Ministério da Educação

Universidade Tecnológica Federal do Paraná

Curso Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
Campus Toledo

PROJETO 1 – PLANEJAMENTO DE
EXPERIMENTOS

Alunos: Eduardo Geliel 1911325

Professor: Jones Erni Schmitz

Toledo, de 2023.
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1. INTRODUÇÃO
Com o objetivo de analisar a alteração da resposta com a alteração dos fatores e sua
correlação, um pesquisador realizou um experimento de 50 maneiras diferentes e registrou seus
resultados Tabela 1. Os fatores a serem analisados são concentração de cloreto de cálcio, o pH,
a concentração de plasmídeo, o tempo de incubação e a temperatura e como eles afetam a
porcentagem de recuperação de plasmídeo e a porcentagem de remoção de RNA.
Tabela 1 – Resultados obtidos pelo pesquisador nos 50 experimentos.

Fatores Respostas
Concentração Concentração Tempo de Recuperação Remoção
Temperat
de cloreto de pH de plasmídeo incubação de plasmídeo de RNA
ura (°C)
cálcio (M) (g/mL) (min) (%) (%)
1 1,4 7,5 100 50 4 91 88,7
2 1,2 8,5 75 30 12 87,9 93,6
3 1,2 8,5 75 30 23 85,6 94,6
4 1 9,5 100 50 4 0,7 99,3
5 1,4 7,5 50 10 20 83,8 89,6
6 1,4 7,5 50 50 20 84,9 89,4
7 1,2 8,5 40 30 12 79,3 85,5
8 1,2 7 75 30 12 92,2 97,5
9 1,2 8,5 75 30 12 85,3 98,8
10 1 9,5 100 50 20 0,4 100
11 1,4 9,5 50 50 4 10,5 99,7
12 1,2 8,5 75 60 12 77,5 99
13 0,9 8,5 75 30 12 84,4 99
14 1 9,5 50 50 4 0,6 100
15 1,4 9,5 100 10 4 67,7 99,2
16 1 7,5 100 10 4 92,6 97,1
17 1,4 7,5 50 10 4 82,9 98
18 1 7,5 100 10 20 89 97,3
19 1,4 9,5 50 10 20 0 100
20 1 7,5 50 10 20 84,6 99,3
21 1 7,5 50 10 4 80 98,1
22 1,4 7,5 100 10 4 88,3 97,9
23 1 7,5 50 50 4 82,1 97,4
24 1 9,5 50 10 20 22,7 100
25 1,4 9,5 50 50 20 62 99,8
26 1,2 8,5 75 30 12 85,2 98,9
27 1,4 9,5 50 10 4 2 100
28 1,2 10 75 30 12 61 100
29 1,4 7,5 100 10 20 88,2 98,2
30 1 9,5 100 10 4 0 100
31 1,2 8,5 75 30 12 83,6 98,7
32 1,4 7,5 100 50 20 90,4 93
33 1 7,5 100 50 4 91 87,1
34 1,5 8,5 75 30 12 83,4 96
35 1 7,5 50 50 20 77,7 92,5
36 1 9,5 50 50 20 0 100
37 1,2 8,5 75 30 12 84,3 95,7
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Fatores Respostas
Concentração Concentração Tempo de Recuperação Remoção
Temperat
de cloreto de pH de plasmídeo incubação de plasmídeo de RNA
ura (°C)
cálcio (M) (g/mL) (min) (%) (%)
38 1,4 9,5 100 50 4 40,4 98
39 1,2 8,5 75 0 12 83,5 95,4
40 1 9,5 100 10 20 0,3 100
41 1,4 9,5 100 10 20 0 100
42 1,2 8,5 110 30 12 86,3 95,6
43 1 9,5 50 10 4 0,8 100
44 1 7,5 100 50 20 90,5 100
45 1,2 8,5 75 30 12 83,5 95,7
46 1,2 8,5 75 30 12 85,1 95
47 1,2 8,5 75 30 12 84,2 95,2
48 1,4 7,5 50 50 4 81,2 98,5
49 1,4 9,5 100 50 20 62 94
50 1,2 8,5 75 30 1 70,3 100
Fonte: Jones Erni Schmitz
Para isso precisamos calcular os efeitos individuais de cada fator, seus efeitos combinados,
o erro padrão e por fim analisar quais efeitos são realmente significativos para o experimento.

