A EXPRESSÃO DE ARNM AUMENTADA DA CONVERSÃO DA ANGIOTENSINA I

HOMÓLOGA ENZIMA (ACE-2) INDUZIDA POR ATORVASTATINA ESTÁ

ASSOCIADA COM FIBROSE REDUZIDA E HIPERTROFIA VENTRICULAR
ESQUERDA NUM MODELO DE CARDIOMIOPATIA DIABÉTICA

A atorvastatina aumento induzido em angiotensina I homóloga da enzima de conversão

(ACE2) está associada com o ARNm Diminuição Diminuição da fibrose ventricular esquerda
e hipertrofia num modelo de rato da cardiomiopatia diabética

Cristian Aguilar 1, um , Freddy Ventura 2, b , Luis Rodríguez-Delfín 1,3,4, c

1 Departamento de Patologia do Hospital Nacional Edgardo Rebagliati Martins. Lima Peru.

2 Departamento de Ciências Básicas, Faculdade de Medicina, Universidade Nacional de

Trujillo. Trujillo, Peru

3 Laboratório de Biologia Molecular da Faculdade de Biologia da Universidade Nacional

Pedro Ruiz Gallo. Chiclayo, Peru.

4 Pesquisa e Diagnóstico em Genética e Biologia Molecular? GEN MOL ??. Trujillo, Peru.

Doutor, Residente de Anatomia Patológica, HNERM; b Química Farmacêutica, Mestre em

Fisiologia e Biofísica; c Biólogo, Doutor em Ciências, área de Genética.

RESUMO

Objetivos Avaliar o efeito da atorvastatina na progressão do remodelamento cardíaco e na

expressão de ECA-2 no miocárdio de ratos diabéticos. Materiais e métodos. Diabetes foi
induzido em ratos Holtzman com uma injeção intraperitoneal de estreptozotocina. Os animais
foram divididos em três grupos: (1) ratos controle, (2) ratos diabéticos e (3) ratos diabéticos
tratados com atorvastatina (50 mg / kg / dia). Após oito semanas de tratamento, os corações
foram extraídos para análise morfométrica, quantificação de colágeno e determinação dos
níveis de RNAm de ECA e ECA-2. ResultadosA taxa de hipertrofia ventricular e deposição
de colágeno aumentou significativamente em ratos diabéticos. A administração de
atorvastatina impediu essas alterações sem modificar os níveis de colesterol. A hiperglicemia
foi um aumento significativo em níveis de mRNA de ACE e uma diminuição marcada na
expressão de ACE-2 no miocárdio de ratos diabéticos. A administração de atorvastatina
induzida a expressão de ARNm de ACE-2 e ARNm de ACE inibiu a sobre-express no
miocárdio de ratos diabéticos. Conclusões Nossos resultados indicam que a atorvastatina,
independentemente da sua capacidade de reduzir o colesterol, normaliza a relação da
expressão do ACE / ECA-2 e atenua o desenvolvimento de remodelamento adverso no
coração diabético.

Palavras-chave: Cardiomiopatias; Sistema renina-angiotensina; Reação em cadeia da

polimerase da transcriptase reversa (Fonte: DeCS BIREME).
RESUMO

Objetivos Este estudo investigou o efeito da atorvastatina na progressão do remodelamento

cardíaco e expressão de ACE-2 no miocárdio diabético de ratos. Materiais e Métodos.
Diabetes foi induzido em ratos Holtzman com uma injeção intraperitoneal de
estreptozotocina. Os animais foram divididos em 3 grupos: (1) ratos controle normais, (2)
ratos diabéticos e (3) ratos diabéticos tratados oralmente com atorvastatina (50 mg / kg / dia).
Após oito semanas de tratamento, os corações foram removidos para estudos morfométricos,
ensaio de conteúdo de colágeno e expressões genéticas de ACE e ACE2 mRNA. Resultados
Índice de hipertrofia miocárdica e deposição de colágeno foram aumentados em ratos
diabéticos, mas não nos ratos diabéticos tratados, sem produzir mudanças nos níveis de
colesterol. Os níveis de mRNA da ECA do miocárdio aumentaram, enquanto os níveis de
RNAm da ECA2 foram diminuídos em ratos diabéticos. A administração de atorvastatina
atenuou a superexpressão de mRNA da ECA e a superexpressão de mRNA da ACE-2 em
ratos diabéticos. Conclusões Nossos resultados indicam que a atorvastatina é a relação ECA /
ACE2 aos valores normais e atenua o desenvolvimento de remodelamento adverso no coração
diabético.

