Claudia G.

Bica

Objetivo Mapear o patrimnio gentico do Homem

O Comeo do Fim! Por qu?

Avano na Medicina
Preventiva Diagnstico (especfico, sensvel, efetivo e seguro) Tratamento (desenhos de frmacos especficos)

 O arranjo linear dos nossos cromossomos fazem parte da nossa micro-anatomia. Neo-Vesalian
1543- corporis humani Fabrica por Andreas Vesalius; 1628- fisiologia da circulao por Harvey; 1761- anatomia mrbida por Morgagni.

1956- Evoluo da Gentica Mdica

1956- Estabelecimento do nmero de cromossomos e a determinao da estrutura de dupla-hlice do DNA por Watson e Crick; A partir deste ano a gentica se estabelece como especialidade clnica; 1959, descrita a 1 sndrome (Down). Nos anos 60 uma srie de anormalidades comearam a ser descritas (n, translocao, deficincia, mosaicos, triploidias e microdelees).

 Devido aos avanos nas tcnicas identificao de cromossomos, como citogentica-molecular e a hibridizao situ possibilitaram um avano identificao clnica de muitas doenas.
Ex: cromossomo Filadlfia(1960-1973);

de a in na

Mapeamento Gentico

Provavelmente o 1 gene a ser mapeado foi o do Daltonismo (1911-1968) 1980- anlise de clulas somticas atravs do uso de sondas (diretamente no gene afetado); 1981- uso de sondas, em genes de cpia nica; Construo de marcadores genticos para serem utilizados em famlias (RFLP, Seq TANDEM, Microsatlites, etc).

 1983-1993- Mapeamento da 1 doena pela tcnica de marcadores de DNA (Huntington) localizada no brao curto do cromossomo 4 (alta taxa de recombinao. Outras doenas importante puderam ser mapeadas como em 1986 a Granulomatous Crnica e Distrofia Muscular de Duchenne e em 1989 a Retinoblastia e a Fibrose Cstica. A possibilidade da descoberta de doenas despertou nos pesquisadores um grande impulsos, pois as possibilidade que se abriam eram evidentes. Com o mapeamento de gene era possvel traar o perfil da doena, a localizao, o padro de transmisso, mutaes correlatas, determinar genes candidatos, etc.

O Sequenciamento do Genoma Humano A ltima anatomia

Antes mesmo do lanamento do PGH ser lanado uma variedade genes j haviam sido descritos; 1944- 1 apresentao do material gentico por Avery, McLeod e McCArty em pneumococcus; 1953- Watson e Crick deduziram a dupla-hlice do DNA por difrao de radiografia; 1966- deduo dos nucleotdeos (para codificao de aa); 1960s Uso de enzimas de restrio; 1970s- Clonagem de genes em plasmdeos bacterianos e a tcnica do DNA recombinante;

 1977- aprimoramento da tcnica de sequenciamento por Maxam e Gilbert por Sanger et al. O mtodo estabelecido por Sanger de dideoxi, permanece como a base do PGH. Esse mtodo foi modificado exaustivamente at se conseguir a automatizao da tcnica. 1981- Feito o 1 seq. completo, pelo grupo de Sanger de uma organela citoplasmtica com 16569 nucleotdeos. 1980- O Departamento de Energia dos EUA propem do sequenciamento do genoma humana devido a preocupao de mutaes ocorridas devido a radiao que seus trabalhadores estavam expostos.

Dcada de 1980- Primeiras discusses PGH; 1984- PG: EUA mapear patrimnio gentico humano. Japo e Austrlia: organismo de coordenao internacional HUGO (Human Genome Organization) facilitar e coordenar mapear, sequenciar e analisar: genoma humano e sua aplicao; 1990PGH internacional: americanos e europeus. pesquisadores

 1988- acretitava-se que o mapeamento e o seq. completo do genoma humano seria possvel ser feito em 10-15 anos (2005), com um custo de $200 milhes de dlares as ano liberado pelo congresso nacional americano. O Comit assessor do PGH recomendou que se fizesse o seq. a partir da construo dos mapas genticos e fsicos dos cromossomos e que fossem sendo feitos modelos de outros organismos em paralelo.

 1985-1990- Discusso do PGH 01/10/1990: foi lanado nos EUA do PGH: patrocinado pelo NIH (National Institutue of Health) e pelo DOE (Departament of Energy). Foi criado o grande consrcio mundial para o seq. do genoma humano formado pela Europa, Japo e Austrlia. HUGO ( Human Genome Organization)sintonizar o trabalho e organizar o conhecimento em um banco de dados.

