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Medicina
complementar e alternativa baseada em evidências Hindawi
Volume 2023, artigo ID 6251200, 14 páginas
https://doi.org/10.1155/2023/6251200

Artigo de Pesquisa

Efeito protetor do extrato de semente de Dolichos biflorus em 3T3-L1

Diferenciação de pré-adipócitos e induzida por dieta rica em gordura
Obesidade em Ratos

Kumaraswamy 1 , Nayagam Agnel Arul John,1 Gurunagarajan Sridharan,1

4
Athesh Pemiah Brindha,2 Amer M. Alanazi,3 Kannan RR
Balasubramanian Balamuralikrishnan 5 , Rengasamy, Wen-Chao Liu,6
7
e Arumugam Vijaya Anand
1
Departamento de Bioquímica, Faculdade de Artes e Ciências Srimad Andavan (Autônoma), Filiada à Universidade de Bharathidasan,
Tiruchirappalli 620005, Tamil Nadu, Índia
2
Centro de Pesquisa Avançada em Sistemas Indianos de Medicina (CARISM), SASTRA University, Tanjavur 613401,
Tamil Nadu, Índia
3
Departamento de Química Farmacêutica, Faculdade de Farmácia, King Saud University, Riyadh 11451, Arábia Saudita
4
Laboratório de Produtos Naturais e Química Medicinal (LNPMC), Departamento de Farmacologia, Saveetha Dental College,
Instituto Saveetha de Ciências Médicas e Técnicas (SIMATS), Chennai 600077, Tamil Nadu, Índia
5
Departamento de Ciência Alimentar e Biotecnologia, Faculdade de Ciências da Vida, Sejong University, Seul 05006, República da Coreia
6
Departamento de Ciência Animal, Faculdade de Ciências Agrícolas Costeiras, Guangdong Ocean University,
Zhanjiang 524088, China
7
Departamento de Genética Humana e Biologia Molecular, Universidade de Bharathiar, Coimbatore 641046, Tamil Nadu, Índia

A correspondência deve ser endereçada a Kumaraswamy Athesh; athesh.biosearch@gmail.com

Recebido em 9 de julho de 2022; Revisado em 8 de setembro de 2022; Aceito em 18 de janeiro de 2023; Publicado em 10 de fevereiro de 2023

Editor Acadêmico: Pathirage Kamal Perera

Copyright © 2023 Kumaraswamy Athesh et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob a licença Creative Commons Attribution, que
permite uso, distribuição e reprodução irrestritos em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente citado.

