Riscos associados ao trabalho

laboratorial em imunologia

1- Risco biolgico
2- Risco Qumico
3- Risco Radiolgico

IMUNOLOGIA - TP
Procedimentos de segurana
1- Risco biolgico
Os agentes biolgicos podem ser distribudos em quatro
grupos de risco de 1 a 4 por ordem crescente de risco.
So classificados segundo os seguintes critrios:

Patogenicidade para o Homem

Virulncia das estirpes
Modos de transmisso
Disponibilidade de medidas profilticas eficazes
Disponibilidade de tratamento eficaz
Endemicidade

1
 IMUNOLOGIA - TP
1. Nvel 1 de segurana biolgica (NSB 1)

Risco individual e comunitrio = Escasso

Microrganismo tem pouca probabilidade de provocar

enfermidades humanas ou enfermidades de importncia
veterinria.

As prticas, o equipamento e as instalaes deste nvel

de segurana so apropriadas para laboratrios de ensino
e instalaes em que seja efectuado trabalho com
estirpes bem definidas e caracterizadas de
microrganismos viveis que sejam incuos para o adulto
saudvel.

Ex.: Bacillus subtilis, Escherichia coli K12, a Naegleria

gruberi, e o vrus da hepatite canina

NVEL 1 de segurana biolgica (NSB 1)

Cmara de Fluxo Laminar - I

Ex.: Bacillus subtilis, Escherichia coli K12, a Naegleria gruberi, e o vrus da hepatite canina

2
 IMUNOLOGIA - TP
2. Nvel 2 de segurana biolgica (NSB-2)

Risco individual moderado, risco comunitrio

limitado
A exposio ao agente patognico pode provocar
infeco, porm, existem medidas eficazes de
tratamento e de preveno

O risco de propagao limitado.

Ex.: Schistosoma mansoni, Toxoplasma gondii

NVEL 2 de segurana biolgica (NSB 2)

Cmara de Fluxo Laminar - II

Ex.: Schistosoma mansoni, Toxoplasma gondii

3
 IMUNOLOGIA - TP
3. Nvel 3 de segurana biolgica (NSB-3)

Risco individual elevado, baixo risco

comunitrio

O agente patognico pode provocar enfermidades

humanas graves, podendo propagar-se de uma
pessoa infectada para outra, mas existe profilaxia e/
ou tratamento.

Ex.: Mycobacterium tuberculosis

IMUNOLOGIA - TP
4. Nvel 4 de segurana biolgica (NSB-4)
Risco individual e comunitrio elevado.
Os agentes patognicos representam grande
ameaa para as pessoas e animais, com fcil
propagao de um indivduo para outro, directa ou
indirectamente, no existindo profilaxia nem
tratamento.

Ex.: Vrus Ebola

4
 IMUNOLOGIA - TP
Os riscos primrios so:
a exposio respiratria a aerossis infecciosos
exposio das membranas mucosas a gotculas
infecciosas
auto-inoculao.

Todas as manipulaes de materiais de diagnstico

potencialmente infecciosos, microrganismos isolados, e
animais natural ou experimentalmente infectados
constituem um risco de exposio e infeco para o
pessoal laboratorial, a comunidade, e o meio ambiente.

NVEL 4 de segurana biolgica (NSB 4)

Cmara de Fluxo Laminar - III

5
 Nvel 4 de segurana biolgica (NSB 4)

Cmara de Fluxo Laminar - III

6
 IMUNOLOGIA - TP
Procedimentos de segurana
Risco qumico
Uso de bata, luvas e culos; trabalho em hotte; verificar os
rtulos dos produtos utilizados.
Procedimentos para a eliminao dos resduos e
monitorizao das pessoas e ambientes envolvidos.

Risco radiolgico
Regras de manipulao especficas.
Procedimentos particulares para a eliminao dos resduos e
monitorizao das pessoas e ambientes envolvidos.

Risco biolgico
Vias de exposio aos m.o. no laboratrio

7
Tipos de acidentes associados a infees laboratoriais

ACIDENTES N DE INFEES

Derrames e aerossis 26,7

Agulhas 25,2

Objetos cortantes 15,9

Mordedura/arranho de animal ou 13,5

parasita

Pipetagem boca 5,5

*Sewell, D.I., 1995, Clin. Microbiol. Reviews, 8:389-405

MTODOS DE IMUNOENSAIO
Qual a definio?

Ensaios que detetam ou quantificam uma substncia

especfica (analito) numa amostra biolgica, usando o
princpio da reao antignio-anticorpo.

