Guia incompleto de Imunobiologia (imunologia como se o organismo importasse)

Nelson M. Vaz e Ana Maria C.de Faria

Belo Horizonte, 1993

Nos cursos introdutrios Imunologia que oriento no ICB da UFMG enfatizo assuntos que me parecem negligenciados e, ao mesmo tempo, ser da maior importncia. Os estudantes no dispem de bibliografia em portugus para tais discusses. Com este texto, tento preencher parcialmente esta lacuna. Como texto introdutrio Imunologia, ele serve tambm a no-especialistas procura de uma viso pouco ortodoxa. Por outro lado, abordo assuntos muito mais vastos que a Imunologia, e sei que a mera tentativa de abord-los parece implicar alguma presuno da minha parte, como se eu tivesse algum talento especial para tratar destes problemas. No me sinto assim. Durante os ltimos anos, falei exaustivamente destas opinies s pessoas mais prximas. Exceto por alguns estudantes, duvido que algum concorde inteiramente comigo. Mas quase todos os imunologistas que conheo concordam em que h algo seriamente equivocado em levar as coisas como usualmente fazemos na Imunologia. No suponho ter solues para os vastos problemas sobre os quais me sinto forado a falar. Sinto que estamos todos em um tempo de crise e falo de problemas que so nossos, no apenas meus. O que apresentamos aqui muito incompleto para ser usado como livro-texto. No tratamos de mtodos imunolgicos, de aspectos bioqumicos, histolgicos ou farmacolgicos ou de Imunologia clnica. Abordamos apenas tangencialmente campos de grande interesse atual, como a biologia celular e gentica molecular. No procuramos sequer ser atualizados; na Imunologia moderna, esta qualidade seria perdida antes mesmo da redao ser completada. Eis aqui uma compreenso pessoal da Imunologia como um todo e de suas relaes com a Biologia e a Medicina. Talvez nada resuma melhor a motivao deste trabalho que os versos de Ana Maria Caetano de Faria: "responde depressa: a pergunta pr tua resposta ainda essa?" In Levianas (peras completas) Ana Maria Caetano de Faria e Levi Carneiro Belo Horizonte,1985 Agradecimentos Agradeo muito particularmente, a Humberto Maturana, por existir da maneira que existe. A Francisco Varela e Antonio Coutinho, agradeo pelo muito que aprendi - primeiro com um, depois com o outro. Ana Maria C. de Faria, cmplice e co-autora, afastou-se para um doutorado no estrangeiro durante a redao, mas suas idias e seus textos esto mesclados atravs do livro. H pessoas muito queridas sem as quais eu no teria iniciado esta tarefa: Cristina Magro, Jorge Mpodozis, Geraldo Florsheim, Hj Ross, John Stewart. Agradeo a Tomaz Mota-Santos e Enio C.Vieira a acolhida no ICB, e a Clio Garcia, Evando Mirra, Ricardo Fenati e Paulo Margutti, a acolhida na Fafich. Daisy de Souza Noli reviu, inicialmente, com carinho todo o trabalho. Finalmente, aos amigos e amigas, que nos co-orientamos no Laboratrio de Imunobiologia, e s vrias turmas de estudantes que viveram conosco a criao destes textos, fica um agradecimento comovido. A Cludia Rocha Carvalho agradeo o privilgio de sua convivncia e o exemplo de como harmonizar fora e delicadeza. Durante a redao, nosso laboratrio recebeu bolsas e auxlios do CNPq, da CAPES, da Fapemig e da Fapesp, sem os quais nada seria possvel. Nelson M.Vaz

A minha modesta contribuio neste livro resultou dos quatro anos de vivncia e aprendizagem com o Prof. Nelson Vaz e os colegas do laboratrio de Imunobiologia. Foi um tempo de trabalho e reflexo no s sobre temas de Imunologia que nos parecem de primeira importncia como a tolerncia oral e outros fenmenos imunolgicos naturais como tambm sobre certezas cientficas que nos cercam e nos guiam por caminhos nem sempre iluminados. Talvez nossa grande concluso durante este perodo tenha sido que a Imunologia, como qualquer outra cincia, no resultou de um busca cega ou de um acmulo de descobertas inexorveis. Ao contrrio, ela resultou de uma escolha entre diferentes caminhos e de uma histria que justifica esta escolha. Assim, continuar na mesma direo no significa simplesmente seguir o trajeto natural da cincia, mas reafirmar esta escolha, refaz-la a cada dia. O material usado para o livro inclui alguns textos conjuntos em Imunologia, eventualmente utilizados em aulas ou discusses. O Captulo 2, sobre a origem remota das certezas da Imunologia, a transcrio de uma aula que apresentei no Departamento de Bioqumica em 08/08/88 e as reflexes sobre as origens da Imunologia e a contribuio de Metchnikoff fazem parte de minha tese de mestrado. As figuras que ilustram o livro so obra da competncia e da criatividade do Prof. Nelson Vaz, e os Captulos 12-17 so de sua inteira responsabilidade. Ana Maria Caetano de Faria

1 1. Introduo
______________________________ A Imunologia surgiu validada e validando uma nova forma de Medicina, ao final do sculo passado. Surgiu como conseqncia e como parte indispensvel da Teoria dos Germes sobre a origem das doenas e sobre nossos mecanismos de defesa. Transformada na Teoria das Causas Especficas das doenas, como coluna dorsal da Medicina contempornea, esta Teoria insatisfatria por vrios motivos. H um desconhecimento bastante difundido sobre os mecanismos de defesa imunolgica. Alm disso, h uma ignorncia central usualmente omitida da apresentao da Imunologia. Os mecanismos bsicos de operao do sistema imune no so conhecidos, embora conheamos minuciosamente a maioria de seus componentes e sub-componentes. Desde que no entendemos como o sistema opera, no sabemos como intervir previsivelmente na maioria das atividades imunolgicas: as vacinas em uso humano e veterinrio foram todas desenvolvidas empiricamente, milhares de outras falharam no estgio experimental. No sabemos porque umas funcionam, outras no. A Imunologia no pode prometer vacinas sociedade porque no sabe como fabric-las. Os progressos recentemente obtidos sobre mecanismos celulares e moleculares no alteram este panorama. Continuamos a agir empiricamente: um mtodo moderno eficaz no tratamento de algumas doenas auto-imunes - a injeo de altas doses de imunoglobulinas - age por mecanismos totalmente obscuros. A facilitao dos transplantes renais por transfuses de sangue tambm utilizada sem que entendamos como ocorre. No entendemos bem porque as gestantes no rejeitam os fetos e suas placentas, como se fossem transplantes alognicos. Uma parcela das protenas que ingerimos como alimentos penetra a circulao em forma antigenicamente ativa, mas a importncia que isto pode ter na operao global do sistema imune negligenciada. Entendemos pouco ou quase nada sobre a suscetibilidade individual s infeces ou ao desenvolvimento de alergias. Este quadro muito diferente do apresentado nos textos de Imunologia. A deciso de no polemizar estes temas se deve, em parte, relutncia dos biologistas experimentais em discutir "teorias", embora isto seja corriqueiro na Fsica e outras reas da cincia. Mais seriamente, porm, o problema se deve inexistncia de uma Teoria suficientemente ampla e poderosa sobre os seres vivos e a natureza dos fenmenos biolgicos. A Imunologia no dispe desta Teoria porque ela no est presente na Biologia atual. A introduo de uma Teoria que redefina a Imunologia, portanto, passa por uma redefinio dos fenmenos biolgicos em geral. Como veremos, em nossa opinio esta Teoria j est disponvel no trabalho de Humberto Maturana sobre a Biologia do Conhecer . No pretendemos apresentar aqui o trabalho de Maturana e convidamos o leitor a consultar seus textos originais. Frequentemente, estaremos apontando coisas simples e bvias e como ele lembra: "Nada mais difcil de dar valor e respeitar quanto aquilo que nos dizem e to fundamental que, depois de ouvido, nos parece bvio." A metfora defensiva Freqentemente falamos dos seres vivos em termos antropomrficos. Fazemos de conta que o corpo sbio, no sentido em que concebemos a sabedoria. A atividade biolgica, porm, constitui uma forma diferente de "conhecer". Podemos dizer que um embrio sabe crescer para formar uma estrela do mar, um canrio ou um tigre. Dizemos que a trepadeira sabe se enrolar em seu suporte e que o protozorio sabe procurar seu alimento. Mas nossa referncia a este saber, este conhecer biolgico, vaga e nebulosa. Dois pensadores importantes da biologia contempornea se dedicaram a esclarecer esta diferena entre o "conhecimento humano" e este "conhecer" que caracteriza a atividade dos sistemas biolgicos. Era a esta diferena que Gregory Bateson se dirigia ao se referir a problemas mentais . a ela que Maturana se refere na Biologia do Conhecer . Que relevncia tm tais problemas tm para a Imunologia? Quando dizemos que o sistema imune nos defende , identificando e eliminando materiais estranhos em meio aos componentes do corpo, estamos usando, deliberadamente ou no, uma metfora. No existe uma entidade inteligente planejando e desenvolvendo estratgias defensivas contra invasores antignicos no meio do sistema imune. As modificaes que o sistema atravessa surgem como decorrncias inevitveis de sua estrutura celular e molecular. Tais mudanas estruturais ocorrem como se o corpo se defendesse e, usualmente, resultam na eliminao dos materiais estranhos sem causar danos excessivos estrutura

2
do organismo. Mas elas no derivam de um planejamento da defesa. A defesa no intencional . O corpo existe sempre de uma maneira determinada por sua estrutura, em congruncia com suas circunstncias, mantendo sua organizao e sua adaptao atravs de uma seqncia particular de mudanas estruturais. Algumas destas mudanas se passam durante a existncia do indivduo, muitas outras se passaram durante a filognese, numa longa e ininterrupta seqncia de acontecimentos desde a origem da vida. Os seres vivos so seres histricos, no sentido de que representam o resultado de uma longa seqncia de modificaes estruturais. Por um lado, o sistema imune parece operar inteligentemente e sua operao constitui uma maneira de "conhecer" o mundo; por outro, aprendemos a decomp-lo em elementos celulares (linfcitos) cada um dos quais desempenha aes muito mais singelas. Por um lado, o sistema parece dotado de uma intencionalidade defensiva, parece capaz de reter a memria de acontecimentos passados; por outro, encontramos os linfcitos e seus produtos moleculares envolvidos em uma dinmica estrutural na qual a variedade dos resultados muito mais limitada. No domnio dos linfcitos tudo se resume a ativaes e inibies celulares. Como podem estas aes celulares resultar em um sistema que age como se fosse inteligente e recordasse o passado? A proposta de um mecanismo Por um lado, temos descries semnticas , baseadas no significado do que ocorre, nas quais o sistema imune parece ter propsitos de defesa; por outro, temos descries estruturais . H um vo entre estas duas formas de descrio. Podemos descrever os fenmenos imunolgicos como aqueles dos quais participam clulas e molculas com uma certa estrutura. H molculas tpicas dos fenmenos imunolgicos: molculas com regies variveis (regies V ) formadas por linfcitos . Diferentemente de todas as demais molculas de protenas formadas pelo organismo, durante a emergncia dos linfcitos (linfopoiese) surgem molculas com trechos onde a seqncia de aminocidos varivel. Isto se deve a processos especiais de rearranjo do genoma que ocorrem exclusivamente na produo dos linfcitos e so proibidos para outras clulas. Por isso os linfcitos so diferentes de todas as demais clulas do organismo, tm o genoma rearranjado. Os linfcitos surgem diferentes uns dos outros, nascem individualizados, cada qual portando como receptores de membrana um determinado tipo de molcula recm-inventada, molculas com regies V . Por um lado, podemos definir os fenmenos imunolgicos como fenmenos nos quais linfcitos (e molculas com regies V ) tm participao essencial; por outro, podemos atribuir planos e propsitos defensivos ao sistema imune. Na primeira opo, que preferimos, o sistema imune um mecanismo tal que, deixado operar, dar origem a todos os fenmenos imunolgicos. Para descrever o sistema imune, necessrio descrever sua organizao, isto , componentes essenciais e relaes essenciais entre estes componentes, sem os quais seria impossvel descrever os fenmenos imunolgicos. So dois domnios de descrio distintos, ambos vlidos, na verdade, complementares, mas que precisamos manter separados para no nos confundirmos. Um o domnio estrutural, onde existem linfcitos e seus produtos moleculares, onde clulas so ativadas, inibidas, destrudas. Tudo o que ocorre neste domnio so modificaes celulares e moleculares. Outro, o domnio onde descrevemos as interaes do organismo em seu ambiente e o vemos mudar de acordo com estas interaes. Usualmente fundimos estes dois domnios em um s e achamos que so as interaes no ambiente que determinam as modicaes da estrutura do sistema. Como veremos, isto no pode se passar assim, pois no existem interaes instrutivas e o organismo muda de acordo com sua prpria estrutura. As divises do texto A primeira parte do texto - O reconhecimento imunolgico especfico - contm um esboo da Imunologia contempornea, comeando pelas origens das certezas que orientam seu trabalho. Buscaremos tais origens no como um inventrio das descobertas que nos trouxeram aqui, mas sim preocupados em desnudar as razes das idias bsicas da Imunologia. Em seguida, em uma srie de captulos curtos, procuramos descrever o cenrio atual em termos gerais. Na segunda parte do livro, O conhecer imunolgico , descrevemos a natureza do contexto biolgico onde se desenrolam os fenmenos imunolgicos. Faremos isto apoiados na Biologia do Conhecer - um conjunto de idias que tm origem no trabalho de Maturana, da Universidade do Chile, sobre a organizao dos seres vivos. Desta redefinio dos seres vivos e de suas atividades cognitivas

3
deriva, ento, uma nova interpretao dos fenmenos imunolgicos. neste contexto que abordaremos O emergir da patologia , reavaliamos as crenas bsicas da Imunologia e descreveremos a imunopatologia.

2. Certezas : origens remotas

______________________________ 2.1 Uma busca na Histria No pretendemos fazer aqui um inventrio das descobertas da Imunologia como o que normalmente se encontra nos livros: uma histria de como a Imunologia progrediu. Nossa inteno buscar a origem das certezas que temos quando praticamos a Imunologia. Sempre que realizamos uma experincia ou organizamos uma aula sobre um tema de Imunologia, partimos de um conjunto de certezas sobre a natureza dos fenmenos imunolgicos. J sabemos muitas coisas e a partir dessas certezas que fazemos perguntas e organizamos nossas afirmaes. Qual a origem dessas certezas? Em que momento da Histria elas surgiram? Eram estas as nicas certezas possveis? A Imunologia, tal qual ela hoje, representa a nica forma possvel de haver uma Imunologia? A viso que temos hoje sobre o sistema imune era a nica possvel? Ou existem motivos histricos para que a Imunologia seja assim, apesar de existirem alternativas? 2.2 A base de certeza Para comear, os cientistas sabem, sabemos todos que o sistema imune um sistema de defesa. Em segundo lugar, sabemos que o sistema imune forma anticorpos especficos quando estimulados por materiais que so estranhos ao corpo. A formao destes anticorpos constitui as respostas imunes especficas. Sabemos ainda que, num segundo contato com estes materiais estranhos, as respostas imunes sero mais rpidas, mais intensas e duradouras e atribumos isto a uma memria imunolgica. Ou seja, imaginamos que o sistema imune "aprende" e no se esquece. Em terceiro lugar, sabemos que esta memria imunolgica pode ser artificialmente induzida atravs das vacinas. Estas so certezas das quais se parte para trabalhar em Imunologia. Quais so, ento, os objetivos da Imunologia, delineados a partir dessas certezas? Em primeiro lugar, entender o mecanismo de funcionamento das respostas imunes especficas . E entender isto de uma maneira muito especial: como j sabemos que o sistema imune um produtor de respostas imunes, nossa tarefa a de esclarecer como essas respostas ocorrem detalhando ao mximo os elementos bioqumicos envolvidos na sua prooduo. exatamente isto que a Imunologia tem feito at hoje. Qualquer revista de Imunologia recente mostrar uma descrio minuciosa dos genes que formam os anticorpos, da recombinao desses genes, de como so as molculas dos anticorpos, etc. Um segundo objetivo importante nesta viso da Imunologia a produo de novas vacinas e novos mtodos especficos para neutralizar os agentes causadores das doenas. A idia das doenas enquanto entidades produzidas por causas especficas, como veremos, uma das certezas importadas da Bacteriologia e que marca o perodo fundador da Imunologia. Nossa idia procurar no passado o momento em que adquirimos estas certezas e, a partir da, analisar porque elas permanecem to fortes. Apesar de hoje reconhecermos que o sistema imune est envolvido em muitas atividades alm da defesa do corpo; que os anticorpos no so to especficos assim; que eles no so formados apenas contra materiais estranhos mas tambm para componentes do prprio corpo, mesmo em indivduos sadios; apesar da enorme dificuldade em inventar novas vacinas; apesar de tantas contradies, porque, em determinado momento da Histria, ns adquirimos estas certezas e no queremos abandon-las?

Tabela 2.1 A base de certeza e os objetivos da Imunologia ____________________________________________________ A base de certeza : 1. O sistema imune age como um sistema de defesa do corpo. 2. O sistema imune capaz de fazer respostas especficas. 3. O sistema imune dotado de uma "memria" imunolgica. 4. Esta "memria" pode ser criada artificialmente (vacinas). Os objetivos : 1. Esclarecer os mecanismos de reconhecimento imunolgico especfico. 2. Desenvolver novas vacinas e novas formas de terapia imunolgica especfica. _____________________________________________________________ 2.3 Um surgimento peculiar O surgimento da Imunologia foi muito peculiar, muito diferente do de outras disciplinas. A origem da Anatomia e da Fisiologia, por exemplo, remete a estudos gregos antigos sobre os seres vivos. A Gentica, de origem recente, surgiu no estudo de plantas e animais. Nenhuma destas disciplinas se vinculou ao desenvolvimento ou prtica mdica da sua poca. A Imunologia, ao contrrio, surgiu dentro da Medicina. E num momento muito particular, quando as descobertas de uma Bacteriologia emergente conferiam "arte" mdica de curar os instrumentos para uma prtica cientfica. Confundida com a Bacteriologia, a Imunologia surge, por um lado, como validadora desta transformao e, por outro lado, sendo validada por este status de cincia que a Medicina acabava de adquirir. Este surgimento peculiar ir conferir Imunologia suas caractersticas mais marcantes e toda a fora das idias que ela tem hoje. A transformao da Medicina em uma atividade cientfica marcada pelo surgimento de uma nova Teoria mdica, uma teoria com duas caractersticas importantes. A primeira sua eficcia. As teorias mdicas surgidas at ento eram muito pobres em resultados. A Medicina era praticamente incapaz de evitar ou curar as doenas. a partir do surgimento da Imunologia que, pela primeira vez, a Medicina se mostra capaz de intervir no curso de uma doena. A primeira prtica inegavelmente eficaz de interferncia na sade humana se faz atravs de um instrumento imunolgico: as vacinas. Ser muito difcil questionar a validade de idias que nasceram envoltas em poder to monumental. Mas alm de sua eficcia, essa nova teoria mdica tinha uma outra caracterstica importante: ela surgiu de uma forma inusitada na Medicina, no mais como uma mera teoria mas como o resultado de concluses cientficas, apoiada em experincias. As teorias mdicas que a precederam eram derivaes tericas de uma cosmologia, de uma viso de mundo. Atravs dessa viso de mundo se desenvolvia uma viso do que era o corpo sadio e desta viso, por sua vez, se derivava uma viso do que era a doena e do que poderia consistir uma terapia. As teorias mdicas da Grcia antiga, das quais nos fala Hipcrates (460 A.C.), por exemplo, organizavam seus conhecimentos a partir de pressupostos tericos sobre a natureza do universo. Segundo estes pressupostos, a natureza e o cosmos eram perfeitos, ordenados por leis divinas e totalmente hierarquizados. A Razo sendo divina, exterior ao homem, ordenava o cosmos. O corpo, como parte da natureza, era tambm perfeito. Neste contexto, a doena significava um distrbio do equilbrio com o cosmos e derivava de imperfeies do mundo humano, excessos no comer e no beber, no exerccio e no sono. Mas o corpo, deixado em seu estado natural, tenderia para a perfeio, para a cura. Assim, na medicina hipocrtica, de um modo geral, havia pouco sentido em intervir no corpo. A idia moderna de remdio, de medicao, de interveno mdica, no faria o mesmo sentido na Grcia antiga, porque ela significava a interferncia de uma razo menor, mundana num equilbrio fundado por leis superiores, divinas. Deixado em suas condies naturais, o corpo tenderia a voltar ao normal, perfeio. Por isso mesmo, a teraputica hipocrtica era, na maioria dos casos, expectante. Os principais tratamentos que existiam na Grcia e se estenderam, com Galeno, atravs da Idade Mdia incorporados mstica crist, consistiam basicamente em conter os excessos, recomendar o repouso, ar puro e uma alimentao sadia, aliados a uns poucos preparados com efeitos sintomticos, para aliviar a dor, acalmar. Nestes tratamentos no havia a inteno de curar, mas sim de facilitar o restabelecimento de um equilbrio anterior.

Tabela 2.2 Caractersticas do surgimento da Imunologia _____________________________________________________ 1. Associao com a Medicina, no com a Biologia 2. Validada e validando uma nova Teoria mdica: - que tinha uma nova eficcia; - que no se baseava em uma cosmologia (e sim em achados empricos e cientficos) _____________________________________________________ Tal Teoria se prolonga pela Idade Mdia e somente nos sec. XVI a XVIII, surge uma nova viso sobre a prtica mdica. Esta, apesar de j vir no bojo da revoluo cientfica, ainda segue um esquema similar ao da antiga: ela ainda se apoia em uma cosmologia, numa viso de mundo, da qual ela deriva uma viso do corpo; desta viso do corpo, ento, ela extrai uma noo da doena e uma terapia. A viso de mundo, no entanto, muda radicalmene. Ao contrrio da viso grega que imaginava a Razo ordenadora do mundo era exterior e divina, a Razo agora interna e se localiza no homem. Ao homem cabe organizar um universo desencantado atravs de seus prprios instrumentos: a Fsica e, mais particularmente, a Mecnica. Em oposio, ento, ao mundo hierarquizado e harmnico dos gregos, o universo da cincia se assemelha a uma grande mquina cujo mecanismo preciso testar para entender. Por extenso, o corpo deixa de ser a representao terrrena de uma perfeio celeste e passa a ser visto como mquina pensante. Descartes, no Discurso sobre o Mtodo, o primeiro a propor todo um esquema de funcionamento do corpo segundo esta idia. Se o corpo uma mquina, a doena um distrbio mecnico nessa mquina, algo que enguiou. Ao contrrio da viso grega, agora a terapia requer uma interveno para consertar o defeito.A inteno teraputica no mais restaurar um equilbrio perfeito original, mas reparar um distrbio de regulao atravs de um tratamento ainda nico, inespecfico. Como discutiremos adiante, as sangrias constituram durante muito tempo esta terapia inespecfica. Embora esta seja a poca da Revoluo Cientfica, a Medicina ainda descreve o corpo como um todo que funciona e se regula integrado e onde a doena tem, necessariamente, uma carter sistmico. A desintegrao da cosmologia antiga representou a perda de uma viso unificadora do mundo e colocou para a Razo humana uma tarefa monumental: reconstruir um universo coerente, no mais a partir de princpios conhecidos a priori mas atravs de uma busca metdica das leis embutidas no seu funcionamento. A destruio da viso do mundo tambm a destruio da viso do corpo. O homem se encontra, a partir da, entregue aos seus prprios instrumentos para reconstruir uma nova imagem do mundo e, no caso na Medicina, do corpo. Estes instrumentos sero dados pela cincia emergente, pelo mtodo cientfico. Surge a a figura do cientista. Ele exatamente este homem que perdeu a viso do mundo mas sabe que pode ter acesso a uma nova viso atravs das experincias. E que so as experincias? So a aplicao da razo humana ao conhecimento do mundo atravs de um mtodo. Ao contrrio do filsofo antigo que observa o universo para tentar encontrar nela a materializao de uma lgica divina, de uma ordenao estabelecida a priori por leis matemticas, o cientista recolhe suas observaes como quem recolhe fragmentos de um universo detroado. Sua tarefa recompor estes fragmentos numa nova viso coerente do mundo e, no caso da Medicina, do corpo. A Cincia tem ainda a convico que, no dia em que todos os fragmentos forem montados, todos detalhes conhecidos ser possvel recompor, novamente e para sempre, uma nova viso de mundo, uma nova cosmologia. Assim procede o cientista: por adio. O que ser, ento, a nova Teoria mdica? Uma montagem, um mosaico. Do sucesso teraputico da vacinao anti-varilica, introduzida por Jenner e dos dados laboratoriais de Pasteur, montou-se uma teoria sobre a natureza das doenas: a Teoria dos Germes. Dessa teoria sobre o que so as doenas, partiu-se para sua confirmao experimental: a busca de terapias especficas verdadeiramente eficazes. 2.4 A perda do corpo At esse momento, a Medicina possua um discurso sobre o corpo doente, porque tinha uma viso integrada do corpo so. Mas no momento em que ocorre uma perda da idia de corpo, s lhe resta falar de

doenas. Nossos livros mdicos no mostram nenhuma definio do adoecer, mas trazem uma classificao minuciosa das hepatites, das pneumonias,dos defeitos genticos. interessante perceber no surgimento dessa nova Teoria mdica (sec. XVIII) que a idia de germes como causadores de doenas muito mais antiga. Em 1546, cerca de 300 anos antes, Girolamo Fracastoro publicou um livro sobre o contgio e as doenas contagiosas, dizendo que as doenas poderiam ser causadas por partculas invisveis que passavam de uma pessoa a outra. Muitos outros estudiosos depois, estudando doenas humanas, de animais e de plantas, argumentavam claramente sobre a idia de contgio. Mas isto nunca chegou a constituir uma Teoria mdica. Porque apenas no sec. XVIII e XIX esta idia foi considerada e elevada ao status de uma Teoria to poderosa? Vrios fatores colaboraram para o surgimento da Teoria dos Germes, da Bacteriologia e da idia moderna de doenas . O primeiro fator importante foi a Revoluo Cientfica, que transformou a Medicina em uma Cincia. O segundo, foi a introduo da vacinao anti-varilica, por Jenner, em 1798. A erradicao da varola na Europa foi uma inequvoca demonstrao de eficcia. O terceiro fator foi o que Foucault chama de "o nascimento da clnica", nome dado no s s reformas hospitalares ocorridas nos sec. XVIII e XIX na Europa mas tambm s mudanas na forma da Medicina encarar o paciente, o corpo doente. O quarto, foi a emergncia da Qumica e da indstria qumica na Alemanha, que foram fundamentais e estiveram profundamente envolvidas no surgimento da Imunologia, deixando nela profundas marcas de nascena.

Tabela 2.3 Fatores que favoreceram a Teoria dos Germes _____________________________________ 1. A Revoluo Cientfica. 2. A vacinao anti-varilica 3. O nascimento da clnica. 4. A emergncia da indstria qumica. _____________________________________ 2.5 A Revoluo Cientfica A Revoluo Cientfica foi o amadurecimento da idia de que a interveno na Natureza por meio da Cincia era possvel. Na cosmologia antiga, o homem era um observador passivo, um admirador. O cosmos era dividido em um mundo lunar e um mundo sublunar. O mundo lunar era perfeito e era representado pelo mundo dos planetas, das rbitas circulares e dos movimentos perfeitos. L habitava Deus. O mundo habitado pelo homem era o mundo sublunar e havia entre eles no s uma separao muito clara, mas tambm uma hierarquia. O mundo antigo, ento, era ordenado e fechado. Acabava no horizonte e sera separado por esferas de cristal que evitavam que um mundo tocasse o outro. As leis da Fsica antiga s podiam explicar o mundo sublunar, humano, porque aqui vigoravam algumas lgicas imperfeitas. O mundo lunar s podia ser explicado pela Matemtica que era a forma de pensar de Deus. O movimento dos planetas era entendido atravs da geometria dos crculos porque era a cincia dos movimentos perfeitos. Evidentemente, a arte de observar no nasceu com a Cincia, ela existia no mundo antigo. Mas o critrio de observao era diferente. Atualmente, observamos para entender como o mundo . Os gregos observavam para adequar a observao feita aos princpios divinos, aos dogmas. A observao era uma forma de contemplao. Contemplava-se o mundo na tentativa de enquadrar tais observaes aos princpios j estabelecidos. Isto obviamente gerava uma srie de contradies. Por exemplo: Aristteles afirmava que, de acordo com a lgica do mundo lunar, a rbita dos planetas s poderia ser circular pois o crculo era a figura geomtrica perfeita. Mas, pela observao direta do movimento dos planetas e levando-se ainda em considerao que a Terra era o centro do mundo e que tudo girava em torno dela, o que se via que os planetas no tinham rbitas regulares. Em certos momentos, eles paravam em suas rbitas e descreviam um pequeno crculo no sentido contrrio ao movimento anterior. No tinham, portanto, um movimento circular uniforme como seria adequado ordem lunar. Na teoria de Ptolomeu, essas irregularidades foram acomodadas para constituir os epiciclos. Mas porque haveriam os planetas de se comportar assim? Um outro exemplo notvel desse conflito foi a busca do dcimo planeta, Vulcano, que deveria completar a lista dos corpos girando em volta da Terra, j que 10 um nmero perfeito.

As contradies foram se acumulando e houve um momento em que foi preciso separar a Fsica Ptolomaica, a astronomia, da Matemtica, porque as duas eram inconciliveis. Surgido na poca do Renascimento, o movimento de emancipao das cidades italianas do poder da Igreja, gerou as primeiras experincias questionadoras desse modelo de mundo (Ptolomaico), no qual a Terra era o centro do Universo e o prprio Universo era uma inveno divina intocvel. Um dos primeiros trabalhos importantes neste questionamento surge em 1543, publicado por Nicolao Copernico onde ele mostra que a Terra no o centro do Universo e que os planetas giram ao redor do Sol. Esta mudana na geografia celeste teve consequncias desastrosas para a velha cosmologia. Por um lado ela demonstrava as possibilidades da Fsica e da Razo humana de compreender o mundo a partir da observao. Por outro lado, ela questionava a perfeio do cosmos, seu fechamento e hierarquizao e, por isto mesmo, a existncia de Deus. compreensvel que, por temor Igreja, Copernico tenha feito arranjos para que seus achados s fossem publicados aps a sua morte. Toda uma Revoluo nas idias da Cincia iniciada e conduz a duas mudanas que iro caracterizar a emergncia da Cincia moderna. Primeiro, a unificao dos mundos (o sublunar e o lunar). Diferentemente da hierarquia das disciplinas antigas, a Cincia moderna pretende explicar todos os aspectos do universo, incluindo o movimento dos astros e o corpo humano, atravs da Fsica. A segunda mudana a passagem de uma Razo que externa e, portanto, objetiva, para uma razo que interna, subjetiva. No mundo antigo, a Razo est no mundo, foi colocada l por Deus. No mundo moderno, a razo humana. Ao cientista cabe a tarefa de reexplicar o universo atravs dos seus prprios instrumentos: o mtodo cientfico. E em que consiste o mtodo cientfico? Inventar perguntas que, atravs de experincias, possam ser feitas ao mundo, analisar os resultados dessas experincias e construir, a partir deles, uma teoria coerente. Novas confirmaes experimentais dessa teoria criariam um comportamento cclico de gerao de conhecimentos. Tabela 2. Duas mudanas essenciais para a emergncia do pensamento cientfico ______________________________________________________ 1. A unificao dos mundos: sub-lunar e lunar. 2. A passagem de uma Razo externa (divina) para uma razo interna (humana) ________________________________________________________________ Estas mudanas repercutiram fortemente dentro da Medicina, que at ento, separada da cincia, era simplesmente a arte de curar. Um dos trabalhos fundamentais na modificao das concepes da Medicina surgiu no mesmo ano (1543) em que Copernico publicou suas observaes astronmicas: um atlas de anatomia publicado por Vesalius revendo toda a anatomia grega e mostrando nela vrios equvocos. No havia, at a, nenhum questionamento da anatomia ensinada por Galeno. 2.5.1 Ambroise Parr: a criao dos hospitais Um segundo trabalho digno de nota surgiu em 1570, com Ambroise Parr, o fundador dos hospitais e o criador da cirurgia moderna. A cirurgia, at ento, no fazia parte da Medicina. E fcil compreender esta separao. Se a Medicina era expectante e pouco intervencionista, haviam, no entanto, as guerras, os acidentes, ocasies em que as pessoas se feriam, tinham que amputar membros, tratar feridas. Esse trabalho, porm, no era praticado pelos mdicos; era feito pelos barbeiros da poca. Existia uma profisso chamada "cirurgio barbeiro". A pessoa que cortava a barba era a mesma que, se necessrio, amputava uma perna. As amputaes, sem anestesia, eram dramas terrveis. Feridas infectadas eram tratadas com leo fervente ou outros mtodos igualmente agressivos. Muitos no suportavam esse sofrimento e morriam. Ambroise Parr foi treinada para ser um destes cirurgies. Ele foi o responsvel no s pela introduo de mtodos mais suaves de tratamento das feridas como tambm pela criao de casas especializadas onde se realizavam as cirurgias, os primeiros hospitais. Enfim, foi o primeiro a tentar introduzir a cirurgia dentro da Medicina antiga. interessante notar ainda que na publicao do trabalho de Pasteur, mais de um sculo depois, o ttulo ainda se referia a esta antiga dicotomia: "Sobre a Teoria dos Germes e sua Influncia sobre a Medicina e a Cirurgia", como se Medicina e Cirurgia fossem prticas distintas.

2.5.2 William Harvey: a descoberta do invisvel William Harvey (1578-1676) foi talvez o primeiro grande cientista que a Medicina conheceu. Harvey preocupava-se com a natureza da circulao sangunea. Na fisiologia herdada dos gregos, j se dizia que o corao era "uma bomba"; j se sabia tambmda existncia de artrias e veias. Foram os gregos, por exemplo, que chamaram as artrias por esse nome e por um motivo especial: quando as disseces dos cadveres eram feitas, as veias eram encontradas cheias de sangue, mas as artrias estavam vazias. Eles imaginavam, ento, que as artrias transportavam ar. Em Alexandria, mais tarde, descobriram que as artrias transportavam sangue, descreveram-se as vlvulas cardacas e vlvulas nas veias. No grande tratado de Galeno, porm, constava que o corao bombeava o sangue desordenadamente: o sangue entrava pelas artrias, saa pelas veias, atravessava paredes cardacas. A grande preocupao de Harvey era esclarecer estes pontos obscuros. Ligando a veia cava ou a aorta, ele estabeleceu o sentido da circulao sangunea, observando que o sangue s se acumula do lado por onde ele chega at a ligadura. O sangue entra no corao pelas veias e sai pelas artrias, algo que Harvey estabeleceu por uma experincia, como o primeiro experimentador dentro da Fisiologia. Mais importante que isto, porm, Harvey constatou, em suas disseces, que as artrias vo se bifurcando e se tornando mais finas at desaparecerem nos tecidos, enquanto que as veias, trazendo o sangue dos tecidos, parecem brotar de l, em pequenas veias que confluem para formar veias maiores. Entre as artrias, por onde o sangue entra nos tecidos, e as veias, por onde ele volta ao corao, no existem ligaes visveis. Harvey calculou, ento, a quantidade de sangue bombeada pelo corao e concluiu que uma massa de sangue trs vezes maior que o peso do corpo mobilizada diariamente. Para ele parecia completamente absurdo imaginar que um volume de sangue como este pudesse ser gerado em algum lugar do corpo para entrar pelas veias e em seguida desaparecer nos tecidos. Harvey utilizou, ento, uma concluso, uma inferncia, atravs de dados que obteve experimentalmente: se o sangue entra no corao, tem um movimento com um sentido bem definido e no pode ser criado e consumido todo dia em to grande volume, deve existir algo entre as veias e as artrias, algo que est ali mas invisvel. Harvey passou para a histria como o descobridor dos capilares, denominao que ele deu aos vasos mais finos porque os imaginava finos como cabelos. Mas sua contribuio muito mais importante: ele foi o primeiro a falar no invisvel dentro da Medicina. Fazendo inferncias a partir de observaes experimentais, Harvey foi um dos primeiros a introduzir a prtica cientfica na Medicina. O novo mtodo, ento, permitia aplicar as leis Fsica tambm ao conhecimento do corpo humano. Isto desencadeou uma srie enorme de trabalhos que deram origem Fisiologia como a conhecemos hoje. Se o corpo nada mais que um aglomerado de leis Matemticas e Fsicas, mais fcil imagin-lo como uma mquina. Uma mquina que bombeia sangue e realiza outras atividades prprias s mquinas. interessante notar que os nomes que os fisiologistas passaram a utilizar so tomados por emprstimo Mecnica ("regulao", "energia", etc). Esta tendncia desemboca em Descartes que, sem admitir que faz metforas, descreve o corpo como uma mquina. 2.5.3 Broussais: a inflamao e as sangrias Surgem tambm neste perodo os primeiros modelos de Teorias mdicas que rompem radicalmente com a Medicina grega. Um fisiologista francs, Broussais (1735-1788), cria um modelo exemplar. Segundo Broussais, tal como uma mquina, o corpo tende para o desgaste, a destruio e a morte. A tarefa do mdico, ento, seria a de intervir no curso dos acontecimentos e retardar o desenlace inevitvel, porque o corpo em seu estado natural tende a morrer. No existiria , entre a doena e a sade, uma diferena em natureza, mas apenas em grau. Todas as doenas seriam reguladas por um s princpio, o princpio da excitabilidade. O corpo doente ou est excitado demais, ou de menos. A normalidade seria o grau certo de excitabilidade. A terapia advogada por Broussais, ento, visava recompor o grau correto de excitabilidade: para os pouco excitados, os excitantes; para os excitados demais, as sangrias. As sangrias se tornaram uma forma muito popular de interveno mdica, um mtodo universal de cura, aplicvel a inmeras situaes. Toda doena febril, por exemplo, envolvia um grau exacerbado de excitabilidade e exigia sangrias. Em 1820, por exemplo, a Frana exportava 1 milho de sanguessugas (um verme de vida livre, Hirudo medicinalis ) para serem usados em sangrias. Em 1827, ela importava 30 milhes destes animais. Normalmente, junto com a aparelhagem que o mdico levava para examinar seus pacientes, havia um frasco onde nadavam as sanguessugas .

Embora tenha se comprovado mais tarde que as sangrias possuam algum valor teraputico no caso das doenas febrs, seu uso se tornou universal e indiscriminado. Este uso inespecfico baseava-se na idia de que a doena era tambm uma entidade inespecfica, que afetava todo o corpo. Como era de se esperar, o uso generalizado das sangrias resultou em desastres histricos. Conta-se a histria de um paciente famoso que adoeceu com dor de garganta e muita febre. Um mdico foi chamado para atend-lo e aplicou-lhe uma sangria. Horas depois, como o paciente no melhorasse, outros mdicos foram chamados, e novas sangrias foram feitas. Nenhuma melhora resultou e uma terceira equipe mdica foi convocada, que executou novas sangrias, nas quais o paciente veio a falecer. O nome do paciente era George Washington, ento presidente dos Estados Unidos . A aceitao das sangrias como um mtodo universal de cura representou um desastre para a Medicina. Houve um movimento de retorno Medicina hipocrtica, contemplativa. Apesar destes primeiros contratempos teraputicos, as idias da revoluo cientfica estavam irremediavelmente plantadas dentro da Medicina e a Fisiologia prosseguiu com suas observaes. 2.6 Edward Jenner: a vacina contra a varola O segundo fator favorecedor da emergncia da Teoria dos Germes foi a vacinao anti-varilica introduzida por Edward Jenner (1749-1823) na Inglaterra ao final do sculo XVIII. Jenner no era simplesmente um mdico de provncia, como alguns o retratam. Ele era discpulo e intimamente ligado a um outro mdico, muito famoso na histria da cirurgia: John Hunter. Hunter era um verdadeiro praticante da Medicina experimental, completamente imbuido do esprito cientfico, convencido de que alm de clnico, o mdico deve ser um experimentador. Conta-se que ele dizia a Jenner, a ttulo de conselho: "Porque pensar? Porque no experimentar?". Movido por solicitaes de Hunter, Jenner era, alm de mdico, um naturalista: identificou uma srie de plantas, fazia experincias tais como determinar a temperatura corporal do ourio-caixeiro durante a hibernao e tarefas de igual teor. No por acaso, portanto, que foi Jenner quem observou sistematicamente um fato que j era do domnio pblico em sua regio rural. A varola, nesta poca, era uma ameaa muito grave populao, responsvel por uma em cada sete mortes de crianas inglesas. E mesmo as pessoas que sobreviviam varola ficavam desfiguradas. Os prprios herdeiros do trono britnico morreram, quando crianas, vitimados pela varola. Era, enfim, uma preocupao sanitria de grandes propores. Antes do trabalho de Jenner, praticava-se, como preveno da varola, a variolao, trazida por Lady Montagu de Constantinopla, que consistia na inoculao deliberada de pessoas sadias com o pus de casos brandos de varola. A variolao era praticada por velhas que visitavam as casas em datas combinadas, durante reunies festivas, trazendo uma pequena quantidade de pus de varola em uma casca de noz. Os pacientes, geralmente crianas, eram puncionados com uma grossa e slida agulha molhada em pus, em uma veia do antebrao. A varola, geralmente branda (com cerca de 20 pstulas pelo corpo) surgia em uma ou duas semanas. O procedimento, no entanto, no estava livre de riscos, pois ocasionalmente induzia casos graves ou fatais de varola, sendo, portanto, muito temido . Conta Jenner, em seu trabalho , que uma doena dos cascos de cavalos, conhecida como The Grease, foi passada para vacas leiteiras pelas mos de um ajudante de cavalaria de hbitos pouco higinicos. Nas vacas, a doena se manifestava por pstulas no bere e, durante a ordenha, estas pstulas contaminaram moas da aldeia, causando-lhes pstulas nas mos e nos braos. Era do conhecimento popular que esta forma atpica de varola (cowpox) evitava que as moas adoecessem subseqentemente com a varola (smallpox). Jenner comeou a investigar sistematicamente a base dessas crenas e descobriu um sitiante que havia, deliberadamente, infectado toda a famlia com a cowpox, tornando-a imune varola. Aps vrios anos de observaes, Jenner decidiu executar experincias. Conseguiu o pus da cowpox e inoculou, por via cutnea, uma criana de 8 anos de idades, induzindo nela uma nica pstula bem formada. Seis meses depois, Jenner inoculou a mesma criana com o pus de uma caso grave de varola - um experimento inconcebvel aos nossos olhos. A criana no adoeceu e Jenner repetiu o procedimento em numerosos pacientes, at submeter os seus resultados Royal Society. Por incrvel que parea, o trabalho no teve muita repercusso na Inglaterra. Mas repercutiu fortemente na Europa e se difundiu rapidamente pelo mundo. Os soldados de Napoleo foram vacinados com esse mtodo. Em levas de imigrantes europeus que se dirigiam para a Amrica, crianas eram vacinadas em srie, para transportar o pus em forma infectante de um continente a outro. O mtodo introduzido por Jenner conseguiu, pela primeira vez, erradicar uma doena importante. importante notar que tal mtodo no deriva de nenhuma viso global de universo ou mesmo do corpo. Na

verdade, ele implantado muito antes de se saber o que eram as doenas, o que era a varola e muito antes do aparecimento da Imunologia. O sucesso da vacinao, generalizado como um mtodo seguro e eficaz de proteo, ser importantssimo depois para Pasteur na criao de uma teoria geral sobre a imunidade e sobre as vacinas. 2.7 O nascimento da clnica Nos termos de Foucault, o nascimento da clnica foi uma modificao radical da prtica mdica. A Medicina at ento usava uma classificao das doenas que era totalmente sintomtica. Estas se dividiam entre febres, apoplexias ou denominaes igualmente vagas. Como as classificaes se baseavam em descries criteriosas do curso da doena, um diagnstico completamente preciso implicava em um desenrolar completo da doena, ou seja, na morte do paciente. Nos sculos XVIII e XIX, surgem mtodos mais adequados de exame fsico dos pacientes, como o estetoscpio, procedimentos mais sistemticos de coleta de histrias clnicas (anamnese), formas mais adequadas de se chegar aos sintomas das pessoas e de decidir quais os sinais associados a esses sintomas dentro do corpo. Paralelamente a isto, a anatomia patolgica evolua, permitindo que se fizesse uma superposio de dados da autpsia aos sinais e sintomas colhidos anteriormente na clnica. Antes disso, a Medicina se confrontava com um corpo doente a ser decifrado. As doenas no existiam enquanto entidades distintas. A partir deste momento, "os sinais" e "os sintomas" passam a ser correlacionados com diferentes doenas. Pode-se, por exemplo, correlacionar uma queixa de cansao de um paciente com uma taquicardia e depois, com os dados da autpsia, constatar a presena de um corao aumentado de volume. possvel da concluir que existem "doenas" definidas, localizadas em rgos. A doena comea a ter uma sede, um local. A classificao das doenas no se faz mais atravs de sua histria, apenas, mas atravs de sua localizao anatmica. O corpo doente, at ento tratado no Hospital Geral, d lugar s doenas especficas tratadas no Hospital das Clnicas. Data desta poca, portanto, duas cises importantes na forma em que o corpo estudado pela Medicina: a diviso do corpo (sadio) em rgos e sistemas e a fragmentao da doena em entidades clnicas especficas. Pasteur, anos depois, ir derivar da a concluso de que, se existem "doenas" especficas, provavelmente as"causas" destas doenas tambm soespecficas.

2.8 Relaes entre a Qumica e a Imunologia O quarto fator favorecedor do aparecimento da Teoria dos Germes no final do sculo XIX, particularmente importante para o surgimento da Imunologia, foi a criao da indstria qumica alem, por volta de 1870. A Qumica passou por uma revoluo similar sofrida pela Fsica e pela Medicina. Diferentemente do que se possa imaginar, a Qumica no uma continuao da Alquimia. A Alquimia se desenvolveu de preocupaes completamente diferentes, objetivos msticos pouco relacionados com o entendimento da natureza da matria. Ela tambm no uma sofisticao da farmacologia primitiva, como a utilizada na preparao dos "compostos galnicos" que eram utilizados para mitigar a dor. Mesmo na produo dos "compostos galnicos", no havia uma preocupao em identificar com preciso seus componentes, quais eram as substncias ativas, etc. A nica preocupao era a eficcia teraputica, determinada empiricamente. A Qumica moderna nasce da moderna idia de cincia: j que possvel entender o mundo atravs da Fsica, deve ser possvel entender tambm a matria e suas propriedades, purificar as substncias at seu estado ltimo de pureza e entender suas regras de associao a outras substncias. 2.8.1 Lavoisier: respirao e combusto Uma das pessoas mais importantes nesta transformao foi Lavoisier (1743-1794), que introduziu na Qumica os mtodos quantitativos de medida e foi o primeiro elaborador da teoria da combusto. Nesta poca j se identificavam diversos gases e Lavoisier props uma teoria sobre o aparecimento do calor e da energia: a teoria da combusto. Ele props que a gerao do calor dependia da combusto, que era a combinao de um material a ser queimado com o ar. Este era um conceito muito importante sobre as transformaes qumicas da matria, exaltado no dito "na natureza nada se cria, nada

se perde: tudo se transforma." A combusto era um exemplo dessas transformaes para Lavoisier, onde a matria podia se tornar energia e vice-versa. Lavoisier se empenhou em demonstrar que a combusto um princpio geral aplicvel no s s coisas inanimadas, como tambm aos seres vivos. A respirao, segundo ele, nada mais era que uma combusto controlada. Para tal demonstrao, ele colocou dentro de frascos fechados um candelabro e um camundongo. No primeiro frasco, a chama das velas consumiu todo o ar existente no frasco e elas se apagaram. No frasco com o camundongo, similarmente, o animal consome todo o ar que l existe e morre. Lavoisier via nos dois frascos exemplos do mesmo processo de combusto: ambos consomem oxignio, produzem gs carbnico e calor. Esta experincia, aparentemente ingnua, foi muito importante porque, junto com a idia dos fisiologistas de que possvel entender o corpo de acordo com as leis da Mecnica, tambm possvel entender o corpo atravs das leis da Qumica. O corpo poderia ser visto como um aglomerado de fenmenos mecnicos e qumicos cujo esclarecimento nos permitiria saber o que o corpo e como ele funciona. Quase na mesma poca, estudos sobre a digesto, indicando que um suco secretado pelo estmago transforma quimicamente os alimentos, reforam esta idia. Pouco depois, a sntese da uria inaugura a qumica orgnica. Pela primeira vez surge a possibilidade de criar no laboratrio compostos que, aparentemente, s eram fabricados pelos seres vivos. 2.9 O trabalho de Louis Pasteur No final do sec. XIX, os trabalhos de Pasteur inauguraram a idia de que as doenas so causadas por microorganismos e que elas podem ser evitadas por vacinas ou soros especficos. O prprio Pasteur deu a estes achados e idias o corpo e o ttulo de uma Teoria - a Teoria dos Germes. Por estranho que parea, o criador e os grandes consolidadores da nova Teoria mdica no eram bilogos, nem mdicos; no eram pessoas que estavam lidando nem com seres humanos, nem com plantas e animais. Eram qumicos. Pasteur era um qumico e seus primeiros trabalhos eram exatamente com a qumica, isolando ismeros ticos. Em um trabalho de 1857, isolando cristais de tartarato e paratartarato, que desviam o plano da luz polarizada, respectivamente, para a direita e para a esquerda, ele percebe que quando uma soluo contendo os dois compostos fermentada por um dado fungo, apenas um dos compostos consumido, deixando o outro em soluo pura. Pasteur havia criado, com essa experincia, uma forma de isolamento qumico de um composto atravs da bacteriologia. Por outro lado, ele havia conseguido enriquecer a cultura do microorganismo, criando, portanto, um meio seletivo de crescimento para um dado microorganismo. A partir da, ele se interessa pela fermentao e pelas tcnicas de isolamento de micrbios, pelo estudo das bactrias e pelas doenas que elas so capazes de produzir. A trajetria de Pasteur confirma duas idias que sero incorporadas sua teoria: a primeira, que possvel entender o processos biolgicos sem falar da biologia do corpo, que no existe nenhuma especificidade biolgica no corpo; o corpo tambm fsico, qumico. A segunda, que a Medicina deve se ocupar essencialmente das doenas, que so entidades "concretas" e no com o corpo, uma entidade "abstrata". Pasteur realiza a maior parte de seus trabalhos dentro da Bacteriologia, que ele ajuda a criar e, no final do sculo XIX, estudando a clera aviria, descobre o princpio da atenuao microbiana, que torna possvel a preparao de vacinas. Conta-se que uma cultura envelhecida de bactrias, deixada sobre a bancada durante um perodo de frias, foi usada para inocular galinhas e no foi capaz de induzir a clera aviria. No entanto, as mesmas aves inoculadas subseqentemente com uma cultura virulenta sobreviveram infeco, mostrando que a primeira inoculao as havia protegido. O princpio descoberto por Jenner, com a varola, h um sculo atrs, poderia ser reproduzido no laboratrio com outras doenas. Anos depois, Pasteur explorava essa possibilidade na preveno da hidrofobia, injetando em um menino mordido por um co raivoso um extrato de medulas de coelhos infectados secas ao sol. Este sucesso teraputico lhe trouxe o reconhecimento pblico, a criao do Instituto Pasteur em Paris e a aceitao de suas idias universalmente. Apesar de combatido por eles, Pasteur concretizou a esperana dos Fisiologistas em fundar a primeira teoria mdica extrada de dados experimentais . A Teoria dos Germes nada mais que a extenso destas observaes para uma generalizao que orientaria a prtica mdica a partir de ento. A idia central seria a de que as doenas so no apenas entidades patolgicas especficas mas tambm tm causas especficas. A Imunologia seria a cincia do combate especfico a estas causas. Em 1878, ele publicou seu principal trabalho, a "Teoria dos Germes e suas Repercusses em Medicina e Cirurgia". Como conseqncia direta destas idias, Lister, na Inglaterra, e vrios outros cirurgies na Europa comeam a usar mtodos

de assepssia (a pulverizao de cido fnico) para a realizao de intervenes cirrgicas. Tais prticas tambm tiveram um efeito sensacional: as infeces e mortes ps-cirrgicas e ps-parto praticamente desapareceriam simplesmente pelas precaues dos cirurgies de lavar as mos e desinfectar os ambientes. 2.10 O desenvolvimento da sorologia Como vimos, a Teoria dos Germes oposta s demais teorias mdicas que a antecederam em dois aspectos fundamentais. As teorias anteriores se apoiavam em uma cosmologia, da qual derivavam uma viso de corpo. A Teoria dos Germes no possui nenhuma viso do corpo: surge de fragmentos empricos (Jenner) e de experincias laboratoriais (Pasteur) montados em um arcabouo terico. Por outro lado, a Teoria dos Germes se apoia em uma eficcia que as demais teorias no possuam e ser a teoria que sobreviver at nossos dias. Por incrvel que parea, ns ainda pensamos como Pasteur. verdade que, aos poucos, reconheceu-se que nem todas as doenas so causadas por germes. Mas a idia da especificidade etiolgica ficou: se a causa no bacteriana nem virtica, pode ser um gene defeituoso, a falta de um hormnio, um anticorpo em excesso. Baseados nos experimentos de Pasteur, von Behring e Kitasato encontram no soro de animais imunizados contra a difteria e o ttano substncias neutralizantes especficas que eles denominam anticorpos . As pesquisas imunolgicas, muito naturalmente, se voltaram todas para a caracterizao bioqumica dessas substncias neutralizantes que pareciam ser a chave da proteo contra as doenas. Von Behring e Kitasato mostraram que a proteo contra a difteria e o ttano poderia ser transferida passivamente de um animal imune para um normal pela transferncia do soro contendo os anticorpos. Estava criada a soroterapia que comeou a salvar da morte crianas com difteria. A nfase no estudo dos anticorpos e o desenvolvimento de tcnicas capazes de induzir a formao de quantidades elevadas de anticorpos em animais de laboratrio desenvolveu a estratgia imunolgica no sentido da inveno de mtodos de medida dos anticorpos no soro. Surgiram tcnicas de precipitao e de aglutinao. Quase na mesma poca, descobriu-se a ao ltica (desintegradora) do complemento. Em 1894, Pfeifer descobriu que vibries colricos injetados no peritneo de cobaias so desintegrados (bacterilise). Bordet, em 1895, mostrou que esta ao dependia de fatores tambm presentes no soro de animais normais que, de alguma forma, "complementam" a ao dos anticorpos especficos presentes no soro de animais imunizados. Gruber e Durham, em 1896, chamam a ateno para o fato de que, antes de se desintegrarem, as bactrias so aglutinadas pelos anticorpos, formando grumos facilmente visveis. No mesmo ano, Widal tem a idia de utilizar esta manifestao visvel da atividade imunolgica (a aglutinao) para fazer o diagnstico da febre tifide. Estava criado, tambm nesta poca, o sorodiagnstico especfico.

2.11 O trabalho de Paul Ehrlich Talvez a figura mais impressionante desta poca da fundao da Imunologia, tenha sido Paul Ehrlich. Qumico por formao, Ehrlich comeou a trabalhar na poca em que se implantou a indstria qumica alem, foi o responsvel pelo isolamento da morfina e pela sntese dos primeiros corantes. Um dos primos de Ehrlich era presidente de uma destas indstrias qumicas. No incio de sua carreira, Ehrlich trabalhou com os corantes recm-inventados para desenvolver mtodos de colorao de clulas sanguneas. Devemos a ele as denominaes: eosinfilo, basfilo e neutrfilo, dados s variedades de leuccitos polimorfonucleares do sangue. A questo que orientava Ehrlich na poca era saber qual o mecanismo que torna um dado corante especfico para um determinado tipo celular e no outro. Sua hiptese se baseava na existncia de receptores para os corantes nas clulas. A partir do trabalho com os corantes e sua especificidade de ao, Ehrlich interessou-se pela especificidade dos fenmenos imunolgicos. Trabalhou algum tempo com a padronizao da toxina diftrica, que muito instvel e criou o mtodo que usado at hoje, utilizando uma antitoxina padro ao invs de uma toxina padro. Para contornar a instabilidade da toxina diftrica, ele trabalhou com toxinas vegetais que so muito estveis, como a ricina e a abrina. Com esta extenso de seu trabalho, ele demonstrou que os fenmenos imunolgicos no se restringem a reaes anti-microbianas. Utilizando camundongos imunes ricina, ele esclareceu os mecanismos de imunizao ativa e passiva e demonstrou a transmisso de anticorpos da me para os filhos pelo leite. Posteriormente, baseado em sua teoria sobre os receptores especficos, Ehrlich inventou a terapia mais eficaz j conhecida, a quimioterapia.

A idia de Ehrlich era: como aliar a especificidade dos corantes (tambm encontrada nos anticorpos) a uma ao txica de maneira que seja possvel fabricar uma substncia capaz de se combinar especificamente a um dado micrbio e destru-lo, sem danificar nenhuma outra estrutura no corpo. Esta substncia seria, nas palavras de Ehrlich, uma "bala mgica" . No por acaso que o primeiro quimioterpico inventado por Ehrlich um corante: o vermelho Trypan, que mata o Trypanosoma da doena do sono. O Prontosyl vermelho, o Salvarsan, o Neo-Salvarsan, os primeiros medicamentos ensaiados contra o treponema da sfilis eram todos derivados de corantes. 2.12 Marcas de nascena A Imunologia nasceu imbricada nesse complexo processo de transformao da Cincia e da Medicina. interessante notar que as grandes criaes da Imunologia, seus grandes sucessos teraputicos, so, na sua maioria, desse perodo fundador: a vacinao, a soroterapia, o sorodiagnstico e, por fim, a quimioterapia surgiram na Imunologia muitas dcadas antes de se cogitar, por exemplo, em que clulas eram produzidos os anticorpos. A descoberta dos linfcitos como produtores de anticorpos s ocorrer em 1950-60. Desta maneira, tanto os sucessos mais bombsticos da Imunologia, assim como seu arcabouo terico se estabeleceram muito antes de existir qualquer idia sobre o sistema imune ou das clulas que o constituem. No s seus sucessos experimentais, mas tambm os princpios centrais que formam o arcabouo terico da Imunologia atual so deste perodo: a idia de um sistema de defesa do corpo contra infeces, dos anticorpos enquanto armas especficas produzidas no encontro com microorganismos e outros "corpos estranhos" (o horror autotoxicus de Paul Ehrlich), a noo da capacidade imunolgica em guardar uma memria desses encontros (o mecanismo de ao das vacinas). So estas as certezas que,ainda hoje, utilizamos na montagem de experincias imunolgicas e encadeamos em um programa didtico de ensino. Se, por um lado espantoso o pouco esforo de pesquisa direcionado no entendimento do sistema imune enquanto um sistema biolgico, sua relao com outros sistemas ou fenmenos do corpo (como o sistema nervoso, a digesto, etc); por outro lado, conpreensvel o comprometimento da Imunologia com sua tradio. Seus dois objetivos primordiais derivam desta tradio: em primeiro lugar, entender a operao do sistema imune pela montagem dos componentes bioqumicos e genticos envolvidos nesta operao. O nvel de detalhamento hoje disponvel com relao aos receptores, citocinas, genes de imunoglobulinas aliado iganorncia quase completa sobre os aspectos sistmicos da atividade imunolgica uma prova desta convico. Em segundo, desenvolver novas vacinas e novos mtodos especficos de terapia e diagnstico. Como veremos, esta tem sido uma tarefa muito complexa e nem sempre bem sucedida.

1 3. Certezas: origens recentes

_____________________________ 3.1 A Imunologia moderna nasceu em 1960 Vimos que a Imunologia surgiu como uma revoluo na arte de prevenir e curar doenas, validando e validada por uma nova viso da Medicina e da natureza das doenas. Depois de um intenso florescimento no incio do sculo, as descobertas imunolgicas importantes, tanto do ponto de vista aplicado, como do ponto de vista bsico, se interromperam. Um novo perodo de crescimento surgiu por volta de 1960 e se mantm at o presente, a julgar pelo nmero de prmios Nobel concedidos a imunologistas, indicados pelas setas na Figura 3.1 .

1902 1905 1908 1913 1920 1930

von Behring Koch Ehrlich & Metchnikoff Richet & Portier Bordet Landsteiner 1920 1940

1965 1977 1980 1984 1987 1990

Burnet & Medawar Yallow Snell, Dausset & Benacerraf Jerne, Kohler & Milstein Tonegawa Murray & Thomas 1980 2000

1900

1960

Figura 3.1: Prmios Nobel concedidos a imunologistas desde o perodo de sua fundao, Houve um ressurgimento do interesse em Imunologia nos ltimos 25 anos. Em uma dzia de imunologistas laureados com o prmio de 1960 para c, cinco foram premiados pelo desenvolvimento de mtodos importantes: Yallow, radio-imunensaio; Kohler e Milstein, anticorpos monoclonais; Murray e Thomas, tcnicas de imuno-supresso para transplantes. Dos restantes, trs foram responsveis por progressos bsicos na compreenso do MHC e sua importncia na transplantao de tecidos (Snell e Dausset) e na reatividade imunolgica (Benacerraf). Outros trs foram criadores de conceitos tericos fundamentais: Burnet e Medawar (seleo clonal, tolerncia, doenas autoimunes) e Jerne (Teorias seletivas, degenerao da especificidade, a rede idiotpica) e, finalmente, Tonegawa elucidou os processos de rearranjo gnico que criam as regies variveis de imunoglobulinas e receptores de linfcitos T (ou TCRs). O aumento exponencial do nmero de pginas do Journal of Immunology desde1960 (Figura 3.2 ), foi devido a progressos bioqumicos e, mais recentemente, biologia celular e gentica molecular. Ampliou-se muito o conhecimento sobre componentes e subcomponentes do sistema imune e sobre maneiras de abordar a atividade imunolgica especfica. Considerando todo este novo conhecimento, seria razovel esperar-se o desenvolvimento de novos mtodos de preveno e tratamento de doenas, novas vacinas e novas formas de interveno imunolgica. Na realidade, h alguns exemplos notveis de coisas assim, como a recente tentativa de tratar uma imunodeficincia congnita humana por engenharia gentica ou o desenvolvimento da vacina para a hepatite-B, que tambm dependeu de mtodos sofisticados de biologia molecular. Mas o grande progresso esperado no ocorreu. Como ilustrado na Figura 3.2 , no h relao alguma entre o progresso do conhecimento imunolgico, avaliado pelo volume de publicaes, e a introduo de novas vacinas. O avano no conhecimento bioqumico e sobre a biologia celular de linfcitos necessrio e desejvel. Mas h um descompasso entre a abundncia de dados sobre os componentes do sistema imune e a escassez de idias que esclaream a sua operao global. H um descompasso entre a grande sofisticao metodolgica e as idias elementares, quase todas metafricas, que orientam a pesquisa em Imunologia. A Imunologia tem duas tendncias herdadas de seu perodo fundador: uma (bio)qumica, hoje representada pela gentica molecular e pela biologia celular de linfcitos; outra, tecnolgica, dependente da primeira, empenhada na inveno de novas vacinas e representada principalmente pela Imunoparasitologia. Desapareceram da Imunologia as teorias de cunho biolgico, como as idias de Metchnikoff, o nico bilogo envolvido em seu perodo fundador.

2
10 8 6 4 2 0 1920 1940 1960 3144 1320 1980 2000 8879

6026

anos de introduo de novas vacinas

Figura 3.2: Nmero de pginas Association Immunologists, a mais of fundao. A Imunologia contempornea publicao das Teorias seletivas de Jerne entre o volume de publicaes e o setas abaixo da Figura.

do Journal of Immunology, rgo da American antiga associao de imunologistas desde sua nasceu por volta de 1960, pouco aps a (1955) e Burnet (1957). No h relao nmero de vacinas inventadas, indicadas pelas

3.2 As idias de Metchnikoff Metchnikoff passou para a Histria como o defensor de uma "teoria celular" da imunidade, na qual a inflamao e a fagocitose so elementos centrais. Sua proposta, no entanto, era muito mais ampla. Ele defendia uma ligao da atividade imunolgica com atividades biolgicas bsicas, como a nutrio e procurava elucidar sua origem filogentica. Nos seus primeiros anos de pesquisa, Metchnikoff, preocupado com uma possvel ligao filogentica entre todas as espcies animais, sugeriu que todas elas possuam uma maquinaria digestiva comum onde poderiam ser encontradas as marcas da evoluo. Nos animais sem cavidade central (celoma), organizados como uma massa celular parenquimatosa, como as medusas, a digesto se resumia ao de clulas fagocitrias amebides derivadas do mesoderma. J nos animais que possuam um tubo digestivo, a digesto ocorria por meio de um processo mais especializado no interior desta cavidade abdominal. No entanto, nestes animais, ainda existiam as clulas fagocitrias, sendo capazes de endocitar partculas slidas e diger-las. Estas clulas, no mais necessrias digesto de nutrientes, poderiam se dedicar tarefa de englobar e destruir os microorganismos que penetram o corpo. Acreditava Metchnikoff ser este mecanismo biolgico, a fagocitose, a base para a explicao do fenmeno da imunidade, ou seja, da capacidade adquirida pelos organismos vivos de, sob certas circunstncias, destruir os microorganismos que o invadissem. Haveria, ento, um elo filogentico entre a fagocitose e a nutrio. As clulas fagocitrias tm origem, juntamente com as demais clulas do sangue, no mesoderma. As clulas mesodrmicas so usualmente vistas como habitantes da profundeza do corpo, separadas do ambiente pelo ectoderma (que d origem pele e ao sistema nervoso) e das cavidades internas do corpo pelo endoderma (que d origem ao tubo digestivo). Metchnikoff, no entanto, salientava que o mesoderma se origina do endoderma, criando, assim, um elo ontogentico (embriolgico) entre as clulas fagocitrias e o intestino. Em 1883, ano da descoberta da fagocitose, era publicado o estudo de Metchnikoff sobre a metamorfose dos Equinodermas e Batrquios, "Investigaes sobre a Digesto Intracelular", demonstrando o papel de fagcitos, por exemplo, na destruio da cauda dos girinos. Ele tentou estabelecer a fagocitose como um mecanismo geral para a explicao de fenmenos biolgicos relevantes como a metamorfose em certos animais, a degenerao senil dos tecidos e a imunidade. Era o incio da famosa Teoria da Inflamao e da Imunidade Celular em oposio qual a Escola Alem (de Buchner, von Behring, Ehrlich e Koch) iria construir uma Teoria Humoral da imunidade propondo serem as antitoxinas presentes no soro as responsveis pela imunidade, no os fagcitos. O debate entre a Teoria da Imunidade Celular e a Teoria da Imunidade Humoral passou para a histria como uma querela entre pesquisadores na qual o futuro acabou por dar razo a ambas. A prova

3
desta conciliao foi o Prmio Nobel concedido simultaneamente a Metchnikoff e Ehrlich em 1908. Mas as comemoraes oficiais, s vezes, encobrem grandes esquecimentos. A verdade que a tentativa de Metchnikoff de ligar o fenmeno da imunidade a outros fenmenos biolgicos foi abandonada pelas pesquisas que o sucederam e os trabalhos relacionando a digesto e as mucosas a uma interpretao bsica dos eventos imunolgicos praticamente desapareceram. Os trabalhos que, apesar disto, apareceram, foram tratados com indiferena e silncio. Um exemplo marcante desta indiferena foi o que aconteceu com o fenmeno hoje conhecido como "tolerncia oral".

3.3 A negligncia sobre a tolerncia oral Em 1829, Dakin j descrevia que ndios norte-americanos tinham por hbito darem de beber s crianas uma infuso da planta poison ivy, do gnero Rhus, para evitar uma dermatite alrgica por contatos futuros com esta planta sensibilisante. Este relato precedeu os trabalhos de Pasteur e a prpria emergncia da Imunologia por cerca de 50 anos. Era um relato ligando a nutrio e as mucosas a fenmenos mais tarde reconhecidos como imunolgicos. Em 1909, em plena era do desenvolvimento da Imunologia, Besredka publicou um estudo sobre a anafilaxia mostrando que a reao anafiltica a protenas do leite no ocorria em animais previamente alimentados com estas protenas. Em 1911, Wells e colaboradores mostraram o mesmo fenmeno ocorrendo com protenas vegetais e do ovo.
anticorpos especficos

no-tolerante

no tolerante

gua dias

antgeno dias tolerante tolerante

antgeno

antgeno

Figura 3.3: A "tolerncia oral". Animais jovens ou que ingerem uma adultos dada protena podem desenvolver refratariedade formao de anticorpos e de uma linfcitos T especficos se subseqentemente imunizados com a mesma protena por via parenteral (por ex., intraperitoneal com adjuvantes). A tolerncia pode ser transferida adotivamente para animais normais pela transferncia de linfcitos T. Tambm trabalhando com a alergia, Chase confirmaria Dakin, em 1946, ao observar que a administrao oral de dinitroclorobenzeno ou cloreto de picrila,duas substncias altamente sensibilisantes, a cobaias evitava a dermatite de contato que tais compostos causavam quando subseqentemente pintados na pele dos animais. Pode-se imaginar que estes trabalhos foram publicaes esparsas, carentes de uma sistematizao, o que explicaria sua passagem efmera pela Imunologia e porque eles no ocupam uma posio de destaque nos livros-texto. Mas, no. Besredka, professor do Instituto Pasteur e discpulo de Metchnikoff, publicou, em 1927, uma extensa monografia sobre o assunto, onde tentou reunir as evidncias experimentais que o precederam e estabelecer a noo de uma imunidade local presente no intestino e da possibilidade de imunizao atravs da via oral. Em 1957, Sabin inventou a vacina oral contra a poliomielite, mas isto tambm no levou a um aumento do interesse sobre as reaes imunolgicas iniciadas no tubo digestivo. Foi somente em 1959, quando Heremans descobriu nveis elevados de IgA no leite e em outras secrees, que se iniciaram investigaes mais freqentes sobre o papel das mucosas nos eventos imunolgicos.