A obesidade é conhecida por ser um dos graves problemas de saúde em todo o mundo, pois sua prevalência continua aumentando e sua
associação com outras doenças crônicas piora. Embora várias abordagens estejam em andamento para prevenir ou tratar a obesidade,
abordagens alternativas são necessárias para combater essa condição crônica devido à eficácia insatisfatória e aos efeitos colaterais adversos
das abordagens existentes. As sementes de Dolichos biforus L. têm sido empregadas como tratamento para perda de peso na medicina popular.
Considerando a necessidade de desenvolver um remédio alternativo seguro para o aumento da obesidade, a presente investigação foi iniciada
para avaliar o potencial antiobesidade e o modo de ação do extrato aquoso da semente de D. biforus (ASEDB) em uma linha celular (3T3-L1 )
e ratos induzidos por dieta rica em gordura (HFD). Para estudos in vitro, as linhagens de células 3T3-L1 foram cultivadas em meio Eagle
modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de meio indutor adipogênico e a influência do extrato (10 µg/mL–500 µg/mL) na viabilidade de
adipócitos 3T3-L1, adipogênese , e a lipólise foi avaliada. Um estudo in vitro revelou manutenção da viabilidade celular, redução do acúmulo de
triglicerídeos (TG) e promoção da lipólise em células 3T3-L1 pelo ASEDB. Após a análise in vitro, os ratos obesos induzidos por HFD foram
tratados com ASEDB em diferentes concentrações (100 mg/kg, 200 mg/kg e 300 mg/kg) por 60 dias e o efeito foi avaliado por meio de vários
parâmetros antropométricos e bioquímicos . Os achados revelaram uma diminuição significativa no peso corporal total, pesos de órgãos, pesos
de gordura e restauração de níveis anormais de glicose, leptina, insulina, marcadores lipídicos e sistema antioxidante ao normal pelo tratamento
com ASEDB. Além disso, a análise de inibição da lipase pancreática de ASEDB revelou um nível modesto de inibição com um valor de IC50 de
213,3 µg/mL. Todos esses achados expuseram que o ASEDB possui potencial antiobesidade pronunciado e exibe seu efeito protetor ao suprimir
a ingestão de alimentos, reduzir a digestão e absorção de gordura, limitar a adipogênese, aumentar a lipólise e aliviar o estresse oxidativo.
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2 Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências
1. Introdução
A obesidade, o principal problema de saúde pública do século 21 ,
é uma condição crônica e complexa de acúmulo excessivo de
gordura corporal que resulta de um desequilíbrio entre energia e
ingestão de alimentos, metabolismo basal e gasto de energia. O
índice de massa corporal (IMC), a métrica determinada a partir do
peso e altura de uma pessoa, categoriza em indivíduos aqueles que
têm IMC de 25 a 29,9 kg/ m2 como sobrepeso e ÿ30 kg/m2 como
obesos [1]. Essa gordura corporal adicional é depositada e está
predisposta a problemas graves de saúde, como dislipidemia, doença
arterial coronariana, diabetes mellitus tipo 2 (T2DM), acidente
vascular cerebral e certas doenças malignas como mama, endométrio
e cólon, o que reduz a expectativa de vida. Além disso, os obesos
têm maiores riscos de dor nas costas, osteoartrite, infertilidade e bem-
estar psicossocial privado [2]. Embora a obesidade seja de etiologia
multifatorial, que é influenciada por variáveis sociais, fisiológicas e
genéticas, acredita-se que o aumento da ingestão calórica de
refeições densas em energia, juntamente com um estilo de vida
sedentário, sejam as principais causas da obesidade na maioria dos
casos [3] . Segundo a OMS, a incidência mundial de obesidade
aumentou três vezes entre 1975 e 2016. Em 2016, também foi
relatado que mais de 340 milhões de crianças e adultos e mais de
1,9 bilhão de adultos eram obesos ou estavam acima do peso. O
mais chocante é que cerca de 38,2 milhões de crianças com menos
de 5 anos se identificaram como obesas ou com sobrepeso [4].
Como o problema está se espalhando como uma epidemia por todo
o mundo e entre todas as faixas etárias ao longo dos anos, impõe-se
uma estratégia promissora para tratá-lo.
Existem várias abordagens atualmente em uso para combater o
sobrepeso e a obesidade, incluindo dieta, exercícios e medicamentos
e, em circunstâncias extremas, cirurgia bariátrica.
No entanto, todas essas abordagens atuais têm certas limitações.
Por exemplo, as modificações do estilo de vida foram declaradas
como tendo uma taxa de desaceleração superior a 85%, ao longo de
5 a 10 anos, se as modificações não fossem continuadas [5]. No caso
da farmacoterapia, as opções são muito menores e o orlistat é o
único medicamento aprovado pela FDA que está atualmente no
mercado, mas que também apresentou efeitos adversos em seu uso
prolongado, como esteatorréia, fatus, incontinência fecal e nervosismo
[6]. A cirurgia bariátrica é geralmente sugerida para pessoas
imensamente obesas, tendo em mente as complicações pós-
operatórias associadas.
Assim, é de suma importância desenvolver uma estratégia alternativa
eficaz e segura para controlar a epidemia de obesidade.
Atualmente, a comunidade científica acredita que revelar as
capacidades antiobesidade dos curandeiros convencionais de
alimentos/plantas pode levar ao desenvolvimento de um novo
medicamento para o controle da obesidade com menos efeitos colaterais.
Dolichos biforus L., pertencente à família Fabaceae, é uma
leguminosa comestível cultivada em áreas subtropicais. Geralmente
é reconhecido como grama de cavalo em inglês e kulthi no Sistema
Indiano de Medicina. É uma erva subereta, ramificada, nativa da
Índia e encontrada até altitudes de 1000 m. Tradicionalmente, suas
sementes têm sido usadas para várias doenças como anti-helmíntico,
expectorante, adstringente, diaforético, diurético, oftálmico e tônico. 100 µg/mL, 250 µg/mL e 500 µg/mL) de 0,2 mL do extratos foram
As sementes têm
foi relatado que possui atividade quimiomoduladora [7], antilitíaca [8],
anti-hepatotóxica [9] e antioxidante [10]. Também está sendo usado
em medicamentos ayurvédicos para o tratamento de medroga
(obesidade), constipação, hemorroidas, hepatomegalia,
esplenomegalia e cálculos renais. Apesar do extrato de água quente
das sementes de D. biforus ter um longo histórico de uso para o
controle local da obesidade, há uma escassez de registros científicos
publicados sobre seu potencial antiobesidade. A partir da pesquisa
na literatura, constatou-se que o potencial antiobesidade do extrato
de solvente orgânico de sementes de D. biforus em si ou em
combinação [11] foi estudado extensivamente. No entanto, não há
dados tão extensos disponíveis para o extrato de água quente
(aquoso). Assim, a investigação atual foi estruturada para avaliar
extensivamente para conhecer a eficácia antiobesidade da planta D.
biforus usando água de semente (ASEDB) em uma linha celular,
adipócitos 3T3-L1 e ratos obesos induzidos por HFD, validando
cientificamente a planta como curandeiro tradicional.