2. RESULTADOS E DISCUSSÃO
Com o objetivo de realizar o calculo dos efeitos devemos começar por separar 32 dos
experimentos para realizar um planejamento fatorial completo 25, como são dois níveis
devemos filtrar dos resultados os que tenham apenas duas variáveis em cada nível. Após isso
atribuímos ‘+’ a uma característica e ‘-’ a outra a fim de se montar a tabela de contraste, Tabela
2.
Tabela 2 – Tabela do planejamento fatorial 25.
Fatores : (-) (+)
Concentração
1 de cloreto de 1 1,4
cálcio (M)
2 pH 7,5 9,5
Concentração
3 de plasmídeo 50 100
(g/mL)
Tempo de
4 10 50
incubação (min)
Temperatura
5 4 20
(°C)
Concentração Concentração Tempo de
Temperatura
Ensaio de cloreto de pH de plasmídeo incubação
(°C)
cálcio (M) (g/mL) (min)
1 + - + + -
4 - + + + -
5 + - - - +
6 + - - + +
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Fatores : (-) (+)

Concentração
1 de cloreto de 1 1,4
cálcio (M)
2 pH 7,5 9,5
Concentração
3 de plasmídeo 50 100
(g/mL)
Tempo de
4 10 50
incubação (min)
Temperatura
5 4 20
(°C)
Concentração Concentração Tempo de
Temperatura
Ensaio de cloreto de pH de plasmídeo incubação
(°C)
cálcio (M) (g/mL) (min)
10 - + + + +
11 + + - + -
14 - + - + -
15 + + + - -
16 - - + - -
17 + - - - -
18 - - + - +
19 + + - - +
20 - - - - +
21 - - - - -
22 + - + - -
23 - - - + -
24 - + - - +
25 + + - + +
27 + + - - -
29 + - + - +
30 - + + - -
32 + - + + +
33 - - + + -
35 - - - + +
36 - + - + +
38 + + + + -
40 - + + - +
41 + + + - +
43 - + - - -
44 - - + + +
48 + - - + -
49 + + + + +
Fonte: Próprio autor.
Com a tabela 2 podemos começar a realizar o calculo dos efeitos, utilizando de um
algoritmo matemático simples. Considerando todos os ‘+’ como 1 e os ‘-’ como -1 montamos
a tabela dos coeficientes de contraste, a primeira coluna será toda de 1 e representará a media,
seguido vem os efeitos dos fatores individuais, que será a mesma coluna da tabela do
planejamento. Para os cofatores, a coluna resultante será a multiplicação da coluna dos fatores
de interesse, a coluna F25 será a multiplicação da coluna do efeito 2 e do efeito 5, a F135 será
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a resultante do produto da 1, 3 e 5, e assim sucessivamente até a completude de todos os 32

efeitos, um planejamento 2k terá 2k efeitos.
O resultado final será uma matriz 32x32, que será transposta e então multiplicada pela
matriz composta pelo resultado dos 32 experimentos selecionados (Tabela 3), pois desejamos
calcular os efeitos sobre as duas respostas, se não, poderíamos multiplicar a matriz transposta
pelo vetor resposta.
Tabela 3 – Matriz com as duas respostas aos 32 experimentos.
Recuperação de Remoção de RNA
plasmídeo (%) (%)

91 88,7
0,7 99,3
83,8 89,6
84,9 89,4
0,4 100
10,5 99,7
0,6 100
67,7 99,2
92,6 97,1
82,9 98
89 97,3
0 100
84,6 99,3
80 98,1
88,3 97,9
82,1 97,4
22,7 100
62 99,8
2 100
88,2 98,2
0 100
90,4 93
91 87,1
77,7 92,5
0 100
40,4 98
0,3 100
0 100
0,8 100
90,5 100
81,2 98,5
62 94
Fonte: Próprio autor.
Dessa multiplicação obtemos um matriz 32x2, dividimos a primeira linha por 32 e as
outras por 16, seguindo o algoritmo matemático, e obteremos o resultado dos efeitos(Tabela 4).
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Tabela 4 – Resultado de todos os efeitos.