Quem participa do PGH ?

Setor Pblico dados - qualidade e preciso: detalhes das clulas humanas. Setor Privado genes interessantes. 18 Pases : Alemanha, Austrlia, Brasil, Canad, China, Coria, Dinamarca, EUA, Frana, Holanda, Israel, Itlia, Japo, Mxico, Reino Unido, Rssia, Sucia e Unio Europia.

MAPEAMENTO E SEQUENCIAMENTO DO GENOMA

GENOMA: DNA clulas - determinado organismo.
Mapeamento Diviso dos cromossomos fragmentos menores propagados, caracterizados e ordenados respectivas posies nos cromossomos.

Sequenciamento Seqncia de bases fragmentos de DNA j ordenados genes na seqncia do DNA.

VANTAGENS DO PGH

Doenasfator gentico;
Tecnologias clnicas diagnsticos de DNA; Terapiasnovas classes de remdios; Tcnicas imunoterpicas;

Preveno Doenas condies ambientais: mal de Alzheimer, hipertenso, obesidade, artrite reumtica, suscetibilidade ao cncer de mama e ovrio, osteoporose, cncer do clon, doenas cardiovasculares, mal de Parkinson, calvcie; Genes defeituosos Terapia Gnica Drogas medicinais organismos geneticamente alterados

Filme Projeto Genoma Humano

COMO FEITO O SEQUENCIAMENTO

Mapeamento Sequenciamento Etapas do Sequenciamento
1. Picotando o DNA 2. Clonagem 3. Marcao com Fluorencncia 4. Separao 5. Leitura

Ver animao!!!
1. Picotando o DNA 4. Separao

Fig . 1 : Bases nitrogenadas do DNA

2. Clonagem

3. Marcao com Fluorescncia

Fig . 3: Fragmentos de DNA separados pelo tamanho

5. Leitura

Fig . 2 : Cromatograma de 4 cores Fig . 4 : Dados processados

Os resultados so mostrados num cromatograma de quatro cores. Depois os computadores reunem as sequncias em longos e contnuos trechos.

 1 organismo livre seq. foi a bactria Haemophilus influenzae, com 1800 genes que codificam protenas. Este seq. foi feito pelo grupo do J. Craig Venter utilizando a tcnica de aproximao. Helicobacter pylori, Mycobacterium tuberculosis e Treponema pallidum. 1996- 1 eucarioto seq. completamente, o Saccharomyces cereviae. 1998- 1 organismo multicelular completamente seq. foi o nematode Caenorhabditis elegans. 2000/ maro Drosophila melanogaster.

 Inspirado nos resultados dos seq. anteriores, Venter e O consrcio mundial para o seq do PGH aceita o colaboradores criaram a desafio competitivo e companhia privada para acelerou o seq com a ajuda sequenciar o genoma humano de vrios laboratrios (Celera Genomics Inc) (EUA, Inglaterra, Japo, Tcnica para seq por Frana e Alemanha sob a aproximao, clonagem ao direo de Francis Colins. acaso. Os dados eram fornecidos a Tcnica para seq por sobreposio de clones investigadores acadmicos, laboratrios no farmacuticos, Os resultados eram de domnio pblico. sob uma taxa bastante considervel.

 26 de junho de 2000
Na Casa Branca, Colins e Venter anunciaram a concluso inicial do PGH O grupo do Colins publicou na Nature O grupo do Venter publicou na Science

A maior concluso deste grande projeto foi explicar que a complexidade do ser humano esta baseada codificao de diferentes protenas e no no nmero de genes.

Venter et al.

Colins et al.

O sequenciamento do genoma humano no corresponde ao genoma especfico de determinada pessoa. importante saber que at o presente foi feito apenas um sequenciamento rascunho

Sequenciamento dos genes

cada vez maior o esforo dos cientistas para colocar disposio um nmero crescente de genomas inteiros sequenciados dos mais diferentes organismos.

Fig.7 : Representao do mapeamento gentico no cromossomo humano

O DNA humano formado por 3.1 bilhes de pares de base, com 4 nucleotdeos diferentes (A, C, G, T). Essas combinaes se repetem ao longo do genoma em diferentes ordens para formar aa, que combinado formaram as protenas necessrias.
Ele formado por grandes desertos e alguns osis. S 3% do DNA contm regies codificadoras (centrais). O genoma humano idntico em 99,9%, os 0,1% que traz as variaes e pistas de muitas doenas

A complexidade dos seres humanos surgiu de alguma outra fonte Colins 12/02/01

PGH- Resultados
Total de espcies j sequenciadas- 908 (NCBIfev/2002)
70 genomas bacterianos (13 archae e 57 bact); 695 genomas de vrus, retrovirus, etc; 39 plasmdeos 15 eucariotos 307 organelas Atualmente: dos 70 genomas bacterianos 7 foram feitos atravs do consrcio e 1 foi brasileiro. Existem 107 genomas em andamento (15 dop consrcio e 5 brasileiros) out/2001- seq completo de rato pelo grupo Celera.