4
O estudo das mucosas dentro da Imunologia comea, portanto, na dcada de 60. Mas se inicia como um tpico completamente segregado do estudo do sistema imune "principal", representado pelos rgos linfides como o bao, os linfonodos e pela medula ssea. Os anticorpos presentes no plasma receberam praticamente a totalidade da ateno. Prova disto o fato do estudo das mucosas, ainda hoje, ocupar uma parte marginal dos livros de Imunologia e, principalmente, o fato de ter sido criado para este tipo de imunidade um sistema imune parte, o chamado sistema imune secretor . Uma pergunta nos parece, ao mesmo tempo, bvia e fundamental: porque eventos biolgicos to cotidianos como a alimentao foram, e so ainda, considerados com tanta relutncia na Imunologia? Porque as relaes evidentes apontadas por Metchnikoff foram esquecidas? Porque repetidamente descoberta, a tolerncia oral foi negligenciada a ponto de ocupar uma posio subalterna ou mesmo omitida em livros-texto de Imunologia? Porque foi necessria a criao de um sistema imune separado (o sistema imune secretor ) para estudar a imunologia das mucosas? Em nossa opinio, a resposta para estas perguntas nos remete histria da Imunologia. 3.4. Uma ndole mais qumica que biolgica Como vimos, a Imunologia surgiu como parte do projeto de criao de uma Medicina cientfica, um projeto que substitua um discurso sobre o corpo (sobre o doente ) por uma teoria sobre as doenas - a Teoria dos Germes, de Pasteur, mais tarde expandida como a Teoria das Causas Especficas das Doenas . Filha deste processo, a Imunologia surge como responsvel pela imagem pblica desta medicina e a pesquisa imunolgica, a partir da, ser profundamente marcada por esta origem. Por um lado, a Imunologia se desenvolveu no sentido da descoberta de novas vacinas e novos sucessos teraputicos que continuassem validando a nova Teoria mdica, ainda que estas descobertas permanecessem to empricas e destitudas de uma base terica quanto a primeira vacina inventada por Jenner contra a varola no sec. XVIII. Por outro lado, a pesquisa Imunolgica se encaminhou tambm no sentido (bio)qumico, molecular. A grande maioria das investigaes ps-Pasteur representa uma tentativa de responder pergunta crucial: "Qual o princpio qumico do soro era responsvel pelo fenmeno da imunidade?" A caracterizao minuciosa dos anticorpos e o uso de antisoros especficos para o diagnstico de algumas doenas precedeu em dcadas as indagaes sobre os mecanismos celulares de formao dos anticorpos. S em 1930, foi sugerido que seriam os linfcitos as clulas responsveis pela produo das "antitoxinas" e somente nas dcadas de 60-70, os plasmcitos foram caracterizados como as clulas que produzem os anticorpos encontrados no plasma, na linfa e nas secrees. Essa face bioqumica nada mais era que um aspecto complementar de uma necessidade tecnolgica, perfeitamente compreensvel, de criar meios especficos de preveno e tratamento das doenas que a Teoria dos Germes acreditava enfim compreender. As preocupaes bioqumicas s no apagaram definitivamente o interesse nos aspectos fisiolgicos do fenmeno da imunidade porque descobertas muito curiosas foram feitas quase mesma poca, logo ao iniciar-se o sculo XX. Por exemplo, Landsteiner descobriu na circulao de pessoas normais anticorpos capazes de aglutinar as hemcias de outras pessoas e isto o conduziu caracterizao dos grupos sanguneos ABO e possibilitaram as primeiras transfuses de sangue. Isto, aparentemente, contradizia a idia de que os anticorpos so formados apenas contra micrbios invasores. Alguns anos antes, preocupado com a instabilidade da toxina diftrica, Erlich havia decidido usar toxinas vegetais (ricina, abrina), que so muito mais estveis, para entender os mecanismos da imunizao ativa e passiva. Nestas experincias, tornouse evidente que protenas vegetais tambm eram capazes de induzir a imunidade. Foram descobertos que os fenmenos alrgicos como o choque anafiltico e a sensibilidade anafiltica de ces a extratos de anmonas marinhas podia ser transferida a ces normais pela transfuso de anticorpos mostrando que tais fenmenos tinham uma base imunolgica. Estava claro, portanto, que a reatividade imunolgica era um fenmeno geral, mais amplo que a reatividade a microorganismos invasores. A resistncia a infeces parecia derivar de mecanismos gerais de reconhecimento de materiais estranhos. Foram estas descobertas, de carter bsico, que deram origem s primeiras Teorias realmente fecundas sobre a atividade imunolgica. A primeira, formulada por Ehrlich em 1900 (Teoria das cadeias laterais ), apontava a impossibilidade do organismo fazer respostas imunes contra seus prprios constituintes, uma caracterstica que ele denominou horror autotoxicus . Injetando hemcias de cabras em outras cabras ele descobriu que freqentemente apareciam anticorpos especficos, mas, em

5
nenhuma ocasio, a injeo de cabras com suas prprias hemcias resultava no aparecimento de autoanticorpos. Quase na mesma poca, Landsteiner havia descoberto os grupos sanguneos humanos e os anticorpos naturais (isohemaglutininas) que os caracterizam. Isto reforou as idias de Ehrlich, pois pessoas normais possuem (naturalmente) na circulao anticorpos (isohemaglutininas) que reagem com hemcias de outros grupos sanguneos, mas no reagem com suas prprias hemcias. Estavam postos os elementos que preservariam interesses biolgicos dentro da Imunologia moderna, salvando-a de um destino puramente bioqumico e tecnolgico. Mas o interesse sobre a natureza qumica dos antgenos e anticorpos continuou intenso. Logo comprovou-se que o organismo se imuniza a pequenos radicais qumicos sintticos (haptenos) introduzidos artificialmente em protenas. O trabalho com os haptenos, principalmente os desenvolvidos por Landsteiner e seus colaboradores, demonstrou que os anticorpos eram capazes de discriminar entre radicais qumicos (haptenos) muito similares (Figura 3.4 ).

exemplo de radical utilizado como hapteno protena NO2 NO2 (TNP,trinitrofenil) NO2

protena + hapteno

anticorpos anti-protena anticorpos anti-hapteno

conjugado

Figura 3.4: O trabalho com haptenos demonstrou que anticorpos, quando utilizados como reagentes de laboratrio, so dotados de uma capacidade extremamente delicada de diferenciar entre substncias qumicas muito parecidas. Isto consolidou a crena na grande especificidade dos fenmenos imunolgicos. Isto cristalizou a idia de que cada organismo capaz de formar uma variedade praticamente ilimitada de anticorpos altamente especficos para pequenas regies de estrutura definida, presentes nos antgenos naturais (determinantes antignicos, ou epitopos). Parecia que o corpo, alm de reagir especificamente a uma variedade ilimitada de substncias estranhas, era tambm capaz de ignorar uma variedade imensa de auto-constituintes. A combinao destas duas propriedades, o horror autotoxicus e uma versatilidade extrema, formaram a coluna dorsal da Imunologia no incio do sculo. Esta problemtica sobrevive basicamente inalterada at o presente na viso da maioria dos imunologistas. Nos anos 50 e 60, criaram-se as idias que puseram msculos neste esqueleto conceitual. 3.5 A idia de seleo Em 1897, Paul Ehrlich props a Teoria das Cadeias Laterais sobre a formao dos anticorpos. Ehrlich popularizou a noo de receptores especficos , to importante na cincia moderna. Para ele, uma clula lidaria com a multiplicidade de "nutrientes" necessrios ao seu metabolismo atravs de "cadeias laterais" que se ligariam a estes nutrientes como receptores especficos. Na Teoria das Cadeias Laterais, Ehrlich props que a formao de anticorpos (antitoxinas) dependia de interaes das toxinas com estas cadeias laterais da superfcie celular. Em resposta ao contato repetido com uma toxina, as clulas elevariam a produo do tipo especfico de cadeias laterais capazes de ser ligar mesma e o excesso das mesmas seria liberado das clulas para o sangue passando a constituir os anticorpos especficos circulantes. Estas idias ficaram esquecidas por um longo perodo at que, em 1955, Niels Jerne, uma das figuras mais importantes da Imunologia contempornea, sugeriu que os anticorpos formados em resposta a um antgeno devem ser, de alguma forma, "selecionados" entre os anticorpos "naturalmente" presentes no organismo. Os anticorpos naturais , aqueles cuja presena no resulta de uma exposio prvia ao

6
antgeno ao qual reagem, haviam sido caracterizados, por exemplo, no trabalho de Landsteiner com os grupos sanguneos humanos. Isto, de certa forma, fez reviver o conceito de Ehrlich de que todos os possveis antgenos, ao entrarem no organismo, j encontram anticorpos especficos pr-formados e "selecionariam" estes anticorpos ao reagirem com eles. Jerne props que o antgeno conduziria o anticorpo para clulas especializadas capazes de produzir muitas rplicas do anticorpo. Atento aos ento recentes desenvolvimentos da Bioqumica sobre a sntese de protenas, ele sugeriu que os anticorpos poderiam influenciar a sntese de um RNA especfico ou mesmo modificar a estrutura de um RNA pr-existente, que se tornaria um "molde" para a produo dos anticorpos especficos. Estas idias, porm, s adquiririam a forma que possuem hoje por volta de 1960, apoiadas nas idias de Burnet, que deu uma base celular mais aceitvel para as idias de Jerne. Tabela 3.1 Principais Teorias seletivas da Imunologia at o presente _______________________________________________ Teoria publicao autor _______________________________________________ Cadeias laterais 1897 Paul Ehrlich Seleo natural 1955 Niels Jerne Seleo clonal 1957 MacFarlane Burnet Rede idiotpica 1974 Niels Jerne ________________________________________________

3.6 A discriminao self-nonself Por volta de l950, em um livro sobre a produo dos anticorpos, Burnet havia grifado a noo do horror autotoxicus de Ehrlich, dizendo ser evidente que o sistema imune capaz de discriminar entre o que lhe prprio ("self") e o que lhe estranho ("nonself"). Esta capacidade de discriminar entre o eu e o resto no pode ser herdada, desde que a composio do organismo no est determinada at o momento da constituio do zigoto, pela fuso dos gametas. O sistema imune da criatura em formao no pode, por antecipao, desarmar a reatividade a si mesmo, pois no sabe o que "si mesmo" (o self) vir a ser, a que estruturas deve ignorar. A discriminao self-nonself, portanto, deve ser um fenmeno somtico, isto , deve acontecer de novo durante a vida de cada organismo. Burnet sugeriu que este processo, que ele considerava central no estabelecimento da reatividade imunolgica, deveria ocorrer durante a vida embrionria ou no perodo perinatal, desde que se tratava de um fenmeno essencial integridade do organismo (a defesa contra invasores externos) e mantida no decorrer de toda a vida da criatura. Anos antes, na Inglaterra, Owen havia mostrado que gmeos fraternos bovinos, cujo sangue se mistura durante a gestao, so, na realidade, quimeras , isto , quando adultos, possuem clulas sanguneas de ambos os indivduos. Com base neste achado, Burnet sugeriu que a introduo de clulas de um outro organismo no embrio, durante a fase em que o autoreconhecimento imunolgico se processasse, resultaria no reconhecimento destas clulas estranhas (nonself) como prprias (self). Na vida adulta, este organismo seria incapaz de reconhecer as clulas deste doador especfico como estranhas e aceitaria sem rejeitar transplantes de tecidos desse mesmo doador. As experincias de Burnet para comprovar sua hiptese falharam, mas Brent e Medawar, na Inglaterra, e Hasek, na Tchecoslovquia, fizeram experincias bem sucedidas com camundongos (Figura 3.5 ) e galinhas respectivamente. Na linguagem criada por Medawar, camundongos neonatos se tornam tolerantes a transplantes de pele de outra raa (transplantes alognicos) se so injetados, logo ao nascer, com uma mistura de clulas de bao, fgado e rim dos doadores. Sabemos hoje que apenas as clulas do bao, os linfcitos, precisariam ser injetadas. Medawar mostrou tambm que, em animais tolerantes adultos que mantm um transplante sem rejeit-lo, uma transfuso de linfcitos de animais que j rejeitaram um transplante igual ou mesmo de linfcitos de animais normais restaura a competncia imunolgica causando a rejeio do transplante em poucos dias. Paralelamente a estes estudos, tambm na Inglaterra, Gowans demonstrava, com uma srie de experincias onde ele drenava, por vrios dias, a linfa do conduto torcico de ratos, que os linfcitos recirculantes so clulas essenciais para a reatividade imunolgica. Animais tornados deficientes em linfcitos pela drenagem crnica de linfa (de linfcitos), tornavam-se imunologicamente incompetentes:

7
formavam mal anticorpos e rejeitavam mal transplantes. A competncia imunolgica podia ser restaurada por uma reinfuso de linfcitos de doadores compatveis normais.

neonatos raa A

transplante de pele

rejeita

raa B suspenso celular bao raa B tolera

Figura 3.5: A experincia Brent-Medawar em seus aspectos essenciais. A transfuso clulas alognicas (de outra raa) para camundongos neonatos os torna de capazes de receber, quando adultos, transplantes de pele desta mesma raa, sem rejeio. Nesta mesma poca, os bioqumicos estavam decifrando os aspectos essenciais do mecanismo de sntese de protenas. J se reconhecia, pelo trabalho de Michael Heidelberger, que anticorpos so protenas e devem ser formados com base neste mesmo mecanismo. A especificidade de um dado anticorpo depende de sua forma molecular e esta, por sua vez, depende da seqncia particular de aminocidos presente nas cadeias polipeptdicas que compem a molcula do anticorpo. A seqncia de aminocidos, por sua vez, depende da seqncia de nucleotdeos presente no RNA-mensageiro correspondente, e, finalmente, da seqncia correspondente de nucleotdeos no DNA nuclear, isto , da natureza dos genes que codificam aquele anticorpo em particular. Enfim, os genes necessrios sntese de um dado anticorpo precisam existir no organismo antes da chegada do antgeno. O papel do antgeno deve se resumir a "selecionar", entre uma grande variedade de anticorpos j disponveis ao organismo, aqueles anticorpos que lhe so especficos e, de alguma forma, estimular sua formao em quantidades mais elevadas. O antgeno no "causa" a formao de anticorpos novos. Ele "destrava" a formao de maiores quantidades de anticorpos que j eram produzidos pelo organismo. Ehrlich, em 1897, afinal, estava certo. A idia de Burnet, hoje amplamente comprovada, foi a de que os linfcitos, ao contrrio das demais clulas do corpo, so geneticamente distintos uns dos outros, isto , constituem clones celulares. Cada clone linfocitrio expressaria na membrana celular um nico tipo de anticorpo. A seleo dos anticorpos adequados a cada antgeno seria, portanto, feita atravs da seleo dos clones de linfcitos reativos com aquele antgeno em particular (Figura 3.6 ). A Teoria de Seleo Clonal de Burnet estava ligada sua preocupao central na Imunologia: a discriminao self-nonself. A Teoria propunha, ao mesmo tempo, um mecanismo para a imunizao especfica (um aumento numrico dos linfcitos dos clones reativos) e um mecanismo para a tolerncia imunolgica aos auto-componentes. Esta tolerncia ocorreria atravs de uma diminuio, por destruio ou inibio permanente dos clones correspondentes denominados por Burnet de clones proibidos . Burnet postulou que doenas de agresso imunolgica aos tecidos pelos linfcitos e seus produtos, as doenas autoimunes , ocorreriam quando esta proibio fosse violada. Realmente, nos anos subseqentes, confirmou-se a participao de mecanismos imunolgicos na gnese de vrias doenas humanas e muitos modelos experimentais de auto-agresso imunolgica foram criados nos laboratrios. Burnet props uma origem somtica para a variabilidade gentica necessria para criar um grande nmero de clones linfocitrios. Esta idia no tinha pontos de apoio no conhecimento gentico da poca. Na realidade, este problema s foi resolvido no final da dcada de 80, principalmente pelos trabalhos de Tonegawa e seus colaboradores sobre rearranjos e juno de segmentos gnicos.

8
morte antgeno

ativao

diviso expanso clonal

Figura 3.6: A Teoria de Seleo Clonal de Burnet, em seus aspectos essenciais. Clones de linfcitos gerados ao acaso reagiriam, em uma fase, com primeira autocomponentes e seriam eliminados. Os sobreviventes passariam a constituir clones o sistema imune e, caso encontrassem o antgeno correspondente, se expandiriam e produziriam anticorpos. Na dcada de 60, surgiram tambm os achados de Miller, assim como Burnet, um australiano, sobre o timo. Misterioso at o presente, o timo mostrava ento a sua importncia na gnese da reatividade imunolgica, desde que a sua remoo no perodo perinatal, e s ento, implicava em deficincias imunolgicas severas. A intensa linfopoiese observada no timo de animais jovens era, portanto, importante na gnese da competncia imunolgica. O timo revelava ainda um aspecto curioso: a grande maioria dos linfcitos produzidos em seu interior so destrudos sem sair do timo. Para Burnet, estes achados permitiram uma interpretao original, conveniente e apoiada at o presente. O timo seria o rgo gerador da competncia imunolgica a partir de precursores importados desde a medula ssea. No seu interior seriam gerados mutantes (somticos) em grande nmero (a gerao da diversidade necessria). Por serem gerados ao acaso, os mutantes incluiriam muitos clones auto-reativos ("proibidos") que, ao serem inativados (a explicao da destruio de linfcitos no interior do timo), tornariam o sistema imune do animal tolerante aos componentes do organismo (Figura 3.7 ). Caracterizou-se tambm nesta poca a existncia de dois tipos distintos de linfcitos: um tipo que, como sugeria Burnet, se originava do timo (linfcitos T ) e um segundo tipo denominado linfcitos B . Descobriu-se que, em aves, os linfcitos B se originam em um rgo linfide especial, associado cloaca, denominado bursa de Fabricius. A remoo cirrgica da bursa no perodo perinatal ou a inibio de seu desenvolvimento pela injeo de testosterona em ovos embrionados, resulta em aves incapazes de formar anticorpos. Isto levou, por algum tempo, suposio de que existiriam dois compartimentos distintos no sistema imune (um T e um B) cada um dispondo de um rgo central ( respectivamente, timo e bursa). Durante alguns anos, procurou-se, sem sucesso, um rgo linfide em mamferos que desempenhasse funes anlogas s desempenhadas pela bursa. A interpretao deste problema mais aceita atualmente bem distinta. A produo de linfcitos B em mamferos ocorre, na maioria das espcies estudadas, na prpria medula ssea (embora em outras, haja uma linfopoiese B intensa no intestino delgado). A existncia da bursa em aves poderia ser devida a outros fatores como, por exemplo, a necessidade de ter ossos leves, para permitir o voo e, portanto, ocos, vazios de medula ssea.

9
no timo do neonato morte timo regridiria no adulto

gerao da diversidade clonal (por mutaes somticas) & eliminao dos clones auto-reativos adulto com linfcitos reativos apenas a materiais non-self

Figura 3.7: Segundo Burnet, a gerao da competncia imunolgica e da tolerncia aos auto-componentes ocorreria no interior do timo. Criadas nos anos 60, tais idias ainda formam a coluna dorsal do pensamento imunolgico mais tradicional. As experincias de Claman e colaboradores foram importantes na caracterizao da participao de linfcitos T nas respostas imunes. Trabalhando com a reconstituio da competncia imunolgica de animais irradiados pela transferncia de linfcitos de doadores compatveis normais (Figura 3.8 ), observaram que quando linfcitos colhidos de diversos rgos foram utilizados, os colhidos do timo ou da medula ssea eram incapazes de restaurar a competncia. Mas uma mistura destes dois tipos de linfcitos se mostrou to eficiente para a restaurao quanto linfcitos de bao, do sangue ou de gnglios (Tabela 3.2 ). Isto caracterizava a existncia de dois tipos de linfcitos, denominados B (de Bone marrow) e T (de Timo).

suspenso celular bao normal

imunizao com hemcias de carneiro +++

irradiado

reconstitudo

+++

no-reconstitudo

Figura 3.8: Restaurao da competncia imunolgica de letalmente pela transferncia adotiva de linfcitos de bao.

animais irradiados

A cooperao entre linfcitos T e B, incluindo a participao de macrfagos e clulas dendrticas, tornou-se o tema central da investigao imunolgica bsica nos anos 70 e 80 e constitui a maior parte do que se convencionou chamar Imunologia celular .

10
Tabela 3.2 Eficcia da transferncia adotiva de linfcitos para restaurar a competncia imunolgica de animais irradiados _______________________________________________ Origem dos linfcitos Eficcia _______________________________________________ sangue circulante ou linfa + bao ou gnglios linfticos + medula ssea timo medula ssea + timo + _______________________________________________

3.7 Os quatro pilares da viso clonal O esquema geral proposto por Burnet prevalece inabalado. Suas discrepncias e contradies so interpretadas como problemas menores que encontraro explicaes adequadas no devido tempo. Na verdade, este arcabouo terico permanece slido porque as idias de Burnet representam uma sntese das descobertas bioqumicas e dos sucessos empricos da Imunologia construda a partir de quatro princpios: 1. 2. a idia da especificidade herdada, originalmente, da Qumica, atravs da Teoria dos Germes de Pasteur e expandida pelo trabalho de Landsteiner com haptenos; a noo de memria imunolgica , uma reatividade progressiva pela qual o organismo responde mais intensamente a um segundo contato com o mesmo antgeno, uma idia que, de mecanismo de funcionamento de algumas vacinas, se converteu numa regra geral de operao do sistema imune; o horror autotoxicus de Ehrlich: a reatividade imunolgica est dirigida s substncias estranhas ao corpo, mas evita reaes com elementos do prprio corpo; a idia de seleo , originada na Teoria da Seleo Natural de Darwin, segundo a qual o sistema imune se adapta continuamente ao ambiente.

3. 4.

Na Teoria Clonal de Burnet, o sistema imune, se afastava das preocupaes puramente bioqumicas e ganhava um contorno biolgico, embora ainda muito impreciso. Sob a influncia do neo-darwinismo, Burnet colocava o acaso (mutaes) na origem do sistema imune e o punha em relao com o ambiente sem sequer estabelecer relaes com o organismo a que pertence. uma viso em que o sistema imune como que "habita" o corpo e sobre o mesmo exerce vigilncia, sem realmente se integrar a ele. No existem na Teoria Clonal preocupaes em relacionar os clones linfocitrios uns com os outros, da mesma forma que, no neo-darwinismo, a preocupao preponderante relacionar "caractersticas adaptativas" do organismo com o meio, mais do que relacionar as diversas "caractersticas" do organismo entre si. Na Teoria Clonal, o sistema imune reconhece o desconhecido enquanto desconhece o prprio corpo. No existe exatamente a discriminao entre o que prprio e o que estranho porque o prprio, isto , o corpo jamais chega a ser conhecido em condies fisiolgicas, exceto durante a induo da tolerncia aos auto-componentes. Existe apenas o reforo de uma reatividade fragmentada contra detalhes igualmente fragmentados do ambiente. As explicaes imunolgicas continuaram, portanto, essencialmente bioqumicas e apenas metaforicamente biolgicas. A Imunologia no esconde suas origens. No surpreendente que a Teoria nascida desta trajetria contradiga fenmenos biolgicos cotidianos como a tolerncia adquirida por animais adultos a componentes de sua dieta ou o fato da me no rejeitar o prprio filho (um organismo "estranho"). Os fenmenos imunolgicos naturais envolvendo a mucosa gastrointestinal, desde o primeiro relato de Dakin em 1829, faziam parte deste lado obscuro da teoria: o de suas falhas conceituais. No surpreendente tambm que, em cerca de 30 anos de existncia, a Teoria Clonal haja recebido muitas crticas e objees e requerido reformulaes constantes. Isto gerou uma srie de paradoxos e contradies. Nesta abordagem inicial, citaremos apenas duas crticas importantes, que deram origem a muitos desenvolvimentos no previstos na Imunologia dos anos 60.

11
3.8 O controle gentico da atividade imunolgica Um dos problemas mais srios encontrados pelas verses mais simples da Teoria foi a descoberta de que algumas respostas imunes esto sob um controle gentico estrito. Por volta de 1970, vrios modelos experimentais mostraram que a reatividade imunolgica especfica a vrios tipos de antgenos, como polmeros sintticos de aminocidos, aloantgenos e pequenas doses de antgenos naturais (ovoalbumina, ovomucide, etc), geneticamente controlada. Nestes modelos, a reatividade (alta ou baixa) a um dado antgeno depende de um nico gene dominante, denominado gene Ir , para Immune response gene (Figura 3.9 ).

raa A MHC a/a bom respondedor bom respondedor

raa B MHC b/b

mau respondedor raa B MHC b/b 50% maus respondedores MHC b/b mau respondedor

F1(AxB) MHC a/b

50% bons respondedores MHC a/a

Figura 3.9: O controle gentico reatividade imunolgica. Diferentes raas da isognicas de animais demonstram "alta" ou "baixa" reatividade antgeno e, um dado a por cruzamentos adequados entre elas, pode-se demonstrar que gene nico um dominante controla a "alta" reatividade. Este gene denominado gene Ir . Na maioria dos casos, os genes Ir fazem parte do um complexo gnico importante na MHC, compatibilidade de transplantes. Por si s, a existncia destes genes contradiz a idia de que a competncia para executar respostas imunes seja gerada ao acaso, como ocorreria com as mutaes intratmicas propostas na Teoria Clonal. Alm disto, descobriu-se que a maioria dos genes Ir, que controlam as respostas imunes, estavam ligados a genes que controlam a compatibilidade de transplantes de tecidos alognicos. Em sua maioria, os genes Ir caracterizados nesta fase, fazem parte do MHC (Major Histocompatibility Complex), o complexo gnico que codifica os principais "antgenos" responsveis pela compatibilidade ou rejeio de transplantes. Porque a reatividade imunolgica especfica (reagir, por exemplo, ovoalbumina) estaria ligada a estes genes e no aos genes que codificam as cadeias dos anticorpos ou de receptores usados pelos linfcitos T transformou-se em um enigma que a Imunologia demorou 15 anos para resolver e s recentemente foi elucidado. Como veremos em captulos subseqentes, os genes do MHC esto envolvidos no "processamento" e "apresentao" de antgenos aos linfcitos T. 3.9 A restrio por compatibilidade Os genes do MHC mostraram estar envolvidos no apenas no controle da reatividade imunolgica a um espectro particular de antgenos, mas tambm nas relaes entre as clulas do sistema imune. Isto foi descoberto em experincias de reconstituio da competncia imunolgica de animais irradiados pela transfuso de linfcitos T e B, semelhantes s ilustradas na Figura 3.7 . Kindred e Shreffler mostraram que, para reconstituir a competncia imunolgica, os linfcitos T e B utilizados precisavam provir de doadores MHC-compatveis, isto , capazes de receber transplantes um do outro. Linfcitos T e B colhidos de doadores MHC-incompatveis no cooperavam entre si. Havia uma restrio imposta pela compatibilidade do MHC.

12
As interaes celulares envolvidas nas respostas imunes estavam sendo elucidadas. Sabia-se que macrfagos "processavam" de alguma maneira os antgenos que captavam e os "apresentavam" aos linfcitos T especficos que eram, ento, ativados. Isto podia ser demonstrado em vrios sistemas in vitro. Nestes sistemas, mostrou-se que os macrfagos e os linfcitos T, para cooperar, precisavam ser tambm MHC-compatveis. Anos mais tarde, chegamos a compreender que eram os produtos dos genes Ir que participavam destas interaes e determinavam ("restringiam") quais clulas poderiam cooperar (ver Captulo 8 , "Processamento e apresentao").

3.10 A necessidade de interaes celulares Outro problema enfrentado pela Teoria Clonal foi a constatao de que todos os fenmenos imunolgicos dependem de interaes celulares. A formao de anticorpos, por exemplo, depende de interaes entre linfcitos B e T (ver Tabela 3.2 ), macrfagos e outras clulas acessrias. Clones isolados se desenvolvendo independentemente uns dos outros no contribuiriam para compreender esta necessidade de interaes entre os linfcitos. Em sua verso original, a Teoria de Seleo Clonal apontava o timo como o rgo gerador dos mutantes responsveis pela diversificao da reatividade imunolgica. Como foi sendo constatado nos anos 60-70, os linfcitos gerados no timo, linfcitos T, no formam diretamente os anticorpos, apenas auxiliam (ou suprimem) sua formao. Por outro lado, as experincias de Gowans mostravam que a drenagem do conduto torcico de ratos causa uma forte queda na concentrao de linfcitos circulantes e, concomitantemente, uma profunda imunodeficincia, com queda inclusive da formao de anticorpos. O pequeno linfcito recirculante parecia ser a variedade linfocitria mais afetada pela drenagem. Na Austrlia, Miller demonstrou que a retirada do timo de camundongos logo aps o nascimento, causava imunodeficincia acompanhada de uma queda da taxa de pequenos linfcitos circulantes. Tudo apontava para os pequenos linfcitos T originrios do timo como o substrato da imunocompetncia. Finalmente, as experincias de Claman (Figura 3.7 ) mostravam que linfcitos T e B colaboravam da produo de anticorpos. Em 1970, Rajewsky, Jerne e colaboradores mostraram que uma molcula antignica precisa possuir no mnimo dois determinantes antignicos diferentes para ser imunognica. Anos antes, Benacerraf e Ovary haviam demonstrado que a especificidade da memria imunolgica induzida com conjugados hapteno-protena dependia da protena portadora e no do hapteno. Animais injetados dinitrofenil-ovoalbumina (DNP-Ova) davam uma resposta secundria (mais intensa) de anticorpos anti-DNP (e anti-Ova) se re-injetados com DNP-Ova. Quando, porm reinjetados com DNP-hemocianina (DNP-KLH), estes animais faziam uma segunda resposta primria (menos intensa) anti-DNP. Rajewsky e Jerne mostraram que, por exemplo, se um animal fosse injetado com DNP-Ova, depois, separadamente, com KLH nativa e s ento com DNP-KLH, ele faria uma resposta secundria anti-DNP, demonstrando possuir "memria" para uma molcula que estava sendo injetada pela primeira vez (Tabela 3.3 ). Tabela 3.3 Desencadeamento de respostas secundrias a conjugados hapteno-protena ___________________________________________________________ primria (intermediria) secundria resposta anti-DNP ___________________________________________________________ DNP-Ova DNP-Ova +++ DNP-Ova DNP-KLH + KLH DNP-KLH + DNP-Ova KLH DNP-KLH +++ ___________________________________________________________ A idia desenvolvida nesta poca foi que determinantes antignicos da protena, reconhecidos por linfcitos T e os determinantes haptnicos, reconhecidos por linfcitos B, mediavam a "cooperao" T-B que desencadeava a ativao dos linfcitos B e a produo de anticorpos (Figura 3.10 ). Como veremos mais adiante, esta era uma viso equivocada, mas ela tornava clara a importncia de interaes celulares para a ocorrncia de fenmenos imunolgicos.

13

linfcito B

antgeno linfcito T Ig TCR

Figura 3.10: Explicao sugerida para os resultados de experincias com os mostrados na Tabela 3.4. A cooperao entre linfcitos T e B se faria porque ambos se ligariam a determinantes diferentes da mesma molcula. Hoje sabemos que esta interpretao no correta. Os determinantes ligados pelos linfcitos T so, geralmente, criados pela digesto parcial da protena portadora ("processamento") no citoplasma de clulas "apresentadoras". (ver "Processamento e apresentao") 3.11 Jerne e os anti-anticorpos Em 1974, Niels Jerne adicionou um componente muito importante ao debate imunolgico, ao chamar a ateno para o fato de que os anticorpos so capazes de reagir uns com os outros (atravs de determinantes que ele chamou idiotpicos ) e, sugerir que esta conectividade interna era importante na operao do sistema imune. Atravs de reaes idiotipo-anti-idiotipo (isto , anticorpo-antianticorpo) todos os anticorpos do organismo poderiam estar unidos em uma rede muito complexa. Por isto, estas idias ficaram conhecidas como a Teoria da Rede Idiotpica . As regies variveis dos anticorpos (imunoglobulinas) contm, alm dos stios combinatrios (que Jerne chamou paratopos ) que se combinam aos determinantes antignicos (epitopos ), estruturas chamadas idiotopos (epitopos associados a paratopos) complementares a paratopos de outros anticorpos formados pelo mesmo organismo (Figura 3.11 ). Trs aspectos da Teoria da Rede a tornam muito diferente e, na verdade, incompatvel com a Teoria de Seleo Clonal. Primeiro, a Teoria da Rede permitiu, pela primeira vez na Imunologia, uma abordagem verdadeiramente sistmica . uma Teoria sobre o conjunto global de linfcitos em interao, sobre o sistema imune e no sobre clones linfocitrios isolados, como a Teoria de Seleo Clonal. O segundo aspecto, apesar de no enfatizado pelo prprio Jerne, parece evidente: a idia de uma rede idiotpica, isto , de uma conectividade interna entre os elementos do sistema imune incompatvel com a noo de discriminao self-nonself, incompatvel com o horror autotoxicus . A conectividade idiotpica uma forma fisiolgica de auto-reatividade , uma demonstrao de que nem sempre a reao de linfcitos e anticorpos com um auto-componente destrutiva. Neste aspecto, a Teoria da Rede acomoda mais confortavelmente descobertas paradoxais para a Teoria Clonal. Por exemplo, natural que, fisiologicamente, existam linfcitos naturalmente ativados que reagem com auto-componentes. O problema da auto-reatividade destrutiva precisa encontrar uma soluo na organizao do sistema imune e no, simplesmente, na proibio da existncia de clones auto-reativos. H um terceiro aspecto importante da proposta de Jerne amplamente confirmado desde 1974. Como ilustrado na Figura 3.12 , existem duas variedades de anticorpos anti-idiotpicos. Uma variedade, chamada 2 , "reconhece" o idiotipo; outra, chamada 2 , "reconhecida" pelo idiotipo. Estes anticorpos (anti-idiotipo 2) foram chamados por Jerne de imagens internas do antgeno (do epitopo). Na Teoria de Seleo Clonal, o sistema imune composto de clones desconexos entre si, cada qual respondendo independentemente a um epitopo. A presena de anticorpos capazes de reagir com um epitopo X atribuda simplesmente ao acaso, ou melhor, imensa diversidade de anticorpos disponveis a cada organismo. Jerne sugeria, embora de forma incompleta, que o sistema imune tem uma organizao mantida atravs da conexo de seus elementos, algo que resiste a mudanas. Na Teoria da Rede, a existncia de anticorpos anti-X no organismo no gratuita, no surge por acaso, mas sim uma indicao de que em algum outro anticorpo do mesmo organismo existe algo semelhante a X - uma "imagem interna" de X.

14
anti-anticorpo (anti-idiotipo) anticorpo (idiotipo) idiotopo paratopo epitopo

antgeno

Figura 3.11: A base da conectividade idiotpica segundo Jerne. Os no anticorpos apenas "reconhecem" epitopos materiais antignicos, como tambm so em "reconhecidos" por outros anticorpos do mesmo organismo atravs de seus idiotopos. Nestes aspectos, a Teoria da Rede polarmente oposta Teoria de Seleo Clonal. Na Teoria Clonal, o reconhecimento de antgenos feito por diferena (entre a estrutura do antgeno e a do organismo); na Teoria da Rede, o reconhecimento feito por semelhana . Na Teoria Clonal, o organismo reconhece o que nonself; na Teoria da Rede, o que "self-like", o que se "confunde" com o self.
inespecfico paralelo anti-anticorpo (anti-idiotipo) anticorpo (idiotipo) antgeno anti-anticorpo (anti-idiotipo) imagem interna Ac2 Ac2

Ac1

Figura 3.12: A rede idiotpica segundo Jerne (1974). Dois tipos de anti anticorpos idiotpicos, um dos quais (Ac2b) a imagem interna do antgeno por ter idiotopos semelhantes aos epitopos do antgeno. 3.12 Reconsiderando Metchnikoff Neste particular, a idia de uma rede idiotpica operando por assimilao indistintamente de materiais prprios e estranhos se assemelha abordagem de Metchnikoff, que insistia nas similaridades entre os processos imunolgicos e a captao de alimentos por clulas dos organismos mais diversos. O que Metchnikoff antevia era um plano geral de construo do organismo animal. O que a rede idiotpica nos sugere que existe uma organizao no sistema imune atravs de uma rede complexa de elementos relativamente simples, multiconectados e que, de alguma forma, a organizao do sistema imune se apoia nesta conectividade idiotpica. Pela viso tradicional da Histria da Imunologia, no existia nenhum conflito entre a "Teoria humoral", defendida pela escola alem, e a "Teoria celular da imunidade", defendida por Metchnikoff. A nosso ver, isto no faz justia ao pensamento original de Metchnikoff que descrevia a imunidade nos vertebrados superiores com base na embriologia comparada, vendo-a como uma adaptao de mecanismos de nutrio j existentes em animais mais primitivos. H uma diferena fundamental entre, por um lado, imaginar um sistema de defesa do organismo, que , de certa forma, separado dele como um exrcito pode ser separado do povo que defende e, por outro lado, imaginar que a defesa deriva da mesma rede de processos que continuamente (auto-) desmonta e (auto-)constri o organismo. Alm disto, a proposta de Metchnikoff implica em um plano de organizao

15
dos animais, generalizaes que englobam desde os seres unicelulares, multiplicidade das formas dos invertebrados, aos mamferos e s aves. Em algum sentido, o que defenderemos em captulos subseqentes tem semelhanas com o que propunha Metchnikoff. Fica aqui, portanto, um tributo ao primeiro imunobiologista.

32 4. Conceitos bsicos
______________________________ 4.1 Reconhecimento imunolgico especfico O conceito fundamental da Imunologia, que tentaremos gradualmente reformular, o reconhecimento especfico . Por um lado, esta uma noo clara e direta: indica que o sistema imune capaz de identificar e reagir a materiais estranhos ao corpo, e que esse reconhecimento se faz de uma forma especial, particular, para cada material estranho. Especificidade significa exclusividade. Quando uma reao imunolgica acontece fora das condies que a especificam, diz-se que houve uma reao cruzada , no sentido de uma linha cruzada no telefone, algo indevido. O sentido coloquial do termo reconhecer implica em aceitar algo como familiar, previamente conhecido. Mas, no "reconhecimento" ao qual os imunologistas se referem, o sistema imune reconhece o desconhecido . Ao mesmo tempo que responde a materiais estranhos, o sistema imune parece ignorar a presena dos prprios componentes do organismo e no reagir aos mesmos, evitando a auto-destruio imunolgica. Em Imunologia, portanto, "reconhecer" significa exatamente o oposto do significado coloquial do termo reconhecer. O termo especfico , no sentido de especial, particular, exclusivo tambm sugere algo que no devia. Ao contrrio do que o termo sugere, nas situaes naturais, impossvel encontrar-se um (nico) anticorpo especfico para um dado antgeno: existem sempre centenas, milhares de anticorpos diferentes , todos capazes de reagir, com graus variveis de afinidade, com o mesmo antgeno, mesmo que o antgeno testado seja muito simples. Todos estes anticorpos so "especficos". Reciprocamente, cada anticorpo, mesmo produzido ou purificado com a mais absoluta homogeneidade no laboratrio, capaz de reagir com uma multiplicidade de antgenos diferentes. Se, pelo termo especfico se entende algo particular, exclusivo, ento, especfico exatamente o que o reconhecimento imunolgico no . Existe sempre uma multiplicidade de elementos envolvidos em todos os fenmenos imunolgicos. Uma regra oculta na fisiologia do sistema imune que qualquer componente (celular ou molecular)"especfico" do sistema pode ser substitudo eficazmente por muitos outros e, usualmente, o . Consideraes deste tipo esto ausentes dos livros-texto de Imunologia porque elas confundem exatamente os conceitos que a Imunologia admite como no problemticos, e que servem de apoio para a definio de seus problemas. Na Imunologia tradicional, no se discute se o reconhecimento imunolgico especfico ou que qualidades caracterizam um material como "estranho". Todos j sabem que o reconhecimento especfico de materiais estranhos se d e trabalham para elucidar como ele se processa. Esta a base de certeza sobre a qual se erguem as dvidas que a Imunologia procura responder. Como vimos na discusso das "Origens das certezas", estas noes tm razes muito antigas.

4.2. A diversidade clonal Um primeiro fato espantoso na descrio do sistema imune a multiplicidade de seus componentes. Pela anlise da quantidade de DNA nuclear, pode-se calcular que um organismo complexo, como o humano, utilize cerca de 150 mil protenas diferentes em sua constituio, incluindo todas as enzimas, hormnios, protenas estruturais, etc. Em comparao, calcula-se que de 10 a 100 milhes de variedades de molculas de imunoglobulinas (Igs, anticorpos) e igual nmero de receptores de linfcitos T (TCRs) possam ser produzidos por um s indivduo. Haveriam, portanto, cerca de mil vezes mais variedades de anticorpos e TCRs que de todos os outros componentes do organismo juntos! Um segundo aspecto espantoso nesta descrio, previsto por Burnet em 1960 ao propor a Teoria de Seleo Clonal, que esta diversidade molecular corresponde uma diversidade celular equivalente. Para sintetizar um milho de variedades de imunoglobulinas, o organismo utiliza um milho de variedades de linfcitos. Diferentemente das demais clulas do corpo, em sua maturao, os linfcitos utilizam processos especiais de rearranjo e juno de segmentos gnicos que os tornam geneticamente (nucleicamente) diferentes uns dos outros.

33
regies V livres no plasma, linfa e sobre o muco no so secretados no existem livres

TCR como receptor clonal Ig como receptor clonal receptores em vrias clulas regies V

linfcitos B

linfcito T

Figura 4.1: Os receptores clonais de membrana nos linfcitos B so anticorpos (Igs, imunoglobulinas). linfcitos T, so TCRs, estruturalmente semelhantes s Nos Igs. Tanto Igs quanto TCRs possuem regies variveis . Cadalinfcito expressa exclusivamente uma variedade ou TCR como receptor, e difere do linfcito ao de Ig lado pela seqncia de aminocidos presente nas regies variveis. Uma regra da estrutura do sistema imune, portanto, : um linfcito, um receptor. A gerao dessa enorme diversidade de linfcitos a caracterstica mais importante dos processos imunolgicos e o que torna o sistema imune peculiar entre outros sistema biolgicos. Se tivssemos que examinar um organismo marciano, ou um invertebrado terrestre, procura de um sistema imune, deveramos procurar exatamente por clulas como linfcitos, individualmente diferentes, com seu genoma rearranjado, diferentemente de outras clulas do mesmo organismo. H dois tipos principais de linfcitos, denominados B (de Bone marrow) e T (de Thymus). (Figura 4.1 ) Cada linfcito B sintetiza uma variedade de Ig; cada linfcito T, uma variedade de receptor (TCR). Cada linfcito exibe na membrana cerca de 100 mil cpias do receptor particular que adquiriu a capacidade de sintetizar aps os rearranjos de seu genoma. Se ativado, o linfcito pode se multiplicar e se expandir em um clone, um conjunto de clulas idnticas. Caso contrrio, o linfcito, exibindo sua Ig ou seu TCR, permanece em repouso. Os linfcitos B que assim permanecem tm uma vida curta; a situao dos linfcitos T menos conhecida. A principal caracterstica estrutural do sistema imune , portanto, a multiplicidade de receptores distintos, produzidos em clones linfocitrios individualmente distintos. 4.3 Dois estados linfocitrios Uma segunda caracterstica importante de linfcitos que eles podem existir em dois estados:

repouso Linfcitos freqncia metabolismo ciclo mittico receptores de citocinas 80% baixo no raros

ativado

20% sim alto abundantes

Figura 4.2: Linfcitos podem existir em dois estados distintos: em repouso e ativados. A ativao depende de interaes com outrasincluindo outros clulas, linfcitos previamente ativados. - um estado de repouso , onde o tamanho da clula pequeno, a atividade metablica mnima e existem poucos receptores de membrana para citocinas (fatores de crescimento);

34
um estado ativado (linfoblastos ),no qual o linfcito aumenta de tamanho, incorpora nucleotdeos, exibe receptores de membrana para citocinas e pode, ele prprio, secretar citocinas que atuam sobre outras clulas. Os linfcitos emergem dos rgos primrios, onde so originalmente gerados - medula ssea (B) e timo (T) - no estado de repouso, como pequenos linfcitos. Uma parcela muito significativa destes linfcitos se desintegra em poucas horas, ou dias, sem chegar a ser ativados. Esta parcela pode atingir a 90% dos linfcitos B ; para os linfcitos T, a situao menos clara, mas acredita-se que de 30 a 50% dos linfcitos T emergentes sejam tambm clulas de vida breve e morram sem ser ativados. Para os linfcitos emergentes, a ativao significa a diferena entre a vida e a morte. Todos os eventos importantes na vida do linfcito, tais como a expresso de receptores para fatores de crescimento (citocinas), a secreo destes fatores, a mitose, a mudana do tipo de molcula secretada e a diferenciao em plasmcitos (nos linfcitos B) s ocorre a partir de linfcitos ativados. Esta ativao, como discutiremos a seguir, depende de interaes celulares. 4.4 A necessidade de "processamento" e "apresentao" O contato com materiais estranhos ao corpo, por si s, incapaz de promover a ativao de linfcitos . A ativao depende de interaes com outros linfcitos e/ou com clulas chamadas "acessrias" (Figura 4.3 ).

linfcito B apresentao & processamento antgenos & auto-componentes

linfcito T

clulas apresentadoras

Figura 4.3: Linfcitos B e T tm requisitos diferentes para As Igs nos ativao. linfcitos B so capazes de se ligar a molculas de em sua configurao protenas nativa. Os receptores (TCRs) nos linfcitos T requerem que estas protenas sejam antes reduzidas a peptdeos ("processadas") e conjugadas a produtos do MHC. H muitos anos sabe-se que linfcitos B e T "reconhecem" antgenos por processos diferentes. Os linfcitos B podem captar materiais por unio direta s molculas de imunoglobulinas (anticorpos) expressas, como receptores, em sua membrana. Mas os linfcitos B no so ativados quando isto ocorre. Esta uma ligao de alta afinidade, que no depende do metabolismo celular e pode se processar mesmo em linfcitos B resfriados a 4C, nos quais o metabolismo se reduz a nveis muito baixos. Em contraste, os linfcitos T so incapazes de ligar materiais como molculas de antgeno em sua forma nativa diretamente aos receptores clonais (TCR) que expressam na membrana. Para que esta ligao ocorra, o material precisa ser apresentado aos linfcitos T incorporado na membrana de outras clulas conhecidas como clulas apresentadoras . Quando esta ligao efetivamente ocorre, os linfcitos T so ativados. Entre as clulas que operam como apresentadoras para os linfcitos T responsveis pela ativao dos linfcitos B (conhecidos por linfcitos T auxiliares, ou Th), esto: - os macrfagos de vrios tecidos; - diversas variedades de clulas conhecidas como dendrticas ; - clulas da parede vascular (endoteliais) durante as reaes inflamatrias; - entercitos e - linfcitos B.

35
4.5 Ativadores policlonais Algumas substncias de origem microbiana ou vegetal so ativadores policlonais de linfcitos. Mas estas substncias no devem necessariamente seus efeitos ligao com as imunoglobulinas ou as molculas de TCR. Elas podem atuar em outros receptores da membrana capazes de ativar uma parcela significativa dos linfcitos em repouso. Exemplos de ativadores policlonais so a concanavalina A e os lipopolissacrides (LPS) de bactrias gram-negativas (respectivamente, ativas em linfcitos T e B).
LPS como antgeno

LPS receptor de LPS

antgeno

Ig

Ig

ativadora

no-ativadora

no-ativadora porm focalizadora

Figura 4.4: O contato do antgeno com imunoglobuinas receptoras (mIgM) na membrana do linfcito B ativa o linfcito. Ao contrrio, o contato com LPS no ativador. Os anticorpos podem, porm, focalizar molculas de LPS sobre seu receptor e, assim, facilitar a ativao do linfcitos especficos pelo LPS. Este contato se faz atravs de um receptor que expresso em muitos clones e, portanto, a ativao policlonal , no especfica. No entanto, molculas de LPS so antignicas e podem contactar o linfcito atravs das imunoglobulinas de membrana que, ento, podem "focalizar" as molculas de LPS sobre seu receptor. O resultado, que concentraes altas de LPS so ativadoras policlonais enquanto que concentraes mais baixas parecem ativar especificamente os linfcitos porque apenas as clulas que focalizam molculas de LPS so ativadas. Estas so, exatamente, as clulas que expressam anticorpos especficos. A ativao, porm, se faz atravs do receptor de LPS. 4.6 O MHC e a apresentao Muito se aprendeu nos ltimos anos sobre a ativao dos linfcitos T. Para sumarizar uma longa histria: descobriu-se que, para fazer a apresentao (Figura 4.3 ), as clulas apresentadoras precisavam estar metabolicamente ativas, isto , necessitavam processar de alguma forma o antgeno. Em segundo lugar, as clulas apresentadoras precisavam ser da variedade gentica j familiar aos linfcitos T em seu organismo de origem. Clulas apresentadoras colhidas em linhagens de animais apenas ligeiramente diferentes fracassam totalmente em apresentar o antgeno. As diferenas genticas cruciais entre as linhagens foram finalmente atribudas a um complexo gnico j bem conhecido, porque ser muito importante na compatibilidade de transplantes, chamado MHC (major histocompatibility complex). Como seu nome indica, o MHC um complexo gnico, um "pacote" de gens situados muito prximos em um cromossoma. Os gens que constituem o MHC comandam a sntese de diversos tipos de produtos. Para as interaes ativadoras dos linfcitos T auxiliares (CD4+), os produtos mais importantes do MHC so os chamados produtos de classe II . Os produtos de classe II do MHC so expressos apenas nas clulas apresentadoras, principalmente em linfcitos B e macrfagos. Pelo entendimento atual, os linfcitos denominados T auxiliares (CD4+) interagem com os produtos de classe II nas clulas apresentadoras e os linfcitos T ditos citotxicos/supressores (CD8+) interagem com produtos de classe I do MHC. Os produtos de classe I do MHC, ao contrrio dos de classe II, so expressos por todas as clulas do corpo, inclusive linfcitos e macrfagos.

36
peptdeos

2-microglobulina
membrana celular

classe II classe I produtos do MHC

Figura 4.5: Produtos de classe I expressos em todas as clulas do corpo e so permitem a interao com linfcitos T CD8+. Por sua vez, os produtos de classe II do MHC so expressos apenas em "clulas apresentadoras" e permitem a interao comlinfcitos T CD4+ (ou T-auxiliares). Os produtos de classe I possuem apenas uma cadeia (a) codificada gens do MHC e se expressam unidos por 2microglobulina, que codificada em outro cromossoma. Os produtos de classe II possuem duas cadeias ) codificadas por genes do MHC. Produtos de classe I e e( II so expressos em conjugao a peptdeos resultantes do processamento de materiais captados pela clula. Nos final dos anos 80, o envolvimento dos genes do MHC foi elucidado em seus principais aspectos moleculares. O "processamento" dos antgenos envolve uma digesto parcial feita em compartimentos intracelulares nas clulas apresentadoras. Em seguida, o material, agora transformado em peptdeos, retorna membrana da clula apresentadora conjugado a produtos de classe II do MHC . O que apresentado e reconhecido pelo linfcito T, portanto, um conjugado de peptdeos derivados do antgeno com produtos do MHC. No surpreende, ento, que os linfcitos T sejam incapazes de ligar molculas antignicas nativas, antes de seu processamento pelas clulas apresentadoras. Recapitulando, as caractersticas do sistema imune mencionadas at agora so: a multiplicidade de receptores celulares (Ig e TCR) expressos clonalmente nos linfcitos, a existncia de um estado de repouso e um estado ativado, a maioria dos linfcitos no ativados tem uma vida breve, a necessidade de processamento e apresentao para ativao dos linfcitos T, o envolvimento de produtos do MHC neste processo. 4.7 A resposta imune especfica De acordo com a Teoria de Seleo Clonal, que domina o pensamento tradicional em Imunologia, a atividade imunolgica consiste, em essncia, na expanso, por mitose, de clones linfocitrios ativados pelo antgeno especfico ( Figura 4.6 ).

antgeno

antgeno

clula de memria

Figura 4.6 : O esquema tradicional de ativao de linfcitos pelo antgeno resultando no aparecimento de clulas formadoras de anticorpos e de "clulas de memria".

37
Durante esta expanso, a maioria dos clones de linfcitos B se diferenciaria em clulas especializadas para a secreo de imunoglobulinas, denominadas plasmcitos. Alguns linfcitos B ativados (linfoblastos), retornariam a um estado de repouso e ficariam dotados de uma vida mais longa, constituindo assim "clulas B de memria". Entre os linfcitos T, tambm se formariam "clulas T de memria". (Figura 4.6 ). Face a um contato subseqente com o mesmo antgeno, as "clulas B e T de memria" interagiriam e promoveriam respostas mais intensas, mais rpidas e duradouras (Figura 4.7 ). A base do funcionamento das vacinas, por exemplo, seria o estabelecimento de clulas de memria, possibilitando respostas imunes de tipo secundrio, ou anamnstico, como se o sistema imune "recordasse" experincias anteriores. 4.8 A tolerncia imunolgica A Teoria de Seleo Clonal d nfase ao fato de que, normalmente, o sistema imune no faz respostas imunes especficas contra componentes do prprio organismo. O sistema seria imunologicamente "tolerante" a estes materiais. Se estas respostas (auto-imunes) ocorressem, surgiriam doenas autoimunes ou de auto-agresso. Exemplos de doenas de auto-agresso so o lupus eritematoso disseminado, a miastenia gravis, a doena de Graves, leses digestivas, dermatolgicas e oculares graves, entre muitas outras.

concentrao de anticorpos no soro resposta primria 0 2 4 6

resposta secundria

10 12 tempo (semanas)

antgeno

antgeno

Figura 4.7: Respostas imunes primria e secundria como observadas pela subida da concentrao (ttulo) de anticorpos especficos no soro. As respostas secundrias so mais rpidas, mais intensas e mais duradouras. Tais diferenas constituem a racional das vacinaes na profilaxia de doenas infecciosas. Em suas verses iniciais, a Teoria de Seleo Clonal proibia a existncia de clones de linfcitos auto-reativos. Com o decorrer dos anos, porm, tornou-se evidente que estes clones podem existir em organismos sadios. As verses mais modernas da Teoria, portanto, admitem que estes clones existem, mas que sua ativao inibida. O mecanismo dessa inibio ainda objeto de calorosas discusses. Experincias mais recentes sobre a tolerncia imunolgica aos componentes do prprio organismo contradizem a idia de que esta tolerncia dependa da inibio (ou destruio) de clones auto-reativos. Organismos normais, sadios, so capazes de produzir auto-anticorpos, isto , anticorpos que reagem com seus prprios componentes. Isto no ocorre de maneira episdica, acidental. Cerca de um quinto dos linfcitos de um organismo normal, no imunizado artificialmente e aparentemente no sofrendo de doenas infecciosas, esto ativados ("naturalmente" ativados). Como estes linfcitos (linfoblastos) se distinguem dos linfcitos "em repouso" pelo tamanho, eles podem ser separados por gradientes de centrifugao. Quando se pesquisa a que populao pertencem os linfcitos que formam os auto-anticorpos se descobre que eles so muito mais freqentes entre os linfcitos naturalmente ativados que entre os linfcitos em repouso.

38
antgeno etc antgeno clones permanecem ativados antgeno

expanso clonal

inibio da expanso clonal

deleo clonal

Figura 4.8: Efeitos antagnicos do antgeno os clones linfocitrios de sobre acordo com a Teoria de Seleo Clonal, conforme as condies de apresentao (ainda parcialmente no esclarecidas), poderia tanto a expanso clonal, ocorrer dando origem s respostas imunes e memria imunolgica, ou, o seu inverso, a tolerncia imunolgica, com a supresso ou destruio dos clones especficos. Atualmente, reconhece-se uma terceira possibilidade, ilustrada no painel central, na qual o contato com o antgeno ativa clones linfocitrios, expande. Isto os mas no o que parece ocorre na reao a auto-componentes (ver Figura 4.9) Assim, a explicao da tolerncia aos auto-componentes requer um mecanismo que inclua a existncia de linfcitos auto-reativos naturalmente ativados. Em condies naturais, os linfcitos autoreativos esto ativados, so linfoblastos. No entanto, eles no esto se multiplicando como ocorre nas respostas imunes a materiais estranhos. Existem, portanto, srias dificuldades para manter a base atual de certeza da Imunologia. As respostas imunes no dependem, necessariamente, de uma grande expanso de uns poucos clones linfocitrios antgeno-especficos, e a tolerncia a auto-componentes (ou a aloenxertos) no depende da ausncia de clones especficos ativados. Precisamos de uma outra base de certeza. Qualquer que seja a abordagem usada para descrever os fenmenos imunolgicos, indispensvel conhecer os componentes essenciais do sistema imune: os receptores clonais (Igs e TCRs), os produtos do MHC e os processos de ativao linfocitria. Estes sero os assuntos dos captulos seguintes.

Freqncia de precursores de auto-anticorpos +++ mdios e grandes (ativados)

pequenos (em repouso)

Figura 4.9: Auto-anticorpos naturais. Cerca de 20% dos linfcitos encontrados em organismos normais esto "naturalmente ativados", so linfoblastos. A grande maioria dos linfcitos auto-reativos est includa nestas clulas, mostrando que h uma auto-reatividade fisiolgica. Em animais recm nascidos, a porcentagem de linfcitos ativados auto-reativos ainda mais alta.

5. Imunoglobulinas
________________________ 5.1 Muitos tipos de imunoglobulinas A Imunologia adquiriu sua face atual atravs de modificaes iniciadas na dcada de 60. Na dcada de 80, o progresso da gentica molecular e a inveno de mtodos para produzir anticorpos homogneos (monoclonais) permitiram a soluo de alguns de seus enigmas mais importantes, como a estrutura das Igs e TCRs e a elucidao dos mecanismos genticos especiais responsveis por sua produo. As tentativas iniciais de caracterizar fisico-quimicamente os anticorpos revelaram que eles eram substncias muito heterogneas. Na eletroforese, embora a maioria dos anticorpos apresentem uma mobilidade de gama-globulinas, outros migram como beta- ou, mesmo, alfa-globulinas. No fracionamento por ultra-centrifugao, a maioria dos anticorpos aparece como molculas de 7S mas alguns medem 10S ou 19S. Os anticorpos so, portanto, heterogneos em carga eltrica e tamanho molecular. Paralelamente, eles revelam tambm uma grande heterogeneidade em suas propriedades biolgicas: alguns anticorpos so capazes de atravessar a placenta, outros no; alguns ativam enzimas do plasma (o sistema complemento) levando lise (desintegrao) de clulas, outros no; alguns induzem reaes de hipersensibilidade (alrgicas), outros no. Durante alguns anos, a nomenclatura imunolgica tornou-se catica. Para sanar estas dificuldades, um comit da Organizao Mundial de Sade resolveu denominar por imunoglobulinas (abreviado Ig , plural Igs) todas as globulinas presentes no plasma e/ou nas secrees que demonstrassem atividade de anticorpos. Inicialmente as trs classes, ou isotipos , mais abundantes de imunoglobulinas no plasma foram caracterizados: IgG - correspondendo s "gamaglobulinas"; IgA - correspondendo 2A da eletroforese; IgM- correspondendo 2M da eletroforese. Anos mais tarde, dois isotipos adicionais, menos abundantes, foram caracterizados: IgE - o isotipo responsvel pelas reaes alrgicas; IgD - um dos isotipos presentes como receptores na membrana de linfcitos B. Os isotipos de imunoglobulinas (IgG, IgA, IgM, IgD e IgE) foram caracterizados, portanto, por critrios imunoqumicos , por reagirem com antisoros isotipo-especficos preparados em outras espcies animais. Por exemplo, possvel preparar em coelhos, cavalos ou cabras anticorpos isotipoespecficos para as imunoglobulinas humanas ou de camundongo: coelho anti-IgG humana ou cabra anti-IgM de camundongo. Um anticorpo anti-IgG, purificado adequadamente, no reagir com molculas de IgM. Mais modernamente, o uso de anticorpos monoclonais (ver seo final) revolucionou esta metodologia. 5.2 A molcula de IgG A IgG o isotipo mais abundante no plasma e a maioria de nossos conhecimentos sobre a estrutura dos anticorpos baseou-se na anlise da estrutura da IgG de coelhos e da IgG humana. A estratgia bioqumica seguida para analisar a estrutura de molculas de protenas, antes do desenvolvimento dos mtodos modernos de sequenciamento, consistia em cindir a molcula em elementos menores, quer por reduo de pontes S-S, quer pela ao controlada de enzimas proteolticas como a papana ou a pepsina. O tratamento de molculas de IgG com agentes redutores mostrou que a molcula, com cerca de 150 kd, se cindia em dois tipos de cadeias: um com cerca de 50 kd, denominado Heavy (H, pesada ), outro com cerca de 25 kd , denominado Light (L, leve ). Sugeria-se, ento, que a molcula era formada de duas cadeias H e duas L (desde que: 2 x 50 + 2 x 25 = 150) (Figura 5.1 ). A digesto controlada com papana, uma enzima do mamo, produziu dois tipos de fragmentos, ambos com cerca de 50 kd, mas com diferenas marcantes: um tipo de fragmento que, no coelho,

2
formava cristais e foi chamado de "fragmento cristalizvel" ou Fc e um segundo tipo de fragmento, duas vezes mais abundante que o Fc, que era incapaz de cristalizar. Diferentemente do Fc, este segundo tipo de fragmento era capaz de se ligar ao antgeno especfico contra o qual os anticorpos haviam sido produzidos. Ao contrrio dos anticorpos nativos, estes fragmentos eram incapazes de formar precipitados com o antgeno. Eles se ligavam, porm, ao antgeno, pois impediam sua subseqente precipitao pelo anticorpo nativo. Isto sugeria que eles haviam retido apenas uma das duas vaIncias presentes na molcula do anticorpo nativo. Este segundo tipo de fragmento foi, portanto, denominado de fragmento "antigen-binding" (capaz de ligar-se ao antgeno) ou Fab (Figura 5.1 ).

Fc Fab Fab pontes S-S

papana

reduo

pepsina

Figura 5.1: Ao da reduo, da papana e da pepsina sobre a IgG. Sob a ao da pepsina, a molcula de IgG reduzia seu peso molecular de 150 kd para cerca de 100 kd, retinha a capacidade de precipitar o antgeno (mantendo, portanto, suas duas valncias), mas perdia algumas de suas propriedades importantes como, por exemplo, no conseguia mais ativar o sistema complemento para a lise celular nem atravessar a placenta ou produzir reaes de hipersensibilidade. Era como se a poro da molcula responsvel por estas propriedades biolgicas houvesse desaparecido. Este fragmento, de cerca de 100 kd, destitudo das propriedades biolgicas tpicas da molcula inteira, foi denominado de F(ab')2: era como se ele fosse formado de dois fragmentos semelhantes aos Fab, ainda unidos um ao outro (Figura 5.1 ). Restava determinar as relaes entre as cadeias (H e L) e os fragmentos (Fc e Fab) obtidos das molculas de IgG. Isto foi conseguido preparando-se, em cabras, anticorpos contra as cadeias pesadas (anti-H) e contra as cadeias leves (anti-L) e testando os mesmos contra os fragmentos Fc e Fab. Como mostrado na Tabela 5.1 , o soro de cabra anti-cadeia pesada (anti-H) reagia tanto com o Fab como com o Fc, enquanto que o soro anti-cadeia leve (anti-L) no reagia com o Fc. Tabela 5.1 Relaes entre cadeias e fragmentos da IgG ______________________________________ Reao com Antisoros IgG Fab Fc ______________________________________ anti-H + + + anti-L + + _______________________________________ Com base nestas informaes, Rodney Porter props um modelo para a estrutura da IgG que, em linhas gerais, o modelo aceito at hoje, como mostrado na Figura 5.2.

3
stio combinatrio stio combinatrio cadeia leve pontes S-S cadeias pesadas

Figura 5.2: O modelo de Porter para a molcula de IgG.apontam os stios As mos combinatrios com o antgeno, dois por molcula. Anos mais tarde, Valentine usando o microscpio eletrnico, observou imunocomplexos formados por anticorpos anti-dinitrofenil (anti-DNP) e bis-DNP-octametanico. As formas dos imunocomplexos sugeriam figuras geomtricas simples (tringulos, quadrados, pentgonos, etc) com pequenas ramificaes nos vrtices (Figura 5.3 , esquerda). Valentine props que as formas resultavam da formao de imunocomplexos contendo molculas de anticorpo em forma de "Y" unidas por molculas (invisveis ao microscpio) de bis-DNP-octametanico. Para testar sua hiptese, ele digeriu os anticorpos com pepsina, para remover a poro Fc da molcula, e repetiu a experincia: as formas observadas corresponderam sua expectativa, os prolongamentos nos vrtices desapareceram (Figura 5.3 , direita). Ficava estabelecida, assim, uma forma em "Y" para a molcula (monomrica) dos anticorpos. Aprendeu-se mais tarde que as molculas de IgM encontradas no soro so pentmeros e as molculas de IgA presentes nas secrees so dmeros desta estrutura bsica.

bis DNP-octametanico

Figura 5.3: Anticorpos anti-DNP purificados combinados a um hapteno bivalente (bis-DNP-octametanoico) formam complexos sugerindo figuras geomtricas simples com prolongamentos nos vrtices (esquerda) que desaparecem pelo tratamento com pepsina (direita).

5.3 Os isotipos das cadeias leves Outros achados importantes da mesma poca foram feitos com as protenas de Bence-Jones, protenas patolgicas que aparecem na urina de alguns pacientes com mieloma mltiplo. O mieloma mltiplo um plasmocitoma, um tumor maligno de plasmcitos (as clulas que secretam as imunoglobulinas encontradas no plasma, na linfa e nas secrees). Estes pacientes geralmente exibem no plasma grandes concentraes de uma imunoglobulina homognea, que o produto dos plasmcitos neoplsicos e, algumas vezes, protenas com uma caracterstica peculiar na urina: floculam ao aquecimento, como ocorre com a albumina mas, diferentemente desta, dissolvem-se medida que o aquecimento prossegue. Desde cedo descobriu-se que as protenas de Bence-Jones (BJ) eram relacionadas s imunoglobulinas. Anticorpos preparados, em coelhos, contra estas protenas reagiam com imunoglobulinas de pessoas normais. Curiosamente, porm, testados contra outras protenas BJ (de outros pacientes) reagiam ora fortemente, ora no reagiam de todo. Havia dois tipos de soros: protenas BJ que reagiam com um tipo de soro, no reagiam com o outro. Ambos os soros, porm, reagiam com imunoglobulinas normais.

4
A soluo deste enigma que as protenas BJ so dmeros de cadeias leves das imunoglobulinas secretadas pelos plasmcitos neoplsicos e h dois tipos de cadeias leves nas imunoglobulinas normais, que hoje chamamos pelas iniciais dos pesquisadores que caracterizaram estas cadeias: kappa ( ) e lambda ( ). Todos os seres humanos normais produzem imunoglobulinas contendo cadeias kappa e imunoglobulinas contendo cadeias lambda; em uma mesma molcula as cadeias so ambas kappa ou ambas lambda. Os plasmcitos que sofrem a transformao maligna, portanto, secretam imunoglobulinas que contm cadeias kappa ou lambda. Anticorpos preparados contra estas protenas reagem com imunoglobulinas normais e tambm com outras protenas BJ que contiverem o mesmo tipo de cadeias leve, mas no reagiro com as que contiverem cadeias leves do outro tipo. As estruturas primrias das cadeias kappa e lambda so bastante diferentes. As analogias entre cadeias kappa humanas e cadeias kappa de camundongo so maiores que as analogias entre cadeias kappa e cadeias lambda humanas. 5.4 Os isotipos de cadeias pesadas Um segundo desenvolvimento importante foi a caracterizao de mais dois isotipos de imunoglobulinas: a IgE e a IgD. Estas imunoglobulinas existem em concentraes bem baixas no soro, o que dificultou a sua caracterizao inicial. Suspeitava-se da existncia da IgE, pois o anticorpo responsvel pelas reaes anafilticas em algumas espcies animais e pela sensibilidade alrgica humana tinha propriedades diferentes das imunoglobulinas conhecidas: IgG, IgA e IgM. Anos depois, a IgE e a IgD foram caracterizadas pela identificao de imunoglobulinas de mielomas que eram de isotipos desconhecidos. Aps a identificao destas imunoglobulinas com antisoros isotipo-especficos, comprovou-se a participao da IgE nas reaes de hipersensibilidade. A IgD, por sua vez, foi identificada como uma imunoglobulina presente, principalmente, na membrana de linfcitos B recm emergidos da medula ssea. Alm da caracterizao dos isotipos principais comprovou-se, em vrias espcies animais, a existncia de subclasses (variaes nos isotipos). A IgG humana, por exemplo, existe em 4 subclasses denominadas IgG1 a IgG4. A IgA, por sua vez, existe em duas subclasses, chamadas IgA1 e IgA2. Diferenas nas propriedades das diversas subclasses foram tambm identificadas. Nas IgGs humanas, apenas a IgG2 no atravessa a placenta para atingir a circulao fetal e apenas a IgG3 no reage com a protena A do estafilococo; a IgA1 a subclasse de IgA presente no soro, enquanto que a IgA2 a IgA predominante nas secrees e assim por diante. 5.5 Alotipos Os diversos isotipos (e subclasses) de imunoglobulinas so expressos em todos os indivduos da espcie, exceto quando h defeitos congnitos. Por exemplo, todos os seres humanos normais formam IgG3 e IgA2. Existem, porm, pequenas variaes que, muitas vezes, consistem da troca de apenas um, ou poucos aminocidos nas cadeias de um dado isotipo. Estas variaes, presentes apenas em alguns indivduos da espcie, constituem variaes anlogas aos grupos sanguneos, que dependem de pequenas variaes nas membranas de hemcias. Imunoglobulinas de um dado isotipo colhidas de um indivduo e injetadas em outro indivduo da mesma espcie podem induzir a formao de anticorpos dirigidos contra estas pequenas variaes na estrutura das imunoglobulinas. Estes anticorpos so denominados anti-alotpicos (allos = outro, diferente). Os alotipos de imunoglobulinas existem tanto nas cadeias leves quanto nas cadeias pesadas. Na espcie humana, por exemplo, existe um alotipo de cadeias leve kappa, denominado Km (antes Inv) que consiste em variaes no aminocido presente na posio 191 da cadeia kappa (que tem 214 aminocidos). Indivduos que sejam homozigticos para o alotipo Km-1, se injetados com imunoglobulinas contendo cadeias kappa com o alotipo Km-3, por exemplo, formaro anticorpos (anti-alotpicos) anti-Km-3 . Nas cadeias pesadas de molculas de IgG, existem outros alotipos, denominados grupos Gm (G-marker). As molculas de IgA, por sua vez, expressam alotipos Am (A-marker).

5.6 Idiotipos Isotipos so variedades de imunoglobulinas presentes em todos os membros da espcie animal. Por exemplo, todos os seres humanos possuem IgG no soro e IgA no muco intestinal. Alotipos, por sua vez, so

5
variedades allicas de imunoglobulinas que esto presentes em apenas alguns membros da espcie. Idiotipos so variaes pertinentes individualidade da molcula de imunoglobulina (idios = individual, especial, particular). Os determinantes idiotpicos esto situados nas regies variveis da molcula, onde se processa a ligao de molculas antignicas (Figura 5.5 ). Os isotipos dependem de estruturas presentes nas regies constantes das cadeias leves ou ( kappa ou lambda) e das cadeias pesadas , , , ou (mu, delta, gama, epsilon ou alfa, que ocorrem na IgM, IgD, IgG, IgE ou IgA). Os alotipos dependem de pequenas variaes tanto nas pores constantes, como nas variveis, de cadeias leves e pesadas. Os idiotipos, por sua vez, dependem de variaes nas regies V (variveis) da molcula, associadas ao local de combinao com os antgenos. Podem estar associados s cadeias pesadas ou leves e freqentemente dependem de ambas as cadeias e desaparecem se as mesmas forem separadas.

isotipos alotipos idiotipos

Figura 5.4 : Localizao de variaes isotpicas, alotpicas molcula de imunoglobulina.

idiotpicas

na

Assim como podemos identificar imunoquimicamente os isotipos, por meio de anticorpos especficos (por ex., anti-IgG) e podemos identificar os alotipos por anticorpos anti-alotpicos (por ex., anti-Km-1), identificamos os idiotipos com anticorpos anti-idiotpicos (por ex., anti-Tl5). A denominao T15 foi dada a um idiotipo comum em anticorpos anti-fosforilcolina formado por camundongos da cepa Balb/c. O problema especial com os idiotipos, que ainda discutiremos amplamente, que existem anticorpos que chamamos auto-anti-idiotpicos , isto , anticorpos que reagem com idiotipos produzidos anteriormente pelo prprio organismo. So anti-anticorpos. Como estes anti-anticorpos so tambm anticorpos, formam-se anti-anti-anticorpos e assim sucessivamente. Este tipo de problema foi suscitado pela primeira vez por Niels Jerne, em 1974, enunciando o que viria a se conhecer como a "Teoria da Rede Idiotpica", na qual as conexes idiotipo-anti-idiotipo constituem a base da organizao do sistema imune. 5.7 A troca de isotipos Todas as imunoglobulinas existem em duas formas distintas: uma ancorada membrana de linfcitos B em repouso, outra secretada por linfoblastos e, principalmente, plasmcitos resultantes da ativao linfocitria. A diferena entre as formas de ancoragem e as formas secretadas consiste na existncia, ou no, de um segmento hidrofbico com cerca de 50 aminocidos prximo ao extremo carboxiterminal das cadeias pesadas. O segmento mantido, ou no, nas cadeias pesadas pela edio diferencial do RNAmensageiro ou pelo trmino da transcrio em pontos diferentes da fita de DNA (no caso da IgA). As formas secretadas, que no possuem este segmento, escapam livres para dentro do retculo endoplsmico e, por suas vesculas, so transportadas para a membrana, de onde escapam para o meio extracelular. As formas de ancoragem permanecem ancoradas s membranas desde sua emergncia no retculo endoplsmico (Figura 5.5 ). curioso notar que, desde sua emergncia no retculo endoplsmico at seu afloramento na membrana plasmtica, as molculas de imunoglobulinas no fazem contato com o citoplasma.

6
Ncleo Retculo endoplsmico Golgi membrana plasmtica

DNA RNA mRNA DNA RNA mRNA

Figura 5.5: As diferenas entre as formas de membrana e as formas secretadas de imunoglobulinas dependem da presena ou ausncia respectivamente de um pequeno segmento hidrofbico que "ancora", ou no, aspesadas na cadeias membrana do retculo endoplsmico e na membrana plasmtica (ver Figura 5.6). Ao emergirem na linfopoiese medular, os linfcitos expressam IgM na membrana e, logo aps, uma mistura de IgM e IgD. Ao serem ativados, sofrem a troca de isotipos e passam a secretar IgM (pentamrica) ou uma das subclasses de IgG, ou IgE, ou IgA. Qual isotipo de imunoglobulina produzido parece depender da variedade de citocinas s quais o linfcito B exposto durante a ativao. A interleucina-4 (IL-4), por exemplo, parece essencial para a produo do isotipo IgE. Uma pequena parcela dos linfcitos B ativados pode regredir a uma forma de repouso, de vida mais longa (cerca de 20 dias). Durante este perodo, os linfcitos expressam na membrana as formas de ancoragem de subclasses de IgG ou molculas de IgE ou IgA.

