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Fernando Corrêa de Almeida¹, Isabel Rodrigues Marques Amaral¹, Carlos Ueira Vieira¹,
Warwick Estevam Kerr¹, Ana Maria Bonetti¹
no Estado de Minas Gerais; a não detecção pode ser devida ao limitado número de
amostras (30 abelhas no total). Os resultados desse trabalho sugerem que a circulação
desses vírus nas colônias possa estar relacionada com o desaparecimento e morte
inesperada de abelhas A. mellifera, relatadas por apicultor da região do Triângulo
Mineiro (MG). Essa análise faz parte de um Programa de Estudo de Epidemiologia
Molecular de vírus em abelhas no Brasil.
Fernando Corrêa de Almeida¹, Isabel Rodrigues Marques Amaral¹, Carlos Ueira Vieira¹,
Warwick Estevam Kerr¹, Ana Maria Bonetti¹
Abstract: The mortality of Apis mellifera is one of the several problems that beekeepers are
confront around the world. Divers factors contribute to this fact, like as the presence of
Varroa destructor (mite) and Nosema apis (protozoan) and exposure to pesticides used in
agriculture. Mortality is aggravated by the presence of retroviruses that infect bees,
causing undesirable deformations. With the objective to investigate the death episode of
honeybees reported by beekeepers in the Triangulo Mineiro region, was performed this
analysis, which describes the first molecular detection of viruses in bees in Minas Gerais
State. Made RT-PCR with primers specific for the virus Acute Bee Paralisys Virus (ABPV),
Deformed Wing Virus (DWV) and Black Queen Cell Virus (BQCV), in pool 15 bees derived
from 2 hives (15 bees each) in a apiary of the Triangulo Mineiro (MG). Analysis by
electrophoresis in agarose gel 1.5% indicated fragments corresponding to the DWV and
ABPV. The latter was confirmed by sequencing on MegaBACE and alignment with BLAST,
showing homology of this gene with the Acute bee paralysis virus (gene encoding the
capsid protein). The samples of A. mellifera analysis wasn’t detected the presence of the
virus BQCV, but wasn’t put away of circulation in Minas Gerais State, the failure detection
maybe was to limited number N-amostrals samples (30 bees in total). The resulted suggest
that circulation of theses viruses in colonies maybe was associated to the disappearance
and unexpected death of honeybees, reported by beekeepers in regions of Triangulo
Mineiro (MG). This analyse is part of a new Program for the Study of Molecular
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INTRODUÇÃO
2. MATERIAL E MÉTODOS
O RNA proveniente das amostras das abelhas foi utilizado como molde para
a síntese do cDNA por transcrição reversa (50ng RNA) utilizando a enzima SuperScript II
Reverse Transcriptase (INVITROGEN) seguindo recomendações do fabricante. O cDNA
obtido foi testado quanto à qualidade com o gene codificador da proteína ribossomal 49
(RP49).
3. RESULTADOS E DISCUSSÃO
Figura 1. Produtos do multiplex PCR, para detecção dos vírus Deformed Wing
Virus (DWV), Acute Bee Paralysis Virus (ABPV) e Black Queen Cell Virus (BQCV) em
Apis Mellifera (2 colônias). Fragmentos correspondentes aos vírus DWV, 129pb (x) e do
vírus ABPV, 500pb (y). Colunas do gel: M, marcador (100pb); 1 e 2, DWV; 3, controle
negativo para DWV; 4 e 6, ABPV; 7, controle negativo para ABPV; 8 e 9, BQCV; 10,
controle negativo para BQCV.
Foram pesquisados três diferentes tipos de vírus, Deformed Wing Virus (DWV),
Acute Bee Paralysis Virus (ABPV) e Black Queen Cell Virus (BQCV). O ABPV foi
purificado do gel e clonado em pGemT-Easy (PROMEGA). Os clones contendo insertos
foram submetidos ao seqüenciamento automático em MegaBace (Pharmacia). As
seqüências obtidas do vírus foram alinhadas utilizando o banco de dados BLAST
(Figura 2). O resultado apontou alta similaridade (96%) com a seqüência correspondente
ao ABPV publicada (GenBank Adesão No.AY763414) e E-value de 0,0, confirmando a
presença desse vírus em Apis mellifera no Estado de Minas Gerais. A metodologia de
RT-PCR utilizada para detecção molecular dos vírus mostrou-se adequada.
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Figura 2. Alinhamento por BLAST mostra a homologia desse gene com o do Acute Bee
Paralysis Virus isolado do gene do capsídeo F6 em Apis mellifera (Figura 1). 96% de
similaridade entre os genes, confirmando a presença do mesmo.
estudo. Não foi descartada a existência do vírus BQCV nos apiários, a ausência pode ser
devido ao baixo número de amostras coletadas (15 por colônia).
4. CONCLUSÃO
A presença do vírus Acute Bee Paralysis Vírus (ABPV) e Deformed Wing Virus
(DWV) é positiva para o Estado de Minas Gerais, assim como o método empregado para
detecção é completamente vantajoso e de rápido diagnóstico.
5. AGRADECIMENTOS
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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viruses. Bee world v. 77, p.141–162, 1996.
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