Palavras-chave: Cardiomiopatias; Sistema renina-angiotensina; Reação em cadeia da

polimerase via transcriptase reversa (fonte: MeSH NLM)

INTRODUÇÃO

As doenças cardiovasculares são as principais causas de morbimortalidade em pacientes

diabéticos (1). Durante as últimas três décadas, vários estudos epidemiológicos, clínicos e
experimentais confirmaram a existência de miocardiopatia associada ao diabetes (2). Essa
condição clínica é atualmente definida como a presença de disfunção miocárdica na ausência
de hipertensão arterial e doença arterial coronariana (1). Hipertrofia e fibrose do miocárdio
são as principais alterações patológicas observadas em cardiomiopatia diabética, inicialmente
essas mudanças contribuem para a disfunção diastólica do ventrículo esquerdo (VI), em
seguida, a pressão sistólica e, finalmente, o desenvolvimento de insuficiência cardíaca (IC) (2
-4).

O remodelamento cardíaco é um evento central tanto no desenvolvimento quanto na

progressão da IC (2). A evidência clínica e experimental sugere que a activação do sistema
renina-angiotensina (RAS) e a geração de angiotensina (ANG) II desempenha um papel
crítico na remodelação funcional e estrutural no coração diabético (4,5). É também bem
conhecido que o bloqueio do RAS, tanto diabetes clínica e experimental, podem atenuar a
progressão e em alguns casos mesmo inverter alterações estruturais no coração diabético (6).

Durante décadas, a enzima conversora da angiotensina (ECA) foi considerada uma enzima
chave na SRA. No entanto, essa visão clássica da SRA tem sido questionada pela descoberta
da enzima conversora homóloga I (ECA-2) (7). De fato, descobriu-se recentemente que os
níveis de Ang II dependem não apenas das atividades da renina e do ACE, mas também do
ACE-2 (8). Esta enzima degrada Ang I para Ang- (1-9) e Ang II para Ang- (1-7), portanto,
antagoniza a ação do ECA (7,8). Assim, ações vasoconstritivas / proliferativas ou
vasodilatadoras / antiproliferativas da ARS em tecidos seriam reguladas pelo balanço ECA /
ECA-2.

Existem evidências experimentais que demonstram o significado funcional da ECA-2 na

fisiopatologia cardiovascular (8). A este respeito, relatos recentes indicaram que os animais
knockout para ACE-2 mostram um aumento da Ang II e alterações na contractilidade
cardíaca, enquanto que os ratinhos que sobre-expressam o gene ACE-2 mostra a pressão
sanguínea sistólica inferior (9) . Essas observações nos permitem propor que a inibição da
ECA-2 poderia aumentar a doença cardiovascular e que sua maior expressão poderia produzir
um efeito benéfico.

Estatinas, inibidores da 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG-CoA) redutase,

demonstraram clinicamente reduzir a morbilidade e mortalidade cardiovascular (10). Embora
os benefícios das estatinas tivessem inicialmente sido atribuídos ao seu efeito hipolipemiante,
estudos recentes propuseram que as estatinas agiriam diretamente através de outros
mecanismos celulares (11). Recentemente, foi demonstrado que a inibição da via da Rho-
quinase pelas estatinas atenua a remodelação cardíaca induzida pela Ang II (12). Estas
observações sugerem que as estatinas podem inibir o remodelamento cardíaco ao interferir
com a sinalização de Ang II no coração diabético.

