Artigo

IMPORTNCIA DAS CITOQUINAS NO SISTEMA IMUNOLGICO - PARTE I: PROPRIEDADES E CARACTERSTICAS FUNCIONAIS

RESUMO
As citoquinas so um grupo de glicoprotenas que atuam na resposta imune, unindo-se aos receptores nas membranas celulares para transmitir as informaes. Possuem inmeras funes biolgicas e podem ser produzidas por praticamente todos os tipos de clulas, dentre elas, as mais importantes so os linfcitos, moncitos e macrfagos. Recentemente, tem-se estudado as potenciais utilizaes destas molculas no tratamento de vrios tipos de cncer, HIV e outras doenas. Dessa forma, o objetivo deste trabalho mostrar a importncia das citoquinas no sistema imunolgico, bem como suas caractersticas estruturais e funcionais. Palavras-chave: citoquinas, importncia, sistema imunolgico, propriedades, caractersticas funcionais
Boutros Fouad Sarrouh*, Juan Daniel Rivaldi, Bruno Chaboli Gambarato, Diego Tresinari dos Santos e Silvio Silvrio da Silva Escola de Engenharia de Lorena-USP, Departamento de Biotecnologia *Autor para correspondncia: Estrada Municipal de Campinho Caixa Postal: 116 CEP: 12602-810. Lorena. SP Fone: (12) 3159-5027 E-mail: bsarrouh@yahoo.es

SUMMArY
Cytokines are a group of glycoproteins that act in the immune response, together with receivers found in the cellular membrane, in order to transmit the information. Cytokines possess some biological functions and can be produced by almost all body cells, among these cells, the most important are lymphocytes, monocytes and macrophages. Recently, the potential uses of these molecules in the treatment of diverse types of cancer, HIV and several other diseases have been studied. Thus, this work presents a review about the importance of cytokines in the immune system and its structural and fuctional characteristics. Keywords: cytokines, importance, immunologic system, properties, functional characteristics

INTrODUO
As citoquinas representam um grupo heterogneo de protenas biolgicas ativas ou glicoprotenas que regulam o crescimento da clula entre outras funes. So mediadores solveis ativos em quantidades muito pequenas. Diversas pesquisas centraram em citoquinas, que parecem modular o crescimento e a funo das clulas contidas dentro do sistema imune (1). Os papis das citoquinas na sade e na doena so provavelmente complexos. Em geral, quantidades medidas de citoquinas so encontradas raramente em lquidos de corpo de indivduos saudveis. Altas concentraes detectveis podem, entretanto, ser encontradas em lquidos de corpo durante episdios de infeces microbianas agudas e, em alguns casos, durante a doena agressiva crnica (1,2). Postulou-se conseqentemente que as citoquinas so primeiramente envoltos na induo e a manuten42

o dos mecanismos de defesa do hospedeiro de encontro infeco microbial e doena agressiva. Por outro lado, sua presena continuada em algumas doenas crnicas pode contribuir a patologia. Citoquinas so altamente ativas farmaceuticamente e assim podem ser agentes eficazes para modificar respostas biolgicas (As citoquinas so usadas freqentemente como os modificadores biolgicos da resposta imunolgica). Assim, elas foram usadas na maior parte para a terapia da doena neoplstica (cncer). As investigaes clnicas, realizadas principalmente com alfa ou beta interferon, confirmaram que o tratamento com citoquinas pode ser benfico para um nmero limitado dos cnceres (1). Entretanto, o potencial clnico completo de muitas delas, usadas individualmente ou de combinao com outros agentes, ainda necessitam de mais estudos (3).
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A OriGEM DAS CiTOQUiNAS