2. Materiais e métodos
2.1. Produtos químicos. DMEM (meio Eagles modificado por
Dulbecco), estreptomicina, penicilina, dexametasona, MTT (brometo
de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio), DMSO
(dimetilsulfóxido), FBS (sebo bovino fetal rum) e 3-isobutil-1-
metilxantinas foram adquiridos da Himedia, Mumbai, Índia. Oil red O,
kit de determinação de glicerol livre, PPL (porcine pancreatic lipase),
insulina comercial e kits de quantificação de leptina ELISA foram
adquiridos da Sigma-Aldrich, EUA. Kits analíticos para determinação
de glicemia, FFA sérico (ácido graxo livre), TG (triglicerídeos), TC
(colesterol total), HDL-C (colesterol de lipoproteína de alta densidade),
ALT (alanina transaminase) e AST transaminase (aspartato
transaminase) foram fornecidos pela Biosystems, Tamil Nadu, Índia.
Todos os outros reagentes de grau analítico usados no presente
estudo foram obtidos da Merck Ltd., Índia.
2.2. Preparação do Extrato. Sementes secas frescas de D. biforus
foram adquiridas no mercado de drogas naturais em Trichy, Índia.
As sementes limpas e secas foram então pulverizadas em pó
minúsculo usando um liquidificador elétrico doméstico. Uma parte da
amostra em pó foi embebida em seis partes de água e fervida com
agitação contínua até que o conteúdo fosse reduzido a um terço do
seu volume original. O extrato resultante após ser filtrado através de
um pano de musselina foi então concentrado usando um banho de
água fervente. O rendimento do extrato seco foi de quase 21,4% (p/
p) e foi mantido em um recipiente hermético e armazenado a 4°C até
o uso posterior.
2.3. Ensaio de Inibição da Lipase Pancreática. O ensaio de inibição
da PPL (lipase pancreática suína) foi feito com base em protocolos
previamente descritos [12–14] com pequenas modificações. O
estoque de PPL (1 mg/mL) foi preparado usando tampão fosfato de
potássio (0,1 mM, pH 6,0) e mantido a -20°C. Para testar a atividade
inibitória, várias dosagens (5 µg/mL, 10 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL,
pré-incubados com
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Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências
0,1 mL de PPL em tampão fosfato de potássio 0,1 mM (pH 7,2), que
contém Tween 80 (0,1%) por 1 hora, a 30°C.
A isso, 0,1 mL de butirato de p-nitrofenil 25 mM em aceto nitrila
(solução de substrato) foi adicionado e a reação química foi iniciada
incubando a mistura de reação a 37°C por 5 min. O controle positivo,
orlistate, também passou pelo protocolo. Após o período de incubação,
a quantidade de p-nitrofenol liberada do p-nitrofenil butirato foi anotada
a 405 nm usando um espectrofotômetro. O controle negativo também
foi medido com e sem a adição de um inibidor.
Utilizando a fórmula seguinte, calculou-se a percentagem de inibição
da lipase.
(B ÿ b)
% de inibição ÿ 100 ÿ × 100, (1)
(A - a)
onde B-atividade com um inibidor; b-controle negativo com inibidor; A-
atividade sem um inibidor; e controle a-negativo sem inibidor.
2.4. Efeitos anti-adipogênicos de ASEDB em adipócitos 3T3-L1
2.4.1. Cultura e diferenciação de pré-adipócitos 3T3-L1.
Os pré-adipócitos 3T3-L1 de camundongos foram adquiridos do
National Center for Cell Science, Índia, e foram cultivados em DMEM
adicionando FBS (10%), 100 UI/mL de penicilina e 100 ÿg/mL de
estreptomicina foram mantidos a 37° C com 5% de CO2. Para
diferenciação de adipócitos, pré-adipócitos pós-confuentes de dois
dias de idade foram incubados em um indutor (consistindo de 0,25 ÿM
de dexa metasona, 0,5 mM de 3-isobutil-1-metilxantina e 10 ÿg/mL de
insulina) suplementado com DMEM por 48 horas (dia 2) e então
mantido em FBS (10%) e insulina (10 ÿg/mL) suplementado com
DMEM por mais 6 dias (dia 8). O meio de cultura foi substituído por
um meio fresco a cada dois dias.
2.4.2. Teste de Viabilidade Celular. A influência dos extratos aquosos
de sementes de D. biforus (ASEDB) na viabilidade de pré-adipócitos
3T3-L1 foi analisada através de um ensaio de MTT [15]. Os pré-
adipócitos 3T3-L1 (1 × 105 células/mL) foram retirados em uma placa
de microtitulação de 96 poços (em triplicata) e tratados com várias
concentrações de ASEDB (10 ÿg/mL, 25 ÿg/mL, 50 ÿg/mL, 100 ÿg /mL,
250 ÿg/mL e 500 ÿg/mL) e incubados em meio de cultura livre de FBS
a 37°C por 2 dias sob 5% de CO2. Em vez de extratos, 0,05% de
DMSO foi adicionado ao grupo controle. Após dois dias, meio fresco
(sem FBS) com MTT (0,5 mg/mL) foi adicionado e incubado a 37°C
por uma hora. Os cristais roxos de formazan desenvolvidos foram
então solubilizados com 100 µL de DMSO e medidos
espectrofotometricamente a 560 nm. A porcentagem de células viáveis
foi determinada por (At/Ac) × 100, onde At e Ac representam a
absorbância do grupo teste e do grupo controle, respectivamente.
2.4.3. Coloração Oil-Red-O. A eficácia do ASEDB na atividade anti-
adipogênica foi avaliada medindo o acúmulo de lipídios nos adipócitos
após a coloração dos lipídios neutros
3
com Oil Red O [14, 16]. Para estudos anti-adipogênicos, as células
3T3-L1 submetidas aos primeiros 2 dias de diferenciação adipogênica
foram tratadas com doses não tóxicas de ASEDB (10 µg/mL, 25 µg/
mL, 50 µg/mL, 100 µg/mL, 250 µg/mL , e 500 µg/mL). As células 3T3-
L1 de controle foram mantidas sem extratos.
Todas estas células foram subsequentemente movidas para um meio
de manutenção durante os quatro dias seguintes. Após 6 dias de
incubação, as células foram submetidas a lavagem com PBS (solução
salina tamponada com fosfato) duas vezes e fixadas com formaldeído
(10%) em PBS por 30 minutos a 37°C . As células foram então lavadas
duas vezes com água destilada e finalmente coradas com Oil Red O
(3 mg/mL em álcool isopropílico 60%) por um período de 1 hora à
temperatura de 25°C . Após 1 hora, o acúmulo de lipídios nas células
foi avaliado microscopicamente. Além disso, o corante que permaneceu
nas células após a eluição com isopropanol (100%) foi quantificado
espectrofotometricamente
a 510 nm.
2.4.4. Ensaio de Liberação de Glicerol. A liberação de glicerol foi
quantificada com base no método relatado anteriormente [17].
Resumidamente, as células 3T3-L1 diferenciadas foram tratadas com
dosagens variadas de ASEDB (10 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL, 100 µg/
mL, 250 µg/mL e 500 µg/mL) e incubadas por 24 horas.
Dez, o reagente de glicerol livre foi misturado aos tubos e a reação foi
deixada em repouso por 5 minutos, com base nas instruções do
fabricante. Água destilada (branco) e padrão de glicerol também foram
tratados de forma semelhante e a absorvância foi medida a 540 nm.
2.5. Efeito do ASEDB nas propriedades antiobesidade
2.5.1. Ratos Experimentais. Ratos albinos machos Wistar pesando
entre 100 e 125 g foram adquiridos da Tamil Nadu Veterinary and
Animal Sciences University, Chennai, Índia, para uso nesta investigação.
Todos os animais foram alojados em gaiolas de polipropileno sob