IgM secretada (pentamrica) IgG secretada mantidas as regies variveis mudam as cadeia pesada

IgM de membrana segmento hidrofbico

cadeia J

Figura 5.6: Diferenas entre as formas de membrana e as formas secretadas de Imunoglobulinas. Na trocaisotipos, ocorre uma mudana no gene da cadeia de pesada. Com esta mudana, a clula uma forma de imunoglobulina "ancorada" troca membrana por uma forma secretada. Pode ocorrer simultaneamente uma mudana do isotipo da Ig: a clula passa a secretar uma subclasse de IgG (IgE ou IgA) em vez da forma secretada (pentamrica) de IgM. Na IgM a forma um pentmero secretada da unidade bsica, enquanto que a forma de ancoragem um monmero.

7
5.8 Importncia da IgA Nos ltimos 20 anos, muitas informaes foram obtidas sobre as propriedades biolgicas dos anticorpos. Mas bastante provvel que nossas idias nesta rea venham a se modificar significativamente no futuro imediato. Descobriu-se, muito recentemente, que a lamina propria do tubo intestinal, principalmente no duodeno e no jejuno proximal, contm uma imensa quantidade de clulas produtoras de anticorpos (plasmcitos), das quais a grande maioria secreta imunoglobulinas de isotipo IgA para a luz do intestino. Estas clulas podem ser muito mais numerosas que o total de clulas secretando imunoglobulinas de outros isotipos em todos os rgos do sistema imune! Esta constatao pode nos obrigar a uma reviso de conceitos sobre a importncia relativa dos diversos isotipos, dentro em breve. A IgA secretria (ou sIgA) um dmero (contm 2 molculas de IgA) unidas por uma cadeia especial, denominada J e, alm disso, contm uma outra protena, denominada "pea de secreo". Ao contrrio da cadeia J, que produzida pelo mesmo plasmcito que secreta a IgA, a "pea de secreo" um produto da clula epitelial que a molcula de IgA deve atravessar para atingir o muco que reveste a mucosa. Ao ser sintetizada pela clula epitelial, a molcula da qual se origina a "pea de secreo" exposta na face voltada para a lamina propria, onde ela capta uma molcula (dimrica) de IgA secretada por um plasmcito da vizinhana. Este complexo macromolecular endocitado e transportado para a face apical da clula, onde ele cindido, liberando para o muco a molcula de sIgA, no qual o receptor da clula epitelial est agora transformado em "pea de secreo". (Figura 5.7 )
cadeia J (no plasmcito) (no entercito) (no muco)

IgA dimrica IgA

receptor poli-Ig luz intestinal face basal face mucosa pea de secreo transporte desde a face basal at a face mucosa do entercito

IgA dimrica

corte enzimtico

(muco)

Figura 5.7: A montagem molcula de IgA secretria tem trs etapas. Nos da plasmcitos associados s mucosas, ocorre a montagem de um dmero de IgA com uma cadeia J. Na segunda etapa, o dmero secretado e reage com um receptor (poli-imunoglobulina) na membrana declula epitelial. O conjunto uma interiorizado e o receptor clivado enzimaticamente. queporo A permanece ligada IgA recebe o nome de "pea de secreo". Este ltimo conjunto transportado atravs do citoplasma e secretado apical da clula epitelial na face onde passa ao muco que reveste a superfcie da mucosa. provvel que as molculas de sIgA, por seu contedo em carbohidratos, flutue na interface entre o muco e a luz intestinal. A formao de um filme molecular de sIgA nesta posio seria um revestimento muito eficiente da superfcie da mucosa que a simples deposio destas molculas na luz intestinal.

8
luz intestinal muco entercito linfcito intra-epitelial clula M

Figura 5.8: H muitos linfcitos no epitlio intestinal; em sua maioria, linfcitos T. Freqentemente estes linfcitos esto recobertos por clulas especiais (clulas M) que so muito ativas na pinocitose de da luz intestinal. Na materiais lamina propria do intestino, abaixo do epitlio, existem muitos linfcitos T e logo B alm de macrfagos e plasmcitos secretando IgA.

O interesse na "imunologia das mucosas" vem crescendo nos ltimos anos, mas sempre como um captulo a parte, distinto das manifestaes "sistmicas" da atividade imunolgica. Em nosso ponto de vista, esta uma atitude inadequada, mas uma atitude que tem slidas razes histricas. A separao das mucosas do restante do sistema imune torna-se ainda mais estranha quando se considera que a IgA, e no a IgG, o isotipo mais abundante de imunoglobulinas (Figura 5.9 ).
plasma & linfa IgG IgA IgM secrees

Figura 5.9: No plasma e na linfa, a IgG o isotipo mais abundante mas, nas mucosas, predomina a IgA em sua forma secretria. Segundo o raciocnio tradicional em imunologia, voltado para a defesa do corpo, o maior nmero de clulas secretoras de IgA deveria estar concentrado nas zonas de maior risco. No intestino, esta regio de maior risco deveria corresponder ao intestino grosso, onde se concentra a grande maioria da flora intestinal. No entanto, no intestino delgado, na verdade, no duodeno e no jejuno proximal, que estas clulas aparecem em maior nmero (Figura 5.10 ). Esta a regio onde so absorvidos peptdeos e outros produtos da digesto de protenas. A preservao da identidade imunolgica est, possivelmente, mais relacionada a estes peptdeos que defesa anti-microbiana.

9
100 100

% do total de clulas secretoras de Igs

% da flora bacteriana

duodeno distal proximal jejuno

leo

ceco & colon

Figura 5.10: Distribuio de clulas secretoras de imunoglobulinas e da flora bacteriana ao longo do intestino. 5.9 Imunoglobulinas monoclonais A inveno da tcnica de produo de imunoglobulinas monoclonais por Kohler e Milstein, em 1975, revolucionou a Imunologia. Em reconhecimento a isto, eles foram contemplados com o prmio Nobel de Medicina em 1984, juntamente com Niels Jerne que, alm de suas importantes contribuies tericas, foi tambm o criador da tcnica de plaqueamento para a enumerao de clulas secretoras de anticorpos (PFCs). Um dos grandes obstculos elucidao da natureza e da estrutura dos anticorpos foi a enorme heterogeneidade dos anticorpos naturais. Mesmo os anticorpos formados contra um nico determinante antignico (epitopo) so muito heterogneos. Todos so "especficos", em maior ou menor grau, para o determinante, mas tm estruturas qumicas diferentes e se ligam ao mesmo com diferentes graus de afinidade. Ao se combinarem ao antgeno, todas estas molculas esto fazendo a mesma coisa, mas este o nico evento que as une: cada uma teria muitas possibilidades de combinao com outros materiais e, provavelmente, reagiria com muitos componentes do organismo que a produziu. O termo especificidade , portanto, diz respeito s regras de observao imunolgica, no s regras naturais de operao do sistema imune. A especificidade reside na mente e no treinamento do imunologista, nos procedimentos que ele executa, no nos anticorpos (ou linfcitos) que ele utiliza como reagentes, como "ferramentas de observao". Por exemplo, anticorpos funcionam como reagentes muito especficos na tipagem de hemcias para o grupo ABO, necessria s transfuses de sangue. Mas estes anticorpos, usados como reagentes especficos, no foram induzidos pela injeo de hemcias, eles so anticorpos "naturais" para a formao dos quais colaboram muitos antgenos de alimentos, da flora bacteriana alm da prpria dinmica do sistema imune. Eles no foram induzidos especificamente, mas servem como reagentes especficos. Esta elevada especificidade dos mtodos imunolgicos pode nos levar, indevidamente, a supor que a operao do sistema imune est baseada em reaes igualmente especficas. Estas suposies errneas so reforadas pela imagem equivocada que a imprensa leiga dissemina sobre a natureza dos processos imunolgicos. O sistema imune, porm, assim como o sistema nervoso, opera com um enorme grau de redundncia, usando mtiplos elementos que so equivalentes no desempenho das mesmas funes. Grande parte dos anticorpos naturais, por exemplo, so multiespecficos, capazes de reagir com muitos antgenos diferentes. No saberamos nada disso sem a tcnica de produzir imunoglobulinas monoclonais. Uma tcnica que permite a obteno de anticorpos homogneos, uma coleo de molculas absolutamente idnticas, produzidas por um nico clone de plasmcitos imortalizados por fuso com uma clula neoplsica. Tal clone pode, em tese, ser mantido indefinidamente em cultura de tecidos: os hibridomas.

10
5.10 A fuso celular e os hibridomas Imunoglobulinas monoclonais so obtidas pela fuso de plasmcitos normais que esto sintetizando imunoglobulinas (anticorpos) com clulas de plasmocitomas (clulas tumorais) que perderam esta capacidade, mas podem ser mantidas indefinidamente em cultura de tecidos. Alm disto, o plasmocitoma utilizado na fuso um mutante que, por haver perdido uma enzima (chamada HGPRT), no consegue sobreviver em presena da droga aminopterina. Clulas normais sobrevivem em meio com aminopterina porque sintetizam o DNA por uma via metablica que utiliza a HGPRT. (Figura 5.11 ) Mutantes HGPRT-deficientes (HGPRT(-)) so obtidos por crescimento em meio contendo a droga 8azoguanina que, por meio da HGPRT, incorporada ao DNA formando molculas defeituosas que levam destruio celular. Estes mutantes, que perderam a enzima HGPRT, por no incorporarem a 8-azoguanina, sobrevivem e so isolados para uso nas fuses celulares. Para a fuso, mutantes HGPRT(-) e plasmcitos normais so cultivados em um meio especial contendo hipoxantina, aminopterina e timidina (abreviado HAT) e expostos a polietilenoglicol (PEG) que promove a fuso celular. A hipoxantina e a timidina facilitam a ao da HGPRT. Depois de algum tempo de cultura, ocorrem fuses e se formam hbridos entre clulas normais e os mutantes deficientes em HGPRT. As clulas normais sobrevivem em presena da aminopterina contida no meio HAT mas, como clulas normais que so, no conseguem se reproduzir rapidamente em cultura. As clulas HGPRT(-) que no se fundiram, morrem em presena de aminopterina. Apenas os hbridos, que sobrevivem em aminopterina por possuirem a HGPRT (das clulas normais) e se reproduzem rapidamente em cultura (como clulas neoplsicas) crescem exuberantemente, podem ser isolados e transferidos para outros frascos de cultura. O anticorpo que a clula normal estava produzindo, em muitos casos, continua a ser produzido pelo hbrido. Desta maneira, obtido um hibridoma secretando um anticorpo (uma imunoglobulina) monoclonal (Tabela 5.2 ).

Tabela 5.2 Sobrevivncia de clulas normais, hbridos e mutantes HGPRT(-) em meio HAT com aminopterina ______________________________________________________ Clula multiplica sobrevive em meio multiplica em cultura? com aminopterina? em meio HAT? ______________________________________________________ normal no sim no hbrido sim sim sim

tumor sim no no _______________________________________________________

11
Meio de cultura clulas normais (com HGPRT) via HGPRT sem inibidores via principal via HGPRT DNA clula DNA sobrevive mutantes sem HGPRT clula DNA sobrevive

via principal

com aminopterina

DNA

clula sobrevive via principal

via principal via HGPRT com 8-azoguanina via principal DNA defeituoso clula morre DNA

clula morre

clula DNA sobrevive via principal

Figura 5.11: Efeitos da aminopterina e da 8-azoguanina na sobrevivncia de clulas normais, mutantes deficientes na enzima HGPRT.As clulas normais sobrevivem em aminopterina (por possurem HGPRT) e morrem em 8-azoguanina porque a incorporam ao DNA com ada HGPRT. Os mutantes HGPRT(-) morrem ajuda em presena da aminopterina, pois no conseguem sintetizar DNA, mas sobrevivem em presena da 8-azoguanina pois, pela ausncia da HGPRT, no a incorporam ao DNA.

50 6. Linfopoiese
___________________ 6.1 Linfopoiese e hemopoiese A formao dos linfcitos - linfopoiese - envolve questes comuns formao de outras clulas sanguneas (hemopoiese), como a de entender porque uma clula segue um dado trajeto de diferenciao. Alm disso, a produo dos linfcitos depende de processos especiais de rearranjo de segmentos gnicos (exons) no contguos, processos que ocorrem apenas em linfcitos e so responsveis pela gerao da diversidade clonal.

Medula ssea

Progenitoras hemcias

autorenovao

granulcitos & moncitos clulas tronco

plaquetas

linfcitos B

linfcitos T Timo

Figura 6.1 Hemopoiese linfopoiese na medula ssea e no timo. Sobre a e influncia de fatores do microambiente, clulas tronco se diferenciam em clulas progenitoras que do origem s hemcias, granulcitos, moncitos, plaquetas e linfcitos. As dimenses das barras pontilhadas sugerem o tamanho das populaes dos diversos tipos celulares no interior da medula (ou do timo) e na periferia. Nos mamferos, logo aps o nascimento, praticamente toda a formao de clulas sanguneas se concentra na medula ssea. Linfcitos T, gerados no timo, dependem de precursores medulares. Todas as linhagens celulares presentes no sangue dos mamferos descendem de uma clula precursora comum, chamada clula tronco (stem cell) dotada de duas propriedades essenciais: aauto-renovao: dar origem a clulas idnticas, indiferenciadas; b diferenciao em clulas (progenitoras) de linhagens diferentes. Na diferenciao, a clula vai se tornando progressivamente mais comprometida com um trajeto irreversvel de mudanas at que a diferenciao atinge um estgio terminal, uma forma da qual a clula no pode regredir, nem prosseguir adiante (Figura 6.2 ). Os linfcitos so uma exceo a esta regra pois podem regredir do estado adulto para um estgio, de linfoblastos, menos diferenciados. Ao longo da diferenciao, os diferentes tipos celulares podem se multiplicar. A proliferao e a diferenciao (passagem de um tipo celular para outro) dependem da estimulao de receptores para citocinas ("fatores de crescimento e diferenciao") que guiaro a clula ao estgio seguinte. A multiplicao e a diferenciao dos diferentes tipos celulares dependem de influncias do microambiente da clula, da presena de mltiplas citocinas agindo sobre receptores de membrana numa rede de grande complexidade. A seqncia de etapas na diferenciao celular envolve eventos iniciados na membrana (ligao de substncias a receptores) que promovem modificaes no citoplasma e, ento, no ncleo, levando expresso de novos genes. Aparecem novos receptores de membrana que possibilitam a

51
ocorrncia de novos eventos na membrana e assim sucessivamente (ver Captulo 9 ).

Figura 6.2 A diferenciao celular procede em estgios nos quais a clula expressa sucessivamente diferentes receptores para fatores de crescimento (estimulantes de proliferao) e de diferenciao (que mudam o tipo celular). 6.2 Unidades formadoras de colnias Os conhecimentos sobre hemopoiese derivam, em grande parte, de experincias de reconstituio da hemopoiese em animais irradiados letalmente atravs da transfuso de diferentes tipos celulares. Uma tcnica engenhosa, desenvolvida por Till e McCulloch no incio dos anos 60, consiste em transfundir apenas um pequeno nmero de clulas. Esta transfuso, embora insuficiente para salvar o animal da morte por anemia, gera colnias (focos) de hemopoiese no bao que podem ser vistas e contadas a olho nu. Pode-se, assim, enumerar quantas unidades formadoras de colnias (CFU, colony forming unity) existem no inculo (Figura 6.3 ). Admite-se que cada uma destas colnias deriva de uma nica clula tronco (stem cell), multipotencial. Cada colnia contm clulas de apenas uma dentre quatro linhagens celulares: eritride, neutroflica granulide, eosinoflica granulide ou megacarioctica. (Figura 6.1 ). Sabemos hoje, graas s experincias de Wolf e Trentin que o tipo de diferenciao seguido pela clula tronco depende do estroma (matriz extracelular) com o qual a clula est em contato. O transplante de estroma de medula ssea para o bao faz com que as clulas-tronco que a se dividem se diferenciem, predominantemente, em granulcitos, enquanto que as clulas que se dividem no estroma do bao se diferenciam, predominantemente, para a linhagem eritride.

colnias de hemopoiese irradiao letal pequeno nmero de clulas hemopoiticas bao (dias)

Figura 6.3: A contagem de "colony forming units" ( CFUs). Animais irradiados letalmente recebem uma reduzida quantidade de hemopoiticas que clulas colonizam o bao. Aps alguns dias, formam-se que podem colnias ser contadas a olhonu. Cada colnia contm apenas um tipo celular (hemcias, leuccitos ou plaquetas) e, provavelmente, deriva da reproduo de uma nica clula tronco. Por precauo, no entanto, diz-se que cada colnia foi produzida por uma CFU. H fatores importantes no estroma, alm das substncias que denominamos "fatores de diferenciao", no desencadeamento destes eventos. Algumas citocinas so capazes de ligar-se a estruturas da matriz extracelular e, nesta situao, atuar sobre clulas de maneira diferente do que fazem quando livres em soluo. Isto talvez explique algumas das influncias da matriz na diferenciao celular. Existem tambm "fatores" provindos de locais distantes: a eritropoietina, por exemplo, que favorece a diferenciao de hemcias quando a oxigenao dos tecidos cai, formada nos rins. Mltiplos "fatores de diferenciao" j foram isolados e caracterizados mas, in vivo, eles no

52
agem isoladamente, seus efeitos so equilibrados com diversos outros fatores agindo simultaneamente. A Tabela 6.1 mostra a sensibilidade de diferentes clulas precursoras a "fatores" j caracterizados. Por exemplo, a IL-3 age sobre todos os precursores, exceto os de megacaricitos. Acredita-se que a IL-3, atuando junto com outros fatores, seja responsvel pela proliferao celular que acompanha a diferenciao. O GM-CSF age sobre precursores das sries granuloctica (neutrfilos e eosinfilos) e monoctica. J os fatores G-CSF e M-CSF agem com exclusividade sobre precursores de granulcitos neutrfilos ou moncitos, respectivamente. Tabela 6.1 Sensibilidade de diferentes tipos celulares a "fatores" de diferenciao _______________________________________________________________ Fator hemcia granulcito moncito eosinfilo megacaricito _______________________________________________________________ IL-3 + + + + GM-CSF + + + G-CSF + M-CSF + ________________________________________________________________ CSF = "Colony Stimulating Factor"; G= granulcito; M= moncito;IL-3 = interleucina 3. Experincias in vitro sugerem que a concentrao destes fatores seja tambm um fator determinante na diferenciao. Clulas indiferenciadas postas em presena de concentraes relativamente altas de GM-CSF do origem a granulcitos e moncitos, enquanto que concentraes mais baixas do origem apenas a moncitos. 6.3 Origem dos linfcitos Os linfcitos T e B possuem um precursor comum (Figura 6.1 ) do qual se diferenciam clulas progenitoras-B (pr-B) que permanecem na medula e clulas progenitoras-T (pr-T) que imigram para o timo.

autorenovao

Medula ssea progenitora linfide pr-B pr-B B-jovem

B emergente

clulas tronco pele, intestino ? T adultos pr-T

pr-T

T auxiliar emergente

pr-T

Timo T supressor emergente

Figura 6.4: Esquema simplificado da linfopoiese B e T na ssea e no timo. medula Cada um dos estgios diferenciao caracterizado pelo aparecimento de certas de molculas na membrana (ver Figuras 6.6 e 6.7). A linfopoiese T envolve duas linhagens com receptores clonais distintos, conhecidos como Figura e (ver 6.8); os linfcitos Th e Ts na Figura 6.6 pertencem linhagem . Experimentalmente, estas diferentes etapas de diferenciao podem ser acompanhadas com anticorpos (por ex., fluorescentes) dirigidos para molculas expressas na membrana do linfcito em

53
diferentes estgios de diferenciao. Tais molculas so usadas, portanto, como marcadores de diferenciao. Muitos de tais marcadores so designados pela sigla CD (cluster of differentiation) significando que eles esto expressos em molculas, geralmente glicoprotenas de membrana, que surgem em diferentes fases da diferenciao celular. Assim, CD2, CD3 e CD7, por exemplo, so marcadores do desenvolvimento de linfcitos T. Vrios destes marcadores possuam outras designaes ao serem descobertos (por ex., CD7 = Thy.1). H ainda outros marcadores para os quais a designao CD ainda no foi estendida; por. ex.: h um marcador importante da maturao de linfcitos B, por exemplo, denominado B220. So inconvenientes da nomenclatura que s acordos internacionais podem sanar.
clula tronco Golgi membrana progenitora linfide

pr-B cadeias

pr-B cadeias cadeias -

B-jovem cadeias + MHC classe II cadeias IgM + Ia

Figura 6.5: A linfopoiese B. De clulas progenitoras linfides, diferenciam-se clulas pr-B, que possuem cadeias (cadeias pesadas de IgM) no citoplasma j (Golgi), mas no na membrana celular. Destas, surgem clulas pr-B, que j possuem cadeias e cadeias leves (geralmente kappa), mas no expressam estas imunoglobulinas na membrana. A seguir, surgem os linfcitos B jovens, que alm das imunoglobulinas de membrana, expressam tambm de classe II do produtos MHC (denominados IaFigura 6.5). na Histologicamente, os linfcitos B e T so indistingveis uns dos outros. Em seu estado de repouso, mais usual, so clulas pequenas (7-10 ), com pouco citoplasma e baixa atividade metablica. A distino entre linfcitos B e T pode ser feita pela caracterizao de marcadores de membrana . O marcador mais caracterstico de linfcitos B, presente em todos os linfcitos B jovens e adultos, a presena das imunoglobulinas (Igs) que atuam como seus receptores clonais (Figura 6.4 ). Reciprocamente, o marcador de membrana mais caracterstico dos linfcitos T o seu receptor clonal, conhecido por TCR (T Cell Receptor). As molculas de TCR aparecem sempre associadas a um complexo de 5 outras protenas, conhecidas como o complexo CD3, que tambm caracterstico de todos os linfcitos T jovens e adultos. Em outros termos, o marcador equivalente s imunoglobulinas nos linfcitos T o complexo TCR/CD3 (Figura 6.6 ). So os receptores clonais (Ig e TCR) presentes na membrana dos linfcitos que diferenciam um linfcito do linfcito seguinte e o fazem capaz de ligar-se apenas a certos tipos de estruturas moleculares (Tabela 6.2 ). A diversidade linfocitria depende da diversidade destes receptores clonais. Tanto linfcitos B como T possuem muitos outros receptores de membrana que podem ser usados como marcadores de subtipos linfocitrios, alguns caractersticos de estgios da diferenciao celular. Os linfcitos B, por exemplo, possuem receptores para C3b, um componente de um conjunto de enzimas do plasma (sistema complemento ) importante em reaes inflamatrias e na ativao linfocitria. Anticorpos anti-receptor de C3b, por exemplo, podem distinguir linfcitos B de linfcitos T, que no o possuem. Alm das imunoglobulinas, o receptor de C3b, caracterizado por Bianco e Nussenzweig, foi o primeiro marcador utilizado para identificar linfcitos B.

54
T T jovem CD7 CD8? TCR-CD3 T jovem CD7 CD4 CD8 TCR-CD3 CD7 CD8? TCR-CD3 T auxiliar CD7 CD4 TCR-CD3

clula tronco

progenitora linfide

pr-T

pr-T CD7 pr-T CD7

T supressor CD7 CD8 TCR-CD3

Figura 6.6: A linfopoiese T. Clulas pr-linfides, na medula ssea, a clulas do origem pr-T que migram para o timo e a se diferenciam em dois tipos, segundo o tipo de cadeias usadas na constituio dos receptores clonais -(TCR): - . ou Na diferenciao intratmica, as cadeias rearranjam primeiro, depois rearranjam as cadeias - . Aparentemente, clulas que no conseguem expressar as - , expressam cadeias as cadeias - . Os linfcitos T perifricos adultos maioria ; mas h muitos linfcitos T so, na na pele e nas mucosas. Em ambas as clulas, surgem a seguir molculas "acessrias", CD3 e CD7. Nas clulas, surgem ainda molculas de CD4 e Nesta fase, os timcitos so CD8. denominados "duplo-positivos". As clulas expressam CD4 CD8 (so "duplo - no ou negativas"). Aps esta fase, as clulas perdem um destes marcadores, tornando-se - CD4+/CD8- (T auxiliares),ou CD4-/CD8+ (T supressores/ citotxicos). Um segundo tipo importante de molculas presentes em todos os linfcitos B j diferenciados e ausente de linfcitos no ativados so os produtos de classe II do MHC . Estas molculas, tambm chamadas Ia , so importantes na "apresentao" de peptdeos ao reconhecimento pelo complexos TCR/CD3 de linfcitos T (Figura 6.6 ). A designao Ia uma abreviao de "I-region associated antigen", derivada do estudo dos gens Ir (Immune response gens), gens caracterizados nos anos 70 como responsveis pela alta ou baixa reatividade imunolgica a certos antgenos (ver Captulo 3 ). No camundongo, h 4 genes de classe II no MHC (A , A , E e E). As clulas "apresentadoras" co-expressam dmeros A /A e E /E . Em humanos, h 14 genes de classe II. Alm de mais numerosos, esses gens podem ser expressos em uma variedade maior de combinaes / (ver Captulo 7 ). Em aves, uma parte importante da diferenciao de linfcitos B se passa em um rgo linfide associado cloaca, denominado bursa de Fabricius . Nos mamferos, a diferenciao completa dos linfcitos B se faz na medula ssea, de onde eles emergem j maduros.

DNA transcrio

RNA transcrito

edio peptdeo (protena) traduo RNA mensageiro

Figura 6.7: Transcrio, edio e traduo do material gentico em clulas eucariticas. O processo envolve a remoo de trechos do transcrito de RNA correspondentes aos introns ("edio"). Nos linfcitos, outras em e no clulas, antes da etapa da transcrio ocorrem eventos (rearranjo e segmentos de juno

55
gnicos) que do origem aos gens correspondentes aos receptores clonais (Igs e TCRs). (ver Figura 6.9) 6.4 Rearranjos gnicos: mecanismos especiais de linfcitos Como nas demais clulas eucariticas, o DNA de linfcitos contm pores (introns ) que no so traduzidas em peptdeos, intercaladas entre os segmentos gnicos (exons ) que so traduzidos. Um primeiro transcrito de RNA, contendo introns e exons, "editado" pela remoo das sequncias dos introns.
cromossoma materno trecho ativo

cromossoma paterno

Figura 6.8: Os rearranjos gnicos ocorrem em linfcitos em ciclo mittico. No ocorrem em linfcitos em repouso. Os linfcitos dispem, alm disso, de mecanismos de rearranjo de segmentos gnicos (exons) no contguos que no so encontrados nas demais clulas do corpo. Atravs destes mecanismos, so montadas as regies variveis das molculas de imunoglobulinas(Igs) e dos receptores clonais (TCRs) dos linfcitos T (Figura 6.9 ). Grande parte do conhecimento hoje disponvel sobre este processo especial de rearranjo de exons no contguos deriva do trabalho de Tonegawa e seus associados, premiado Nobel em 1987.

DNA germinal DNA do linfcito B

V1 V2 V3 V4 ..... Vn

J1 J2 J3...... Jn

Segmentos gnicos

rearranjo e juno V1 V2 V3 J3...... Jn C transcrio

RNA transcrito

V1 V2 V3 J3...... Jn

RNA mensageiro cadeia leve

V3J3C

edio do RNA traduo

Figura 6.9: Na linfopoiese, antes etapas que ocorrem nas demais clulas das eucariticas, ocorre o rearranjo e a juno dos segmentos gnicos(V,J,C) que do origem aos genes das Igs e TCRs, contendo as regies variveis(V) e constantes(C). Nas cadeias pesadas, entre os segmentos V e os J, existem ainda D. A segmentos Figura 6.9 ilustra a produo de uma cadeia leve. Como vimos, os linfcitos podem existir em dois estados distintos: um estado de repouso (pequenos linfcitos) e um estado ativado (linfoblastos, grandes e mdios linfcitos). A grande maioria (80-95%) dos linfcitos existe em estado de repouso. Os linfcitos B adultos que emergem diariamente da medula ssea (20 a 30 milhes de clulas por dia no camundongo) so pequenos linfcitos em repouso que, em sua maioria, morrem em poucos dias ou mesmo horas, antes de serem ativados.

56
Tabela 6.2 Gerao da diversidade de Igs e TCRs durante a linfopoiese
Cadeias kappa Ig lambda pesadas Segmentos gnicos V kappa J kappa V lambda J lambda VH DH JH V beta D beta J beta N 300 4 2 4 200 12 4 22 11 22 Rearranjos possveis Pareamentos possveis molculas possveis mutaes somticas 7 10 10 4 erros de juno 8 10 9 10

10

beta TCR alfa

10

3 7 10 erros de juno 8 10

V alfa 220-440 50 J alfa

10

Os pequenos linfcitos constituem tambm a maioria das clulas encontradas nos rgos linfides perifricos, como o bao e os gnglios. Cerca de 20% das clulas nucleadas da medula ssea so pequenos linfcitos. Mas os processos genticos especiais expressos nos linfcitos operam apenas quando os linfcitos so ativados e entram em ciclo mittico. Para que os rearranjos gnicos ocorram, a dupla fita de DNA precisa estar desenrolada e permitir a ancoragem das enzimas responsveis pelas mudanas. (Figura 6.8 ).
Cadeias H (cromossoma) camundongo 12 6 16 homem 14 2 22 Animal

Figura 6.10: Os genes que codificam os anticorpos existem em 3 conglomerados gnicos, em 3 cromossomas diferentes: os genes das pesadas (H), das cadeias cadeias leves kappa e das cadeias leves lambda ( ) ( ). Em humanos e camundongos a formao de anticorpos envolve rearranjos em 2 ou 3 conglomerados gnicos situados em cromossomas diferentes (Figura 6.10 ). A ocorrncia de divises celulares durante a linfopoiese B na medula pode estar marcada por uma seqncia definida de rearranjos gnicos. Na 1 mitose, haveria o rearranjo DH-JH; na 2 mitose, se completariam os rearranjos da cadeia pesada (VHDH-JH); na 3, haveria o rearranjo da cadeia kappa; o rearranjo da cadeia lambda s ocorreria se o rearranjo kappa no fosse funcional (Figura 6.11 ). 6.6 Os linfcitos T Os linfcitos T diferem dos linfcitos B muitos pontos importantes: no processo de gerao, no mecanismo de ativao e em sua vida mdia no organismo. Contrariamente aos linfcitos B, que emergem maduros (adultos) da medula ssea e so "selecionados" nos rgos perifricos, o processo de "seleo" dos linfcitos T ocorre, em sua maior parte, durante sua "educao", dentro do timo, sobre linfcitos T ainda em formao (timcitos). Clulas pr-T migram da medula ssea ou do fgado fetal e ingressam no crtex do timo. Estas clulas expressam novos marcadores de membrana, por exemplo, CD7 (antes denominado Thy-1), que permanece presente em todas as etapas subseqentes da diferenciao de clulas T. Dentro do timo, a diferenciao se processa do

57
crtex para a medula tmica. Os linfcitos T adultos que conseguem passar periferia emergem da medula tmica (Figura 6.6 ).

VH V V

DH J J

JH

1 mitose

VH V V

DHJH J J

2 mitose

VHDHJH V V J J

VHDHJH VJ

4 mitose
se falhar o rearranjo

VHDHJH VJ V J

3 mitose

VJ

Figura 6.11: Sincronia das mitoses com os rearranjos gnicos. Nas etapas seguintes da diferenciao no crtex, as clulas T, agora denominadas timcitos jovens se multiplicam intensamente. Durante estas mitoses, elas sofrem os rearranjos gnicos que permitem a construo de seus receptores clonais (TCR). Nesta etapa, gerada uma variedade de TCRs to ampla quanto a das Igs utilizadas pelos linfcitos B (Tabela 6.2 ). Nos linfcitos T, os TCR passam a ser expressos na membrana em associao com protenas de um complexo conhecido por complexo CD3. Nesta etapa, no so ainda expressas molculas de CD4 ou CD8 (molculas que desempenham funes acessrias nas interaes do complexo TCR-CD3) e as clulas so, por isto mesmo, ditas "duplo negativas" (CD4/CD8-) (Figura 6.8 ). A molcula do TCR um heterodmero possuindo domnios constantes (C) e variveis (V) que guardam analogias com as molculas de imunoglobulinas. Tanto em humanos como em camundongos, h dois tipos de TCR expressos em linhagens distintas de linfcitos T: h os que expressam TCR com cadeias gama-delta ( ) e os que expressam cadeias alfa-beta (), as conhecidas originalmente. As clulas T so as primeiras a aparecer no timo e pensou-se inicialmente que, ao maturar, elas se transformassem em clulas T , as clulas T mais comuns nos rgos linfides perifricos como o bao e os linfonodos. Pensa-se atualmente que as clulas T e T constituam linhagens distintas de clulas T. Um forte argumento a este favor, o aparecimento de taxas normais de clulas T na pele, e na mucosa digestiva e genital de camundongos nude (atmicos), que so totalmente desprovidos de clulas T . Em camundongos normais, porm, as clulas mais abundantes no interior do timo so clulas T . Em ungulados, a porcentagem de clulas T bem maior. Em camundongos, a grande maioria dos linfcitos T intestinais so T , enquanto que em seres humanos eles so T . Na etapa seguinte, as clulas T passam a expressar, simultaneamente, molculas de CD4 e CD8 e so conhecidas como clulas "duplo positivas" (CD4+/CD8+). As molculas de CD4 e CD8 so importantes nas interaes ativadoras dos linfcitos T, onde atuam como co-receptores: enquanto o paratopo da molcula de TCR se liga ao complexo MHC-peptdeo, as molculas de CD4 e CD8 se ligam diretamente a pores invariantes dos prprios produtos do MHC. Na etapa seguinte da diferenciao, as clulas "duplo positivas" perdem um destes marcadores, tornando-se CD4+/CD8ou CD4-/CD8+. As primeiras desempenharo as funes de linfcitos T-auxiliares; as ltimas, de linfcitos T supressores/ citotxicos. Alguns linfcitos T tambm expressam molculas de CD8, mas este um ponto ainda parcialmente obscuro atualmente. Acredita-se que o processo de seleo dos linfcitos T que efetivamente emergiro do timo ocorre a partir desta etapa. A grande maioria dos linfcitos T formados no timo, cerca de 19 em cada 20, morrem sem deixar o rgo. A seleo ocorre quando os linfcitos T jovens interagem com clulas "apresentadoras" no interior do timo e h etapas "positivas" e "negativas" de seleo. Um certo limiar de afinidade entre o complexo TCR-CD3 e os complexos MHC-peptdeos nas clulas "apresentadoras" do timo parece essencial talvez para que a clula receba um suprimento indispensvel de citocinas. Algumas clulas so, ento, "positivamente" selecionadas. Por outro lado, afinidades muito elevadas reteriam a clula no timo por um tempo excessivo e estas clulas seriam "negativamente" selecionadas. Desta forma, sairiam do timo como linfcitos T adultos, clulas com um grau moderado de afinidade.

58
Como mencionamos, o TCR aparece sempre associado a um conjunto de no mnimo 5 outras protenas, conhecido como o complexo CD3. Por isso, muitas vezes nos referimos ao complexo molecular que atua como o verdadeiro receptor clonal do linfcito T como TCR-CD3. Reciprocamente, a presena do TCR parece essencial para o aparecimento do complexo CD3 na membrana: existe uma linhagem de clulas mutantes (Jurkat) que tm defeitos na sntese das cadeias alfa ou beta do TCR e, como conseqncia, no expressam CD3 na membrana, embora tenham CD3 no citoplasma e nveis normais de mRNA para CD3. As protenas caracterizadas no complexo CD3 at a data (denominadas gama, delta, epsilon, zeta e eta) existem tanto em humanos como em camundongos e esto associadas entre si e com o TCR por ligaes no-covalentes. As cadeias gama, delta e epsilon so relacionadas estruturalmente, enquanto que a cadeia zeta um homodmero unido por pontes dissulfeto. Um dos eventos mais precoces da ativao do linfcito T parece ser a fosforilao de componentes do complexo CD3.

59 7. Histocompatibilidade
__________________________________ 7.1 Relaes entre a transplantao de tecidos e a imunologia bsica. O desenvolvimento da Imunologia moderna foi marcado por dois perodos de intensa atividade, nos quais descobertas fundamentais foram feitas. No primeiro, 1955-1965, a viso sobre o significado dos linfcitos para os fenmenos imunolgicos mudou radicalmente. Na viso descrita por Virchow em 1858, linfcitos eram produzidos nos gnglios linfticos e lanados na linfa de onde passariam ao sangue para uma curta vida, no muito diferente da vida dos leuccitos. As experincias de Gowans, iniciadas em 1956, mostraram que ratos que tinham a linfa do conduto torcico cronicamente drenada tornavam-se linfopnicos e imunodeficientes. A competncia imunolgica destes animais podia ser restaurada pela reinfuso de linfcitos. Havia, portanto, linfcitos recirculantes, clulas de vida mais longa do que propunha Virchow. As idias que fundamentam a Imunologia moderna tiveram origem neste perodo. de 1955 a Teoria da Seleo Natural da Formao dos Anticorpos, de Jerne e de 1957, a primeira verso da Teoria de Seleo Clonal, de Burnet (uma modificao fecunda das idias de Jerne). So tambm deste perodo a caracterizao da existncia de linfcitos B e T como clulas distintas e os primeiros trabalhos sobre a funo do timo (e da bursa de Fabricius, em aves). Expostos ao antgeno especfico, linfcitos T de animais imunizados transformam-se em blastos e se multiplicam mas no produzem anticorpos, criando uma problemtica nova para a Imunologia. Alm disso, aprendeu-se que a produo de anticorpos para a maioria dos antgenos requeria a cooperao entre linfcitos T e B. O segundo perodo de intenso progresso, entre 1965 e 1975, foi marcado por descobertas inesperadas que uniram em uma s problemtica duas reas da pesquisa biomdica at ento separadas: a imunobiologia e a biologia da transplantao de tecidos. Tais descobertas ocorreram no estudo dos genes que controlam a reatividade imunolgica. O primeiro destes genes foi descrito por Levine e Benacerraf no estudo da reatividade de cobaias a poli-L-Lisina (PLL). Inicialmente realizados em cobaias, estes estudos logo passaram a ser feitos com raas isognicas de camundongos (ver Apndice 1 ), j ento disponveis em grande variedade. Estudando a reatividade de um painel de raas de camundongos, McDevitt descobriu que camundongos C3H/He diferiam de camundongos C3H.SW na reatividade a polmeros sintticos de aminocidos. Estas duas raas diferem uma da outra apenas por uma regio cromossmica conhecida como MHC (Major histocompatibility Complex) por conter os genes mais importantes na compatibilidade de tecidos transplantados entre animais da mesma espcie. As raas C3H/He e C3H.SW formam um par congnico-resistente diferindo pelo MHC (ver Apndice 1 ). Isto sugeriu a McDevitt que os genes responsveis pela reatividade aos polmeros sintticos de aminocidos se localizavam numa regio prxima ao MHC. Experincias nesta direo logo conduziram caracterizao de "genes de Imune-resposta" (genes Ir ) controlando a reatividade a polipeptdeos sintticos que estavam, no apenas prximos, mas sim no interior do MHC. Meses depois, Vaz e Levine, trabalhando com camundongos e Green e Benacerraf, trabalhando com cobaias, mostraram que havia gens Ir controlando tambm a resposta imune a protenas. Tratava-se de um fenmeno geral, operando na base da ativao linfocitria. Quase simultaneamente, Kindred e Shreffler mostraram que linfcitos T e B cooperam apenas quando tm o mesmo MHC. Os linfcitos poderiam provir de raas com mltiplas diferenas genticas, mas cooperavam bem se compartilhassem o MHC. Este fenmeno, conhecido como "a restrio por compatilidade" ou "restrio pelo MHC " s foi elucidado no final da dcada de 80 e depende do que passou a se chamar "processamento e apresentao " como ser discutido no prximo captulo. At este perodo, no havia uma conexo direta entre a Imunologia bsica e o estudo da transplantao de tecidos. O estudo dos transplantes de tecidos animais foi iniciado, curiosamente, no trabalho com tumores experimentais de camundongos, ainda no comeo do sculo. O objetivo da maioria das investigaes, como usual na Imunologia, era o desenvolvimento de vacinas. Alguns tumores transplantados entre animais geneticamente no-idnticos eram rejeitados e havia a esperana de se desenvolver uma vacina contra o cncer. O trabalho nesta rea mostrou-se decepcionante por duas razes principais. Primeiro, chegou-se concluso de que a rejeio dos tumores poderia ser devida a antgenos presentes nos tecidos normais do doador e no exclusivamente a antgenos presentes nos tumores. Em segundo lugar, animais injetados com clulas tumorais mortas e que formavam anticorpos contra elas,

60
poderiam tornar-se mais suscetveis, em vez de mais resistentes, ao crescimento de um inculo subseqente do mesmo tumor, um fenmeno que ficou conhecido em Imunologia como facilitao (enhancement). Estas frustraes arrefeceram o interesse em Imunologia dos tumores por muitas dcadas, mas tiveram o grande efeito de despertar o interesse no estudo sistemtico da transplantao de tecidos normais. Datam deste perodo os trabalhos de Little criando linhagens homogneas de camundongos que tornaram possveis, nos anos 40-50, os trabalhos de Gorer e, finalmente, a carreira pioneira e inicialmente solitria, de Snell.
genes H

produto do gene H-1

produto do gene H-2

Figura 7.1 : Um gene de histocompatibilidadee(H-1) produto expresso na seu membrana celular. Clulas de um animal que expresse do alelo a o locus H-1 transplantadas para animais que expressam (por ex., animais homozigticos no o para o alelo do locus H-1), b provocam respostas imunes para o produto do alelo a, ou seja, causam a rejeio das clulas. 7.2 A descoberta do MHC Snell foi o fundador da imunogentica da transplantao de tecidos. Trabalhando com camundongos, ele produziu um grande nmero de raas isognicas (inbred) por cruzamentos sucessivos entre irmos. Um clculo simples de probabilidade indica que, aps 20 cruzamentos sucessivos entre irmos, apenas 5% dos genes (dos loci) permaneceriam heterozigticos. Atualmente, a linhagem mais antiga de camundongos (DBA/2J) j conta com mais de 200 destes cruzamentos.

Fo

F1

F1

F2

Figura 7.2: Camundongos de raas isognicas foram e continuam sendo de valor inestimvel na pesquisa imunolgica. Camundongos isognicos so homogeneamente homozigticos, enquanto que os hbridos F1 raas isognicas so tambm de duas homogneos (homogeneamente heterozigticos). J o cruzamento de animais F1 gera animais F2 geneticamente heterogneos. Gorer havia demonstrado que camundongos formam anticorpos contra antgenos presentes em hemcias e outras clulas de camundongos de outra raas durante a rejeio dos transplantes. Usando tais mtodos e diretamente a rejeio de transplantes de pele, Snell queria conhecer os "antgenos de transplantao" ou antgenos de histocompatibilidade (antgenos H). Seu projeto era caracterizar os genes H (genes de compatibilidade histolgica) atravs de cruzamentos e retrocruzamentos adequados.

61

mesma raa isognica entre raas isognicas

aceita

rejeita

parentais para F1

aceita

Figura 7.3 : As "leis" transplantao. 1 lei: transplantes isognicos (dentro da da mesma raa) so aceitos. A 2 lei: transplantes alognicos (entre so duas raas) rejeitados. A 3 leiF1 o : de duas raas isognicas aceitar transplantes de ambas as raas parentais. Haveria uma 4 lei, que surge da 3, dizendo que os F1 aceitaro transplantes de Fn (qualquer gerao) so receptores universais. "lei" A 3 e a 4 derivam do mesmo fato: todos os genes de histocompatibilidade so expressos na gerao F1 (so todos genes co-dominantes). Estudando a transplantao de pele entre camundongos resultantes de cruzamentos e retrocruzamentos destas raas, Snell enunciou "leis" da transplantao de tecidos alognicos, isto , entre raas isognicas diferentes da mesma espcie animal. A Figura 7.3 ilustra as 3 primeiras "leis".
a/a Fo a/b F1 b/b a/a

a/b

F2 25% 50% 25% a/a a/b b/b

75% aceitam a/b a/a a/b

25% rejeitam b/b

Figura 7.4 : Como seria a rejeio de transplantes da raa parental (raa A) para a gerao F2 se existisse um nico gen de histocompatibilidade, H-1, com alelos a/a e b/b. A Figura 7.4 ilustra a transplantao de tecidos de uma raa isognica (raa A) para a gerao F2 de seu cruzamento com outra raa (raa B) se existisse um nico gene H (gene H-1) com alelos a/a na raa A e alelos b/b na raa B: 3/4 dos animais da gerao F2 aceitariam o transplante. A Figura 7.5 ilustra o que ocorreria se existissem 2 gens H no ligados, H-1 (com alelos a/a e b/b) e H-2 (com alelos x/x e y/y). Ocorreria que (3/4) x (3/4) dos animais aceitariam o transplante. Isto , a porcentagem de rejeies de transplantes parentais pela gerao F2 proporcional ao nmero de genes H independentes. Com apenas 1 gene H, o transplante seria aceito por 3/4 dos animais; com 2 genes, seria aceito por (3/4) x (3/4); com 3 genes, por (3/4)x(3/4)x(3/4) e, portanto, com n genes, por (3/4)n animais.

62

Fo

F1

F2 a/a x/x a/b x/x a/b x/y b/b x/y b/b x/y a/a x/y a/b x/y a/a y/y a/b y/y a/b x/y a/b x/y a/b y/y b/b y/y

a/b x/x b/b y/y

a/b x/y a/b x/y 7/16 rejeitariam

a/b x/x a/a x/x b/b x/x

Figura 7.5 : Rejeio de transplantes da raa parental para a gerao F2 se existissem dois genes H, sendo a raa A H-1a/H-1a; H-2x/H-2x e a raa B H 1b/H-1b; H-2y/H-2y. Ocorreria que 1/4 dos animais rejeitariam o transplante por diferenas no gen H-1 e 1/4 por diferenas no gen H-2. Assim (3/4)x(3/4), ou 9/16 animais aceitariam o transplante. Podemos, ento, utilizar o raciocnio inverso: realizar transplantes da gerao parental para um grande nmero de animais da gerao F2 resultantes do cruzamento de duas raas isognicas, determinar a porcentagem de transplantes rejeitados e, a partir destas cifras, calcular o nmero (n) de genes H controlando a compatibilidade de transplantes realizados entre as duas raas, pois esta porcentagem (3/4)n. Esta experincia foi efetivamente realizada mltiplas vezes. Seu resultado precisa ser descrito em etapas. Na primeira etapa, 1/4 dos transplantes (25%) sofriam uma rejeio rpida (10 dias), enquanto que 3/4 (75%) permaneciam aceitos. Se a experincia fosse interrompida nesta etapa, a concluso seria: existe apenas 1 gene de histocompatibilidade. Com o correr dos dias, porm, ocorriam mais e mais rejeies. Por exemplo, 40% dos animais haviam rejeitado o transplante aos 20 dias; 60% aos 30 dias e assim sucessivamente at que, ao fim de 6 meses, praticamente nenhum dos animais F2 ainda portava o transplante parental sem o rejeitar. Um nvel assim to alto de rejeio indica que existem mltiplos genes H no camundongo, tantos que praticamente impossvel fazer com que transplantes da gerao parental para a gerao F2 sejam permanentemente aceitos.

Tabela 7.1 Porcentagem de rejeies de transplantes parentais para a gerao F2 ___________________________________________________ Nmero de locos F2 que aceitam o transplante H independentes frao % ___________________________________________________ 1 (3/4)1 75 2 3 4 ... 9 ... 13 15 (3/4)2 (3/4)3 (3/4)4 ......... (3/4)9 ......... (3/4)13 (3/4)15 57 42 31 ..... 8 ...... 2 1

63
_____________________________________________________ Mas o que se observa na primeira etapa da experincia, na qual 25% dos transplantes sofreram uma rejeio rpida (10 dias), tambm revelador. Isto indica que, entre os mltiplos genes H do camundongo, existe um gene "forte", "maior". Animais que diferem em alelos deste gene rejeitam rapidamente o transplante. Animais que possuem alelos compatveis deste gene "forte", ainda assim, rejeitam o transplante, mas o fazem mais lentamente. Este gene mais "forte", responsvel pelas rejeies rpidas, o que denominamos hoje em dia o complexo principal de histocompatibilidade ("Major Histocompatibility Complex") abreviado MHC . 7.3 H-2: o MHC do camundongo O "gene forte" , na verdade, um complexo gnico , genes intimamente ligados que, por sua proximidade, so herdados quase sempre como um "pacote", como se fossem um s gene. Descobriu-se que se trata de um complexo gnico pela descoberta de raras recombinaes, que ocorrem em cerca de 5 cruzamentos em 1000 (0,5%), capazes de fazer com que caractersticas codificadas pelo mesmo "alelo" (o termo correto aqui haplotipo) sejam separadas e herdadas por indivduos diferentes. Um esquema da estrutura gentica fina do MHC do camundongo, conhecido como complexo H-2, mostrado na Figura 7.6 . A regio H-2 do cromossoma 17 do camundongo dividida em 4 subregies denominadas K, I , S e D. Cada uma destas subregies contm de um a vrios segmentos gnicos (Tabela 7.2 ). Tabela 7.2 Subregies e segmentos gnicos do complexo H-2 ____________________________________________________ Subregies Segmentos gnicos Classe dos produtos ____________________________________________________ K K I I A , A , E , E II S Slp, Ss, Bf, C2 III D D, L I ____________________________________________________
classe II peptdeo produtos cadeia membrana celular cadeia cadeia

classe I peptdeo

2-micro
globulina

genes classe Sub-regies Loci T/ t

K A A E E Slp Ss Bf C2 D I K II II I II II III III III III S I I

L Qa2,3 I D I

Tla Qa1 I

Qa/Tla

H-2

Tla

Figura 7.6: O MHC do camundongo: o complexo H-2 contendo 4 subregies (K,I,S e D) e 11 segmentos gnicos. Destes segmentos gnicos, 3 codificam produtos de classe I (K,D,L) e 4 produtos de classe II, (A e E ). Os produtos de , A E classe I e II so expressos na membrana celular. Os produtos de classe III so componentes do sistema complemento e no se expressam na membrana. direita do complexo H-2, existe um conglomerado de outros segmentos gnicos I, designados classe de Qa/Tla, que contm cerca de 30 segmentos gnicos. Esto ainda, no presentes

64
complexo H-2, genes que a Figura no mostra(por ex.: h um gene codificando uma neuraminidase; o gene de uma citocina (TNF ); etc.) Estes segmentos gnicos codificam produtos moleculares de diferentes classes, designadas I, II e III. Os produtos de classe I e II so protenas da membrana celular, como representado na parte superior da Figura 7.6 . Os produtos de classe III so componentes de um sistema de enzimas do plasma denominado sistema complemento e no fazem parte da membrana celular. Tabela 7.3 Distribuio celular de produtos de classe I e II do MHC __________________________________________________________ Classe Expressos em __________________________________________________________ I ( H-2) Todas as clulas nucleadas I (Qa/Tla) Fases da diferenciao de alguns linfcitos II Clulas apresentadoras (*) ___________________________________________________________ (*) linfcitos B, clulas dendrticas, macrfagos, endotlio ativado, entercitos, epitlio tmico, espermatozides. Os produtos de classe I do complexo H-2 (K,D,L) consistem de uma nica cadeia polipeptdica com cerca de 43 kd, aos quais se une uma molcula menor, conhecida por 2-microglobulina (2m) que codificada em um outro cromossoma. A 2m existe tambm livre no plasma. Os produtos de classe I do H-2 so expressos na membrana de todas as clulas nucleadas do camundongo, mas no so expressos em hemcias. Por outro lado, os produtos de classe I codificados na regio Qa/Tla so expressos apenas em algumas clulas e apenas em alguns estgios da diferenciao celular. Por exemplo, a denominao Tla uma abreviatura de "thymus-leukemia antigen" porque estas molculas so expressas em timcitos, mas no em linfcitos T adultos e, alm disso, durante leucemias, podem reaparecer em linfcitos perifricos. Similarmente, os produtos de genes Qa aparecem em algumas clulas da medula ssea durante a hemopoiese e depois desaparecem. H indicaes de que estes mesmos antgenos aparecem em clulas fetais e, o que muito importante, em uma grande variedade de clulas neoplsicas. Atualmente, h sugestes de que os linfcitos T se liguem a peptdeos conjugados a produtos de genes Qa. Os produtos de classe II so formados por duas cadeias distintas, ambas codificadas por genes do complexo H-2. Os produtos so denominados I-A (expresso dos genes A e A ) e I-E (dos genes E e E ) e tm uma distribuio muito mais restrita que os produtos de classe I do complexo H-2. Molculas de I-A e I-E so expressas nas clulas apresentadoras de antgenos aos linfcitos T auxiliares: linfcitos B, clulas dendrticas, macrfagos, clulas endoteliais "ativadas", clulas do epitlio tmico(Tabela 7.3 ) e algumas outras clulas, entre as quais, curiosamente, esto os espermatozides.

classe I

classe II

classe IIII

H-2 HLA

K A A E E Slp Ss Bf C2 D

L Qa2,3

Tla Qa1

DP

DX

DQ

C4F C4S C2 Bf B C A
DR

DZ DO

Figura 7.7. Comparao do MHC do camundongo (H-2) com o humano (HLA). H 4 genes de classe II no MHC A , E e E) e as clulas "apresentadoras" co (A, expressam dmeros A/ A e E/ E. No HLA, h 14 genes de classe II. Alm de mais numerosos, esses genes podem ser expressos em uma variedade maior de

65
combinaes . / 7.4 HLA: o MHC humano O conhecimento sobre a imunogentica do complexo H-2 do camundongo facilitou muito a compreenso da estrutura gentica do MHC humano, o complexo HLA. Como ilustrado na Figura 7.7 , existem duas pequenas diferenas na organizao do H-2 e do HLA: no complexo HLA, todos os genes de classe I (denominados HLA-A,HLA-B e HLA-C) esto agrupados direita (no existe um gene semelhante ao H-2K do H-2); em segundo lugar, existe uma variedade maior de genes de classe II, denominados HLA-DP, HLA-DZ, HLA-D0, HLA-DX, HLA-DQ e HLA-DR (Figura 7.8 ).
peptdeo cadeia membrana celular classe II cromossoma 6 cromossoma 15 DP DZ DO DX DQ DR classe II B C A classe I cadeia peptdeo cadeia

2-micro

globulina

classe I

Figura 7.8 Os genes e os produtos de classe I e II do complexoprodutos . Os HLA de classe I so expressos na membrana em combinao com a 2-microglobulina. No complexo HLA, os produtos de classe II , so mais numerosos que no complexo H-2 do camundongo. Alm disso, as cadeias de um tipo, por ex., DP, podem ser conjugadas a cadeias DP, DQ, ou DR tornando a variedade de produtos finais muito maior. Dois problemas relacionados ao sistema HLA so de grande importncia imunolgica. O primeiro, que discutiremos sumariamente ainda neste captulo, o interesse em realizar transplantes de rgos e tecidos com finalidades teraputicas. Com a notvel exceo de transplantes entre gmeos univitelinos, a transplantao na espcie humana sempre realizada entre indivduos alognicos e, portanto, na ausncia de intervenes teraputicas, eles so invariavelmente rejeitados aps um perodo mais ou menos longo. Um corolrio deste problema a gestao vivpara e a natureza dos mecanismos que, normalmente, impedem a rejeio do feto, desde que a placenta pode ser vista como um enxrto alognico implantado na mucosa uterina. O segundo problema, que discutiremos depois, a relao entre certos haplotipos HLA e a incidncia de doenas auto-imunes humanas (por exemplo, a freqente associao do HLA-B27 com a espondilite anquilosante).

66 8. O processamento e a apresentao
____________________________________________ 8.1 Diferenas entre linfcitos T e B Nos livros-texto de Imunologia de alguns anos atrs, h esquemas semelhantes ao da Figura 8.1 mostrando a estimulao de um linfcito por seu antgeno especfico. A figura sugere que o linfcito seria ativado pelo antgeno, sofreria um nmero varivel de divises celulares (expanso clonal) e, ento, se diferenciaria em plasmcitos secretando anticorpos. Uma parcela das clulas estimuladas reverteria a um estado de repouso para constituir uma populao de "clulas de memria" responsveis pela reatividade aumentada ("secundria") em contatos subseqentes com o mesmo antgeno. Esta proposta era a base da Teoria de Seleo Clonal, de Burnet, e foi feita nos anos 60, quando no eram conhecidos ainda os linfcitos T e B. Nesta poca, existiam apenas "linfcitos". No surpreende que variaes desta figura aparecessem em todos os textos de Imunologia mais antigos. O que aprendemos sobre os processos de ativao linfocitria nos ltimos anos, porm, sugere que este esquema contm incorrees fundamentais.

expanso clonal

anticorpos plasmcitos etc &

antgeno

ativao

clulas de memria

Figura 8.1 : O esquema tradicional de ativao de linfcitos pelo antgeno resultando no aparecimento de clulas formadoras de anticorpos e de "clulas de memria". Este esquema, derivado da Teoria de Seleo Clonal, contm vrias incorrees, como a sugesto de que os antgenos so capazes de estimular diretamente os linfcitos B. A incorreo mais bsica a sugesto de que o antgeno seja capaz de ativar diretamente linfcitos para a produo de anticorpos. Embora capazes de ligar molculas de antgeno s molculas de IgM que possuem na membrana, os linfcitos B no so ativados por esta ligao. O processo mais comum (T-dependente) de ativao de linfcitos B requer a presena de linfcitos T auxiliares (CD4+). Por sua vez, os linfcitos T so incapazes de ligar molculas de antgeno em sua configurao nativa e requerem que estas molculas sejam previamente processadas e apresentadas por outras clulas. Vrios tipos de clulas podem operar como apresentadoras de antgenos para os linfocitos Tauxiliares. Entre estas clulas, esto os prprios linfcitos B. A captao de antgenos pelos linfcitos B, portanto, uma etapa importante em seu processo de ativao, porque os antgenos captados so processados e recolocados (apresentados) na membrana, transformados em peptdeos e conjugados a outras molculas da membrana (produtos do MHC). Linfcitos T-auxiliares podem, ento, interagir com estes peptdeos e, neste processo, levar ativao do linfcito B. A participao de linfcitos B e T nas interaes ativadoras, portanto, diferente. Enquanto os anticorpos na membrana do linfcito B ligam-se s molculas na sua conformao nativa tridimensional, os receptores da clula T (TCR) exigem que estas molculas sejam fisicamente alteradas (processadas) em outras clulas e conjugadas a produtos do MHC para se ligarem a elas. Como vimos, h dois tipos principais de linfcitos T, designados auxiliares (Th) e supressores /citotxicos (Ts/Tc), e indentificados pelos marcadores CD4+ e CD8+, respectivamente. Durante as interaes celulares envolvendo linfcitos Ts, as molculas de CD8 ligam-se s molculas de produtos de

67
classe I do MHC presentes na membrana de todas as clulas nucleadas do organismo. Nos linfcitos Th, porm, as molculas de CD4 tm afinidade por produtos de classe II do MHC e esses produtos so expressos apenas nas clulas ditas apresentadoras (linfcitos B, macrfagos, vrios tipos de clulas dendrticas, entercitos, clulas do trato genital, etc). H, portanto, um grupo restrito de clulas capazes de atuar com alvos de linfcitos Th. Por outro lado, todas as clulas do corpo so "apresentadoras" para linfcitos T CD8+ (supressores/citotxicos). H razes para considerar separadamente o processamento e a apresentao ligados a ativao de linfcitos Th e Ts/Tc. Usualmente, o termo clulas "apresentadoras" refere-se apenas aos linfcitos Th. As clulas "apresentadoras", como macrfagos e clulas dendrticas, captam a maioria dos antgenos que penetram no organismo. Elas ingerem e parcialmente digerem os antgenos, gerando peptdeos que so, ento, conjugados a produtos de classe II do MHC. o conjugado formado entre "produto de classe II - peptdeo" que se liga ao receptor (TCR) do linfcito Th. Alm da ligao do TCR com o conjugado "peptdeo-produto do MHC", h ligaes diretas entre molculas de CD4 e os produtos de classe II do MHC, alm de outras ligaes estabilizadoras (Figura 8.2 ).
CD8 TcR T supressor citotxico peptdeo qualquer clula nucleada MHC classe II MHC classe I

CD4 TcR T auxiliar

peptdeo clula apreentadora

Figura 8.2 : Linfcitos T-CD4+ ligam-se a produtos de classe II/peptdeos nas clulas apresentadoras. Linfcitos T-CD8+ ligam-se a produtos de classe I/peptdeos em qualquer clula nucleada. Molculas acessrias (CD4 e CD8) interagem diretamente com os produtos do MHC de classe II e classe I), respectivamente, Estas ligaes parecem essenciais para a ativao do linfcito Th, que requer ainda a presena de interleucina-1 (IL-1) (ver Captulo 11, "O contexto ativador") fornecida por clulas dendrticas, macrfagos e, em menor quantidade, pelo linfcito B. Na verdade, as clulas apresentadoras mais eficientes expressam uma forma de IL-1 que permanece fixa membrana. Se ativado, o linfcito T auxiliar passa a secretar outras citocinas (IL-2,IL-3,IL-4, etc) necessrias ativao do linfcito B. Tabela 8.1 Molculas acessrias que se ligam a produtos do MHC ________________________________________________________________________ Classe de Atividade Produto do MHC Clulas em que se linfcito T imunolgica ao qual se liga expressa o produto _________________________________________________________________________ CD4 auxiliar classe II clulas apresentadoras CD8 supressora-citotxica classe I todas as clulas nucleadas __________________________________________________________________________

8.2 O processamento

68
Quando em repouso, o linfcito B expressa um nmero relativamente pequeno de receptores para citocinas na membrana. Este nmero aumenta muito quando o linfcito B induzido pelo entrelaamento (crosslinking) dos anticorpos de membrana por ligao a outras molculas (molculas de antgenos, por exemplo). Concomitantemente, o linfcito B passa a hiper-expressar os produtos de classe II do MHC. Isto o torna um alvo mais provvel para linfcitos Th. O contato direto do linfcito T auxiliar somado presena de IL-3, IL-4 e talvez outras citocinas transformam o linfcito B em um linfoblasto, que pode se dividir algumas vezes gerando linfoblastos que, ento, pela ao de outras citocinas, se diferenciam em plasmcitos secretando grandes quantidades de imunoglobulinas. Os plasmcitos so clulas terminais,no podem se diferenciar em outras clulas e vivem apenas algumas horas ou dias.
endocitose antgeno Ig Y Y Y Y Y Y membrana classe I peptdeo Y classe II peptdeo

YY YY YY

Y YY

vescula endoctica YY Y

gerao de peptdeos

&

conjugao com produtos do MHC

Figura 8.3 : Linfcitos B ligam molculas de antgeno, mas isto insuficiente para ativ-los. Linfcitos T requerem o "processamento e apresentao" do antgeno por outras clulas. A figura mostra produtos do MHC de classe II aos quais se ligam os linfcitos T-CD4+ (auxiliares). (ver Figura 8.2 ). A idia de que o antgeno reconhecido por sua "estranheza" , portanto, controversa, na medida em que um dos passos cruciais do processo de reconhecimento antignico a desmontagem do antgeno em fragmentos (ou seja, a descaracterizao de sua estranheza) e a posterior apresentao destes fragmentos ao linfcito T, unidos a molculas inteiramente familiares ao sistema imune: produtos do MHC. Estes fragmentos, os peptdeos, em geral, possuem de 10 a 20 aminocidos, mas alguns podem ser menores, outros muito maiores. Algumas molculas de protena podem ser apresentadas sem qualquer degradao, sem que se formem peptdeos. Uma macromolcula antignica pode dar origem a diversos fragmentos antignicos diferentes e muitos deles se originam de regies da molcula que no estavam expostas em sua configurao original (nativa) e, portanto, estavam fora do acesso dos anticorpos que ligaram a macromolcula clula processadora. Assim, o processamento no s descaracteriza a estranheza original como extrai do material estranho uma estranheza que no estava presente. Alm disto, ao englobar o complexo antgeno-anticorpo formado na membrana, a clula processadora produz tambm peptdeos resultantes da digesto do anticorpo e de produtos do MHC. A este nvel, no h como diferenciar entre os peptdeos das duas origens nem entre eles e os peptdeos resultantes do processo natural de renovao dos componentes moleculares da clula processadora. Os peptdeos se ligam s molculas do MHC ainda no citoplasma da clula apresentadora e, ao emergir na membrana, o produto do MHC j carrega o peptdeo encaixado. Todos os cristais de HLA-A2 (um produto de classe I do MHC humano) at hoje estudados possuam um peptdeo encaixado. A estabilidade molecular dos produtos do MHC parece depender da sua unio com os petdeos. Nas molculas de classe I, a presena de molculas de 2-microglobulina ( que representa as cadeias nas molculas de classe II), essencial para que todo o conjunto possa ser expresso na membrana da clula e a unio prvia com o peptdeo necessria para que a ligao com a 2-microglobulina ocorra. Tem sido tambm impossvel unir in vitro cadeias e de produtos de classe II e sugere-se que isto possa ser devido ausncia do encaixe

69
prvio do peptdeo que ocorre nos dois primeiros domnios ( 1 e 2) da cadeia . A unio da cadeia seria o detalhe final tornando a molcula apta a ser transportada para a membrana plasmtica. Anlises da cintica da interao peptdeos-produtos de classe II mostram um ritmo de dissociao bastante lento e evidncias cristalogrficas tambm indicam uma estabilidade muito grande desta combinao uma vez estabelecida. Por outro lado, a associao dos peptdeos aos produtos de classe II tambm muito lenta, exigindo um contato prolongado dos reagentes, se possvel, em concentraes elevadas. Isto sugere que a formao do complexo ocorra dentro de uma vescula, no citoplasma da clula apresentadora e no na superfcie da membrana, onde a eficcia do processo seria muito menor. Atualmente, j h outras evidncias de que este compartimento intracelular realmente existe. 8.3 A cadeia invariante e seu papel no processamento Um desenvolvimento recente e importante para a compreenso destes fenmenos foi a caracterizao do papel desempenhado por uma molcula, denominada cadeia invariante . Ao contrrio dos produtos de classe I e II, que apresentam um alto grau de polimorfismo gentico, este produto no varia nos diferentes tipos de MHC; da seu nome. A cadeia invariante codificada por um gene que no est ligado ao MHC (cromossoma 18 em camundongos, cromossoma 5 em humanos). Ela se liga s cadeias nascentes de produtos de classe II no retculo endoplsmico e inibe a ligao de peptdeos ali presentes a estes produtos. O mesmo no acontece com produtos de classe I que tendem, ento, a formar conjugados com peptdeos presentes no meio intracelular (Figura 8.4 ). A cadeia invariante parece ser importante tambm em favorecer o transporte dos produtos de classe II at o interior de vesculas endocticas, provindas da membrana celular e contendo, portanto, materiais presentes no meio extracelular ligados ou no a receptores da membrana. No interior desta vescula, o complexo formado entre a cadeia invariante e o produto de classe-II se dissocia e este ltimo se torna acessvel a peptdeos ali presentes. A conseqncia deste mecanismo que os produtos de classe I expressos na membrana celular de todas as clulas tendem a estar conjugados a peptdeos que se originaram no meio intracelular, enquanto que os produtos de classe II, expressos nas clulas apresentadoras, tendem a se ligar a peptdeos presentes nas vesculas endocticas e podem ter uma origem extracelular (Tabela 8.2 ).
Membrana plasmtica 2m

RNA

produtos de classe I com e peptdeos

cadeia invariante

peptdeos produtos de classe II com a cadeia invariante Golgi vescula endoctica

Retculo endoplsmico

Figura 8.4 : A participao da cadeia invariante do MHC durante o processamento. Ao contrrio da molcula de classe I, a molcula de classe II entra na via endoctica ainda ligada cadeia invariante. provavelmente no endossoma, devido ao pH e presena de enzimas, que a cadeia invariante se desliga do produto de classe II permitindo a ligao de peptdeos.

Tabela 8.2 Consequncias da unio da cadeia invariante com produtos de classe II _________________________________________________________ Produtos Unio com Local de formao Origem provvel

70
do MHC cadeia invariante dos conjugados dos peptdeos _________________________________________________________ classe I no retculo endoplsmico intracelular classe II sim vesculas endocticas extracelular ___________________________________________________________ 8.4 Peptdeos imunognicos e no imunognicos Neste processo de unio de produtos do MHC com peptdeos, muitos complexos diferentes so formados pela mesma clula apresentadora que, ento, apresenta uma grande variedade de conjugados s clulas em sua vizinhana. Alguns destes peptdeos conjugados so oriundos do antgeno, outros dos anticorpos, outros ainda de molculas no relacionadas. Para a clula apresentadora, o peptdeo no tem remetente nem destinatrio. A identidade do peptdeo apenas sua seqncia de aminocidos. Se assim , o que faz com que certos peptdeos sejam mais "imunognicos" que outros? O que torna animais de certas raas isognicas "bons" ou "maus" respondedores a um destes peptdeos? A explicao tradicional era a de que os animais "maus-respondedores" tinham uma falha, um "buraco" em seu repertrio de linfcitos Th, tornando-os incapazes de responderem "bem" a determinados antgenos pela ausncia dos linfcitos T correspondentes. Os conhecimentos atuais sobre a estrutura dos produtos do MHC permitem uma outra interpretao: a diferena entre "bons" e "maus-respondedores" pode ter origem na formao dos conjugados dos peptdeos com os produtos do MHC. Os produtos de classe I do MHC (por exemplo, a molculas de HLA-A2) so constitudos de uma cadeia (45 kd) com 3 domnios ( 1, 2, 3) de estrutura homloga aos domnios das imunoglobulinas. Esta cadeia est associada a uma cadeia (a molcula de 2 -microglobulina) que, como mencionamos, parece essencial para a expresso da molcula na membrana celular. Os produtos de classe II do MHC possuem tambm duas cadeias ( e ) que, diferentemente dos produtos de classe I, so de dimenses similares. Cada uma possui dois domnios: 1, 2, 1, 2. As pores finais das cadeias e esto ancoradas membrana por segmentos hidrofbicos e as molculas penetram at o citoplasma da clula. A ancoragem de produtos de classe I na membrana diferente e feita exclusivamente pelo domnio 3. A cadeia (a molcula de 2-microglobulina), embora prxima membrana, no est diretamente associada ela. Na cristalografia por raios-X a molcula de HLA-A2 revelou possuir uma reentrncia no topo, semelhante a uma cesta ou bolso que se supe seja o ponto de encaixe do peptdeo. Esta cesta formada pelos domnios 1 e 2. Oito segmentos destes dois domnios se combinam para formar uma fita -pregueada formando o fundo da cesta, enquanto que os lados da cesta so constitudos por duas -hlices, tambm dos domnios 1 e 2. Embora esta forma em cesta sugira ser a o ponto de encaixe do peptdeo, a sugesto mais forte deriva da natureza dos aminocidos encontrados nesta regio. A grande maioria dos resduos variveis dos produtos do MHC, responsveis pelo seu enorme polimorfismo gentico (pela existncia de numerosas variedades allicas destes produtos), esto na regio da cesta. Alguns dos resduos variveis aparecem no fundo da cesta (nas fitas -pregueadas), outros em suas paredes (nas -hlices), sugerindo que estes resduos fazem contato com o peptdeo. H tambm resduos variveis nos "lados" exteriores das hlices ou mesmo prximos a elas, fazendo pensar que estariam em posio de interagir com o receptor (TCR) do linfcito T. E no apenas lgico como tambm interessante constatar que exatamente a regio polimrfica dos produtos do MHC o stio de ligao dos peptdeos e, posteriormente, do receptor do linfcito T. Isto nos fornece uma explicao alternativa para a existncia dos "bons" e "maus"-respondedores a antgenos. Se estas raas tm stios de ligao (do peptdeo) diferentes (isto , MHC diferentes), a afinidade de ligao dos peptdeos variar de acordo com o MHC do indivduo. Esta hiptese foi confirmada pelos trabalhos de Buus e colaboradores com raas isognicas de camundongos. Um painel de peptdeos foi testado em sua afinidade de combinao com produtos de classe II do MHC extrados de animais "bons" e "maus"respondedores. Houve uma correlao entre uma alta afinidade de combinao de um dado produto de classe II (por ex., I-Ak) com um dado peptdeo da lisozima (peptdeo 46-61) e uma "boa-reatividade" lisozima. Esta seletividade dos produtos do MHC em ligar peptdeos no explica, isoladamente, a "alta" ou "baixa" reatividade porque h peptdeos que se ligam muito bem e no induzem respostas altas. Segundo Buus e colaboradores, haveria tambm uma influncia do repertrio de linfcitos T. Um dos problemas mais intrigantes da Imunologia moderna foi entender de que forma produtos do MHC (produtos dos genes Ir) influenciam a magnitude ou mesmo determinam a possibilidade de ocorrncia

71
de respostas imunes especficas. A dinmica do "processamento" de antgenos, agora elucidada, explica o fenmeno da "restrio pelo MHC" por dois mecanismos distintos. Primeiro, o MHC influencia no apenas a interao do linfcito T com o peptdeo como tambm, previamente, os tipos de peptdeos que, no citoplasma da clula apresentadora, podem se unir aos produtos do MHC; segundo, os peptdeos que no fizerem esta unio com um mnimo de afinidade no sero sequer trazidos membrana e no sero "apresentados" ao linfcito T. Por esta perspectiva, existe uma etapa de "processamento" antignico que se passa no citoplasma da clula apresentadora, na qual o antgeno digerido em fragmentos, e estes , ento, submetidos a uma seleo interna por sua capacidade de unio aos produtos do MHC. Uma espcie de traduo do externo no estranho interior, no sentido de que o antgeno primeiro desmontado, destitudo de sua estranheza original e transformado numa linguagem interna de peptdeos (o estranho interior). Em seguida, ele selecionado segundo critrios de relevncia prprios ao organismo (capacidade de unio ao MHC) e, finalmente, "apresentado" ao sistema imune. Esta "apresentao" feita em unio com molculas familiares ao sistema (produtos do MHC), porm, modificando-as. Estas molculas, sim, so tornadas estranhas. O sistema imune percorre um trajeto do externo sem sentido (o antgeno) para o estranho interior (o complexo peptdeo-produto do MHC), repleto de significado.