O organismo humano continuamente ameaado por microorganismos, pelo cncer ou por outros agentes que exigem que os mecanismos de defesa sejam mantidos em alerta durante toda a vida. O sistema imunolgico realiza uma permanente viglia biolgica com o objetivo de proteger o organismo contra a invaso de agentes estranhos de qualquer natureza (1). A defesa do organismo uma atividade de extrema complexidade que depende da imunidade inata (que nasce com o indivduo) e da imunidade adquirida. Esta ltima compreende a imunidade humoral, baseada na formao de anticorpos e na imunidade celular, baseada na atuao dos linfcitos e outras clulas especializadas, como os macrfagos dos tecidos, por exemplo. As clulas do sistema de defesa precisam comunicar-se umas com as outras, com os objetivos de ativar, estimular, amplificar e organizar a defesa do organismo, estas mensagens de comunicao entre as clulas so enviadas por determinadas substncias chamadas citoquinas ou, como preferem alguns autores, citocinas. As citoquinas funcionam, portanto, como verdadeiros mensageiros entre as clulas (2,3).

tre eles, por este motivo foram denominadas primeiramente de interleucinas. Do mesmo modo, as citoquinas secretadas pelos moncitos (macrfagos) foram chamadas monoquinas. Os interferons so citoquinas que ocorrem naturalmente e que podem amplificar a aptido do sistema imunolgico para reconhecer o cncer como um invasor estranho ao organismo. Hoje, sabe-se que as citoquinas ou quimioquinas ou interleucinas podem ser produzidas por virtualmente todos os tipos celulares existentes no organismo. Esse sistema de extraordinria complexidade funciona de um modo integrado, com a finalidade nica de defender o organismo contra infees, tumores, traumas ou qualquer tipo de agresso (4,5).

NOMENcLaTURa DaS CITOQUINaS

Existe uma ampla variedade de designaes para as citoquinas que dependem das caractersticas observadas pelos seus autores. As citoquinas produzidas pelos leuccitos so conhecidas como interleucinas (IL), ex.: IL-1, IL-2, etc. Algumas passaram a ser conhecidas como Interferons, porque tinham uma atuao de intermediao entre as clulas do sistema de defesa e certos vrus. Essas citoquinas so conhecidas pela abreviatura (IFN), ex: IFNa, IFNb, IFFNy. Outras so conhecidas como fatores de necrose tumoral, cuja sigla (TNF) ex: TNFa, TNFb. Outras, ainda, so conhecidas como fatores de crescimento (GF), ex: NGF, EGF. Estes fatores de crescimento tambm so segregados nos grnulos das plaquetas e desempenham um importante papel na regenerao das feridas. A tendncia geral usar a denominao citoquinas quando se deseja referir as todas essas substncias (3,4). As estruturas de algumas das mencionadas citoquinas so mostradas na seguinte Figura 1.

AS CITOQUINaS E O SISTEMa IMUNOLGIcO

As citoquinas so protenas de baixo peso moleculares, geralmente em torno de 30.000 Daltons, produzidas por clulas do sistema imune que tem a propriedade de atuar sobre outras clulas do organismo, pertencentes ou no ao sistema imunolgico (1,2). As primeiras citoquinas identificadas eram produzidas pelos leuccitos. Por essa razo, imaginou-se que tinham a funo de intermediar ou transmitir mensagens exclusivamente en-

Figura 1. Representao estrutural de algumas citoquinas produzidas pelos leuccitos. (Citadas em WebCyt, www.cytokinesweb.com)

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A famlia das citoquinas apresenta-se por dois subgrupos principais tendo-se Quatro bases conjugadas de cistena em sua estrutura molecular. O primeiro subgrupo conhecido como CC citoquinas e contem a seqncia (13): NH2 -X (1011)-Cys-Cys-X (2223)-Cys-X (15)-Cys-X (1824)-COOH Onde as primeiras duas citoquinas esto separadas por um aminocido (X).

