ANVISA Bactérias

Deteco e Identificao
de Bactrias de
Importncia Mdica
Mdulo V
NDICE
1.
Estafilococos, estreptococos, enterococos e outros cocos gram positivos ........................................ 1

Introduo..............................................................................................................................................1
Identificao preliminar ............................................................................................................................1
Identificao de estafilococos ....................................................................................................................3
Identificao dos staphylococcus aureus.....................................................................................................4
Identificao dos estreptococos .................................................................................................................5
2. Neisserias......................................................................................................................................... 9
Introduo..............................................................................................................................................9
Isolamento ........................................................................................................................................... 10
Transporte e semeadura do material........................................................................................................ 11
Bacterioscopia e identificao.................................................................................................................. 11
3. Enterobactrias .............................................................................................................................. 14
introduo ............................................................................................................................................ 14
tipos de testes utilizados para identificao............................................................................................... 15
etapas da identificao de enterobactrias................................................................................................ 18
identificao das enterobactrias de importncia clnica ............................................................................. 19
identificao sorolgica .......................................................................................................................... 27
4. Bastonetes no fermentadores....................................................................................................... 31
Introduo............................................................................................................................................ 31
Semeadura, leitura e interpretao das provas de identificao ................................................................... 31
Procedimentos para a identificao .......................................................................................................... 33
5. Bacilos curvos ou espiralados......................................................................................................... 41
Introduo............................................................................................................................................ 41
Campylobacter ...................................................................................................................................... 42
Vibrios, Aeromonas e Plesiomonas........................................................................................................... 43
6. Bacilos gram positivos.................................................................................................................... 45
Introduo............................................................................................................................................ 45
Corineformes ........................................................................................................................................ 46
Bacilos gram positivo ............................................................................................................................. 50
Bacilos esporulados aerbios e anaerbios facultativos............................................................................... 52
Actinomicetos ....................................................................................................................................... 54
7. Fastidiosos ..................................................................................................................................... 56
Introduo............................................................................................................................................ 56
Bartonella............................................................................................................................................. 58
Bordetella............................................................................................................................................. 59
Brucella................................................................................................................................................ 60
Francisella tularensis.............................................................................................................................. 61
Haemophylus ........................................................................................................................................ 62
Legionella ............................................................................................................................................. 64
Pasteurella ........................................................................................................................................... 65
Actinobacillus ........................................................................................................................................ 66
Capnocytophaga.................................................................................................................................... 68
Eikenella .............................................................................................................................................. 68
Kingella................................................................................................................................................ 68
Cardiobacterium hominis ........................................................................................................................ 69
Chromobacterium violaceum................................................................................................................... 69
Streptobacillus moniliformis .................................................................................................................... 70
8. Bactrias anaerbias estritas ......................................................................................................... 71
Introduo............................................................................................................................................ 71
Coleta de material ................................................................................................................................. 73
Transporte do material........................................................................................................................... 73
Processamento do material ..................................................................................................................... 73
Identificao bacteriana ......................................................................................................................... 74
Provas de sensibilidade a antimicrobianos................................................................................................. 77
9. Interpretao de Resultados e laudos ............................................................................................ 78
Introduo............................................................................................................................................ 78
Laudo para o trato respiratrio superior ................................................................................................... 79
Laudo para escarro ................................................................................................................................ 81
Laudo para secreo endotraqueal, lavado traqueal, e lavado brnquico ...................................................... 81
Laudo para lavado brocoalveolar ou escovado brnquico ............................................................................ 82
Laudo para pleural................................................................................................................................. 84
Laudo para abscesso pulmonar ............................................................................................................... 84
Laudo para ocular.................................................................................................................................. 84
Laudo para lquido cfalo raquidiano (LCR) ............................................................................................... 85
Laudo para fezes ................................................................................................................................... 85
Laudo para pele, abscessos e feridas ....................................................................................................... 86
Laudo para genital................................................................................................................................. 88
Laudo para urina ................................................................................................................................... 89
Laudo para sangue ................................................................................................................................ 92
10. Referncias Bibliogrficas .............................................................................................................. 93
1. ESTAFILOCOCOS, ESTREPTOCOCOS, ENTEROCOCOS E OUTROS

