encaix-lo na frente do LDR.
As conexes eltricas devem
seguir o esquema da Figura 4. Os terminais do LDR devem ser conectados
diretamente aos terminais utilizados
para medio de resistncia eltrica
no multmetro (verificar no manual
do aparelho geralmente esto indicados por COM e ). O ctodo
(terminal mais curto) do LED deve
ser ligado sada negativa da fonte
de alimentao, enquanto o nodo
deve ser conectado ao resistor e este,
sada positiva da fonte.

Preparao das amostras

Preparar uma amostra de gua
tnica (cerca de 100 mL) e outra de

Figura 4: Esquema de montagem e disposio dos elementos que constituem o conjunto

do medidor de fluorescncia.
Medidor de Fluorescncia Caseiro

Vol. 31, N 2, maio 2009

gua salgada (uma colherzinha rasa

de sal em 100 mL de gua) com as
quais sero feitas solues em diferentes propores. Por exemplo, em
partes iguais (1:1); uma parte de gua
tnica e duas partes de gua salgada
(1:2); uma parte de gua tnica e
quatro partes de gua salgada (1:4);
duas partes de gua tnica e uma
parte de gua salgada (2:1); quatro
partes de gua tnica e uma parte de
gua salgada (4:1).
Existe a possibilidade de bolhas
de gs presentes na gua tnica interferirem nas medies. Recomendase, ento, mexer com uma colherzinha ou agitar a amostra e deix-la em
repouso de um dia para outro ou por
alguns minutos no caso de preparar
a amostra na hora.

Procedimento
A fluorescncia medida a 90 em
relao ao feixe incidente, pois nesse
caso no estamos interessados na
absoro da luz pela soluo, mas
sim no brilho que a soluo emitir
ao fluorescer.
Recomenda-se, durante as medies, cobrir o conjunto do detector
com uma caixa de papelo ou um tecido escuro, diminuindo a incidncia
de luz espria do ambiente sobre o
LDR, a fim de minimizar as oscilaes
na leitura dos valores. Tambm convm fixar na mesa ou bancada cada
um dos elementos que constituem o
aparato (inclusive os fios de ligao)
com o intuito de imobiliz-los durante
as trocas das amostras e manter os
ajustes de posicionamento inalterados. O uso de fita adesiva dupla face
indicado para essa finalidade.
Para iniciar a coleta de dados,
necessrio ajustar a escala de
medida de resistncia eltrica do
multmetro, posicionando o seletor do
aparelho em uma escala compatvel
com a disposio e montagem que
for feita. Para tanto, testar se a faixa
selecionada gera registro no aparelho. Caso contrrio, mudar de escala
at que seja registrado algum valor.
As medidas so tomadas diretamente
do valor indicado no display (ou ponteiro) do multmetro. Na montagem
que elaboramos, a faixa de 20 M
foi sensvel o suficiente.
QUMICA NOVA NA ESCOLA

Colocar a amostra na cubeta e

esta, no porta-cubeta. Em seguida,
ligar a fonte e o multmetro e anotar
os valores registrados.

Resultados
Verifica-se que, medida que
a proporo de gua salgada na
soluo aumenta em relao gua
tnica, os valores de resistncia
eltrica aumentam, indicando menor
brilho da amostra, ou seja, menor
fluorescncia. A Tabela 1 indica os
valores mdios observados numa
configurao montada para coletar
os resultados.
Para fim de comparao, a observao do efeito visual da fluorescncia de algumas amostras, submetidas
iluminao direta de luz ultravioleta
(procedimento que requer proteo
adequada dos olhos e partes do
corpo expostas), mostrada na
Figura 5.
A diminuio da intensidade da
fluorescncia deve-se ao fato de
que o on cloro (Cl-), proveniente da
dissociao inica do NaCl na gua,
atua como um dissipador (quencher) da fluorescncia, pois ao se
encontrar com a molcula de quinina
(responsvel pela fluorescncia da
gua tnica) desativa-a antes de ter

a chance de decair por intermdio da

emisso de radiao.