LOcAl DE AO DAS CiTOQUiNAS

O volume de citoquinas segregadas e liberadas pelas clulas produtoras pequeno e a sua liberao ocorre durante um perodo bastante curto, durante o rpido contato com o agente agressor. Os seus efeitos, porm, so desproporcialmente acentuados. As citoquinas lanadas na circulao unem-se a receptores especficos existentes na membrana das clulas que vo estimular, iniciando uma cadeia de transmisso intracelular de um sinal capaz de ativar uma determinada resposta celular. Considerando-se simplesmente o local de atuao, as principais citoquinas podem ser classificadas em trs tipos principais (5), conforme representado na Figura 2. 1. Citoquinas autcrinas - so as citoquinas que atuam sobre as prprias clulas que as produzem. 2. Citoquinas parcrinas - so as citoquinas que atuam sobre as clulas prximas. 3. Citoquinas endcrinas - so as citoquinas que atuam sobre as clulas distantes, da mesma forma que os hormnios.

Na quais os nmeros entre parnteses representam os numero dos aminocidos, e Cys representa a cistena cuja estrutura representada por:

H H

H N C CH2 SH C

O OH

O primeiro subgrupo conhecido como CXC citoquinas e contem a seqncia (13): NH2 -X (612)-Cys-X (1)-Cys-X (2324)-Cys-X (1516)-Cys-X (1553)-COOH

(a)

Inducing stimulus

(b)

Cytokine gene

Cytokine-producing cell

Autocrine action

Cytokine Paracrine action Receptor Signal Gene activation Circulation Target cell Endocrine action Distant cell Nearby cell

Biological effects
Figura 2. Classificao e funo dos trs principais tipos das citoquinas. (Citadas em WebCyt, www.cytokinesweb.com) (a) Mecanismo de atuao das citoquinas (b) local de atuao das citoquinas

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O sistema imunolgico controlado pelas citoquinas, principalmente do seguinte modo (1): 1. Mediante a regulao (inibindo ou ativando) da proliferao e diferenciao de vrios grupos celulares; 2. Mediante a regulao da secreo de outras citoquinas; 3. Mediante a induo da produo de anticorpos. contato com superfcies estranhas ou a mutao de determinados grupos celulares. Elas so responsveis pela produo, estimulao e diferenciao de mltiplos tipos celulares bem como pela produo de outras citoquinas capazes de estimular ou de inibir a sntese de protenas ou os efeitos biolgicos de determinados tipos celulares ou de outras protenas (3). de extraordinria importncia reconhecer que h citoquinas que atuam excitando as clulas de defesa produtoras da inflamao seja diretamente, seja pelo estmulo produo de outras citoquinas. Estas citoquinas, das quais as mais conhecidas so as Interleucinas (IL-1alfa e beta, IL-6, IL-8) e o fator de necrose tumoral (TNF); so denominadas citoquinas pr-inflamatrias. Por outro lado, h outras que atuam exatamente no sentido oposto, ou seja, inibem as clulas de defesa produtoras da reao inflamatria ou inibem a produo das citoquinas que estimulam a inflamao. As mais conhecidas deste tipo so a interleucina-10 (IL-10) e a interleucina-13 (IL13); so denominadas citoquinas anti-inflamatrias. A interleucina-10, produzida pelos linfcitos, possui notveis propriedades anti-inflamatrias, como a capacidade de inibir a produo do TNF e das interleucinas IL-1, IL-6 e IL-8. Isso representa uma reduo substancial da intensidade do processo inflamatrio (3, 7, 13). As estruturas de algumas de estas mencionadas citoquinas esto representadas por a Figura 3. Os estudos precedentes mostraram os seres humanos que se sujeitaram ao stress crnico tal como a antecipao de exames mdicos, falta de controle emocional no trabalho e pessoas que cuidam de parentes com doenas mentais (Demncia) tenha concentraes mais elevadas no sangue de IL-6, de TNF-a e de antagonista do receptor

