CONCEITO

C o n c e i to

Originada da palavra grega Kólon, que designa forma

de reprodução assexuada, ou seja, geração de
indivíduos idênticos ao doador do DNA;
 C o n c e i to

• Toda vez que um ser é gerado a partir de células ou fragmentos

de uma mesma matriz, através de um processo de reprodução
assexuada que resulta na obtenção de cópias geneticamente
idênticas de um mesmo ser vivo (microrganismo, vegetal ou
animal), acontece uma clonagem.

• A clonagem pode acontecer de forma natural ou induzida.

HISTÓRICO
 Linha do Tempo

1997 Primeiro clone de um mamífero adulto

Ovelha Dolly
 Dolly
• O maior feito dos cientistas, foi fazer com que uma célula adulta
se tornasse totipotente (células-tronco) de novo.

• Vale ressaltar que, para o procedimento, utilizar “mães” de

fenótipos distintos foi uma maneira dos cientistas obterem um
melhor controle quanto à possibilidade das características
destas fêmeas serem misturadas.
 Dol l y

• Núcleo utilizado: Uma célula da glândula mamária de uma ovelha de seis anos
denominada Bellinda, da raça Finn Dorset.
• Doadora do Óvulo: Uma outra ovelha, chamada Fluffy, da raça Scottish Blackface.
• Gestação: Finalmente, uma terceira ovelha, Lassie, da raça Scottish Blackface foi
quem gestou a ovelha Dolly.
 Linha do Tempo
A bezerra Vitória coloca o Brasil na
2001 linha de frente da pesquisa de
clonagem.

Vitória foi clonada pela técnica de transferência nuclear a partir de células embrionárias e, desde que
nasceu sempre mostrou bom desempenho em relação a crescimento e desenvolvimento de acordo
com os padrões da raça Simental. Em 2004, com o nascimento de seu primeiro filhote, comprovou
que era um clone perfeito do ponto de vista científico e de produção, levando em consideração o
potencial reprodutivo e a habilidade materna. Em 2006, deu à luz mais uma cria. Além dos dois filhos,
Vitória deixou ainda dois netos, todos nascidos de forma natural.
Vi t ó r i a
A bezerra Vitória nasceu em 17 de
março de 2001 com 50 kg.

As células que originaram Vitória foram

obtidas de um embrião de cinco dias. Ou
seja, Vitória é um clone de uma vaca
virtual, que não chegou a nascer.

Em 2004, deu à luz a bezerra Glória

por inseminação artificial.

Vitória foi o primeiro clone bovino da

América Latina. O Projeto da clonagem de
Vitória consumiu aproximadamente R$ 300
mil de investimentos em 3 anos.
Vi t ó r i a
• O bezerro é um clone de uma célula de embrião,
que ainda não passou por todos os estágios de
diferenciação celular.
• Enquanto a ovelha Dolly é um clone de uma
célula de um animal adulto, já diferenciada,
Vitória é resultado de núcleos transferidos de um
embrião de cinco dias de uma vaca da raça
simental pela técnica de transferência de
embriões clássica.
• Vitória foi produzida a partir de uma célula
embrionária já existente, mas hoje já é possível
fazer cópias a partir de células da pele, que
podem ser colhidas até mesmo de um animal
morto.
 Linha do Tempo
A empresa Clonaid anuncia o nascimento (até
2002 hoje não comprovado) de uma menina
chamada Eva, o primeiro clone humano.
 Linha do Tempo

2003 Com câncer, morre a ovelha Dolly,

com 6 anos.
 Linha do Tempo
A empresa americana Genetic Savings & Clone
apresenta o primeiro clone de estimação feito
2004 por encomenda, um gato que custou US$ 50
mil.
MÉTODODE
 natur a l

Bipartição Gêmeos univitelinos Estrela-do-mar

Reprodução assexuada Mamíferos Outros
Ex.: Bactérias, algumas Embora haja reprodução reprodução dos
leveduras e a maioria dos sexuada na formação do zigoto, vegetais inferiores,
protozoários. os descendentes idênticos têm certos moluscos e
origem a partir de um processo crustáceos.
assexuado de divisão celular.
Natu r a l
 Reprodutiva

• Uma das técnicas básicas usadas por

cientistas é a transferência nuclear da
célula somática (SCNT ou TNCS).

• Retira-se o núcleo de uma célula somática,

que poderia ser de qualquer tecido de um
animal, inserir este núcleo em um óvulo e
implantá-lo em um útero (que funcionaria
como uma barriga de aluguel).
 Reprodutiva
• Se este óvulo se desenvolver teremos um novo ser
com as mesmas características físicas do animal de
quem foi retirada a célula somática.

