SOLUÇÕES

Acrilamida MIX 30%

Acrilamida 29g
Bis-acrilamida 1g
H2O q.s.p 100ml

Amino-etil-Carbazol (AEC) – solução stock

AEC 0,1g
N, N – dimetilformamida 15ml

Comassie gel stain-corante

Comassie blue R-250 1g

Etanol 450ml
H2O destilada 450ml
Ácido acético glacial 100ml

Líquido de Diluição para IPX

NaCl 29,5g
Na2HPO4.2H2O 1,55g
NaH2PO4.H2O 0,23g
TWEEN 80 5,0ml
H2O destilada q.s.p. 1000ml
Ajustar pH 6,4

Líquido de Lavagem para ELISA

NaCl 8,5g
Na2HPO4.2H2O 1,55g
NaH2PO4.H2O 0,23g
TWEEN 20 5ml
H2O destilada q.s.p. 1000ml

Líquido de Fixação para IPX

PBS 1X 800ml
Acetona 200ml

Meio Mínimo Essencial de EAGLE (E – MEM)

MEM (GIBCO) 9,6g

Trishidroximitelaminometano (Tris) 2,4% pH 7,0 50ml
H2O deionizada q.s.p. 1000ml
Ajustar pH 7,2

OPD

OPD 0,34g
Tampão Citrato Fosfato 100ml
Observação: acondicionar em local fresco e escuro
PBS 10X

NaCl 85,0g
Na2HPO4.2H2O 15,5g
NaH2PO4.H2O 2,3g
H2O destilada q.s.p. 1000ml
Ajustar pH 7,2 - 7,4

PBS-Tween 20

PBS 10X 100ml

H2O destilada 900ml
TWEEN 20 5ml

PBS-Tween 80

PBS 10X 100ml

H2O destilada 900ml
TWEEN 80 5ml

RPMI 1640 (SIGMA)

RPMI 1640 10,0g

Glutamina 0,3g
Piruvato de Sódio (ou sem) 0,11g
Dextrose 6,0g
Hepes sal sódio 2,3g
Bicarbonato de sódio 2,0g
Gentamicina 50ug/ml
H2O deionizada q.s.p. 1000ml
Ajustar pH 7,2 a 7,4

Solução Cromógena de Carbazol

3-amino, 9-etilcarbazole (AEC) 0,67% 300ul

Peróxido de Hidrogênio 100 vol. 10ul
Tampão Acetato de sódio 0,05M pH 5,0 5ml

Solução de Giemsa – solução concentrada

Giemsa em pó 0,3g
Glicerina 25ml
Metanol 25ml
Obs.: Para o uso, diluir esta solução a 1:10 em água destilada

Substrato – Amino Etil Carbazol – solução concentrada

3 – amino – 9 – etil – carbazol 0,1g

Dimetil formamida 15ml
Obs.: Armazenar em local escuro

Substrato p/ IPX (Amino-etil-Carbazol)

Solução estoque 300ul

Tampão acetato 5ml
H2O2 10ul

Substrato para ELISA (OPD)

OPD 34mg
Tampão Citrato Fosfato 100ml
Obs.: Guardar em local fresco e escuro.
Obs.: Adicionar 5ul de H2O2 para cada 5ml do substrato na hora
do uso.

Tampão Acetato para IPX (0,05M)

Ácido acético glacial 0,89ml

Acetato de sódio 2,89g
H2O 100ml
Ajustar pH 5,0

Tampão Acetato (p/ separar IgG c/ Ác. Caprílico)

Ácido acético glacial 3,6ml

Acetato de sódio 8,16g
H2O destilada q.s.p. 1000ml

Tampão Barbital

Solução 1
CaCl2.2H2O 4,41g
MgCl.H2O 20,33g
H2O bidestilada 1000ml

Solução 2
NaCl 83,0g
NaC8H11N2O3 10,19g
Sol. 1 5ml
H2O bidestilada 1000ml
Ajustar pH 7,6 com HCl 1N, diluir1/4 para uso

Tampão Bloqueador (TB)

TWEEN 20 0,5ml
Leite em pó 5g
PBS 100ml

Tampão Carbonato/Bicarbonato (ELISA)

Na2CO3 1,59g
NaHCO3 2,39g
H2O destilada q.s.p. 1000ml
Ajustar pH 9,6

Tampão Citrato/Fosfato

Ácido Cítrico 10,2g

Na2HPO4 14,6g
H2O destilada q.s,p. 1000ml
 5,0

Tampão de Amostra (PAGE)

Tris (HCl) 0,1425g

H3PO4 1M 0,64ml
Sacarose 2,0g
SDS 10% 2ml
Uréia 2,4g
Vermelho Fenol 0,2g
B- mercaptoetanol 0,2ml
H2O bidestilada q.s.p. 10ml

Tampão de Transferência

Tampão Carbonato/Bicarbonato 13mM

Metanol 20%
Ajustar pH 9,9

Tampão não-Redutor

SDS 1% 1ml
Glicerol 1ml
Azul de Bromofenol 1% 100ul
Fosfato de sódio 2H2O 0,178g

Tampão Tris-Glicina 10X (PAGE)

Tris 30,3g
Glicina 144,2g
SDS 10,0g
H2O destilada q.s.p. 1000ml
PH ajustado para 8,3 com HCl 1N
Tampão para Gel Filtração

NaCl 16,0g
Cloreto de potássio 0,4g
Na2HPO4 2,3g
Potassium Dihidrogen phosphate 0,4g
H2O destilada q.s.p. 2000ml

Tampão Redutor

Tris HCl 1M pH6,8 2,5ml

SDS 10% 3,0ml
B Mercapto 1,0ml
Glicerina 2,0ml
Azul de bromofenol 1% 100ul
H2O destilada q.s.p. 10,0ml

Tampão Salina Fosfato (PBS) pH 7,4

NaCl 8,0g
KCl 0,2g
Na2HPO4.12H2O 2,9g
KH2PO4 0,2g
H2O bidestilada 1000ml

Tripsina Versene

Tripsina 0,5g
NaCl 8,0g
KCl 0,4g
EDTA 0,2g
NaHCO3 10,0g
Vermelho de Fenol 1,2ml
H2O deionizada q.s.p. 1000ml
Ajustar pH 7,8

Fermelho Fenol (1%)

Vermelho Fenol 1g
NaOH 0,05N 15ml
H2O q.s.p. 100ml