controles ambientais apropriados (65 ± 5% de umidade, temperatura
de 23 ± 2°C e 12/12 horas de ciclo claro-escuro) e receberam rações
de rato padrão comercialmente disponíveis (fabricadas por Sai Durga
Feeds and Foods, Bengaluru, Índia) usado como ração padrão junto
com acesso ilimitado à água. Os ratos passaram cerca de uma semana
se acostumando com o ambiente de laboratório antes de serem usados
para a investigação.
Todos os experimentos e protocolos realizados neste estudo
cumpriram as diretrizes da OCDE do CPCSEA e foram aprovados pelo
Comitê Institucional de Ética Animal do Srimad Andavan Arts and
Science College, Tiruchirappalli, Índia (Aprovação No: 790/03/ac/
CPCSEA).
2.5.2. Indução da Obesidade e Tratamento. Um total de 40 ratos foram
induzidos com pré-obesidade antes do início do período experimental
original por meio de uma dieta rica em calorias e rica em gordura
(HFD) por 45 dias. A HFD representada em estudos anteriores [14, 18]
compreendia 5% de óleo de milho (45 kcal), 15% de amido de milho
(60 kcal), 20% de sacarose (80 kcal), 20% de caseína (80 kcal) e 35%
sebo bovino (315 kcal) além de mistura de 4% de minerais e 1% de
vitaminas. Após alimentar HFD por 45 dias, 30 ratos
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4 Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências
que foram considerados propensos à obesidade (pesando perto de 250
g) foram escolhidos para estudos antiobesidade. No mesmo período,
outros 6 ratos foram mantidos alimentando-se de pastilhas padrão de
ração para ratos. Os ratos experimentais foram divididos aleatoriamente
em 6 grupos (n ÿ 6). Os ratos alimentados com pellets de ração padrão
serviram para continuar como controle normal (Grupo 1), enquanto os
ratos pré-obesos alimentados com HFD serviram como grupo 2 para o
grupo 6. O Grupo 2 foi mantido como controle obeso/HFD e continuou
comendo HFD sem Tratamento ASEDB. Os grupos 3 a 5 continuaram a
se alimentar com HFD e tratados com 100 mg/kg, 200 mg/kg e 300 mg/
kg de ASEDB, respectivamente. Os animais do grupo 6 receberam a
medicação padrão orlistat (30 mg/kg) além de HFD. As drogas foram
injetadas por via oral através de um tubo de alimentação uma vez ao dia
durante 60 dias.
2.5.3. Avaliação da atividade antiobesidade. O consumo diário de
alimentos [19] e o peso corporal (em um intervalo de 10 dias) de animais
experimentais foram documentados regularmente. Os ratos foram
sacrificados por deslocamento cervical sob anestesia com éter dietílico
no final do período de estudo (60º dia) e o sangue foi coletado do
coração para vários ensaios bioquímicos. Órgãos necessários (rins,
fígado, baço e coração), bem como gorduras (mesentérica, epididimal e
perirrenal) foram separados, lavados em solução salina tamponada,
secos com papel absorvente e pesados imediatamente para obter seus
pesos absolutos.
A área de adipócitos da gordura visceral foi calculada com a ajuda
de um microscópio de luz trinocular Nikon (Eclipse, Ci) equipado com
software de imagem digital de sistema de informação de rede (NIS). O
IMC dos ratos, ou seja, peso corporal em gramas dividido pelo
comprimento corporal em centímetros quadrados, foi determinado e
registrado nos dias inicial e final do experimento [20]. O comprimento
corporal (do nariz ao ânus) e a circunferência da cintura (na maior porção
do estômago) dos ratos experimentais foram medidos com uma fita,
mantendo os animais em uma postura ventral sob anestesia leve de
barbitúrico de sódio (0,1 ml ip de 1%). .
Os níveis séricos de CT, TG, HDL-C, FFA, AST, ALT e glicemia
foram determinados usando kits comerciais. O LDL-C e o VLDL-C foram
determinados pelas fórmulas: LDL-C ÿ TCÿ(HDL-Cÿ(TG/5)); VLDL-Cÿ
soro total TG/5 [21]. A insulina e a leptina foram quantificadas usando
kits ELISA disponíveis comercialmente. Peróxidos lipídicos (LPO) [22],
glutationa reduzida (GSH) [23], superóxido dismutase (SOD) [24] e
catalase [25] foram analisados usando protocolos padrão.
2.6. Análise Estatística. Todos os dados obtidos foram apresentados
como média ± SEM (erro padrão da média), e foram analisados
estatisticamente por ANOVA one-way, que é seguida pelo teste de
escala múltipla de Duncan; <0,05 foi considerado como diferença
estatisticamente signifcativa entre os grupos.
3. Resultados
3.1. Efeito Inibitório da Lipase Pancreática por ASEDB. A ação inibitória
da lipase pancreática suína (PPL) do ASEDB
100
80
IC50 = 9,2 µg/ml
60
Inibição
(%)
40
20
IC50 = 213,3 µg/ml
0
5 10 25 50 100 250 500
Concentração (µg/ml)
ASEDB
Orlistate
Figura 1: Efeito inibitório da lipase pancreática do ASEDB. Os valores
são a média de 3 experimentos; ASEDB–extrato aquoso de semente
de Dolichos biforus L. Orlistat foi usado como controle positivo.
em várias concentrações (5 µg/mL a 500 µg/mL) foi avaliada avaliando
a quebra de p-nitrofenil butirato em p-nitrofenol. A Figura 1 demonstra
que o ASEDB tem um nível substancial de potencial de inibição sobre a
atividade de PPL com IC50 de 213,3 µg/mL quando comparado ao
medicamento padrão orlistat, cujo valor de IC50 encontrado foi de 9,2
µg/mL.
3.2. Efeito anti-adipogênico e lipolítico. Primeiro, para avaliar a
possibilidade de pré-adipócitos 3T3-L1 após exposição a ASEDB, as
células foram tratadas com uma dosagem variada de ASEDB (10 ÿg/mL–
500 ÿg/mL) e os achados observados foram expressos como
porcentagem de viabilidade, comparando a viabilidade celular de controle
negativo (Figura 2(a)). Esses dados deixaram claro que nenhuma das
doses de ASEDB administradas teve impacto na viabilidade das células.
Assim, as dosagens selecionadas de ASEDB (10 ÿg/mLÿ500 ÿg/mL)
foram consideradas não tóxicas em linhagens celulares 3T3-L1 e
consideradas para investigação posterior.
A coloração Oil Red O foi usada para avaliar o potencial anti-
adipogênico do ASEDB. Os achados observados (Figura 2(b)), bem
como fotomicrografias de coloração lipídica (Figura 2(c)), revelaram
claramente que o ASEDB diminuiu o acúmulo de lipídios dependente da
dose durante a diferenciação 3T3-L1. Na dose mais alta de 500 ÿg/mL,
ASEDB exerceu cerca de 35,25 ± 1,37% de redução no acúmulo de
gordura do que as células de controle.
O efeito lipolítico do ASEDB foi avaliado pela estimativa da
quantidade de glicerol liberada dos adipócitos 3T3-L1 diferenciados e os
dados obtidos são apresentados na Figura 2(d). ASEDB mostrou um
nível razoável de atividade lipolítica que foi evidenciado por um aumento
notável (p < 0,05) na liberação de glicerol em aproximadamente 21, 31
e 33% nas doses de 100, 250 e 500 ÿg/mL de ASEDB, respectivamente.
3.3. Efeito antiobesidade de ASEDB em ratos obesos induzidos por HFD
3.3.1. Efeito do ASEDB no Consumo Alimentar. O consumo alimentar
dos grupos experimentais foi determinado subtraindo-se a quantidade
de ração restante da
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Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências 5