MATERIAIS E MÉTODOS

MODELO ANIMAL DE DIABETES EXPERIMENTAL

O protocolo experimental para este estudo foi realizado em conformidade com o Guia para o
Cuidado e Utilização de Animais de Laboratório publicado pelo Instituto Nacional de Saúde
(NIH Publication N ° 85-23, 1996). A diabetes foi induzida em ratos macho Holtzman (200-
220 g) a partir do National Agricultural University La Molina, com uma única injecção
intraperitoneal de estreptozotocina (STZ) 50 mg / kg, preparado em tampão / L citrato 0,1 mol
(pH 4,5). Apenas ratos com níveis séricos de glicose superiores a 200 mg / dL três dias após a
injeção de STZ foram incluídos no estudo (3). Os ratos de controlo foram injectados com o
mesmo volume de tampão citrato sozinho.

PROTOCOLO E GRUPOS EXPERIMENTAIS

Os ratos foram divididos em três grupos: (1) os ratos de controlo normal (C, n = 8), (2) ratos
diabéticos (D, n = 8) e (3) Animais diabéticos tratados com ratos atorvastatina (DA, n = 8) . A
atorvastatina é administrada por gavagem na dose de 50mg / kg / dia por oito semanas. As
doses de estatina utilizados neste estudo foi baseado em um estudo anterior (13), no qual foi
mostrado que uma dose de 50 mg / kg foi suficiente para bloquear a atorvastatina RhoA / Rho
em corações de rato. Também foi demonstrado que esta dose produz concentrações
plasmáticas comparáveis às obtidas após a administração oral de doses clínicas de
atorvastatina no homem (14).

Os animais foram mantidos sob condições normais de iluminação (ciclo claro-escuro de 12 h)

e alimentados com uma dieta padrão e água ad libitum. Ao final das oito semanas, os animais
foram anestesiados por injeção intraperitoneal de pentobarbital sódico (40 mg / kg). Depois de
coletar o sangue, o coração foi removido rapidamente. No músculo papilar, o coração foi
dividido em duas partes em uma direção transversal: a porção distal para o estudo
histomorfométrico e a porção proximal para a determinação de colágeno e expressão gênica.

DAS DETERMINAÇÕES STERÉTICAS

No final do estudo, os ratos foram jejuados por 12 h, em seguida, amostras de sangue foram
tomadas por punção cardíaca. O soro foi separado e, em seguida, os níveis de glucose e
colesterol foram analisados color imet ricamente (kit de diagnóstico Biochemical, humano,
Wiesbaden, Alemanha) utilizando um / Vis (Jenway 6505 UV / VIS Jenway, Felsted, Reino
Unido) espectrofotómetro de UV.

HISTOLOGIA E ANÁLISE MORFOMÉTRICA

Sob anestesia, os corações foram removidos, depois lavados com solução salina, secos e
pesados. O índice de hipertrofia do VE foi calculado pela razão VI peso / peso corporal (o
septo intraventricular foi incluído no peso do VE). Finalmente, o VI foi fixado em
formaldeído a 10%, embebido em parafina, cortado em lâminas de 4 μm de espessura e
corado com hematoxilina-eosina e tricrômico de Masson.

Com a ajuda de um computador equipado com software para análise de imagens (ImageJ,
NIH, Bethesda, EUA), mediu-se a área de secção transversal dos cardiomiócitos como
indicador do tamanho das células. Em cada animal, pelo menos 50 cardiomiócitos foram
medidos, cortados transversalmente e com seu núcleo claramente na posição central (15). Por
outro lado, o grau de fibrose perivascular foi estimado pela relação entre o colágeno
perivascular e a área luminal das artérias coronárias intramiocárdicas em um total de dez
campos por coração. Um único pesquisador, inconsciente da natureza dos grupos
experimentais, estava encarregado da análise histológica.

DETERMINAÇÃO DO ARNm ECA E ECA-2 POR TRANSCRIÇÃO REVERSA DA

REAÇÃO DA CADEIA DE POLIMERASE (RT-PCR)

Para determinar se a transcrição de ACE e ACE-2 no miocárdio foi afectado por diabetes, a
expressão de ARNm de ACE e ACE-2 foi avaliada por transcrição reversa acoplada ao ADN
da reacção em cadeia da polimerase (RT- PCR). O RNA total foi extraído do miocárdio
usando o kit PureLink ?? Kit de Purificação de RNA Micro-para-Midi Total (Invitrogen,
Carlsbad, CA, EUA) de acordo com a recomendação do fabricante.

