Controle Microbiológico

de Produtos não estéreis

PESQUISA DE PATÓGENOS
 Pesquisa de Patógenos
Microrganismos a serem pesquisados devido à sua
presença indesejável nas formulações farmacêuticas,
segundo Resolução 481/99:

- Staphylococcus aureus - nas preparações tópicas em

Geral.

- Pseudomonas aeruginosa - preparações tópicas,

principalmente para áea dos olhos.

- Escherichia coli - nas preparações orais.

-Salmonella sp - Nas preparações orais.

-Obs. Pode ser tb interessante a pesquisa de outras

cepas ou grupos microorganismos, tais como coliformes.
 Staphylococcus aureus

• Staphylococcus aureus
– Familia Staphylococcaceae
– Coco Gram (+) cacho de uva
– Anaeróbios facultativos

• Doenças
– Infecções cutâneas
– Infecções oportunistas
– Das vias urinárias
– Sistêmicas potencialmente fatais
 Pseudomonas aeruginosa

• Pseudomonas aeruginosa
– Bacilo Gram (-)
– Anaeróbios facultativos

• Infecta
– Aparelho pulmonar
– Aparelho urinário
– Queimaduras
– Infecções Sanguíneas
 Escherichia coli

• Escherichia coli
– Familia Enterobacteriaceae
– Bacilo Gram (-) flagelado
– Anaeróbios facultativos
– Fermentadores de açúcares
- Lactose (+)

• Doenças
– Gastroenterites
 Salmonella sp

• Salmonella
– Familia Enterobacteriaceae
– Bastonetes Gram (-) flagelado
– Anaeróbios facultativos
– Fermentadores de açúcares

• Sintomas da Salmonelose
– Febre
– Náuseas
– Vômito
– Diarréia
Procedimentos:

-Sofrem pequenas distinções entre os vários

compêndios oficiais, entretanto os aspectos básicos
são mantidos.

- Segue- se apenas com a citação dos diferentes meios

de cultura recomendados.
 Sequência para execução das etapas para realizar
pesquisa de patógenos em amostras de produtos não
estéreis:

- Amostragem matéria-prima, medicamentos ou cosméticos

não estéreis;

- Determinação tomada de ensaio da amostra a ser analisada;

- Enriquecimento não seletivo da amostra;

- Isolamento seletivo utilizando meios cultura seletivos;

- Realização coloração de gram e provas bioquímicas

pertinentes.
 Meios de Enriquecimento

 Tomada de ensaio: 10 g(mL).

 Enriquecimento não seletivo (100 mL):

- Caldo lactose (CL): Escherichia coli e Salmonella sp
- Caldo caseína-soja (TSB): Staphylococcus aureus e
Pseudomonas aeruginosa.

 Ambos incuba: 35 – 37ºC - 24 a 48 horas

 Enriquecimento seletivo para Salmonella sp:

- 10 mL da suspensão resultante do caldo não seletivo para os
caldos tetrationato (100mL) e selenito-cistina (100mL) por 24
horas a 36±1ºC.
 Meios de Diferenciação

- Após enriquecimento seletivo e não-seletivo (Salmonella sp),

alíquotas são transferidas, por repique (estria), para meios de
cultura para isolamento e diferenciação visando a identificação do
microorganismo.
Staphylococcus aureus

• Ágar Baird Parker

– colônias pretas, halo transparente.

 Staphylococcus aureus

Ágar Manitol
Ágar Vogel-Johnson • colônias amarelas, halo
• colônias pretas, halo amarelo amarelo

Meio de
cultura Ágar Manitol
sem
inoculação

Ágar Vogel-Johnson
 Pseudomonas aeruginosa

• Ágar Pseudomonas Base • Ágar Cetrimida

– colônias amareladas a douradas – colônias esverdeadas com
fluorescência

Placa não-
inoculada

Placa inoculada
Pseudomonas aeruginosa
 Pseudomonas aeruginosa

• Ágar Pseudomonas para Fluoresceína (A e C)

– colônias claras e amarelas, com fluorescência amarela.

• Ágar Pseudomonas para Piocianina (B e D)

– colônias esverdeadas, com fluorescência azul.
 Escherichia coli

• Ágar Mac Conkey • Ágar Eosina-Azul de metileno (EMB)

– colônias vermelho-tijolo a púrpura – colônias vermelho-escuras, brilho
– com halo de precipitação de bile metálico
 Escherichia coli
• Ágar Endo
– colônias rosadas a vermelho, brilho metálico.
 Salmonella sp

• Enriquecimento seletivo
– caldo selenito-cistina e tetrationato

• Meio de isolamento
• Ágar sulfito de bismuto
• Ágar Verde Brilhante
– colônias pretas ou esverdeadas
– colônias transparentes
 Teste de promoção de crescimento dos meios

• Verificar a capacidade de promoção de crescimento do

meio de cultura.

• São utilizados microrganismos testes:

– Para TSB (tryptone soya broth) , TSA (tryptone soya

agar) : S.aureus e P. aeruginosa
– Para CL (caldo lactose): E.coli e Salmonella
– Para Sabouraud: C.albicans
Conforme Portaria 348/97 que determina a todos
estabelecimentos produtores de Produtos de Higiene
Pessoal, Cosméticos e Perfumes, o cumprimento das
Diretrizes estabelecidas no Regulamento Técnico -
Manual de Boas Práticas de Fabricação para Produtos de
Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.

TSA (Tryptone Soya Ágar) como meio de

crescimento para bactérias, incubação a 35 a 37º C,
durante 48h.

SDA (Sabouraud Dextrose Ágar) como meio de

crescimento para fungos, incubação a 20-25º C,
durante 7 dias.
 MÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREIS

10g
1mL 1mL

Inativante Inativante Inativante +

+ diluente + diluente diluente
Pote de
90 mL 9 mL 9 mL
creme 10-1 10-2 0,1mL 10-3
0,1mL
0,1mL
10g 10g

TSB CL

fungos bactérias
SAB TSA CETR

Staphylo MAN. Mac SALM

E. coli Salmonella
coccus
Pseudomonas