120 120

100 100

80 80 ** **
60
controle)
Red-
Oil-
(%
de
O

Viabilidade
controle)
celular
(%
de

60

40 40

20 20

0 0
Controle 10 25 50 100 250 500 Controle 10 25 50 100 250 500

Concentração (µg/mL) Concentrações (µg/mL)

(a) (b)
200
180
160
140 ** **
**
120
Liberação
controle)
glicerol
(%
de
de
100
80
60
40
Ao controle 20
0
Controle 10 25 50 100 250 500

Concentrações (µg/dL)

10 µg/mL 25 µg/mL

50 µg/mL 100 µg/mL

250 µg/mL 500 µg/mL

(c) (d)

Figura 2: Efeito anti-adipogênico e lipolítico de ASEDB em adipócitos 3T3-L1: (a) viabilidade celular, (b) conteúdo lipídico intracelular, (c)
fotografias microscópicas de coloração Oil-Red-O e (d) liberação de glicerol . ASEDB–extrato aquoso de semente de Dolichos biforus L. Os valores são os
média ± SEM (n ÿ 3). ÿÿp < 0,05, significativamente diferente do grupo controle.

ração pré-pesada, a cada 24 horas por gaiola e o recebido
os dados são representados na Figura 3 como ingestão alimentar média. Te dados
indicaram que animais alimentados com HFD consumiram significativamente mais
alimentos em média do que animais alimentados com ND.
A administração de ASEDB junto com HFD, no entanto, mostrou
uma ligeira supressão da ingestão de alimentos, sem mostrar qualquer variação
dose-dependente significativa. No entanto, o tratamento com orlistat
os ratos do grupo 6 apresentaram consumo alimentar significativamente menor (p
< 0,05) do que os ratos tratados com ASEDB.
3.3.2. Influência do ASEDB no Peso Corporal, Peso do Almofada de Gordura,
Peso dos Órgãos, Área de Adipócitos, IMC e Circunferência da Cintura (CC). Um
peso corporal inicial do experimento
modelos foram observados no primeiro dia, seguido pelas mudanças
naqueles pesos trazidos pela suplementação ASEDB;
essas alterações foram documentadas uma vez a cada 10 dias. Os resultados
obtidos mostraram que houve um aumento significativo no ganho de peso corporal
em ratos de controle HFD (Grupo 2)
ao combinar com os ratos de controle normais (Grupo 1). No
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6 Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências
30
* * * *
25 * #
# #
# #
Alimentos
Ingestão
Média
rato/
(gm/
dia)
de
**
**
** **
20
15
012345678
Semana
Grupo 1 Grupo 4
Grupo 2 Grupo 5
Grupo 3 Grupo 6
Figura 3: Níveis de ingestão alimentar média em ratos experimentais. Grupo
1–alimentado com ND; grupo 2 – alimentado com HFD; grupo 3–HFD +ASEDB
(100mg/kg peso corporal); grupo 4–HFD +ASEDB (200mg/kg pc); grupo
5–HFD +ASEDB (300mg/kg peso corporal); grupo 6–HFD + orlistat (30 mg/kg
Pb); ND–dieta normal; HFD-dieta rica em gordura; ASEDB-extrato aquoso de semente
de Dolichos biforus L; os valores são a média de 6 ratos; ÿp < 0,05, significativamente
diferente do grupo 1; ÿÿp < 0,01, significativamente diferente de
#
grupo 2; p < 0,05, grupo 3, 4 e 5 significativamente diferente do grupo 2;
sem diferenças significativas entre os grupos tratados com ASEDB (grupo 3, 4,
e 5).
60º dia do período experimental, os animais do grupo 2
mostrou aproximadamente 15% a mais de ganho de peso do que o grupo 1
animais. No entanto, o tratamento com várias dosagens de
AEDB (100 mg/kg, 200 mg/kg e 300 mg/kg PC) redução significativa (p <
0,05) foi observada na porcentagem
ganho de peso corporal dos animais são proporcionais à dose
quando comparados a ratos de controle HFD. área de adipócito, a
pesos do fígado, coração, rim e baço, bem como o
pesos de gordura mesentérica, perirrenal e retroperitoneal,
também foram observados como aumentados em HFD alimentados, não tratados
ratos, mas diminuiu drasticamente (p < 0,05) em ASEDB-tratados
ratos de forma dose-confiável (Figura 4).
O IMC e a CC dos animais foram medidos em dias
1 e 60 e os dados encontrados estão representados na Figura 5. Quando
em comparação com ratos obesos que receberam HFD sem
recebendo algum tratamento (Grupo 2), a administração de
ASEDB mais HFD diminuiu significativamente o IMC dos ratos e
WC proporcional à concentração.
3.3.3. Efeito de ASEDB em diferentes parâmetros bioquímicos.
O efeito do ASEDB na glicemia, leptina e insulina
níveis nos animais é dado na Tabela 1. Os níveis aumentados
de glicose, leptina e insulina encontrados em ratos induzidos por HFD
retornaram eficientemente a níveis quase normais em animais tratados
com ASEDB. Os dados sobre o efeito do ASEDB no fígado
os triglicerídeos e os perfis lipídicos séricos também são dados na Tabela
1. A alimentação com HFD para os animais experimentais aumentou o
níveis de triglicerídeos hepáticos e séricos, AGL, CT, LDL-C,
e VLDL-C, enquanto o HDL-C foi reduzido.
No entanto, as administrações da ASEDB efetivamente restauraram
lipídios séricos e triglicerídeos hepáticos à normalidade em
proporcional à dosagem. Te AST e ALT mostraram elevação
níveis no soro de ratos alimentados com HFD do que ratos normais.
No entanto, no tratamento com ASEDB, essas alterações foram revertidas
* *
ao normal, dose-dependente (Tabela 1).
#
**
** **
3.3.4. Efeito do ASEDB no status antioxidante hepático.
Os dados obtidos sobre o status antioxidante em tecidos hepáticos de
Ratos obesos alimentados com HFD revelaram uma elevação significativa
na peroxidação de lipídios e depleção no nível de GSH e
atividades de antioxidantes enzimáticos, como SOD e CAT.
No entanto, as análises de dados de ratos HFD tratados com
ASEDB mostraram níveis melhorados dessas alterações em
uma forma dose-confiável (Tabela 2).
4. Discussão
A obesidade está atingindo proporções epidêmicas em todo o mundo e tem
levou a um aumento no ônus dos cuidados de saúde, um declínio na vida
expectativa de vida e muitos outros problemas socioeconômicos. é
epidemia de obesidade alerta o público e os pesquisadores tradicionais
para a necessidade de aumentar a eficácia das terapias
disponível. No presente estudo, estudamos as propriedades anti-obesidade
do ASEDB na diferenciação de 3T3-L1
pré-adipócitos e obesidade induzida por HFD no
ratos experimentais.
Embora inúmeros fatores possam ser responsáveis pelo
patogênese da obesidade, a disponibilidade de alimentos ricos em energia
e o consumo excessivo de calorias são os principais
contribuintes para a obesidade em casos máximos [26]. Gorduras dietéticas
são compostos principalmente de TGs mistos que são decompostos
pela lipase pancreática (PL) e servem como a principal fonte de
calorias extras em relação a outros nutrientes. Portanto, a redução da
atividade do PL e também a redução da digestão e absorção da gordura
dietética do intestino são
as estratégias fundamentais na tentativa terapêutica de
reduzir a ingestão excessiva de energia [27]. Até agora, orlistat,
que é derivado de Streptomyces toxytricini, é o único
droga disponível no mercado para inibir a atividade de PL. essa droga
pode reduzir a absorção de gordura em cerca de 30%. No entanto, seu uso é
limitado porque seu uso prolongado pode resultar em efeitos colaterais
incluindo manchas oleosas, esteatorreia, urgência fecal e
inchaço [28, 29]. Portanto, a busca por um inibidor de PL seguro é
ainda em andamento e muitos pesquisadores nos últimos dias rastreados
centenas de produtos naturais para possível inibição da lipase
efeitos. Na presente investigação, analisamos a capacidade de inibição da
lipase pancreática do ASEDB e os dados encontrados
expôs que ASEDB inibiu PL moderadamente em diferentes
concentrações quando comparadas com a droga padrão
orlistat. Ainda que o ASEDB não tenha sido mais efetivo em
inibindo a atividade da lipase do que o orlistat, seu efeito foi superior
ao de muitas outras plantas dietéticas que foram relatadas
anteriormente [30]. Considerando que os metabólitos secundários de
ASEDB, como taninos, saponinas, polifenóis ou triterpenos, têm uma
capacidade bem estabelecida de inibir
lipases [31-33], este efeito inibitório de ASEDB pode ser
mediada por esses metabólitos secundários.
A obesidade se destaca pelo acúmulo de
calorias no tecido adiposo, que é composto principalmente por
Machine Translated by Google

Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências 7

50 16 #
# 14
40 #
#
# 12
30
10 *
20 peso
(g) *
* 8
Ganho
peso
(%)
de

10 *
* 6 **
# **
0 **
** ** ** 4
1 10 20 30 40 50 60 *
-10 Dia 2
**
0
-20
Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo
Grupo 1 Grupo 2 1 2 3 4 5 6
Grupo 3 Grupo 4
WAT mesentérico
Grupo 5 Grupo 6
WAT perirrenal

WAT epididimal

(a) (b)
120000 12
#
100000 # 10

80000 8
*
* peso
(g)

**
60000 6
adipócitos
(µm2 )
Área
dos

**
40000 4
#
20000 2 # *
# * **
* ** **

0 0

Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo
1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6

Fígado Coração

Rim Baço

(c) (d)

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3

Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6

(e)

Figura 4: Efeito de ASEDB em (a) peso corporal; (b) peso do coxim adiposo; (c) área de adipócito; (d) pesos dos órgãos; e (e) imagens microscópicas
de adipócitos mostrando variações na área de adipócitos entre diferentes grupos. WAT–tecido adiposo branco; ASEDB–extrato aquoso da semente
#
de Dolichos biforus L.; os valores são a média ± SEM de 6 ratos; p < 0,05, significativamente diferente do grupo 1; ÿp < 0,05, significativamente
diferente do grupo 2; ÿÿp < 0,01, significativamente diferente do grupo 2.
Machine Translated by Google

8 Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências

0,8 30 #

0,7 #
25 * * **
#
0,6 *
# * ** **
** 20
0,5
(cm)
WC

cm2 )
IMC
(g/
0,4 15

0,3
10
0,2
5
0,1

0 0

Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo
1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6

Inicial Inicial
Final Final
(a) (b)

Figura 5: Efeito do ASEDB em (a) índice de massa corporal; (b) circunferência da cintura de ratos experimentais. Os valores são a média ± SEM (n ÿ 6);
#
diferença significativa do controle normal (grupo 1) em p < 0,01; ÿdiferença significativa do controle HFD (grupo 2) em p < 0,05; ÿÿDiferença signifcativa do controle
HFD (grupo 2) em p < 0,01.

Tabela 1: Efeito do ASEDB em diferentes parâmetros bioquímicos.