Dez microlitros de ARN total foi utilizado para sintetizar ADNc utilizando o kit Superscript
III First-Strand Synthesis (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) kit. O ADNc foi amplificado por
PCR utilizando ADN-polimerase por Platinum®Taq (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) para o
ACE, ACE-2 e gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH) como controlo,
respectivamente. As sequências de iniciador foram como se segue: para a CEA: para a frente,
5 ?? - GGT CAC CAA CGG CTG CTT-3 ??, reverter, 5 ?? - CTT GGC ATA GTT TCG
TGA GGAA-3 ??; para ACE-2: para a frente 5 ?? - GTG AAA GGT CAC CAC AAT GG-3
??, reverter, 5 ?? - TGT AGG ATC TTC ATG AGG CAG-3 ??; para GAPDH: para a frente,
5'-CAC TCA AAG ACG TTG TCA ATGC-3' , reverso, 5'-GTC CTC AGT GTA GAT GCC
CAG-3'. As condições de amplificação foram: 30 ciclos de desnaturação a 94 ° C por 1 min,
hibridao a 62 durante 1 min e alongamento a 72 durante 1 min para RCT; 38 ciclos de
desnaturação a 94 ° C durante 1 min, hibridação a 60 ° C durante 1 min e alongamento a 72 °
C durante 1 min para ECA-2; e 35 ciclos de desnaturação a 94 ° C durante 1 min, hibridação a
62 ° C durante 1 min e alongamento a 72 ° C durante 1 min para GAPDH.

A intensidade das bandas foi quantificada por densitometria utilizando um planímetro digital
(ImageJ, NIH, Bethesda, EUA); e foi normalizado em relação à banda do gene de controle
GADPH, com expressão padrão no miocárdio, em corrida eletroforética em gel de agarose.

DETERMINAÇÃO DO CONTEÚDO DO COLAGÉNIO

A determinação do conteúdo de colágeno ventricular foi feita por um método bioquímico

baseado na quantificação de hidroxiprolina (HOP) originalmente descrita por Reddy (16),
com pequenas modificações. Resumidamente, o tecido (50 mg) foi manualmente
homogeneizado em água destilada. Os homogenatos foram hidrolisados num volume de
NaOH 4N a 120 durante 20 min. As amostras foram oxidadas com 450 μL de reagente de
cloramina T durante 25 min à temperatura ambiente. As amostras foram então misturadas
com 500 μL de reagente de Erlich e incubadas a 65 ° C por 20 min. A absorvância da amostra
foi lida a 550 nm num espectrofotómetro (Jenway 6505 UV / VIS, Jenway, Felsted, Reino
Unido). O teor de colagénio foi estimado a partir de uma curva de calibração (0-10 μg / ml de
L-hidroxiprolina),

ANÁLISE ESTATÍSTICA

Os resultados foram expressos como média + erro padrão. Uma análise de variância
(ANOVA) foi realizada para estabelecer diferenças entre os grupos, seguida do teste de Tukey
para estabelecer diferenças individuais. Um valor de p <0,05 foi considerado estatisticamente
significativo. Os dados foram processados com o pacote estatístico SPSS 15.0.
RESULTADOS

PARÂMETROS METABÓLICOS

Ao longo do período de estudo de oito semanas, os ratos diabéticos apresentaram perda de

peso corporal, polifagia e polidipsia. O tratamento com atorvastatina não preveniu a perda de
peso nem reduziu o alto consumo de alimentos e água em ratos diabéticos.

Os ratos diabéticos mostraram um aumento acentuado na glicose sérica em comparação com

os ratos controle (417,75 ± 21,12 mg / dL versus 123,55 ± 16,02 mg / dL, p <0,05). O
tratamento de ratos diabéticos com atorvastatina não modificou os níveis de glicose (408,25 ±
21,95 mg / dL) ( Tabela 1 ). Estes dados sugerem que a atorvastatina não exerceu um efeito
metabólico significativo no controle glicêmico desses animais.