72 9. O contexto ativador
___________________________________ Nos ltimos anos, o desencadeamento de fenmenos imunolgicos, antes encarados como resultantes da interao de linfcitos especficos com o antgeno, se deslocou para um contexto ligado biologia celular. A interao de clulas apresentadoras com linfcitos T durante a "apresentao de antgenos", no pode ser dissociada do "processamento e apresentao" de componentes do prprio organismo. Peptdeos derivados dos auto-componentes, na realidade, competem por produtos do MHC com peptdeos derivados de antgenos. Quantitativamente, a reciclagem de componentes celulares torna a "apresentao" de auto-componentes muito mais freqente e comum que a de peptdeos derivados de antgenos. Assim, o "processamento/apresentao" de antgenos pode ser visto como um detalhe de mecanismos gerais de montagem/desmontagem de componentes celulares aos quais, episodicamente, antgenos so incorporados. O que descrevemos usualmente como "mecanismos de defesa" so interaes celulares que, ou so incorporadas fisiologia do organismo, em sua rotina metablica, ou se transformam em franca patologia. Neste e nos prximos captulos, trs aspectos importantes deste "contexto" necessrio ativao dos linfcitos so abordados, ressaltando sua complexidade e, ao mesmo tempo, sua harmonia: a importncia das citocinas na ativao celular; o papel de molculas de adeso importantes em colocar os linfcitos e outras clulas em condies de interagir e, finalmente, os mecanismos de morte celular , que muitas vezes resultam destas interaes. 9.1 A pluralidade de citocinas Nos ltimos anos, houve um enorme progresso na descrio de componentes celulares e moleculares destas interaes. Cerca de 100 aes celulares diferentes foram atribudas a interao com citocinas . Felizmente, no h uma citocina distinta para cada uma destas aes: muitos fenmenos dependem da atuao harmnica de muitas citocinas e/ou da seqncia de seu aparecimento. Como ilustrado na Figura 9.1 , muitas variedades de relaes entre clulas e citocinas j foram descritas. A ativao e a diferenciao dos linfcitos, etapas essenciais dos fenmenos imunolgicos, dependem da presena de vrias destas citocinas.

uma mesma citocina produzida por mais de umtipo celular macrfago IL-1

IFN IL-2 IL-3 citocinas diferentes tm as mesmas aes T uma mesma clula produz mais de uma citocina IL-4 IL-3 B B a mesma citocina age sobre mais de uma clula IL-2

clula dendrtica

Figura 9.1: A maioria das citocinas secretada por tipos diferentes de clulas e tem atividades biolgicas muito variadas;. Muitas destas atividades envolvem a promoo ou inibio da proliferao e diferenciao celulares; as mesmas a atividades podem ser ativadas por citocinas diferentes; de cada citocina as aes dependem da presena de outras citocinas. As primeiras citocinas de interesse imunolgico foram descritas, nos anos 60, como "fatores" solveis que linfcitos secretam sob a ao de lectinas . As lectinas foram originalmente descritas como protenas de origem vegetal dotadas de aes definidas sobre clulas animais (como a fitohemaglutinina do feijo, que aglutina hemcias). Como definidas atualmente, lectinas so protenas de origem vegetal, bacteriana ou animal que se ligam a polissacardeos. Cerca de 10 anos antes, "fatores" semelhantes haviam sido descritos no crescimento de neurnios

73
ou liberados por clulas infectadas por vrus (interferons) ou ainda importantes na formao de colnias de clulas hemopoiticas. Portanto, tais "fatores de crescimento" surgiram simultaneamente em muitas reas de pesquisa. Tem se tornado cada vez mais evidente que citocinas e "fatores de crescimento" que receberam seu nome por desempenharem uma determinada funo (por ex., "fator de necrose tumoral" (TNF) ou "fator de cresimento epitelial" (EGF)), na realidade, exercem muitas outras aes no organismo na dependncia do "contexto" em que surgem . Em outras palavras, estas substncias so multifuncionais . A denominao interleucina ( interleuquina, interleukin), abreviada IL, por exemplo, consagrada pelo uso (por ex., IL-1, IL-2, etc) e se refere ao de fatores liberados por leuccitos sobre outros leuccitos. A IL-2, antes descrita como um "fator de crescimento" para linfcitos T (era chamada TCGF, T-cell growth factor), age tambm sobre linfcitos B e macrfagos e ainda sobre o crescimento de clulas da glia no sistema nervoso. Reciprocamente, a IL-4, antes denominada BSF-1 (B-cell stimulating factor 1), age tambm sobre linfcitos T, granulcitos e macrfagos. A IL-1 estimula queratincitos, condrcitos, fibroblastos, atua sobre o sistema nervoso e sobre clulas endoteliais. "Fatores" elaborados por clulas no linfides, como a neuroleucina (neuroleukin), que isolada de msculos denervados e da glndula salivar, um potente estimulador da maturao de linfcitos B e os conduz secreo de imunoglobulinas. A neuroleucina tambm pode ser sintetizada por linfcitos T tratados com lectinas. A IL-6, que tem vrias aes inflamatrias e efeitos sobre os linfcitos B, sintetizada por fibroblastos e outras clulas. H, portanto, uma dependncia intensa e recproca entre clulas linfides e no-linfides. Um outro conjunto de molculas importante nesta interdependncia so os chamados neuropeptdeos , substncias com potentes aes farmacolgicas secretadas por neurnios, tais como a substncia P envolvida na gerao dos fenmenos dolorosos (P deriva de Pain, dor), a -endorfina e o VIP (vasoactive intestinal peptide), importante na fisiologia vascular do pulmo e outros rgos. Estas substncias, alm de agirem sobre neurnios, agem sobre clulas endoteliais, condrcitos, fibroblastos, clulas musculares lisas e linfcitos. A designao citocina , portanto, representa uma nova categoria de substncias a se juntar aos hormnios (como a insulina, a tireoxina, etc), os autacides (histamina, prostaglandinas, etc), os neurotransmissores (acetilcolina, dopamina, etc) e neuropeptdeos (VIP, substncia P, etc), todas substncias secretadas por uma clula com aes sobre outras clulas no organismo. Como atualmente definidas, as citocinas so glicoprotenas secretadas que agem de forma noenzimtica sobre outras clulas em baixas concentraes (nanomolar, picomolar). Nem mesmo esta simples definio deixa de ter excees: h formas de citocinas (por ex.,IL-1 ) que no so secretadas e algumas citocinas, como a IL-2 e a IL-1, agem sobre a prpria clula que as secretou (ao autcrina ). Muitas citocinas atuam sobre mais que uma variedade de receptor celular: geralmente um descrito como "baixa afinidade" e outro, de "alta afinidade", este ltimo, muitas vezes,formado pela unio de outra protena ao receptor de "baixa afinidade". Um elemento adicional de complexidade, reconhecido recentemente, a interao entre citocinas e a matriz extracelular . A aderncia de clulas a protenas da matriz extracelular (fibronectina, colgeno, proteoglicanos, etc) muitas vezes as induz a secretar citocinas. Reciprocamente, a ao de citocinas modifica a expresso de molculas de adeso pelas clulas. Componentes da matriz podem apresentar citocinas a clulas e a adeso celular pode influenciar a maneira com que as clulas respondem s citocinas. Na definio do contexto de atuao das citocinas importante considerar a presena de outras citocinas. Fisiologicamente, as citocinas agem em conjunto, e parte de nossas dificuldades atuais deriva da insistncia em estud-las uma a uma. Por exemplo, o TGF- (transforming growth factor beta) estimula o crescimento de fibroblastos na presena de PDGF (platelet derived growth factor), mas inibe este mesmo crescimento na presena do EGF (epidermal growth factor). Por outro lado, as aes de um fator dependem do estado de desenvolvimento da clula: o mesmo TGF- estimula a formao de colgeno por condrcitos de embries jovens e inibe esta formao em embries mais desenvolvidos. Isto pode depender da presena de outras citocinas nestes estgios embrionrios. A IL-4 pode estimular ou inibir o crescimento de uma variedade de clulas durante a hemopoiese na dependncia da presena da IL-3. A ao do TNF- (fator de necrose tumoral alfa), um dos mais potentes mediadores das reaes inflamatrias, depende da presena da IL-1 e do IFN- (interferon gama). Esta dependncia complexa, pois o TNF- libera IL-1 e a prpria IL-1 libera mais IL-1 de algumas clulas. A base celular e molecular do "contexto" de ao em conjunto das citocinas pode ser tambm muito

74
complexa. A ao de uma citocina em um receptor celular pode alterar a distribuio ou expresso de receptores para outras citocinas. O PDGF altera a distribuio e a afinidade dos receptores para o EGF. Por outro lado, fatores muito relacionados em funo podem ser muito diferentes em seqncias de aminocidos, se atuam atravs do mesmo receptor. Por exemplo, as duas formas de IL-1, denominadas IL1 e IL-1 , agem no mesmo receptor embora tenham apenas 25% de homologia. Esta homologia est, em parte, presente nas pores (C-terminais) implicadas nas aes biolgicas das IL-1. O EGF e o TGF- podem ambos reagir com o receptor de EGF (EGF-R). Como veremos no Captulo 10, o contexto de ao das citocinas depende ainda de uma grande variedade de molculas de adeso que permitem s clulas se ligar a outras clulas e matriz extracelular. Como a expresso de tais molculas de adeso na superfcie celular depende da ativao celular e esta, da presena de citocinas, torna-se evidente o carter circular do contexto que conduz ativao dos diversos tipos celulares.
ativao celular secreo de citocinas

expresso de molculas de adeso

Figura 9.2 : O contexto ativador depende da secreo de citocinas e da expresso de molculas de adeso. 9.2 Aspectos gerais da ativao celular A ativao celular deve ser entendida como uma seqncia de alteraes quantitativas e qualitativas do metabolismo celular, desencadeadas primariamente por interaes com os receptores da membrana plasmtica. O contato celular ntimo pode ser ajudado pelo desenvolvimento de microvilosidades na membrana celular. Atravs da interdigitao destas microvilosidades, a rea de contato entre duas clulas se amplia muito (Figura 9.3 ). Na rea de contato, receptores da membrana celular so acionados. Muitos destes receptores so protenas com trechos extensos que penetram o citoplasma (domnios citoplasmticos) e a fazem contato com enzimas que desencadeiam as fases secundrias da ativao (Figura 9.4 ). Estas modificaes enzimticas, por sua vez, atuam ainda sobre outras protenas que destravam processos nucleares levando expresso de novos produtos celulares e/ou modificaes da intensidade da expresso de outros produtos (ver Figura 9.7 ).
clula 1 microvilosidades dimetro 200 nm espao extra-celular "bolsos" onde pode ocorrer "secreo dirigida"

clula 2

Figura 9.3: Clulas ativadas podem desenvolver microvilosidades na membrana que permitem ntimo contato entre duas clulas por interdigitao . As o microvilosidades medem 200 nm de dimetro. tambm importante na Isto "secreo dirigida" de citocinas (ver 9.11). Figura As fases secundrias da ativao dependem de enzimas que fosforilam (e desfosforilam) protenas em aminocidos especiais (tirosino-quinases, tirosino-fosfatases). Alguns receptores da membrana, como

75
os receptores clonais dos linfcitos T (TCRs) e as imunoglobulinas que atuam como receptores em linfcitos B virgens (mIgM e mIgD) possuem domnios citoplasmticos muito curtos e no promovem diretamente as modificaes ativadoras no citoplasma. Nestes casos, o receptor est associado a outras protenas que fazem esta conexo com as enzimas do citoplasma. Por exemplo, o TCR est sempre associado a um complexo de protenas, conhecido como complexo CD3, estas sim com extensos domnios citoplasmticos que so fosforilados nas fases iniciais da ativao via TCR.

linfcito B imunoglobulina produto de classe II MHC peptdeo

linfcito T

TCR

LFA-3

ICAM-1

IgM- Ig-

CD4 LFA-1 CD2 complexo CD3

ativao

ativao

ativao

Figura 9.4: A ativao linfocitria envolve protenas de membrana. No vrias linfcito T, molculas do complexo CD3 ou CD4 transmitem ao citoplasma modificaes enzimticas que podem resultar na ativao (setas marcadas da clula * ). Algo semelhante pode se dar nos linfcitos B, atravs de protenas denominadas Ig- e IgM- . Outras molculas estabilizam a ligao do TcR ao peptdeo apresentado pelo produto do na clula apresentadora como, por exemplo, os MHC pareamentos CD4:::MHC-II ; LFA-1:::ICAM-1; LFA-3:::CD2. Molculas de adeso podem estar implicadas na ativao celular atravs da sua associao a quinases e fostatases (enzimas que fosforilam e desfosforilam protenas criando um mecanismo de transmisso de sinais para o ncleo da clula). As pores citoplasmticas de molculas de CD4 e CD8 esto associadas a tirosino-quinases. Por outro lado, a molcula de adeso CD45 est associada a uma tirosino-fosfatase que age sobre as tirosinoquinases de CD4 e CD8. H indicaes recentes de que tambm as Igs nos linfcitos B esto associadas a protenas (Ig e IgM- ) que, como o CD3 nos linfcitos T, so mediadoras da ativao citoplasmtica (Figura 9.4 ). O componente crtico nas fases iniciais da ativao o fosfatiditil-inositol 4,5-bifosfato (abreviado InsP2 ) que existe em minsculas quantidades na membrana celular. A ocupao dos receptores adequados na membrana celular ativa uma fosfodiesterase da membrana (fosfolipase C, ou PLC) que age sobre o InsP2 e gera dois produtos importantes nas etapas subseqentes da ativao celular: o inositol 1,4,5-trifosfato (ou InsP 3 ) e o diacilglicerol (DAG). O InsP3 liberta Ca++ de reservatrios citoplasmticos, provavelmente do retculo endoplsmico e eleva a concentrao de Ca++ no citoplasma. Isto ativa proteno-quinases clcio-dependentes. As protenoquinases fosforilam vrias protenas celulares alterando suas propriedades. Entre as proteno-quinases, est a proteno-quinase C (PKC), uma enzima que ativada por unio com o DAG, que eleva a afinidade da enzima por Ca++ . Durante a ativao, a PKC se desloca do citoplasma para a membrana celular. Durante a ativao da PKC, possvel que se forme um complexo contendo 4 molculas: a PKC, DAG, Ca++ e uma molcula de fosfolipdio. Dos fosfolipdios de membrana, a fosfatidil-serina o mais efetivo em ativar a PKC.

76
Interao ativadora sobre receptores de membrana membrana celular ativa PLC Insp3 mobiliza Ca++ eleva [Ca++] ncleo novos receptores de membrana ativa proteno-quinases InsP2 DAG PKC fosforilao de vrias protenas incluindo enzima de troca Na+/H+

citosol

PKC fosforilao de outras protenas

eleva pH

regulao da expresso gnica

ciclinas?

mitose?

Figura 9.5: Ativao de linfcitos T in vitro. Diversos tipos de perturbaes, iniciadas pelo contato TCR com o conjugado peptdeo-MHC em clulas do apresentadoras ou anticorpos dirigidos contra uma de vrias protenas de membrana, determinam a ativao e o deslovamento de enzimas (PKC, proteno quinase C) do citoplasma para a membrana; isto na fosforilao de vrias resulta protenas e culmina em aes sobre o ncleo celular. Entre as protenas fosforiladas pela PKC durante a ativao de linfcitos T esto o receptor de IL-2 (abreviado IL-2R) e as cadeias gama e delta do complexo CD3. So tambm fosforiladas enzimas envolvidas nas trocas H+ /Na + . Isto tem como conseqncia uma elevao do pH celular evento j registrado em outras ocasies que favorecem a mitose. Lectinas mitognicas, como a concanavalina-A (Con-A) e a fitohemaglutinina (PHA), por exemplo, atuam sobre estas enzimas e provocam um aumento do pH celular (Figura 9.6 ). Os dois produtos da hidrlise do InsP2 , portanto, colaboram para a ativao da PKC diretamente (DAG) ou provocando uma elevao da concentrao de Ca++ ([Ca++]). Experimentalmente, a [Ca++] celular pode ser elevada por exposio a ionforos de Ca, substncias que determinam a entrada de Ca++ na clula. Uma elevao suficiente da [Ca++ ] pode ativar irreversivelmente a PKC pela ativao de uma protease dependente de Ca++ , denominada calpana. O DAG pode ser substitudo por steres forblicos, como o TPA (tetradecanoil-forbol-13-acetato) ou o PMA (forbol-miristoilacetato), substncias que agem tambm como promotores da transformao neoplsica. O TPA substitui o DAG e ativa diretamente a PKC (Figura 9.8 ).
ionforos de Ca++ interaes ativadoras via receptores de membrana promotores tumorais (steres forblicos)

eleva [Ca++] ativa calpana

DAG ativa PKC

Figura 9.6: Os dois produtos da hidrlise do colaboram na ativao da InsP2 proteno-quinase C (PKC). Tanto a elevao da concentrao de Ca++ (conseguida por ionforos), quanto a presena de steres forblicos, semelhantes ao DAG, podem ser usadas para ativar linfcitos T in vitro. A Figura 9.7 mostra um esquema da ativao celular iniciada pelo contato da clula com elementos de seu microambiente, por exemplo, substncias (citocinas) secretadas por outras clulas em sua vizinhana ou o contato direto com a membrana de outras clulas.

77

agonistas novos "receptores"

novos agonistas

membrana

"receptores" ativao de enzimas expresso de novos genes

novo espectro de sensibilidade

citosol ncleo

novas aes celulares

Figura 9.7: A ativao de uma clula, levando-a, por exemplo, a secretar citocinas, se dividir, ou a se diferenciar (uma seqncia coordenadaque de eventos muda um tipo celular em outro) se faz pela concatenao de mudanas na membrana, no citoplasma e no ncleo. 9.3 O ciclo celular Um dos resultados importantes da ativao celular, no caso dos linfcitos, o desencadeamento da diviso celular. Por esta razo, culturas de linfcitos so amplamente empregadas para elucidar aspectos bsicos da mitose. Para entrar em mitose, a clula precisa replicar fielmente seu material gentico e duplicar seus demais componentes, caso contrrio o tamanho celular diminuiria a cada mitose. A vida celular, dividida em fases de repouso e fases de multiplicao, pode ser representada no ciclo celular (Figura 9.8 ) O ciclo est dividido em 4 fases, denominadas M (mitose), G1, S (sntese de DNA) e G2 (entre o trmino da sntese de DNA e a mitose). A fase G1 a fase de durao mais varivel, de acordo com o tipo celular: clulas de crescimento lento tm um perodo G1 mais longo, clulas de crescimento muito rpido praticamente no tm G1. As clulas precursoras da medula ssea tm o ciclo celular mais curto conhecido para clulas dos vertebrados, 18 horas. Clulas do epitlio intestinal requerem 40-48 horas, as do epitlio brnquico, 220 horas. Algumas clulas, como os linfcitos, entram em uma fase "dormente" (Go) onde no esto em ciclo nem morrendo e de onde podem reentrar em ciclo. Clulas em Go interrompem completamente a sntese de DNA.
clulas em ciclo etc G2 (ciclinas) S "Start" ciclinas G1 clulas em G 0 G0 M clulas que no se dividem mais

evento ativador etc

Figura 9.8: O ciclo celular est dividido em 4 fases: M (mitose), G1, S (sntese de DNA) e G2. A regulao dos processos de expresso gnica parece depender da ativao de protenas denominadas . Sabia-se que ciclinas so ativadas ciclinas as em G2; recentemente, demonstrou-se que elas sotambm em G1, em um ativadas ponto denominado "Start", no qual a clula fica predestinada a se dividir.

78
Para reiniciar o processo de sntese, a clula requer a presena de fatores estimuladores em seu microambiente (por ex., citocinas) at um ponto da fase G1 denominado "Start" a partir do qual o encadeamento de eventos que culminaro na mitose irreversvel, mesmo na ausncia de estimulao adicional. Supem-se, hoje em dia, que no ponto "Start" so sintetizadas ciclinas que da em diante conduzem a maquinria celular mitose. As ciclinas ativam proteno-quinases e, atravs delas, uma variedade de outras protenas celulares importantes na conexo entre a maquinria metablica da membrana e do citoplasma com os processos de expresso gnica no ncleo (Figura 9.9 ). H um grande interesse atual sobres as ciclinas do ponto "Start" porque elas podem estar envolvidas no desenvolvimento do cncer. O produto de um gene localizado na banda q3 do cromossoma 11 humano implicado na gerao de um tumor benigno da paratireide foi identificado com sendo uma ciclina. Anormalidades na regio llq3 do genoma j haviam sido notadas no cncer de mama e em leucemias. O retinoblastoma humano, um tumor de retina de incidncia muito rara, foi um dos primeiros tumores onde se comprovou a importncia de fatores genticos. Em 1987, o gene responsvel, denominado Rb (retinoblastoma), foi clonado. A perda ou inativao deste gene est envolvida na gerao de outros tumores, alm do tumor de retina: tumores de mama, do pulmo e talvez outros. Resultados recentes indicam que o produto do gene Rb uma protena que conecta a maquinria bioqumica da clula aos processos que regulam a ativao gnica. Quando o ciclo celular ativado, o produto do gene Rb (protena Rb) desencadeia as modificaes nucleares necessrias para iniciar a mitose. Em clulas em Go ou G1, a protena Rb no est fosforilada e, nesta forma, parece capaz de suprimir o crescimento celular; quando ela fosforilada por proteno-quinases, esta ao supressora desaparece. A natureza exata da supresso exercida pela Rb-protena ainda obscura, mas possvel que ela se deva ligao a um fator de transcrio denominado E2 F. Ela parece se ligar tambm ao produto do oncogene myc , que parte de um complexo de protenas que regula a transcrio. A idia, portanto, que a Rb-protena est normalmente ligada ao E 2 F e outros fatores de transcrio, mas perde esta ligao quando fosforilada e, ento, o ciclo celular ativado. No retinoblastoma, as pessoas geneticamente afetadas teriam uma forma defeituosa do gene Rb deixando os fatores de transcrio permanentemente livres. Protenas oncognicas de vrus parecem capazes de competir com o E 2 F pela ligao com a Rb-protena.

ciclinas

proteno-quinases

regulao da expresso gnica

regulao do ciclo celular

Figura 9.9: As ciclinas representam elos importantes entre as atividades do citoplasma e do ncleo celular. 9.4 O pareamento celular A adeso clula-clula pode ser encarada como o aspecto mais bsico da constituio dos organismos multicelulares. Obviamente, a manuteno da forma dos diversos rgos e tecidos depende da adeso celular. Um aspecto menos bvio que o desenvolvimento do organismo, as transformaes sofridas por cada clula so determinadas por interaes desta clula com outra ou com estruturas da matriz extra-celular. A adeso clula-clula iniciada pelo pareamento de molculas de membrana complementares. Este pareamento determina modificaes em uma ou ambas as clulas atravs de processos bioqumicos que vo da membrana ao ncleo e de volta membrana. Esta "ativao" celular e a adeso que a desencadeou so tratadas como fenmenos distintos mas, na realidade, so duas faces de um mesmo fenmeno. Um dos fenmenos iniciais na adeso clula-clula o desencadeamento mtuo da formao de "calotas" (mutual "capping") resultante da convergncia das molculas que se pareiam para uma mesma regio das clulas. Esta convergncia ocorre porque o pareamento intercelular de um pequeno nmero de molculas complementares reduz a energia livre necessria a formao de pares adicionais, acabando por

79
criar uma adeso intercelular estvel (Figura 9.10 ). Uma adeso intercelular estvel pode resultar no desenvolvimento de microvilosidades que aumentam muito a rea de contato entre as clulas (Figura 9.3 ). A adeso clula-clula se inicia atravs de um par de molculas complementares, mas, uma vez estabelecido o pareamento inicial, pontes intercelulares de molculas de outra natureza, que tambm apresentam complementaridades, podem se formar, e usualmente se formam ( Figura 9.10 ).
clula 1

clula 2

(ativao)

Figura 9.10: Um pareamento inicial e instvel de pequeno nmero de molculas complementares reduz a energia livre para o encontro adicionais de de pares molculas do mesmo tipo, ou de tipos diferentes. O pareamento inicial pode resultar na "ativao" de outras molculas capazes de estabelecer um pareamento mais estvel por expor a clula pareada a substncias ativadoras secretadas pela outra clula (como citocinas) ou substncias presentes naquela vizinhana. Uma variante importante deste processo pode surgir quando uma das molculas pareadas, ao se parear com molculas na outra clula, muda de forma e adquire afinidade para molculas presentes na mesma membrana. Por exemplo, as molculas de TCR e CD4 no esto associadas nos linfcitos T isolados, mas quando o complexo TCR-CD3 se liga ao complexo MHC-peptdeo em uma clula apresentadora, o TCR muda de forma e aumenta sua afinidade para molculas de CD4. Molculas de CD4 unidas ao TCR ento se ligam a pores invariantes do complexo MHC-peptdeo na clula apresentadora, estabilizando a adeso. Isto tem tambm consequncias na ativao do linfcito T j que as molculas de CD4 esto ligadas a uma tirosino-quinase do citoplasma (p56lck ), similar tirosino-quinase associada ao complexo CD3 denominada (p59lyn).(ver Figura 9.4 )
clula alvo

T-citotxico

Figura 9.11: A secreo dirigida. Produtos de uma clulasecretados em so "bolsos" formados entre as membranas das pareadas e no ao redor de toda clulas a clula. Na secreo dirigida, a clula secretora precisa reorientar o aparelho de Golgi perinuclear, atravs de uma estrutura conhecida como centro organizador de microtbulos (MTOC, microtubule organizing center).

80
A adeso clula-clula pode resultar na ativao de uma ou ambas as clulas aderidas por dois mecanismos distintos. O primeiro ocupao direta dos receptores de membrana com repercusses nas enzimas do citoplasma e da membrana. O segundo a "secreo dirigida", pela qual uma clula secreta produtos ativos nos estreitos "bolsos" formados pela aposio das duas membranas ( Figura 9.11 ). Usualmente pensamos na ocupao dos receptores da membrana por ligantes solveis presentes na vizinhana da clula. Mas h razes para supor que molculas que permanecem como parte integral da membrana de outra clula podem funciuonar como estimuladoras. O que ocorre com o fator de crescimento epitelial (EGF) serve de exemplo. O EGF uma protena pequena (53 aminocidos) que ao interagir com seu receptor (EGF-R) na membrana de clulas epiteliais, faz com que este ative tirosino-quinases citoplasmticas desencadeando processos que eventualmente culminam na mitose da clula. O EGF sintetizado como uma grande molcula, denominada pr-pr-EGF (com cerca de 1200 aminocidos), do qual o EGF deriva por protelise. Alm da seqncia do EGF, o pr-pr-EGF contm 8 outras seqncias similares ao EGF. Uma outra citocina denominada TGF- (transforming growth factor-alfa) tambm existe em uma forma solvel (com 50 aminocidos) e numa protena de membrana mais longa (pr-TGF- ) de onde o TGF- deriva por protelise. O TGF- pode se ligar ao EGF-R e ativar a clula como se fosse o EGF. Na realidade, no se sabe se o TGF- possui um receptor prprio. Aqui chegamos ao ponto importante: experincias de transfeco recentes demonstram que o prprio pr-TGF- interage com o EGF-R. Isto importante, porque uma grande variedade de citocinas tm precursores ligados membrana. Fica criada a possibilidade de que a adeso e a ativao sejam indissociveis como fenmenos biolgicos. Macrfagos, por exemplo, quando ativados, hiper-expressam uma forma de interleucina-1 (IL-1 ) que permanece ancorada membrana e molecularmente diferente da forma secretada (IL-1). O contato de linfcitos T auxiliares com a IL-1 uma das razes pelas quais o contato celular direto importante na ativao linfocitria. 9.5 A adeso de linfcitos T-CD4+ e linfcitos B Diversos pares de molculas complementares participam da unio entre linfcitos T auxiliares (CD4+) e linfcitos B que pode culminar na proliferao e diferenciao do linfcito B em plasmcitos secretando imunoglobulinas, apenas alguns dos quais esto sumarizados na Tabela 9.1 . Tabela 9.1 Pareamentos moleculares entre linfcitos B e linfcitos T auxiliares ___________________________________________________ Linfcito B Linfcito T CD4+ ___________________________________________________ Ig MHC classe II / peptdeo TCR MHC classe II (poro invariante) CD4 ICAM-1, ICAM-2 LFA-1 LFA-3 CD2 ___________________________________________________ O pareamento B-T precedido da captao de algum material (antgeno, auto-componente ou idiotipo) pelas Igs de membrana do linfcito B. Protenas presentes no material captado e internalizado so processadas e apresentadas na membrana como peptdeos conjugados a produtos de classe II do MHC. Durante este processo (a "induo"), produtos de classe II do MHC passam a ser hiper-expressos na membrana do linfcito B. A primeira adeso estvel entre os linfcitos T e B depende do pareamento LFA-1::: ICAM-1 ou ICAM-2, mas este pareamento no ocorre sem que antes haja um pareamento instvel entre o TCR e o complexo MHC/peptdeo que, aparentemente, altera a configurao de molculas de LFA-1, aumentando sua afinidade para ICAM-1 e ICAM-2. Este mesmo sinal provoca uma associao de molculas de LFA-1 com molculas de talina presentes no citosol. Esta ligao envolve o citoesqueleto do linfcito T no processo de adeso, uma modificao que se tornar importante, horas depois, na "secreo dirigida" de citocinas sobre a membrana do linfcito B. Pode ser que o sinal inicial dado pela interao TCRMHC/peptdeo envolva a ativao da proteina-quinase-C (PKC), pois o tratamento de linfcitos T com forbol miristoil-acetato (PMA), um ativador da PKC, provoca a ligao do LFA-1 da membrana com a talina do citosol.

81
O sinal inicial da interao TCR-MHC/peptdeo insuficiente para reorientar o complexo de Golgi e o MTOC (microtubule organizing center), necessrios "secreo dirigida" de citocinas pelo linfcito T, sem a qual a ativao do linfcito B no ocorrer. Para que isto ocorra, novos pares TCR-MHC/peptdeo devem se formar. Neste ponto, ocorre um aumento da afinidade do TCR pelas molculas de CD4, at ento livres na membrana. Aps a associao ao TCR, as molculas de CD4 se ligam a pores invariantes do MHC. Isto no apenas estabiliza a adeso, como ativa tirosino-quinases associadas ao CD4. A ativao do linfcito B depende da "secreo dirigida" de citocinas, um evento mais tardio que requer a permanncia do pareamento dos dois linfcitos por vrias horas e a reorientao do aparelho de Golgi do linfcito T. 9.6 Dois tipos de linfcitos T auxiliares? Na histria da medicina experimental, diversas vezes um achado patolgico forneceu as pistas iniciais para achados fisiolgicos importantes. No caso dos linfcitos T, pode haver ocorrido isto recentemente. No estudo da leishmaniose experimental em camundongos, descobriu-se que certas raas, embora capazes de infiltrar as leses no ponto de inoculao com muitos linfcitos T CD4+, eram muito mais susceptveis que outras. Quando as citocinas secretadas pelos linfcitos T CD4+ colhidos de raas susceptveis e resistentes foram comparadas, constatou-se que, neste aspecto, as raas eram tambm muito diferentes (Figura 9.12 ).

inibe IL-2 Th1 IFN- IL-10 inibe Th2 IL-4 IL-5

Figura 9.12: Linfcitos Th1 e Th2. Depois de experincias confirmatrias, na leishmaniose e em outros sistemas experimentais, props-se a existncia de dois sub-tipos de linfcitos T auxiliares (T-helpers), designados Th1 e Th2, ambas CD4+ capazes, porm, de secretar citocinas diferentes. Os linfcitos Th1secretariam IFN- e IL-2, principalmente, enquanto que os linfcitos TH2 secretariam principalmente IL-4,IL-5 e IL-10. Isto faria com que estes dois sub-tipos de linfcitos CD4+ pudessem se regular, mutuamente, desde que o IFN- inibe a secreo de IL-4 e IL-5 e IL-10 e, reciprocamente, a IL-10 inibe a secreo de IFN- e IL-2 (Figura 9.12 ). Atravs da secreo de IFN- , os linfcitos Th1 estariam envolvidos, principalmente, no auxlio a outros linfcitos T, atravs da IL-2, e a macrfagos, atravs do IFN- . Por sua vez, os linfcitos Th2 estariam envolvidos, principalmente, no auxlio a linfcitos B, atravs da IL-4 e da IL-5. preciso notar que linfcitos B tambm podem ser ativados via IL-2, e isto faz com que tanto clulas Th1 quanto Th2 possam ativ-los. A resistncia dos camundongos leishmaniose experimental seria devida aos linfcitos Th1, que ativariam os macrfagos infectados pelas leishmanias, causando sua destruio, enquanto que os camundongos das raas suscetveis infiltrariam as leses com linfcitos Th2, ineficientes neste processo de defesa. Os linfcitos Th1 e suas citocinas seriam os mais envolvidos na produo de leses de hipersensibilidade de tipo retardado (tipo IV), como as que ocorrem na tuberculose (ver Captulo 18, pag.178). Por sua vez, atravs da produo de IL-4 e IL-5, os linfcitos Th2 seriam muito importantes na troca de isotipos (ver Captulo 5 ) que conduz sntese de IgG1 e, principalmente, IgE. Muito recentemente, tcnicas de engenharia gentica ("knock out" de genes) permitiram obter camundongos sem os genes da IL-4. Em tais animais, a sntese de IgG1 foi muito reduzida e a sntese de IgE completamente abolida. As experincias de "knock out" dos genes da IL-4 foram muito significativas tendo em vista que o "knock out" de genes da IL-2, uma citocina que desempenha um papel central na fisiologia dos linfcitos T, resultou em camundongos que no demonstraram anormalidades maiores, pelo menos at serem adultos jovens.

82
9.7 Linfcitos T CD8+: supresso e citotoxicidade Em camundongos produzidos aps o "knock out" do gene da 2-microglobulina, a ausncia da 2microglobulina resulta, portanto, em animais desprovidos de produtos de classe I do MHC pois a b2 microglobulina uma protena necessria expresso dos produtos de classe I do MHC (Captulo 7). Surpreendentemente, estes animais, exceto por algumas anormalidades nos nveis de citocinas secretados e no nvel de imunoglobulinas naturais, so aparentemente normais. Aumentos significativos na suscetibilidade a vrus, ou a tumores espontneos, por exemplo, no foram observados. Isto nos conduz a um outro tipo de problema ainda no resolvido pela Imunologia: o papel fisiolgico dos linfcitos CD8+. A tendncia mais usual nas abordagens introdutrias Imunologia qualifica a atividade dos linfcitos T CD8+ como antagnica de linfcitos CD4+. Alm disto, duas funes so atribudas a estes linfcitos: a supresso e a citotoxicidade. A supresso teria sua razo de ser justificada na necessidade de controlar a magnitude das respostas imunes especficas, enquanto que a citotoxicidade seria justificada pela necessidade de destruir clulas parasitadas por vrus e clulas neoplsicas que apresentassem neo-antgenos de membrana. Estas expectativas, como veremos a seguir, carecem de uma fundamentao experimental adequada at o presente. Embora a ao citotxica de linfcitos T CD8+ contra, por exemplo, alvos alognicos possa ser facilmente demonstrada por ensaios in vitro, nunca foi possvel demonstrar que estas clulas so os elementos cruciais para a rejeio de transplantes alognicos in vivo. Pelo contrrio, em experincias diretas, nas quais linfcitos alorreativos foram isolados em um separador celular (cell sorter) e ento transferidos para hospedeiros portando um transplante de pele, foram CD4+ e no CD8+ os linfcitos capazes de acelerar a rejeio do transplante. Na realidade, transplantes de pele rejeitados sofrem uma morte isqumica, resultado de leses ao endotlio alognico que, quando ativado, passa a hiper-expressar produtos de classe II do MHC e se tornam alvos para linfcitos T CD4+ alo-reativos. A ao supressora dos linfcitos T CD8+ complicada por um fator adicional: a existncia de linfcitos T alm de clulas NK (natural killer cells, ver Captulo 11 ) que so tambm CD8+. 9.8 Clulas formadoras de placa Uma tcnica, em particular, merece uma meno em separado, porque sua inveno mudou as perspectivas de anlise das clulas envolvidas nas atividades imunolgicas. Criada nos anos 60 por Niels Jerne, a tcnica de deteco e enumerao in vitro de clulas secretando anticorpos (clulas formadoras de placas ou PFC s, plaque-forming cells) est sumarizada na Figura 9.13 .
hemcias so lisadas pelo complemento quando prximas s clulas produzindo anticorpos dias hemcias de carneiro

bao placas claras surgem no agar opaco e vermelho

hemcias + gar + complemento +

suspenso celular

Figura 9.13: Enumerao de clulas secretoras de anticorpos (PFCs) ilustrada na imunizao de camundongos contra hemcias de carneiro. a imunizao, o aps Dias bao (ou outro rgo linfide) transformado em uma suspenso celular qual so misturadas as hemcias, gar-gar e uma diluio fresco de cobaia (ou soro de coelho) como fonte de complemento. Aps a gelificaoclulas do bao e gar, do hemcias imobilizadas na rede do gel, so incubadas por algumasestufa numa horas a 37C. As clulas secretoras de anticorpos anti-hemcias reagem com as hemcias sua volta e as sensibilizam a lise pelas enzimas do sistema complemento. para Quando elas so lisadas, pequenos orifcios claros (as "placas") aparecem no gel vermelho e podem ser contados a enumerao das clulas secretoras de para

83
anticorpos presentes na suspenso de clulas linfides. Diversas modalidades da tcnica foram desenvolvidas atravs dos anos. Em sua proposta inicial, Jerne j demonstrava a possibilidade de distingir clulas formadoras de anticorpos IgM de clulas secretoras de anticorpos de outros isotipos, por exemplo, IgG. As primeiras, PFCs de IgM, so enumeradas em placas "diretas", como na descrio da Figura 9.13 . As PFCs criadas por anticorpos IgG requerem a incorporao de uma anticorpo anti-IgG (por exemplo, coelho anti-IgG de camundongo) na mistura de reagentes. Esta diferena se deve maior eficincia dos anticorpos IgM em induzir a lise das hemcias. Outras modificao da tcnica permitem enumerar apenas as clulas formadoras de anticorpos de um dado isotipo, por exemplo, IgG2a ou enumerar todas as clulas secretoras de imunoglobulinas independente de sua especificidade.

1 10. A migrao de linfcitos *

__________________________ 10.1 O fluxo de linfa O sangue e a linfa, os fluidos circulantes que permeiam todos ou quase todos os tecidos so as partes mais internas do organismo. Flutuando no sangue ou na linfa, uma clula est potencialmente em todos os lugares e em nenhum lugar do corpo. Algumas das clulas a presentes, como as hemcias, transportam gases respiratrios; outras, como os leuccitos neutrfilos, passam um perodo fugaz na circulao e deixam os vasos para morrer nos tecidos horas depois. O comportamento dos linfcitos diferente. Em contraste com as hemcias e leuccitos, eles no so clulas terminais. A maioria dos linfcitos recm-produzidos so clulas que entram em circulao em repouso metablico e tm vida curta, mas que podem deixar o estado dormente (Go) em que se encontram e entrar novamente em ciclo mittico. Para que isto ocorra, os linfcitos precisam entrar em contacto com citocinas produzidas em interaes ativadoras. Tais interaes no podem se dar na circulao, pois envolvem a adeso celular e o encadeamento preciso de uma srie de eventos. A maioria das interaes ativadoras ocorre no interior de rgos linfides ou no tecido linfide associado s mucosas, principalmente na mucosa do intestino delgado, mas, em condies anormais, podem ocorrer tambm em reas inflamadas de qualquer tecido. A circulao de sangue e a circulao de linfa esto integradas de uma maneira muito caracterstica que, nos mamferos e na maioria das aves, envolve a filtrao da linfa em rgos especiais: os linfonodos ou gnglios linfticos. A circulao linftica est esquematizada nas Figuras 10.1 a 10-3 .

Figura 10.1: A coleta de linfa nos tecidos feita por vasos linfticos de contornos irregulares com uma extremidade cega (fechada),vlvulas que dotados de asseguram o sentido centrpeto do fluxo de linfa. A linfa coletada nos tecidos conduzida a linfonodos pelos vasos aferentes. Durante a inflamao de aguda, fibras colgeno mantm os vasos linfticos locais abertos mesmo contra uma presso aumentada nos tecidos. Isto aumenta muito o fluxo de lquido para dos o interior linfticos. A linfa coletada dos tecidos por vasos linfticos que tm uma extremidade fechada (em "dedo de luva"). O lquido extracelular (a "linfa dos tecidos") penetra nestes vasos movida por diferenas de presso (Figura 10.2 ). Quando uma regio se inflama, fibras de colgeno da parede dos vasos linfticos e ancoradas nos tecidos se contraem e, como resultado, abrem os vasos linfticos aumentando muito o diferencial de presso e, portanto, o fluxo de linfa. Por exemplo, no co em repouso, a presso no vaso linftico que ascende a perna praticamente nula; alguns minutos depois de megulhar a perna em gua a 45-50C, a presso de linfa se eleva a 200mm de gua, e o fluxo de linfa aumenta cerca de 30 vezes. Nas reaes inflamatrias o organismo "lava" a regio inflamada com plasma e clulas, usando vasos sanguneos (vnulas) como torneiras e vasos linfticos como ralos. ________________________ * Este captulo inclui algumas anotaes feitas durante o curso sobre "Inflamao" ministrado pelos Profs. Henrique Lenzi e Jane Lenzi em julho/89 na FIOCRUZ, Rio de Janeiro.

2
A circulao da linfa vinda dos tecidos atravessa uma cadeia de linfonodos (Figura 10.2 ) antes de ser retornada circulao venosa (Figura 10.3 ).A linfa se forma nos tecidos onde constitui o lquido extracelular (Figura 10.1 ). Dos tecidos, a linfa coletada em vasos linfticos (Figura 10.2 ), atravessa os linfonodos e devolvida circulao sangunea atravs do conduto torcico.
corao artrias tecidos AE pulmo AD VE VD

veias conduto torcico linfonodos

linfa linfonodo

Figura 10.2. Esquema geral da circulao do sangue e da linfa.

Linfonodo vasos aferentes

linfa dos tecidos vlvulas

Vasos linfticos contornos irregulares

fluxo no sentido centrpeto vlvulas

cortex paracortex medula vaso eferente

trmino em "dedo de luva" nos tecidos linfa dos tecidos

vlvulas

linfa

Figura 10.3: Esquema da estrutura de linfonodos e vasos linfticos. O gnglio dividido em 3 grandes regies: crtex, paracrtex e medula. H vrios geralmente vasos aferentes e apenas vaso eferente que conduz a outro linfonodo e assim um sucessivamente at que a linfa retornada circulao venosa pelo conduto torcico. Os vasos linfticos so dotados de vlvulas queoasseguram linfa fluxo de no sentido centrpeto. Os diferentes tipos de clulas do sistema imune se distribuem em diferentes regies dos linfonodos (Figura 10.4 ). Os macrfagos, por exemplo, forram os seios marginais onde desemboca a linfa dos vasos aferentes e, em menor concentrao, existem por todo o linfonodo. Os linfcitos B esto concentrados no crtex, em folculos, onde, quando ativados, do origem aos chamados centros germinativos. As clulas dendrticas formam um "domo" nos folculos do crtex. Os plasmcitos, ao se diferenciarem, deslocam-se da crtex para os cordes da medula do linfonodo. Os linfcitos T, por sua vez, esto concentrados no paracrtex, onde se localizam as veias de epitlio alto (HEV , high endothelial venules) atravs das quais os linfcitos retornam da circulao sangunea ao tecido linfide. Com exceo do bao, todo o tecido linfide possui HEVs com caractersticas que tornam possvel a aderncia e a passagem de linfcitos (Figura 10.7 ).

Linfcitos B

Linfcitos T

Plasmcitos

Clulas dendrticas

Figura 10.4: Os diferentes tipos clulas linfides, macrfagos de dendrticas ocupam regies estratgicas nos linfonodos.

clulas

10.2 A migrao de linfcitos B para as mucosas Os linfcitos B, ao contrrio dos linfcitos T, emergem da medula como clulas maduras e imunocompetentes. Da, eles povoam os rgos linfides secundrios. Neste estgio, os linfcitos apresentam na membrana molculas de imunoglobulinas de isotipo IgM e IgD. A ativao e diferenciao final destes linfcitos em clulas secretoras de imunoglobulinas dos diversos isotipos ocorre nos rgos secundrios. Uma observao importante que o isotipo produzido varia de acordo com o local em que o linfcito B ativado. Esta observao foi importante na descoberta de que os linfcitos migram seletivamente entre os rgos linfides secundrios. Enquanto que os linfcitos B localizados no bao e linfonodos secretam preferencialmente IgM (pentamrica) e IgG, aqueles localizados no tecido linfide associado s mucosas secretam preferencialmente sIgA (IgA associada a um componente secretor).

antgeno trfego de linfoblastos IgA

anticorpos IgA mamas mucosa intestinal mucosa genital mucosa brnquica

Figura 10.5: : O contato com antgenos por vias mucosas provoca preferencialmente o aparecimento de linfoblastos IgA que migram para as mucosas. Em 1964, Gowans e Knight relataram que linfoblastos comprometidos com a sntese de IgA, quando injetados na circulao de ratos, migravam seletivamente para o intestino. Vrios trabalhos vieram posteriormente confirmar a existncia de um trfego constante de linfoblastos comprometidos com a sntese de IgA entre o tecido linfide associado s mucosas do corpo. Montgomery e colaboradores, alimentando coelhas grvidas com pneumococos que haviam sido dinitrofenilados (DNP-pneumococos), mostraram o aparecimento de anticorpos IgA anti-DNP no colostro e no leite destes animais. Em 1982, Butcher e colaboradores propuseram um modelo para a migrao linfocitria, explicando a preferncia dos linfcitos recirculantes por determinados stios. Segundo eles, as vnulas ps-capilares que possuem um endotlio alto, cubide (HEV, high endothelial venules) das placas de Peyer e outros stios

4
nas mucosas seriam estruturalmente diferente das HEV dos linfonodos perifricos. Por sua vez, os linfcitos expressariam receptores de superfcie (receptores de migrao) para estes determinantes especficos das diferentes clulas endoteliais, direcionando seu trfego seletivamente para a mucosa ou o tecido linfide perifrico. A aquisio dos receptores de migrao pelos linfcitos recirculantes se daria no seu stio primrio de ativao e seria provavelmente concomitante com o comprometimento isotpico do linfcito B.

Y IgG

IgA

Y IgA

no aderem

no adere Y IgG Y IgA Y IgG

mucosas

linfonodos perifricos

linfonodos mesentricos

Figura 10.6: A presena de molculas de adeso diferentes nos linfoblastos IgG e IgA faz com que eles tenham localizaes diferentes no tecido linfide. A presena, nos linfonodos mesentricos, de molculas de adeso comuns s HEV das mucosas e das HEV dos linfonodos perifricos sugere uma regulao da expresso destas molculas rgo-especficas por citocinas e outros aspectos do microambiente local. Uma observao importante a de que o processo pelo qual os linfcitos se localizam no bao no envolve este mecanismo, j que neste rgo os capilares venosos terminam diretamente no parnquima sem a presena de uma barreira endotelial ps-capilar. 10.3 A migrao de Linfcitos T Da medula ssea, emigram clulas precursoras (pr-T) que penetram seletivamente o timo, onde passam por um processo de maturao tornando-se clulas imunocompetentes. A entrada de tais clulas no timo depende da presena, nas suas membranas, de receptores de migrao (homing receptors) capazes de interagir especificamente com o endotlio tmico. As clulas precursoras, ento, aderem ao epitlio e migram, atravs da parede capilar, at o parnquima do rgo. Algumas molculas de superfcie so candidatas a desempenhar um papel importante nesta migrao, entre as quais o marcador CD7 (Thy-1).
Medula pr-T CD7 receptor de migrao? Timo linfcitos T L-selectina receptor de migrao Linfonodos linfcitos T ativados produo e secreo de citocinas

Figura 10.7 : Molculas de CD7, expressas nas clulas pr-T da medula ssea, podem gui-las at o endotlio do timo. No interior do timo, a linfopoiese T acompanhada pela expresso de L-selectina que opera como um "homing receptor" para HEV de linfonodos.

5
No processo de diferenciao intratmico, como vimos na discusso da linfopoiese (Captulo 6 ), estas clulas pr-T mudam a configurao de suas membranas, perdem algumas molculas e expressam outras que servem como marcadoras de estgios de sua diferenciao em linfcitos T maduros. Entre estas, est a L-selectina que opera como um receptor de migrao para o linfcito (Figura 10.9 ).

CD7(Thy1) CD34 Medula ssea

pr-T CD7

pr-T CD7,CD1,CD2

Timo

CD3
CD7,CD1,CD2 CD3 CD4 CD7,CD1,CD2 MEL-14

CD3
CD7,CD1,CD2

CD3 CD8 CD7,CD1,CD2

CD3 CD7,CD1,CD2 HR

MEL-14

Linfonodos recirculao seletiva

pele, intestino (no recirculam)

Figura 10.8 : Gerao, diferenciao e amadurecimento de linfcitos T. Clulas pr-T geradas na medula ssea, passam por um estgio de timcitos, linfcitos T imaturos e, finalmente, se diferenciam em trs tipos de linfcitos um T maduros: utiliza cadeias no TCR, migra para a pele ou intestino onde permanece sem recircular; outros dois tipos, utilizam cadeias no receptor clonal e se diferenciam pela presena de molculas acessrias( CD4 ou CD8). Os linfcitos T maduros, uma vez ativados, podem tambm recircular. Esta recirculao ocorre num grau muito menor que aquele observado entre os linfcitos B maduros, mas provavelmente os mecanismos utilizados para a migrao seletiva de ambos so os mesmos. Ao emergirem do timo, os linfcitos T expressam outras molculas de membrana que, por um lado, marcam seu estgio de diferenciao e, por outro, os tornam capazes de novas interaes celulares. Tabela 10.1 Principais antgenos de superfcie em linfcitos T maduros ______________________________________________________________ Antgenos Caractersticas ______________________________________________________________ TCR receptor clonal, interao com MHC classe II/peptdeo CD3 complexo acessrio, associado ao TCR CD2 interage com LFA-3 na clula apresentadora (APC) CD4 Marcador de linfcito T auxiliar (interao com MHC classe II) CD8 Marcador T supressor/citotxico(interao com MHC classe I) LFA-1 interage com ICAM-1 nas HEV L-selectina receptor de migrao, liga-se s adressinas de HEV em linfonodos __________________________________________________________

10.4 As vnulas de endotlio alto (HEV) Como mencionamos, uma caracterstica importante do processo migratrio de linfcitos sua relao com o endotlio de vnulas especiais, denominadas "veias de endotlio alto" ou HEV (de high endothelial venules).

6
linfcitos clulas cubides endotlio alto (HEV) sem desmossomos & gap junctions

endotlio plano com desmossomos & gap junctions

membrana basal

membrana basal

Figura 10.9: Caractersticas do endotlio das vnulas de epitlio alto (HEV) ausncia de desmossomos e gap junctions - as diferenciam do endotlio plano da maioria das vnulas. Em 1964, Gowans e Knight demonstraram, in vivo, que os linfcitos recirculantes aderem e atravessam seletivamente o endotlio "alto"(cubide) das vnulas ps-capilares dos rgos linfides (em ingls, HEV, high endothelial venules) e no ao endotlio plano dos demais capilares e vnulas. Ao contrrio do que mostram os esquemas que ilustram a adeso de clulas circulantes ao endotlio, a superfcie das clulas endoteliais no plana, como parece. Imagens de microscopia eletrnica mostram que a membrana endotelial rugosa, repleta de vilosidades que apresentam uma grande superfcie luz vascular. Estas irregularidades da superfcie endotelial so particularmente acentuadas em duas situaes: - fisiologicamente, nas HEV; - no endotlio plano ativado, durante reaes inflamatrias.

+ linfcitos

marcao fluorescente incubao a 4 & lavagem

linfonodo corte em criostato

linfcitos se localizam sobre as HEV

Figura 10.10: A importncia das HEV na migrao de linfcitos pode ser ilustrada por experincia in vitro Quando linfcitos marcados com fluorescena . so colocados sobre cortes de linfonodos, 80-85% da fluorescncia se concentra sobre as reas contendo HEVs, embora estas reas representes 4-5% da rea do corte. Neutrfilos, por sua vez, no aderem s HEVs. A morfologia cubide das HEV retarda o fluxo sangneo e, com isto, favorece a coliso entre os leuccitos e o endotlio. A atividade metablica destas clulas endoteliais tambm mais elevada que a do endotlio plano (nveis de atividade estersica e de incorporao de sulfato, por exemplo). As HEV apresentam ainda molculas de adeso no encontradas no endotlio plano, como uma molcula atualmente designada MECA-325, provavelmente uma "adressina vascular" que permite a adeso seletiva de linfcitos.

7
linfonodos perifricos linfonodos mesentricos HEV placas de Peyer lamina propria do intestino brnquios

Figura 10.11: A distribuio de HEVs no organismo se aos linfonodos e ao limita tecido linfide associado s mucosas. O bao no possui HEVs, aintenso despeito do trfego de linfcitos que ali se processa. H duas hipteses relativas origem das HEV. De acordo com a primeira, estas clulas constituem uma linhagem diferenciada de clulas endoteliais que se estabelecem em determinadas regies das vnulas, vindas de outras regies ou mesmo de precursores quiescentes. De acordo com a segunda hiptese, elas se diferenciariam do endotlio vascular plano induzidas por fatores associados s reaes imunes locais ou ao estmulo inflamatrio crnico. Dois grupos de evidncia privilegiam a 2 hiptese: em cobaias e em humanos, o "endotlio alto" aparece em vnulas de regies cronicamente inflamadas e a remoo cirrgica dos vasos linfticos aferentes em linfonodos de ratos provoca, no endotlio ps-capilar, a perda de seu aspecto cubide e sua capacidade de mediar a passagem de linfcitos, revertendo para um endotlio plano em 2-3 semanas (Figura 10.12 ).
HEV

bloqueio aferente

endotlio plano

endotlio plano inflamao crnica IL-1 IFN

HEV

Figura 10.12: O endotlio alto (HEV) de linfonodos se transforma em endotlio plano aps remoo cirrgica vasos linfticos que chegam ao linfonodo dos bloqueando o fluxo aferente de linfa. Por outro lado, as clulas endoteliais planas em um local de inflamao crnica tende a adquirir a morfologia cubide das HEV. Fisiologicamente, ocorre uma contnua migrao de linfcitos B (da medula) e linfcitos T (do timo) para os rgos linfides secundrios. H tambm um trfego incessante de clulas maduras entre os linfonodos e os tecidos. Esta migrao depende da presena de receptores (homing receptors ) na membrana de linfcitos que se ligam especificamente a molculas ("adressinas") presentes no "endotlio alto" (HEV) das vnulas ps-capilares dos rgos linfides. Esta ligao especfica ("homing receptors":::adressinas) entre linfcitos e HEVs precisa ser estabilizada por outras molculas tambm presentes na membrana dos linfcitos. Os "homing receptors" linfocitrios pertencem famlia das selectinas, protenas que, como as lectinas, se ligam a acares. Tanto o linfcito, quanto a clula endotelial podem expressar selectinas, denominadas, respectivamente, L-selectina e E-selectina. A Eselectina se liga a um polissacardeo leucocitrio designado sLex, enquanto a L-selectina se liga a glicoprotenas do endotlio (ainda designadas "adressinas vasculares") relacionadas s mucinas.

8
Molcula No leuccito em repouso ativado Molcula No endotlio em repouso ativado (ou HEV)

(pareamentos iniciais, instveis) sLex L-selectina + + + :::::: E-selectina ++ :::::: adressina ++ +++ ++

(pareamentos secundrios, estveis) VLA-4 LFA-1 LFA-1 + + + ++ :::::: VCAM-1 + :::::: ICAM-1 + :::::: ICAM-2 + ++ +++ +++ ++

Figura 10.13 Pareamentos leuccito-endotlio. Dois tipos de ligaes promovem a ligao do linfcito s HEV. A primeira, instvel, se faz por meio das selectinas que se unem a acares (L-selectina na adressina vascular e E-selectina no acar sLex). A segunda, mais estvel, se faz quando VLA-4 e LFA-1(intregrinas) se ligam aos CAMs (famlia das Igs, ver adiante) da clula endotelial (VCAM-1, ICAM-1 e ICAM-2). Clulas de endotlio alto (HEV) e clulas do endotlio plano inflamado, que passsam a expressar VCAM-1 e a hiper-expressar ICAM-1 e ICAM-2, fazem ligaes essencialmente idnticas. Dois mecanismos so propostos para explicar o movimento de linfcitos atravs do endotlio. H pesquisadores que propem um mecanismo chamado emperilopoiese atravs do qual o linfcito atravessaria a barreira endotelial sendo endocitado pela prpria clula endotelial similarmente ao que ocorre nas clulas M das placas de Peyer. Outros trabalhos argumentam que a migrao se daria por entre as clulas endoteliais (via intercelular ), j que as clulas do endotlio alto (HEV) no possuem os desmossomos e "gap junctions" que as unam s clulas vizinhas. Alm disto, o gama-interferon (IFN-) secretado pelos linfcitos T agiria aumentando ainda mais estes espaos intercelulares nos stios inflamados cronicamente. Uma terceira alternativa a ocorrncia concomitante dos dois processos de migrao, principalmente em momentos de intenso aporte de linfcitos.

aderncia

diapedese

emperilopoiese luz da vnula de endotlio alto endotlio cubide (HEV) membrana basal linfcitos no linfonodo

Figura 10.14: Duas hipteses para a passagem dos linfcitos pelas HEV. Em uma delas, o linfcito passaria citoplasma da clula endotelial, por um mecanismo pelo denominado emperilopoiese.

10.5 Molculas de adeso: um conceito em construo Para que a ativao linfocitria ocorra, os linfcitos devem estar nos locais corretos, nos momentos apropriados. Para que isto acontea, eles precisam deixar os rgos primrios onde so gerados, recircular no sangue e na linfa para, enfim, se localizarem em um rgo linfide perifrico, nas mucosas do corpo, ou em um local de inflamao. Nestes locais, para serem ativados, os linfcitos

9
precisam ainda estabelecer uma ntima adeso com outras clulas. Tanto o deslocamento de linfcitos dos rgos primrios aos rgos secundrios ("homing"), quanto a sada da circulao (por ex., nas reaes inflamatrias), quanto a adeso ativadora de uma clula a outra dependem da presena de molculas de adeso complementares nos dois tipos celulares. Alm disto, como trataremos mais adiante ainda que superficialmente, os leuccitos polimorfonucleares (PMN) neutrfilos so tambm clulas em contnuo deslocamento da medula ssea para os tecidos. Ao contrrio dos linfcitos, os PMN so clulas de vida muito breve (6-8 horas) logo aps deixar a circulao sangunea. A adeso dos PMN ao endotlio, um dos eventos mais precoces e caractersticos das reaes inflamatrias agudas se faz atravs de molculas de adeso que, em parte, so compartilhadas pelos linfcitos.
Selectinas Integrinas Super-famlia das Imunoglobulinas

10 nm

L-selectina

P-selectina E-selectina LFA-1 VLA-4

CD8

CD4

TcR ICAM-1

MHC classe II

Figura 10.15: Molculas de adeso: selectinas, integrinas e molculas da superfamlia das imunoglobulinas (IGG-SF) desenhadas aproximadamente em escala. Note as diferenas entre, por um lado, TCRs e produtos do MHC, que tm domnios pareados e as demais molculas, que tm no pareados (com domnios exceo de CD8, que tem um). tambm que as molculas de TCR e do MHC so Note as menores e, portanto, requerem uma maior proximidade celular para atuar como adesivas. Trs categorias principais de molculas de adeso so atualmente conhecidas. Muitas destas molculas fazem parte da superfamlia das imunoglobulinas (ou IGG-SF, immunogobulin gene superfamily), composta de molculas que possuem domnios estruturais tpicos das imunoglobulinas, como os TCRs e os produtos do MHC (Figura 10.15 ). As outras duas famlias so: as integrinas e as selectinas . A super-famlia das imunoglobulinas (IGG-SF) composta de molculas com um "domnio" caracterstico: um trecho de 90-100 aminocidos arrumados em um sanduche de duas placas de filamentos- anti-paralelos que, usualmente estabilizado por uma ponte dissulfeto no seu centro. Das molculas pertencentes super-famlia, apenas as Igs e os TCRs encontrados em linfcitos de vertebrados possuem regies variveis (regies V) montadas, como vimos, pelo rearranjo de segmentos gnicos durante a linfopoiese. Estas molculas so expressas clonalmente . As demais molculas da superfamlia das Igs podem ter uma distribuio muito mais ampla. Algumas existem, por exemplo, no sistema nervoso de insetos (NCAM, fasciculina); outras, como os produtos do MHC, embora sem possuir regies V, so importantes na ativao linfocitria.

Tabela 10.2

10
Super-famlia das Igs ___________________________________________________ Molculas Expresso celular ___________________________________________________ Ig linfcitos B TCR linfcitos T CD3 linfcitos T CD4 linfcitos T auxiliares CD8 linfcitos T supressores MHC classe I todas as clulas MHC classe II clulas apresentadoras CD2 (LFA-2) linfcitos T LFA-3 (CD58) linfcitos B ICAM-1 (CD54) muitas clulas ICAM-2 muitas clulas VCAM-1 muitas clulas _____________________________________________________ As integrinas (Tabela 10.3 ) so protenas com 120-180 kd, formadas por cadeias designadas e . At o presente (1992), foram descritos 14 subtipos de cadeias e 8 subtipos de cadeias . A maioria das integrinas expressa em uma variedade de clulas e cada clula expressa uma variedade de integrinas. Uma classificao divide as integrinas em tissulares , que utilizam cadeias 1 e integrinas leucocitrias , que utilizam cadeia 2. Entre as integrinas tissulares (1) esto molculas denominadas VLA, expressas tanto em linfcitos e leuccitos, quanto no endotlio, clulas epiteliais, fibroblastos, etc. A designao VLA procede de Very Late Antigen porque estas substncias foram descobertas em culturas de linfcitos de longa durao (semanas). Entre as integrinas leucocitrias (2) esto o LFA-1, expresso em linfcitos, macrfagos e granulcitos (que se liga ICAM-1 e ICAM-2) e o Mac-1, expresso em macrfagos e granulcitos (que se liga a produtos da cascata do complemento como iC3b). Tabela 10.3 Algumas integrinas ________________________________________________________________ Sub-tipo Cadeia Molculas Expresso celular __________________________________________________________ Leucocitrias 2 LFA-1 leuccitos, linfcitos T Mac-1 leuccitos, linfcitos T

Tissulares

leuccitos, endotlio, epitlio,etc. VLA-5 " _________________________________________________________________ A nomenclatura das integrinas est sendo organizada atualmente e muitas novas molculas esto sendo descobertas. Ressaltaremos apenas alguns aspectos importantes descobertos at o momento. Provavelmente, haver uma simplificao como a que ocorreu com as selectinas. Recentemente (1992), trs selectinas , antes descritas com vrias designaes, foram designadas L-selectina, P-selectina e E-selectina (Tabela 10.4 ). Como vimos, a L-selectina uma molcula importante na destinao ("homing") de linfcitos para os linfonodos. A E-selectina uma molcula importante na migrao leucocitria, expressa no endotlio plano durante a inflamao aguda e constitutivamente nas HEV. A P-selectina expressa no endotlio plano inflamado e tambm em plaquetas. Como sugerido na Figura 10.14 , as 3 selectinas tm estruturas semelhantes com um domnio que se repete na poro extracelular e terminam por um domnio semelhante a lectinas, isto , capaz de se ligar a polissacardeos.

VLA-4

11
Tabela 10.4 Selectinas ____________________________________________________ Nome atual Nomes antigos Expresso celular ____________________________________________________ L-selectina Mel-14, LAM-1 linfcitos, leuccitos E-selectina ELAM-1 endotlio inflamado P-selectina CD62, PADGEM, GMP-140 endotlio, plaquetas _____________________________________________________ Um sumrio das famlias de molculas de adeso mostrado na Tabela 10.5 . A adeso celular inicia e participa de muitos fenmenos que acompanham o deslocamento celular e a ativao linfocitria. H modificaes significativas nos tecidos (remodelagem), desencadeadas pela infiltrao de clulas circulantes tanto em situaes que ocorrem fisiologicamente (como no desenvolvimento embrionrio e em certas fases do crescimento), quanto acidentalmente (por traumatismos, infeces, reaes inflamatrias agudas e crnicas desencadeadas por meios muito variados). Alm dos linfcitos, os leuccitos polimorfonucleares, moncitos e plaquetas tambm so importantes nestas modificaes. 10.6 O endotlio plano e a inflamao Devemos aos italianos os primeiros relatos de que clulas sanguneas so capazes de aderir parede dos vasos, atravess-la e migrar para os tecidos - algo que pode ser observado facilmente, atravs de microscpios com pequeno aumento, na membrana transparente da cauda de girinos (larvas de r). Em 1824, Dutrochet confirmou estas observaes, ampliadas na Alemanha por Virchow, ao relacionar a passagem dos leuccitos atravs dos capilares ao processo inflamatrio. Tabela 10.5 Famlias de molculas ativas nas interaes linfocitrias _____________________________________________________________________ Famlias Molculas Expressas em Regies V Expresso clonal ____________________________________________________________________ Ig linfcitos B sim sim TCR linfcitos T sim sim IGG-SF complexo CD3 linfcitos T no no MHC classe I todas as clulas no no MHC classe II cel.apresentadoras no no Integrinas leucocitrias ( 2) tissulares ( 1) L, E e P-selectinas linfcitos, leuccitos muitas clulas no no no no

Selectinas

leuccitos, linfcitos no no endotlio, plaquetas ______________________________________________________________________ No final do sculo XIX, ocorreram intensas discusses sobre o mecanismo da aderncia e migrao leucocitria atravs dos vasos. Surgiu uma calorosa controvrsia entre a escola Alem e a Francesa, como j havia ocorrido em relao ao fenmeno da imunidade. Conheim, patologista alemo, afirmava que a adeso celular era promovida por "alteraes moleculares na parede dos vasos", enquanto que Metchnikoff, no Instituto Pasteur de Paris, enfatizava a importncia dos neutrfilos e das influncias quimiotticas nestas clulas, direcionando a aderncia e a migrao. O que o futuro demonstraria que, na interao leuccito-endotlio, participam fatores vindos de ambos os componentes. A interao leuccito-endotlio importante na migrao de clulas precursoras (de linfcitos T, macrfagos, mastcitos) desde a medula ssea para os tecidos. importante tambm na migrao de linfcitos maduros de um rgo ou tecido linfide para outro (por exemplo, de um linfonodo a outro ou de linfonodos para as mucosas). importante ainda em interaes patolgicas, como nas metstases que se

12
deslocam de um tumor primrio e se localizam preferencialmente em alguns tecidos ou na reao inflamatria aguda, onde ocorre um grande aporte de clulas sanguneas em direo ao tecido inflamado. A migrao de leuccitos para os tecidos pode ser dividida em vrias fases: 1- marginao dos leuccitos (rolagem) dentro do lume vascular e adeso parede endotelial; 2 - estabilizao da adeso; 3- diapedese (passagem atravs da parede do vaso); 4- migrao extravascular dos leuccitos. A adeso de leuccitos ao endotlio depende do pareamento de molculas complementares presentes na superfcie das clulas endoteliais e dos leuccitos, capazes de promover uma primeira ligao, instvel, do leuccito ao endotlio. Posteriormente, ocorrem ligaes entre outros pares de molculas que estabilizam a ligao do leuccito ao endotlio. Como vimos, tais molculas pertencem a vrias "famlias".

membrana transparente com vasos

girino

10x lmina de microscopia

algodo molhado

girino

Figura 10.15: A marginao de leuccitos pode ser facilmente observada na membrana transparente da cauda de girinos imobilizados em um lmina de microscpio por um algodo molhado posto sobre Os animais se mantm a cabea. vivos e aparentemente intactos, por 10-15 minutos. Nas fases iniciais da inflamao, desencadeada pelo contato com o vidro, os leuccitos so percebidos comomoedasrolando sobre o endotlio. Mais tarde, os leuccitos estacionam (marginao) e iniciam a passagem para fora das vnulas (diapedese). As clulas endoteliais no so um cenrio passivo da migrao leucocitria, mas sim parceiras ativas dos leuccitos neste processo. Por exemplo, o tratamento do endotlio com IL-1 determina, em algumas horas, o aumento da adesividade de leuccitos, enquanto que o tratamento direto dos leuccitos com IL-1 no os tornam mais aderentes ao endotlio. Na inflamao aguda, o endotlio plano adjacente a uma leso tissular torna-se mais adesivo e mais permevel, embora mantenha seu aspecto plano. Tais modificaes na morfologia e/ou na expresso de molculas pelas clulas endoteliais incluem: expresso de novas molculas de superfcie (Tabela 10.6 ); aumento da permeabilidade pelo aparecimento de interrupes na monocamada celular; hipertrofia das clulas endoteliais que adquirem aspecto cubide; aumento do metabolismo e do nmero de organelas citoplasmticas.

H duas fases distintas na ativao do endotlio plano. A primeira fase fugaz, pode ser desencadeada por uma variedade de mediadores de ao rpida (histamina, trombina, leucotrieno C4, etc) e, aps poucos minutos ou mesmo segundos, resulta na expresso de PAF e P selectina na membrana endotelial. A unio da P-selectina com carbohidratos leucocitrios faz uma primeira ligao, instvel, durante a qual o PAF pode ativar o leuccito, que passa a hiper-expressar L-selectina e muda ("ativa") suas molculas de integrinas (VLA-4, LFA-1) que se tornam mais capazes de parear com molculas na clula endotelial.