Parâmetros Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6

Glicose (mg/dL) 71,08 ± 1,65 149,16 ± 2,58# 125,84 ± 1,67 106,43 ± 1,82 93,28 ± 1,87ÿ 76,52 ± 2,12ÿÿ
Insulina (µIU/mL) 3,42 ± 0,20 7,35 ± 0,22# 6,55 ± 0,16 5,61 ± 0,23 5,02 ± 0,16ÿ 4,04 ± 0,25ÿÿ
Leptina (ng/mL) 3,12 ± 0,24 7,56 ± 0,32# 6,36 ± 0,38 5,63 ± 0,36 4,95 ± 0,18ÿ 3,83 ± 0,17ÿÿ
TG hepático (mg/g de tecido) 9,58 ± 0,48 18,02 ± 0,49# 16,22 ± 0,61 15,33 ± 0,52 14,54 ± 0,13ÿ 11,26 ± 0,23ÿÿ
TG sérico (mg/dL) 73,85 ± 1,92 169,24 ± 2,54# 146,34 ± 1,77 127,92 ± 2,69 114,47 ± 1,93ÿ 92,19 ± 1,47ÿÿ
AGL (mg/dL) 20,12 ± 2,08 46,71 ± 1,89# 34,86 ± 1,20 32,80 ± 1,71 29,56 ± 2,32ÿ 21,90 ± 1,03ÿÿ
CT (mg/dL) 98,02 ± 1,41 174,16 ± 2,48 158,31 ± 1,96 135,71 ± 1,98 108,65 ± 1,96ÿ 99,54 ± 1,59ÿÿ
HDL-C (mg/dL) 67,28 ± 0,98 # 43,05 ± 46,93 ± 0,88 49,21 ± 1,32 53,91 ± 0,91 ÿ 58,99 ± 1,25ÿÿ
LDL-C (mg/dL) 42,15 ± 1,66 0,71# 157,55 ± 132,43 ± 1,91 103,48 ± 1,24 ÿ 73,60 ± 1,58ÿ 57,33 ± 1,34ÿÿ
VLDL-C (mg/dL) 15,25 ± 0,52 1,43# 33,16 ± 31,28 ± 1,02 25,58 ± 1,14 22,09 ± 0,63 ÿ 17,08 ± 0,59ÿÿ
ALT (U/L) 39,23 ± 1,04 1,83# 74,19 ± 57,18 ± 1,29 51,03 ± 0,88 45,73 ± 0,93ÿ 43,89 ± 1,27ÿÿ
AST (U/L) 67,83 ± 1,47 0,80 # 150,56 ± 1,32# 135,79 ± 0,62 121,69 ± 1,13 102,06 ± 1,34ÿ 79,63 ± 1,46ÿÿ
#
Os valores são expressos em média ± SEM (n ÿ 6); p < diferem significativamente do controle normal em p < 0,01; ÿdiferem significativamente do grupo tratado com HFD em
0,05; ÿÿdiferença significativa do grupo tratado com HFD em p < 0,01.