8
 IMUNOLOGIA - TP
Antignio
qualquer molcula que pode ser reconhecida
especificamente pelos receptores das clulas B e/ou T (BCR
e TCR, respectivamente).

Antignios estranhos no so produzidos pelo

organismo.

Auto-antignios (ou antignios prprios)

molculas produzidas pelo organismo que
estimulam uma resposta imunitria adaptativa.

IMUNOLOGIA - TP
Eptopo ou Determinante antignico:
Parte do antignio que contacta directamente com o local
de ligao antignico do anticorpo ou com o TCR

Paratopo:
poro do anticorpo na qual o eptopo se vai ligar

9
 IMUNOLOGIA - TP
ANTICORPO
uma imunoglobulina produzida pelos plasmcitos
Local de
constituda por: ligao do
AG
a)2 cadeias leves
Ligaes
dissulfito
b) 2 cadeias pesadas Regio CH
1
varivel
c) regio charneira -

Regio constante

CH2
CH2
flexibilidade

CH3
CH3

IMUNOLOGIA - TP
CLASSES DE IMUNOGLOBULINAS/
ANTICORPOS:

1. IgA
2. IgD
3. IgE
4. IgG
5. IgM

10
 IMUNOLOGIA - TP
Os nveis sricos normais de qualquer uma das Igs
mencionadas variam com:

1. O sexo

IMUNOLOGIA - TP
2. A idade

(g/L) (g/L) (g/L)

11
 IMUNOLOGIA - TP
Situaes em que os nveis sricos das Igs so diferentes
dos valores normais:

Nveis sricos Nveis sricos

Doenas hepticas crnicas IgG, IgA -
Mielomas IgG, IgA, IgM -
Infeces crnicas IgA -
Macroglobulinmia de Waldenstrom IgM -
Distrbios que conduzem - IgG, IgA
diminuio da sntese proteica
Sindroma de deficincia de - IgM
produo de ACs

IMUNOLOGIA - TP
SEROLOGIA

Sentido estrito -> determinao de anticorpos no soro de

um indivduo (utilizao original).
Sentido mais lato -> determinao de antignios e/ou de
anticorpos, tanto no soro como noutros produtos
biolgicos, ou at diretamente em culturas.

Os ensaios serolgicos baseiam-se na deteo de

reaes antignio-anticorpo.

12
 O anticorpo liga-se ao eptopo do antignio

VALNCIA
Eptopos
DO ANTIGNIO
Nmero mximo de
anticorpos que podem ligar-se
ao mesmo tempo a um
antignio

DO ANTICORPO
Nmero mximo de
antignios que podem ligar-se
ao mesmo tempo a um
anticorpo

FATORES QUE INTERFEREM NA LIGAO ENTRE AG E AC

O Especificidade dos anticorpos

O Afinidade dos Ac

O Avidez dos Ac

O Concentrao dos Ac e antignios

O Classe dos anticorpos envolvidos

O Pureza dos antignios utilizados

13
 FATORES QUE INTERFEREM NA LIGAO ENTRE AG E AC

Especificidade dos anticorpos

Capacidade de um AC se ligar apenas a um tipo de eptopo

especfico.

Capacidade de uma populao de AC se ligar apenas a um

tipo de AG.

FATORES QUE INTERFEREM NA LIGAO ENTRE AG E AC

O Afinidade dos Ac
Fora da ligao entre um eptopo e um local de ligao do AC.
Fora resultante do total de foras no-convalentes entre um
nico stio de ligao do Ac e um nico eptopo do antignio.
AC DE BAIXA AFINIDADE: ligam-se de modo fraco e
tendem a dissociar-se com facilidade.

AC DE ALTA AFINIDADE estabelecem ligaes fortes e

mais duradouras.

14
 FATORES QUE INTERFEREM NA LIGAO ENTRE AG E AC

O Avidez dos Ac

Fora de ligao do antignio ao anticorpo, quando

os seus mltiplos eptopos interatuam com os
locais de ligao do anticorpo.

FATORES QUE INTERFEREM NA LIGAO ENTRE AG E AC

O Concentrao dos Ac e Ag

15
 CONCENTRAO DOS ANTICORPOS: equilbrio entre
concentrao de Ag e Ac

PH DO MEIO DE REAO: pH cido=desfaz reao

TEMPERATURA DE REAO: em geral o aumento de

temperatura torna a reao mais rpida.
Cuidado: no deixar desnaturar os componentes da reao.
Reaes com complemento devem ser a baixa temperatura.
Concentrao dos anticorpos (equilbrio entre concentrao de Ag e Ac)

TEMPO DE REAO: Quanto maior o tempo, mais fortes as

ligaes Ag- Ac e maior a probabilidade de dar reao positiva.
Algumas reaes ocorrem em minutos, outros requerem muitas
horas. Em geral dependem da quantidade de reagentes usados na
reao.

