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AULA
ambientes hipersalínico
– Aula prática
Meta da aula
Mostrar a existência de micróbios do
filo das arqueas na biosfera, em especial, aquelas
do grupo das halofílicas.
capaz de:
• demonstrar o efeito do calor sobre os micróbios halofílicos;
• mostrar que agentes químicos (desinfetantes ou anti-sépticos)
também têm ação sobre os micróbios halofílicos;
• reconhecer os ecossistemas ocupados pelos micróbios do grupo
das arqueas.
Pré-requisitos
Para a compreensão desta aula, é necessário que você reveja alguns
conceitos apresentados na Aulas 1 (micróbios como digestores de matéria
orgânica), na Aula 3 (formas vegetativas das células), na Aula 6 (necessidades
nutricionais microbianas), na Aula 8 (semeadura de micróbios por esgotamento
– ziguezague), na Aula 9 (filogenia microbiana), na Aula 10 (produção de
metano pelas arqueas metanogênicas) e na Aula 11 (ação de anti-sépticos e
desinfetantes sobre micróbios do solo).
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INTRODUÇÃO Nesta aula você vai conhecer um pouco mais sobre um grupo bastante
heterogêneo, de organismos procarióticos, eles são filogeneticamente
distantes das eubactérias, classificados no filo Archaea. Ele inclui seres
anaeróbicos, aeróbicos, autotróficos fotossintetizantes, heterotróficos,
termofílicos, acidofílicos e halofílicos. Os membros desse filo são encontrados
em ambientes hostis à sobrevivência dos outros seres vivos. São ambientes
que, acredita-se, guardem semelhanças com aqueles existentes na superfície de
nosso planeta, em épocas muito primitivas (muito quentes, muito frios, muito
ácidos, muito alcalinos, hipersalínicos, sob alta pressão), ou seja, ambientes de
condições extremas. Por isso, as arqueas também são conhecidas como seres
extremófilos. Uma característica exclusiva de algumas arqueas é o metabolismo
PICOPLÂNCTON
metanogênico: não se conhecem eubactérias nem eucariontes capazes de
Zonas oligotróficas
marinhas dominadas produzir metano como subproduto do metabolismo fermentativo.
por células com
dimensões lineares Cerca de 20% da biomassa do PICOPLÂNCTON marinho se compõem por
menores que 2µm.
arqueobactérias.
Termo que significa aos demais seres vivos, você verá nesta aula que as arqueas de ambiente
“os antigos”. Refere-se hipersalínico também são sensíveis à ação de produtos desinfetantes que fazem
ao heterogêneo filo de
micróbios encontráveis parte do nosso cotidiano.
em ambientes
extremos, daí serem
conhecidos, também,
como extremófilos. CONVERSANDO SOBRE AS ARQUEAS
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Eucariontes
Animais Fungos
Plantas
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Bactérias
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Arqueas
Outras bactérias
Cianobactérias Crenarqueotas Euriarqueotas
Proteobactérias Algas
Ciliados
ue originaram os cloroplastos
ias q
a ctér Outros Eucariontes
B
unicelulares
(outros protistas)
as qu e originaram as mitocôndrias
téri
B ac
Korarqueotas
Bactérias
hipertermofílicas
Figura 14.1: Posição filogenética das arqueas em relação aos outros seres vivos (Modif. Doolittle, 2000).
!
O meio de cultura para as arqueas termo-acidófilas deve ter o pH ácido,
ser adicionado de enxofre inorgânico e os tubos têm de ser mantidos
hermeticamente fechados por dois motivos:
a. a água não pode evaporar;
b. esses micróbios são anaeróbios, ou seja, o O2 lhes é tóxico.
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Figura 14.2: Extração de sal no litoral brasileiro, onde a água do mar é contida
em reservatórios para evaporar.
http://200.156.34.70/IQM/verdeII/cap2_files/fotos/salina.jpg
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O prefixo hal significa sal, o que justifica os termos halofílicos para os micróbios e
o termo halogênicos para os elementos químicos. O sufixo ita refere-se a pedra ou
cristal. Então halita quer dizer sal cristalizado, como você pode ver um fragmento
de rocha de sal nesta figura obtida no site http://zdna2.umbi.umd.edu/~haloed/
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ATIVIDADES PRÁTICAS
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a. Reconhecimento das características fisiológicas dos micróbios
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halofílicos.
Esta questão será respondida de maneira prática e, para isso, você vai
AGAR-HIPERSALÍNICO
testar o efeito do calor sobre as populações microbianas halofílicas.
O meio de cultura definido
como hipersalínico
utilizado nesta prática tem
a seguinte formulação e b. Reconhecimento do impacto dos agentes antimicrobianos, de uso
modo de preparo: corrente pela população humana, sobre os micróbios habitantes de
ambientes hipersalínicos.