PrOpriEDADES DAS CiTOQUiNAS

As citoquinas constituem um grupo de protenas produzidas durante as respostas imunes naturais e especficas. Elas unem-se aos receptores existentes na membrana das clulas para transmitir as informaes necessrias (6). Os macrfagos so as clulas que mais as produzem, seguidos dos linfcitos T. As citoquinas possuem uma ou mais das seguintes caractersticas: 1. Pleitropismo (tem efeitos mltiplos para atuar sobre clulas diferentes). 2. Redundncia (vrias citoquinas podem exercer um mesmo efeito). 3. Sinergismo (duas ou mais citoquinas produzem um efeito que se soma ou potencia reciprocamente). 4. Antagonismo (uma citoquina bloqueia ou inibe os efeitos de outras citoquinas).

ESTrUTUrA E FUNO DAS CiTOQUiNAS

As citoquinas so glicoprotenas pertencentes famlia das hematopoietinas e tem estruturas semelhantes, constitudas por um conjunto de quatro hlices, com poucas estruturas na lmina (7). A sua secreo induzida por estmulos especficos, tais como a presena de produtos bacterianos, o

Figura 3. Representao estrutural de algumas citoquinas pr-inflamatrias e anti-inflamatrias. (Citadas em WebCyt, www.cytokinesweb.com)

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IL-1 (IL-1Ra). As concentraes aumentadas das citoquinas so sustentadas 2 horas que seguem a exposio aguda do stress e correlacionam positivamente com as medidas cardiovascular: presso de sangue aumentada, assim como a taxa de sstole e distole.

REcEpTOrES DAS CiTOQUiNAS

Os receptores so indispensveis para que as citoquinas exeram as suas funes e apenas se expressam em tipos especficos para a ligao a elas. Existem vrios tipos de receptores de membrana para as citoquinas. Estes, entretanto, podem ser agrupados em cinco famlias principais (1, 2, 4, 5, 13): 1. Receptores da famlia das imunoglobulinas, que possuem vrios domnios extracelulares do tipo Ig. So receptores especficos para a interleucina-1 (IL-1). 2. Receptores de classe I de hematopoietinas. 3. Receptores de classe II ou receptores de interferons. So exemplos os receptores dos interferons no imunes (IFN-a e B) e o IFN-y. 4. Receptores da famlia do TNF (Fator de Necrose Tumoral). Caracterizados por um domnio extracelular rico em cistenas. Ex: TNF-a, TNF-b, CD4. 5. Receptores de quimioquinas. So receptores de protenas integrais das membranas e que interagem com as protenas de sinalizao do citoplasma celular. As maiores partes dos receptores de citoquinas pertencem famlia de classe I (receptores de hematopoietinas), que possuem duas cadeias proticas nas membranas celulares, denominadas alfa e beta.

TipOS DE RESpOSTAS MEDiDAS PElAS CiTOQUiNAS

Est demonstrado, como se representa na figura 4, que as citoquinas participam de uma srie de repostas do organismo, tais como (1, 3, 4, 13): 1. Ativao dos mecanismos da imunidade natural, a- os macrfagos e outras clulas fagocitrias so ativadas, b- as clulas NK (natural killer) so ativadas, c- os eosinfilos so ativados, d- induo da produo das protenas da resposta aguda. 2. Ativao e proliferao dos linfcitos B, 3. Interveno na resposta celular especfica, 4. Interveno nas reaes inflamatrias, aguda ou crnica, 5. Controle dos processos hematopoiticos da medula ssea, 6. Induo da cura das feridas.

Mast cell

ANTAGONiSTAS DAS CiTOQUiNAS

A atividade biolgica das citoquinas regulada fisiologicamente por dois tipos de antagonistas (1, 3, 5, 7):

IL4

TH1

TH2

IFN

IL10 TGF IL12

NK Macrophage

Figura 4. Diferentes respostas expressadas por diferentes citoquinas. (Citadas em WebCyt, www.cytokinesweb.com). Os subconjuntos Th1/Th2 baseados em sua expresso de IFN - , de IL-2, de IL-4 e de IL-10.