CONCEITOS BSICOS EM SOROLOGIA

TESTES DE REFERNCIA

SENSIBILIDADE
O

ESPECIFICIDADE

FALSO-POSITIVO, FALSO-NEGATIVO

REAO CRUZADA

PRECISO

EXATIDO

REPRODUTIBILIDADE

LIMIAR DE REATIVIDADE (CUT OFF)

16
 TESTES DE REFERNCIA

Teste j conhecido e usado para um

determinado propsito, com o qual uma nova
metodologia deve ser comparada durante sua
padronizao.

EXEMPLO:
qualquer teste sorolgico proposto para o
diagnstico da doena de Chagas, deve ser
comparado com o xenodiagnstico, baseado na
demonstrao de que o paciente tem o parasita
circulante.

TTULO

Ttulo de um soro ou soluo de anticorpos (Imunoglobulinas),

refere-se mxima diluio na qual um teste continua com reao
positiva.

EXEMPLO:
quando dizemos que um soro deu ttulo de 1:5000 para
toxoplasmose, significa que mesmo diluindo-se a amostra 5000
vezes, a reao continua positiva.

Uma mesma amostra pode ter ttulo de 1:100 num tipo de teste (por
exemplo no teste de precipitao) e ttulo de 1:10.000 noutro teste
(por exemplo ELISA). Isso depender do limiar de deteo de cada
ensaio.

17
 SENSIBILIDADE DO TESTE SOROLGICO

A sensibilidade de um teste sorolgico = percentagem

de resultados positivos na populao doente, isto , a
proporo de resultados positivos verdadeiros.

Resultado falso-positivo = refere-se a reaes positivas em

indivduos saudveis.

O termo sensibilidade tambm usado para definir o limiar

de deteo de um mtodo, isto , a quantidade mnima de
Ac detetvel.

ESPECIFICIDADE DE UM TESTE SOROLGICO

A especificidade definida pela percentagem de

resultados negativos em pacientes saudveis, isto , a
proporo de resultados negativos verdadeiros.

Por outras palavras, num teste com alta especificidade

acontecem poucos resultados falso-positivos.

Resultados falso-negativos: correspondem s reaes

negativas em pacientes doentes.

18
 REAO CRUZADA

Refere-se capacidade de:

uma populao de anticorpos se ligar a mais do que um
antignio.
um anticorpo se ligar a mais do que um tipo de eptopo.

PRECISO

Expressa a concordncia dos resultados obtidos aps

vrias repeties e traduz a possibilidade de erro acidental
do mtodo.

Quanto maior a preciso do teste, menor a influncia

que sofre das condies de execuo (temperatura, pH,
manuseio, tempo, etc.)

A B

19
 EXATIDO
Determina a capacidade do teste em fornecer
resultados muito prximos ao verdadeiro valor do que est
sendo medido. Detecta erro do sistema ou tendncia de
desvio.
A B

REPRODUTIBILIDADE

R efere-se obteno de resultados iguais em testes

realizados com a mesma amostra, por pessoas diferentes em
locais diferentes.

QUALIDADE NO LABORATRIO

20
 LIMIAR DE REATIVIDADE (CUT OFF)

O limiar de reatividade ou cut off de um teste entendido como

o ponto de corte de um teste, isto , o valor acima do
qual se dever considerar o resultado como positivo.

Em rigor, no existe um teste sorolgico que estabelea

claramente o que um resultado positivo e um negativo,
pois sempre existem amostras cujos resultados ficam
em uma zona duvidosa

LIMIAR DE REATIVIDADE (CUT OFF)

idade de um teste %
%

percentagem de resultados
populao doente, isto , a a --- mxima sensibilidade
de resultados positivos --- mxima especificidade
b
- Mxima sensibilidade e
b especificidade

cidade definida pela

m de resultados negativos
es saudveis, isto , a Ttulos

Ttulos
de resultados negativos

A = no doentes; b = doentes

21
 IMUNOLOGIA - TP
Tcnicas serolgicas baseadas em:
1. Interaes primrias
Avaliam a ligao direta do antignio ao anticorpo.
(ex: ELISA e RIA)

2. Interaes secundrias
Avaliam alteraes que o anticorpo induz no estado
fsico do antignio.
(ex: reaes de precipitao e aglutinao)

22