13
Tabela 10.6 Marcadores e citocina endoteliais presentes no endotlio plano normal e ativado _____________________________________________________________________ Molculas Endotlio normal Endotlio ativado _____________________________________________________________________ P-selectina +++ (fugaz) E-selectina +++ ICAM-1 + +++ ICAM-2 ++ +++ VCAM-1 +++ Produtos classe II MHC + +++ Secreo de IL-8 +++ ______________________________________________________________________ Por sua vez, a expresso destas molculas no endotlio (VCAM-1, ICAM-1 e ICAM-2) depende da ao de citocinas. Vrias citocinas secretadas por linfcitos, macrfagos e outras clulas podem desempenhar este papel e, ainda, agir sobre os leuccitos, aumentando a adesividade (Tabela 10.7 ). Tabela 10.7 Principais citocinas ativas no aumento da adesividade _____________________________________________________________________ Citocina Origem Alvo endotlio leuccitos _____________________________________________________________________ IL-1 tecido lesado + TNF linfcitos T + + INF- linfcitos T + LT linfcitos T + + iC3b sist. complemento + _____________________________________________________________________ Estas citocinas alteram no s a adesividade mas outras propriedades do endotlio ligadas coagulao e s reaes imunolgicas (Tabela 10.8 ). Tabela 10.8 Propriedades do endotlio alterveis por citocinas ___________________________________________________________________ - permeabilidade e endocitose - secreo de IL-8 - propriedades anti-coagulantes na superfcie (trombomodulina, fatores similares heparina, fator ativador de plasminognio-TPA) - propriedades coagulantes na superfcie (fatores de coagulao e um inibidor do TPA) - participao no metabolismo de mediadores vasoativos (relaxamento e contrao vascular) - hiper-expresso de molculas de adeso j expressas no endotlio normal (ex., ICAM-2) - expresso de novas molculas de adeso (ex., VCAM-1) - expresso de produtos de classe II do MHC ___________________________________________________________________ A IL-1, o TNF e a linfotoxina (LT) (ver Captulo 11 ) so as principais citocinas envolvidas nestes efeitos. Outros efeitos esto descritos na Tabela 10.9 . H uma seqncia definida na ao destas citocinas. A secreo de IL-1 e TNF precoce e ocorre principalmente na inflamao aguda. O TNF capaz de induzir a sntese de IL-1 pela prpria clula endotelial. J o -interferon aparece na fase crnica da inflamao envolvendo o surgimento das vnulas de endotlio alto (HEV), o aumento da expresso de ICAM1 e a aderncia e extravasamento de linfcitos no foco inflamatrio (Tabela 10.10 ).

14
Tabela 10.9 Efeitos de IL-1, TNF e LT no endotlio afetando a inflamao _________________________________________________________ expresso de novos produtos E-selectina,VCAM-1,PAF* hiper-expresso de produtos j expressos ICAM-1,ICAM-2 aumento da secreo PGI2 sntese e secreo de novos produtos IL-8,IL-1,PDGF,CSFs __________________________________________________________ * O PAF (Platelet Activating Factor) permanece na membrana endotelial. O PAF (Platelet Activating Factor), um fosfolipdio, produzido pelo endotlio permanece ligado membrana, ao contrrio do PAF produzido por plaquetas, que secretado para o meio. Tabela 10.10 Aes das citocinas na inflamao ____________________________________________________________________ Citocina Fase Aes _____________________________________________________________________ IL-1 Precoce - aumento da adesividade de moncitos e neutrfilos ao endotlio; - expresso de E-selectina pelo endotlio; - sntese de IL-1 pelo endotlio. -interferon Tardia - induo de produtos de classe II do MHC; - aumento da expresso de ICAM-1 pelo endotlio; - modificaes morfolgicas no endotlio (HEV); - aumento da adesividade de leuccitos ao endotlio. IL-2 Tardia - estmulo da sntese de TNF e LT por linfcitos T. ________________________________________________________________________

10.7 A expresso de produtos de classe II do MHC pelo endotlio O endotlio ativado (por ex., com INF- ) expressa produtos de classe II do MHC. Clulas endoteliais, quando ativadas com IL-2 in vitro, podem secretar IL-1. Por um lado, a expresso de produtos de classe II do MHC e a secreo de IL-1 so requisitos para uma clula funcionar como "apresentadora" para linfcitos T-auxiliares. Por outro lado, o INF- e a IL-2, desencadeadores deste processo, so produtos dos linfcitos T. Isto sugere fortemente que o endotlio ativado possa funcionar como clula apresentadora para linfcitos T. Esta interao entre o endotlio ativado e os linfcitos T pode facilitar o trfego de linfcitos T do sangue para os tecidos e este aporte aumentado de novos linfcitos pode gerar um efeito em cascata amplificando a resposta inflamatria (Figura 10.16 ). Talvez o efeito mais interessante da expresso destas molculas no endotlio seja, no entanto, seu papel na rejeio de aloenxertos. Uma das etapas cruciais no sucesso da transplantao a vascularizao do enxerto, necessria sua integrao no organismo receptor. Por outro lado, os produtos de classe II do MHC so os aloantgenos mais importantes na compatibilidade entre as clulas transplantadas e os linfcitos T do hospedeiro. Pode ser, ento, que o processo de vascularizao (angiognese), que certamente envolve a produo de linfocinas ativadoras do endotlio, constitua uma etapa onde determinado o sucesso ou fracasso de um transplante, em um curioso equilbrio: deve haver a ativao endotelial, necessria angiognese, mas ela no deve ultrapassar os limites em que a infiltrao pelos linfcitos T do hospedeiro comea a ser lesiva ao transplante.

15
10.8 A migrao de neutrfilos na inflamao Os neutrfilos so as primeiras clulas mobilizadas na inflamao aguda, enquanto que os macrfagos e linfcitos so clulas caractersticas da inflamao crnica. Na formao de granulomas, na fase crnica da inflamao, ocorre uma diminuio do nmero de neutrfilos paralelamente ao aumento de macrfagos e linfcitos. O macrfago (moncito) a clula mais persistente, enquanto que os mastcitos aparecem e desaparecem rapidamente. Os linfcitos T e plasmcitos so clulas tardias que surgem com o aparecimento das modificaes morfolgicas do endotlio (HEV) na fase crnica. Os linfcitos T modulam as dimenses dos granulomas que ocorrem na esquistosomose, ao redor dos ovos retidos nos tecidos. Tabela 10.11 Cintica de aparecimento das clulas na inflamao __________________________________________ 1 - neutrfilos 2 - neutrfilos e moncitos (e mastcitos) 3 - linfcitos e fibroblastos __________________________________________ Fisiologicamente, h uma interao entre o endotlio e os neutrfilos que esto na microcirculao, principalmente no pulmo. Esta coleo marginal de neutrfilos no est propriamente aderida ao endotlio, mas movimenta-se pelas margens da microcirculao. Tal interao fisiolgica de retardamento da movimentao leucocitria muda dramaticamente na inflamao aguda, onde h: - aderncia dos neutrfilos ao endotlio pela ligao selectinas::: adressinas; - estabilizao da adeso por integrinas (por ex.: LFA-1:::ICAM-1); - diapedese e migrao dos neutrfilos atravs da parede capilar. O aumento na capacidade de adeso se deve a muitos fatores. Por exemplo, a aderncia dos neutrfilos ction-dependente. Vrias outras substncias podem influenci-la, tais como: nucleotdeos cclicos (AMP- e GMP-cclicos); produtos da lipooxigenase; produtos de plaquetas; fatores plasmticos.

endotlio

adesividade aumentada

Figura 10.16: A ao de vrias substncias liberadas pelos prprios leuccitos aumenta sua adesividade ao endotlio. O prprio contedo dos dos grnulos neutrfilos pode promover a agregao. Esta, por sua vez, facilitados o contato neutrfilos com o endotlio. A ativao dos neutrfilos por agentes quimiotticos resulta na sua degranulao e esta, por sua vez, na liberao de substncias que diminuem a carga eltrica negativa da membrana (Figuras 10.16 e 10.17 ). So reduzidas assim as foras repulsivas entre os neutrfilos e o endotlio e so facilitadas unies atravs de foras de van de Waals que unem as duas superfcies celulares.

16
- - - - - adesividade aumentada -

- - -----------------endotlio

Figura 10.17: A diminuio da carga eltrica negativa dos neutrfilos pela ao de substncias liberadas pelos prprios grnulos dos leuccitos pode facilitar a aderncia ao endotlio. Uma das evidncias de que a diminuio das cargas negativas do endotlio facilita a adeso de neutrfilos que o tratamento das clulas endoteliais com neuraminidase, que remove os stios eletricamente negativos de cido silico na superfcie celular aumenta a adesividade. H autores que argumentam, porm, que a remoo destes stios poderia tambm expor partes ocultas de glicoprotenas da superfcie, tornando-as receptores eficazes para os neutrfilos. Os grnulos dos neutrfilos contm protenas capazes de promover a adeso ao endotlio. A principal destas protenas a lactoferrina. Os produtos da lipooxigenases e da ciclooxigenase so tambm importantes: os leucotrienos C4 e D4 (LTC4 e LTD4) aumentam a permeabilidade vascular, enquanto que a prostaglandina I2 (PGI2) e a tromboxana A2 (TXA2) agem sobre o tnus vasomotor. A ligao da adrenalina ao receptor na clula endotelial estimula a produo de PGI2 que, por sua vez, inibe a expresso de laminina pelos neutrfilos dificultando sua adeso. J o PAF e outros quimiotticos so fatores produzidos pela clula endotelial que facilitam a adeso dos neutrfilos. A L-selectina o receptor usado pelos neutrfilos para aderir ao endotlio do stio de inflamao e tambm o mesmo utilizado pelos linfcitos para se ligar ao endotlio plano inflamado e s HEV dos linfonodos perifricos. O que impede os neutrfilos de se ligarem s HEV no endotlio no inflamado dos linfonodos perifricos? Trs hipteses tentam responder a esta questo: 1. 2. 3. Podem haver domnios diferentes na molcula da L-selectina de neutrfilos e linfcitos. Pode existir um "segundo sinal" para linfcitos nas HEV. Podem existir ligaes estabilizadoras especficas para linfcitos nas HEV.

A terceira hiptese nos parece a mais provvel: a combinao de integrinas usadas por leuccitos e linfcitos so diferentes. Por exemplo, o VLA-4 do linfcito se liga molcula de VCAM-1, enquanto que o LFA-1 do leuccito se liga molcula ICAM-1. 10.11 Como o neutrfilo atravessa o entotlio Aps a fase inicial de aderncia clula endotelial, os neutrfilos emitem pseudpodos e migram atravs das junes intercelulares. Os receptores neutroflicos para laminina facilitam este processo j que a membrana basal do endotlio est repleta de laminina. Esta protena da membrana basal est envolvida tambm na quimiotaxia e adeso de clulas metastticas que chegam pela corrente sangunea. ainda controverso se a migrao neutroflica, por si s, causa injria vascular grave. Estudos in vitro demonstram que ela no acarreta aumento da permeabilidade vascular a macromolculas. Provavelmente, se h leses, elas so restritas e transitrias. Durante a migrao do leuccito pelos tecidos ocorre a liberao de proteases cidas e neutras que digerem o trajeto migratrio. A protelise da superfcie endotelial e oxidantes derivados dos neutrfilos podem inativar o inibidor plasmtico da alfa-1 protease, permitindo que a elastase neutroflica ataque a membrana endotelial (Figura 10.18 ).

17
sLex L-selectina VLA-4 LFA-1 endotlio

P-selectina adressina E-selectina PAF

VCAM-1 ICAM-1 ICAM-2 laminina proteases

membrana basal

Figura 10.18: Fases da migrao do leuccito pelas junes endoteliais. H uma fase incial, instvel, mediada especialmente pelo pareamento de selectinas; uma fase de estabilizao mediada por integrinas (VLA-4,LFA-1) e uma fase com o auxlio de outras integrinas que atuam como receptores de laminina da membrana basal do vaso. A membrana basal digerida por proteases secretadas pelo leuccito.

10.9 A migrao dos moncitos A vida mdia dos moncitos no sangue muito mais longa que a dos neutrfilos e eles no formam um "pool" perifrico significativo. Os moncitos circulantes so clulas em trnsito destinadas a se tornarem macrfagos teciduais de vida longa. A atividade dos macrfagos discutida mais extensamente no captulo seguinte. Como os neutrfilos, eles sofrem marginao e agregao e parecem atrados por produtos neutroflicos. A adeso de moncitos ao endotlio tambm parece ser mediada por glicoprotenas de superfcie. Moncitos tambm secretam fatores potencialmente citotxicos e alteradores da funo endotelial como, por exemplo, proteases e derivados do oxignio. Outros produtos de secreo importantes no processo de adeso e migrao dos moncitos/macrfagos so: citocinas (monocinas) que agem na parede vascular; fator angiognico; fator com atividade de G-CSF; alfa-interferon (inibe a proliferao do endotlio, eleva PGI-2); IL-1 (estimula a atividade pr-coagulante do endotlio).

Alm de sua importncia na formao dos granulomas (inflamao crnica), as interaes entre os moncitos/macrfagos e o endotlio vascular esto envolvidas numa srie de desordens inflamatrias crnicas. A aterosclerose associada hipercolesterolemia uma delas. No discutiremos aqui a migrao dos linfcitos para regies de inflamao crnica. Os linfcitos so clulas de aparecimento tardio nos focos inflamatrios (linfcitos T e plasmcitos). Surgem quando fatores liberados no processo de inflamao crnica modificam o endotlio, tornando-o semelhante ao endotlio dos rgos linfides (HEV) ao qual, ento, aderem e atravessam. 10.10 Concluses 1. Normalmente, no fenmeno da migrao leucocitria, atribui-se ao leuccito no s o papel ativo de migrar atravs da corrente sangunea e selecionar o seu stio de localizao como tambm o de agente responsvel pela diapedese atravs do endotlio. Ao endotlio caberia o papel de um mero substrato, de matriz sobre a qual os leuccitos aderem e caminham. No fundo, esta uma noo paralela quela que confere aos materiais externos a responsabilidade pela operao do sistema imune. O corpo, seus tecidos e sistemas, seriam incapazes de desencadear autonomamente mudanas relevantes na sua estrutura e operao, requerendo, para isto, a ao decisiva de um elemento externo. O que os trabalhos mais recentes (e alguns menos recentes) tm demonstrado, no entanto, que, se o leuccito capaz de selecionar seu stio de localizao no endotlio atravs de receptores de migrao, ao endotlio cabe escolher, atravs de molculas indevidamente chamadas de acessrias, quais clulas so relevantes para

18
os processos que esto em curso naquele local, naquele momento. E se a citocinas leucocitrias podem aumentar a adesividade ou mesmo lesar o endotlio, as clulas endoteliais secretam quimiotticos, agentes degranuladores de leuccitos, substncias que facilitam ou dificultam a adeso e o trnsito leucocitrio. A migrao leucocitria, ento, longe de ser uma viagem de clulas pr-destinadas, muito mais um processo de interao mtua no qual leuccitos e endotlio participam ativamente atravs da secreo de citocinas, atravs de modificaes morfolgicas e pela expresso de molculas de superfcie, capazes de interagir umas com as outras. 2. As clulas migrantes adquirem seus receptores de migrao a partir de processos que ocorrem nos rgos ou tecidos de origem. Da mesma maneira, o endotlio apresenta caractersticas morfolgicas favorveis adeso destas clulas a partir de fenmenos prvios ocorridos nos tecidos vizinhos. Estes fenmenos incluem desde leses tissulares desencadeadoras de processos patolgicos (como na inflamao) at eventos fisiolgicos, como a migrao de clulas que chegam constantemente aos linfonodos. Se a drenagem linftica for interrompida, as clulas endoteliais dos linfonodos perdem suas caractersticas de "endotlio alto" (HEV) e diminuem a expresso de ICAM-1 na superfcie. Como em todo processo fisiolgico, ento, a interao leuccito-endotlio tem efeitos mtuos. Quando nos referimos ao organismo como um sistema autnomo, queremos dizer que ele determina autonomamente a seqncia de suas modificaes estruturais. Isto no significa que tais modificaes estruturais no sejam perturbadas ou influenciadas por agentes externos. Tampouco significa que se possa separar a operao "natural" do corpo do conjunto destas influncias. As condies naturais (fisiolgicas) de operao de um sistema biolgico no so as condies "germfree" ou "antigen-free" onde se tenta recuperar seu funcionamento isolado original. Estas condies artificiais servem apenas para demonstrar a capacidade de operao autnoma do corpo. exatamente a contaminao microbiana que se evita na condio "germfree" que revela potenciais adormecidos do sistema. Por exemplo, os isotipos e clonotipos de imunoglobulinas usados por animais "germfree" e convencionais so diferentes. As condies fisiolgicas de funcionamento dos sistemas biolgicos so aquelas em que a integrao destes com o meio ocorre dentro dos limites de compensao do sistema ou seja, sem perda de autonomia ou identidade. 3. O mecanismo pelo qual as clulas leucocitrias participam do processo inflamatrio uma variante do mecanismo fisiolgico utilizado cotidianamente pelos leuccitos em sua adeso ao endotlio e tambm pelos linfcitos e clulas precursoras da medula no seu trnsito e localizao nos rgos linfides. A observao do aparecimento de clulas de "endotlio alto" nos processos inflamatrios crnicos uma comprovao desta adaptao. Isto no diminui a fronteira entre a fisiologia e a patologia, apenas nos retira de uma viso teleolgica de que estes mecanismos existem para proteger e defender o corpo atravs dos processos inflamatrios e nos permite v-los como operaes fisiolgicas com as quais o corpo distribui e recircula suas clulas.

1 11. Mecanismos imunolgicos de destruio celular

_________________________________________ 11.1 A destruio celular fisiolgica Completando a trade de captulos iniciada com a discusso do contexto da ativao linfocitria, vamos examinar agora os mecanismos imunolgicos de destruio celular. A viso usual da Imunologia est ligada defesa contra infeces pela destruio de clulas invasoras (clulas de micoorganismos e parasitas) ou, como nas infeces virais, de clulas do prprio corpo infectadas pelos vrus. Ao considerar estes mecanismos de destruio celular, convm notar que a dinmica fisiolgica de organismos multicelulares complexos requer uma contnua destruio de clulas, coordenada com a reposio de novos componentes. Isto ocorre rotineiramente no tecido linfide, no tecido hemopoitico e nos epitlios de revestimento da pele e das mucosas. A destruio de clulas ocorre tambm em larga escala no desenvolvimento embrionrio, nos processos de regenerao e cicatrizao e nas reaes inflamatrias severas. Os mecanismos imunolgicos de destruio de parasitas e de clulas infectadas por vrus derivaram destes processos fisiolgicos de destruio.

Figura 11.1 Necrose ou morte acidental, por exemplo, por leses na membrana. A clula incha por descompensao osmtica e, ento, se desfaz; as organelas so destrudas. Pode haver danos s clulas vizinhas pelos produtos liberados na desintegrao. 11.2 Apoptose H um mecanismo fisiolgico de morte celular, que opera durante o crescimento embrionrio e durante toda a vida do organismo, importante para a manuteno do tamanho e da forma de diversos rgos. A ao de muitos hormnios depende do desencadeamento deste tipo de morte celular. Por exemplo, a destruio de timcitos jovens pela ao de corticides liberados pela glndula supra-renal. Em todas estas situaes, as clulas que morrem atravessam uma srie previsvel de transformaes conhecida como apoptose . A apoptose foi identificada em 1987 por Andrew Wyllie como uma espcie de suicdio celular que ajudaria no controle das populaes de clulas. O que ocorre na apoptose bem diverso do que ocorre na morte acidental da clula, qual nos referimos como necrose .

Figura 11.2 Apoptose ou auto-destruio. No estgio inicial, a clula se encolhe, mantendo intactas as organelas; depois, a clula se divide em vrios "corpos

2
frgeis", que so fagocitados por macrfagos e/ou clulas vizinhas. No h dano s clulas adjacentes. Na apoptose, a clula promove sua desintegrao com sua prpria energia metablica, tanto que, se seu metabolismo experimentalmente bloqueado ela no consegue morrer da maneira que morreria. Na apoptose, a clula se encolhe e como que se "empacota" internamente em fragmentos facilmente digerveis, causando um mnimo de perturbao em clulas vizinhas quando finalmente se desintegra. O "empacotamento" do material nuclear que precede a morte por apoptose permite determinar que a clula no morreu por necrose, pois quando o material nuclear separado por eletroforese, ele mostra fragmentos regulares com cerca de 150 pares de base nucleotdicas, formando uma imagem "em escada". A apoptose dura poucas horas. A clula predestinada se encolhe e se separa das vizinhas, enquanto o ncleo de divide em fragmentos regulares. Algum tempo depois, ela se divide em mltiplos" corpos frgeis" que so englobados por macrfagos ou clulas vizinhas (Figura 11.2 ). Bioquimicamente, a apoptose se divide em duas fases. Na primeira fase ("predestinao"), a clula sintetiza as enzimas de que necessitar para sua auto-destruio. Entre estas enzimas esto uma nuclease, que segmenta o DNA, e uma transglutaminase, que cria unies entre vrias estruturas da clula, formando os "pacotes". Se o metabolismo bloqueado nesta fase, a apoptose se interrompe. Os mecanismos que desencadeiam a "predestinao" so obscuros. Os eventos que desencadeiam a fase final de morte da clula predestinada parecem ser formas incompletas dos eventos que "ativariam" a clula em condies normais. Por exemplo, a apoptose pode ser desencadeada por um evento que leva a uma elevao do Ca++ intracelular desacompanhado dos eventos que elevariam a concentrao de outras molculas necessrias ativao celular (ver Captulo 9 ). As clulas j divididas em fragmentos expressam marcadores, possivelmente acares ausentes das clulas normais, que as fazem facilmente identificveis por clulas como macrfagos. Por exemplo, uma molcula conhecida como vitronectina surge na membrana de neutrfilos moribundos e permite sua fagocitose por macrfagos que os destroem. Este processo tem grande importncia na regulao da inflamao aguda. Na destruio de clulas infectadas por vrus acredita-se que atuem linfcitos T CD8+, conhecidos por T-citotxicos, que, como veremos abaixo, inserem molculas de perfurinas na membrana, causando sua lise osmtica. No entanto, quando o DNA das clulas-alvo da ao citotxica examinado por eletroforese, ele mostra a "escada" tpica da morte por apoptose. Este um problema ainda em aberto, mas sabe-se que a maquinria gentica da clula-alvo precisa ser sadia para que a morte ocorra: so conhecidas linhagens celulares mutantes resistentes ao de clulas T-citotxicas.

x sim estado 1 etapa 1 no etapa 2 no sim sim estado 2 possveis abortos

etapa ..... etapa 3 n no

morte celular por apoptose

Figura 11.3 : Pode ser que o desencadeamento da apoptose dependa de uma incompletude do processo de ativao celular. Quando falham etapas iniciais, possvel que a clula possa retornar ao estado anterior, mas que a falha de uma etapa mais tardia, conduza a clula j comprometida morte por apoptose. A morte por apoptose pode ser particularmente importante na destruio de timcitos jovens. Se o timcito se liga com afinidade demasiadamente elevada a uma clula apresentadora dentro do timo, ele pode ser destrudo por apoptose. Por sua vez, timcitos que desenvolveram TCRs que condicionam uma ligao demasiadamente baixa s clulas apresentadoras tambm morreriam, possivelmente pela ausncia de

3
citocinas necessrias para a diferenciao. Por este mecanismo, apenas os timcitos cujos TCRs possibilitassem ligaes de afinidade intermediria conseguiriam atingir a maturao e sair do timo para os rgos perifricos. possvel que o desencadeamento da apoptose se deva a uma mecanismo incompleto de ativao celular, pela ausncia de uma etapa particular na seqncia de etapas necessrias ativao (Figura 11.3 ). Recentemente, dois genes foram relacionados com a induo de apoptose em linfcitos: fas e bcl-2. O gene fas codifica uma protena de 35 kDa expressa em clulas linfides e no-linfides. Esta protena, quando ligada por um anticorpo monoclonal, capaz de transmitir sinais para o interior da clula desencadeando os mecanismos apoptticos. Animais com defeito no gene fas desenvolvem uma sndrome autoimune caracterizada por intensa linfoproliferao de linfcitos T anmalos (CD4-CD8-) e pela produo de autoanticorpos semelhantes aos encontrados no Lupus Eritematoso Sistmico. Estes animais so conhecidos como camundongos lpr (lymphoproliferation). Acredita-se que o gene fas tenha um papel fisiolgico na seleo negativa ocorrida no timo durante o processo de maturao dos linfcitos T; um processo que, como j mencionamos, envolve uma morte massiva de clulas por apoptose. O gene bcl-2, ao contrrio do gene fas , atua como um repressor dos mecanismos apoptticos. A hiper-expresso deste gene em linhagens hematopoiticas in vitro evita a morte destas clulas mesmo se todos os fatores de crescimento a elas necessrios (IL-3, GM-CSF, IL-4, etc) forem retirados do meio de cultura. Bcl-2 parece interferir no processo de morte celular de maneira seletiva: ele no interfere na progresso do ciclo celular mas bloqueia a clivagem do DNA que ocorre no incio da apoptose. Diferentemente do produto do gene fas que uma protena de membrana, a localizao da protena bcl-2 citoplasmtica (talvez mitocondrial). Sua expresso est muito aumentada em zonas de intensa proliferao linfocitria como os centros germinativos dos linfonodos (ver Captulo 10) e est praticamente ausente em regies onde as clulas se encontram em diferenciao final e, portanto, morrendo ( os centrcitos da zona basal dos linfonodos ou os linfcitos T do crtex tmico, p. ex.). Da mesma maneira que se cogita um papel fisiolgico para o gene fas na seleo negativa dos linfcitos T, acredita-se que o gene bcl-2 exerce, no timo, um papel de resgate dos linfcitos T na seleo positiva (ver Captulo 6). Obviamente, a hiper-expresso de bcl-2 pode estar envolvida nas patologias neoplsicas onde as clulas proliferam descontroladamente e os mecanismos de morte celular esto travados. 11.3 Mecanismos de leso da membrana celular Como vimos, a morte de uma clula pode resultar de mudanas que ocorram no seu interior. Mas ela pode resultar tambm de influncias externas sobre a clula, que desencadeiam mudanas irreversveis na membrana plasmtica. Trs tipos distintos de leso da membrana so descritos: 1. Substncias com ao detergente so capazes de dissolver a membrana, por desorganizao da dupla camada lipdica. Inclui-se nesta categoria a lisolecitina, que pode ser gerada nos tecidos pela ao de enzimas como a fosfolipase A. Neste caso, a lise no osmtica. 2. A ao de componentes do sistema complemento (ver adiante) que, ativados pela reao antgeno-anticorpo, ou por outros meios, abrem orifcios na membrana plasmtica por onde passam livremente ons e outras molculas pequenas, mas no molculas maiores, como as de protenas (Figura 11.3 ). Como as protenas no saem e a sada de ons no consegue ser contrabalanada por transporte ativo, entra gua muito rapidamente na clula que incha e, literalmente, explode. A lise no ocorre se a clula mantida, por exemplo, em um meio contendo dextrana de peso molecular 40.000 daltons, mas ocorre em dextrana de 10.000 daltons.

Figura 11.4 : A ao ltica do sistema complemento e a citotoxicidade de linfcitos T por meio de perfurinas tm em comum o estabelecimento de "poros" na membrana da clula- alvo, atravs dos quais a clula perde o controle de sua osmolaridade. Aqui se ilustra a polimerizao de vrias molculas de perfurina na membrana da clula-alvo, causando sua lise osmtica. No caso do sistema complemento, vrios componentes diferentes (C5b6789), ativados em uma cascata enzimtica, se renem sobre a membrana para formar o MAC (membrane attack complex; ver adiante neste Captulo) que forma um "poro" montado pela polimerizao da perfurina. Amebas patognicas usam tambm molculas semelhantes perfurina para destruir clulas alvo. A Figura 11.4 ilustra a ao citotxica celular. Perfurinas so protenas componentes de sistema anlogos ao sistema complemento que, no entanto, funcionam inseridos na membrana de clulas dotadas de atividades citotxicas como macrfagos, vrios tipos de linfcitos e as chamadas "natural killer cells" (clulas NK). Perfurinas tambm abrem orifcios na membrana e causam lise osmtica da clula-alvo. H molculas semelhantes a perfurinas em amebas patognicas e outros protozorios, o que sugere que se trata de um mecanismo ancestral de destruio celular. 3. Certos vrus, como o vrus Sendai, abrem na membrana orifcios menores que os abertos pelo sistema complemento. A lise, neste caso, tambm osmtica, mas pode ser evitada por dextranas de 10.000 daltons ou mesmo por sacarose.

11.4 Aes citotxicas de linfcitos H trs modalidades de aes citotxicas mediadas por linfcitos: 1. Como revelado por experincias in vitro, linfcitos T citotxicos (CD8+) destroem clulas-alvo aps se fixarem sobre a membrana. A secreo de perfurinas uma "secreo dirigida", isto , se faz para dentro de "bolsos" formados pela aderncia do linfcito clula-alvo e no ao redor de todo o linfcito (ver Figura 9.11 ). Para que a lise ocorra, o linfcito e a clula alvo precisam ser MHC compatveis, porque a aderncia do linfcito depende da ligao do TCR ao conjugado MHC-peptdeo na clula-alvo. No caso especial da rejeio de um alotransplante MHC-incompatvel, a situao mais complexa do que se supunha inicialmente pois as clulas T citotxicas (CD8+) tm um papel menos importante que as clulas T auxiliares (CD4+). Mas h testes in vitro nos quais clulas T citotxicas destroem clulas-alvo alognicas. No se compreende ainda como isto ocorre, isto , se a ligao se faz aos peptdeos apresentados pela clula alognica, aos prprios produtos do MHC alognico ou a ambos. Dados recentes, obtidos por camundongos desprovidos de genes de classe I do MHC, produzidos por engenharia gentica, mostram que tais animais so totalmente desprovidos de clulas T CD8+. Surpreendentemente, tais animais so normais em muitos aspectos. A citotoxicidade mediada por clulas T, portanto, no indispensvel vida, nem defesa contra vrus. 2. Linfcitos podem tambm se "armar" com anticorpos e destruir clulas que apresentem na membrana os antgenos aos quais os anticorpos se unam. Este processo conhecido por ADCC (antibody dependent cell citotoxicity) e diferente da lise mediada por anticorpos e complemento, pois requer o

5
contato direto de linfcitos com as clulas-alvo. Provavelmente, os linfcitos "armados" para a ADCC so linfcitos B que possuem receptores de membrana para o Fc de imunoglobulinas. A ADCC pode ser inibida por soros anti-imunoglobulinas que no interferem na citotoxicidade exercida por linfcitos T. Linfcitos assim "armados" costumam ser chamados de "killer cells" (clulas K) para distingu-los das "natural killer cells" (clulas NK), descritas a seguir. 3. H uma terceira variedade clulas citotxicas, denominadas "natural killer cells" (clulas NK ), porque foram identificadas matando clulas tumorais na ausncia de anticorpos ou de linfcitos T especficos para o tumor. A ao das clulas NK no inibida por soros anti-imunoglobulinas (como a ADCC) nem requer compatibilidade MHC (como a ao de linfcitos T CD8+). Discute-se ainda se a ao NK exercida in vivo da mesma forma que pode ser demonstrada in vitro . Camundongos nude, que no possuem linfcitos T, exibem uma taxa de aparecimento de tumores espontneos idntica a de animais normais mas, como discutido abaixo, camundongos com a mutao beige , que no possuem clulas NK, exibem uma taxa muito mais elevada de tumores espontneos, sugerindo que clulas NK, e no clulas T CD8+, so importantes na destruio de clulas neoplsicas. 11.5 As clulas NK A atividade de clulas NK muito influenciada por citocinas, tais como interferons. A infeco de camundongos com o vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV) eleva a atividade NK, com um pico aos 3 dias de infeco e retorno ao normal aps 8 dias. As concentraes de interferon seguem uma curva exatamente paralela, sugerindo que a secreo do interferon responsvel pelo aumento da atividade NK. H muito interesse na relao entre vrus, interferons e resistncia a tumores. Na sndrome de Chediak-Higashi, uma leso congnita humana rara, h grnulos anormais nos granulcitos, pigmentao anormal da pele e suscetibilidade elevada a infeces. Os pacientes afetados, geralmente, morrem de infeces piognicas na primeira infncia. Os sobreviventes a esta fase morrem de desordens proliferativas parecendo tumores linfides. H alguns anos, constatou-se que linhagens de camundongos portadores da mutao beige tm anormalidades semelhantes sndrome de Chediak-Higashi. Esta mutao herdada como uma caracterstica recessiva, afeta os melanossomas e as funes dos lisossomas, causando defeitos na pigmentao e na destruio de materiais fagocitados. Tanto em pacientes de Chediak-Higashi, como em camundongos beige, a atividade de clulas NK est muito abaixo dos nveis normais, o que no ocorre com a atividade de macrfagos ou de linfcitos T. Leucemias transplantveis induzidas por drogas ou por vrus crescem com mais facilidade em camundongos beige (bg/bg) que em controles normais da mesma ninhada (bg/+), H tumores com graus variveis de suscetibilidade ao das clulas NK e a base destas diferenas desconhecida. A suscetibilidade parece crescer com o alongamento do prazo de cultura in vitro das clulas tumorais, e muitas clulas que so NK-resistentes quando recm-colhidas tornam-se suscetveis com o tempo. Quando tumores suscetveis s clulas NK so injetados em camundongos beige, eles crescem mais rpido e do mais metstases. Isto no ocorre com tumores NK-resistentes. No entanto, aps a infeco com o vrus da coriomeningite linfoctica, que aumenta a atividade NK atravs dos nveis de interferon, a resistncia a ambos os tipos de tumores se eleva, tanto em camundongos beige quanto em camundongos normais. A resistncia mediada pelas clulas NK se exerce precocemente, alcanando um nvel mximo 3 dias aps o estmulo inicial. Isto sugere que elas possam ser importantes na defesa contra tumores espontneos. Vrias linhas de pequisa sugeriram que as clulas NK atacam, preferencialmente, tumores onde a expresso de produtos de classe I do MHC reduzida. Como mencionado acima, recentemente, foram produzidos camundongos desprovidos de genes de classe I do MHC por tcnicas de "knock out" gnico. Clulas obtidas deste camundongos mostraram ser muito sensveis ao de clulas NK in vitro. No est claro, porm, se estes animais tm clulas NK e, se as tm, porque elas no geram leses indiscriminadas no organismo. 11. 6 Lisossomas e a destruio de microorganismos O termo lisossoma uma denominao geral para enquadrar uma variedade de formas de organelas que mudam de acordo com o estado funcional da clula. O chamado lisossoma primrio aquele que ainda no participou dos processos de digesto intracelular. Os grnulos caractersticos dos leuccitos polimorfonucleres neutrfilos so lisossomas primrios.

6
Os lisossomas primrios podem fundir suas membranas com as membranas de vacolos fagocticos (fagossomas) formando fagolisossomas, que onde a digesto intracelular realmente ocorre. Os fagolisosomas so tambm chamados de lisosomas secundrios. Muitas vezes, os lisosomas se fundem em vesculas (vacolos) autofgicas formadas pela clula na ausncia de fagocitose e destroem mitocndrias, pores do retculo endoplsmico e do aparelho de Golgi. Finalmente, tanto na fuso com vesculas autofgicas quanto na fuso com fagossomas, ao final do processo, restam lisosomas contendo resduos da digesto geralmente de natureza lipdica e conhecidos como "corpos residuais". Cerca de 25 enzimas, entre outras substncias, j foram identificadas em lisosomas, entre elas: fosfatases cidas, arilsulfatases, esterases, betaglucoronidases alm da lisozima. A seqncia de acontecimentos metablicos envolvendo a morte de microrganismos fagocitados e englobados em fagolisosomas pode depender, ou no, destas enzimas, mas elas so sempre importantes na digesto dos corpos bacterianos. Na morte microbiana aps a fagocitose muito importante um aumento do metabolismo aerbico da clula e a ativao do desvio (shunt) da hexose monofosfato, que conduzem a uma grande liberao de gua oxigenada (H2 O2 ). Neste processo, tambm importante uma enzima lisossomal abundante nos grnulos dos polimorfonucleares neutrfilos denominada mieloperoxidase. H um defeito metablico congnito humano que resulta numa sndrome denominada doena granulomatosa crnica e afeta gravemente a resistncia a infeces, levando morte antes da adolescncia. Nesta doena, a produo intracelular de H2 O2 aps a fagocitose est comprometida. Os leuccitos destes pacientes podem destruir bactrias como Lactobacilos, mas no Serratias. H uma correlao entre a suscetibilidade destas bactrias e sua capacidade de sintetizar uma enzima denominada catalase, que desdobra H2 O2 e elimina sua toxicidade. Por no sintetizar catalase, os Lactobacilos se "suicidam" no interior do vacolo com a H2 O2 que seu prprio metabolismo produz. Bactrias como Serratias, por outro lado, produzem catalase e sobrevivem no iinteriordos vacolos de pacientes com a doena granulomatosa crnica. Mas mesmo Serratias so destrudas em vacolos de clulas normais, que produzem um excesso de H2 O2 aps a fagocitose, um excesso que as bactrias no conseguem detoxificar. O estudo da doena granulomatosa crnica, portanto, sugeriu que um dos principais processos de destruio intracelular de bactrias consiste em facilitar a intoxicao das bactrias por um produto do prprio metabolismo bacteriano - a H2 O2 - ativando trajetos metablicos da clula para produzir H2 O2 que se adicione a H2 O2 produzida pela bactria no interior do vacolo fagoctico. Macrfagos ativados podem produzir 25 vezes mais H2 O2 que macrfagos em repouso. 11.7 Os macrfagos Macrfagos so parasitados por uma srie de microrganismos e parasitas no encontrados em polimorfonucleares, provavelmente por serem clulas de vida mais longa, no citoplasma das quais estes microorganismos e parasitas podem se reproduzir. Entre as bactrias, encontram-se as micobactrias causadoras da tuberculose e da lepra, listrias, salmonelas e brucelas; entre os protozorios, o Toxoplasma gondii, o Trypanosoma cruzi e as Leishmanias. O mecanismo de resistncia microbiana destruio aps a fagocitose varia de acordo com a espcie de micrbio. Alguns, como o Toxoplasma gondii, conseguem evitar o aumento do metabolismo aerbico dos macrfagos. Cepas virulentas do Mycobacterium tuberculosis produzem uma catalase muito ativa, enquanto que o Mycobacterium leprmurium sobrevive ao de enzimas lisosomais. O Trypanosoma cruzi, aps a fagocitose, consegue se libertar do fagossoma e penetrar no citoplasma do macrfago, onde no pode mais ser agredido. Usualmente pensamos em macrfagos apenas como clulas fagocticas, mas h muitas razes para os considerarmos tambm como clulas secretoras pois, quando ativados, eles liberam numerosas substncias para os tecidos, que exercem efeitos, inclusive citotxicos, sobre outras clulas. Entre as proteases neutras liberadas por macrfagos para os tecidos esto o ativador de plasminognio, a colagenase, a elastase. O ativador de plasminognio o transforma em plasmina. A plasmina, por sua vez, atua em trs cascatas enzimticas: na cascata do sistema complemento (ativando C1 e C3), na cascata da coagulao (ativando o fator de Hageman) e na cascata da fibrinolisina, que gera muitos produtos para os quais macrfagos exibem receptores na membrana. O fator de Hageman ativa a pr-calicrena, que se transforma na calicrena. A calicrena, por sua vez, produz peptdeos inflamatrios a partir de precursores no plasma (por exemplo, a bradicinina a partir

7
do bradicinognio plasmtico). A inflamao resultante, atrai mais macrfagos para a regio. A ativao do sistema complemento e a degradao do colgeno geram tambm produtos quimiotticos para macrfagos. A elastase digere fibrilas de elastina e destri a estrutura vascular ou atua em cartilagens, aumentando a inflamao nas artrites. Estes fatores podem interagir ciclicamente, aumentando muito a inflamao. Existem em macrfagos, porm, muitas molculas que atuam como inibidores enzimticos. Os macrfagos secretam, por exemplo, alfa-2-macroglobulina, que capaz de inibir o ativador de plasminognio, a plasmina, a colagenase, a elastase e a calicrena. Outro inibidor importante a alfa-1-anti-tripsina. Existem ainda interaes mais complexas que a simples modulao de fatores inflamatrios e antiinflamatrios. As interaes de macrfagos com o sistema complemento, por exemplo, so muito complexas. Macrfagos sintetizam vrios componentes dos sistema complemento, que so, ento, secretados para o plasma. H pelo menos dois tipos de receptores para componentes ativados do complemento na membrana de macrfagos. Quando estes componentes so ligados aos receptores, eles so endocitados e destrudos por proteases. A ligao destes componentes na membrana, por sua vez, afeta o comportamento dos macrfagos. A ligao dos fragmentos C3a ou C5a (que so ativos sobre mastcitos e, por isso, chamados "anafilotoxinas") ativa ainda mais os macrfagos, mas a ligao de um componente da via alternativa (Bb) inibe a migrao e induz o espalhamento dos macrfagos. Atravs de receptores para C3b, operando junto com receptores para o Fc da IgG, os macrfagos ligam e fagocitam complexos antgeno-anticorpo e este processo pode ser favorecido por citocinas secretadas por linfcitos T. Quando o pH de uma regio inflamada baixa, o macrfago passa a secretar proteases cidas que, alm de agirem no colgeno e na membrana basal de vasos, degradam componentes do complemento, anticorpos e cininas, atuando assim nas condies inflamatrias que agem nos seus prprios processos secretrios. Os macrfagos secretam tambm gua oxigenada, superxido e radicais oxidrila que oxidam enzimas, quebram molculas de protenas, lipdios e cidos nucleicos. 11.8 As cascatas enzimticas do plasma A ativao celular pode ser acompanhada pela ativao de sistemas de enzimas presentes no plasma. Usualmente, estas molculas existem como pr-enzimas. A ativao de faz "em cascata", isto , a ativao de uma pr-enzima resulta na ativao de um nmero muito maior de molculas da pr-enzima seguinte, de forma que em poucos segundos ou minutos, milhes de molculas ativas podem ser geradas como conseqncia da ativao inicial de uma nica molcula enzimtica.

cininognio (alto peso molecular) pr-calicrena

bradicinina

renina-angiotensina pr-renina renina angiotensina I ECA angiotensina II coagulao plasminognio fibrinlise

calicrena angiotensinognio

Fator de Hageman superfcie negativa

Fator de Hageman ativado

Fator XI

Fator XIa pr-ativador do plasminognio C3a C3b C1s ativador do plasminognio complemento

plasmina

Figura 11.5 : A interao entre as diversas cascatas enzimticas do plasma. O Fator de Hageman (Fator XIIa) pode ser ativado por contato com uma superfcie negativa, num processo que depende de duas outras protenas: a pr-calicrena e o cininognio de alto peso molecular. Por sua vez, quando ativado, o Fator de Hageman dispara a cascata da coagulao pela via intrnseca (convertendo o Fator XI no Fator XI-a) e a cascata das cininas, pela converso da

8
pr-calicrena em calicrena plasmtica (que cliva o cininognio de alto peso molecular). Ele tambm ativa o sistema fibrinoltico, convertendo o plasminognio em plasmina. A plasmina, por sua vez, alm de sua ao fibrinoltica, ativa a cascata do complemento (tanto pela formao de C1s, como convertendo C3 em C3b). Por sua vez, a calicrena plasmtica ativa a pr-renina plasmtica a renina, causando a formao de angiotensina I a partir do angiotensinognio ( angiotensina I depois convertida a angiotensina II pela enzima conversora da angiotensina, ECA). Assim, a ativao do fator de Hageman pode resultar na ativao simultnea de 5 cascatas de enzimas plasmticas: complemento, coagulao, calicrena/cinina, renina/angiotensina e fibrinlise. (Adaptado de J.A.Guimares, Cincia e Cultura 33: 1458 (1981)) Um exemplo destas cascatas, particularmente importante na Imunologia, a cascata do complemento que , usualmente, estudada em separado. No entanto, vrias cascatas enzimticas do plasma usam produtos comuns e, portanto, so simultaneamente ativadas como ilustrado na Figura 11.4 . Produtos destas cascatas e produtos celulares, como citocinas e molculas de adeso, interagem reciprocamente e exercem grande influncia sobre os fenmenos imunolgicos. A operao destas cascatas enzimticas tem vrios elementos em comum (Tabela 11.2 ): 11.9 A cascata do complemento As diversas cascatas enzimticas do plasma tm elementos comuns, alm de caractersticas comuns de forma que, provavelmente, nunca so ativadas independentemente umas das outras. H motivos, porm, para considerar em separado a cascata do complemento. Primeiramente, por motivos histricos. A descoberta da lise (destruio) do vibrio da clera injetado no peritneo de cobaias imunizadas foi um achado importante. Inicialmente, isto sugeriu que os anticorpos eram capazes de dissolver microorganismos patognicos pois isto era visvel, evidente. Mais tarde concluiu-se que a lise no era diretamente causa pelos anticorpos, mas sim por um "fator" presente no soro fresco de animais imunes e normais. Este "fator", era pois um "complemento" necessrio para que a lise ocorresse e foi denominado fator complemento . Tabela 11.1 Caractersticas da operao das cascatas enzimticas __________________________________________________________________ 1. Precursores proticos presentes na forma de pr-enzimas ou pr-fatores. 2. Processos de ativao e inativao consistindo de protelise parcial. 3. Enorme ampliao do evento bioqumico final. 4. Componentes ativados tm vida-mdia curta. 5. Formao de complexos multimoleculares. 6. Inibidores enzimticos muito ativos em maior concentrao na fase lquida. 7. Constantes cinticas da ao enzimtica favorecem a inibio do produto ativo. __________________________________________________________________ (Adaptado de J.A.Guimares, Cincia e Cultura 33: 1458 (1981)) Expostas a anticorpos especficos e, ento, ao complemento, no apenas bactrias, mas tambm hemcias e outras clulas, so prontamente destrudas. Examinadas ao microscpio eletrnico, as membranas destas clulas mostram os "poros" caractersticos da lise osmtica desencadeada pelo complemento.

C4a C4

C4b

C2b C2

C2a

C3a C1r C1s C1q Ig C3

C3b

C5a

C5b

C5

C5 convertase epitopos C2a C4b C3b C2a C4b

membrana plasmtica

C3 convertase

Figura 11.6 : A ativao da cascata do complemento pela via clssica . O componente inicial (C1) ativado pelo Fc de molculas de anticorpo. Os fragmentos C2a-C4b ligados membrana da clula alvo constituem a C3-convertase. Os fragmentos C3a e C5a tm vrias aes inflamatrias e quimiotticas. C3b serve de ponto de ligao de macrfagos e, unido a C2a-C4b, constitui a C5-convertase. Nos anos subseqentes, descobriu-se que o "fator" era, na realidade, um sistema composto de vrios componentes diferentes, inicialmente 4 componentes, denominados C1,C2,C3 e C4. Comprendeuse em seguida que estes fatores interagiam em uma seqncia definida que, infelizmente, no era a ordem seguida na nomenclatura, mas sim C1,4,2,3. Pouco mais tarde, outros 5 fatores, denominados C5, C6, C7, C8 e C9, foram caracterizados como necessrios para a ao ltica do complemento.

C3a C3b C3 C3(H 0) H0 C3a C3b fator B fator D C3 C3 C5 fator I fator H fator B fator D C3b membrana plasmtica C3 convertase C3b,Bb C5 convertase C3b,Bb 2 C3 convertase C5a C5b

C3 (H 0),Bb C3 convertase

10
Figura 11.7 : A ativao da cascata do complemento pela via alternativa , comentada no texto, tambm inclui a formao de C3-covertases e da C5 convertase.

complexo de ataque membrana via clssica C3 convertase C3 C3 convertase via alternativa C5a vrias aes inflamatrias C5b C6 & C7 C3b C5 convertase C5b,6,7,,8,9 C5 C5b,6,7 ligao membrana celular C8 & C9

Figura 11. 8 : A cascata do complemento tem dois pontos cruciais: a formao da C3- convertase e da C5-convertase. A C3 convertase gera um peptdeo inflamatrio (C3a) e C3b, uma molcula com vrias aes imunolgicas importantes que tem receptores na membrana de macrfagos e linfcitos B. Por sua vez, a C5 convertase gera C5b que inicia a formao do complexo de ataque membrana e C5a que, alm de agir sobre mastcitos (degranulao) tem aes vasculares diretas e o agente quimiottico mais potente para neutrfilos; finalmente, o C5a ativa os neutrfilos que atrai, desencadeando o shunt respiratrio, a liberao de enzimas lisosomais e a sntese de leucotrieno B4. A lise da clula-alvo depende da formao de poros na membrana criados pela insero de molculas de uma forma ativada de C5 unida aos ltimos 4 componentes (C5b6789), um conjunto denominado MAC (de Membrane Attack Complex). Antes da formao do MAC, porm, vrios eventos de importncia imunolgica derivam da ativao da cascata do complemento, dos quais mencionaremos apenas, e brevemente, a ciso (converso) dos componentes C3 e C5. A converso do componente C3 pode ser alcanada por duas vias enzimticas diferentes denominadas a "via clssica" e a "via alternativa", mostradas nas Figuras 11.5 e 11.6 .

1 12. Para explicar os fenmenos imunolgicos

_________________________________ At aqui, fizemos dois tipos de excurses ao territrio da Imunologia. Nos primeiros captulos, visitamos a histria da Imunologia ("Origens remotas", "Origens recentes") buscando entender porque os imunologistas consideram o sistema imune como um sistema de defesa especfica contra infeces e porque a Imunologia atual tem uma ndole bioqumica e tecnolgica. Depois, fizemos uma descrio sumria dos componentes celulares e moleculares do sistema imune e das interaes que apoiam sua organizao . Vamos agora atravessar terra incgnita. Insistiremos em perguntas pouco usuais. Faremos uma excurso Biologia do Conhecer . 12.1 O conflito de duas vises O que a Biologia do Conhecer ? Porque esta curiosa denominao? O que h de comum entre o nosso conhecer e a atividade biolgica? Est claro que o conhecer se apoia na atividade biolgica. Mas de que maneira? De sada, quero repetir algo que Maturana afirma em algum ponto de seu trabalho: "Nada mais difcil de dar valor e respeitar quanto aquilo que nos dizem e to fundamental que, depois de ouvido, nos parece bvio." Em vez de encarar o enorme conjunto de molculas com regies variveis produzidas pelo sistema imune como um suprimento de elementos especficos destinados a reagir com materiais estranhos, faremos uma afirmao mais modesta: esta diversidade , de alguma forma, necessria organizao que perpetua a operao do sistema imune. Esta organizao surge atravs de um mecanismo automontvel e auto-mantido. No nos preocupemos agora em saber como organismo lida com materiais "estranhos". Deixemos de lado o "reconhecimento imunolgico especfico" e admitamos que os materiais externos so incorporados aos mesmos processos que o organismo usa para reciclar seus prprios componentes celulares e moleculares; que os materiais estranhos so assimilados a estes mesmos processos fisiolgicos a despeito de sua estranheza. A distino entre os processos fisiolgicos e os imunolgicos existe apenas em nossas descries. difcil pensar desta nova forma porque evidente que o sistema imune capaz de formar anticorpos que reagem com materiais estranhos ao corpo e que forma estes anticorpos em quantidades muito maiores do que forma anticorpos para os auto-componentes. Estes anticorpos podem discriminar entre substncias muito parecidas, parecem ser muito especficos. Como conciliar estas duas classes de afirmaes? Como posso, por um lado, aceitar que o organismo mistura materiais prprios e estranhos em um mesmo processo e, por outro, aceitar que ele separa materiais prprios de estranhos? O conflito entre estas duas vises est em nossas descries. Maturana afirma que freqentemente fazemos uma confuso de domnios de descrio . H uma perspectiva na qual podemos ver que o sistema imune discrimina materiais prprios de materiais estranhos e reage especificamente aos materiais estranhos, produzindo anticorpos e linfcitos especficos . No negamos que tais descries podem ser feitas e usualmente o so. Mas, poder o sistema imune , em si mesmo (o mecanismo que o constitui como um sistema), fazer estas mesmas distines que ns, como seres humanos, fazemos? Na atividade imunolgica, clulas (linfcitos, macrfagos, etc) e molculas (imunoglobulinas, receptores celulares, citocinas, molculas de adeso, etc) participam de redes complexas de interaes que podemos analisar de vrias maneiras. Por outro lado, observamos a ocorrncia de mudanas no comportamento imunolgico do organismo como um todo. Por exemplo, as mudanas que ocorrem na imunizao contra doenas infecciosas, a reatividade alrgica ou na rejeio de transplantes. Queremos unir estes dois domnios, entender como as clulas e molculas que compem o sistema imune (algo que observamos no domnio da estrutura do sistema imune) participam do comportamento imunolgico (algo que observamos no domnio das interaes do organismo). Maturana afirma que este nosso propsito pode esbarrar em uma confuso de domnios de descrio. O que quer ele dizer?

2
12.2 Conhecer o conhecer Ele afirma que precisamos conhecer como os seres vivos so capazes de "conhecer" alguma coisa ou alguma ao. H uma circularidade vertiginosa nesta inteno de "conhecer o conhecer", como explicava Maturana, em uma palestra recente em Santiago do Chile: "Os cientistas praticam a cincia como observadores que explicam o que observam. Ns, seres humanos, j nos encontramos como observadores observando quando comeamos a observar nosso observar numa tentativa de descrever e explicar o que fazemos. Isto , nos encontramos j na linguagem, fazendo distines na linguagem, quando comeamos a refletir na linguagem sobre o que fazemos e como ns fazemos o que fazemos quando operamos como animais que usam a linguagem. Em outras palavras, acontece conosco que j somos sistemas vivos que usam a linguagem fazendo o que fazemos, incluindo nossas explicaes, quando comeamos a explicar o que fazemos. E ns j estamos na experincia de observar quando comeamos a observar nosso observar. Observar aquilo que fazemos como observadores quando distinguimos na linguagem os diferentes tipos de entidades que trazemos baila como objetos de nossas descries, explicaes e reflexes no decorrer de nossa participao nas diferentes conversaes em que estamos envolvidos em nossa vida diria." Quer dizer, para responder nossas perguntas, no poderemos evitar a considerao de problemas mais amplos. O que acontece conosco quando conversamos ou lemos um texto? Usualmente entendemos que estamos trocando "informaes". Maturana tem uma maneira caracterstica de abordar estes problemas. Suas perguntas no podem deixar de estar ligadas Filosofia do conhecer ( Epistemologia). Mas ele insiste em caminhar no sentido biolgico destes problemas porque o "conhecer", necessariamente, tambm est ligado nossa constituio como seres vivos e como seres humanos que utilizam a linguagem. Usualmente, estes problemas so, de certa forma, adiados ao dizermos que armazenamos "informaes" no sistema nervoso. Neste caso, porm, como ficaria a descrio dos seres vivos que no possuem um sistema nervoso? Por acaso uma planta ou um protozorio no exibem comportamentos que desafiam nosso entendimento? Maturana afirma que: " Os sistemas vivos so sistemas cognitivos e viver, como um processo, um processo de cognio. Esta afirmao vlida para todos os organismos, com e sem um sistema nervoso." Ele pergunta: "O que observar?" "Como nossa biologia est envolvida em nossas observaes?" "O que explicar algo?" "O que torna uma explicao cientfica?" Com estas perguntas, ele nos leva a definir o que somos como seres vivos, o que fazemos como seres humanos quando operamos como observadores na linguagem, no conversar. Ele nos convida, afinal, a reavaliar a prpria natureza da realidade. Isto feito, porm, atravs de um prisma biolgico, fundado em nossa estrutura como seres vivos. Em outro trecho da palestra citada acima, ele disse: "Refletindo sobre o que o observador faz, ou encaramos suas capacidades cognitivas como propriedades inexplicveis ou as encaramos como fenmenos que precisam ser explicados mostrando como eles surgem da biologia do observador como um ser humano." Este trecho aponta para a existncia de dois caminhos explicativos. Qual deles escolheremos? Conta Maturana que houve uma fase em que ele se preocupava com o que pareciam ser dois problemas fundamentais. Como neurobilogo, cujos trabalhos por pouco no ganharam o prmio Nobel nos anos 60, ele estudava a percepo de cores e sua relao com a estrutura da retina. Como professor, estava gravemente preocupado com a incapacidade de responder pergunta "O que um ser vivo?". Parecia-lhe insatisfatrio descrever os seres vivos em termos de propriedades, dizer que eles se reproduzem, se movem, metabolizam, etc. Acabaramos com uma enorme lista sempre incompleta. Faltava uma definio da vida, em si mesma, como um fenmeno. Faltava o entendimento de como os seres vivos se

3
constituem. Por volta de 1970, ele compreendeu que estas duas perguntas eram uma s. "O que a percepo?" e "O que viver?" so duas faces da mesma pergunta. O que quereria ele dizer com isto? "O que a percepo?" e "O que viver?" se tornam a mesma pergunta quanto entendemos que conhecer viver e viver conhecer. Isto , quando encaramos as atividades biolgicas como um processo cognitivo. Aceitar que "conhecer viver" fcil. Mas o que significa: "viver conhecer". Tudo que vive "conhece"? Em que sentido viver conhecer? Viver desempenhar com eficcia a tarefa de continuar vivo. Esta tarefa envolve, necessariamente, mltiplas interaes do ser vivo em seu ambiente. Podemos admitir que, nestas interaes, o ambiente, de diversas maneiras, "percebido" pelo ser vivo. Etmologicamente, a palavra percepo, vem de per capiere ( por captao , pegar alguma coisa). Por percepo (de uma imagem, um som, um cheiro, uma forma) queremos significar que o ser vivo apanha coisas no mundo, saca bocados em um mundo que est l para ser percebido. Na nova viso oferecida por Maturana, o conceito de percepo deixa de ser um bom conceito, exatamente porque ele traz consigo a idia deste mundo exterior, objetivo, onde captamos coisas. Na nova viso que ele oferece, nossa biologia se envolve de forma diferente na constituio da realidade. O que chamamos percepo algo sempre eventual, episdico. No lugar antes ocupado pela percepo de eventos, Maturana enfatiza a continuidade indispensvel do processo biolgico. Obrigatoriamente, viver um processo incessante no qual um contnuo de mudanas mantm o ser vivo adaptado s suas circunstncias, estas tambm continuamente cambiantes. No se trata de responder a estmulos eventuais. O contnuo de mudanas que caracteriza o ser vivo est sempre estruturalmente acoplado ao contnuo de mudanas do ambiente que ele habita. Continuar vivo manter esta congruncia atravs de uma seqncia de mudanas estruturais que regenera incessantemente o ser vivo. Estamos habituados idia de regenerao aplicada a partes de um ser vivo, como o rabo de uma lagartixa ou os ramos de uma rvore. Maturana introduz o conceito de autopoiese (auto-construo) para indicar que viver um processo incessante de auto-regenerao global. Este processo (autopoitico) no pode ser dissociado da seqncia de mudanas que o ambiente desencadeia no ser vivo (e o ser vivo desencadeia no ambiente). Neste sentido, "estar percebendo o mundo" tem o sentido de "estar vivendo" e no necessariamente o sentido de estar imerso em um mundo objetivo que pode ser separado do ser vivo. Viver e conhecer podem ser vistos como dois aspectos do mesmo processo. Por isto, Maturana se refere ao seu trabalho como a Biologia do Conhecer . evidente que, ao sugerir uma mudana na idia de que habitamos um mundo objetivo independente de nossas observaes, Maturana se envolve com problemas filosficos. Ele insiste, porm, que este tambm um problema biolgico porque so os seres vivos que conhecem o mundo e sem conhecer no existe mundo algum. Torna-se imperativo conhecer o conhecer dos seres vivos, para conhecer o mundo. Ele no est se referindo ao "conhecimento humano", mas, ao se referir ao conhecer exibido por uma planta ou um protozorio, est tambm apontando para as bases biolgicas do entendimento humano. Para isto, porm, ele redefine o que entendemos por linguagem. Este um aspecto crucial em seu trabalho, que s poderemos abordar superficialmente aqui. Quero apenas adiantar que, para Maturana, a realidade no nem objetiva, independente de ns, nem subjetiva, pessoal, pois ela os objetos que a constituem so configurados na linguagem, uma empreitada coletiva. H uma opo por um de dois caminhos explicativos de nossa experincia ao conhecer o mundo. Num destes caminhos, o tradicional, no necessrio levar em conta a biologia do observador para afirmar a existncia de uma realidade objetiva. As coisas so como so, seja l como forem, independentemente de nossas observaes. Maturana chama a este o caminho da "objetividade sem parntesis". No segundo caminho, nos damos conta de que a configurao da realidade brota da biologia do observador e, portanto, torna-se indispensvel estudar as relaes entre esta biologia e o conhecer desta realidade. Este o caminho da "objetividade entre parntesis". Estes dois caminhos explicativos implicam em tipos diferentes de perguntas cognitivas. " O que ver?" ou "O que reconhecer imunologicamente um antgeno?" so perguntas que levam a desdobramentos diferentes segundo o caminho explicativo que escolhermos.

12.3 A Imunologia e a Biologia do Conhecer Como imunologista, meu envolvimento com estes problemas se iniciou de forma oblqua, o que no cabe descrever aqui. H muitos anos dou nfase a temas da Imunologia que me parecem ter duas qualidades incompatveis: so negligenciados pelos imunologistas, mas me parecem da maior importncia. Cedo

4
percebi que, para abordar estes problemas, teria que lidar com assuntos mais gerais que a Imunologia. Sei que a mera tentativa de abordar estes temas gerais parece implicar alguma presuno da minha parte, como se eu tivesse algum talento especial. No me sinto assim. Durante os ltimos anos, discuti exaustivamente estas opinies. Buscava uma compreenso da atividade imunolgica, como um todo. A Biologia do Conhecer me pareceu, afinal, a interpretao generalizante que buscava. Neste pequeno livro e ,particularmente, neste captulo, fao a tentativa ambiciosa de servir a duas causas. Por um lado, quero apresentar a Biologia do Conhecer . Por outro, quero faz-lo usando a Imunologia como exemplo. Sinto-me mais seguro ao falar de minha prpria rea de trabalho. Alm disso, o "conhecer imunolgico", exatamente por ser menos familiar que o "conhecer psicolgico" pode ser abordado pela Biologia do Conhecer sem as dificuldades criadas pelas pressuposies que cada um de ns tem sobre como "conhecemos" as coisas. Ao mesmo tempo, a maneira como definimos ou compreendemos o "conhecer imunolgico" deriva da maneira como definimos ou compreendemos o "conhecer" (Por isto, no Captulo 14 , nos detemos a examinar em mais detalhe a noo de "informao"). Como vimos, a Imunologia uma cincia recente. Surgiu ao final do sculo passado, validada e validando uma nova forma de Medicina. Surgiu como conseqncia e como parte indispensvel da Teoria dos Germes, da tentativa de Pasteur de explicar a origem das doenas. Generalizada na Teoria das Causas Especficas das Doenas, esta Teoria tornou-se a coluna dorsal da Medicina contempornea. Apesar de sua hegemonia, a Teoria das Causas Especficas insatisfatria. H uma forma especial de ignorncia difundida entre os imunologistas profissionais, e na sociedade em geral, sobre os mecanismos das doenas e a defesa imunolgica. Os mecanismos bsicos de operao do sistema imune no so conhecidos e sempre que nos referimos a eles, o fazemos em termos metafricos - "fazendo de conta" que clulas e molculas atuam com uma deliberao defensiva. Por outro lado, conhecemos cada vez mais minuciosamente os componentes e sub-componentes do sistema. Em um trabalho recente, o geneticista evolutivo Susumo Ohno escreveu: "Na Imunologia atual, sabemos tudo, e no compreendemos nada!". Desde que no compreendemos como o sistema opera, no sabemos como intervir previsivelmente na maioria das atividades imunolgicas. As vacinas em uso humano e veterinrio foram todas desenvolvidas empiricamente, milhares de outras falharam no estgio experimental. No sabemos porque umas funcionam, outras no. A Imunologia no pode prometer vacinas sociedade porque no sabe como invent-las. Os progressos recentemente obtidos sobre mecanismos celulares e moleculares da atividade imunolgica no conseguem alterar este panorama, porque no esto articulados em um quadro coerente. Continuamos a agir empiricamente. Por exemplo, um mtodo moderno eficaz no tratamento de algumas doenas auto-imunes, a injeo de altas doses de imunoglobulinas (discutiremos adiante), age por mecanismos totalmente obscuros. As doenas autoimunes so diagnosticadas por mtodos noimunolgicos, pelas leses que causam, pois no sabemos distingir um sistema imune sadio de um doente. A facilitao dos transplantes renais por transfuses de sangue utilizada sem que entendamos como isto se passa. No entendemos porque as gestantes no rejeitam os fetos e suas placentas como se fossem transplantes alognicos. Uma parcela das protenas que ingerimos como alimentos penetra a circulao em forma antigenicamente ativa, mas a importncia que isto pode ter na operao global do sistema imune negligenciada. No compreendemos quase nada sobre a suscetibilidade individual s infeces ou ao desenvolvimento de alergias. Este um quadro bem diferente do apresentado nos livros-texto de Imunologia. A deciso de no polemizar estes temas se deve, em parte, relutncia dos biologistas experimentais em discutir "teorias", embora isto seja corriqueiro na Fsica e outras reas da cincia. Mais fundamentalmente, porm, o problema se deve inexistncia de uma Teoria suficientemente ampla e poderosa sobre a natureza dos fenmenos biolgicos. A Imunologia no dispe de sua Teoria porque ela tambm est ausente da Biologia atual. No dispomos de uma Teoria adequada sobre a doena porque no dispomos de uma Teoria sobre a biologia normal.

A introduo de uma Teoria que redefina a Imunologia, portanto, passa por uma redefinio dos fenmenos biolgicos em geral, tanto pela definio dos seres vivos, quanto por uma reavaliao do processo evolutivo. Em minha opinio esta Teoria j est disponvel no trabalho de Maturana e seus colaboradores sobre a Biologia do Conhecer . Por isto, introduzo estes captulos to diferentes dos que os precederam.

5
12.4 A metfora defensiva Freqentemente falamos dos seres vivos em termos antropomrficos. Fazemos de conta que o corpo sbio, no sentido em que concebemos a sabedoria. A atividade biolgica, porm, constitui uma forma diferente de "conhecer". Podemos dizer que um embrio sabe crescer para formar uma estrela do mar, um canrio ou um tigre. Dizemos que a trepadeira sabe se enrolar em seu suporte e que o protozorio sabe procurar seu alimento. Mas nossa referncia a este saber, este conhecer biolgico, imprecisa e nebulosa. Precisamos esclarecer esta diferena entre o "conhecimento humano" e este "conhecer" que caracteriza a atividade dos sistemas biolgicos. Que relevncia tem isso para a Imunologia? Quando dizemos que o sistema imune nos defende, identificando e eliminando materiais estranhos em meio aos componentes do corpo, estamos usando, deliberadamente ou no, uma metfora , um "faz de conta". No existe uma entidade inteligente planejando e desenvolvendo estratgias defensivas contra invasores antignicos no mago do sistema imune. As modificaes que o sistema atravessa surgem como decorrncias inevitveis de sua estrutura celular e molecular. Tais mudanas estruturais ocorrem como se o corpo se defendesse e, usualmente, resultam na eliminao de materiais estranhos sem causar danos excessivos estrutura do organismo. Mas elas no derivam de um planejamento da defesa. A defesa no intencional . O corpo existe sempre de uma maneira determinada por sua estrutura , em congruncia com suas circunstncias (em acoplamento estrutural com o ambiente), mantendo sua organizao e sua adaptao atravs de uma seqncia particular de mudanas estruturais. Algumas destas mudanas se passam durante a existncia do indivduo, muitas outras se passaram durante a filognese, numa longa e ininterrupta seqncia de acontecimentos desde a origem da vida. Os seres vivos so seres histricos, no sentido que representam o resultado de uma longa seqncia de modificaes estruturais. Por um lado, o sistema imune parece operar inteligentemente e sua operao constitui uma maneira de "conhecer" o mundo. Por outro, aprendemos a decomp-lo em elementos celulares (linfcitos) cada um dos quais desempenha aes muito mais singelas. Por um lado, o sistema parece dotado de uma intencionalidade defensiva, parece capaz de reter a memria de acontecimentos passados; por outro, encontramos os linfcitos e seus produtos moleculares envolvidos em uma dinmica estrutural na qual a variedade dos resultados muito mais limitada. No domnio dos linfcitos, tudo se resume a ativaes e inibies celulares. Como podem estas aes celulares resultar em um sistema que age como se fosse inteligente e recordasse o passado? 12.5 Mecanismos & significados Podemos buscar descries semnticas , baseadas no significado do que o sistema imune realiza, enfatizar seus propsitos de defesa. Por outro lado, podemos buscar descries estruturais . Que estrutura precisa ter o sistema imune para se comportar como se comporta? Clulas e molculas especiais participam dos fenmenos imunolgicos (molculas com regies variveis (regies V ) formadas por linfcitos). Diferentemente de todas as demais molculas de protenas formadas pelo organismo, durante a emergncia dos linfcitos surgem molculas com trechos onde a seqncia de aminocidos varivel, isto , varia de linfcito para linfcito. Isto se deve a processos especiais de rearranjo do genoma ocorrendo exclusivamente na linfopoiese e no em outras clulas. Por isto, os linfcitos so diferentes de todas as demais clulas do organismo: tm o genoma rearranjado, nascem individualizados, cada qual portando como receptores de membrana cem mil cpias de uma mesma molcula portando regies V recm-inventadas. No domnio estrutural , queremos descrever o sistema imune como um mecanismo tal que, deixado operar, dar origem a todos os fenmenos imunolgicos. Neste domnio, necessrio descrever sua organizao, isto , componentes essenciais e relaes essenciais entre estes componentes, sem os quais seria impossvel descrever os fenmenos imunolgicos. Por outro lado, estamos tambm interessados na participao que o sistema imune tem nas interaes do organismo em seu ambiente. Este, porm, um domnio de descrio diferente, complementar ao domnio estrutural. Precisamos, porm, manter separados estes dois domnios. Num domnio, descrevemos linfcitos e seus produtos moleculares, clulas so ativadas, inibidas, destrudas. Tudo o que ocorre neste domnio so modificaes celulares e moleculares. No outro domnio, descrevemos as interaes do organismo em seu ambiente e mudanas que o organismo atravessa de acordo com estas interaes (imunidade, alergia, agresses auto-imunes etc). Usualmente fundimos estes

6
dois domnios em um s e conclumos que so as interaes no ambiente que determinam as modicaes da estrutura do sistema. De acordo com a Biologia do Conhecer , isto no pode se passar assim, pois no existem interaes instrutivas e o organismo muda de acordo com sua prpria estrutura. Um anlise de alguns fenmenos imunolgicos pode ajudar a esclarecer este ponto. 12.6 Como e porque o sistema imune parece responder especificamente a materiais que incapaz de processar e apresentar? Contrariamente viso mais popular da reatividade imunolgica, o contato com materiais estranhos ao corpo incapaz de promover, diretamente, a ativao de linfcitos. Vimos, no Captulo 4 , que a ativao de linfcitos depende de interaes com outros linfcitos e/ou com clulas apresentadoras . Linfcitos B e T "reconhecem" antgenos de maneiras diferentes. Os linfcitos B podem captar materiais por unio direta de epitopos s molculas de imunoglobulinas (anticorpos) expressas, como receptores, em sua membrana . Os linfcitos B, no entanto, no so ativados quando isto ocorre. Em contraste, os linfcitos T so incapazes de ligar materiais como molculas de antgeno, em sua forma nativa, diretamente aos receptores clonais (TCR) que expressam na membrana. Para que esta ligao ocorra, o material precisa ser apresentado aos linfcitos T incorporado na membrana de clulas apresentadoras. Quando esta ligao efetivamente ocorre, os linfcitos T so ativados. Entre as clulas que operam como apresentadoras para os linfcitos T-CD4+ (auxiliares na ativao dos linfcitos B) esto os prprios linfcitos B, macrfagos, clulas dendrticas e algumas outras clulas. As clulas apresentadoras necessitam processar o antgeno e conjugar os peptdeos resultantes deste processamento a produtos do MHC ( Captulos 7 ). Para as interaes ativadoras dos linfcitos TCD4+, os produtos mais importantes do MHC so produtos de classe II, expressos apenas nas clulas apresentadoras. O que apresentado ao linfcito T um conjugado de peptdeos derivados do material processado com produtos do MHC (Captulo 8 ). Podemos agora mostrar, com um exemplo imunolgico, como no existem interaes instrutivas e que o sistema imune atua de acordo com sua estrutura. Nas respostas imunes especficas a polissacardeos ou a haptenos, como o grupamento dinitrofenil (DNP) ou peniciloil, anticorpos so formados para materiais que no so processados nem apresentados, isto , trechos da molcula do antgeno que no so transformados em peptdeos e no formam conjugados com produtos do MHC. Estes anticorpos surgem como resultado da apresentao de peptdeos derivados do processamento da protena (protena portadora) qual estavam associados os polissacrideos ou o hapteno (Figura 12.1 ). Na operao do sistema imune ocorre algo semelhante a um dito popular: "Atira no que v, acerta no que no v." Por se passarem desta forma, os processos imunolgicos no podem ser e no so especificados diretamente por interaes com materiais estranhos. O sistema imune no "responde" aos epitopos que contata. As "respostas imunes especficas" (T-dependentes) derivam de processos mais bsicos de processamento ligados contnua montagem e desmontagem de materiais celulares. Estes processos j operavam antes do encontro com o antgeno. O linfcito T reage com um detalhe que o linfcito B "no viu", mas apresentou. O painel central da Figura 12.1 ilustra tambm um pouco da complexidade da interao entre os linfcitos T e B. O peptdeo resultante do processamento um pequeno detalhe no conjunto de pareamentos moleculares que ali se completam. um acidente intrometido no conjunto de interaes moleculares que perpetuam a ativao linfocitria. Mas h uma ironia no que ocorre depois, como mostra o painel da direita na Figura 12.1 . Quando a interao com o linfcito T efetivamente resulta na ativao do linfcito B, os anticorpos produzidos sero dirigidos aos detalhes inicialmente captados pelo linfcito B e no a detalhes dos peptdeos apresentados aos linfcitos T, que so os responsveis pela ativao . H um vo entre as aes do linfcito B e as aes do linfcito T. Neste vo est a organizao do sistema imune, a conjugao de aes de linfcitos T aos linfcitos B e aos demais componentes do sistema.