1. Antagonistas que provocam o bloqueio do receptor, unindo-se ao mesmo. Desse modo, impedem a unio entre a citoquina livre e o seu receptor especfico, ocupado pelo antagonista ou bloqueador. 2. Antagonistas que inibem a ao da citoquina ao unir-se mesma. Desse modo, impedem a unio entre a citoquina combinada ao antagonista ou bloqueador e o receptor especfico livre. Um exemplo de bloqueador de receptor o antagonista do receptor IL-1 (IL-1RA), que bloqueia a unio de IL-1a e IL1b. Esse bloqueador (ou antagonista) desempenha um papel importante na regulao da intensidade da resposta inflamatria. Os inibidores de citoquinas so verses solveis dos respectivos receptores (sua nomenclatura acrescenta um s antes do receptor). Ex: sIL-2R (verso solvel do receptor da interleucina 2) que se libera durante a ativao dos linfcitos T, e que corresponde a 192 aminocidos N- terminais da subunidade a.
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POTENciAiS USOS ClNicOS DAS REcENTES CiTOQUiNAS HUMANAS
Os papis clnicos potenciais das citoquinas humanas recentemente descobertas para o diagnstico e o tratamento de vrias doenas agressivas so detalhados em a seguinte Tabela I (8). es para testes de controle. Embora a caracterizao detalhada do produto purificado da citoquina seja essencial, a nfase particular deve tambm ser colocada no controle e na consistncia do processo de produo, um conceito que seja muito eficaz no controle de outros produtos biolgicos (12). Exigncias que se relacionam aos estabelecimentos, em que os produtos biolgicos esto sendo produzidos, sero aplicadas aos fabricantes de produtos das citoquinas para o controle de qualidade destes produtos biolgicos. Assim, a ateno apropriada necessita ser dada qualidade de todos os reagentes usados na produo, incluindo componentes de meios da fermentao ou da cultivao; as especificaes para estes devem ser includas na documentao e devem satisfazer todas as exigncias mundiais relevantes. Os testes para a potncia, o toxicidade anormal, esterilidade etc., que se aplicam aos produtos fizeram por mtodos convencionais, aplicar-se-o tambm aos produtos de processos biotecnolgicos (13). indesejvel usar os agentes da produo que so conhecidos para provocar reaes da sensibilidade em determinados indivduos, tais como, para o exemplo, a penicilina ou os outros antibiticos do beta lactam (12-13).

PrODUO DE CiTOQUiNAS EM GrANDE EScAlA

Citoquinas podem ser produzidas em quantidade pela cultivao em escala grande de: (i) linhas transformadas das clulas produzindo citoquinas particulares ou (ii) clulas procaritica ou eucaritica, em que os genes do citoquinas foram introduzidos por tcnicas do rDNA (9-11). A produo em grande escala das citoquinas por estes procedimentos pode afetar a qualidade das mesmas, e tem assim implica-

Citoquinas

Possvel Uso Clnico Tratamento ou Diagnostico Tratamentos de fraturas Fuses na espinha Cirurgias ortopdicas Cirurgias orais Antiinamatrio em atrite reumtica Cncer Linfomas no-Hodgkins Mieloma mltiplo Melanoma Ovariano Antiinamatrio Transplante Imunodecincias Infeces de parasites Cncer de mama Cncer HIV Antiinamatrio HIV Diversos linfomas Arteriosclerose Reumatide artrites Psorase Asma Gengivite crnica Diversos cnceres

Protenas Morfogentica do Osso Interleucina-1 Receptor Adversrio

Referncias
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Interleucina-10 (IL-10)

Interleucina-11 (IL-11) Interleucina-12 (IL-12) Interleucina-13 (IL-13) Interleucina-14 (IL-14)

Protena quimo-atraente moncito-1

Tabela 1. Potenciais usos clnicos das recentes citoquinas humanas

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