Recuperação
Remoção de
Efeito de plasmídeo
RNA (%)
(%)
M 51,509 97,253
F1 13,894 -1,506
F2 -69,256 4,244
F3 8,544 -0,781
F4 5,156 -2,331
F5 1,544 -0,369
F12 13,494 0,431
F13 6,544 0,031
F14 8,531 -0,394
F15 -0,631 -1,631
F23 0,569 -0,344
F24 5,231 1,281
F25 1,544 0,069
F34 -0,119 -1,369
F35 -7,906 2,269
F45 7,256 0,369
F123 8,244 -0,981
F124 7,381 -0,481
F125 -1,606 1,156
F134 -3,669 -1,306
F135 -4,706 0,081
F145 10,881 -0,544
F234 -1,394 0,444
F235 -6,706 -2,594
F245 7,706 -0,869
F345 4,156 1,206
F1234 -3,769 0,556
F1235 -4,581 -0,581
F1245 9,856 -0,131
F1345 -0,094 -1,231
F2345 3,056 -1,731
F12345 1,831 0,531
Fonte: Próprio autor.
De acordo com Neto (2003),
“Admitindo que os efeitos principais e as interações de dois fatores bastam para
descrever adequadamente a superfície de resposta, podemos usar os demais efeitos para
obter uma estimativa do erro experimental nos valores dos efeitos. De acordo com essa
suposição, ... as interações de três ou mais fatores na verdade não existem ... só podem
ser atribuídos às flutuações aleatórias inerentes ao nosso processo, isto é, ao "ruído"
embutido nos valores das respostas”
com isso podemos usar os valores dos efeitos com interação de 3 fatores acima para calcular
o erro embutido nas respostas, uma vez que o experimento não foi realizado em duplicata para
calcular a variância dos resultados.
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Elevando todos os efeitos ao quadrado, fazendo sua média, e tirando a raiz conseguiremos
obter esse valor, de 5,850 para a recuperação do plasmídeo e de 1,094 para a remoção do RNA,
que representa uma estimativa para o erro dos efeitos.
Neto (2003) também diz que é possível calcular se os efeitos são estatisticamente
significativos para a nossa analise se o valor do efeito foi superior ao seu erro estimado
multiplicado pelo valor da distribuição de Student com 2k graus de liberdade, com 95% de
confiança.
Para o nosso caso o valor da distribuição com 32 graus será 1,6939, multiplicando pelo erro
do plasmídeo obteremos o valor de 9,9101, e pelo do RNA 1,8524, os valores de efeitos que
forem maiores que esses resultados serão significativos para a análise. Os efeitos significativos
e seus valores são apresentados na Tabela 5.
Tabela 5 – Efeitos significativos e seus valores calculados.

Recuperação Remoção de
Efeito Efeito
de plasmídeo RNA

Média 51,509 Média 97,253

F1 13,894 F2 4,244
F2 -69,256 F4 -2,331
F12 13,494 F35 2,269
F145 10,881 F235 -2,594
Fonte: Próprio autor.
Com uma análise da grandeza do resultado dos efeitos é possível inferir que o efeito 5
não deva ter significância, podemos então redividir os experimentos de forma a desconsiderar
a variável de temperatura e agrupar os valores de forma a ficarem como um experimento em
duplicata dos outros 4 fatores.
Trabalhamos agora com 2 conjuntos de valores com 16 eventos cada, podemos usar a
variância desses valores para obter uma estimativa absoluta para o erro, para isso calculamos a
variância dos dois resultados para cada evento em individual, fazemos a média, e então
calculamos a raiz desse número.
Desse modo o valor de erro para a recuperação de plasmídeo é de 5,679 e para a
remoção do RNA 1,220, multiplicando pelo valor de t da distribuição de Student com 95% de
confiança, com agora 16 graus de liberdade, obtivemos que para os efeitos serem significantes
devem ser maiores que 9,914 para o plasmídeo e de 2,130 para o RNA, o que não altera o
numero de efeitos a serem considerados como significância.
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Tabela 6 – Resultados dos experimentos reagrupados desconsiderando o efeito da temperatura.