7
antgeno epitopo peptdeo CD3 CD4 imunoglobulina linfcito B TCR peptdeo produto do MHC peptdeo

linfcito T

linfcito B imunoglobulina secretada

produto de classe II MHC processamento/apresentao

Figura 12.1: Para que sejam ativados, os linfcitos B requerem o "auxlio" de linfcitos T auxiliares (CD4+) no se ligam ao antgeno nativo mas sim a que peptdeos resultantes do "processamento" do antgeno conjugados ado molculas MHC.No h uma relao direta entre a especificidade do material captado pelos anticorpos do linfcito B e a especificidade da interao ativadora com o linfcito T auxiliar. Os anticorpos so muitas vezes formados paraque no so epitopos processados/ apresentados (por exemplo, anticorpos anti-polissacardeos ou anti haptnicos). Os epitopos da protenaso conformacionais e, usualmente, so nativa destrudos durante o processamento. No painel da direita, a imunoglobulina secretada no tem relao direta com o peptdeo que tornou possvel a ativao do linfcito B que a secretou. O sistema acerta no que no v. H uma sabedoria embutida neste processo. Por um lado, o mecanismo de ativao dos linfcitos T resguardado do contato com materiais que chegam do exterior ao organismo. Por outro, o organismo gera continuamente uma grande variedade de linfcitos B, uma diminuta parcela da qual aproveitada ao sabor das interaes do organismo. Este aproveitamento no depende diretamente do material contactado pelo linfcito B, mas sim do resultado do processamento. Devido a tal estratgia, no encontro com vrus, microorganismos e parasitas, o sistema imune desmonta e despreza a experincia evolutiva configurada na estrutura do invasor e a reduz a uma organizao prvia e anterior, isto , o desmembra em peptdeos. Esta organizao prvia e anterior (as relaes mantidas entre o conjunto dos linfcitos B e o conjunto dos linfcitos T) constitui a fisiologia do sistema imune. Baseado na proposta de Maturana sobre a Biologia do Conhecer, o sistema imune pode ser descrito como uma rede fechada de regulao de produes celulares e moleculares na qual estados relativos de ativao linfocitria podem apenas conduzir a outros estados relativos de ativao linfocitria. Nesta perspectiva, o sistema no distingue "antgenos" de "autocomponentes". Para o sistema no h fora, nem dentro. Como observadores do sistema imune, podemos facilmente perceber um lado de fora e um lado de dentro, mas, para tanto, temos que nos colocar em uma posio externa ao sistema. Esta distino impossvel para os componentes do prprio sistema. Assim sendo, o sistema no pode ser "estimulado", no "responde" a nada. Para o sistema no existem "respostas imunes especficas" nem estados de "tolerncia imunolgica", como existem para o imunologista que o descreve. O sistema opera como se executasse respostas imunes. Mas, do ponto de vista de sua estrutura, existem apenas estados relativos de ativao linfocitria que conduzem a outros estados relativos de ativao linfocitria. Uma pergunta se coloca de imediato: se o sistema imune opera como tal rede fechada , como explicar o desempenho imunolgico do organismo que conduz, por exemplo, eliminao de materiais estranhos? Como pode uma rede fechada, para a qual no existe "fora" nem "dentro", atuar como se detectasse a presena de materiais estranhos ao corpo? Como pode a organizao do sistema imune ter conseqncias defensivas para o corpo sem que ela tenha um propsito defensor? Como acertar no que no foi visto? 12.7 Conseqncias defensivas sem um propsito defensor A organizao do sistema imune depende de uma associao entre mecanismos de gerao de diversidade molecular (regies V) e mecanismos associativos de sobrevivncia celular, que se nutrem

8
desta diversidade. Linfcitos emergentes so ativados por associao com outros linfcitos previamente ativados, formando uma rede complexa multiconectada que auto-determina suas aes. Como veremos, as associaes entre os linfcitos so criadas pela conectividade idiotpica e por mecanismos de pluralizao que operam durante o processamento/apresentao. A histria individual (epignese) do sistema imune a seqncia particular de modificaes estruturais desta rede de conexes entre componentes desencadeadas na prpria dinmica interna do sistema e tambm por interaes em seu ambiente. O "ambiente" do sistema imune o prprio organismo, com seus componentes e materiais que, de uma forma ou de outra, o invadem (vrus, microorganismos, materiais derivados de alimentos, etc). O ambiente do organismo um meta-ambiente para o sistema imune e, como tal, s interfere em sua operao indiretamente. Mas voltemos nossa pergunta. Como podem existir relaes entre a fisiologia do sistema imune (que se d no domnio estrutural, que no admite interaes instrutivas) com o domnio das interaes do sistema (onde um observador o descreve executando respostas imunes especficas)? Tomo como exemplo uma infeco viral, mas o mecanismo se aplica a toda uma variedade de elementos invasores do organismo, desde bactrias a restos moleculares de alimentos imperfeitamente digeridos . Para penetrar em clulas do organismo, os vrus se ligam inicialmente a molculas da membrana celular, que so "subvertidas" para desempenhar o papel de "receptores" do vrus. H muitos exemplos em que os receptores virais so molculas da superfamlia das imunoglobulinas. Por exemplo, o vrus da dehidrogenase lctica murino, utiliza produtos de classe II do MHC como receptores; todas as variedades conhecidas do vrus da influenza utilizam a molcula de ICAM-1 como receptor; o vrus ao qual se atribui a AIDS, o HIV, utiliza molculas de CD4 na membrana de linfcitos T-auxiliares humanos como receptores.

Ig-1

Ig-2

Ig-1 Ig-2 2 2 Ig-2 V

Ig-2

Ig-1 1 1 1 1

Figura 12.2: A produo de auto-anticorpos naturais para componentes de membrana, incluindo outros auto-anticorpos, conseqncias protetoras. pode ter Imaginemos que um vrus (V) utiliza como "receptor" uma protena de membrana (1) que interage com um segundo componente do organismoexistir auto (2). Podem anticorpos (Ig-1 e Ig-2) que interagem fisiologicamente com estes componentes e entre si (painel esquerdo). Estes dois tipos de imunoglobulinas protegero o organismo da penetrao de um vrus (V) que utilize o auto-componente-1 como "receptor": Ig-2, competir com o vrus pelo receptor; Ig-1, porque se combina por diretamente ao vrus. A presena de Ig-1 e Ig-2 constituir uma proteo "natural" ao vrus. Por outro lado, desde que a chegada do vrus altera as interaes entre Ig-1 e Ig-2, podem surgir alteraes nas concentraes de Ig-1 e Ig-2 o que tornem organismo "especificamente imunizado" ao vrus. Fisiologicamente, o sistema imune produz imunoglobulinas que reagem com componentes do prprio organismo (auto-anticorpos). A Figura 12.2 , por exemplo, mostra um componente de membrana (componente 1) reagindo com um componente livre (componente 2). Alm disso, a Figura 12.2 mostra imunoglobulinas (Ig-1 e Ig2) que reagem com estes componentes, alm de reagirem entre si. Notar ainda,

9
que a Ig-1 tem estrutura semelhante a estruturas presentes no componente-1 e Ig-2 partilha detalhes estruturais com o componente-2 (o que Jerne chamava de "imagens internas"). Este no um exemplo criado ao acaso. O vrus da dehidrogenase lctica (LDH) do camundongo usa produtos do MHC como receptores; muitos anticorpos anti-TNP (anti-trinitrofenil) de camundongos Balb/c funcionam como "imagens internas" de um produto de classe II do MHC (denominado Ia-7) expresso por estes camundongos. Assim, auto-anticorpos anti-anti-MHC, (anti-anti-Ia7), que so comuns entre os anticorpos "naturais" de camundongos Balb/c, podem funcionar como anticorpos protetores em infeces pelo vrus LDH. Esta proteo no "antecipatria", no precisa prever, e no prev, a estrutura de cada um dos invasores do corpo. Ela se baseia na organizao de processos internos do organismo, que "copiam" molculas de membrana em idiotipos de imunoglobulinas. Estes processos no tm "funes" protetoras, mas tm conseqncias protetoras e, por isto, so mantidos na deriva filogentica (Captulo 15 ) . 12.8 A falcia das interaes instrutivas Tudo o que acontece ao sistema imune determinado por sua estrutura , surge como uma mudana estrutural. Tais mudanas surgem, quer no curso da prpria dinmica interna do sistema, quando seus componentes interagem entre si, quer desencadeadas pelas interaes do sistema em seu ambiente. Nada externo ao sistema imune pode especificar (determinar, dirigir) o que vai ocorrer no sistema, porque isto j est especificado (determinado, dirigido) pela estrutura que o sistema possui naquele momento. Dada grande plasticidade estrutural do sistema, muitas mudanas diferentes so possveis a cada momento e as interaes com o ambiente desencadeiam mudanas estruturais diferentes. Mas estas modificaes no so determinadas pelo ambiente. No existem interaes instrutivas. Desde 1955-57, como sugerido inicialmente por Jerne, depois por Burnet, os imunologistas admitem que interaes com materiais externos ao corpo no podem induzir (especificar, determinar) o que vai ocorrer no sistema imune. Por um lado, os imunologistas sabem que as molculas que o sistema utiliza como receptores (Igs e TCRs) so especificadas (determinadas, criadas) pela prpria operao do sistema imune e que estes receptores celulares precisam existir antes da interao com materiais externos. Por outro lado, eles admitem que so os materiais externos ao sistema imune (os antgenos) que selecionam as clulas e molculas do sistema imune com as quais vo interagir e, ao faz-lo, ora estimulam, ora inibem o crescimento de clones linfocitrios. Pensam os imunologistas que, atravs destas interaes seletivas, o corpo se imuniza a materiais estranhos e adquire tolerncia imunolgica (cessa de responder), por exemplo, aos seus prprios constituintes. Se assim fosse, a estrutura do sistema imune seria moldada (criada, determinada, especificada), unilateralmente, por suas interaes. A estrutura do sistema imune seria instruda pelo "ambiente" do sistema . O sistema imune teria uma organizao aberta . Embora cada clula fosse "selecionada" por meio de molculas receptoras especificadas pelo prprio sistema, esta "seleo" seria especificada (determinada, causada) pelas interaes do sistema no seu "ambiente". Na Teoria da Rede Idiotpica, de 1974, Jerne liminarmente sugere que o conjunto de clulas sobre o qual esta "seleo" opera no especificado (determinado) exclusivamente pelas interaes das mesmas com materiais externos ao sistema, mas, sim, depende de interaes (idiotpicas) entre os prprios elementos (clulas e molculas) do sistema imune. Ao criar o conceito de idiotipos funcionando como imagens internas de materiais antignicos, Jerne nos encaminhou para teorias onde impossvel separar estes dois lados do problema. Visto por este ngulo, o sistema no s afetado por suas interaes no ambiente, mas tambm afetado por uma dinmica que lhe interna. Queremos compreender como linfcitos so ou deixam de ser ativados ou como imunoglobulinas e fatores inflamatrios so ou deixam de ser produzidos. Precisamos saber como estas atividades brotam das prprias interaes entre os componentes do sistema imune. Temos insistido em explicar estas atividades como conseqncias da penetrao de materiais estranhos no corpo, mas imunoglobulinas so produzidas e linfcitos so ativados mesmo na ausncia de qualquer contato com antgenos (em animais "antigen-free"). 12.9 As metforas funcionais Usualmente, nossas referncias aos aspectos globais da atividade imunolgica so feitas de forma esquiva, usando metforas que, impropriamente, adquirem um valor explicativo. Estas metforas no constituem explicaes, no propem mecanismos capazes de gerar os fenmenos que pretendem explicar. Quando dizemos que neurnios na mucosa olfativa "reconhecem" odores ou que linfcitos

10
"reconhecem" antgenos, parecemos entender algo mais sobre estes fenmenos, mas estamos dizendo apenas que os neurnios ou linfcitos so ativados nestas circunstncias. As descries funcionais so metforas que no nos ajudam a conhecer a organizao dos sistemas biolgicos. Descrever um automvel como "um meio de transporte" no esclarece se ele se move com patas ou rodas, se utiliza energia qumica ou a energia do vento para se mover. Dizer que o sistema imune um sistema que defende o corpo contra a penetrao de materiais estranhos no esclarece como este "reconhecimento" se d, que estrutura o sistema deve ter para interagir com materiais estranhos; no nos ajuda a compreender sua organizao, sua estrutura. A deteco de materiais estranhos uma decorrncia da organizao do sistema, no o contrrio. A organizao do sistema imune no deriva da necessidade de reconhecer materiais estranhos. Na realidade, nenhuma caracterstica biolgica deriva de uma necessidade (ver Captulo 14 ). Enquanto vemos o sistema imune como um sistema de defesa, podemos adiar a possibilidade de explic-lo, porque esta "funo de defesa" no exige, em princpio, uma descrio da organizao de um sistema. A defesa poderia derivar da ao de linfcitos isolados uns dos outros. Na realidade, exatamente esta a viso defendida pela Teoria de Seleo Clonal. As doenas autoimunes e as alergias tambm podem ser explicadas pela ao de clones isolados. A cooperao entre clones surgiria apenas para "ajudar" ou "suprimir" as respostas especficas. Esta atitude deriva diretamente da Teoria dos Germes , de Pasteur. A Imunologia no esconde suas razes histricas. Se, por um lado, a metfora de defesa no ajuda a definir os mecanismos que constituem o sistema imune, por outro lado, ela cria os paradoxos que atormentam a Imunologia contempornea. Destes paradoxos, o mais incmodo a auto-reatividade fisiolgica. H linfcitos ativados reativos com autocomponentes em organismos sadios. Porque estas clulas no atacam os tecidos e promovem leses autoimunes? Tais linfcitos surgem mesmo em camundongos mantidos desde o nascimento em ambientes livres de macromolculas estranhas ("antigen-free"), algo contrrio idia de que os linfcitos s so ativados em presena de materiais estranhos. Omitidos, sob o tapete, esto outros paradoxos que os imunologistas contemporneos mencionam apenas de passagem ou deixam de fora dos livros didticos: a tolerncia oral em animais adultos; a facilitao de transplantes renais por transfuses do sangue do doador; a gravidez vivpara saudvel em presena de linfcitos maternos capazes de destruir tecidos fetais; a associao de certas caractersticas do MHC com a ocorrncia de doenas autoimunes; entre outros. H um enorme contraste entre a descrio metafrica que os imunologistas fazem do sistema imune como um conjunto de linfcitos voltados para a deteco do que estranho e a descrio que Maturana faz do sistema nervoso. Enquanto os imunologistas sugerem que linfcitos individuais, como componentes do sistema imune, tm propriedades de "reconhecimento" similares s do sistema nervoso, Maturana, famoso como neurobilogo, nos diz que os elementos estruturais do funcionamento do sistema nervoso no foram ainda definidos: " Neurnios so a unidade anatmica do sistema nervoso, mas no so os elementos estruturais de seu funcionamento. Os elementos estruturais do funcionamento do sistema nervoso no foram ainda definidos e, quando eles o forem, se tornar claro que eles precisam ser expressos em termos de invariantes de atividades relativas entre neurnios, de alguma maneira incorporados em invariantes de relaes de interconexes e no em termos de unidades anatmicas separadas." Na Imunologia, a despeito de um grande progresso na definio das clulas e molculas envolvidas nos fenmenos imunolgicos, termos mal definidos permanecem sendo usados. Sem mudar de terminologia, freqentemente mudamos de domnios de descrio, ora falamos de fenmenos moleculares, ora da resistncia de organismos inteiros a infeces. Precisamos urgentemente de uma linguagem mais clara, que no confunda domnios de descrio diferentes. Esta uma das razes pelas quais a abordagem de Maturana aos fenmenos biolgicos bem-vinda: suas propostas, embora radicais, so feitas em linguagem muito clara. 12.10 A especificidade das observaes imunolgicas No resta dvida que, quando utilizados como reagentes , os anticorpos podem participar de reaes muito especficas, tal como ocorre em testes diagnsticos e muitas outras aplicaes mdicas e biolgicas. Nestes casos, porm, a especificidade reside na maneira de observar os fenmenos imunolgicos, no nos anticorpos. Quando, por exemplo, um soro anti-A usado para identificar hemcias

11
A+, o teste especfico, mas os anticorpos anti-A no so especficos para as hemcias A+ : eles reagiro com muitas outras estruturas que contenham os mesmos polissacrideos, ou polissacrideos semelhantes, tais como bactrias, ou gros de plen. Na verdade, o soro anti-A colhido de pessoas de grupo sangneo B, que nunca entraram em contacto com hemcias A+. Como observamos as imunoglobulinas atuando como reagentes especficos in vitro admitimos, indevidamente, que elas operam tambm assim in vivo. Mas quando estudamos ,in vitro, as reaes de imunoglobulinas "normais" (produzidas por animais ainda no manipulados experimentalmente), com outras imunoglobulinas produzidas pelo mesmo organismo ou com componentes do organismo, tais como colgeno, tireoglobulina, etc, observamos que h muitas imunoglobulinas reagindo umas com as outras ou com autocomponentes. Estas reaes so, usualmente (mas no sempre), de menor afinidade que as observadas em animais deliberadamente hiperimunizados com antgenos, mas razovel que assim seja, porque os mtodos de hiperimunizao foram condicionados para produzir altos ttulos de anticorpos de afinidade elevada. Em condies menos artificiais, freqente encontrarmos imunoglobulinas "multi-especficas", isto , que reagem, em grau variveis, com muitas outras imunoglobulinas e com vrios autocomponentes. Esta ausncia de uma especificidade estrita pode ser tambm observada com linfcitos T naturalmente ativados. Temos em mos, portanto, um problema de cuja soluo depende toda a viso do que constitui os fenmenos imunolgicos. Como vimos no captulo anterior, podemos optar entre dois caminhos explicativos. Por um lado, podemos dizer que o corpo detecta materiais estranhos, que os fenmenos imunolgicos so especficos e existem, basicamente, para nos proteger da invaso destes materiais estranhos . Por outro lado, temos a constatao de que as imunoglobulinas (os linfcitos T e tambm as clulas apresentadoras), se observadas em condies mais prximas de condies "naturais", no so assim to especficas, revelando um alto grau de entrelaamento interno. Podemos optar em dar importncia a estas reaes menos intensas e mais plurais. Voltemos, porm, a ressaltar o que mais importante: a especificidade no reside nos componentes do sistema imune, mas sim na forma de observar os fenmenos imunolgicos. Se colhermos imunoglobulinas de animais artificialmente imunizados e as dirigirmos para o antgeno imunizante, elas nos parecero muito especficas e de alta afinidade. Se colhermos imunoglobulinas de animais no imunizados e as dirigirmos a outras imunoglobulinas ou a componentes do organismo, elas se mostrarocapazes de reagir com tais molculas, embora mais fracamente e com uma especificidade mais frouxa. As interaes de que o sistema participa no fazem parte de sua estrutura. As interaes de um sistema no podem determinar, especificar o que vai acontecer com o sistema . Isto est determinado pela estrutura do sistema. No existem interaes instrutivas , interaes que causem mudanas na estrutura do sistema, embora as interaes possam desencadear mudanas permitidas pela estrutura do sistema. 12.11 A teleonomia O sistema imune atua, enfim, como se reconhecesse materiais estranhos ao corpo de forma especfica, mas esta maneira de v-lo deriva da maneira como montamos a maioria de nossas observaes. Temos, porm, a opo de deslocar nossa ateno das interaes do sistema imune com materiais externos para as relaes constitutivas entre seus componentes. Neste domnio, a especificidade se dilui. Nesta passagem de um domnio de descrio a outro, nossa confuso mais comum reside em encarar as relaes dos componentes do sistema imune uns com os outros como se elas ocorressem no mesmo domnio em que ocorrem as interaes do organismo. Isto no se passa assim. As reaes do sistema imune com materiais externos, reaes que conotamos como reaes especficas, no so constitutivas , no constituem , no constrem sistema algum. Nesta viso, voltada para as interaes do organismo, "constituir o sistema" no uma preocupao importante porque, nesta viso, o sistema imune j dado, ele existe como algo definido por propriedades, entre as quais est a propriedade de reagir especificamente a materiais estranhos e defender o corpo. Na viso alternativa, o problema central mostrar como o sistema se constitui, porque as interaes do sistema e as conseqncias destas interaes se daro como resultado desta constituio. Na perspectiva "estmulo-resposta", no faz sentido buscar um mecanismo gerador, constitutivo das atividades do sistema imune porque, nesta perspectiva, as atividades imunolgicas so apenas

12
respostas clonais especficas; o sistema opera quando acionado por estmulos (antignicos) externos. No faz sentido perguntar como pode o sistema "se organizar" porque, nesta viso, o sistema no um sistema, uma coleo desarticulada de clones que s funcionam quando estimulados. O "sistema" no tem uma atividade autnoma, no tem organizao, um sistema "aberto", com uma entrada (para estmulos) e uma sada (para respostas especficas). Nesta viso, a estrutura do sistema determinada (especificada, moldada) pelo ambiente e no pelo "fechamento" de sua prpria organizao. Assim sendo, o problema de explicar o sistema, de descrever as relaes que criam, que constituem o sistema, no chega sequer a ser posto. As preocupaes se concentram nas "funes" defensivas do sistema e se desviam de sua organizao. Na perspectiva que propomos, precisamos definir uma organizao para o sistema imune. Esta organizao, se posta a operar, pode ter conseqncias defensivas, mas ela no criada para ter funes defensivas. Em nossa preocupao com as funes do sistema, estamos vendo o problema pelo avesso: a defesa que resulta da organizao, no ao revs. A teleonomia dispensvel.

1 13. A organizao do sistema imune

___________________ 13.1 A falta de uma Teoria imunolgica adequada A Teoria da Seleo Clonal uma Teoria sobre as atividades especficas de linfcitos. Por definio, tais atividades so manifestaes da independncia dos linfcitos, que reagem cada qual com o que lhe diz respeito. A Teoria no tem nada a dizer sobre a interdependncia dos linfcitos. As conexes entre linfcitos se fazem apenas atravs de elementos externos, quando linfcitos T e B pareiam para iniciar ou suprimir respostas imunes especficas. Na Teoria Clonal, os linfcitos esto voltados para fora do corpo, no uns para os outros. Se no h atividades especficas, no h mais nada a que a Teoria possa se referir. Os fenmenos so especficos ou inespecficos e estes ltimos no esto, propriamente, dentro da Imunologia. A Teoria da Rede Idiotpica no chegou a ser aceita pelos imunologistas em seus aspectos mais importantes. A Teoria assinala a importncia de uma organizao inter-linfocitria para que o sistema opere como um sistema, e prope que esta organizao se estabelece atravs de conexes idiotipo-anti-idiotipo , mas no chega a indicar como isto se faria. Ouviu-se de Jerne que, ao propor sua Teoria de Seleo Natural da Formao dos Anticorpos (1955), ele havia "acertado no prego", mas que Burnet com a Teoria Clonal (1957), havia "acertado na cabea do prego". Algo semelhante talvez se passe com a Teoria da Rede (1974); falta-lhe algo. E porque lhe falta algo, ela mantm conceitos da Teoria Clonal que no poderia manter, tais como a discriminao entre "self" e "nonself" e a noo de respostas imunes especficas . irnico que assim seja, pois em sua Teoria de 1955, Jerne j frisava que os fenmenos imunolgicos so muito menos especficos do que usualmente admitido. Existe, portanto, um vcuo terico na Imunologia contempornea. Tem sido impossvel aos imunologistas fazer referncias mais concretas a esta organizao dos elementos do sistema imune, que parece to necessria. As discusses oscilam entre os abundantes progressos na caracterizao de componentes celulares e moleculares e referncias vagas a um sistema imune que no sabemos o que ou como se constitui. Os imunologistas no sabem definir, clinica ou experimentalmente, se o sistema imune de um organismo est ou no normal. Pela anlise do sistema imune, impossvel dizer se existe ou no uma agresso autoimune em curso, sabemos apenas registrar que a agresso autoimune a este ou aquele rgo ou tecido j se iniciou, pela constatao que existem leses histolgicas. Por exemplo, no lupus eritematoso, encontramos anticorpos anti-DNA ligados s clulas e este um recurso diagnstico. Todos os organismos normais formam alguns anticorpos anti-DNA. Mas como se forma um excesso destes anticorpos? Esta impotncia existe porque no sabemos, por um lado, como articular os elementos do sistema uns com os outros e, por outro, no sabemos tambm o que devemos esperar como resultado desta articulao. De acordo com a Biologia do Conhecer , o sistema imune um sistema de organizao fechada , uma rede de processos de produo de componentes que, por suas interaes (de ativao, de inibio, de multiplicao e destruio celular), capaz de regenerar a rede de processos que a produziu. Podemos substituir a pergunta usual "Como pode o sistema imune reconhecer materiais estranhos e permanecer tolerante aos auto-componentes?", pela pergunta "Como pode o sistema imune ter uma estrutura tal que o faz reagir a materiais estranhos e aos auto-componentes de maneiras efetivamente diferentes?" Podemos trocar uma dvida semntica por um problema estrutural. Na nova perspectiva, no precisamos nos confundir com a presena de linfcitos B e T auto-reativos ativados em organismos sadios. A autoreatividade o sistema imune, sua base da operaes. Mas ainda precisamos explicar como e quando esta auto-reatividade perturbada, criando fenmenos de auto-agresso imunolgica e complicaes de doenas infecciosas. Ainda precisamos esclarecer as diferenas entre a fisiologia e a patologia imunolgica em termos estruturais. Caminharemos gradualmente nesta direo.

2
13.2 Elementos para a organizao do sistema imune As principais caractersticas estruturais do sistema imune so: uma imensa diversidade de receptores: Igs em linfcitos B, TCRs em linfcitos T; expresso clonal: cada linfcito expressa um tipo de receptor exclusivo; dois estados linfocitrios: um estado de repouso e um estado ativado; a maioria dos linfcitos em repouso tem vida breve; linfcitos so ativados por citocinas geradas em interaes com clulas acessrias ou outros linfcitos j ativados; - linfcitos emergentes so resgatados de um desaparecimento precoce por interaes ativadoras. As operaes bsicas do sistema imune so: - a gerao da diversidade dos receptores clonais; - o processamento e a apresentao de peptdeos aos linfcitos T; - a ativao recproca de linfcitos T e B e clulas acessrias. A evoluo de nossa compreenso sobre a organizao do sistema imune est ilustrada nas Figuras 13.1 a 13.3 , desde descries puramente clonais, at uma proposta de organizao fechada baseada em ligaes idiotipo-anti-idiotipo.

Figura 13.1: A atividade imunolgica descrita como respostas especficas imunes dirigidas eliminao do antgeno (cerca de 1970). A participao de produtos do MHC ainda no era conhecida. Um antgeno captado simultaneamente por linfcitos e T reconhecendo determinantes diferentes na mesma molcula. O B linfcito d origem a plasmcitos que forma anticorpos que facilitam a captao B do antgeno por macrfagos, que o digerem. As reaes idiotipo-anti-idiotipo foram incorporadas ao ponto de vista dominante, mas somente como recursos acessrios de controle da magnitude e qualidade de respostas imunes especficas, que permanecem sendo as atividades fundamentais do sistema imune. De uma imunologia preocupada com antgenos e anticorpos, passou-se a outra, preocupada com antgenos, anticorpos e anti-anticorpos, mais complexa em detalhes, mas essencialmente idntica antecessora. Em um sistema de organizao fechada, a idia de discriminao self-nonself perde completamente o sentido e as reaes idiotipo-anti-idiotipo so demonstraes de que a reatividade imunolgica no constituda de respostas a estmulos antignicos. As conexes idiotpicas so prvias entrada de qualquer antgeno, o referencial de funcionamento do sistema o prprio sistema (os idiotipos de todos os receptores linfocitrios e anticorpos). A ligao do material antignico aos elementos do sistema (anticorpos, TCRs) ocorre, ento, porque o sistema trata materiais externos, ou peptdeos deles derivados, da mesma forma que trata os elementos com os quais ele j interagia, os idiotipos, o "self".

Figura 13.2: Um esquema igualmente simplificado produzido 20 anos depois, onde os produtos do MHC (processamento e a apresentao) participam do processo de ativao dos linfcitos T. O esquema permanece, porm, centrado no antgeno e aberto como se a ativao linfocitria ocorresse em funo do reconhecimento de materiais estranhos.

IL-1

IL-2

T IFN IL-4,IL-5 B

auto-componentes antgeno B

P antgeno

Figura 13.3: O sistema imune com uma organizao fechada. Os materiais processados e apresentados incluem tanto complexos Ag-Ac formados com materiais externos, quanto formados com auto-componentes complexos e ainda idiotipo-anti-idiotipo.organizao dita A fechada porque ela pode operar na ausncia de contatos com materiais externos. Note que a circularidade do circuito se manteria na ausncia de antgenos pois, alm de antgenos, os auto-componentes e as prprias imunoglobulinas so tambm processadas/apresentadas. Quando ativados, os linfcitos passam a expressar um nmero aumentado de receptores para citocinas e passam tambm a secretar citocinas. A secreo de citocinas e outras modificaes celulares importantes na ativao dos linfcitos, por sua vez, requerem a ocorrncia de interaes ativadoras com outras clulas e, para que estas interaes ocorram, deve haver um processamento de materiais prvio apresentados aos linfcitos. Neste processo nouma discriminao entre existe "self" e "nonself".

4
13.3 O processamento como gerador de conectividade O processamento e a apresentao acrescentam um novo argumento esta discusso. Assim como os anticorpos so incapazes de distingir entre epitopos e idiotopos, tambm os receptores clonais dos linfcitos T (TCRs) so incapazes de distinguir um peptdeo derivado da digesto intracelular de um antgeno, da digesto de uma imunoglobulina ou outra molcula vinda da membrana celular. Para o linfcito T, este peptdeo no tem remetente nem destinatrio. Nem todos os fragmentos de molculas produzidos na digesto intracelular se ligam aos produtos do MHC. Alguns se combinam com uma afinidade muito baixa e no chegam a ser apresentados na membrana celular. Os produtos do MHC determinam, ento, que tipo de fragmentos sero levados superfcie celular e a apresentados aos linfcitos T auxiliares. Dessa maneira, no processamento/ apresentao o material antignico desmontado, destitudo de sua estranheza por um processo de digesto intracelular e apresentado aos linfcitos T dentro de molculas do self: os produtos do MHC. O "self" o referencial para o funcionamento imunolgico e, ao nvel das interaes celulares, no h possibilidade de distingui-lo do estranho (nonself). No sistema imune normal, a maioria dos linfcitos (80-85%) est em repouso. A maioria destas clulas em repouso so clulas de vida fugaz, que no sobrevivem mais que algumas horas ou dias. A minoria restante de linfcitos ativada em conseqncia de interaes com outros linfcitos e clulas acessrias. De acordo com a histria vivida pelo sistema, tanto em funo de sua dinmica interna, quanto em funo do encontro com elementos do ambiente, o sistema muda continuamente de estrutura, desenvolve sua individualidade atravs das interaes celulares que vo surgindo. O que o sistema imune ,a cada instante, definido por estados relativos de ativao, pela coleo de linfcitos que esto ativados. Para que tal identidade seja definida, necessrio conhecer os processos que geram conexes entre linfcitos at ento no relacionados e possibilitam, ento, sua ativao. Trs processos de produo esto acoplados para gerar estas regras de mudana. O primeiro a contnua gerao de clones linfocitrios pelos processos especiais de rearranjo gnico que s so encontrados em linfcitos (Igs e TCRs). Milhes de clones linfocitrios diferentes so gerados a partir de algumas centenas de genes herdados por esquemas mendelianos simples. O segundo processo, a sobrevivncia associativa , desempenha um papel semelhante regra de Hebb para o sistema nervoso, uma regra de reforo pelo uso (ou perda pelo desuso) que diz: "neurnios que disparam juntos, reforam suas conexes". Da grande quantidade de linfcitos que emerge continuamente do tecido linfide, apenas uma pequena porcentagem sobrevive mais que algumas horas ou dias. A pequena parcela de linfcitos sobreviventes constituda por aqueles que estabelecem conexes com clulas previamente incorporadas ao sistema, pois, nestas interaes, so geradas citocinas e outras condies essenciais de crescimento celular. A sobrevivncia associativa faz com que a histria vivida pelo sistema, a seqncia particular de transformaes estruturais, de reforo de algumas conexes e desaparecimento de outras, seja indissocivel da prpria estrutura do sistema. Desta seqncia depende a forma particular de desempenho do sistema. Materiais "self" e "nonself" so processados/apresentados rotineiramente, de maneira no episdica, como parte de processos gerais de reciclagem de componentes celulares. O processamento/ apresentao de auto-componentes em conjugao com produtos de classe I do MHC parte da atividade metablica de todas as clulas e no apenas das clulas apresentadoras que auxiliam a atividade dos linfcitos CD4+. Nestas ltimas, no entanto, a apresentao se faz tambm em conjugao com produtos de classe II do MHC. Neste processo, peptdeos do "self" competem com peptdeos de origem externa para a conjugao. Os produtos do MHC esto entre as protenas mais rapidamente recicladas na membrana celular, mesmo em clulas em repouso. Esta reciclagem se acelera intensamente em linfcitos ativados, que passam tambm a expressar uma quantidade muito mais elevada de produtos do MHC. Nos linfcitos B, a captao de um material pelas Igs de membrana, fazendo um entrecruzamento (cross-linking) das mesmas, resulta na despolarizao da membrana celular e na hiper-expresso de produtos do MHC. Desde os anos 60 e 70, quando foi comprovada a estrutura clonal do sistema imune, como sugerido por Burnet na Teoria de Seleo Clonal, todas as propostas sobre a natureza das interaes entre linfcitos, como seria de se prever, se basearam na especificidade clonal. Se o que distingue os linfcitos uns dos outros a especificidade de seus receptores clonais (Igs e TCRs), as conexes entre eles devem

5
depender, primariamente, de ligaes especficas entre Igs e/ou TCRs (Figura 13.1 ). Mesmo a Teoria da Rede Idiotpica se apoia exclusivamente nas interaes linfocitrias entre Igs e TCRs. No entanto, quando linfcitos B processam/apresentam materiais externos e/ou endgenos eles abdicam, temporariamente, de sua especificidade clonal, pois passam a apresentar na membrana um conjunto heterogneo de molculas: uma coleo de peptdeos pareados a produtos do MHC. A continuidade do processo de ativao do linfcito B depende, neste momento, de interaes mediadas por alguns destes elementos heterogneos apresentados na membrana, no mais da homogeneidade das imunoglobulinas antes utilizadas como receptores. Por um lado, isto pluraliza as interaes. Cada linfcito B apresenta mltiplos peptdeos conjugados a produtos do MHC que podem ser conectados por mltiplas clulas ou molculas do sistema imune (por exemplo, por muitos linfcitos T , ou imunoglobulinas diferentes). Talvez as interaes linfocitrias envolvam sempre muitas clulas simultaneamente e no duas ou trs como costumamos imaginar. Por outro lado, surge a um terceiro processo que participa da organizao do sistema imune: o processamento/apresentao pode gerar novos padres de conexo entre linfcitos. Quando linfcitos B totalmente no relacionados captam o mesmo tipo de molcula antignica (atravs de epitopos diferentes), eles a processam usando as mesmas enzimas e apresentam seus peptdeos conjugados s mesmas molculas do MHC. Assim, eles passam a expor na membrana conjuntos similares de molculas e, portanto, tornam-se alvos da mesma populao de linfcitos T (Figura 13.4 ). Uma relao entre os linfcitos B foi estabelecida pela simples razo de que eles operam da nica maneira que poderiam operar.

Ig-1

epitopo 1 Ag B1

Ig-1

especificidade clonal

Ig-2 B2

processa & apresenta peptdeos-MHC similares

Ig-2 epitopo 2 T mesma populao de linfcitos T

Figura 13.4: A apresentao de peptdeos pelos linfcitos B pluraliza as conexes entre linfcitos e tambm gera conexes entre linfcitos B antes no relacionados. Quando linfcitos B diferentes, que captam uma molcula atravs de epitopos diferentes, processam este material, eles podem peptdeos apresentar similares conjugados aos mesmos produtos do assim, e, MHC tornar-se alvos da mesma populao de linfcitos T-CD4+. Neste ponto, h todo um conjunto de fatores, ainda obscuros, que podem contribuir para o que acontece. No se sabe ao certo se as pores (os epitopos) das molculas que se ligam s imunoglobulinas ficam protegidas do processamento e, ento, no geram peptdeos. Alguns resultados atuais sugerem isto, outros sugerem o contrrio. Materiais captados pelas clulas apresentadoras podem j chegar a elas na forma de complexos com imunoglobulinas. Enfim, muitas conjecturas e sugestes de experimentos interessantes poderiam ser feitas a partir da. possvel que o processamento/apresentao das Igs de membrana gere tambm conexes entre linfcitos antes no relacionados, por mecanismos diferentes dos condicionados pela especificidade das Igs e TCRs. No camundongo, por exemplo, os genes-VH esto agrupados em famlias gnicas e h uma grande homologia estrutural entre genes da mesma famlia. Genes da mesma famlia podem ser usados para construir imunoglobulinas totalmente diferentes, com especificidades no relacionadas tanto em seus paratopos quanto idiotopos. Quando estas imunoglobulinas diferentes so processadas/apresentadas surgiro peptdeos similares, correspondendo aos peptdeos codificados pelos genes-V da mesma famlia.

6
O processamento/apresentao, portanto, "ancora" o sistema imune no organismo. A atividade imunolgica uma parte especial da contnua montagem/ desmontagem dos materiais que compem o organismo. Assim como o sistema imune, o organismo do qual ele participa como componente pode ser visto como uma rede de processos de produo de componentes celulares e moleculares. 13.4 O fechamento do sistema imune Ao aplicarmos as noes da Biologia do Conhecer ao sistema imune, surge uma nova viso da Imunologia. O sistema pode ser definido em seus prprios termos e no em funo de suas interaes com elementos externos ao sistema, como habitualmente fazemos. Neste ponto, pode renascer um equvoco freqente sobre as idias de Maturana. O sistema imune fechado em sua organizao, mas no fechado para interaes. As interaes, porm, nunca so interaes instrutivas . Elas no determinam, no especificam o que ocorre no sistema, isto determinado pela estrutura do sistema. Se confundirmos a organizao do sistema com as interaes do sistema, estaremos incorrendo em uma confuso de domnios de descrio . Quando descrevemos o sistema imune em termos das relaes entre seus componentes, estamos falando de um sistema que existe em um espao definido por estes componentes, e prprio e adequado falarmos de sua estrutura e da organizao. Mas, quando optamos por um delineamento diferente e falamos das interaes do sistema em seu meio (um sistema que percebemos como existente no espao fsico, em interao com outras entidades) falamos do sistema como um todo, no de sua estrutura e organizao. As interaes do sistema (como um todo) no devem ser confundidas com as relaes entre os componentes do sistema. As interaes do sistema em seu meio se fazem atravs de seus componentes mas tudo o que pode acontecer com o sistema (como um todo) determinado pela estrutura do sistema e no por elementos externos que o invadam ou afetem seus componentes. difcil fazer esta distino entre domnios de descrio porque estamos habituados a ignor-la e costumamos identificar a fenomenologia em que um sistema est envolvido como existente no sistema ou de responsabilidade de seus componentes. Maturana nos diz que esta crena est equivocada. A organizao do sistema imune em termos de seu fechamento no diz nada a respeito da participao do sistema imune nas interaes do organismo em seu meio (por exemplo, com micrbios, ou alimentos, ou drogas e medicamentos); no diz nada a respeito da imunidade ou de uma alergia que possamos descrever no organismo. Para descrever um dado organismo como imune a uma dada doena infecciosa ou afetado por um dado tipo de alergia, precisamos mudar de domnio de descrio e falar do organismo como um todo, em interaes com o seu meio. No h equvoco nenhum nesta mudana de descries. O equvoco aparece quando imaginamos os componentes que o organismo utiliza para interagir com componentes do meio. Com este raciocnio, tentamos explicar (reduzir) o que ocorre em um domnio de descries atravs do que ocorre em outro domnio de descries. Por exemplo, a imunidade a uma dada doena infecciosa, uma alergia poeira domiciliar ou penicilina ocorrem no domnio de interaes do organismo. Por outro lado, o aumento ou diminuio de um dado tipo de componente do sistema imune (um dado tipo de linfcito ou de anticorpo) ocorre no mbito da organizao do sistema imune, que fechada, subserviente autopoiese do organismo. Os componentes do ambiente em que o organismo existe no podem participar de sua autopoiese.

13.5 Um equvoco imunolgico comum Todo o pensamento tradicional em Imunologia est envolvido nesta confuso de domnios de descrio. Por exemplo, a imunidade ao ttano, determinada pela vacinao com o toxide tetnico, est correlacionada com um aumento na concentrao de anticorpos antitxicos (antitoxinas tetnicas) no soro. Usualmente, imaginamos que o toxide (antgeno) induz a formao das antitoxinas (anticorpos) protetoras. Quando imaginamos isto, confundimos o domnio de interaes do organismo, no qual o sistema imune interage com o toxide tetnico, com o domnio da estrutura (e da organizao) do sistema imune, no qual encontramos os linfcitos que sintetizam os anticorpos que esto servindo como antitoxinas. Quais so os inconvenientes desta confuso de domnios? O primeiro inconveniente que, nesta descrio, no existe uma preocupao em relacionar os linfcitos produtores das antitoxinas com os demais linfcitos do sistema imune. Qual seria a origem destes linfcitos? Eles l estariam, espera do toxide tetnico? Como o sistema imune os gerou e porque os mantm? Se estes linfcitos interagem com outros linfcitos do corpo, estes outros linfcitos afetam a produo de antitoxinas?

7
Uma descrio que respeitasse a organizao fechada do sistema imune, diria que o contato com o toxide desencadeou mudanas estruturais constitudas de trocas dos tipos de linfcitos e de anticorpos sendo produzidos, mudanas que resultaram em uma seqncia de estados compatveis com a acumulao de imunoglobulinas com propriedades de antitoxina tetnica no soro, isto , imunoglobulinas que servem como antitoxinas. Nesta viso, as antitoxinas apareceram em conseqncia de mudanas nas relaes entre linfcitos e o sistema imune adquiriu novas conformaes compatveis com a manuteno do fechamento de sua organizao. Seria perfeitamente possvel desencadear mudanas equivalentes no sistema imune que conduzissem produo de antitoxina tetnica, sem nunca chegar a expor o organismo ao toxide tetnico. Reciprocamente, podem ser criadas situaes nas quais o sistema imune, embora exposto ao toxide tetnico, no produz antitoxinas (estados de tolerncia imunolgica). Em suma, o que ocorre no sistema imune depende de sua prpria estrutura e nunca determinado diretamente por suas interaes. Em um nvel superficial, nenhum imunologista pensa que o sistema imune opera de acordo com instrues recebidas do ambiente. Mas em um sentido mais amplo, o "ambiente" habitado pelo sistema imune, o organismo. Na viso tradicional, de fato, este ambiente amplo, o organismo, com seus componentes e seus invasores, quem "molda" e "instrui" o sistema imune. O sistema, nesta viso, tem uma organizao moldvel exclusivamente por suas interaes (e, portanto, aberta). Assim, embora na Imunologia tradicional se defenda a idia de que o antgeno seleciona os componentes do sistema aptos a responder, ainda se defende, de forma velada, idias "instrutivas". Para Maturana, os sistemas vivos tm uma organizao fechada sobre si mesma , embora aberta para interaes. O sistema imune no s est em contacto com elementos encontrados em seu ambiente (o corpo, seus componentes e seus invasores), como tambm, por sua prpria atividade, introduz continuamente na circulao uma grande variedade de novos elementos (linfcitos, anticorpos) que podem, ou no, ser incorporados s suas operaes. Esta contnua substituio de componentes, porm, no altera a organizao do sistema, que se mantm capaz de regenerar, a cada instante, as operaes que definem sua existncia. Nesta perspectiva, a atividade imunolgica deixa de ser "instruda" pelas interaes do sistema imune. Ela depende de si mesma.

13.6 Nem instruo, nem seleo Nesta viso, na qual no existe instruo , tambm no existe seleo . A "seleo" existe apenas na perspectiva de um observador do sistema imune, por exemplo, a de um imunologista que o "estimule" com um "antgeno" para obter uma "resposta especfica". Na perspectiva que preferimos, em sua existncia fechada sobre si mesma, o sistema imune no pode identificar o "antgeno" usado pelo imunologista como um material especial, que requeira uma "resposta especfica". Se o novo material no tem capacidade de interagir com nenhum dos elementos j em operao, nada acontece (pois no existem interaes instrutivas). Se o material se combina a componentes do sistema imune, a estrutura do sistema modificada e novos trajetos de modificao so adotados para a manuteno de sua organizao fechada. No apropriado dizer que o material introduzido "seleciona" os componentes com os quais interage, pois os trajetos de modificao estrutural que iro surgir no sistema como conseqncia deste encontro so determinados pela estrutura do sistema, e no pela intromisso deste ou daquele antgeno. Assim sendo, no existem interaes seletivas . Seleo pressupe a ao de um elemento distinto ( o antgeno) sobre os elementos do sistema. Se no h uma maneira especial de tratar o antgeno, se no h distino entre o antgeno (que "estranho") e os componentes que j esto operando no sistema (que no o so), o que ocorre incorporao ou assimilao (ou no) do novo elemento s operaes do sistema. A idia de assimilao pensa o comportamento imunolgico a partir das operaes prvias do sistema. Elementos presentes no ambiente do sistema imune (o corpo) podem "selecionar" componentes do sistema para ativao (ou inibio), mas no so estes elementos que geram a coleo de componentes disponveis. Esta coleo gerada pela prpria atividade do sistema. Em outras palavras, na proteo contra o ttano, no posto em operao nenhum plano, propsito ou inteno que inclua a produo de antitoxinas. Podemos descrever este plano por motivos didticos, mas ele no participa das aes desencadeadas pela toxina tetnica. Na verdade, tais aes no dependem das propriedades txicas, fato que nos permite utilizar seu derivado no txico (o toxide

8
tetnico) na vacinao. As aes desencadeadas dependem de interaes com linfcitos e anticorpos j presentes no sistema imune. Se estas aes falharem em eliminar a toxina, no existem aes alternativas a serem tomadas com base em um "plano" original. O sistema imune prosseguiria desencadeando suas aes de acordo com sua organizao. A idia de "proteo", ou "plano protetor", pertence ao domnio cognitivo, ao domnio daquele que observa e faz comentrios sobre as interaes do organismo. As aes que lidam com a toxina e promovem, ou no, sua eliminao pertencem ao domnio estrutural, onde a chave para entendermos o que se passa o fechamento da organizao do sistema.

13.7 A tentao da especificidade A Teoria de Seleo Clonal nos conduz a admitir que a qualidade fundamental do sistema imune a produo de uma vasta coleo de linfcitos especficos , cada qual capaz de reagir com um ou alguns poucos materiais estranhos. Esta pluralidade seria necessria para atender a uma gama igualmente vasta de materiais estranhos (antgenos) que o corpo contacta. Estamos imersos nesta maneira de falar e pensar. Trs lembretes podem nos ajudar a afastar esta tentao e ter uma outra viso das aes dos linfcitos: 1. A atividade imunolgica muito heterognea . A especificidade dos fenmenos imunolgicos deriva de uma opo que fazemos ao descrever estes fenmenos da maneira que o fazemos. Esta opo tem razes histricas bem ntidas, ligadas noo de causa especfica de doenas e cristalizada no trabalho de Pasteur e seus colaboradores. Mas h sempre centenas, milhares de molculas anlogas envolvidas em todas as atividades imunolgicas. Uma das regras ocultas da imunologia que, quase sempre, qualquer componente celular ou molecular utilizado pelo sistema imune pode ser substitudo por mltiplos outros e, na realidade, isto que ocorre durante a dinmica de operao do sistema. A redundncia e a troca constante de componentes so qualidades tpicas dos fenmenos imunolgicos. 2. A atividade de qualquer elemento do sistema imune altamente interconectada a muitos outros; a ativao de cada elemento aciona indiretamente muitos outros. A multi-conectividade entre componentes outra propriedade tpica do sistema imune. 3. Finalmente, a auto-reatividade . Os elementos do sistema imune, os linfcitos e seus produtos clonais, no apenas esto conectados entre si (por reaes idiotipo-anti-idiotipo), como tambm reagem com uma multiplicidade de componentes do prprio organismo. Os 3 lembretes, portanto, so: heterogeneidade, interconectividade e auto-reatividade.

1
14. Informao versus organizao fechada __________________________________________ 14.1 A terminologia da biologia do conhecer Termos como distino, estrutura, organizao, espao, tm significados tcnicos precisos no trabalho de Maturana. Em geral, este significado no se afasta muito do sentido coloquial do termo. Mas os termos so usados de forma rigorosa. Estrutura e organizao so dois termos convenientes para falarmos, respectivamente, da variao e da constncia que coexistem nos sistemas biolgicos. Maturana reserva o termo estrutura para a composio atual (atuante) do ser vivo, entendida no s como seus componentes, mas tambm como as relaes entre estes componentes . (Por esta perspectiva, quando movemos um brao, mudamos de estrutura e o que est ocorrendo no organismo, continuamente, um imenso turbilho de mudanas estruturais). O termo organizao reservado para os aspectos da estrutura que no podem variar sem que a unidade, a entidade sendo considerada, mude de classe. Uma mesa que arranhada, pintada de outra cor ou que fica com um dos ps mais curto muda de estrutura, mas continua a ser "uma mesa". Se a serrarmos em muitos pedaos, porm, destrumos sua organizao de "mesa". Os seres vivos so sistemas dinmicos que variam continuamente de estrutura, mas devem manter invariante um tipo especial de organizao, que Maturana denomina autopoitica, para continuarem sendo seres vivos. Para entendermos um sistema qualquer, seja ele uma mesa ou um ser vivo, necessrio conhecer sua organizao, isto , determinar quais so as relaes entre seus componentes que precisam ser mantidas invariantes para que o sistema no se desintegre como um sistema daquela classe. S podemos falar de organizao e estrutura, portanto, em sistemas que sejam unidades compostas , que tenham componentes que interagem segundo certas relaes que especificam o sistema como um sistema daquela classe. Unidades simples , que no tm componentes, no tm organizao nem estrutura: tm apenas as propriedades que as definem em seu ambiente, em interao com outras unidades. Como observadores, estamos sempre distinguindo unidades simples, e unidades compostas. Podemos sempre distinguir uma unidade composta como se ela fosse uma unidade simples. E, reciprocamente, podemos distinguir componentes em uma unidade simples, transformando-a em uma unidade composta. Existe um domnio de descries em que distinguimos um ser vivo como uma unidade simples, uma unidade dotada de uma srie de propriedades (de forma, movimento, etc). Podemos observar esta unidade em interao com outras unidades de seu ambiente. Existe um outro domnio de descries em que distinguimos componentes na estrutura do ser vivo e compreendemos como as interaes entre estes componentes constituem,

2
geram, mantm o ser vivo. Neste segundo domnio, podemos descrever sua estrutura e sua organizao. Estes dois domnios de descries so domnios diferentes, domnios que no se superpem. E muito comum passarmos desapercebidamente de um domnio ao outro, como se as propriedades do ser vivo (definido como uma unidade simples) pudessem derivar diretamente de interaes de componentes do ser vivo (definido como uma unidade composta) com componentes do ambiente. Mas o que acontece a um ser vivo determinado por sua estrutura como um sistema inteiro. As mudanas que ele atravessa, so subservientes manuteno de sua organizao como ser vivo. De outra maneira, o ser vivo se desintegra, morre. Assim sendo, componentes do ambiente no podem especificar o que vai se passar com o ser vivo. No existem interaes instrutivas. Para compreender um ser vivo como um sistema dinmico, preciso trat-lo como uma unidade composta : definir seus componentes e as relaes essenciais entre eles, as relaes que constituem, especificam o sistema como uma unidade da classe dos seres vivos. Os componentes do ser vivo, neste domnio de descrio, so determinados pelas relaes que estabelecem com outros componentes do prprio ser vivo. Componentes do ambiente podem alterar a seqncia de interaes entre os componentes do ser vivo, interaes que mantm em curso sua dinmica estrutural. Desde que sejam mantidas a organizao (autopoitica) do ser vivo e seu acoplamento estrutural com seu ambiente (sua adaptao), todas as mudanas resultantes da interao com o ambiente so permitidas, e no so diferentes das interaes geradas pela prpria dinmica interna do ser vivo. Para esta dinmica, no h "fora" , nem "dentro". A situao como nos versos do poeta maranhense Ferreira Gullar:

Dentro sem fora A vida est dentro da vida em si mesmo circunscrita sem sada Nenhum riso nenhum soluo rompe a barreira de barulhos. A vaso para o nada. Por conseguinte

3
no vasa. In Barulhos , Jos Olympio, Ed., Rio, 1988. 14.2 O fechamento do sistema nervoso Nosso obstculo inicial e mais formidvel para adotar o que prope a Biologia do Conhecer a certeza que temos de habitar um mundo objetivo, um mundo de objetos que existem independentemente de nossas observaes. Tambm para Maturana, esta "tentao da certeza" j constituiu um obstculo formidvel. Vivemos imersos em uma tradio na qual a existncia de um mundo material e objetivo indiscutvel. Eis aqui suas palavras sobre pesquisas na neurobiologia da viso da r realizadas nos anos 50: " Quando Jerry Letvin e eu escrevemos vrios artigos sobre a viso da r... ns o fizemos sob a admisso implcita de que estvamos manipulando uma situao cognitiva claramente definida: havia uma realidade objetiva (absoluta), externa ao animal e independente dele (no determinada por ele), que ele podia perceber (cognize). O animal poderia usar a informao obtida em sua percepo para computar um comportamento adequado situao percebida." Maturana se refere a um famoso trabalho seu, publicado em 1959, denominado "O que o olho da r diz ao crebro da r' (What the frog's eye tells the frog's brain?)

tela: vermelho claro

sombra verde

sombra vermelho denso

luz branca basto

luz vermelha

Figura 14.1 : Uma iluso de cores que pode ser montada com dois projetores de diapositivos. Iluses de cores podem ser facilmente montadas com dois projetores de diapositivos (Figura 14.1 ) Cada projetor recebe uma moldura vazia. Em

4
um deles se coloca um filtro vermelho de fotografia (ou celofane dobrado). A luz dos dois projetores perfeitamente superposta em uma tela. A tela aparecer vermelho claro (rosa). Quando se coloca um objeto (basto) frente dos dois projetores, de maneira que surjam duas sombras, uma delas aparecer vermelho escuro, a outra aparecer verde (turquesa). uma "iluso coletiva". Mas o que uma "iluso" sobre a qual existe um consenso? Porque teramos todos as mesmas iluses? neste mesmo sentido que os imunologistas manipulam seus animais experimentais: admitem que o animal habita uma realidade (molecular, antignica) objetiva, externa e independente dele e que o sistema imune computa, com seus linfcitos, um comportamento imunolgico adequado quela situao. Famoso entre os neurobilogos por seus estudos sobre a neurobiologia da viso, Maturana mudou drasticamente de orientao quando estendeu seus estudos sobre a percepo de cores. Hoje em dia, ele utiliza "iluses de cores", como a ilustrada na Figura 14.1 , para demonstrar que somos incapazes de distingir iluses de percepes. (Como vimos no Captulo 12 , Maturana no utiliza o conceito de percepo pois ele implica na existncia de um mundo objetivo independente). Maturana explica fenmenos assim de uma forma muito radical. Para ele, os padres de atividade neuronal desencadeados nesta "iluso" so os mesmos padres desencadeados por comprimentos de onda aos quais chamamos verde. "Verde" seria uma palavra que as pessoas atribuem a um estado do seu sistema nervoso, um estado que pode envolver muito mais neurnios que simplesmente aqueles envolvidos na percepo de um dado comprimento de onda. Em funo de experincias como esta, Maturana acabou concluindo que: " ... em minha pesquisa, conclu que o propsito central no estudo da viso de cores no poderia ser o mapeamento de um mundo colorido no sistema nervoso, mas sim que ele tinha que envolver a compreenso da participao da retina (do sistema nervoso) na gerao do espao cromtico do observador." Ele mudou radicalmente sua definio do sistema nervoso. O sistema nervoso passou a ser uma rede fechada de neurnios em interao, tal que, qualquer mudana no estado relativo de ativao de certos neurnios, apenas conduz a outros estados relativos de ativao da mesma coleo de neurnios. Nesta perspectiva, o sistema nervoso no tem entradas (no recebe estmulos ), nem sadas (no responde a nada). Ele existe continuamente movido por suas prprias atividades, voltado sobre si prprio. Certas configuraes de atividade neuronal conduzem a outras configuraes. Interaes no ambiente do organismo podem mudar a seqncia de mudanas adotadas pelo sistema, mas as novas seqncias so qualitativamente similares s seqncias geradas pela prpria atividade do

5
sistema. Quais caractersticas do ambiente do organismo conseguiro desencadear mudanas de estado (perturbaes) no sistema nervoso, est na dependncia da estrutura do sistema nervoso naquele instante e no apenas da natureza do agente perturbador. Quando um nervo tocado por uma pina ou quando levamos uma pancada no olho (e "vemos estrelas"), ocorrem mudanas de estado no sistema nervoso. No chamaramos, usualmente, estas mudanas de percepes da pina ou da pancada. Mas, para Maturana, todas as atividades do sistema nervoso so deste tipo e devemos encarar o sistema nervoso inteiro, sua histria de modificaes estruturais. No simplesmente os detalhes envolvidos nas perturbaes. As variaes do ambiente no causam o que acontece no sistema nervoso. Elas apenas desencadeiam mudanas de estados relativos de ativao neuronal em uma rede fechada que, de qualquer forma, estaria passando de um estado a outro por sua prpria dinmica. Nesta perspectiva, no h diferenas entre percepes e alucinaes, no h como distinguir o verde criado com os dois projetores, do verde de uma folha. Temos tendncia a perguntar se o verde criado com os dois projetores "real". Mas esta pergunta s faz sentido quando estamos escudados em nossa convico de que existe um mundo objetivo, independente de ns (o mundo "real"). Ela deixa de fazer sentido quando definimos o verde como um padro de atividade neuronal. Isto no significa que abdiquemos de estudar cientificamente o sistema nervoso, ou admitamos que o mundo se resume ao que imaginamos dele (o solipsismo). Continua sendo importante explicar como a estrutura do sistema nervoso gera os padres de atividade que as pessoas identificam como "verde". O fato de que a luz com certos comprimentos de onda capaz de gerar estes padres um dado importante neste estudo, mas este domnio de interaes um domnio diferente do domnio da estrutura do sistema nervoso. Os padres percebidos como verde podem surgir independentemente de certos comprimentos de onda. Este um ponto difcil, mas crucial na abordagem de Maturana. Como observadores de um sistema nervoso (ou de um sistema imune), s podemos estar fora do sistema. Desta posio externa, nos autorizamos a dizer o que est dentro e o que est fora do sistema; a estudar agentes perturbadores do sistema e modificaes que eles causam nos padres de atividades do sistema. Mas esta distino impossvel para o prprio sistema que observamos. O sistema nervoso no pode distingir alucinaes de percepes. O pinamento de um nervo no antebrao pode ser percebido, por exemplo, como uma queimadura na mo. O domnio de interaes do sistema nervoso (onde ocorre o pinamento) distinto do domnio da estrutura do sistema nervoso (onde so gerados os padres de atividade percebidos como "uma queimadura na mo").

6
14.3 Dispensando o conceito de informao Distingir entre domnios de descrio diferentes fundamental porque muito comum passarmos inadvertidamente de um domnio a outro. Maturana insiste que nunca somos instrudos pelo meio, nunca recebemos informaes do ambiente. Usualmente, pensamos que o que vai ocorrendo conosco vai modificando diretamente nossa estrutura, que vamos construindo, continuamente, um "mapa", uma representao do mundo exterior em nosso mundo interior. Como se o mundo exterior deixasse rastros, ficasse representado em nossa estrutura. Isto o que ele chama a falcia das interaes instrutivas . Nossas interaes envolvem sempre o sistema nervoso inteiro, sua contnua passagem de um padro a outro de atividade neuronal relativa e o prprio sistema nervoso que vai abrindo trajetos de modificao estrutural, por sua prpria atividade (uma atividade que depende tanto dos encontros do organismo em seu ambiente, quanto da dinmica interna do sistema). As correspondncias que um observador pode perceber entre as seqncias de modificaes estruturais ocorridas no sistema nervoso e as modificaes do ambiente so correspondncias histricas . Afora isto, no existem correspondncias diretas entre modificaes da estrutura do ambiente e modificaes da estrutura do sistema nervoso. Quando optamos por examinar o sistema nervoso como um sistema determinado por sua estrutura, devemos descrev-lo em termos de seus componentes neuronais e das interaes entre eles. Nesta perspectiva, porm, no esto includas as interaes do sistema nervoso, como um todo, com o ambiente. O domnio das interaes do sistema diferente do domnio da estrutura do sistema. Para Maturana, a cognio, o ato de conhecer indissocivel dos atos associados ao viver e todas as aes dos seres vivos compatveis com a continuao de suas vidas colaboram no seu "conhecer". Do ponto de vista biolgico, agir e conhecer so indissociveis. O conhecimento mais adequadamente descrito em termos de aes que em termos de informaes. importante perceber como a noo de informao permeia toda a cultura contempornea, quer em seu sentido matemtico, como na Teoria da Informao, quer no seu sentido metafrico de informao como significado. Para Maturana, a noo de informao deveria ser totalmente evitada no domnio das explicaes biolgicas porque, neste domnio, a noo de informao tanto desnecessria como geradora de equvocos. Ele substitui a pergunta " Como pode o organismo obter informao sobre seu ambiente?" pela pergunta "Como pode o organismo ter uma estrutura tal que permite que ele opere da maneira que opera?" . Transformando uma pergunta semntica em um problema estrutural, quando diz que conhecer e viver so a mesma coisa, ele faz uma proposta muito mais ampla sobre a natureza dos seres vivos. No se trata mais de entender como o crebro nos informa sobre o mundo, e como essa

7
informao "armazenada" em uma "memria" que nos permite agir, conhecer o mundo. Todas as atividades dos seres vivos podem ser descritas como um conhecer, um padro de aes. Seria o nado de um protozorio, um conhecer? E o direcionamento dos ramos de uma trepadeira? Temos a tendncia de tratar estes problemas em termos da informao que o protozorio ou a planta obtm de seu meio e de como eles "sabem"(isto , processam essa informao para) computar sua conduta. Para Maturana, perguntas como estas so geradoras de equvocos, porque elas se apoiam na falcia das interaes instrutivas. Ele pergunta: como podem o protozorio e a planta possuir estruturas que permitem, ao primeiro, nadar e, segunda, crescer enrolando seus ramos em um suporte. Como observadores, podemos gerar descries da atividade dos sistemas vivos em um de dois domnios que no se entrecruzam. Um domnio lida com a estrutura do ser vivo e com a relao entre esta estrutura e sua fisiologia, um domnio onde nos interessa o ser vivo como um mecanismo, um mecanismo que cria a si prprio. Neste domnio estrutural, a histria do ser vivo no importa, no importa saber como ele veio a ser o que , importa apenas saber como a estrutura atual colabora para a manuteno de sua autopoiese. Um outro domnio lida com a histria das interaes do sistema, entendida como a seqncia particular de modificaes estruturais que o sistema (e seu ambiente) sofreu (sofreram) no tempo. Neste segundo domnio, a histria do sistema, tanto do ponto de vista ontogentico, quanto do ponto de vista da filognese, muito importante. neste segundo domnio, de interaes, que Maturana situa, por exemplo, os fenmenos da evoluo ou da aprendizagem. Os seres vivos so sistemas determinados estruturalmente, isto , tudo o que eles fazem determinado pela sua estrutura, e no diretamente pelas interaes do sistema ou por qualquer outro contexto percebido como um evento informador . A organizao de um sistema definida como o conjunto de caractersticas (a parcela da estrutura) de um sistema que precisa permanecer invariante para que o sistema continue a pertencer a uma determinada classe de sistemas. A organizao de uma cadeira, por exemplo, o conjunto de relaes entre os elementos de sua estrutura que no podem variar sem que a cadeira deixe de pertencer classe das cadeiras. A organizao de um aluno ou um amante, so os aspectos da estrutura que devem permanecer invariantes para que uma pessoa permanea sendo um aluno, ou um amante. Um estudante que reprovado e excludo de um determinado curso deixa de existir como aluno deste curso; um amante rejeitado deixa de existir como amante. 14.4 Explicaes Se nossa inteno explicar cientificamente os fenmenos imunolgicos, devemos esclarecer :

8
1. 2. 3. fenmenos O que faz de um fenmeno um fenmeno imunolgico? O que faz de uma explicao uma explicao cientfica? O que aceitaramos como uma explicao cientfica destes ?

Estas so perguntas pouco comuns na Imunologia. Saber o que so fenmenos imunolgicos parece no constituir problema algum, isto parece resolvido implicitamente pela prpria existncia da Imunologia, que se dedica a solucion-los. De acordo com as pressuposies tradicionais desta disciplina, a proteo imunolgica, como vimos, tem trs caractersticas importantes: 1. outras; 2. 3. especfica, ou seja, a proteo contra uma doena no protege de durvel, portanto, existe uma "memria" imunolgica e pode ser artificialmente induzida por vacinas.

Esta tambm a viso que a sociedade tem da Imunologia. Ela orienta a grande maioria das pesquisas e do ensino da Imunologia. Implcitos nestas pressuposies, esto admisses importantes que no chegam a ser definidas com preciso, mas que no percebemos como imprecisas ou problemticas. No usual, por exemplo, perguntar "O que uma coisa "estranha"? Que propriedades uma coisa deve ter para ser chamada assim?". Nem todos os materiais externos (e macromoleculares) so "estranhos" para o sistema imune; plsticos e polmeros de D-amino-cidos, por exemplo, no so imunognicos. No so estranhos nem familiares. Quando dizemos que o corpo "se defende", no levamos em conta como pode se constituir tal "defesa", se no h um homnculo inteligente no interior do organismo que a planeje. A Imunologia, enfim, est repleta de termos como "reconhecer", "processar", "regular", "suprimir" ou "modular", como se estas fossem aes deliberadas de alguma entidade. O que constitui, ento, um fenmeno como imunolgico? Os fenmenos imunolgicos implicam, direta ou indiretamente, em atividades de linfcitos e seus produtos clonais, isto , molculas que contm regies variveis , produzidas por processos especiais de rearranjo e juno de segmentos gnicos. Os linfcitos so clulas criadas por processos somticos especiais, que os tornam diferentes de todas as demais clulas do corpo . Estas diferenas so importantes na organizao peculiar criada com o sistema imune. Creio que esta definio poderia ser aceita, sem polmicas, pela grande maioria dos imunologistas. A segunda e a terceira perguntas: "O que aceitaramos como uma explicao cientfica dos fenmenos imunolgicos?" pouco usual nos meios cientficos. Os cientistas se comportam como se j soubessem o que constitui uma explicao. O carter cientfico de suas explicaes, segundo eles, deriva

9
das caractersticas inerentes ao mtodo cientfico, ou seja, seu carter experimental e quantitativo e sua capacidade de previso. Afirmaes "cientficas", usualmente, so recebidas como afirmaes de uma qualidade especial, comprovadas de alguma maneira especialmente confivel, afirmaes que corresponderiam, afinal, realidade objetiva . Maturana d um sentido diferente s explicaes cientficas, um sentido que no se apoia na noo de uma realidade objetiva. Uma explicao sempre uma reformulao da experincia que se quer explicar, uma reformulao aceitvel por quem a ouve. Uma explicao constituda por quem a aceita , no por quem a formula. Antes de ser aceita, uma explicao no uma explicao. Para Maturana, as explicaes cientficas so sempre explicaes gerativas: so propostas de mecanismos que, ao operar, geram, criam os fenmenos que pretendem explicar. Segundo ele, elas so compostas de 4 etapas, que devem estar sempre presentes, embora nem sempre na mesma ordem. Na primeira etapa, quem prope a explicao de um fenmeno deve conseguir o consenso de uma comunidade de observadores de que o fenmeno existe e requer uma explicao. Isto , quem explica, deve explicitar as condies em que se pode ter a experincia que se quer explicar. Esta no uma etapa trivial. Por isto a seo denominada "Materiais e Mtodos" to importante nos manuscritos dos cientistas. Na segunda etapa, quem se prope a explicar deve propor um mecanismo gerativo, um mecanismo que, ao operar, gere a experincia que se quer explicar. O que explicamos cientificamente sempre uma experincia. Para que o mecanismo gerativo proposto seja considerado uma explicao cientfica, ele deve ser capaz de gerar tambm outros fenmenos, do mesmo domnio, fenmenos que no haviam sido considerados na proposta original. Esta terceira etapa, a capacidade de gerar outros fenmenos no mesmo domnio, importante porque os cientistas acreditam estar propondo mecanismos que tm alguma analogia, alguma correspondncia, com fenmenos da natureza e no propondo apenas um mecanismo capaz de explicar um fenmeno particular. E a explicao proposta permanecer sendo uma explicao cientfica, at que surja um fenmeno, uma experincia, no mesmo domnio, que o mecanismo seja incapaz de explicar. Neste momento, necessrio reformular a explicao, para torn-la capaz de gerar o fenmeno que no conseguia gerar em sua verso original. A quarta etapa repete, de certa forma, a primeira etapa e torna-se necessrio conseguir o consenso de uma comunidade de observadores sobre a ocorrncia de novos fenmenos deduzidos a partir do mecanismo gerativo proposto. Nestes procedimentos, em nenhuma das 4 etapas, necessrio fazer referncia a uma realidade objetiva , independente do observador. De fato, as explicaes cientficas no discriminam entre os dois caminhos explicativos

10
indicados por Maturana. Isto , podemos ser cientficos levando em conta ou no levando em conta a importncia das propriedades do observador no que observado. Quando, ento, poderemos saber se alcanamos uma explicao cientfica dos fenmenos imunolgicos? Quando houvermos proposto um mecanismo capaz de gerar todos os fenmenos imunolgicos e quando esta nossa explicao for aceita. 14.5 Implicaes sociais dos dois caminhos explicativos Os dois caminhos explicativos tm implicaes sociais distintas. No caminho da objetividade sem parntesis, ao fazer uma afirmao sobre como o mundo , estamos fazendo uma petio de obedincia. Quem no estiver de acordo conosco est se recusando a ver a Realidade e, mais cedo ou mais tarde, teremos que exigir obedincia ou refutar estas pessoas de forma definitiva. No caminho da objetividade entre parntesis, h muitos domnios de realidade diferentes, igualmente legtimos, embora no igualmente desejveis. Neste caminho, uma afirmao cognitiva um convite ao outro para entrar em um certo domnio de coerncias operacionais, mas quem faz o convite sabe que h outros domnios de realidade que o outro pode preferir. Neste caminho explicativo, os que esto em desacordo, no concordam porque esto em domnios de realidade diferentes. Estes domnios podem unir-se, ou no, na medida em que quem convida e quem ouve queiram permanecer juntos, ou separar-se. Se decidem separar-se, o fazem de maneira responsvel. Se decidem ficar juntos e criar um domnio onde apaream coerncias operacionais, tambm o fazem de maneira responsvel. Quando optamos pelo segundo caminho explicativo, no negamos a realidade da Imunologia tradicional. Isto seria presunoso. Gostaramos de convidar os leitores a considerar a perspectiva que preferimos e porque a preferimos. Estas opes afetam tambm as atividades didticas. No caminho da objetividade sem parntesis, uma explicao faz referncia a uma realidade independente do observador, e tanto melhor quanto mais se aproximar desta realidade objetiva. Neste caminho explicativo, o professor ensina a seus alunos porque tem, ou teve, um acesso privilegiado a esta realidade. Ele no constri a realidade: ele a revela , a desvenda. Ele no , tampouco, responsvel por esta realidade ser assim. Se algum no aprende, no concorda com o que ele diz, no prestou ateno ou pouco inteligente. Ele apenas um intermedirio entre a realidade e o aprendiz. No caminho da objetividade entre parntesis, reconhecemos que a realidade que construmos apenas uma entre muitas realidades possveis.