Seria como um gêmeo idêntico

nascido posteriormente.
Te ra p ê u t i c a

A clonagem terapêutica é a mais debatida

atualmente, pois as células nela produzidas
não serão direcionadas para o ventre
materno, e sim para pesquisas que visam a
utilização de células-tronco, para a
formação de tecidos iguais aos daquele que
doou a célula adulta.

O procedimento é semelhante ao da clonagem reprodutiva, porém com

outros fins que não a gestação.
 Terapêut i c a
Nessas pesquisas com clonagem
terapêutica, as células-tronco embrionárias
estudadas são particularmente
importantes, porque são
multifuncionais, isto é, podem ser
diferenciadas em diferentes tipos de
células.
 c l o na em

1)As células somáticas são retiradas do

doador.
2)Essas células são cultivadas em
laboratório.
3) De uma doadora colhe-se um óvulo não
fertilizado.
4) O núcleo contendo DNA é retirado do
óvulo.
5) A célula cultivada é fundida ao óvulo por
meio de corrente elétrica.
6) Agora temos o óvulo fertilizado com nova
informação genética.
7)Este óvulo vai se desenvolver até a fase
de blástula (embrião com mais de 100
células) onde estão as células tronco.
 17
r e p r o d u t iva
 18
terapêutica
R e p r o d u t i v a X Te r a p ê u t i c a
 Clonagem Molecular

• A clonagem molecular é uma técnica da engenharia genética

conhecida também por DNA recombinante, clonagem gênica
ou manipulação gênica. Essa tecnologia permite pegar um
“pedaço” do DNA e combiná-lo com outro, produzindo muitas
cópias de diferentes combinações genéticas.
 Clonagem Molecular
Estudos genômicos
Estudos de expressão de mRNAs
Expressão de proteínas (Proteínas
recombinantes)
Vacinas de DNA
Produção de organismo transgênicos
Terapia Gênica
Estudos de interação DNA-proteína ou
Proteína-proteína
Estudos de mutação sítio-dirigida de proteínas
ênica/molecular

COMPONENTES FUNÇÃO
DNA doador (inserto) Fonte do gene a ser clonado.
Enzima usada para cortar o DNA doador e o
Enzima de restrição DNA do vetor em locais específicos, de modo
(tesoura genética) que o gene a ser clonado possa ser inserido
no vetor.
Plasmídio ou “cromossomo” de bacteriófago
Vetor de clonagem usado para introduzir o gene a ser clonado
numa célula hospedeira apropriada.
Enzima usada para unir as extremidades
livres e adaptáveis (coesivas, adesivas ou
DNA ligase
“pegajosas”) do DNA do vetor e do DNA
doador, formando um vetor recombinante.
Célula na qual o vetor recombinante é
introduzido de modo a obter grandes
Célula hospedeira quantidades da molécula de DNA
recombinante. Geralmente é uma bactéria ou
uma célula de levedura.
 Clonagem Molecular

Vetores: veículos de clonagem que permitem que os

fragmentos de DNA a serem clonados, sejam introduzidos
e propagados em uma célula hospedeira adequada.

Célula hospedeira: células de fácil manipulação,

crescimento rápido e constituição genética bem
conhecida (ex: bactérias, leveduras, células de cultura de
tecidos de mamíferos e insetos).
 VETORES
MOLECULARES
Vetores Moleculares
São moléculas de DNA dupla fita, circular , auto-replicativas e que são
passados de geração para geração;
Características
• -Origem de replicação (Ori): multiplicar-se de maneira
independente
• - Múltiplos Sítios de Clonagem (MSC): Sítios para várias
enzimas de restrição
• - Gene marcador (AmpR)
•
Vetores Moleculares- Tipos
Dependendo do tamanho do inserto de DNA e da finalidade do
experimento, muitos tipos diferentes de vetores de clonagem
podem ser utilizados para geração de moléculas recombinantes.

• -Plasmídeos – clonagem de até 15.000 pb

• - Fagos - clonagem de até 23.000 pb
Vetores Moleculares

Clonagem Expressão

Permite a multiplicar
as moléculas de DNA
de interesse.
Vetores Moleculares
Clonagem Expressão

- Permite expressar uma

proteína
- Indução da expressão
- Proteína pode ser purificada
Clonagem Molecular
 Clonagem Molecular
•DNA ligase:

•Ligar fragmentos de
DNA recombinantes
DNA Ligase
Formas de colocar DNA recombinante dentro das
células competentes (host cells)

• Transformação bacteriana
• Transfecção (transformação em células eucariontes)
• Eletroporação (choque)
• Microinjeção
• Infecção viral