células de gordura. Porque esta expansão da massa adiposa está associada
com hiperplasia e hipertrofia, a eciência de
O ASEDB foi estudado sobre as progressões da proliferação
do adipócito e diferenciação com pré-adipócitos 3T3-L1. Linha celular
3T3-L1, desenvolvida a partir de murino Swiss
Células 3T3, é um modelo bem conhecido para estudar a adipogênese
e obesidade [14]. Essas células exibem uma morfologia semelhante a
fbroblasto e, em condições adequadas, sofrem diferenciação (o processo
também conhecido como adipogênese) e se desenvolvem
em adipócitos maduros [34, 35]. Primeiro examinamos o efeito
de várias concentrações de ASEDB no pré-adipócito 3T3-L1
viabilidade. Conforme revelado na Figura 2(a), uma redução insignificante
na viabilidade celular foi notada conforme a concentração
aumentou, mas ainda assim, a viabilidade da célula foi mantida em
acima de 95% para todas as concentrações administradas. Portanto,
essas concentrações foram tomadas como doses não citotóxicas e
foram usados para um estudo mais aprofundado.
Os pré-adipócitos 3T3-L1 foram expostos a um
meio indutor adipogênico e o mesmo foi tratado
com várias doses de ASEDB. Dez, as concentrações de
acúmulo lipídico intracelular em adipócitos 3T3-L1 em maturação
foram medidos. Os pré-adipócitos 3T3-L1 possuem a
capacidade de acumulação de triglicerídeos na diferenciação. Óleo
Os resultados da coloração Red O mostraram que o ASEDB diminuiu o
tamanho e número de gotículas lipídicas de maneira dose-dependente
e indica a atividade inibitória sobre o acúmulo de
lipídios em adipócitos 3T3-L1 diferenciados usando ASEDB. Como
o mecanismo do potencial antiobesidade depende principalmente
sobre o equilíbrio entre lipólise e lipogênese [17, 36],
então estudamos o efeito lipolítico do ASEDB em
adipócitos 3T3-L1. Os adipócitos liberam glicerol no
meio proporcional à hidrólise dos triglicerídeos, e este
liberação foi significativamente elevada após a
tratamento de adipócitos 3T3-L1 amadurecidos com ASEDB,
expressando os efeitos antiadipogênicos. As descobertas do
presente estudo estão de acordo com o relatado anteriormente
estudo [11]. A diferenciação dos adipócitos é promovida por uma
cascata de fatores de transcrição agindo sequencialmente. Da mesma maneira,
A lipólise também foi identificada como sendo regulada pela expressão
de genes associados com a lipase hormônio-sensível e o
oxidação de ácidos graxos. Presume-se que o ASEDB inibe
o desenvolvimento, bem como o acúmulo de gordura nas células por
obstruindo a proliferação e diferenciação de adipócitos, promovendo a
lipólise, regulando a expressão de
 grupo
em
p
<
0,01. Os
valores
são
expressos
em
média
±
SEM
(n
ÿ6);
#difere
significativamente
do
controle
normal
em
p<
0,01;
ÿdiferem
significativamente
do
grupo
tratado
com
HFD
em
p
<
0,05;
ÿÿdiferença
significativa
do
tratado
com
HFD
CAT
(µmoles
de
HO2
2
utilizados/
min/
mg
de
proteína) SOD
(µmols
de
epinefrina
oxidada/
mg
de
proteína) GSH
(mg/
g
de
tecido) LPO
(n
moles
de
MDA
formado/
g
tecido) Parâmetros
Tabela
2:
Efeito
do
ASEDB
nos
parâmetros
antioxidantes
enzimáticos
e
não
enzimáticos
hepáticos.
34,72
±
1,29 4,47
±
0,05
78,25
±
1,04
5,06
±
0,19
Grupo
1
Grupo
2
2,33
±
0,06#
1,98
±
0,07#
14,27
±
0,84#
144,56
±
1,72#
2,51
±
0,11
137,42
±
1,31
17,31
±
0,71
2,35
±
0,15
Grupo
3
3,56
±
0,10
118,78
±
1,52
20,50
±
0,94
2,71
±
0,23
Grupo
4
24,41
±
1,32ÿ
Grupo
5
3,17
±
0,24ÿ
3,98
±
0,07ÿ
112,12
±
1,18ÿ
30,07
±
1,23ÿÿ 97,42
±
1,42ÿÿ
4,23
±
0,26ÿÿ 4,25
±
0,18ÿÿ
Grupo
6
9 Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências
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10
genes associados à lipólise. Além disso, estudos aprofundados de
expressão gênica são necessários para confirmar isso. Muitos
compostos naturais, como galato de epigalocatequina (EGCG),
ginkgolide C, capsaicina, resveratrol e curcumina também foram
relatados para inibir a adipogênese e induzir o processo de lipólise
através da expressão gênica regulada [34].
Se uma pessoa consome calorias adicionais, ela as gasta ou
gasta; essas calorias adicionais são depositadas como tecidos
adiposos e resultam em ganho de peso. Assim, o ganho de peso
corporal é avaliado como um dos primeiros sinais da progressão da
obesidade [37]. Neste estudo, a alimentação com HFD resultou em
15,3% a mais de ganho de peso em ratos controle obesos (grupo 2)
do que em ratos controles normais (grupo 1) durante 60 dias. O
aumento do peso corporal nos animais do grupo 2 pode estar
associado ao balanço energético e à deposição de gordura nas regiões
viscerais causada pela alimentação HFD. Pelo contrário, a
suplementação de ASEDB em adição ao HFD reduziu
significativamente (p < 0,05) o percentual de ganho de peso após a
dose para ratos do grupo 2 alimentados com HFD. As reduções no
peso corporal podem estar parcialmente associadas à ingestão
suprimida de alimentos, conforme evidenciado neste estudo em ratos
tratados com ASEDB. Além disso, a ingestão de alimentos não foi
drasticamente suprimida nesses ratos tratados com ASEDB, e sua ingestãoassim a regulação
Isso descarta a possibilidade de provocação de toxicidade induzida
por ASEDB. Estudos anteriores também relataram sua natureza não
tóxica e seu uso seguro como fonte de alimento [38].
A obesidade apresenta um aumento no número e tamanho dos
adipócitos no nível celular devido à deposição desnecessária de
gordura [39]. Assim, a medição dos pesos do coxim adiposo ajudaria
a entender a magnitude da obesidade.
Neste estudo, observamos que os pesos foram aumentados nas
bolsas de gordura retroperitoneal, mesentérica e perirrenal nos ratos
controle obesos (alimentados com HFD) quando comparados aos
ratos controles normais. No entanto, a administração de ASEDB
reduziu significativamente (p < 0,05) o peso dessas bolsas de gordura.
Além disso, a medição do tamanho dos adipócitos em termos de sua
área após 9 semanas de tratamento com ASEDB mostrou uma
diminuição substancial na área dos adipócitos após a dose. A
determinação do peso dos órgãos pode ser outro índice importante da
gravidade da obesidade, pois o excesso de calorias se deposita
lentamente em órgãos como fígado, coração, rins e baço, além dos
tecidos adiposos [40]. Verificou-se que a alimentação com HFD
resultou em cerca de 46%, 39%, 41% e 44% a mais de ganho de peso
no fígado, rim, coração e baço de ratos controle obesos (grupo 2),
respectivamente, do que ratos alimentados com dieta normal (grupo
1). No entanto, o tratamento com ASEDB mostrou uma diminuição
significativa (p < 0,05) no peso do órgão de maneira dose-dependente.
Foi relatado anteriormente que exposições contínuas a HFD diminuem
a taxa metabólica de repouso, bem como a termogênese, promovendo
assim o acúmulo de triglicerídeos nas regiões abdominais [41].
Os métodos antropométricos, como IMC e CC, são abordagens
práticas padrão, recomendadas para diagnóstico, avaliação de risco e
rastreamento exato da distribuição geral da gordura corporal. A
avaliação da obesidade central (adiposidade visceral) por meio do
IMC e da CC ajuda a prever problemas metabólicos como doenças
cardiovasculares, aterosclerose, hipertensão e dislipidemia [42]. Foi
relatado que um aumento de 1 cm na CC aumenta a ameaça do
despertar da hipertensão em 2,49 vezes [43]. A ascensão em
Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências
A CC também é um preditor útil para a progressão subsequente do
DM2 [44]. Neste estudo, observou-se que a HFD administrada por 60
dias resulta em aumento considerável do IMC e da CC; no entanto, o
tratamento com ASEDB os trouxe de volta significativamente (p <
0,05) proporcionalmente à dose. Esse declínio no IMC e na CC está
bem correlacionado com o acúmulo reduzido de gordura nas bolsas
de gordura e nos órgãos viscerais.
O tecido adiposo atua como um órgão endócrino dinâmico, que
secreta várias adipocinas biologicamente ativas, incluindo a leptina,
produto da citocina do gene ob. Neste estudo, observa-se aumento
significativo (p < 0,05) dos níveis de leptina nos ratos obesos em
relação aos normais. Verificou-se que o nível de leptina está
positivamente relacionado com a proporção de depósitos de gordura
nos adipócitos brancos [45, 46]. Assim, a concentração elevada de
leptina no soro é um marcador de aumento da massa de gordura
corporal. Em condições normais, a leptina circulante sinaliza as altas
reservas de energia da periferia para o hipotálamo, regulando assim
o metabolismo energético pela supressão do apetite. No entanto, em
condições de obesidade, níveis elevados de leptina não parecem
desempenhar esse papel devido à resistência à leptina. Foi proposto
que níveis elevados de leptina na obesidade podem causar
dessensibilização dos receptores de leptina no hipotálamo, perturbando
de alimentos aindaafoi
jusante
maiordo
doconsumo
que a dosderatos
energia e peso corporal
de controle normais.
[47]. Níveis elevados de leptina foram significativamente reduzidos
com a ingestão de ASEDB, proporcionalmente à dose. Isso indica que
a ingestão de ASEDB é eficaz em refinar as mudanças na massa
gorda e nos níveis de leptina, afetados pela ingestão de HFD.
O sobrepeso e a obesidade têm uma forte associação com o DM2
e isso pode ser devido à resistência à insulina (RI) [48]. Em condições
de obesidade, os adipócitos aumentados secretam comparativamente
mais citocinas pró-inflamatórias (leptina, TNF ÿ e IL-6), o que causa
