EXERCÍCIOS DE ENGENHARIA GENÉTICA

1) Um genoma linear de bacteriófago foi marcado radiotivamente com 32P nas suas
duas extremidades e então foi digerido com a enzima de restrição EcoRI que gerou
fragmentos com os seguintes tamanhos: 8,0 + 7,4 + 6,2 + 4,5 e 2,9 kb. Um
autorradiograma realizado após o Southern blot da digestão revelou que a
radioatividade estava associada com os fragmentos de 8,0 e 6,2 kb. Uma digestão
com a enzima de restrição BamHI gerou fragmentos de 12,9 +10,1 e 6,0 kb sendo
que a radioatividade estava associada com os fragmentos de 10,1 e 6,0 kb. A
digestão dupla com EcoRI e BamHI gerou fragmentos de 7,4 + 6,2 + 6,0 + 3,5 + 2,9
+ 2,0 e 1,0 kb. Pergunta-se:

a) Qual o tamanho do genoma do fago?

R: 29 kb

b) Faça um mapa de restrição deste genoma indicando as posições relativas e as

distâncias entre os sítios de restrição

Onde B = BamHI e E =EcoRI

2) A sequência de DNA abaixo representa um gene que se quer amplificar por PCR.
Desenhe um par de primers com tamanho de 24 nucleotídeos cada para poder amplificar
este fragmento a partir das extremidades. Sublinhe o local de anelamento dos primers e
calcule o Tm de cada um?

tgcgagctgaccaacatcaccatcacggtcgagaaagaggaatgtggcttctgcataagcatcaacaccacgtggtgtgc
aggctactgctacacccgggacttggtgtacagggacccagcaaggcccaacattcagaaaacatgtaccttcaaggagc
tggtctacgagacggtgaaagtgcctggctgtgctcaccatgcagactccctgtacacgtacccagtagccactgaatgt
cactgtggcaagtgtgacagcgacagcactgactgcaccgtgcgaggcctggggcccagctactgctccttcagggaaat
caaagaataa

Primer 1: 5´-tgcgagctgaccaacatcaccatc
Tm = (2x11)+(4x13)= 22+52 = 74°C

Primer 2: 5´-ttattctttgatttccctgaagga
Tm = (2x16)+(4x8)= 32+32 = 64°C