Os animais diabéticos apresentaram níveis mais elevados de colesterol sérico em comparação

com os animais controle (107,24 ± 2,88 mg / dL vs 86,39 ± 5,58 mg / dL, p <0,05). O
tratamento com atorvastatina não afetou significativamente os níveis de lipídios nos ratos
diabéticos tratados (104,46 ± 2,98 mg / dl). Nossos dados mostram que a atorvastatina não
afetou os níveis séricos de colesterol nos animais tratados, o que nos permite investigar in
vivo os efeitos pleiotrópicos da atorvastatina.

HIPERTROFIA CARDÍACA

O peso do VE em relação ao peso corporal como medida do índice de hipertrofia do VE foi

significativamente maior nos ratos diabéticos (2,59 ± 0,11), quando comparado aos ratos
controles (2,11 ± 0,04; <0,05). O tratamento com atorvastatina atenuou significativamente o
desenvolvimento de hipertrofia de VE em ratos diabéticos em comparação com ratos não
tratados (2,23 ± 0,09 vs. 2,59 ± 0,11, p <0,05) ( Tabela 1 ).

O exame histológico revelou que a hiperglicemia também provocou um aumento significativo

na área de secção transversal de cardiomiócitos de ratos diabéticos (308,11 ± 27,51
.mu.m.sup.2) em comparação com ratos de controlo (176 ± 12,61 .mu.m.sup.2; p < 0,05). A
atorvastatina tratamento reduziu o aumento em cruz - área da secção de cardiomiócitos em
ratos diabéticos (217,9 ± 23,41 .mu.m.sup.2; p <0,05) ( Figura 1 ).

O CONTEÚDO DO COLAGÉNIO

Verificou-se que o VI dos ratos diabicos era substancialmente fibroso, com um aumento
acentuado no depito de colagio intersticial e perivascular em comparao com os ratos de
controlo. O tratamento com atorvastatina foi capaz de normalizar o aumento da fibrose
perivascular e intersticial em ratos diabéticos ( Figura 2a-f ). A análise histológica mostrou
que a fibrose perivascular afeta principalmente pequenas artérias intramiocárdicas ( Figura 2h
). As extensas áreas de fibrose intersticial localizavam-se, predominantemente, no endomísio
e no perimísio.
A fibrose cardíaca medição bioquímicos, teor de hidroxiprolina foi também encontrada
aumentou significativamente em ratos diabéticos VI, em comparação com ratos de controlo
(3,92 ± 0,57 mg / mg contra 2,16 ± 0, 09 mg / mg, p <0,05). A atorvastatina reduziram
significativamente o aumento do teor de hidroxiprolina no VI de ratos diabéticos (2,78 ± 0,26
mg / mg versus 3,92 ± 0,57 mg / mg; p <0,05) ( Figura 2i. ).

EXPRESSÃO GÊNICA DO ECA E DO ECA-2

O ARNm da ACE no tecido cardíaco dos ratos diabéticos foi marcadamente mais elevado do
que o observado nos ratos de controlo (3,56 ± 0,8 vs. 1,36 ± 0,2, p <0,05). O aumento do
ARNm da ECA foi significativamente atenuado pela atorvastatina em ratos diabéticos (2,09 ±
0,3 vs 3,56 ± 0,8, p <0,05). Em contraste, a expressão do ARNm de ECA-2 diminuiu
significativamente no miocárdio de ratos diabéticos, em comparação com o grupo de controlo
(1,17 ± 0,6 vs. 1,78 ± 0,2, p <0,05). ). A administração de atorvastatina aumentou
significativamente os níveis do mRNA do ECA-2 em comparação com os ratos diabéticos
sem tratamento (3,06 ± 0,3 vs 1,17 ± 0,6, p <0,05). Esta diferença foi ainda mais acentuada ao
ser representada como uma razão entre os níveis de ARNm de ECA / ECA-2 para cada animal
( Figura 3 ).