Comentrios
O experimento poder ser realizado de maneira similar utilizando
extrato alcolico de folhas verdes
(que conter predominantemente
clorofila) e iodeto de sdio. Nesse
caso, ser necessrio trocar o filtro
para a cor vermelha.
Os resultados numricos apresentados dificilmente se repetiro
em outras construes, pois as
especificidades de cada montagem
(distanciamento dos elementos,
ajustes, intensidade luminosa do
LED, variaes da colorao do
filtro, transparncia da cubeta etc.)
so variveis que produzem resultados numericamente diferenciados.
Importa salientar que os resultados
sero comparativamente coerentes e
compatveis com o fenmeno.
Paulo Henrique dos Santos Sartori (paulo-sartori@
ibest.com.br), licenciado em Cincias e Matemtica
(UNICRUZ), mestre em Educao em Cincias:
Qumica da Vida e Sade (UFRGS), doutorando em
Educao em Cincias (UFRGS/UFSM/FURG). lgion
Lcio da Silva Loreto (elgion@base.ufsm.br), bacharel
em Cincias Biolgicas (UFSM), mestre e doutor em
Gentica e Biologia Molecular (UFRGS), docente da
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM).

Figura 5: Visualizao da fluorescncia de algumas amostras.

Tabela 1: Medidas de resistncia eltrica encontradas para as amostras.
Amostra
gua Tnica (AT)
Proporo de
gua Tnica em relao
gua Salgada AT:AS
gua Salgada (AS)
Medidor de Fluorescncia Caseiro

4:1
2:1
1:1
1:2
1:4

Resistncia eltrica
(escala: 20 M)
0,26
0,30
0,89
1,12
1,14
1,33
1,75
Vol. 31, N 2, maio 2009

153

Referncias
ATKINS, P. e PAULA, J. Physical Chemistry. 8. ed. Oxford: Oxford University
Press, 2006.
CARVALHO, H.F. e RECCO-PIMENTEL,
S.M. A clula. 2. ed. Barueri: Manole,
2007.
CATUNDA, M.G.; FREITAS, S.P.; OLIVEIRA, J.G. e SILVA, C.M.M. Efeitos de
herbicidas na atividade fotossinttica e no
crescimento de abacaxi. Planta Daninha.

Viosa, v. 23, n. 1, p. 115-121, 2005.

INVITROGENTM. Fluorescence Tutorials.
Disponvel em: <http://probes.invitrogen.
com/resources/education/> Acesso em:
10 out. 2006.
LED MUSEUM. Spectra of Low-Powered
Violet LEDs (2). Disponvel em: <http://
ledmuseum.home.att.net/specx78.htm>
Acesso em: 14 nov. 2008.
PITT-BRADFORD. University of Pittsburgh at Bradford. Fluorescence of

Chlorophyll. Disponvel em: <http://www.

upb.pitt.edu/uploadedFiles/About/Sponsored_Programs/Science_In_Motion/
Biology_Labs/bio003_Fluorescence%20
of%20Chlorophyll.doc> Acesso em: 22
ago. 2006.
SUNROM. Light Dependent Resistor.
Disponvel em: <http://www.sunrom.com/
files/3190-datasheet.pdf> Acesso em: 15
nov. 2008.

Abstract: A Homemade Fluorimeter. It aims the construction of a simple system of fluorescence measurement that allows a quantitative analysis of the phenomenon. Such an instrument simulates,
for instance, the operation of fluorometers and chlorophyllometers used at didactic and research laboratories. Its didactic exploration enables innumerous connections among several concepts of
modern chemistry, through an interdisciplinary approach that involves photochemistry, energy levels, and interaction between radiation and organic/biological molecules, all of these allowing, for
example, a better understanding of photochemistry mechanisms of the photosynthesis.
Keywords: Fluorescence, photosynthesis, low cost material.