RNA PLASMIDEO
1 98 94 1 40,4 62
2 99,2 100 2 67,7 0
3 99,7 99,8 3 10,5 62
4 100 100 4 0 2
5 88,7 93 5 91 90,4
6 97,9 98,2 6 88,3 88,2
7 89,4 98,5 7 84,9 81,2
8 89,6 98 8 83,8 82,9
9 99,3 100 9 0,7 0,4
10 100 100 10 0 0,3
11 100 100 11 0,6 0
12 100 100 12 22,7 0,8
13 87,1 100 13 91 90,5
14 97,1 97,3 14 92,6 89
15 97,4 92,5 15 82,1 77,7
16 99,3 98,1 16 84,6 80
Fonte: Próprio autor.
Porém vale ressaltar o que Neto (2003) traz sobre esse método,
“... mas é importante reconhecer que neste tratamento do erro estamos combinando
variâncias que diferem por até quatro ordens de grandeza. Na verdade, esse procedimento é
uma violação da hipótese de normalidade dos erros que está na base da maioria dos testes
estatísticos, e deveríamos ter usado alguma transformação das variâncias (em geral,
logarítmica) antes de procurar determinar valores limite.”
que nos lembra sempre de que as hipóteses que assumimos parar tentar descrever o
sistema devem ser sempre levadas em considerações para tentar assumir um modelo que seja
valido na realidade.
Outra forma de analisarmos a significância é analisar os gráficos de probabilidade
normal para os resultados dos experimentos (Imagem 1 e 2), onde podemos ver que os efeitos
de significância estão mais afastados do centro 0 de probabilidade.
Imagem 1 – Gráficos dos valores de recuperação de plasmídeo pela sua probabilidade normalizada.

Fonte: Próprio autor.

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Imagem 2 – Gráficos dos valores de remoção do RNA pela sua probabilidade normalizada.

Fonte: Próprio autor.

3. CONCLUSÃO
Podemos concluir a partir da Tabela 7, que para a recuperação de plasmídeo a alteração da
concentração de Cloreto de Calcio é o fator de maior importância, pois tanto seu efeito sozinho,
que gera um aumento na efetividade de 13,894, seu efeito de interação com o pH, e de interação
com o tempo de incubação e a temperatura são relevantes. A alteração do pH para 9,5 afeta de
forma negativamente a reação em grandes proporções. A alteração nos níveis da concentração
do plasmídeo parece não afetar os resultados.
O que nos leva a opção com melhor resposta seja o experimento ser realizado em
concentração de cálcio igual a 1, no pH de 9,5, sem diferenças para a concentração do
plasmídeo, e maiores investigações para saber se a temperatura e o tempo afetam em qual
direção a resposta.
Tabela 7 – Efeitos significativos para o experimento com os seus valores e erros calculados.

Recuperação
Erro Remoção Erro
de
Efeito Erro padrão padrão Efeito de RNA Erro padrão padrão
plasmídeo
absoluto (%) absoluto
(%)
F1 13,894 ±5,850 ±5,679 F2 4,244 ±1,094 ±1,220
F2 -69,256 ±5,850 ±5,679 F4 -2,331 ±1,094 ±1,220
F12 13,494 ±5,850 ±5,679 F35 2,269 ±1,094 ±1,220
F145 10,881 ±5,850 ±5,679 F235 -2,594 ±1,094 ±1,220
Fonte: Próprio autor.
Para a remoção do RNA a tempo de incubação e o pH são significativos, bem como a
interação entre a concentração do plasmídeo e a temperatura e a interação desses dois com o
pH.
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Analisando as duas respostas juntas podemos ver que o melhor resultado para as duas
variáveis deve ser obtido com o menor tempo de incubação, na concentração de cálcio igual a
1, e pH 9,5.

4. REFERÊNCIAS

NETO, Benício B.; SCARMINIO, Ieda S.; BRUNS, Roy E. Como fazer experimentos: pesquisa
e desenvolvimento na ciência e na indústria. [Digite o Local da Editora]: Grupo A, 2010. E-
book. ISBN 9788577807130. Disponível em:
https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788577807130/.