DISCUSSÃO

O tratamento com estatina mostrou que tem um papel significativo na melhoria do

remodelamento cardíaco em vários modelos de dano cardíaco. Este trabalho demonstra, pela
primeira vez, a atorvastatina, utilizada a uma dose demasiado baixa para reduzir os níveis de
colesterol, atenuam o desenvolvimento de alterações estruturais da remodelação cardíaca e
normaliza a relação entre a expressão do gene da ECA / ECA- 2 em um modelo experimental
de cardiomiopatia diabética.

O rato representa um excelente modelo para o estudo de efeitos pleiotrópicos? de estatinas, já

que seu perfil lipídico tem se mostrado refratário ao tratamento com estatinas (17). No
presente estudo, os níveis séricos de colesterol foram marcadamente mais elevados em ratos
diabéticos, no entanto, a administração de atorvastatina não modificou esse parâmetro. Da
mesma forma, o tratamento de ratos diabéticos com atorvastatina por 12 semanas não
modificou os níveis de glicose ( Tabela 1 ). Esses dados sugerem que a administração de
atorvastatina não exerceu um efeito metabólico importante em relação ao controle glicêmico e
lipídico de nossos animais.

A ativação patológica da SRA com o conseqüente aumento da Ang II local produz efeitos
deletérios no miocárdio durante o remodelamento cardíaco (5). O diabetes per se demonstrou
ser capaz de ativar o SRA cardíaco, favorecendo o aumento da densidade dos receptores AT1
e a atividade da ECA no miocárdio (2,5). Além disso, o tratamento com drogas que
interrompem a cascata de SRA mostrou atenuar a hipertrofia cardíaca induzida pela Ang II
(6). Nossos achados demonstram que a administração de atorvastatina reduz o aumento da
área de secção transversal dos cardiomiócitos e o aumento do peso do VE em ratos diabéticos.

Em 1999, Luo (18) foi o primeiro a mostrar que o tratamento com uma estatina (sinvastatina)
reduz a actividade da ACE e quantidade AngII no miocárdio de ratos com estenose aórtica. O
efeito hipertrófica de estatinas pode ser devido, em parte, à diminuição da actividade da ECA
(18) ou a expressão de receptores de AT1 (19) no miocárdio. No entanto, a capacidade das
estatinas para inibir a hipertrofia cardíaca em resposta a outros agonistas tais como a
norepinefrina (20) e da endotelina-1 (21), sugerem que o mecanismo predominante de acção
inclui mecanismos distais receptores AT1. Esta hipótese é suportada pelos resultados de
Ocaranza (22), que mostrou que RhoA quinase impede o bloqueio da remodelação vascular
induzida por Ang II em maior medida que o bloqueio do receptor AT1.

Muitos estudos experimentais e clínicos demonstraram que a fibrose do miocárdio, é a

cardiomiopatia diabética patológica substrato (23). Dependendo da sua distribuição e
quantidade, fibrose do miocárdio pode aumentar de forma adversa a rigidez de diminuir
drasticamente VI cumprimento do miocárdio, favorecendo o desenvolvimento de IC (24). É
bem sabido que a diabetes sozinho é capaz de iniciar a expressão de genes pr�fibr�icos e
remodelação da matriz extracelular (ECM) no miocárdio (5). De facto, tem sido mostrado que
o enchimento diastólico prejudicada de VI está associada com mudanças recíprocas no perfil
de expressão do gene do colagénio, bem como a sua armazenagem e distribuição no VI de
ratos diabéticos (24,25).

Os nossos resultados mostram que a diabetes provoca um aumento na deposição de

intramiocardial teor de colagénio, fibrose perivascular predominantemente subendocárdio em
ratos diabéticos ( Figura 2 ). A administração de atorvastatina reduziu significativamente a
deposição de colágeno no interstício e no espaço perivascular em ratos diabéticos. Os nossos
resultados são consistentes com trabalhos anteriores demonstrando que as estatinas são
capazes de reduzir a deposição de colagénio induzida por Ang II por redução da expressão de
ARNm de TGF-β em fibroblastos cardíacos (26). Estas observações permitem a assumir que
as estatinas diminuem a fibrose do miocárdio induzida por Ang II, sugerindo um efeito antif
ibrótico clara de estatinas no coração diabético.