Formulação
H2O 250mL
Nesta etapa do trabalho, você deve ter em mente a seguinte questão:
NaCl 24g
os produtos anti-sépticos e desinfetantes lançados na água, após o
KCl 1g uso, são prejudiciais aos micróbios de ambientes inóspitos? Se forem,
o uso desses produtos pode ser considerado um crime, de efeito
Caldo nutritivo
em pó 10g retardado, contra a Natureza?
Extrato de
levedura 1g
Para execução destas práticas, você utilizará os seguintes materiais:
Agar agar puro 4g
– tubo com amostra de micróbios halofílicos, previamente cultivados
Azul de a partir de carne salgada (pé de porco) e clonados em meio de cultura
bromotimol a 1% 1mL
hipersalínico;
Preparo – tubo de ensaio vazio, com tampa;
Pesar os componentes do – alça metálica;
meio (cada componente
deverá ser pesado – bico de Bunsen ou lamparina;
individualmente sobre um
pedaço de papel alumínio, – fósforos;
portanto, a balança deverá
ser calibrada antes de cada – 1 bulbo de plástico;
pesagem). Juntar todos
os componentes secos no
–2 placas de Petri com meio de AGAR-HIPERSALÍNICO para cultivo dos
Erlemeyer e em seguida micróbios halofílicos;
adicionar a água. Ferver
a mistura até dissolver o – estufa calibrada para 37ºC;
agar-agar e, em seguida,
verter 20mL em cada
– panela para ferver água;
placa de Petri. Deixar à
– fogão ou tripé para colocar a panela na chama do bico de
temperatura ambiente e
aguardar até que o meio Bunsen;
gelifique. Tampar as placas
e identificá-las. Embrulhá- – suporte para tubo (lata estreita);
las com filme plástico, de
– 5 a 7 disquinhos de papel filtro;
forma hermética, para
poder estocá-las, sob – desinfetantes e anti-sépticos;
refrigeração (2-8°C), por
até seis meses.
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– pinça;
– swab;
– régua;
Execução
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Função dos ingredientes usados na confecção do meio de cultura:
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– caldo nutritivo – o pó para preparo de caldo nutritivo tem em sua
composição 37,5% de extrato de carne e 62,5% de peptona. Entra
na composição do meio como suprimento de fonte de nitrogênio
e carbono.
– extrato de levedura – fonte de vitaminas, principalmente, aquelas
do complexo B.
azul de bromotimol – substância indicadora de pH. Quando o meio
está verde seu pH é neutro, quando amarelo o pH é ácido e quando
alcalino aparece como azul.
Breves comentários
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que, se à primeira vista apresentam-se como benéficos, a longo prazo
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prejudicarão o meio ambiente das futuras gerações ou, em particular,
dos nossos descendentes (filhos, netos, bisnetos, tataranetos...). Em qual
cultura humana se pensa em preservar as condições ambientais para os
descendentes que nascerão 400 ou 500 anos à frente?
8. caso sua programação de aulas não coincida com o tempo da leitura dos
resultados, após o tempo de incubação, a borda da placa deve ser vedada
com fita crepe e a mesma colocada na geladeira, para posteriormente
ser analisada com o seu tutor, de acordo com o diâmetro dos halos de
inibição formados.
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Breves comentários
CONCLUSÃO
Você viu nesta aula que as arqueas são células microbianas que
sobrevivem em condições extremas de ambiente físico ou químico.
As arqueas, de acordo com os seus hábitats, podem ser classificadas
como termofílicas, metanogênicas e halofílicas. As primeiras são seres
anaeróbicos que se desenvolvem em ambiente de temperatura variando
entre 65°C a 95°C. As metanogênicas também são anaeróbicas, e são
responsáveis pela produção de gás metano a partir da matéria orgânica.
As halofílicas são aeróbicas, mas têm o metabolismo dependente de íons
sódio para estabelecer o equilíbrio sódio-potássio e para a estruturação
da parede celular, que é protéica. As halofílicas se apresentam como
uma excelente ferramenta para os ensaios microbianos, pois podem ser
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manipuladas sem necessidade da obediência às manobras assépticas,
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embora, para não perder o costume, seja conveniente, quando possível,
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adotar essas manobras. Como representantes dos seres que sobrevivem
em ambientes exóticos, os micróbios halofílicos se prestam como
informantes sobre o efeito de produtos que, se acumulados no ambiente,
podem provocar crimes contra a Natureza.
RESUMO
Na próxima aula, você vai compreender por que os vírus atravessam as membranas
esterilizantes que retêm os micróbios, e também como os fatores fisiológicos,
que garantem as condições vitais dos animais, contribuem para a instalação das
suas viroses.
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