1 15. A deriva natural do sistema imune

__________________ 15.1 Uma busca na histria dos seres vivos Na Biologia do Conhecer , a seqncia de transformaes que um ser vivo atravessa durante sua existncia, em acoplamento estrutural com o meio, mantendo sua organizao e sua adaptao, se denomina uma deriva estrutural . O termo deriva usado exatamente no sentido em que dizemos que um barco "est deriva". Um barco " deriva" no se dirige a qualquer lugar, se desloca para apenas um lugar. Se conhecssemos em detalhe a natureza dos fatores que determinam seu movimento (o tamanho das ondas, a fora do vento, o peso do barco, etc), poderamos prever para onde ele se dirige com preciso. Um barco " deriva" no dirigido por quem o navega, mas no vai para qualquer lugar. Sua trajetria estruturalmente determinada. Todo animal passa pelo menos uma fase de sua vida como um ser unicelular - o zigoto. Este o incio de sua deriva ontognica . Mas os gametas que lhe deram origem vieram de organismos que viveram previamente e estes derivam de uma longa linhagem de ancestrais, alguns muito diferentes dos organismos atuais. Ao considerarmos um organismo atual, contemplamos o resultado de uma histria de bilhes de anos, uma seqncia ininterrupta de acontecimentos que vieram modificando os seres vivos, desde a origem da vida: a deriva filogentica . Na perspectiva tradicional, o aparecimento do sistema imune na histria dos seres vivos vista como a evoluo de mecanismos de defesa contra a invaso de materiais estranhos. Como vimos, esta viso, ao atribuir um propsito ou funo s atividades imunolgicas, confunde domnios de descrio. Descries feitas no domnio da estrutura do sistema imune no devem ser confundidas com descries de suas interaes . H muitos processos no-imunolgicos desencadeados por agentes externos ao organismo que tm conseqncias defensivas. Por sua vez, processos atuantes nas interaes celulares capazes de ativar linfcitos ou inflamar os tecidos, tambm atuam no desenvolvimento embrionrio. So processos gerais da operao de organismos multicelulares e no mecanismos "de defesa", embora participem de processos pelos quais, como observadores, observamos que o corpo "se defende". Os mecanismos celulares que hoje denominamos "imunolgicos" so o resultado do longo desenrolar de uma maneira particular de viver, de uma histria particular de acontecimentos. Estes processos surgiram de nossa histria como seres vivos, como parte da operao de animais vertebrados, como ns, de tal forma que se tornaram constitutivos e j no podemos existir sem eles. Segundo o pensamento biolgico predominante, os fenmenos biolgicos que observamos atualmente surgiram e so conservados porque desempenham uma funo til, porque so necessrios . Segundo Maturana, nenhum fenmeno biolgico ocorre porque necessrio. A histria dos fenmenos biolgicos no a histria de fenmenos que ocorreram por necessidade. Uma vez que certos fenmenos ocorrem e so conservados como parte de uma maneira de viver, o organismo pode se transformar, se tornar congruente com a realizao daqueles fenmenos de tal forma que, aps uma longa seqncia de geraes, o organismo no pode mais existir sem que aqueles fenmenos ocorram como parte de sua forma de viver. Os fenmenos se tornaram constitutivos . Os fenmenos biolgicos so fenmenos histricos. Eles representam a face atual de uma seqncia de transformaes estruturais e agora, nos organismos atuais, observamos sua conectividade celular. Vemos que no possvel mais eliminar, por exemplo, certas relaes entre macrfagos e linfcitos, sem que o organismo se desintegre e sucumba a infeces. Tais relaes, no entanto, no esto presentes no organismo porque elas so necessrias. Elas esto l como o resultado de uma histria de transformaes possveis. Os fenmenos imunolgicos no surgiram porque eram necessrios. Os processos que lhes deram origem e ocorriam no organismo, como parte trivial e freqente de seu operar, foram sendo conservados e se tornaram parte indispensvel de sua maneira de viver. As linhagens de seres vivos se estabelecem atravs da conservao de sistemas de relaes, da conservao de um dado tipo de conectividade entre seus componentes, da conservao de uma dada organizao. Todos os seres vivos, unicelulares ou multicelulares, bactrias, animais ou vegetais, conservam um tipo bsico de organizao que Maturana denomina autopoitica , ou auto-criadora. Mas, sobrepostas nesta organizao (autopoitica) fundamental, existem diversas formas de organizao, que se conservam nas diversas linhagens de seres vivos. Tipos de plantas, tipos de animais, espcies animais, so linhagens definidas pela conservao de uma maneira de viver . Os organismos vertebrados atuais,

2
dotados de um sistema imune, representam o presente de uma histria de transformaes que conservou este tipo particular de conectividade entre clulas e molculas. Alguns imunologistas falam respostas imunes antecipatrias ou imunidade adaptativa . Como vimos, os fenmenos imunolgicos envolvem as atividades de linfcitos e seus produtos clonais, isto , molculas que contm regies variveis , produzidas por processos especiais de rearranjo/ juno de segmentos gnicos. Alguns designam estes processos de respostas imunes antecipatrias , reservando a qualificao de respostas no-antecipatrias aos fenmenos que, embora ligados defesa do organismo, no envolvem linfcitos ou molculas dotadas de regies variveis, tais como as presentes em organismos invertebrados. Os vertebrados seriam capazes de ambos os tipos de respostas: noantecipatrias e antecipatrias. As molculas de adeso e as citocinas, por exemplo, seriam componentes da parcela no-antecipatria da resposta. A denominao "antecipatria" deriva da idia de que o sistema imune opera na base de respostas imunes especficas e antecipa, prev, a natureza dos antgenos com os quais o organismo entrar em contacto. Esta noo inadequada por motivos j discutidos. Quando a reatividade imunolgica centrada-no-antgeno e descrita em termos de "estmulos" e "respostas", se negligencia a necessidade de definir a organizao, as relaes constitutivas entre os componentes do organismo que as constituem, as relaes que devem se manter invariantes enquanto observamos que o sistema "estimulado" e "responde". Como vimos, ao descrever respostas imunes especficas , a especificidade reside nas descries de nossas operaes, como observadores da atividade imunolgica, no na estrutura, no na fisiologia do sistema imune. Ainda mais, os sistemas biolgicos operam sempre no presente; as noes de passado e futuro pertencem linguagem humana e no ao domnio da estrutura e da organizao dos sistemas biolgicos. O fgado no acumula glicognio aps o almoo porque antecipa que haver fome algumas horas depois; ele o faz porque sua estrutura determina que assim seja. Na estrutura dos seres vivos no h antecipao, mas sim a conservao da organizao e da adaptao ao ambiente sob pena de desintegrao do sistema. Gerar e manter uma dada organizao e conservar a adaptao ao ambiente so pr-requisitos, so condies de existncia dos seres vivos, configuradas no domnio de sua estrutura . A defesa contra agresses se configura no domnio das interaes do organismo em seu ambiente. Estes dois domnios so distintos. As modificaes estruturais que ocorrem com conservao da organizao e da adaptao podem ser conservadas na deriva natural a que esto sujeitos os seres vivos e, se estas modificaes se conservam durante vrias geraes, podem dar origem a uma nova linhagem de ser vivo. As modificaes estruturais que resultam em perda da adaptao ao meio, resultam na perda da organizao e na conseqente desintegrao do ser vivo. 15.2. O fenotipo ontognico Usualmente, pensamos que as modificaes evolutivas se do em decorrncia de modificaes no material gentico. Existem, porm, influncias recprocas, do modo de vida sobre o material gentico e, como sugerido abaixo, o modo de vida de um organismo pode, a longo prazo, influenciar sua fisiologia. Mudanas no comportamento de um organismo no podem alterar diretamente sua fisiologia. Maturana e Mpdozis, porm, defendem a idia de que mudanas durveis e profundas no modo de vida , conservadas atravs de vrias geraes, favorecero outras mudanas que facilitem este novo modo de vida , inclusive mudanas genticas. Nesta perspectiva, o modo de vida e no a gentica que determina as modificaes atravessadas pelos seres vivos. Eis aqui Maturana: " O que a gentica determina? A gentica determina uma dinmica estrutural. Mais ainda, determina um mbito de histrias ontognicas possveis de mudanas estruturais. Ou, em outras palavras, um mbito de co-derivas estruturais possveis. Em linguagem tcnica, um mbito de epigneses. (A epignese uma histria de mudanas estruturais contingentes s interaes com o meio a partir de uma certa estrutura inicial.) Ento, o que a gentica determina? Somente a possibilidade inicial." E como se constituem as linhagens de seres vivos? "As linhagens se constituem em uma sucesso de geraes atravs da conservao de um modo de vida , um fenotipo ontognico. Cada vez que um sistema

3
conserva uma certa dinmica ou uma certa forma de relao, tudo pode mudar em torno dessa forma de relao. No quero dizer que mude necessariamente, mas tudo o que est em torno disto pode mudar." Esta possibilidade de mudana importante na constituio das linhagens: " O modo de vida que se conserva na constituio de uma linhagem se configura na epignese, no est determinado geneticamente: pertence ao espao da configurao epigentica. Ao mesmo tempo, a constituio gentica, que determina a constituio inicial da clula zigtica, tem que permitir essa epignese. A gentica permite a epignese mas no a determina." E chega a nos dizer como pode o genoma seguir o modo de vida: " Na reproduo se estabelecem circunstncias tais que a mesma epignese se repete e assim se forma uma linhagem. Na medida em que se realiza esta epignese, a constituio gentica fica livre para variar em torno da conservao deste modo de vida , em torno deste fenotipo ontognico. Depois de um certo nmero de geraes, verificamos que a gentica variou. Variou de que maneira? Variou em torno da conservao deste fentipo ontognico, deste modo de vida ." E, aproveitando, Maturana acrescenta responsabilidade ao nosso modo de viver: " Por isto no trivial que tenhamos um modo de vida ou outro. Quanto mais se prolongar um modo de vida, quanto mais se conservar uma linhagem com um certo modo particular de vida, mais se amarrar a gentica conservao deste modo de vida. Pode chegar um momento em que se amarram de tal maneira, que o espao epigentico muda e certas epigneses que antes eram possveis, agora no podem mais se dar." Este discurso radical no contesta a importncia dos mecanismos mendelianos de herana, mas enfatiza que no so os genes que determinam o desempenho do ser vivo e, portanto, a deriva natural. Muitas variedades genticas viabilizam um desempenho compatvel com um dado modo de vida e, por isto, so mantidas gerao aps gerao. Isto resulta no polimorfismo gentico (o fato de que a grande maioria das protenas codificada por uma variedade de alelos, em diferentes indivduos, e no por um nico alelo otimizado). Resulta tambm em fenmenos como a evoluo convergente, no qual composies genticas muito distintas (como a do lobo europeu e do lobo tasmaniano) conduzem a caractersticas morfolgicas similares, porque a forma biolgica pode estar ligada muito mais diretamente ao desempenho do que a composio molecular. Explica tambm paradoxos aparentes no ritmo de modificao evolutiva. Como em um comentrio de Jorge Mpodozis, tambm gravado em Santiago: "Algumas espcies evoluem muito rapidamente, enquanto que outras permanecem quase estacionrias por longos perodos. Seria de se esperar que o ritmo de modificao (mutacional) das molculas que compem as espcies que esto evoluindo rapidamente fosse rpido e, inversamente, fosse lento nas espcies de evoluo lenta. O que se constata no isto: o ritmo de modificao molecular caracterstico de cada classe de molculas e no da espcie. Componentes de seres que esto evoluindo lenta ou rapidamente, cada molcula segue seu ritmo prprio de modificao. No h um paralelismo entre o ritmo molecular e o ritmo biolgico, como deveria haver se as variaes moleculares controlassem o ritmo da evoluo." As mudanas importantes para o processo evolutivo, portanto, seriam as mudanas no modo de vida , no fenotipo ontognico. Modificaes no material gentico podem se dar sem que haja modificao no fenotipo ontognico, mas modificaes significantes e permanentes no modo de vida, a longo prazo, conduzem a modificaes no material gentico. Novas linhagens surgiriam quando houvessem mudanas no fenotipo ontognico, mudanas que se conservam atravs de geraes, constituindo uma linhagem de

4
organismos em uma nova congruncia com seu ambiente (para uma considerao do "Lamarckismo" destas afirmaes, ver a seo 15.4) 15.3 Adaptao, seleo natural e competio O discurso de Maturana e Mpodozis sobre a deriva filognica no se apoia nas noes fundamentais do darwinismo: adaptao, seleo natural e competio. Para eles, os seres vivos no se adaptam a novas situaes, porque eles sempre conservam sua adaptao ou se desintegram. Os seres vivos esto sempre adaptados, todos tm competncia para existir enquanto existem. No existem criaturas mais adaptadas que outras. Os seres vivos, como sistemas estruturalmente determinados, mudam de acordo com sua estrutura. Eles no se acomodam, no aprendem, no "se adaptam" no sentido de receber informaes do meio sobre como devem se modificar. No existem interaes instrutivas. Os seres vivos sofrem mudanas desencadeadas por suas interaes no ambiente mas, como vimos, tais mudanas so determinadas, especificadas pela estrutura do ser vivo, no pelo ambiente. Maturana e Varela nos alertam tambm para considerar o que entendemos por seleo: "Muitas vezes pensamos em um processo seletivo como no ato de escolher voluntariamente entre muitas alternativas. fcil cair na tentao de pensar que isso o que ocorre nos processos naturais. fcil pensar que o meio, atravs de suas perturbaes, que escolhe quais das muitas mudanas possveis vo se dar nos seres vivos." E, mais: "Falamos de seleo no sentido que, do ponto de vista de um observador, entre as muitas mudanas possveis em um sistema, uma dada perturbao desencadeia uma ou duas mudanas (especficas) como se as houvesse escolhido (selecionado) no conjunto de mudanas. Este raciocnio no de todo adequado porque, em cada ontognese, ocorre apenas uma srie de interaes que desencadeiam apenas uma seqncia de mudanas. O conjunto de variaes que o observador admite como possveis so apenas imaginadas, ainda que pudessem se dar em histrias distintas. Nestas circunstncias, a palavra seleo se refere ao entendimento que um observador tem de cada ontognese, mas esta observao surge da comparao de muitas ontogneses." Dizemos que o que ocorreu foi "selecionado" entre muitas possibilidades, mas para o organismo que observamos, nas condies que o observamos, o que se passou foi a nica coisa que poderia haver se passado. O domnio das possibilidades existe apenas na linguagem. Na Imunologia, por exemplo, fcil pensar que o antgeno que "seleciona" os clones linfocitrios. Embora tenha sido elevada condio de princpio explicativo principal da operao do sistema imune, esta idia uma metfora, um "faz de conta". O que ocorre mais ou menos o contrrio disto. A interao com um antgeno no pode determinar (especificar), e no determina, o que vai ocorrer no sistema imune porque isto est determinado (especificado) pela estrutura do sistema no momento em que este encontro se d. O sistema imune, como todos os sistemas biolgicos, um sistema estruturalmente determinado e no sofre interaes "instrutivas", no pode ser mudado "de fora para dentro". Maturana e Mpodozis no utilizam o conceito de competio para explicar a deriva filognica. Para eles, a competio um fenmeno cultural humano e no tem uma importncia constitutiva no mundo natural. Para que a Alemanha fosse campe mundial de futebol em 1990, a Argentina teve que ser derrotada. A vitria se constitui sobre a derrota do oponente. No h vitoriosos sem derrotados. No mundo natural, quando um animal come, ou afirma um territrio e outro no come, ou expulso do territrio, que o primeiro coma no est constitudo pelo fato que o outro no coma, porque este outro animal pode seguir sua deriva e conseguir outro alimento e outro territrio. No h campeonatos no mundo natural. 15.4 Bateson e a flexibilidade somtica Em uma linha independente de raciocnio, Gregory Bateson, outro pensador contemporneo que praticamente desconhecido pelos biologistas, tambm defendeu a importncia de fatores somticos na evoluo. Ele afirmava que, embora a evoluo biolgica seja considerada um processo movido por modificaes genticas, fatores somticos determinam tudo o que pode ocorrer inicialmente. Embora a vida de um organismo dependa da concatenao de mudanas genticas e somticas com mudanas em seu ambiente, em uma primeira etapa, todas as mudanas enfrentadas pelo ser vivo, sejam elas genticas (por

5
exemplo, mutaes) ou ambientais (por ex., uma queda da temperatura), precisam ser enfrentadas com recursos somticos . As exigncias criadas por um gene mutante ou uma variao da temperatura ambiental sero enfrentadas com os recursos somticos j disponveis ao organismo. Bateson encarava a seleo natural como um processo subtrativo e no como um processo criador: "Na evoluo esto presentes dois sistemas de controle: a homeostase do corpo, que lida com o stress tolervel interno, e a seleo natural, que age sobre os membros (geneticamente) no viveis da populao". Bateson sugeriu que a evoluo ocorre pela criao de modificaes genticas que restituem flexibilidade ao organismo por resolverem problemas que, at ento, eram resolvidos de forma pouco econmica pela utilizao de recursos somticos. Em outros termos, ao utilizar recursos somticos na soluo de dificuldades (criadas por modificaes genticas ou ambientais), os organismos perderiam flexibilidade, diminuiriam seu repertrio de aes e seriam menos capazes de enfrentar outras dificuldades. Modificaes genticas que permitissem um relaxamento destas tenses somticas resultariam em um ganho de flexibilidade e seriam, por isto mesmo, conservadas. Tudo se passaria, ento, como se estas modificaes genticas simulassem uma herana Lamarckista. Uma herana Lamarckista direta no funcionaria por uma srie de razes. Primeiro, seria antieconmico fixar no genoma todas as variaes em circuitos subsidirios que acompanham uma caracterstica desejvel que, at ento, estava sendo mantida por processos somticos. Segundo, a herana Lamarckista teria um andamento inadequado. Para que o processo evolutivo se d, deve haver um intervalo entre o ajustamento somtico (que reversvel) e a mudana do genoma (que irreversvel no indivduo e muito lentamente reversvel na populao). Uma sugesto semelhante, conhecida como efeito Baldwin, foi proposta no final do sculo passado. Baldwin sugeriu que, na seleo natural, deveramos considerar no apenas fatores ambientais, mas tambm o que ele chamava "seleo orgnica", pela qual o destino de uma dada variao dependeria de sua viabilidade fisiolgica. Baldwin atribui a Lloyd Morgan a sugesto de que poderiam existir "variaes coincidentes" que simulariam uma herana Lamarckista. De acordo com tal hiptese, as mudanas genotpicas a serem introduzidas com sucesso so como mudanas que legisladores experientes introduzem, leis que s so propostas quando j foram consagradas na prtica e j esto sendo obedecidas. Um corolrio da proposta de Bateson que, quando organismos ficam sujeitos a uma dificuldade constante durante geraes sucessivas, as solues alcanadas com recursos somticos, que so de alto custo para a flexibilidade, tendem a ser substitudas por solues genticas, que economizam flexibilidade, embora sejam menos reversveis. H um corolrio simtrico a este: se os organismos forem sujeitos a dificuldades continuamente variveis, as mudanas atendendo a tais dificuldades tenderiam a ocorrer no sentido oposto. As "dificuldades imunolgicas" encontradas pelo organismo so tipicamente variveis. O confronto destas dificuldades evoluiu por mecanismos (nucleares, celulares e inter-celulares) que levaram produo de molculas que possuem, ou simulam possuir, (ver adiante) regies de estrutura varivel. Por suas interaes, tais molculas possibilitam a produo e a manuteno do sistema que as produziu como uma rede fechada de produes celulares e moleculares. O sistema imune constituiria, portanto, um exemplo notvel de solues encontradas e mantidas na esfera somtica. 15.5 O sistema imune e solues somticas Mesmo uma anlise superficial da estrutura celular e molecular do sistema imune indica uma grande supremacia de mecanismos somticos sobre mecanismos genticos: no existem, praticamente, componentes (celulares ou moleculares) insubstituveis no sistema imune. O sistema opera com um enorme grau de redundncia e seus componentes (linfcitos, anticorpos, etc) podem ser, e so, contnua e efetivamente, substitudos por outros componentes. Uma incessante mudana na composio, uma intensa dinmica estrutural. H trs conjuntos gnicos importantes na organizao do sistema imune. Dois so polignicos, i.e., contm muitos genes no mesmo indivduo, enquanto que o terceiro extremamente polimrfico, i.e., contm uma enorme variedade de genes na espcie , mas cada indivduo expressa apenas uma pequena variedade destes genes. Os dois conjuntos polignicos so: os genes dos receptores usados pelos linfcitos B e T (respectivamente, as imunoglobulinas, ou Igs, e os TCRs). O complexo gnico polimrfico conhecido como MHC (Major Histocompatibility Complex).

6
Tabela 15.1 Trs conjuntos gnicos so importantes na organizao do sistema imune __________________________________________________________________ Conjunto gnico Caracterstica Expresso clonal Distribuio ___________________________________________________________________ Genes V de polignico sim linfcitos B imunoglobulinas Genes V de TCR polignico sim linfcitos T

MHC classe I polimrfico no todas as clulas MHC classe II polimrfico no cel.apresentadoras ____________________________________________________________________ Os genes de Igs e TCRs so expressos clonalmente e isto muito importante na organizao do sistema imune. Na gerao dos linfcitos, processos especiais de recombinao de segmentos gnicos permitem a gerao de uma grande variedade de receptores celulares (Igs em linfcitos B, TCRs em linfcitos T) mas, em cada linfcito emergente, apenas uma nica variedade de Ig ou TCR pode ser montada. Cada linfcito, do ponto de vista gentico (nucleico), nico e constitui um clone que pode se expandir e constituir uma populao de muitas clulas idnticas ou desaparecer como uma nica clula solitria. A expresso clonal , enfim, faz com que, inveno de um dado tipo de molcula, corresponda a inveno de um dado tipo celular, um clone. A expanso clonal s ocorre se o linfcito for ativado. Ao emergirem nos rgos geradores, os linfcitos esto em um estado "de repouso", como em suspenso animada. A ativao s ocorre se o linfcito emergente entrar em interao com clulas acessrias e outros linfcitos ativados, previamente incorporados ao sistema imune. Os genes do MHC esto implicados nestas interaes ativadoras. Como vimos, h duas classes de produtos dos genes do MHC expressos como protenas de membrana. Os produtos ditos de classe I so expressos em todas as clulas do corpo, enquanto os produtos de classe II so expressos apenas em clulas importantes na ativao de linfcitos T CD4+ (auxiliares) (Tabela 15.1 ) que, por sua vez, ativam vrios outros tipos celulares. Tanto o poligenismo de Igs e TCRs, quanto o polimorfismo do MHC revelam que muitas combinaes gnicas diferentes podem servir organizao multicelular do sistema imune. Quer dizer, a mesma organizao pode ser montada de muitas maneiras e, em sua operao normal, o sistema imune troca continuamente os componentes que utiliza. Os genes importantes na organizao do sistema permitem esta flexibilidade somtica produzindo molculas com estrutura varivel. Dois mecanismos geradores de molculas de estrutura varivel operam e se conjugam no sistema imune. Um deles, amplamente reconhecido, a gerao da diversidade clonal, a criao de regies variveis de Igs e TCRs. Outro mecanismo, menos discutido, opera durante a ativao linfocitria e consiste na combinao de uma multiplicidade de peptdeos gerados pela digesto parcial de protenas em compartimentos intracelulares (o processamento) com produtos do MHC que so, ento, expostos na membrana celular (a apresentao). Os conjugados "apresentados" constituem um conjunto heterogneo de molculas portando peptdeos derivados do processamento. Assim sendo, eles simulam molculas com regies variveis. Ambos estes mecanismos admitem um certo grau de indeterminao, no sentido que a estrututura molecular a ser criada no est completamente determinada nos segmentos gnicos. A indeterminao est presente no rearranjo gnico e durante os processos de juno desses segmentos. Nos linfcitos B, h ainda uma indeterminao gerada por mutaes somticas. Isto permite o aparecimento de uma grande variedade de receptores. A indeterminao ocorre ainda no "processamento" e "apresentao" de peptdeos pareados a produtos do MHC necessrios ativao dos linfcitos T, porque muitos peptdeos diferentes tm oportunidade de se conjugar aos produtos do MHC. Como pode a organizao, o processo ordenador que constitui o sistema imune, emergir destes dois processos que geram produtos de maneira indeterminada?

7
15.6 O estabelecimento somtico da conectividade A apresentao de peptdeos pelos linfcitos B envolve uma perda da originalidade clonal , porque os linfcitos passam a "apresentar" uma coleo heterognea de molculas pareadas a produtos do MHC, em lugar da coleo homognea de imunoglobulinas originalmente apresentadas como receptores. As imunoglobulinas no desaparecem da membrana do linfcito B durante a apresentao, mas deixam de ser as molculas relevantes para que o processo de ativao do linfcito B prossiga. Alm disso, durante a ativao, ocorre uma hiper-expresso do produtos de classe II do MHC . Essa heterogeneidade de conjugados MHC-peptdeos tem algumas conseqncias pouco discutidas: ela permite o pareamento simultneo do mesmo linfcito B com mltiplos linfcitos T; por outro lado, quando linfcitos B diferentes processam/apresentam o mesmo antgeno, eles o processam utilizando as mesmas enzimas e pareiam os peptdeos resultantes com os mesmos produtos do MHC. Assim sendo, embora diferentes, eles acabam por apresentar um conjunto semelhante de peptdeos e, portanto, tornamse alvos de populaes semelhantes de linfcitos T. O processamento/apresentao cria um contexto de modificaes estruturais, padres de mudana na composio celular e molecular do sistema imune, que dependem destas interaes com linfcitos B destitudos de sua originalidade clonal . Pelo seu simples operar, portanto, os linfcitos B criam, atravs de linfcitos T, elos de conectividade com outros linfcitos B previamente no relacionados. Este mecanismo, associado conectividade idiotipo-anti-idiotipo, suficiente para criar e manter as atividades linfocitrias que descrevemos como fenmenos imunolgicos. Tambm na conectividade idiotpica h exemplos de mecanismos que asseguram o estabelecimento de uma conectividade bsica, por exemplo, durante a ontognese. Como j mencionamos, a introduo de seqncias N na a juno de segmentos gnicos que ocorre durante a linfopoiese uma fonte adicional de diversificao dos receptores clonais que emergem da medula e do timo. Durante as primeiras fases da vida, no entanto, a enzima que introduz as seqncias N no DNA linfocitrio est silenciosa. Ocorre, ento, que so expressas as seqncias germinais dos genes V e tais seqncias favorecem a construo de receptores (Igs e TCRs) multiespecficos, com um alto grau de reatividade interna. Assim, o sistema assegura a montagem de uma rede inicial de conexes. Como haveriam surgido os mecanismos imunolgicos na histria dos seres vivos? Anlises estruturais das molculas de Igs, TCRs e produtos do MHC revelaram semelhanas que permitiram, como vimos, sua classificao em uma super-famlia de molculas, a super-famlia das imunoglobulinas. Desde que esta definio foi proposta, muitas outras protenas de membrana revelaram caractersticas estruturais que as colocam na mesma super-famlia. Uma parcela significativa destas molculas enquadram-se na definio de "molculas de adeso celular" (CAMs - cell adhesion molecules), que so importantes na morfognese dos tecidos de animais multicelulares, na migrao celular e nos processos ativadores que requerem o ntimo contato de membranas. Desde que molculas de Igs, TCRs e produtos do MHC parecem existir apenas nos vertebrados, enquanto que existe uma variedade muito maior de CAMs nos invertebrados, Edelman sugeriu que tais molculas derivaram filogeneticamente de CAMs. Na leitura usual desta proposta, molculas originalmente ligadas adeso celular, importantes na constituio dos tecidos, haveriam se modificado durante a evoluo para permitir a ligao de materiais estranhos ao organismo. Nesta viso, a distino entre materiais "prprios" e "estranhos" ocupa o lugar central. Existe, portanto, um vis teleonmico, um propsito dirigindo a evoluo do sistema imune. Como vimos, este propsito dispensvel. Podemos descrever os processos imunolgicos como aspectos especiais de processos de adeso celular, ou melhor, podemos descrever Igs, TCRs e produtos do MHC, no como derivados de CAMs, mas como legtimas CAMs (cell adhesion molecules). Podemos descrever os processos imunolgicos como processos circularmente voltados sobre si prprios, relacionados com a promoo de adeses entre diversos tipos celulares, adeses estas que levam constituio de um tecido especial: o tecido linfide. Isto no to difcil imaginar. Em qualquer diagrama da ativao de linfcitos T, h uma grande coleo de protenas de membrana (CAMs) interagindo para unir o linfcito clula apresentadora. Em meio a estas molculas, o peptdeo conjugado ao produto do MHC parece um detalhe menor. H um entrelaamento de aes de molculas de adeso, citocinas e receptores clonais de linfcitos. A grande maioria dos peptdeos apresentados a linfcitos deriva do processamento de autocomponentes. Peptdeos derivados de molculas antignicas so detalhes diludos em uma vasta coleo de

8
outras substncias envolvidas nas interaes moleculares importantes na adeso celular. Antgenos so manipulados pelos trajetos usuais de degradao de substncias captadas pelas clulas. Eles no so especificamente reconhecidos como estranhos, so assimilados aos processos gerais do metabolismo celular a despeito de sua estranheza. O processamento consiste, exatamente, em destituir os materiais estranhos de sua estranheza. A operao centrada-no-organismo dos processos imunolgicos esclarece um aspecto curioso da resposta imune a infeces. H mltiplas semelhanas antignicas entre macromolculas de vertebrados e as de seus parasitas (como bactrias, protozorios e helmintos) e uma parcela significativa das respostas imunes nas infeces dirigida exatamente a produtos do parasita semelhantes a produtos do hospedeiro. Um exemplo recente o das chamadas "heat shock proteins" ou protenas do "stress" (stress-proteins). Este fenmeno aparentemente cria um risco desnecessrio de infeces desencadearem doenas auto-imunes e provvel que isto realmente ocorra em algumas situaes. Uma forma auto-imune de diabete, por exemplo, pode resultar de infeces virais. Se, porm, considerarmos que a operao do sistema imune no se apoia na distino entre materiais "prprios" e "estranhos", mas sim na concatenao de interaes celulares que lidam indistintamente com uns e outros, compreensvel que as "respostas" do sistema derivem do desvio de atividades nas quais o sistema j estava engajado antes da infeco. Assim, por exemplo, se j existiam muitos linfcitos envolvidos com "heat shock proteins" do prprio organismo, compreensvel que uma parcela importante da resposta a .parasitas inclua anticorpos que reagem com suas "heat shock proteins". As interaes celulares que antes lidavam com "heat shock proteins" do corpo passam a incluir outras interaes celulares que lidam com "heat shock proteins" do parasita. Na discusso da deriva filogentica do tecido linfide, portanto, como nos demais processos morfogenticos, devemos colocar nossa ateno na criao de processos de interao celular, mais que no aparecimento de mecanismos de defesa do organismo. 15.7 A constituio do espao extracelular A deriva natural filogentica que deu origem a organismos multicelulares, provavelmente, foi precedida pelo aparecimento de colnias onde muitos seres unicelulares se agregavam e usufruiam benefcios nesta agregao. A transio entre estas colnias e organismos multicelulares se deu quando se configurou um espao extra-celular . Um ser vivo multicelular se configurou no momento em que este espao extra-celular se constituiu como um espao indispensvel ao desempenho das atividades biolgicas, isto , no momento em que a ruptura deste espao passou a ser equivalente desintegrao do ser vivo, interrupo de suas atividades biolgicas. A transio entre colnias de seres unicelulares e organismos multi-celulares, provavelmente, se fez muito gradualmente. Ela se concretizou no momento em que os intervalos entre as clulas das colnias confluiram para constituir o espao extracelular do organismo, ou seja, no momento em que a estrutura das clulas passou a depender crucialmente da estrutura do espao entre as clulas. Temos a tendncia de imaginar este espao como vazio, no entanto, o organismo multicelular se constitui no instante em que sua estrutura passa a englobar tanto componentes celulares e relaes entre estes componentes, como tambm componentes deste espao que existe entre os componentes celulares.

Figura 15.1: A transio de organismos unicelulares para organismos -multi celulares dispondo de um espao extracelular passou por um estgio intermedirio

9
onde muitas clulas formavam colnias nas quais se intermitentemente "espaos de trocas" fechados para o meio. estabeleciam

A origem filogentica das molculas importantes na organizao do sistema imune pode estar relacionada a estas molculas que existem como componentes do meio extra-celular. Em outras palavras, os metazorios surgiram na deriva filogentica quando surgiram organismos compostos de muitas clulas delimitando um espao, o millieu interieur de Claude Bernard, de composio definida pela atividade celular e essencial para o desempenho das atividades biolgicas. Provavelmente, houve uma transio entre colnias formadas por muitos seres vivos unicelulares e organismos multicelulares. Nas colnias, os seres unicelulares usufruiam vantagens na proximidade pelo estabelecimento de um "espao de trocas". Este "espao de trocas", porm, era ainda aberto para o meio e sua estrutura, portanto, era apenas parcialmente determinada pela atividade das clulas da colnia. Esta situao muda quando se consuma o fechamento do espao de trocas, dando origem ao meio extracelular, cuja estrutura passa a ser especificada mais diretamente pela atividade celular do organismo (Figura 15.1 ). Pode haver ocorrido a formao transitria de "espaos de troca fechados" entre clulas da colnia antes de consumar o fechamento definitivo que deu origem ao espao extracelular. H resqucios deste processo no mecanismo de secreo dirigida de citocinas (ver Captulo 9 ), assim como na liberao de produtos txicos por macrfagos, clulas "natural killer" e clulas T citotxicas sobre clulas-alvo. Nestas situaes, os produtos ativos (citocinas, derivados de oxignio, radicais livres, etc) so liberados em "bolsos" formados entre as membranas de duas clulas e no ao redor de toda a clula. Isto ocorre na secreo de neurotransmissores e na secreo de autacides como a histamina na regulao da permeabilidade vascular. A atividade de hormnios endcrinos e algumas citocinas (como a IL-1), que atuam distncia quando lanados na circulao sangunea so, provavelmente, desenvolvimentos posteriores ligados ao aparecimento de um sistema circulatrio. Um aspecto importante na evoluo do espao extracelular foi o preenchimento de trechos deste espao por uma matriz acelular na qual as clulas se apoiam. H evidncias recentes de que o contato de clulas com esta matriz extracelular pode tanto desencadear atividades celulares como modular atividades desencadeadas por substncias (citocinas, autacides) embebidas na matriz. Estas interaes entre a matriz extracelular e clulas que infiltram uma dada regio so muito importantes nas reaes inflamatrias. No sistema imune, so importantes no apenas rgos e tecidos estruturados de maneira permanente, como tambm colees celulares que infiltram transitoriamente uma regio lesada. 15.8 De que processos derivou o sistema imune? Nos vertebrados contemporneos, h trs grandes grupos de molculas importantes na promoo das interaes celulares que constituem o sistema imune: a) b) c) Igs e TCRs ( os receptores clonais de linfcitos); molculas de adeso celular; citocinas.

As Igs e TCRs so usualmente vistos como os componentes mais importantes do sistema imune, como aqueles componentes que o definem. Isto porque o sistema descrito em termos de respostas imunes especficas. Nesta perspectiva, a presena de uma grande variedade de Igs e TCRs necessria para responder a uma variedade igualmente vasta de materiais estranhos ao organismo. So receptores voltados aleatoriamente para a recepo de materiais que o organismo contacte de maneira fortuita. Uma maneira de antecipar o imprevisvel. H outras interpretaes possveis para a origem desta diversidade. Segundo a que preferimos, a organizao do sistema imune no se apoia em acontecimentos fortuitos, mas sim nas interaes entre seus prprios componentes. Nesta interpretao, a participao de molculas de adeso celular e de citocinas no desencadeamento dos fenmenos imunolgicos tem uma carter essencialmente anlogo participao de Igs e TCRs. Como vimos, os processos imunolgicos encontrados nos vertebrados contemporneos requerem a articulao de dois mecanismos:

10
a) b) a gerao da diversidade clonal, onde operam os mecanismos de rearranjo/juno de segmentos gnicos e a ativao linfocitria com a retomada da proliferao do linfcito.

O sistema imune pode ter tido origem na sofisticao de mecanismos de interao celular nos quais um dado tipo celular coloca em sua membrana complexos moleculares que: a) b) so conjugados de molculas produzidas pela prpria clula com molculas captadas pela clula em seu meio e interagem com outros tipos celulares do mesmo organismo.

x r1 membrana CAM CAM metabolismo a

(a)

Figura 15.2: Mecanismos hipotticos de organismos primitivos similares aos mecanismos de "processamento e apresentao" dos organismos atuais. Um material externo (x) captado por um receptor (r1). Um segundo material, derivado do "processamento de (x), devolvido membrana celular (a). Molculas de adeso celular (CAMs) so tambm mostradas. Mesmo antes das associaes multicelulares, estas molculas provavelmente participavam de atividades celulares essenciais, como a locomoo e a endocitose. Estes processos esto esquematizados nas Figuras 15.2 a 15.4 . A Figura 15.2 sugere, simplesmente, que produtos da fagocitose de organismos unicelulares eram, em parte, devolvidos membrana, em conjugao com produtos da prpria clula. A Figura 15.3 sugere que alguns organismos unicelulares primitivos desenvolveram receptores (r2) para estes produtos "apresentados" por outras clulas. Nesta etapa, ficariam estabelecidas relaes de reciprocidade , nas quais as clulas usufruiriam de algum benefcio mtuo. Processos deste gnero podem ter sido importantes na gerao de organismos metazorios.

clula 2 CAM membrana CAM r1 r2 r2 a

x membrana CAM clula 1 CAM r1

r2

Figura 15.3: Mecanismos primitivos de interao celular semelhantes ao "processamento" e "apresentao". Quando asdesenvolvem receptores (r2) clulas para o conjugado (a), elas estabelecem interaes recprocas e simtricas que

11
poderiam resultar em benefcios mtuos. As molculas de adeso funcionariam como estabilizadoras destas unies transitrias. (CAMs)

Em etapas posteriores desta associao, tipos celulares poderiam se diferenciar pela perda de alguns receptores e aquisio de outros, como ilustrado na Figura 15.4 .

clula 2 membrana CAM CAM r1 r2 r2 a

meio extra-celular x sr1 x membrana CAM clula 1 CAM r3 r1 a r2

Figura 15.4: Tipo de receptor que poderia haver se diferenciado a partir dos mostrados na Figura 15.3. Algumas das molculas dos receptores aparecem agora em forma solvel (sr1) no espao extracelular, receptor (r3) para a mesma um e h na membrana. Molculas de adeso (CAMs) so tambm mostradas. Estes mecanismos, similares ao processamento/apresentao, podem haver sido importantes na constituio dos organismos metazorios, por estabelecerem elos de influncia recproca relevantes para a sobrevivncia de diversos tipos celulares que, com a deriva natural, se tornaram indispensveis manuteno da autopoiese. Destas conexes celulares, derivaram redes de regulaes de produes celulares e moleculares que constituram as diversas linhagens de organismos multicelulares. O sistema imune se originaria, portanto, no de processos de defesa, mas sim de processos primitivos de associao celular. A forma das molculas e imunoglobulinas de desenvolvimento mais recente na evoluo, como a IgG (uma forma em Y), tem implicaes curiosas. A presena de dois pontos de combinao nas regies variveis (nos "braos" do Y) possibilita a agregao de molculas s quais as imunoglobulinas se combinem. Por sua vez, a presena de um nico ponto de interao com receptores celulares, no segmento Fc (no "p" do Y), aumenta muito a afinidade das interaes de imunoglobulinas previamente agregadas por ligao a antgenos polimricos. Em outros termos, permite que as imunoglobulinas no-agregadas se dissociem facilmente dos receptores antes de exercerem aes sobre a clula (Figura 15.5 ). De molculas que, primitivamente, atuavam na membrana, durante interaes celulares, as imunoglobulinas se transformaram em molculas circulantes que ainda se encaixam firmemente em receptores celulares (por exemplo, de macrfagos) mas, para tanto, devem se polimerizar atravs da ligao a outras molculas. Por sua vez, a presena de um nico paratopo (monovalncia) nos TCRs e a natureza do mecanismos pelo qual so ativados os linfcitos T (pareamento com conjugados MHC-peptdeos) sugerem um detalhe importante na operao do sistema imune. Se a ativao via TCR-CD3 depende de processos de transduo da membrana para o citoplasma similares ativao via outros receptores , ela deve requerer o entrelaamento (cross-linking) dos complexos TCR-CD3 na membrana. Isto , pares de complexos TCRCD3 podem ser necessrios para a ativao. Por sua vez, isto implica que os peptdeos capazes de desencadear a ativao devem ser abundantes para que sejam apresentados com uma freqncia relativamente alta. Se tal mecanismo realmente opera assim, somente certos componentes do total de componentes apresentados pelas clulas poderiam chegar a ativar os linfcitos T. Esta hiptese seria consistente com o fato de que a maioria dos anticorpos naturais encontrados em organismos sadios so dirigidos para protenas do citoesqueleto (tubulina, actina, etc) muito abundantes em todas as clulas.

12

Figura 15.5: Abivalncia das molculas de Ig permite a formao de agregados com molculas de antgenos que expressam mltiplas cpias do mesmo epitopo. Isto facilita sua captao por receptores celulares, enquanto que molculas no combinadas, ou combinadas a epitopos univalentes, se dissociam facilmente dos receptores. 15.11 A origem das regies variveis A origem ao sistema imune dos vertebrados contemporneos requer o surgimento dos mecanismos somticos de gerao de diversidade por rearranjo/juno de segmentos gnicos. Como vimos, as molculas que expressam esta diversidade (imunoglobulinas e TCRs) pertencem a uma superfamlia que contm uma variedade de membros envolvidos em interaes celulares, tais como: a) b) c) produtos do MHC, diretamente envolvidos na "apresentao" de materiais "processados" a linfcitos T; molculas de membrana que funcionam como conexes estabilizadoras das interaes linfocitrias, como CD4 e CD8; N-CAM (Neural Cell Adhesion Molecules) molculas integradoras em clulas neurais.

Esta variedade de molculas atuando como protenas de membrana implicadas em interaes celulares sugere que tambm as imunoglobulinas e os TCRs so molculas que derivaram de processos mais primitivos de regulao de interaes celulares. significativo notar que as caractersticas distintivas de molculas de imunoglobulinas(Igs) e TCRs podem ser melhor identificadas pelas caractersticas dos segmentos J , que unem as regies variveis (regies V) s regies constantes (regies C), do que propriamente pelas caractersticas das regies variveis ou constantes. Os segmentos J no so anlogos, quer aos segmentos V, quer aos segmentos C e, no entanto, computadores que analisam seqncias peptdicas em grandes bancos de dados sobre protenas identificam seqncias J como diagnsticas da presena de Igs ou TCRs, enquanto que as seqncias V ou C no permitem isso. O aparecimento dos segmentos J na deriva evolutiva, portanto, pode ter sido o fator que criou a possibilidade de construir imunoglobulinas e TCRs. Os mecanismos nucleares de gerao da diversidade molecular podem ter surgido em um "pacote" contendo os mecanismos que impem a expresso clonal e a excluso allica, obrigando cada variedade molecular "inventada" a ser expressa em um clone celular. Em outras palavras, a proeza do rearranjo gnico talvez seja algo to drstico que a clula s poderia arrisc-la uma vez. Mas a formao de stios combinatrios pelo pareamento de duas regies variveis distintas aumenta de tal forma as possibilidades de variao molecular que o processo finalmente se fixou em molculas com duas cadeias rearranjadas. Isto ocorreu para Imunoglobulinas e TCRs. Convm notar que ocorre uma grande perda de clulas durante a linfopoiese, tanto de linfcitos B como T, correspondendo fase dos rearranjos gnicos. O aparecimento de molculas expressas clonalmente no cenrio somtico, um fenmeno que caracteriza a emergncia dos linfcitos, constituiria, evidentemente, um risco para o organismo, se no surgissem embutidas, no processo, alas protetoras contra estas prprias clulas. Os linfcitos, afinal, so inventados com receptores de membrana gerados por um mecanismo que , em parte, aleatrio. Os receptores no tm destinatrio definido. Desde que os linfcitos so potencialmente capazes de secretar

13
substncias biologicamente muito ativas e, principalmente, podem se multiplicar extensamente, a possibilidade de que eles causem distrbios srios na organizao do corpo evidente e ameaadora. A maneira pela qual esta ameaa contornada indica novamente que o passado evolutivo das molculas de Ig e TCR est ligado s interaes celulares, a redes de processos de regulao de produes celulares e moleculares. O organismo se protege criando a necessidade de interaes celulares para que a diferenciao dos linfcitos emergentes prossiga. Assim, a maioria dos linfcitos emergentes tem vida curta e o prolongamento da existncia da minoria restante depende de interaes com clulas similares previamente ativadas no mesmo organismo. O encontro com estas clulas ativadas, semelhana de uma "socializao", garante que o prosseguimento da vida linfocitria no se far de maneira independente, revelia de outros acontecimentos em curso no mesmo organismo. A patogenia imunolgica, os processos patolgicos em que fenmenos imunolgicos esto envolvidos de maneira importante, derivam de circunstncias nas quais a interdependncia essencial dos processos imunolgicos contornada e circuitos relativamente independentes de ativao linfocitria podem ser estabelecidos. Estas idias explicam o efeito teraputico de injees de imunoglobulinas colhidas de indivduos normais e sugerem ainda que modificaes na dieta podem representar uma forma importante de interveno imunolgica (ver Captulo 18,"O emergir da patologia"). 15.12 Novamente, Metchnikoff Na histria da Imunologia, existe um conjunto de idias que guardam semelhanas e contrastes com as que propomos: as idias de Metchnikoff sobre a inflamao, a fagocitose e sua relao com a nutrio. Por um lado, as idias de Metchnikoff, na sua tentativa de relacionar as atividades imunolgicas a fenmenos biolgicos bsicos como a nutrio, a embriognese e a metamorfose, so muito bem-vindas. Por outro lado, na sua perspectiva, as atividades imunolgicas ainda so vistas como uma "funo" defensiva, derivada da "funo" de nutrir o organismo. Assim como a fagocitose encontrada nos seres unicelulares pode ser encarada como a forma mais primitiva de nutrio, ela tambm pode ser encarada, como o prprio Metchnikoff por vezes assinalou, como um aspecto dos processos constitutivos, um processo na rede de processos que, naquela clula nica, a mantm em existncia. Uma descrio funcional, a outra constitutiva. Em animais metazorios sem tubo digestivo, fagcitos captam materiais do meio, os processam e os apresentam s demais clulas (Figura 15.6 ). Estes fenmenos podem ser descritos como uma distribuio de nutrientes ou como um detalhe das relaes intercelulares que mantm a integridade do organismo metazorio. Uma descrio funcional, a outra constitutiva. perfeitamente legtimo descrever mecanismos celulares apontando para sua importncia na nutrio do organismo ou defesa contra agresses por invasores externos. O domnio das interaes do organismo com presas e predadores, porm, um domnio diferente do domnio de sua estrutura e organizao, mesmo quando as presas e os agressores so microscpicos e descrevemos mecanismos celulares e moleculares destes processos. No domnio da estrutura e da organizao do organismo, nosso interesse esclarecer a rede de regulao de processos de produes celulares e moleculares que constitui o organismo como tal. Para este esclarecimento, no nos ajuda saber que este ou aquele detalhe desta rede desempenha esta ou aquela funo til sobrevivncia do organismo.

intestino

unicelular

multicelular sem intestino

multicelular com intestino

Figura 15.6: A evoluo dos mecanismos imunolgicos, Metchnikoff. ( segundo A) Nutrio por fagocitose em seres unicelulares. mesmo processo em B) O ( organismos multicelulares ainda desprovidos de um tubo digestivo. Clulas fagocticas digerem os alimentos oferecem s demais clulas. Em e os C) (

14
organismos dotadosum tubo digestivo, os macrfagos permaneceriam adaptados de s funes de defesa do corpo. A abordagem de Metchnikoff, portanto, tinha o mrito de permanecer ligada s razes biolgicas do fenmeno da imunidade, mas incorria no equvoco comum de confundir domnios de descrio, relacionando fenmenos definidos no domnio da estrutura do organismo (a fagocitose) com fenmenos definidos no domnio de suas interaes (a nutrio).

1 16. Anlise das crenas fundadoras

_____________________________ 16.1 Crenas herdadas do perodo fundador A Imunologia foi criada como um ramo da Bacteriologia, no final do sculo XIX, com o objetivo de criar vacinas e soros especficos para a proteo contra doenas infecciosas. Surgisse ela hoje e seria considerada uma forma de biotecnologia . Neste mesmo perodo, a Medicina atravessava uma profunda revoluo conceitual que, ao mesmo tempo, validou e foi validada pela Imunologia (ver "Origens remotas"). A Imunologia adquiriu, assim, uma importncia cientfica muito grande devida s suas relaes com a Medicina e s aspiraes da sociedade por vitrias sobre a doenas infecciosas. As noes mais bsicas da Imunologia dependem de crenas surgidas neste perodo fundador, segundo as quais podemos admitir, numa seqncia lgica: - as principais doenas humanas so infecto-contagiosas; - as doenas infecto-contagiosas tm causas especficas (isto , cada doena depende do contgio com um germe); - cada germe induz a formao de anticorpos especficos que, ao reagirem com o germe e seus produtos, neutralizam a infeco e restauram a sade; -a imunidade infeco depende, basicamente da quantidade e qualidade dos anticorpos anti-germe; - estes anticorpos protetores podem ser induzidos por vacinas , tornando possvel preveno das doenas infecciosas.

Embora criadas ao fim do sculo XIX, estas crenas so ainda muito atuais e amplamente aceitas. Enunciadas desta maneira, elas simplificam (reduzem) o problema de compreender as doenas infecciosas. Fica sugerido, embora no afirmado, que cada germe exibe um antgeno, ou alguns poucos antgenos mais importantes, que so os responsveis por sua patogenicidade. Mais que isto, a proteo contra a doena causada pelo germe dependeria da formao de alguns poucos tipos de anticorpos dirigidos contra os estes antgenos. Por um lado, esta explicao torna legtima a concentrao dos recursos disponveis na pesquisa de novas vacinas, o que no chega a ser desastroso porque, embora raramente seja bem sucedida, esta pesquisa requer muita pesquisa bsica. Por outro lado, estas crenas implicam em uma viso metafrica da reatividade imunolgica, que repercute sobre a pesquisa imunolgica bsica, autorizando um ensino de Imunologia que as perpetua e impede que elas sofram modificaes importantes. Estas crenas permanecem inalteradas porque modific-las envolveria uma modificao radical no conceito de doena, no papel da Medicina e de suas relaes com a pesquisa bsica. Envolveria tambm uma reavaliao importante da natureza da atividade imunolgica. Enfim, uma modificao muito grande, a que poucos estariam dispostos. Por isto importante avaliar at que ponto o campo inteiro da Imunologia foi e permanece dominado por suposies que no foram substanciadas, no foram desafiadas ou sequer foram examinadas como suposies. O problema das vacinas, portanto, percebido como o problema mais importante da Imunologia. A pesquisa imunolgica financiada porque, direta ou indiretamente, ela deve contribuir para novos mtodos de preveno e tratamento de doenas, principalmente na forma de vacinas. De acordo com o EPI (Expanded Program of Immunization) da Organizao mundial de Sade, uma vacina ideal para uso humano deveria ser:: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. barata; segura, sem riscos de reaes adversas; extremamente efetiva (imunizando 90-100%) dos receptores; duradoura, induzindo proteo por toda a vida; estvel, no necessitando refrigerao; eficaz em dose nica ou compatvel com outras vacinas; simples de aplicar, administrada por uma via no invasiva (oral, nasal); utilizvel em perodo bem prximo ao nascimento (peri-natal).

2
Em suma, a vacina ideal seria aquela que, com uma nica aplicao ao nascimento, conferisse proteo para mltiplas doenas por toda a vida. A vacina ideal no existe. Mesmo as vacinas usadas rotineiramente na primeira infncia preenchem apenas alguns dos requisitos acima. Apenas a o BCG (tuberculose) e a vacina anti-poliomielite podem ser aplicadas logo ao nascimento. A vacina anti-sarampo s deve ser aplicada aos 12-16 meses de idade quando j desapareceu a maioria dos anticorpos maternos que neutralizariam o vrus atenuado e tornariam a vacina inefetiva No terceiro mundo, no entanto, 30-50% das crianas nesta faixa etria j haveriam contrado o sarampo. A vacinao anti-plio e a trplice (ttano, difteria, coqueluche) requerem muitas doses e a experincia sanitria indica que 20% das crianas no voltam para receber a dose seguinte de vacina. Existem, na verdade, cerca de 16 vacinas efetivas usadas regularmente na preveno de doenas infecciosas humanas. Cerca de 10 outras so usadas com graus variveis de sucesso, como a vacinao anti-menigoccica ou, em casos espordicos, como o caso da vacina anti-rbica. Includas nas vacinas obrigatrias para a infncia, esto vacinas que, evidentemente, trouxeram um grande benefcio sociedade. Como exemplo, estimava-se que, na ausncia de programas regulares de vacinao, em 10 anos, ocorreriam 25.000 casos de poliomielite no Brasil; destes, cerca de 2.500 casos seriam letais. Com o programa de vacinao oral anti-poliomielite, nos ltimos 10 anos, ocorreram cerca de 2.500 casos no pas, com cerca de 160 mortes. Foram poupadas, portanto, as vidas de mais de duas mil crianas e a invalidez de muitos milhares de outras. No se trata aqui, portanto, de argumentar contra a utilizao vacinas que se provaram efetivas, mas sim de examinar com mais detalhe a repercusso que a idia de imunoproteo contra infeces tm na Imunologia, como uma idia fundadora do raciocnio imunolgico.

* 16.2 Sociologia histrica do conhecimento cientfico Existem convices ainda mais bsicas sobre a natureza da realidade e o papel da atividade cientfica, nas quais se apoiam as crenas da Imunologia. Socilogos da Escola de Edinburgo assim descrevem as crenas bsicas dos cientistas: " O ponto de vista ortodoxo (sobre a cincia) afirma que: - a atividade cientfica envolve a interao de mentes isoladas com um mundo material essencialmente passivo; - normas bem especificadas (o mtodo cientfico) controlam e dirigem esta interao e a aplicao sistemtica destas normas leva construo gradual de um corpo de conhecimentos cada vez mais detalhado e correto sobre a natureza; - a Cincia cumulativa e epistemologicamente nica, j que autnoma, atemporal e independente do lugar onde exercida; -o conhecimento gerado determinado pelo mundo fsico e isto se d porque as normas do mtodo cientfico, por assim dizer, protegem a pureza e a objetividade do conhecimento contra a contaminao por fatores extra-lgicos. Segundo essa perspectiva, outras expresses culturais que no partilham deste desvinculamento, como a Arte, so parcialmente determinadas por fatores estranhos sua dinmica interna. No caso da Cincia, s quando houver violao do mtodo cientfico (imparcialidade, neutralidade emocional, universalismo, etc) que se produzir um conhecimento socialmente comprometido e, por conseguinte, falso. O caso Lysenko seria um exemplo claro disto ** . Na Cincia normal, "sadia", os fatores sociais podem, quando muito, influir na direo e no ritmo de desenvolvimento da pesquisa. Por exemplo, na

* Esta seo (16.2) foi extrada de texto no publicado de Geraldo M. Florsheim .

** Trofin Denisovich Lysenko, geneticista sovitico, simptico s idias de Lamarck, que dominou a agricultura sovitica nos anos 30, cujas idias so citadas como exemplo da interferncia do Estado na atividade cientfica. Cientistas soviticos simpticos ao Mendelismo foram perseguidos nesta poca.

3
Revoluo Cientfica, interesses militares e em navegao, exteriores ao desenvolvimento intrnseco da Filosofia Natural, teriam, em grande parte, determinado o tipo de questo estudada e, assim, orientado a atividade cientfica para determinadas reas de investigao. Mas os fatores sociais no afetam o contedo conceitual da Cincia, o qual, como j foi dito, determinado pela prpria natureza do mundo fsico, quando este investigado por mentes imparciais" . De acordo com Bloor, h duas caractersticas importantes subjacentes a esta concepo das Cincias: "1. Ela reflete uma posio teleolgica, no sentido que considera que a mente humana exibe uma tendncia natural em direo verdade e que o processo de conhecimento se dar desde que nosso intelecto se desvencilhe dos obstculos que se contrapem a este movimento espontneo. A histria da Cincia , ento, vista como uma progresso inexorvel em direo verdade." Barnes caracteriza, a este respeito, a chamada "tese da heterogeneidade explicativa": na histria da Cincia, o que preciso explicar so os supostos desvios desta marcha natural em direo ao correto, explicar porque determinados cientistas capazes no "viram" qual o caminho adequado a escolher. Por exemplo, porque Priestley recusou a teoria de Lavoisier? As decises acertadas dos cientistas do passado, isto , as decises que os colocaram na trilha que conduziu ao nosso conhecimento cientfico atual, essas no precisam ser explicadas, pois na situao histrica o natural, o normal, era justamente adot-las. Isto dispensaria, portanto, ulteriores justificativas. Se Lavoisier deu um passo racional, natural ao propor a teoria do oxignio, a qual vemos como verdadeira, sua ao no precisaria ser explicada em termos de fatores sociolgicos ou psicolgicos, como acontece com a opo de Priestley recusar a teoria do oxignio. A segunda concepo de Bloor que: "2. Esta viso politicamente conservadora. O que considerado natural para a mente humana reflete o status quo em termos de moralidade, organizao social, etc e isto no precisa ser explicado porque normal. O peso da justificativa impe-se apenas aos desvios desta ordem natural, a tudo aquilo que no se coaduna com a perspectiva vigente, legitimada, como se esta estivesse automaticamente dispensada, por sua condio de natural, do escrutnio analtico." 16.3 Justificativa de uma viso alternativa da Imunologia Pelo que acabamos de expor, o ponto de vista que defendemos um desvio do pensamento "natural" em Imunologia e, como tal, precisa ser justificado. Pela mesma ptica, a perspectiva vigente, encarada como "a verdade cientfica", est dispensada de justificativas. Por exemplo, na viso tradicional, no necessrio explicar porque as vacinas funcionam, pois bvio e natural que elas funcionem. No se discute porque, aps um sculo de pesquisas, no conseguimos produzir mais que 16 vacinas efetivas para uso humano embora existam mais de 200 doenas infecciosas que gostaramos de prevenir. No nosso entender, as vacinas funcionam por mecanismos ainda obscuros, cada vacina funciona de uma maneira peculiar e explicar como "as vacinas", em geral, funcionam um problema mal colocado e de difcil soluo. Por outro lado, parece fcil entender porque fracassou a maioria das tentativas de desenvolver novas vacinas. Ocorre ainda que, pela ptica tradicional, discusses como a que estamos inciando aqui no fazem parte da atividade cientfica genuina e so rotuladas, pejorativamente, de "filosficas" ou demasiadamente "tericas", insinuando-se que elas so improdutivas e que interessam apenas a quem no consegue ou no quer ir para a bancada do laboratrio produzir evidncias "reais" do que defende. Os cientistas genunos, como comenta Barnes, acreditam que trabalham com o que "real" e "objetivo". No entanto, todo ato experimental , necessariamente, precedido de conjecturas sobre a natureza da realidade, conjecturas que orientam as decises de como manipul-la. Na perspectiva ortodoxa, estas pressuposies existem, mas no so explcitas. Em nosso ponto de vista, as preferncias ideolgicas e crenas que, visvel ou invisivelmente, guiam a formulao de hipteses e a montagem de experincias so parte inseparvel da criao de resultados experimentais.

16.4 As principais doenas humanas so infecto-contagiosas? O sistema imune evoluiu para nos defender destas doenas? Eis aqui um trecho das concluses de Thomas McKeow em uma anlise recente (In The Origin of Human Diseases ) sobre a origem das doenas humanas: " No mundo atual a falta de sade se deve menos falta de recursos que a desigualdades na sua distribuio entre naes e dentro de cada nao". Nas palavras de Behar: "Um organismo debilitado muito menos resistente aos ataques de microorganismos invasores. O sarampo comum e a diarria, doenas no graves e passageiras em crianas bem nutridas, so usualmente srias e freqentemente fatais para crianas cronicamente mal nutridas. Antes da existncia das vacinas, praticamente todas as crianas em todos os pases contraam sarampo, mas ocorriam 300 vezes mais mortes devidas ao sarampo nos pases pobres. Isto no era devido a uma maior virulncia do vrus, nem precariedade do atendimento mdico, mas sim ao fato de que, nas comunidades mal nutridas, o vrus ataca um hospedeiro que, por causa da m nutrio, menos capaz de resistir a ele. O mesmo ocorre com a diarria, as infeces respiratrias, a tuberculose e muitas outras infecces s quais as populaes mal nutridas pagam um nus pesado e desnecessrio." Neste mesmo trabalho, se conclui que 57% das mortes de crianas abaixo de 5 anos era devida direta ou indiretamente m nutrio. A fome o problema de sade mais grave do terceiro mundo, seguida de perto pelas ms condies sanitrias de habitao. Boa alimentao, gua e comida limpas resolveriam a maior parte destes problemas sem qualquer modificao adicional em termos de medidas mdicas ou cientficas. Estas afirmaes sugerem que: no organismo bem nutrido, com acesso a gua e alimentao limpas, os mecanismos "naturais" de imunidade so suficientes para conter a ocorrncia ou limitar a gravidade da maioria das doenas infecciosas. importante salientar que o controle das doenas infecciosas, por exemplo, pela vacinao de crianas, teria seu maior impacto social no terceiro mundo onde ocorrem 86% de todos os nascimentos do planeta e 96% de todas as mortes de crianas. McKeow sugere ainda algo surpreendente: que as doenas infecciosas agudas foram fatores de pouca importncia na maior parte da histria humana e, portanto, no tiveram importncia evolutiva. Pelas estimativas atuais, 10 mil anos representam cerca de 1% da histria humana. As doenas infecciosas adquiriram relevncia apenas nos ltimos 5 mil anos, quando surgiram as cidades permitindo a aglomerao de grandes massas humanas . Fenner assinala que: "Em contraste com outros tipos de doenas (genticas, traumticas, neoplsicas), as doenas infecciosas dependem do contato, direto ou indireto, entre indivduos da mesma espcie ou nas zoonoses, entre indivduos de espcies diferentes. Por esta razo, as organizaes sociais, particularmente o tamanho das comunidades, o grau e a freqncia dos contatos entre indivduos da mesma comunidade ou de comunidades diferentes desempenham um papel significativo na determinao da natureza e da prevalncia das doenas infecciosas humanas."

5
Em um estudo de doenas em sociedades primitivas, Black concluiu que apenas doenas crnicas podem persistir em comunidades pequenas. Isto limita a importncia das doenas infecciosas agudas responsveis pelas epidemias a um pequeno perodo da histria da humanidade: os ltimos 5 mil anos. Assim sendo, a afirmao de que "as principais doenas humanas so as doenas infectocontagiosas", embora verdadeira em um sentido quantitativo, adquire tambm um sentido social. Estas doenas ocorrem principalmente em funo de desigualdades sociais e no como conseqncia direta da existncia de microorganismos patognicos ou de uma suscetibilidade "natural" dos seres humanos agresso pelos mesmos. Isto deve ser levado em conta ao considerarmos o papel da Medicina, em geral, e da Imunologia, em particular, no controle destas doenas. Por sua vez, do ponto de vista biolgico, srias dvidas so levantadas sobre a "presso seletiva" que haveria favorecido a evoluo do sistema imune para nos defender de doenas infecciosas agudas. A crena de que a prevalncia e a gravidade de cada doena infecciosa depende principalmente dos microorganismos e vrus que as produzem precisa ser qualificada. A diarria e o sarampo (com suas complicaes respiratrias), que so as principais causas de mortalidade no mundo, so doenas brandas em crianas bem nutridas. Mesmo em comunidades pobres da China, a mortalidade infantil comparvel da Sucia, porque as crianas so bem nutridas, tm acesso a gua e alimentos limpos.

16.5 As doenas infecto-contagiosas tm causas especficas? Cada doena depende do contgio com um dado germe? Assim colocada, a idia de contgio parece se resumir coliso do organismo com um determinado germe patognico. Omite-se a idia de que a grande maioria dos microorganismos com os quais os organismos metazorios convivem no patognica. Omite-se que a dose infectante (o nmero de germes no inculo) importante na instalao e na severidade da infeco e que o contato com uma dose infectante insuficiente muitas vezes conduz eliminao do germe, outras vezes conduz ao estado de "portador so", no qual o germe no eliminado mas no induz a doena. Omite-se ainda a idia de infeces "oportunistas", que so aquelas envolvendo germes que usualmente vivem em comensalismo pacfico com o organismo, que ocorrem quando h uma baixa - no especificada e, na maioria dois casos, no compreendida, da "resistncia" do corpo. A maioria das pessoas que morrem aps serem politraumatizadas em acidentes de trnsito (excluindo-se aquelas com leses cranio-enceflicas) sucumbe com infeces por germes "oportunistas". Nas doenas periodontais mais comuns, no h germes especficos causando as leses sndo que elas podem ocorrer em pessoas aparentemente sadias. Mesmo na AIDS, uma preocupao central da Imunologia atual, existem correntes discordantes que no atribuem a imunodeficincia diretamente infeco pelo HIV, como discutiremos na seo adequada. H quem considere o HIV como um co-fator e, mesmo, quem o considere um vrus relativamente incuo. 16.6 A imunidade infeco depende, basicamente, da quantidade e qualidade dos anticorpos anti-germe formados? Assim apresentada, a imunidade parece ser uma questo dependente mais de mtodos de imunizao que assegurem a formao de anticorpos contra germes especficos, que de higiene e de uma alimentao adequada. A idia de que os microorganismos e seus produtos induzem a formao de anticorpos especficos responsveis pela resistncia s infeces tambm precisa ser qualificada. Assim apresentada, esta idia transmite a falsa noo de que: o germe induz a formao de uns poucos tipos de anticorpos especficos dos quais depende a resistncia contra a infeco. Esta noo falsa de vrias maneiras: 1. Ela falsa quando atribui a "uns poucos tipos de anticorpos especficos" a reatividade do organismo a um germe. O plasma "normal" contm cerca de 10 mg/ml de imunoglobulinas, o que representa cerca de 10 milhes de bilhes de molculas de imunoglobulinas (anticorpos) por mililitro.

6
Portanto, se existissem 10 milhes de tipos diferentes de anticorpos, ainda assim existiriam 1 bilho de molculas de cada um destes tipos de molculas em cada mililitro de plasma. "Naturalmente" capaz de reagir a 10 milhes de tipos diferentes de determinantes antignicos, o corpo "normal" deveria estar preparado para o que der e vier. Alguns destes anticorpos devem reagir com pelo menos um dos mltiplos detalhes estruturais presentes na superfcie de qualquer germe invasor. Em outros termos, tradicionalmente, pensamos na proteo como resultante de um aumento na concentrao de anticorpos especficos formados aps um primeiro contato, mas o organismo j possui muitos anticorpos "naturais" capazes de reagir com o germe antes deste contato. Seja qual for o germe. Em segundo lugar, sabemos que a "perturbao" desencadeada nas operaes do sistema imune pela infeco pode levar produo de muitos anticorpos que no reagem com o germe ou seus produtos. Estes anticorpos estariam, provavelmente, envolvidos nas "compensaes" que o sistema executa para readquirir sua estabilidade dinmica. 2. Essa idia tambm falsa quando nos faz supor que os anticorpos "especficos" so capazes de reagir exclusivamente com o germe a que aparentemente se dirigem. Na verdade, os anticorpos reagem com detalhes estruturais (epitopos) das molculas do microorganismo de dimenses relativamente pequenas e reagiro igualmente com outras estruturas que exibam estes detalhes ou detalhes semelhantes, o que, tradicionalmente, se denomina "reatividade cruzada". H evidncia de que os anticorpos formados contra os germes reagem tambm com molculas do prprio organismo. H ainda um segundo aspecto muito importante neste processo: o organismo forma anticorpos similares a estruturas do germe, alm de outros complementares s mesmas. A formao de anticorpos especficos (Ac-1) usualmente resulta no aparecimento de anti-anticorpos (anticorpos anti-idiotpicos, Ac2). Como num jogo de espelhos, alguns destes anti-anticorpos parecem exibir "cpias" dos determinantes para os quais se formaram os anticorpos Ac-1. Na linguagem imunolgica, alguns anticorpos Ac-2 so imagens internas dos determinantes com os quais o Ac-1 reagia. A formao de anti-anticorpos indissocivel de idias mais gerais sobre a organizao do sistema imune, tais como a Teoria da Rede Idiotpica. A populao de anticorpos naturais, que muito vasta, contm no apenas anticorpos capazes de reagir com virtualmente qualquer determinante antignico, mas tambm com anticorpos que exibem idiotopos semelhantes a estes determinantes (suas imagens internas). Em outras palavras, os anticorpos naturais reagem uns com os outros; um material externo que reaja com alguns anticorpos, por assim dizer, est sendo "confundido" com outros anticorpos tambm ali presentes. 3. Esta idia ainda falsa quando sugere que os mesmos "poucos anticorpos especficos" so formados em resposta a um dado epitopo. Os anticorpos que reagem com um dado epitopo no apenas so mltiplos, mas tambm cambiveis no decorrer da resposta imune. Os anticorpos formados em um segundo contato com o mesmo epitopo so diferentes, possuem idiotipos diferentes dos anticorpos formados no primeiro contato. Organismos geneticamente diferentes formam anticorpos diferentes para o mesmo epitopo e organismos geneticamente idnticos (animais isognicos) formam anticorpos diferentes porque tm histrias diferentes e, nelas, desenvolveram parcelas diferentes de seu potencial, entrelaaram suas clulas linfides com traados diferentes. 16.7 A defesa contra infeces depende, basicamente, da formao de anticorpos especficos? Os anticorpos, afinal, no so to "especficos" assim. Como vimos antes, sua especificidade, por vezes to sofisticada, depende da maneira de realizar as observaes em nossas explicaes cientficas. Examinemos a idia de que os anticorpos so os agentes primrios de defesa contra infeces. H muitas formas "inespecficas" de resistncia importantes na defesa contra infeces. A grande maioria dos animais constituda por criaturas que rotulamos de invertebrados . Considerando o nmero de espcies animais, encontramos cerca de 6% de protista e 4% de vertebrados. Os invertebrados constituem 90% de todas as espcies animais. Constituindo a grande maioria dos animais, os invertebrados no utilizam processos imunolgicos de defesa contra infeces, pois no sintetizam as molculas com regies variveis (anticorpos e receptores linfocitrios) indispensveis organizao do sistema imune.