RI [32, 49]. A RI resultante na obesidade afeta, portanto, a ingestão
de glicose dependente de insulina pelas células hepáticas ou
musculares e contribui para níveis elevados de glicose no sangue. As
células ÿ do pâncreas continuamente sintetizam e secretam insulina
em resposta ao aumento dos níveis de glicose no sangue, o que, por
sua vez, contribui para a hiperinsulinemia. IR, hiperglicemia e
hiperinsulinemia são frequentemente associadas à obesidade [50]. Os
altos níveis obtidos de glicose no sangue e insulina sérica no estudo
atual também confirmaram hiperglicemia e hiperinsulinemia em ratos
obesos. No entanto, em ratos tratados com ASEDB, os níveis de
glicose e insulina pareceram ser significativamente (p < 0,05) reduzidos
em uma dose maior. O nível reduzido de leptina observado na ingestão
de ASEDB pode ter melhorado a sensibilidade à insulina, o que está
bem correlacionado com os níveis reduzidos de glicose e insulina no
sangue em animais tratados com ASEDB.
A dislipidemia é uma das principais preocupações da obesidade,
pois aumenta significativamente o risco de DCV, DM2 e certos tipos
de câncer. Evidências crescentes sugerem que a RI é a ligação mais
provável entre obesidade e dislipidemia metabólica associada à
obesidade [51]. Os principais padrões em pacientes com dislipidemia
são suas altas concentrações de perfis lipídicos. No presente estudo,
também encontramos níveis significativamente elevados (p < 0,01)
de CT, TG, LDL-C, VLDL-C, FFA e níveis reduzidos de HDL-C em
ratos obesos do que no grupo controle. FFAs elevados em um estado
obeso são principalmente um resultado da liberação aumentada de
FFA da gordura adiposa
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devido à resistência dos adipócitos à ação anti-lipólise da insulina e à
incapacidade dos adipócitos de reutilizar os AGL de forma eficiente
[52]. A hipertrigliceridemia na obesidade é parcialmente devida ao
aumento dos fluxos de AGL no fígado e seu acúmulo como TG. Isso
causa síntese elevada de grandes VLDL pelos hepatócitos, o que
interrompe a lipólise dos quilomícrons devido à competição pela
lipoproteína lipase (LPL). Nessas circunstâncias de concentração
aumentada e depuração retardada de VLDL, a proteína de
transferência de éster de colesterol (CETP) promove o intercâmbio de
ésteres de colesterol em HDL e LDL com TGs em VLDL. Essa troca
também resulta em partículas VLDL enriquecidas com éster de
colesterol aumentadas e concentrações reduzidas de HDL-C [53].
A administração de ASEDB melhorou a dislipidemia revertendo
substancialmente os níveis alterados desses perfis lipídicos ao normal
de uma maneira baseada na dose. A reversão observada dos níveis
lipídicos pode ser devida às ações dos fitoconstituintes presentes nos
extratos no aumento da saciedade, bem como na supressão da
digestão e absorção dos triglicerídeos da dieta através da inibição da
atividade da lipase.
A esteatose hepática (fígado gorduroso) é uma condição patológica
decorrente da deposição de grande massa adiposa no fígado que
ocorre com frequência em pacientes obesos. Embora a esteatose
hepática seja uma condição multifatorial, a RI é um requisito primordial
para o acúmulo de gordura hepatocelular. A IR na obesidade pode
resultar no aumento da lipólise de TG no tecido adiposo e leva a uma
maior acessibilidade dos FFAs para uma síntese e armazenamento
aprimorados de triglicerídeos nas células hepáticas [54]. Nossos dados
mostraram níveis elevados de TGs hepáticos em ratos de controle
alimentados com HFD, sugerindo assim o desenvolvimento de um
fígado gorduroso. No entanto, a suplementação de ASEDB em adição
ao HFD melhorou o fígado gorduroso, anulando a elevação de TG no
fígado. ALT e AST, as enzimas marcadoras hepáticas, também foram
observadas para aumentar nos ratos de controle HFD e este aumento
pode ser atribuído ao fígado gorduroso e lesão necro-inflamatória
hepática induzida por estresse oxidativo após alimentação contínua
de HFD. Níveis elevados de AST e ALT são o índice comum de fígado
gorduroso e hepatotoxicidade associada [55].
Considerando que, essas enzimas hepáticas elevadas foram
consideravelmente (p < 0,05) restauradas nos ratos administrados
com ASEDB, sugerindo a recuperação da lesão necro-inflamatória,
causada por fígado gorduroso induzido por HFD.
A ingestão excessiva de dietas ricas em gordura é capaz de gerar
espécies reativas de oxigênio (ROS) devido ao metabolismo alterado
do oxigênio. Peroxidação lipídica excessiva e ROS utilizarão as
enzimas e vitaminas antioxidantes do corpo [56, 57], resultando na
depleção dessas substâncias protetoras e levando ao estresse
oxidativo e danos celulares mediados por ROS. O estresse oxidativo
crônico é um fator importante na patogênese da obesidade e suas
morbidades relacionadas [58]. No estudo atual, testemunhamos maior
teor de malondialdeído (MDA), que é o biomarcador comum para
estresse oxidativo e produto final da peroxidação lipídica [59], em
tecidos hepáticos de ratos obesos do que em ratos normais alimentados
com dieta padrão de laboratório, indicando HFD estresse oxidativo
induzido em ratos obesos. A administração de ASEDB, no entanto,
preveniu a peroxidação lipídica que foi evidenciada por uma quantidade
substancialmente diminuída de MDA no fígado dos ratos tratados. O
nível de glutationa (GSH), um importante antioxidante citosólico, foi
11
depletado em ratos obesos do que o grupo controle; no entanto, em
ratos tratados com ASEDB, a concentração de GSH foi restaurada
significativamente (p < 0,05). A depleção de GSH em ratos obesos
pode ser compreensível porque sempre que as células experimentam
estresse oxidativo, o GSH pode ser utilizado em grandes quantidades
para extinguir diretamente as ROS, como os peróxidos lipídicos. As
células também possuem outro conjunto de poderosas enzimas
antioxidantes chamadas SOD e CAT para responder aos ânions
superóxidos que são gerados durante o dano oxidativo. Os SODs
respondem a esses ânions superóxidos (O2 •ÿ ) convertendo-os em
H2O2 , enquanto o CAT converte esse H2O2 tóxico em O2 e H2O [60].
Detectamos níveis significativamente diminuídos de ambas as
enzimas antioxidantes em ratos controle obesos do que em controle e
a redução pode ser devido ao armazenamento rápido e maior dessas
enzimas, em oposição aos radicais livres produzidos durante a
progressão da obesidade. Verificou-se que os níveis de SOD e CAT
foram revertidos nos grupos tratados com ASEDB, sugerindo sua
eficácia na eliminação de radicais livres. A restauração de todos esses
sistemas antioxidantes, tanto enzimáticos quanto não enzimáticos,
pode estar associada à participação efetiva de fitoconstituintes naturais,
particularmente favonas e polifenóis, no fármaco teste na eliminação
de radicais livres.
5. Conclusões
Em conjunto, o estudo representa que o ASEDB possui formidáveis
benefícios antiobesidade in vitro (adipócitos 3T3-L1) e in vivo (ratos
obesos alimentados com HFD). A potencialidade do ASEDB pode estar
associada à redução da ingestão de alimentos, bloqueio da
diferenciação de adipócitos, aumento da polilise, diminuição da
absorção intestinal de gordura e melhora da dislipidemia por meio do
metabolismo regulado da gordura e melhoria do grau antioxidante
arbitrado pelos fitoconstituintes defensivos presentes iniciar. Além
disso, é necessário explorar a expressão de mRNA de proteínas
adipogênicas e oxidações de ácidos graxos, bem como análises
aprofundadas de adipocitocinas e níveis de grelina para entender o
mecanismo de ação detalhado. Também é indispensável isolar e
caracterizar as moléculas principais responsáveis pela ação
antiobesidade para desenvolver uma droga pura promissora para
combater a obesidade.
Disponibilidade de Dados
Os conjuntos de dados usados para apoiar as descobertas deste
estudo estão disponíveis com o autor correspondente mediante
solicitação razoável.
Divulgação
Arumugam Vijaya Anand também contribuiu como primeiro autor.
Conflitos de interesse
Os autores declaram não ter conflitos de interesse.
Contribuições dos Autores
Kumaraswamy Athesh, Nayagam Agnel Arul John, Guru Nagarajan
Sridharan, Pemiah Brindha e Arumugam
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12
Vijaya Anand conceituou o estudo, preparou o rascunho original,
validou o estudo e executou a metodologia; Balasubramanian
Balamuralikrishnan, Wen-Chao Liu e Arumugam Vijaya Anand
revisaram e editaram o estudo e realizaram análises formais;
Amer M. Alanazi e Kannan RR Rengasamy verificaram se havia
plágio e realizaram a revisão final.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao SRRCARS, um centro de pesquisa
integrado para ciências biológicas, SAASC, Tiruchir appalli, por
nos permitir utilizar suas amenidades instrumentais de forma
otimizada. Os autores expressam sua gratidão à SASTRA
Deemed University, Tanjavur, por terceirizar o microscópio de
luz trinocular Nikon (Eclipse, Ci) equipado com um sistema de
informações de rede (NIS) instalação de software de imagem
digital para estudar a área de adipócitos. Os autores agradecem
ao Deputyship for Research Innovation, Ministério da Educação
da Arábia Saudita, pelo apoio a esta pesquisa (IFKSURG-2-654).
Todos os autores agradecem a suas respectivas universidades
e institutos pelo apoio.
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