Desde a última década, a Ang II tem sido proposta como um dos mais importantes
mediadores do remodelamento cardíaco que precede o IC, independentemente da lesão inicial
(5). Recentemente, uma via paralela da SRA foi descoberta (7) onde o ECA-2 surge como um
novo antagonista dos efeitos deletérios exercidos pela Ang II. Embora o ECA-2 hidrolise
vários substratos, a produção de Ang- (1-7) parece ter o papel mais importante no nível
cardiovascular. A Ang- (1-7) tem demonstrado ser um importante regulador da função
cardiovascular, promovendo a vasodilatação e um efeito antiproliferativo (8). Portanto, o
ECR-2 interviria na manutenção da homeostase cardiovascular, contrarregulando os efeitos
deletérios derivados do ECR (7,8).

A ang II através dos receptores AT1 induz alterações estruturais no miocárdio, incluindo o
acúmulo de proteínas do CME e a indução de fatores de crescimento profibróticos (5,25). No
presente estudo, o aumento do teor de colagénio em ratos diabéticos foi acompanhado por um
aumento acentuado na proporção de ACE / ACE-2 no miocárdio, sugerindo um aumento local
da Ang II. Os nossos dados são consistentes com Landau (25), que mostrou que a diabetes
provoca uma diminuição progressiva na expressão de ACE-2, enquanto que favorece um
aumento marcado na expressão e actividade da ECA do miocárdio de ratos Diabéticos Qin
(27), em ratos mutantes para o alelo nulo do gene CCK-A (colecistocinina), relataram que a
diminuição da hipertrofia cardíaca produzida pela atorvastatina em um modelo diferente de
sobrecarga de pressão está associada a uma redução na expressão de ECA-2 e proteína;
nossos resultados sugerem que a capacidade de atorvastatina para atenuar a progressão da
remodelação cardíaca induzida por Ang II está associada com a diminuição da expressão de
ACE e um aumento progressivo na expressão de ACE-2 no coração diabético.

A via de sinalização intracelular RhoA-quinase é um novo mecanismo descoberto na última

década, com uma participação destacada no remodelamento cardiovascular (11). A relação
entre a cinase através de RhoA e SRA foi avaliada por Aoki (28) que mostraram que a Ang II
regula a expressão de vários genes atrav da activao de RhoA fibrótica via cinase. A este
respeito, tem sido relatado recentemente que em ratos submetidos a infusão contínua de
angiotensina II, a inibição por meio de RhoA quinase impede por si só aumentou a expressão
de TGF-β e deposição de ECM na aorta ( 29). Nossos resultados são consistentes com os de
Ocaranza (30), que relataram que a inibição da via RhoA-quinase com fasudil favorece o
aumento da expressão de ECA-2 na aorta de ratos, enquanto diminui expressão gênica e
atividade de ECA. Coletivamente, nossos resultados nos permitem propor que as estatinas
atenuam a expressão de genes profibróticos induzidos pela Ang II através da inibição da
ativação da RhoA-quinase.

Em conclusão, a ativação desequilibrada do SRA sugere um aumento acentuado dos efeitos

da Ang II no miocárdio diabético como um possível mecanismo que contribui para o
remodelamento cardíaco. Nossos resultados sugerem que a atorvastatina, independentemente
de sua capacidade de baixar o colesterol, promove o bloqueio das vias de sinalização que
ativam o remodelamento cardíaco no diabetes, aumentando o mRNA do ECA-2 cardíaco.
Assim, nossos dados sugerem que a atorvastatina seria uma estratégia efetiva e inovadora para
prevenir a progressão do remodelamento cardíaco na cardiomiopatia diabética.

Contribuição de Autoria

CA participou da concepção e desenho do trabalho, análise e interpretação dos dados e

redação do manuscrito. A FV participou do desenho do trabalho e análise bioquímica das
amostras. O LR-D participou do desenho do trabalho e dos testes de RT-PCR, interpretação e
redação parcial do manuscrito. Todos revisaram e aprovaram a versão final do trabalho.

Fontes de Financiamento

Auto-financiado
Conflitos de interesse

Os autores declaram não haver conflitos de interesse na publicação deste artigo.

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