7
Mesmo assim, eles se defendem perfeitamente bem de infeces com mecanismos que rotulamos de "inespecficos". Plantas utilizam ainda outros tipos de mecanismos defensivos. H um relato recente sobre a grande eficcia da circunciso realizada no perodo perinatal em reduzir a incidncia de infecces urinrias em berrios. Estas infeces podem ser graves e freqentemente deixam seqelas que compromentem a sade at a vida adulta, de forma que h um grande interesse em evit-las. O Sociedade Americana de Pediatria chegou a contemplar a possibilidade de circuncisar todos os meninos americanos ao nascer. Surgiu, porm, um trabalho de pesquisadores suecos que pergunta, irnicamente, em seu ttulo: "Seria o prepcio um erro da natureza?". E prossegue para argumentar que: 1. 2. as primeiras bactrias a se instalar nas mucosas do recm-nascido dificilmente so de l removidas por outras bactrias; a grande maioria das crianas nasceu, e ainda nasce, em condies no asspticas. No parto de ccoras, ainda muito utilizado, a parturiente geralmente defeca pelo esforo da expulso do feto; a criana se contamina com a flora intestinal materna e isto, normalmente, no resulta em infeces urinrias; no parto horizontal realizado em condies asspticas e nos berrios, as bactrias que se estabelecem na mucosa do recm-nascido so espcies exticas, muitas vezes mutantes resistentes a antibiticos; as infeces urinrias que podem ser efetivamente evitadas pela circunciso so infeces com esta flora bacteriana extica.

3.

4.

O trabalho conclui que o estabelecimento da flora bacteriana do recm-nascido algo importante demais para ser deixado ocorrer ao acaso e enfatiza a importncia da presena da me para o estabelecimento destas infeces benignas. H evidncias de que as atividades imunolgicas so essenciais na defesa dos vertebrados. Em situaes onde existe um estado de imunodeficincia induzido por drogas, radiaes ou ainda associado a defeitos congnitos do sistema imune, a atividade imunolgica tem sua competncia restaurada pela transferncia de componentes do sistema imune. Em sndromes de imunodeficincia congnita B, nas quais crianas nascem incapazes de formar anticorpos (imunoglobulinas) e so sujeitas a infeces graves e freqentemente letais, injees peridicas de gamaglobulina humana (a frao do plasma que contm os anticorpos) melhoram dramaticamente sua resistncia a infeces. Por um lado, este fato mostra que as imunoglobulinas so importantes na proteo. Por outro lado, importante notar que tais crianas so mais suscetveis a apenas certos tipos de infeces, principalmente as causadas por cocos piognicos (estafilo e estreptococos); elas resistem a outras infeces por vrus e fungos; podem ser vacinadas contra o sarampo, por exemplo, e rejeitam transplantes de pele em prazos normais. Alm disso, um defeito grave na formao de imunoglobulinas causa distrbios em muitos setores do sistema imune como, por exemplo, na gerao dos linfcitos T e na atividade de macrfagos. No se pode, portanto, atribuir a baixa resistncia exclusivamente ausncia de anticorpos especficos. O sistema imune, como um todo, certamente contribui na resistncia contra infeces, mas isto no equivale a aceitar, sem crticas, que a defesa depende da formao de anticorpos especficos. Podem anticorpos protetores ser induzidos por vacinas, tornando possvel a preveno das doenas infecciosas? Quando a Imunologia surgiu, junto com uma revoluo nas teorias mdicas, ela surgiu como uma revoluo na arte de curar e prevenir doenas, no como uma conseqncia das teorias mdicas. Fenmeno totalmente inexplicvel na poca em que surgiu e que continua, em grande parte, inexplicado, a proteo imunolgica contra doenas infecciosas foi o evento mdico de maior importncia de todos os tempos. No foi a Imunologia que criou as vacinas: a Imunologia foi criada para explicar as vacinas e inventar outras. Como j mencionamos, a Organizao Mundial de Sade reconhece cerca de 16 vacinas efetivas para a Medicina humana. Destas, a maioria das vacinas anti-bacterianas foi inventada logo no perodo fundador, ainda no sculo XIX.; a maioria das vacinas anti-vrus, nos anos 50, logo aps a inveno de mtodos de cultura de tecidos, que permitiram o cultivo de vrus. No surgiram muitas vacinas antibacterianas no sculo XX, nem muitas vacinas anti-vrus aps a dcada 50. No existem vacinas 16.8

8
plenamente eficazes contra infeces por parasitas (protozorios, fungos ou helmintos) a despeito de um enorme esforo de pesquisa para consegu-las. Enfim, as vacinas efetivas so raras. Convm examinar as vacinas que so realmente efetivas. O que as faz funcionar? Em primeiro lugar, trata-se de um grupo de vacinas com aes muito heterogneas. Algumas so dirigidas contra exotoxinas, como a toxina tetnica e a diftrica, venenos poderosssimos produzidos por bactrias que no chegam a invadir o corpo e precisam se difundir pelo sangue, em pequenas quantidades, desde a "porta de entrada" at os rgos onde promovem as leses (por exemplo, o sistema nervoso no caso da toxina tetnica). Estas infeces representam mais um envenenamento (uma intoxicao) que uma infeco. Nestes casos, as vacinas protegem porque desencadeiam a produo de anticorpos neutralizantes (antitoxinas) que se ligam s toxinas em sua passagem pelo sangue e impedem que elas atinjam seus alvos nos tecidos. Outras so vacinas contra viroses com duas caractersticas em comum: um perodo de incubao longo (vrios dias a semanas) e uma fase tardia em que, semelhana das exotoxinas, o vrus se dissemina pelo sangue. Esto includas neste grupo viroses da infncia e a poliomielite. Nestas infeces, tanto o perodo de incubao longo quanto a passagem tardia pelo sangue condicionam a formao de anticorpos neutralizantes que agem na circulao, semelhana das antitoxinas, desviando os vrus de seus alvos nos tecidos. O prottipo das vacinas bem sucedidas, a vacinao anti-varilica, que possibilitou, inclusive, a erradicao completa da varola do planeta, devia seu sucesso a um raro conjunto de caractersticas: a vacina conferia uma imunidade duradoura; no existiam formas crnicas ou pouco evidentes de varola, tornando sua notificao mais simples; no existiam reservatrios de vrus em outros animais.

O conceito de vacinas (imunizao protetora) domina o pensamento imunolgico e, como vimos, h fortes motivos histricos para que assim o seja. Alm disto, nos ltimos anos houve um enorme progresso no conhecimento sobre aspectos celulares e moleculares do sistema linfide que reacendeu esperanas de um novo perodo de sucessos, como o que ocorreu no final do sculo XIX e mudou a face da Medicina. Tcnicas de biologia molecular tm aberto novas possibilidades de produzir antgenos imunizantes . A inveno da vacina contra a hepatite-B um claro exemplo de que estes progressos podem, eventualmente, ser alcanados. H progressos importantes na busca de uma vacina contra a schistosomose. O conhecimento da estrutura molecular dos antgenos de parasitas possibilitam agora a sntese de polipetdeos contendo estruturas que talvez sejam importantes na infeco. Um grande esforo foi desenvolvido nesta linha para obteno de uma vacina contra a malria, uma das doenas infecciosas mais importantes. Muita importncia tem tambm sido dada a uma vacina contra a AIDS e a processos imunolgicos de controle da fertilidade. Nenhum destes esforos tem sido plenamente bem sucedido. No caso da AIDS, existem mesmo sugestes de que a vacina no seja um objetivo sensato a perseguir, pois alguns dos anticorpos formados contra o virus podem, por si prprios, interferir nos mecanismos de ativao linfocitria e causar imunodeficincia (ver Captulo 17 ,"O emergir da patologia").

16.9 Concluses Pelo exposto, as crenas bsicas da Imunologia precisam ser reavaliadas, desde que a ocorrncia de doenas infecciosas agudas depende, fundamentalmente, de fatores demogrficos e da nutrio acessvel populao. A idia de anticorpos especficos nos defendendo contra germes especficos envolve crenas parcialmente errneas tanto sobre as caractersticas das infeces quanto sobre a especificidade dos processos imunolgicos. Destas crenas bsicas da Imunologia derivam srios entraves ao progresso da Imunologia bsica, incluindo dificuldades em desenvolver novos mtodos de interveno imunolgica. pouco provvel que exista um nico mecanismo fundamental de proteo imunolgica que possa ser acionado por "vacinas". As vacinas atualmente utilizadas para proteo contra doenas humanas certamente no operam todas pelos mesmos mecanismos. A maioria delas foi inventada empiricamente e cada uma delas opera por um mecanismo particular. No h, portanto, garantia de que novas vacinas possam ser desenvolvidas. Eis aqui Bloom em um comentrio recente sobre o problema:

9
"Embora antgenos de virtualmente todos os agentes patognicos j tenham sido clonados e os epitopos ativos para clulas T e B j mapeados para vrios antgenos, h muito poucos agentes patognicos para os quais o mecanismo de proteo compreendido. Nem est claro quais antgenos so necessrios para provocar tais respostas protetoras". H ainda complicaes inesperadas. H alguns anos atrs, uma tentativa de vacinar a populao norteamericana contra a gripe espanhola (swine flu) foi interrompida logo no incio pelo aparecimento inexplicado de distrbios neurolgicos (sndrome de Guillan-Barr) em vrias pessoas vacinadas. Vacinas que podem e devem ser usadas sem riscos na primeira infncia, como as contra difteria e coqueluche, podem causar complicaes srias em crianas de mais idade ou em adultos. Como um ltimo comentrio, importante notar que as vacinas efetivas, quase sem exceo, so usadas em crianas e no em adultos. H uma possibilidade de que a efetividade destas vacinas derive de influncias sobre o desenvolvimento do sistema imune que vo muito alm de simples induo de anticorpos especficos anti-germe. Em outras palavras, pode ser que a ao das vacinas que j utilizamos seja mais complexa do que jamais chegamos a suspeitar.

17. O surgimento da patologia

_________________

17.1 Proteo contra a infeco A Imunologia nasceu ao final do sculo XIX como uma mudana emprica na arte de prevenir e tratar doenas. As vacinas foram as primeiras formas efetivas de preveno de doenas e os soros antitxicos, como o soro anti-diftrico e anti-tetnico, constituiram intervenes teraputicas dramaticamente efetivas. Mtodos de induzir a formao de anticorpos protetores, tanto na vacinao comona produo de soros antitxicos, tornaram-se uma prioridade importante da cincia mdica. Estes mtodos foram desenvolvidos empiricamente, sem um conhecimento dos mecanismos envolvidos na produo dos anticorpos. A caracterizao bioqumica de antgenos e anticorpos se desenvolveu por mais de 50 anos sem que se conhecessem sequer as clulas que reagiam antgenos e produziam estes a estes anticorpos, os linfcitos, como atestado nesta afirmao de 1958: " No somente desconhecemos o destino e o de vida dos linfcitos do sangue prazo como no possumos, ainda, nenhuma pista sobre sua possvel funo no corpo" H.W.Florey and J.L.Gowans (1958) In General Pathology , H.W.Florey,ed. Lloyd Luke, London, p.98 A Teoria dos Germes , proposta por Pasteur para explicar a origem doenas infecciosas, das alm de apontar uma causa especfica - um germe - para cada doena, pouco mais indicava sobre os mecanismos das doenas. Existem quantidades abundantes de germes sobre a pele e nas mucosas de organismos sadios. Infeco e doena no so sinnimos. Saber que anticorpos podem prevenir ou curar doenas no explica o que acontece durante as doenas, nem como a presena de anticorpos pode resultar na cura. Os primeiros anticorpos caracterizados eram antitoxinas (tetnica e diftrica), mas os microorganismos que produzem doenas por meio de exotoxinas potentes so, felizmente, raros. Na realidade, algumas bactrias produzem estas toxinas apenas quando infectadas, elas por vrus prprias, (fagos). Na maioria das doenas, no sabemos ainda quais atividades protetoras, se que alguma, dependem dos anticorpos. Tanto os mecanismos geradores das doenas infecciosas, como os mecanismos restauradores da sade permanecem envoltos em brumas de metforas militares, privilegiando noes e defesa de ataque pouco aplicveis aos mecanismos biolgicos.

17.2 Os portadores sos Os chamados "portadores sos" de germes capazes de provocar doenas representam um grande obstculo Teoria dos Germes. Muitas vezes, talvez na maioria das vezes, capazes de germes desencadear doenas graves estabelecem uma convivncia harmnica com o organismo, sem malefcios aparentes. Os portadores sos constituem um grande problema de sade pblica, pois, embora sos, podem transmitir a doena a outras pessoas. Alm eles revelam que no compreendemos o que ocorre nas disso, doenas. Uma anedota histricaque Lffler, o descobridor do bacilo diftrico, fez bem em procur-lo diz primeiro na garganta de crianas com difteria,poderia hav-lo encontrado tambm na garganta de pois muitas crianas sadias! Exemplos modernos dessa situao podem ser encontrados em muitas doenas. Na AIDS, por exemplo, o nmero de portadores sos do HIV muito mais o nmero de pessoas com sintomas de alto que imunodeficincia e impossvel afirmar que todasdesenvolvero sintomas de imunodeficincia. Em elas doenas parasitrias endmicas, como a schistosomose e a doena de Chagas, a parcela de indivduos com formas severas da doena muito menor que a de indivduos infectados sem sintomas ou com sintomas discretos. Na malria, crianas que habitam endmicas melhoram muito dos sintomas da doena por reas volta dos 6 anos de idade, embora permaneam parasitadas. O que so as doenas, afinal?

Lado a lado com as doenas infecciosas, a Medicina caracterizou umnmero de doenas no grande infecciosas nas quais fatores imunolgicos tm uma contribuio importante. Aqui tambm, h uma grande variabilidade individual. Por exemplo, as doenas alrgicas, como a asma e a rinite desencadeadas por alergenos ambientais, atingem apenas uma pequena parcela das pessoas continuamente expostas a estes materiais. A grande maioria da populao se comporta"processadores sos" de anticorpos contra como estes alrgenos, semelhana dos portadores sos de micro-organismos potencialmente patognicos. Porque certas pessoas ficam ostensivamente alrgicas, por exemplo, ao que enquanto outras, respiram, respirando o mesmo ar, no o fazem? Este um problema similar ao da coexistncia com harmnica germes ou vrus patognicos. A Imunologia caracterizou ainda doenas chamadas auto-imunes , ou de auto-agresso imunolgica, nas quais supe-se que o sistema imune, desregulado, ataque componentes do especficos organismo com as armas que deveria utilizar para combater micrbios ou alrgenos sem muita destruir inflamao. Tambm nas doenas autoimunes, encontramos o mesmo dilema: anticorpos reativos com auto componentes podem ser encontrados em muitas pessoas sadias. Como, ento, atribuir aos auto-anticorpos e aos linfcitos auto-reativos responsabilidade doenas auto-imunes, se eles tambm existem em pelas pessoas normais? Por ltimo, h situaes onde a doena parece resultar exatamente do oposto do que normalmente esperaramos. Na coriomeningite linfoctica, uma virose de camundongos, animais infectados pela me desde o nascimento no tm sintomas neurolgicos, mas animais infectados quando adultos morrem em poucos dias com uma inflamao aguda das meninges que depende de linfcitos T. Se os linfcitos T so suprimidos, a doena no ocorre. Um outro exemplo curioso o da suscetibilidade de camundongos Balb/c infeco experimental com leishmanias. Camundongos normais desta raa so muito sensveis e morrem quando infectados com um pequeno nmero (cerca deleishmanias. Se, por outro lado, os linfcitos T dez) auxiliares so inibidos, por exemplo, por uma pequenade radiao, os animais se tornam mais dose resistentes. A filariose um outro exemplo notvel dessas situaes. Tanto em ces, como em seres humanos, as formas graves de filariose parecem decorrer de uma vigorosa resposta do hospedeiro aos parasitas. Portadores sos de filariose humana (infectados pela Wuchereria bancrofti no Recife, como observou ), Gerusa Dreyer, da FioCruz, freqentemente exibem uma alta contagem de microfilrias no sangue circulante e um baixo ttulo de anticorpos anti-filria no soro; por outro lado, os pacientes com as manifestaes deformantes da filariose (edemas grotescos de membros inferiores, por exemplo) freqentemente no exibem microfilrias circulantes e possuem anticorpos anti-filria em ttulo mais elevado no soro. Em Itaip, um bairro de Niteri, a filariose canina pela Dirofilaria imitis endmica. Tambm l, os portadores sos esto representados por ces que exibem microfilrias na circulao e formam poucos anticorpos anti-filria; ces com anticorpos em ttulo mais freqentemente, elevado, sofrem episdios tromboemblicos fatais. Muito interessante a observao ces nascidos de de que cadelas da regio de Itaipu, como mes, exibem microfilrias circulantes e geralmente sobrevivem, as enquanto que ces importados para a regio freqentemente adoecem e morrem. Maurcio Vercimo e colaboradores, trabalhando na UFF, desenvolveram um modelo que reproduz estas observaes em ratos de laboratrio. Ratas recebem um implantedirofilrias adultas na cavidade peritoneal, onde os vermes de sobrevivem alguns dias. Ratos nascidos destas fmeas, quando injetados com de filrias, formam extratos muito menos anticorpos anti-filria que ratos nascidos de fmeas normais. Tambm na schistosomose, sabe-se que os casos mais graves incluem que migraram de pessoas reas onde a schistosomose no existe para onde endmica. Moradores das reas endmicas ela freqentemente nasceram de mes j infectadas e, como demonstrado por pesquisadores da FioCruz, em Belo Horizonte, isto afeta a reatividade dos linfcitos colhidos do cordo umbilical a antgenos do Schistosoma mansoni . Nestas parasitoses, um grau intenso de reatividade ao parasita parece associado gravidade dos sintomas. O que a doena, afinal? Qual a participao do sistema imune no mecanismo de doenas infecciosas e parasitrias, da alergia, e de doenas autoimunes? Como emerge a patologia? Pouco adianta sugerir a doena surge em situaes onde o sistema imune est "desregulado", que ora reagindo demais, ora de menos, quer a antgenos externos, quer a componentes do prprio organismo, pois no sabemos sequer que regras esto sendo quebradas, e no sabemos propor uma definio do que o sistema imune, como ele se constitui e como "regula" suas atividades.

Medindo as respostas especficas a materiais estranhos ao corpo fazemos observaes e conjecturas sobre as atividades de linfcitos especficos, isolados uns dos outros e no sobre operaes do sistema imune como um todo. Para a maioria dos imunologistas, o sistema imune nadasoma que a mais das respostas dos linfcitos que o constituem. A "regulao" das respostas imunes, nesta tica, deriva de interaes dos linfcitos antgeno-especficos com outros linfcitos ("supressores") mas estas conjecturas no vo alm de interaes entre duplas ou trios de linfcitos que interagiriam entre si. No h, na tica dominante, nenhum significado para a reatividade de linfcitos do todos os organismo uns com os outros. Na tica tradicional, portanto, a "regulao da atividade imunolgica" no pode e no se referir, se refere, ao sistema imune como um todo.

17.3 Autoimunidade como imunodeficincia As doenas auto-imunes no podem ser atribudas simples presena de clones linfocitrios auto reativos porque estes clones podem ser encontrados em indivduos sadios como componentes de redes idiotpicas normais. A que se devem, ento, estas doenas? Tomemos como exemplo o lupus eritematoso sistmico (LES), uma autoimune humana, na doena qual surgem altos ttulos auto-anticorpos anti-DNA, entre muitos outros auto-anticorpos. Sndromes de similares ao LES podem ser induzidas em camundongosinjeo de um anticorpo (idiotipo) anti-DNA pela humano isolado (como um monoclonal) de pacientes de LES. Descobriu-se posteriormente que tal idiotipo tambm existe em todos os seres humanos normais. A encefalomielite alrgica experimental (EAE), por sua vez, uma sndrome neurolgica desmielinizante que pode ser induzida em camundongos pela injeo de clones de clulas T reativas com a protena bsica da mielina (MBP) e, reciprocamente, pode ser prevenida ou revertida, pela injeo de outros clones MBP-reativos. No resta dvida, portanto, que certos anticorpos, ou certos clones linfocitrios, em algumas situaes, podem desencadear doenas autoimunes. Como conciliar este fato com a presena de clones auto-reativos em organismos normais? Como vimos, o processo fisiolgico de ativao de linfcitos T requer a apresentao de peptdeos ligados a produtos do MHC na membrana de linfcitos B (ou outros tipos de "clulas apresentadoras"). H, porm, excees a esta regra: interaes diretas entre regies variveis de receptores de linfcitos T e imunoglobulinas atuando como receptores em linfcitos B podem resultar na ativao recproca de ambos os linfcitos. Esta ativao recproca por pareamento de linfcitos T e B, que escapa da via normal de processamento e apresentao, pode estar ligada gnese de complicaes auto-imunes. provvel que isto ocorra, por exemplo, em doenas parasitrias crnicas. Na schistosomose mansnica e na doena de Chagas, podem ocorrer idiotipos (imunoglobulinas) anti-parasita capazes de ativar linfcitos T autlogos independentemente do processamento/apresentao. Este "pareamento independente" de linfcitos T e B que contorna a necessidade de processamento/ apresentao, pode estar implicado nos desequilbrios encontrados nas formas severas destas parasitoses Por outro lado, h evidncias de que vrias doenas auto-imunes podem ser tratadas, e mesmo curadas, pela injeo de altas doses de imunoglobulinas normais (poliespecficas); a eficcia teraputica destas injees tambm sugere que a restaurao da sade resulta do restabelecimento normais de padres de conectividade idiotpica.

17.4 O tratamento com imunoglobulinas normais O organismo sadio normalmente produz auto-anticorpos diversos auto-componentes. As contra doenas auto-imunes podem resultar de um desequilbrio na interaes entre estes anticorpos, no rede de pela mera existncia de clones auto-reativos, mas porque uma perda de conexes entre certos ocorre auto-anticorpos e a rede idiotpica. Um desenvolvimento recente e importante na imunologia clnica o tratamento de doenas auto imunes por injeo endovenosa altas doses de imunoglobulinas normais. H evidncia de que a de restaurao da sade, nestes casos, depende do restabelecimento de conexes idiotpicas que permitem a reconstruo de padres normais de atividade linfocitria. Na schistosomose e na doena de Chagas, as formas clnicas severas esto associadas a presena de certos idiotipos. Os "portadores sos" destas doenas formam anticorpos contra os mesmos antgenos do parasita, mas que expressam outros idiotipos. Os "portadores sos"so, portanto, caracterizados por certos padres de organizao de interaes idiotpicas; os doentes graves realizam outras interaes. Estas diferenas muito provavelmente

dependem tanto de fatores genticos, quanto da histria do indivduo, incluindo maternas, dieta, influncias infeces prvias, enfim, a prpria dinmica do sistema imune. Nesta perspectiva, as doenas no seriam diretamente causadas por vrus ou parasitas, no resultariam de interaes instrutivas com esses invasores, mas sim resultariam de um desvio grave no fluir dos processos do corpo. Muitas vezes, talvez na maioria das situaes, podem ser parasitas incorporados ao organismo sem que ocorram doenas.

17.5 Autoimunidade e auto-aceitao As relaes materno-fetais na gravidez vivpara desafiam as regras usuais de reatividade imunolgica. Cerca de 25% das mulheres primigravdicas desenvolvem anticorpos IgG dirigidos a epitopos do HLA fetal. Estes anticorpos, em presena de complemento, podem lisar clulas fetais in vitro mas no , so citotxicos vivo Na realidade, as regras da alotransplantaoduplamente violadas durante a in . so gestao, pois a freqncia de abortos maior, e no menor, h maior compatibilidade entre quando haplotipos HLA paternos e maternos. Outra violao aparente das regras de transplantao o efeito benfico de transfuses sangneas antes de um alotransplante renal. Tanto na gravidez normal, como no alotransplante renal bem sucedido, a ausncia de agresso imunolgicaao feto e ao rim transplantado, respectivamente, pode estar relacionada presena de anticorposanti-idiotpicos dirigidos para linfoblastos reativos a aloantgenos do MHC.taxas de Altas ativao linfocitria so encontradas em camundongos tornados tolerantes por injeo de linfcitos alognicos no perodo perinatal, nos quais se estabelece um "quimerismo",a isto , co-existncia de clulas do doador e do receptor. A "tolerncia imunolgica" induzida nestas circunstncias um fenmeno ativo, que envolve a produo de anticorpos anti-idiotpicos capazes deinteraes patognicas. suprimir Por exemplo, pacientes com nefrite lpica em fase inativa possuem baixos ttulos de anticorpos anti-DNA, altos ttulos de anticorpos anti-anti-DNA (anti-idiotpicos) e esta relao se inverte na fase ativa . O mecanismo proposto para explicar a gravidez normal alotransplantes renais bem sucedidos e os pode ser estendido para a "aceitao" do organismo inteiro pelo sistema imune, os prprios incluindo linfcitos. Sob esta perspectiva, a autoimunidade patognica resultaria da ausncia de idiotipos capazes de bloquear a expanso de linfoblastos patognicos, idiotipos capazes de conect-los rede idiotpica global.Ou seja, estamos propondo que subpopulaes de linfcitos B e T, uma vez desconectadas da rede idio-tpica, poderiam perpetuar ciclos de interao recproca e criar concentraes mais elevadas de idiotipos patognicos, como ocorre LES. A eficcia de injees endovenosas de altas doses de no imunoglobulinas multiespecficas (IVIG) colhidas de doadores normais no tratamento doenas de vrias auto-imunes refora esta hiptese. A interao direta entre linfcitos T e B, porque podeindependentemente do que ocorre no se dar resto do sistema, potencialmente capaz de situaes patolgicas, como, aparentemente, ocorre no gerar LES humano . Como discutimos, h ocasies em que o aparecimento de certos anticorpos ou a de introduo um nico idiotipo podem tanto prevenir ou reverter uma agresso autoimune jquanto induzir ou instalada, acelerar doenas auto-imunes em animais no predispostos s mesmas. 17.6 O lupus eritematoso experimental Os critrios para definir uma doena como auto-imune mediada por auto-anticorpos, calcados sobre os postulados de Koch, seriam: 1. 2. caracterizar um auto-antgeno e seus respectivos auto-anticorpos; induzir em animais uma condio similar doena auto-imune pela imunizao com o auto-antgeno ou pela transferncia passiva dos auto-anticorpos.

At bem pouco tempo, estas condies no haviam sido preenchidas por nenhum modelo experimental. Em camundongos NZB/W, o ocorre espontaneamente. Com o decorrer da idade, os LES animaisdesenvolvem altos ttulos de anticorpos anti-nucleoprotenas e anti-DNA. No h dvidas sobre a patogenicidade destes anticorpos, apesar da persistncia de controvrsias sobre o mecanismo pelo qual eles provocam as leses. Vrias tentativas de induzir sndromes semelhantes pela injeo de DNA ao lupus

ou de anticorpos anti-DNA em camundongos normais fracassaram. Recentemente, porm, pesquisadores israelenses constataram uma condio similar ao LES pode ser induzida em camundongos pela injeo que de anticorpos monoclonais humanos expressando um idiotipo, l6/6, comumente encontrado em pacientes com LES. Camundongos de vrias raas injetados com 16/6 produzem anticorpos que expressam anti-DNA este mesmo idiotipo alm disso, uma gama de outros auto-anticorpos patognicos (Anti-Sm, anti-SSA, e, anti-SSB, anti-cardiolipina, anti-ribonucleoprotena). camundongos Os desenvolvem tambm caractersticas clnicas e histolgicas similares ao LES sistmico que surge espontaneamente em camundongos NZB/W. A ativao de clulas T helper, por interao direta com anticorpos anti-idiotpicos, uma possvel explicao para estes resultados. O LES no pode ser induzido em camundongos atmicos (nu//nu, background Balb/c) demonstrando a importncia de linfcitos T neste processo. Clulas de linfonodos de camundongos Balb/c normais imunizados com 16/6 em adjuvante de Freund podem ser estimuladas in vitro (transformao blstica) por 16/6 ou DNA de fita simples (ssDNA), mas no por peptdeos no relacionados, enquanto que clulas de camundongos imunizados com proliferam apenas frente ao ssDNA ssDNA, e, mesmo assim, fracamente. Mais recentemente, este mesmo grupo de pesquisadores demonstrou que o LES pode ser induzido mais rapidamente, e de forma mais grave, pela injeo de um idiotipo monoclonal anti-l6/6. Estes so resultados que sugerem fortemente que a rede idiotpica tem um papel importante na instalao do LES em camundongos. Vrios anticorpos monoclonais anti-DNA foram testados em sua capacidade de instalao acelerar a da nefrite lpica desenvolvida espontaneamente em camundongos NZB/Winduzir o LES em ou de camundongos Balb/c. Os idiotipos mais patognicos encontrados eram do isotipo IgG2a e expressavam um idiotipo conhecido por GN2, caractersticas que haviam sido previamente associadas nefritogenicidade. Dois destes anticorpos foram analisados quantos s famlias utilizadas nas regies variveis; gnicas nenhum segmento gnico incomum ou mtodo especial de gerar a diversidade foram encontrado. Estes dados falam contra o envolvimentofamlias gnicas especiais na gnese do LES. Os de mesmos componentes genticos so utilizados na produo de imunoglobulinas que so e que no so patognicas . Alm do mais, o idiotipo 16/6 ser encontrado em 100% dos seres humanos normais. O pode problema da autoimunidade patolgica no LES parece residir mais na incapacidade de regular deexpresso a combinaes patognicas clones linfocitrios que so gerados por mecanismos normais. Um distrbio, de portanto, ao nvel da rede idiotpica.

17.7 A encefalite alrgica experimental A encefalite alrgica experimental (EAE) pode ser induzida pela da protena bsica da injeo mielina (MBP) ou pela injeo endovenosa de clones de clulas T MBP-reativas. Anlises do receptor (TCR) utilizado por estes clones patognicos revelaram que clones com diferenas significativas nas seqncias de aminocidos das regies variveis, quando testados in vitro contra peptdeos relacionados MBP, podem mostrar padres de reatividade muito similares. Reciprocamente, clones com seqncias muito similares diferiam significativamente na capacidade encefalitognica. Estes resultados foram interpretados como indicativos de que diferenas nos subtipos de clulas T, na secreo de linfocinas, ou na capacidade citotxica seriam responsveis pela patogenicidade dos clones. Mas tambm possvel que eles se devam ao tipo de distrbio que eles causam na rede idiotpica. Tanto a EAE, quanto a artrite induzida pelo adjuvante de Freund podem ser em animais induzidas pela inoculao clones de clulas T colhidas de animais injetados, respectivamente com MBP ou com o de adjuvante de Freund . Por outro lado, a inoculao de outros clones de clulas T colhidos destes mesmos animais capaz de prevenir a induo das leses ou mesmo de reverter um quadro j instalado. Por sua vez, clulas de bao e de linfonodos isoladas destes animais tornados "tolerantes" transferiam para animais normais a refratariedade induo das doenas auto-imunes. A EAE pode ser prevenida ou tratada com injees de anticorpos anti-CD4 ou anti-Ia que inibem, respectivamente, a atividade de clulas Th, e o processamento/apresentao. A injeo de anticorpos anti-Vb8, capazes de inibir especificamente clulas T que utilizam segmentos Vb Vb8, tem o da famlia mesmo efeito. curioso assinalar que os genes da famlia Vb8 so preferencialmente utilizados por linfcitos T naturalmente ativados.

17.8 Parasitoses crnicas graves Em formas crnicas de algumas doenas parasitrias, a persistncia da estimulao por antgenos do parasita tem sido apontada como responsvel desencadeamento de uma coleo de eventos pelo imunolgicos que poderiam resultar em patologias graves. Gazzinelli e colaboradores demonstraram que antgenos de T. cruzi e S. mansonipodem induzir uma intensa transformao blstica em culturas de linfcitos de pacientes infectados. Esta transformao pode ser totalmente bloqueada em presena de cloroquina, que inibe o processamento/apresentao. Em algumas situaes, mas no em outras, a cloroquina no conseguia inibir a transformao blstica induzida por anticorpos (idiotipos) anti-parasita isolados em colunas de afinidade. Na doena de Chagas, os pacientes cujos linfcitos T podiam ser estimulados por idiotipos anti-parasita autlogos eram exatamente aqueles com a forma grave (cardaca) da doena. Na esquistosomose mansnica, ocorria o contrrio: idiotipos anti-parasita de pacientes com a forma branda (intestinal) parasitose, mas no de pacientes com a forma severa (hepato-esplnica), da eram estimulatrios para linfcitos T autlogos mesmo em presena de cloroquina. A falta de circuitos anti-idiotpicos regulatrios pode estar envolvida na formao dos granulomas periovulares, que constituem o substrato anatomopatolgico desta parasitose. Estes resultados so tambm consistentes com a hiptese de uma patologia derivada da perda de conexes idiotpicas. 17.9 Doenas auto-imunes: concluses Os estados de "tolerncia" de "imunidade patognica" a auto-componentes dependem mais da ou histria do organismo, da forma de contato do sistema imune com os materiais com os quais o sistema interage, do que de qualidades especiais destes materiais ou dos clones produzidos pelo sistema imune. Por exemplo, a ingesto prvia MBP pode inibir a induo de EAE, assim como a ingesto de colgeno pode de inibir a induo da artrite por adjuvante de Freund. A patologia imunolgica emerge quando surgem circuitos de estimulao linfocitria relativamente independentes da rede idiotpica, criando "singularidades" que constrastam com a maneira "plural" e distribuda, tpica dos processos imunolgicos.clones linfocitrios patognicos so aqueles, que Os introduzidos (natural ou artificialmente) no sistema imune, so capazes de criar circuitos de ativao celular relativamente independentes da conectividade sistmica. Por outro lado, clones e imunoglobulinas que sejam capazes de restaurar a pluralidade fisiolgica de interaes destes clones com o restante da rede idiotpica so elementos capazes de restaurar a sade e prevenir o estabelecimento da patologia autoimune. possvel que algumas "singularidades" surjam na estimulao direta e recproca de linfcitos T e B e, ainda, que modificaes na dieta possam constituir formas "plurais" de interveno imunolgica, comparveis injeo endovenosa de imunoglobulinas multiespecficas. 17.10 As reaes alrgicas H vrios relatos de reaes alrgicas em documentos e obras de arte da antigidade. A hipersensibilidade a picadas insetos e a plens ocorrem espontaneamente em outros mamferos e de provavelmente acompanha o homem desde suas origens. A reao a componentes domiciliar to da poeira antiga quanto a civilizao. Como o restante do conhecimento em Imunologia, porm,compreenso da natureza dessas nossa reaes se inicia com o sculo XX. Em 1901, o Prncipe de Mnaco, um amador, convidou dois cientista eminentes cientistas, Richet e Portier, um cruzeiro pelo Mediterrneo, com a proposta de que para estudassem a toxicidade de celenterados (guas-vivas). Como era na poca, ces foram escolhidos comum como animais experimentais para se injetar o extrato txico das guas-vivas. Ao alguns animais testar se que haviam sobrevivido a uma dose do veneno haviam se tornado imunes a seus efeitos, eles constataram que a primeira exposio havia os animais feito mais sensveis, ao invs de menos sensveis aos efeitos txicos. De regresso a Paris, eles confirmaram este fenmeno com mais ces e propuseram, ento, o nome anafilaxia para design-lo, significando o oposto da profilaxia induzida pelas vacinaes. Richet e Portier receberam o prmio Nobel de Medicina de 1913. Nos anos subseqentes, dois outros termos foram criados para designar fenmenos de * foi cunhado hipersensibilidade similares anafilaxia apareciam na clnica mdica. O termo que alergia * Alergia vem do grego (outro) e allos ergon (trabalho).

por von Pirquet, em 1906, enquanto que o termo atopia * * foi criado, nos Estados Unidos, por Arthur Coca, em 1923. Os anticorpos anti-txicos (antitoxinas) haviam sido descobertos pouco antes nottano edo estudo da difteria e se sabia que eles podiam transferir passivamente a imunidade a um animal normal. Basead nestes fatos, Maurice Nicolle tentou transferir passivamente a sensibilidade anafiltica a animais normais e foi bem sucedido. A sensibilidade anafiltica, portanto, dependia de anticorpos. Sabia-se tambm, nesta poca, que para destruir (lisar) bactrias vibrio da clera, os o como anticorpos (fatores especficos presentes no imune) requeriam a presena de um segundo fator soro inespecfico presente soro fresco, tanto de animais normais, quanto imunes que lisava bactrias no diversas. Este fator, por estas razes denominado complemento , foi caracterizado por Jules Bordet, tambm premiado com o Nobel de Medicina. Em 1912-1913, descobriu-se que a adio do antgeno especfico a um soro contendo anticorpos podia tornartxico de forma que a injeo deste soro em o soro animais normais, no sensibilizados, desencadeava sintomas semelhantes ao do choque anafiltico. O princpio txico presente no soro denominado foi anafilotoxina . Para perplexidade dos imunologistas, a anafilotoxina tambm surgia no soro normal tratado com uma srie de substncias, tais como agar-agar ou kaolin. Este mistrio persistiu at 1950, quando Abraham Osler mostrou que a anafilotoxina era um produto do complemento. A exposio do soro tanto a complexos antgeno-anticorpo, como a substncias como agar-agar ou kaolin, capaz de ativar a cascata do complemento (ver 11 ). Captulo Em 1922, Carl Prausnitz e Heinz Kstner fizeram descobertas importantes para a compreenso da alergia humana. Kustner era alrgico a peixes. Praunitz se injetou com um pouco do soro de Kustner na pele de seu prprio antebrao e mais tarde injetou um extrato de peixe na mesma regio. Uma forte diludo urticria com "pseudpodos" se formou no local, mostrando que a alergia pode ser transferida com o soro. Esta reao tem at hoje o nome de reao de Praunitz-Kstner. Em 1930, Karl Landsteiner recebeu o prmio Noble por sua caracterizao dos grupos sanguneos humanos ABO a explicao da origem das reaes txicas que se seguem transfuso de sangue ABOe incompatvel. Em 1940, Merrill Chase, um estudante de Landsteiner, caracterizou a existncia de dois tipos de hipersensibilidade: um que podia ser transferido de um animal a outro pelo soro contendo anticorpos(a hipersensibilidade imediata ou humoral) e outro que requer a transferncia de clulas linfides (a hipersensibilidade retardada ou celular). Mais tarde, Gell e Coombs subdividiram as reaes imediatas em 3 tipos: tipo I tipo II tipo III anafiltica; citotxica; por complexos antgeno-anticorpo (Ag-Ac).

Passaram a existir, ento, 4 tipos de hipersensibilidade, reservando-se o ltimo tipo para: tipo IV - celular ou retardada. As reaes de tipo I (alrgicas, anafilticas, reagnicas) incluem a maioria dos sintomas alrgicos mais comuns, como rinites, conjuntivites, asma. Algumas reaes mais severas a medicamentos, como reaes penicilina, chegando s formas muito graves ou mortais (choque anafiltico) onde a injeo de penicilina ou de soro anti-tetnico figuram os principais agentes desencadeadores. Vrias reaes como adversas (idiossincrsicas) a medicamentos no dependem de mecanismos imunolgicos ser podem e devidas a ausncia de enzimas de degradao da droga. Outras, como as reaes a contrastes iodados para radiografias, parecem depender da ativao do sistema complemento (gerando C3a e C5a). As reaes de tipo II e III requerem a participao do complemento , alm dos anticorpos. Nas reaes de tipo II, ocorrem leses citotxicas (de lise, destruio resultantes da ao de celular) anticorpos e complemento sobre a superfcie de clulas contendo determinantes antignicos (epitopos) ao qual se ligam os anticorpos e, ento, o complemento. O exemplo mais caracterstico so as transfuses sangneas incompatveis onde ocorre lise das hemcias transfundidas. reaes citotxicas Outras ocorrem, por exemplo, contra clulas que foram "decoradas" pela conjugao de molculas de

** Atopia vem de topos(fora do lugar) a-

medicamentos. Por exemplo, medicamento denominado sedormid, durante vrios anos, causou prpura um trombocitopnica por um mecanismo imunolgico de lise de plaquetas, a penicilina, vez, pode por sua causar anemias hemolticas ao formar peniciloil-hemcias. A doena hemoltica do recm nascido por incompatibilidade Rh outro exemplo importante de reaes de tipo II. Esta complicao ocorre quando mes Rh- fetos Rh+. Durante a gestao normal, geram no ocorre mistura do sangue fetal o materno. Durante o parto, porm, uma quantidade equivalente a com 5-10 ml de sangue fetal pode penetrar a circulao materna. Nesta situao, mulheres Rhpodem se imunizar contra os antgenos Rh presentes nas hemcias Na eventualidade de uma segunda gestao fetais. de feto Rh+, os anticorpos IgG anti-Rh podem atravessar a placenta e penetrar a fetal. Isto circulao tem conseqncias que variam de uma leve ictercia completa destruio do feto (hydropsis fetalis). A "doena-Rh", porm, muito menos freqente do que seria se todo par me Rh+ x feto Rh- fosse afetado. Pares que so incompatveis tambm no sistema ABO tm uma incidncia menor desta complicao que pares ABO-compatveis. Isto ocorre porque hemcias ABO-incompatveis que fetais penetrem a circulao materna so lisadas pelos anticorpos naturais j ali presentes. Por exemplo, hemcias fetais A/Rh+ penetrando a circulao de uma me O/Rh- so lisadas pelos anticorpos anti-A antes que os antgenos Rh nela tambm presentes possam imunizar a me. Por suame A/Rhvez, uma resultaria imunizada aos antgenos Rh ausncia de anticorpos naturais anti-A. Esta constatao levou pela ao desenvolvimento de um mtodo altamente efetivo de preveno da sensibilisao Rh que consiste na injeo de uma pequena quantidade (300 g) de anticorpos anti-Rh em parturientes Rh- nas 24 horas que se seguem ao parto de criana Rh+. A preveno tambm indicada em os casos de aborto de todos mulheres Rh negativas. As reaes de tipo III requerem a presena concomitante de concentraes relativamente elevadas de anticorpos e de seus antgenos especficos na circulao tecidos. O exemplo mais caracterstico ou nos a chamada "doena do soro", ainda comum em pases como o Brasil, nos quais de um programa a ausncia eficaz e sistemtico de vacinao anti-tetnica torna, vezes, necessria a profilaxia passiva do muitas ttano pela injeo de antitoxina tetnica de origem equina (soro anti-tetnico). de soro anti A injeo tetnico, como mencionamos acima, tambm uma causa importante dede tipo I (anafilticas), reaes mas as reaes de tipo III podem surgir na ausncia de reaes de tipo I. Tipicamente, o paciente com "doena do soro" tem reaes cutneas, aumento de gnglios linfticos, febre e mal-estar de 7 a 10 dias aps uma injeo de soro anti-tetnico. Nestes dias, os anticorpos formados contra as imunoglobulinas e as demais protenas de cavalo presentessoro anti-tetnico comeam a emergir do sistema linfide em no grande quantidade encontram ainda presentes na circulao uma quantidade elevada de tais protenas e estranhas. Forma-se, ento, uma grande quantidade de complexos antgeno-anticorpo (Ag-Ac) capazes de ativar o sistema complemento. Nos locais onde tais complexos se depositam (a membrana sinovial das articulaes, os glomrulos renais e, em certa medida, todos os vasos do corpo) a ativao do complemento pode gerar reaes inflamatrias criando uma vasculite generalizada. No lupus eritematoso disseminado, grave doena autoimune humana, uma perturbao crnica uma grave das interaes celulares no sistema imune conduz produo quantidade elevada de de uma anticorpos contra uma srie de auto-componentes, incluindo o DNA, nucleoprotenas, as prprias imunoglobulinas (fatores reumatides), etc. Tambm neste caso, se formam quantidades elevadas de complexos Ag-Ac e, freqentemente, h srias leses renais. O lupus eritematoso disseminado, portanto, inclui manifestaes severas de hipersensibilidade tipo III. A hipersensibilidade de tipo IV, celular ou retardada, deve esta designao ao longo ltima intervalo (cerca de 48 horas) decorre entre a exposio ao antgeno (por ex., a injeo intradrmica que de tuberculina) e o pleno aparecimento dos sintomas (o desenvolvimento de uma ppula em um se local onde fez uma injeo intradrmica do antgeno). Este tipo de hipersensibilidade foi caracterizado por Chase a estudar a transferncia da chamada "sensibilidade de contato", responsvel pelas "dermatites por contato" desencadeadas pela pincelagem repetida da pele de com agentes com o tinitroclorobenzeno (TNCB). cobaias Muitas plantas contm produtos naturais capazes de induzir a sensibilizao por contato. aEntre ns, aroeirinha; nos Estados Unidos, a poison ivy, plantas do gnero Rhus, que contm produtos sensibilizantes denominado urushiis. Na sensibilisao de contato, compostos altamente reativos, como o TNCB ou os urushiis, se conjugam a protenas da pele, funcionando como . Ouseja, a sensibilizao depende haptenos da conjugao a uma protena portadora que precisa ser processada para gerar os linfcitos T responsveis pela sensibilidade.

17.11 Os mediadores auto-farmacolgicos O mecanismo das reaes de hipersensibilidade comeou a ser esclarecido pela compreenso de que os sintomas txicos observados no eram desencadeados diretamente pelo antgeno, mas sim por substncias geradas ou liberadas dos tecidos pela combinao antgeno-anticorpo. Isto se tornava bastante evidente no caso das anafilotoxinas geradas no soro fresco normal pela reao Ag-Ac, pelo contato com agar-agar ou kaolin. Um passo importante nesta direo foi dado por Sir Henry Dale que mostrou a semelhana entre os sintomas txicos provocados pela exposio histamina e o choque anafiltico sugerindo que os sintomas anafilaxia se deviam liberao de histamina dos tecidos. Isto foi da comprovado anos depois, Brasil, por Ivan Mota, apontando a degranulao dos mastcitos do tecido no conjuntivo como a fonte da histamina liberada nestes processos. Dale desenvolveu tambm o primeiro teste de anafilaxia in vitromostrando que o tero isolado de cobaias sensibilizadas sofria uma rpida e intensa contrao segundos aps a exposio ao antgeno. Hoje sabemos que o componente rpido desta contrao, conhecida como reao de Schultz-Dale, a histamina, mas que h uma substncia que induz contrao mais lenta e prolongada, por isto mesmo denominada SRS-A (slow reacting substance of anaphylaxis).substncia, atualmente identificada como o leucotrieno B3, Esta um produto do metabolismo do cido aracdnico, descoberta que valeu o prmio Nobel a Bengt Samuelson

17.12 Alergia como autoimunidade. Asma e anticorpos anti-VIP. H evidncias recentes que o "peptdeo vasoativo intestinal", ou VIP, e outros neuropeptdeos de desempenham um papel importante na fisiologia pulmonar. A asma pode estar associada a nas uma baixa concentraes de VIP liberadas no tecido pulmonar. Recentemente, demonstrou-se a existncia de um auto-anticorpo anti-VIP dotado de propriedades catalticas capazes de promover a ruptura do peptdeo e que tais anticorpos podem estar mais elevados nos pacientes asmticos. A asma crnica poderia depender da manuteno de concentraes patognicas deste auto-anticorpo na circulao possuindo, portanto, um componente autoimune importante. Ulceraes gastrointestinais agudas podem resultar da produo de anticorpos anti prostaglandinas. Uma variedade de outros distrbios digestivos poderia resultar da de auto produo anticorpos com esta especificidade. 17.13 Imunologia e digesto Temos a tendncia a imaginar que o nosso "lado de fora" Na pele. a verdade, a pele constitui uma parcela muito pequena de nossa superfcie externa. A grande maioria desta est nas mucosas do superfcie corpo e, principalmente, na mucosa do intestino delgado, da qual absorvemos a maior parte do atravs alimento que digerimos. Em ser humano adulto, a mucosa do intestino delgado, se desdobrada de todas um as suas pregas e vilosidades, atingiria a cifra espantosa de 300-400 metros quadrados. A absoro de materiais derivados de alimentos, que podem estar incompletamente digeridos, assim como a associao com uma riqussima flora bacteriana nos fazem encarar sem muita surpresa a revelao de que existe uma intensa atividade imunolgica no tecido linfide associado ao intestino. A surpresa surge quando se constata que: - cerca de 80 % das clulas secretoras de anticorpos no organismo de um camundongo adulto so encontradas na mucosa intestinal e - a grande maioria destas clulas est concentrada na mucosa do duodeno e do jejuno, enquanto que a maioria de bactrias intestinais est no intestino grosso. A maior parte da formao de anticorpos no organismo portanto, concentrada no intestino est, delgado, nas regies onde so absorvidos os peptdeos e aminocidos resultantes da digesto das protenas ingeridas como alimento e no nas regies onde se concentra a flora microbiana do intestino. H tambm um grande nmero de linfcitos T, tanto na propriado intestino, como lamina intercalados entre as clulas do epitlio intestinal (linfcitos intraepiteliais). Estes linfcitos T no parecem seguir as regras aprendidas sobre o comportamento dos linfcitos T dos demais rgos linfides, como o bao e os gnglios e pouco sabemos ainda sobre suas interaesclulas intestinais. as com Na montagem de seus receptores de membrana, estes linfcitos T utilizam cadeias polipeptdicas (cadeias g e d) diversas das cadeias (a e b) encontradas nos linfcitos T de outros locais e que supnhamos ser as

mais comuns. Alm dos linfcitos T, e intestino delgado possui ainda uma extensa rede de clulas B o dendrticas ("apresentadoras"), ricas em produtos de classe II do MHC que so importantes na "apresentao" de antgenos aos linfcitos T auxiliares. Similarmente a macrfagos, clulas dendrticas e linfcitos B, os entercitos, eles prprios, expressam tambm molculas de Ia permitem a "apresentao" de peptdeos a linfcitos T auxiliares. que Estas molculas so expressas em uma localizao que sugere que elas participam,lado, nos por um processosde absoro de peptdeos da luz do tubo intestinal e, por outro lado, na operao do tecido linfide do intestino: a) b) c) d) so expressas apenas no intestino delgado, onde tambm esto concentradas as clulas secretoras de imunoglobulinas; so expressas apenas nas clulas dos dois teros superiores das vilosidades, que esto mais em contato com a luz intestinal; esto ausentes das clulas secretoras de muco; esto ausentes das clulas intestinais durante todo o desenvolvimento embrionrio. Surgem no perodo perinatal coincidentemente com o incio da alimentao independente. Este o mesmo perodo em que a propria lamina se infiltra de clulas secretando imunoglobulinas.

Tudo isto sugere que as molculas de enzimas (oligopeptidases) e molculas de Ia expressas na face luminal dos entercitos desempenhem funes complementares: as reduzindo oligopeptdeos a enzimas dimenses abaixo da possibilidade de reconhecimento imunolgico, as molculas de Ia formando complexos com peptdeos maiores e os transportando, atravs do citoplasma, para apresentao aos linfcitos adjacentes. Esta possibilidade atribuiria molculas de Ia uma funo de s filtragem imunolgica, restringindo as possibilidades de reaes dos linfcitos aos peptdeos capazes de se conjugar s mesmas. O aparecimento do tecido linfide intestinal est associado absoro de materiais antignicos da luz intestinal: ele est diminudo em animais "isentos de germes" (germfree) e totalmente ausente quando estes animais so alimentados com uma dieta "isenta de antgenos"(antigen free) e ultrafiltrada. Os entercitos participam ativamente montagem das molculas de um da tipo especial de anticorpos, a IgA-secretria, s quais adicionam a pea de secreo antes de seu transporte para a luz intestinal. A IgA-secretria, que secretada para a superfcie das mucosas do corpo, difere da IgA plasmtica exatamente por possuir esta de secreo que, aparentemente, lhe confere uma pea resistncia maior a enzimas proteolticas presentes, por exemplo, na luz intestinal. Flutuando na interface entre o muco e a luz do intestino, a IgA secretria pode se ligar a antgenos sua penetrao no e dificultar organismo. Dois paralelos importantes indicados. Primeiro, h uma semelhana entre a digesto, como so ocorre no tubo intestinal, e a contnua montagem e desmontagem de protenas (e outras macromolculas) como ocorre, incessantemente, em todas as clulas do corpo. Nenhum organismo est "pronto", acabado, terminado. Todos esto engajados em processos de contnua reconstruo. No tubo intestinal, na digesto, ocorre uma faceta especial deste processo onde novos materiais, capturados como alimentos, so desmontados para incorporao aos tecidos do corpo. Em segundo lugar, os processos imunolgicos podem ser encarados como mecanismos facilitadores da captao de materiais por macrfagos e outras clulas que atuam pela desmontagem destes materiais por digesto intracelular. Nesta perspectiva, a atividade imunolgica, incluindo as reaes inflamatrias, que facilitam o aporte de clulas fagocticas a locais onde elas so necessrias, pode ser encarada como uma extenso de processos ligados nutrio do organismo, sentido amplo. Esta perspectiva , em em seu linhas gerais, a que foi defendida por Ellie Metchnikoff no perodo fundador da Imunologia, no sculo XIX. 17.4 Outra viso da patologia Existe um produto de macrfagos que pode ilustrar a necessidade de uma nova viso da o patologia: "fator de necrose tumoral", abreviado TNF(tumour necrosis factor), tambm denominado caquectina (cachectin, princpio responsvel pela caquexia). Estas duas denominaes diferentes mesmauma para substncia surgiram em dois trajetos independentes de pesquisa. Em infeces crnicas e doenas neoplsicas freqente um emagrecimento severo com graves distrbios metablicos (caquexia), cujas relaes com a carga de microorganismos ou com o tumor no so

claras. Em outras situaes, as infeces com bactrias gram-negativas conduzem a um quadro severo de choque, com coagulao intravascular e leses tissulares disseminadas. Tambm nestes relaes casos, as entre as bactrias e os sintomas eram obscuras. Vrias descobertas conduziram concluso de que tanto a caquexia quanto as leses tissulares dependem da ao de mediadores das clulas do organismo e liberados no de aes diretas de produtos dos microorganismos. As aes txicas de endotoxinas de bactrias gram-negativas (lipopolissacride, abreviado LPS) ilustram bem este ponto. O LPS no exerce efeitos diretos sobre o metabolismo, nem diretamente txico para a maioria das clulas do corpo. Seus efeitos txicos sedevem de mediadores liberados por ao clulas de linhagem hemopoitica. Estas descobertas foram devidas, em grande parte, existncia de uma linhagem de camundongos, denominada C3H/HeJ que, por uma modificao fortuita, perdeu o gentica receptor de LPS e, portanto, no sofre a maioria de seus efeitos txicos. Transplantado com a medula ssea de camundongos C3H/HeN, que no perderam o receptor de LPS, os C3H/HeJ se tornam suscetveis aos seus efeitos txicos. Logo se suspeitou o macrfago fosse a clula responsvel por esta que suscetibilidade, porque se sabia que camundongos parasitados por listrias, micobactrias e outros parasitas intracelulares que causam ativao e hiperplasia dos macrfagos,suscetibilidade aos tm a efeitos txicos do LPS muito aumentada. Mostrou-se depois que mediadores in vitropela ao do liberados LPS sobre macrfagos suscetveis eram capazes de matar camundongos C3H/HeJ resistentes ao LPS. Um dos distrbios metablicos induzidos pelo LPS uma hiperlipemia causada por um aumento de triglicerdeos. Este efeito se deve a uma inibio da enzima lipoprotena soro de animais lipase. O suscetveis tratados com contm um fator capaz de induzir a lipemia em camundongos C3H/HeJ, e o LPS fator, por ser responsvel pela caquexia de animais infectados, foi denominado caquexina (cachectin). A caquexina foi caracterizada como uma protena de 17 kilodaltons (KDa) constituir at 1 que pode a 2% do total de protenas secretadas por macrfagos - uma quantidade Moncitos circulantes, enorme. por sua vez, no secretam nenhuma caquexina,a no ser quando expostos ao interferon-gama. A caquexina se liga com alta afinidade a clulas adiposas, mioblastos, endoteliais e uma variedade de outros clulas tecidos. Quando injetada em animais, ela produz arrepios, diarria, hemoconcentrao, choque, acidose metablica, hiperglicemia seguida de hipoglicemia,elevao do potssio do plasma e uma aparncia doente. Com a injeo de uma dose 100-200 g de LPS/kg de peso, em ratos, ocorre morte por embolia pulmonar, pneumonite intersticial severa, necrose tubular aguda e leses isqumicas e hemorrgicas no tubo gastrointestinal. Em 1985, Beutler e colaboradores descobriram semelhanas entre a caquexina e uma outra protena, caracterizada por sua capacidade de induzir necrose em certos tumores edenominada por isto TNF (tumour necrosis factor). Hoje sabemos se tratar da mesma substncia. Um dos efeitos marcantes do LPS, conhecido desde o sculo oXIX, de induzir uma necrose hemorrgica dealguns tumores, principalmente sarcomas e carcinomas de origem mesodrmica, propriedade que levou, inclusive, a tentativas teraputicas, logo abandonadas pela alta toxicidade do LPS. Em 1962, OMalley e colaboradores descobriram que o soro de camundongos em choque pelaLPS de injeo podia induzir necrose de tumores de outros camundongos. Em 1975, Old e colaboradores caracterizaram o TNF no soro de camundongos previamente infectados por micobactrias (BCG) e depois injetados com LPS. A descoberta deste fator reacendeu esperanas da obteno de um mediador capaz necrose de induzir tumoral sem a toxicidade do LPS . Esperanas que, infelizmente, no se realizaram. Demonstrou-se que TNF era produzido por macrfagos e que uma segunda substncia, produzida o por linfcitos e denominada linfotoxina era tambm capaz de lisar clulas tumorais. Os codificam genes que o TNF e a linfotoxina so ligados entre si e ligados tambm ao MHC. No camundongo eles esto na regio D do complexo H-2. H 30% de homologia entre o TNF e a linfotoxina, ambos se ligam aos mesmos receptores celulares e tm aes semelhantes. No entanto, a linfotoxina produzida exclusivamente por linfcitos T (e algumas linhagens linfoblastides B) expostos a mitognios policlonais enquanto que o TNF produzido por macrfagos expostos ao LPS e em quantidades muito mais abundantes. Desde que a identidade TNF j est estabelecida, daqui em diante apenas o termo TNF ser usado para designar a substncia responsvel pelas duas atividades. A produo intracelular TNF hiper-regulada: glucocorticides presentes antes da ativao do de macrfago so inibidores muito potentes de sua produo, mas no tm efeitos em macrfagos j ativados. Nas clulas-alvo, o TNF inibe a lipoprotena e induz a produo de uma srie de protenas, incluindo lipase produtos de classe I do MHC e IL-1.

Os mecanismos detalhados da produochoque e da necrose hemorrgica no so ainda do conhecidos, mas parecem depender, essencialmente, de mecanismos vasculares. O efeito do TNF sobre tumores se assemelha ao que ocorre se os vasos que alimentam o tumor so ligados. Os efeitos do TNF sobre algumas clulas tumorais vitro, portanto, seriam independentes destes efeitos . H in in vivo sugestes de que o TNF diretamente txico para clulas endoteliais aumentando sua atividade pr coagulante e inibindo a expresso de trombomodulina. provvel que diferentes redes vasculares respondam ao TNF de maneira e que os vasos diferente de alguns tumores sejam especialmente suscetveis a tais efeitos. Experincias recentes de Silvia Andrade, no Royal Cancer Institute, com a neo-vasognese que ocorre em esponjas plsticas implantadas no dorso de camundongos, mostraram que vasos de tumores implantados em tais esponjas no respondem a mediadores farmacolgicos da mesma forma que vasos normais que invadem a esponja na ausncia de clulas tumorais. Isto refora a idia devasos que nutrem tumores possam ser diferentes dos que que nutrem o tecido normal correspondente. Uma possibilidade intrigante e j parcialmente confirmada que o TNF exerce alguns de seus efeitos indiretamente, atravs da liberao de outros mediadores,- tais como IL 1, leucotrienos e PAF (Platelet Activating Factor). Por si s, a IL-1 pode desencadear alguns dos efeitos tpicos do choque endotxico, tais como, febre, hipotenso, leucopenia e trombocitopenia. Um outro fator relevante nas aes do TNF a ativao macrofgica como ocorre, por exemplo, nas infeces por parasitas intracelulares, onde a produo de TNF muito aumentada. A ao do interferon-gama (INF-g) sobre macrfagos, que intensifica muitas atividades dos macrfagos, tambm potencia a secreo de TNF. possvel que o INF-g esteja envolvido na potenciao que ocorre nas infeces intracelulares. Recentemente, aes completamente imprevistas do TNF foram descobertas no estudo da esquistosomose experimental em camundongos. Grande parte da patogenia da esquistosomose se deve formao de granulomas ao redor de ovos do parasita que no conseguem sair do sangue para o intestino e so carregados pela circulao at se alojarem em redes vasculares do fgado, pulmo e outros rgos. Os granulomas se formam por processo dependente de linfcitos T CD4+ e , portanto, no se formam um quando camundongos geneticamente deficientes em linfcitos T, como os SCID (stem cell immunodeficient) so experimentalmente infectados com o Schistosoma mansoniComo esperado, . quando os SCID infectados recebem uma transfuso de linfcitos T ou o sobrenadante de culturas de linfcitos T, os granulomas aparecem ao redor dos ovos. Na identificao das citocinas responsveis presentes nestes sobrenadantes de cultura, descobriu-se que apenas o TNF era capaz de desencadear todo o processo: camundongos SCID infectados com S.mansoni e tratados com TNF desenvolvem granulomas se fossem camundongos como normais. Descobriu-se, alm disso, um efeito no esperado muito surpreendente: o TNF atua como um hormnio sexual paraS.mansoni expostas ao TNF, as o : fmeas aceleram muito a postura de ovos! Estas so, evidentemente, conseqncias de uma longa co-evoluo do parasita com seus hospedeiros.

1
17. Goiaba, goiabeira Metadilogo em homenagem a Gregory Bateson ________________________________
Pai : H muito tempo penso em lhe contar uma histria chamada assim: "Goiaba, goiabeira". Filha: Seria melhor "Goiaba, goiabada". P: No, esse ttulo seria o avesso do que eu queria dizer. Eu queria dizer "goiaba" do verbo "goiabar". E a goiabada em que voc est pensando no do verbo goiabar. Quer dizer, , mas muito indiretamente. F: Mas eu gosto muito de goiabada e nunca ouvi falar neste verbo "goiabar". Foi voc quem inventou? P: Foi. Mas um verbo muito necessrio. A gente s deve inventar palavras quando elas forem muito necessrias, indispensveis mesmo. F: E como se conjuga esse verbo "goiabar"? Eu goiabo, tu goiabas... P: No, no, s goiabeiras goiabam. Pra goiabar, voc tem que nascer goiabeira e depois usar vontade duas coisas que o planeta tem (ou tinha) de sobra : luz e tempo. E uma chuvinha aqui, outra ali. F: Luz e tempo? Pai, pra de brincadeira. P: Eu nunca fui to srio. Voc pode ver uma goiabeira goiabando. s olhar pra ela. Um dia, eu olhei e vi. F: E como que ela fazia para goiabar? P: Quer dizer, existia como uma goiabeira. F: "Goiabar" a mesma coisa que "ser uma goiabeira"? P: ser assim como uma goiabeira, do jeitinho dela. F: Quer dizer que eu posso ser... quer dizer, fazer de conta que eu sou uma goiabeira e a eu estaria "goiabando"? P: Humm...vejamos. O que que voc faria? F: Deixa ver. Eu balanaria com o vento, assim, e enfiaria minhas razes na terra preta, assim, e ia sempre crescendo brotinhos bem verdinhos, assim, e dava uma sombra bem escura, mas, principalmente, eu dava muita goiaba: pros passarinhos e pras mosquinhas, pras crianas e pra Mame fazer goiabada. No assim? P: . Tambm . Achei seu jeito de goiabar muito bonito. Mas me conte mais: como que voc pensou nisto? F: Bem, eu pensei : a goiabeira existe pra dar sombra, pra ser verde, pra dar goiabas - pros passarinhos e mosquinhas e pra gente fazer goiabada ... P: No, no assim. A goiabeira apenas goiaba. F: No, Pai. Ela faz muito mais do que dar goiaba. Ela.. P: Eu no estou dizendo que ela d goiabas. Estou dizendo que ela "goiaba", do verbo goiabar. F: Pai, voc est brincando com as palavras de novo e voc mesmo me disse que a gente no deve inventar palavras - a no ser que seja muito, muito, muito necessrio - como mesmo? - in-dis-pen-s-vel! P: Eu sei, eu sei. Agora indispensvel. F: Por que, Pai? P: Porque a goiabeira no existe pra nada. Quando eu digo que ela d

2
goiabas, d sombra, d verde, eu estou confundindo o que a goiabeira faz com o que outras criaturas fazem dela ou com ela; estou confundindo o que ela faz com o que ela . E o que ela, Pai? Eu j lhe disse: uma goiabeira uma mquina de goiabar. No, Pai. Voc no disse isso! E se dissesse, eu ia ficar muito triste. Chamar uma goiabeira, to verdinha, de mquina! Puxa, Pai, voc... Desculpe, no estou me referindo a mquinas de vidro e metal. Escute, voc j encontrou uma goiabeira completamente sozinha no mato? J. Uma vez no stio da tia Inez, eu passei l por trs, onde ningum vai e achei uma goiabeira enorme, carregadinha e.... J sei, voc se encheu de goiaba. Foi, comi bessa, trouxe uma poro pra casa...e Mame fez goiabada. Voc lembra? possvel. Mas, me conte: como que estava esta goiabeira que voc encontrou no mato? Ela estava assim perto do barranco... O que que ela estava fazendo? Ora, Pai, o que que uma goiabeira pode fazer? Ela fica l, plantada, sei l, balanando com o vento e esperando a chuva... ...e crescendo as razes e dando novos brotos verdinhos ... ...e dando goiaba! Tinha muita goiaba madura, grandona assim, amarelinha! E tinha goiaba verde? Tinha muita - mas essas eu no como porque d dor de barriga. Eu sei. E tinha goiaba no cho, podre, preta. Pai, tinha sim. Mas estas a gente nem olha. A gente no, mas tem muito bichinho que gosta: mosquinha, minhoca, passsarinho...mesmo a prpria goiabeira, no ? A prpria goiabeira? Como isso, Pai? A goiabeira usa as goiabas que ela produz de novo, como uma espcie de adubo, pra crescer. Voc no viu um monte de goiabas podres no cho e algumas j bem escuras e pretas... ... e cheia de bichinho de goiaba... , cheia de bichinho sim, mas uma boa parte daquelas goiabas no so os bichinhos que aproveitam: a prpria goiabeira. Goiabeira come goiaba, Pai? No, no come. Mas aproveita de novo uma boa parte das goiabas que caem e no so aproveitadas por passarinhos e bichinhos e... ...minhocas. , minhocas. por isto que voc diz que a goiabeira "goiaba"? "Goiabar" isto? Quer dizer: aproveitar as goiabas que caem no cho? Tambm isso. Mas voc mesmo disse que a goiabeira d sombra e d flores - voc esqueceu das flores - d goiaba... Pai, voc mesmo disse que no assim! Eu s disse que no devemos confundir o que a goiabeira faz com o que ela .

F: P: F: P: F: P: F. P. F: P: F: P: F: P: F: P: F. P: F: P:

F: P: F: P: F: P: F: P: F: P:

3
F: P: F: E os passarinhos, Pai? Passarinhos so mquinas de passarinhar? So, no so? So. Eu entendo o que voc quer dizer. Voc quer dizer que se a goiabeira no "goiabasse", no reaproveitasse as goiabas do cho...e a luz e o tempo e no desse razes e brotos e no crescesse e fizesse sombra... no serviria de nada nem para os passarinhos e os bichinhos... Se ela no goiabasse, deixava de ser goiabeira. Morria. Pai, da prxima vez que eu chegar perto de uma goiabeira toda goiabada, eu vou falar bem baixinho: "Goiabando a, hein!"

1 Apndice 1: Obteno de pares congnico-resistentes (CR)

________________ A imunogentica da transplantao e a Imunologia em geral dificilmente haveriam progredido sem o desenvolvimento de linhagens de animais que diferem apenas em um locus de histocompatibilidade. Desde que existem mltiplos loci de histocompatibilidade (H-1, H-2, H-3...etc), qualquer transplante alognico envolveria mltiplas formas de incompatibilidade. O ideal, portanto, seria dispor de linhagens onde houvesse diferena em apenas um dos loci H, mantendo-se os demais loci constantes. Por exemplo, obter uma linhagem B.A que fosse idntica a uma linhagem B, mas que tivesse, no locus H-2, as caractersticas de uma linhagem A (Figura 19.1 ).
raa A MHC a/a raa B MHC b/b raa B.A MHC a/a F1(AxB) MHC a/b

Figura 19.1 : Houve um grande interesse em desenvolver linhagens como a representada por B.A na as caractersticas genticas (representadas pela cor) qual fossem todas idnticas a de uma raa B, mas na qual um dos loci de histocompatibilidade, por exemplo o MHC (H-2), fosse idntico raa A. uma ao de Compare a raa B.A com a raa B: elas diferem exclusivamente pelo MHC, formam um par CR no MHC. Uma tal raa, B.A, formaria um par congnico-resistente (par CR) com a raa B. Ela seria congnica com a raa B por diferir dela apenas por um locus e seria dita resistente porque sobreviveria (rejeitaria) ao transplante de tumores da raa B. Na verdade, duas raas isognicas que diferissem apenas em um locus seriam ditas co-isognicas. O termo congnico utilisado porque o processo no seleciona apenas um locus de interesse mas tambm vrios locos vizinhos.

raa A MHC a/a F1(AxB) MHC a/b Tumor da raa B MHC b/b BC2

raa B MHC b/b F1(AxB) MHC a/b a/b e b/b morrem com o tumor a/a rejeita o tumor

Figura 19.2 : Um tumor da raa B implantado em animais da gerao F2 do cruzamento com a raa A rejeitado apenas pelos animais a/a, que sobrevivem. Os animais a/a so, ento, retro-cruzados (backcrossed) com a raa B, como mostrado na Figura 19.3.

2
A Figura 19.3 mostra como os animais a/a, resistentes ao crescimento do tumor b/b, so usados em sucessivos retrocruzamentos (backcrosses) com a raa B. Os retrocruzamentos vo, gradualmente, substituindo os genes da raa A pelos genes da raa B, com exceo do MHC, pois os animais a/a so selecionados para os retrocruzamentos.
F2 da 1 etapa MHC a/a raa B MHC b/b

BC1 MHC a/b Tumor da raa B MHC b/b BC2

BC1 MHC a/b a/b e b/b morrem com o tumor a/a rejeita o tumor

Figura 19.3: O esquema de produoraa B.A prossegue pelo retrocruzamento da de animais selecionados na primeira etapa - que so F2(AxB) resistentes ao tumor b/b e, portanto, de MHC a/a, com animais da raa B, que so de MHC b/b (produzindo as geraes BC1 e BC2 - backcross 1 e 2). A repetio deste procedimento, como ilustrado na Figura 7.12, vai diluindo progressivamente o genoma da raa A com genes da raa B, mas a implantao do tumor permite resgatar, a cada retrocruzamento, os animais de MHC a/a. A implantao do tumor nos animais resultantes dos retrocruzamentos identifica os animais que so homozigticos para a caracterstica desejada (no caso, os animais a/a) selecionando-os para os retrocruzamentos e desprezando os animais restantes (a/b e b/b). Em vez da implantao do tumor, qualquer outro processo de identificao dos animais homozigticos poderia ser utilizado. Por exemplo, um teste sorolgico que identificasse produtos dos genes b na circulao dos animais, identificaria os animais a/b e b/b.

F2 a/a resistente a tumor b/b MHC

raa B b/b

BC2 a/a resistente a tumor b/b MHC a/a MHC

raa B b/b

BC2 a/a resistente a tumor b/b etc

MHC a/a

gerao de BC1 gerao de BC2 implantao de tumor b/b seleo de BC2 resistentes

gerao de BC1 gerao de BC2 implantao de tumor b/b seleo de BC2 resistentes

Figura 19.4: Esquema de produo de raas CR por retrocruzamento (backcrossing). Selecionando-se repetidamente os animais resultantes de retrocruzamentos para uma raa B para caractersticas de uma raa A, pode-se "fabricar" uma raa B.A. Reciprocamente, selecionando-se repetidamente os retrocruzamentos para uma raa A para as caratersticas de uma raa B, pode-se fabricar uma raa A.B. A sofisticao da Imunologia moderna seria impossvel se no existissem painis de raas especiais de animais, principalmente camundongos, selecionadas e mantidas por mtodos imunogenticos.

3
Os pares congnico-resistentes (CR) constituem apenas um exemplo dos recursos que a "fabricao" destas linhagens de animais possibilita.

raa A MHC a/a

raa B MHC b/b

seleo a cada etapa do MHC resistente a/a diluio progressiva do genoma da raa A com o genoma da raa B

a/a a/a a/a

raa B.A MHC da raa A MHC a/a

resto do genoma da raa B

Figura 19.5: Diluio do genoma da raa no desejada por retrocruzamentos sucessivos.