O Brasil tambm participa do Projeto Genoma Humano . As principais iniciativas tomadas foram a da clonagem dos genes pelo laboratrio da pesquisadora Mayana Zatz; Projeto Genoma Humano do Cncer est em andamento graas a unio da Fapesp, Instituto Ludwig, Unicamp, EPM e da Faculdade de Medicina da USP; O Genoma Cana leva o Brasil a liderar a pesquisa em genoma de plantas (Copersucar FAPESP em 1998)

O seqenciamento de uma praga de lavoura de laranja chamada de Xylella fastidiosa.

Cncer e o Projeto Genoma

Fig . 8 : Representao da porcentagem dos tipos de cncer

Genoma Cncer
Pretende gerar entre 500mil e 700mil sequenciamentos
Acesso a regies codificadoras ainda no exploradoas Elucidao no sequenciamento gentico do Homo sapiens Descoberta (???) da cura do cncer

 O Futuro: A Medicina do Sculo 21

Saber a funo de todas essas protenas Saber as variaes, padres, estruturas e fentipos Identificar alelos para suscetibilidade Buscar marcadores Especificar diagnsticos (mendelianos ou no) Conhecer a vulnerabilidade ou resistncia Influncia: medicina reprodutiva, preditiva, no conceito de doenas que levem os mdicos a interpretar genes como hemogramas, diagnsticos especficos e clnicos, caracterizao precisa das doenas, busca de terapias personalizadas (frmacos), impresso digital dos tumores (2020).

Polycystic (ARPKD), doena renal autossmica recessiva. A identificao de genes de ARPKD, atravs do sequenciamento PKD1.
Descoberta do 1 gene especfico para a suscetibilidade para o Ca de pncreas. Localizado no cromossomo 4. Sendo a 4 causa de mote nos EUA (Jimmy Carter). Desenvolvimento da droga STI 571 que bloqueia a atividade da Kinase de BCR-ABL. Essa protena produzida como conseqncia da translocao do cromossomo 9-22, causando a leucemia mieloide. A STI-571, bloqueia a atividade da kinase de BCR-Abl de fosforilar o seu substrato.

Aplicaes

tica no Progeto Genoma

Passado - origem, formas justificar Presente - irresponsabilidade futuro Patrimonio individual Patentes

Disseminao e testes genticos para identificao de genes doentes

Potencialidade do indivduo Discriminao excluso social desemprego nova classe social Seguradoras - aumento de preos

IMPLICAES FARMACUTICAS
Surgimento de drogas a partir do genoma pode levar anos
Altos Gastos Pesquisas
Indstria Farmacutica

Desenvolvimento

Poucos Benefcios Instantneos

PGH identificar a funcionalidade dos Genes

Principal trabalho para a indstria farmacutica

Mais de cinco mil genes podem ser importantes na determinao de doenas Indstria Farmacutica 450 classes de drogas Informao do genoma humano descoberta e desenvolvimento de drogas Melhor compreenso das causas das doenas novas drogas necessidade de cada paciente Mudanas devem levar a medicamentos com menos efeitos colaterais e custo menor

As primeiras aplicaes clnicas do PGH estaro na rea de diagnsticos Farmacogentica

Estudo de variabilidade em resposta de droga e toxicidade devido a fatores genticos

Farmacogenmica

Aplica a informao ganhada pela farmacogentica ao desenvolvimento de medicamentos

O genoma, considerado a ferramenta biolgica mais poderosa para explorar os mistrios do desenvolvimento do organismo humano e suas doenas, teve sua seqncia revelada, aps 13 anos de intenso trabalho em vrios laboratrios do mundo e ter consumido um oramento de US$ 3 bilhes. O DNA humano contm 3.16 bilhes de bases (letras) e o total das informaes genticas, contidas nos 23 pares de cromossomos, nos mostra que o ser humano possui cerca de 30 mil genes. Estes genes se espalham pelo DNA, mas ocupam somente 1,2-3,% de seu tamanho. No entanto, eles so essenciais para a produo de protenas necessrias para o desenvolvimento, metabolismo e outras funes vitais no organismo.

Filme para discutir as implicaes ticas do PGH?