Resenha
Qumica Verde: fundamentos e
aplicaes
154

Elaborado
pelas professoras Arlene
Gonalves
Corra (DQ) e
Vnia Gomes
Zuin (DME) da
Universidade
Federal de So
Carlos (SP), o
livro Qumica
Verde: fundamentos e aplicaes,
recentemente publicado pela editora EdUFSCar, constitui-se numa
importante referncia acadmica e
cientfica para a Qumica no Brasil. Tal
assertiva sustenta-se tanto pela qualidade da obra, quanto pela inequvoca
demonstrao de compromisso que
a cincia qumica, por meio de seus
profissionais, tem com a preveno
e a resoluo dos problemas ambientais. A divulgao de algumas
produes cientficas e tcnicas j
espelham a nova conduta que a qumica assume diante dessa to grave
questo e aponta um caminho a ser
seguido por todos profissionais de
nossa rea, sejam os mais ligados
pesquisa cientfica, educao
qumica e/ou ainda aqueles que
atuam diretamente nos processos
produtivos.
A Qumica Verde, como bem apreQUMICA NOVA NA ESCOLA

sentam as duas pesquisadoras,

pode ser definida como a criao,
o desenvolvimento e a aplicao de
produtos e processos qumicos para
reduzir ou eliminar o uso e a gerao
de substncias nocivas sade humana e ao ambiente. Ressalta-se
que, desde 2003, esse novo campo
de interveno e produo cientfica
da Qumica se organiza no subcommittee da Diviso III da International
Union of Pure and Applied Chemistry
(IUPAC).
O livro resultado de uma srie
de trabalhos de pesquisa das professoras-pesquisadoras e de outros
acadmicos, que tambm serviram
Escola de Vero em Qumica (EVQ),
evento promovido pelo Departamento
de Qumica da UFSCar, que j se
encontra na sua XXIX edio. Qumica Verde: fundamentos e aplicaes
est organizado em sete captulos,
escritos numa linguagem simples
e acompanhado de uma criteriosa
referncia bibliogrfica. Ele descreve,
a partir dos princpios bsicos da
QV, os conceitos e as aplicaes no
desenvolvimento C&T de algumas
de suas reas mais relevantes como
a da catlise, dos solventes alternativos, da minimizao de resduos e
do desenvolvimento de processos
mais seguros e eficientes. Para tanto, foram includos exemplos de sua
aplicao industrial como aqueles
de reaes ativadas por ultrassom
Medidor de Fluorescncia Caseiro

e irradiao de microondas; as de
clulas fotovoltaicas e a combustvel;
a de biocatlise e biotransformao;
a de metodologias analticas verdes;
e a dos tratamentos de efluentes com
tecnologias verdes, demonstrando
a importncia da Qumica Verde em
todos os setores produtivos.
A publicao dessa obra permitir
ainda o estabelecimento de dilogos
mais consistentes com os diferentes
setores nos quais intervimos como
profissionais da qumica, com destaque para o campo da formao e
da educao cientfica. Ensina-nos
que, se tomarmos os princpios da
QV como referncia, poderemos
construir uma imagem mais positiva
da qumica; orientar as pessoas para
uma atuao baseada em fundamentos tico-cientficos de tutela e
preveno ambiental; auxiliar o poder
pblico e os agentes sociais na formulao de programas e aes de
preveno e salvaguarda ambiental;
e tantas outras medidas ligadas
a esse importante tema-problema
planetrio.
Recomendamos sua leitura.
Prof. Dr. Carlos Alberto Marques
(UFSC)
CORRA, Arlene G. e ZUIN, Vnia
G. Qumica Verde: fundamentos e aplicaes. So Carlos: EdUFSCar, 2009.
172 p. ISBN: 978-85-7600-150-8.
Vol. 31, N 2, maio 2009