COCOS GRAM POSITIVOS
INTRODUO
Os Estafilococos so as bactrias no esporuladas que mais resistem no meio ambiente. Podem
sobreviver por meses em amostras clnicas secas, so relativamente resistentes ao calor e podem
tolerar uma concentrao aumentada de sal. No entanto, apesar dos antimicrobianos existentes, da
melhora das condies sanitrias e das medidas de controle de infeco hospitalar, este
microrganismo continua a ser um dos mais importantes patgenos para o homem. Indivduos sadios
so colonizados intermitentemente por Staphylococcus aureus desde a amamentao, e podem
albergar o microrganismo na nasofaringe, ocasionalmente na pele e raramente na vagina. A partir
destes stios, o S. aureus pode contaminar a pele e membranas mucosas do paciente, objetos
inanimados ou outros pacientes por contato direto ou por aerossol, ocasionando infeces letais por
conta dos fatores de virulncia ou atravs de resistncia aos antimicrobianos atualmente utilizados.
J foram descritos no Brasil casos de infeces causadas por Staphylococcus aureus parcialmente
resistentes aos antibiticos mais potentes como a Vancomicina, e relatos da capacidade que os
Staphylococcus coagulase negativa tem de desenvolver resistncia. Assim h necessidade de uma
identificao rpida e eficiente de todos os casos em que estes microrganismos se apresentam.
Os estreptococos foram os maiores causadores de infeco hospitalar na era pr-antibitica, causando
surtos de infeco e morte de purperas. Apesar de no serem atualmente uma importante causa de
infeco hospitalar, provocam, no entanto, doenas muito graves e muitas vezes letais, mesmo em
pacientes imunocompetentes, sendo importante o rpido diagnstico deste agente.
J os enterococos apresentam importncia crescente como causadores de infeco hospitalar, pelo
aparecimento de resistncia quase total aos antibiticos tradicionalmente utilizados para tratamento
destas infeces.
Os Enterococos mais comumente isolados so: Enterococcus faecalis (90% dos casos) e Enterococcus
faecium, com grande capacidade de colonizao de pacientes e de contaminarem superfcies ou
equipamentos utilizados em hospitais. Possuem sensibilidade ou resistncia varivel aos antibiticos
chamados glicopeptdios como a vancomicina e teicoplanina. Existem, atualmente, cepas comensais
naturalmente resistentes a vancomicina e que podem ser isoladas de pacientes internados, porm no
sendo ainda capazes de causarem surtos, mas que devem ser corretamente identificadas.
IDENTIFICAO PRELIMINAR
A identificao dos estreptococos e estafilococos baseada na morfologia que apresentam em meios
lquidos. Sendo o estreptococo uma cadeia normalmente longa e os estafilococos mostrando-se em
forma de cocos aos pares, em cachos de uva ou agrupados.
A identificao presuntiva comea com a inoculao primria na placa de gar sangue de carneiro que
deve ser incubada em 5% de tenso de CO (mtodo da vela ou estufa de CO2). As colnias de
estafilococos so geralmente maiores, convexas, de colorao variando do branco-porcelana a
amarelo podendo apresentar hemlise ou no. Note-se que o desenvolvimento da cor amarelada no S.
aureus ocorre somente aps incubao prolongada (72 h), temperatura ambiente. As colnias de
estreptococos tendem a serem menores (puntiformes), e com halos de hemlise total ou parcial (beta
e alfa hemlise). A diferenciao entre os estreptococos e os estafilococos se d, seguramente, pela
prova da catalase.
PROVA DA CATALASE
Com a ala bacteriolgica ou com um palito coleta-se o centro de uma colnia suspeita e esfrega-se
em uma lamina de vidro. Colocar sobre este esfregao uma gota de gua oxigenada a 3% e observar
a formao de bolhas. Para a famlia Microccocacea (estafilococos) a prova geralmente positiva,
enquanto que para a famlia Streptococcacea (estreptococos) negativa.
Mod V - 1
Diviso dos cocos Gram positivo pela prova da catalase

Catalase positivos
Catalase negativos
Staphylococcus spp.
Enterococcus spp.
Micrococcus spp.
Streptococcus spp.
Planococcus spp.
Aerococcus spp.
Stomatococcus spp.
Gemella spp., Leuconostoc spp.

Lactococcus spp., Stomatococcus spp.
Ao coletar a colnia, no carregar meio de cultura (gar sangue), que pode acarretar resultados falsopositivos porque o sangue do meio contm catalase. Algumas cepas de enterococos podem dar falsa
reao positiva (fazer Gram e ver disposio em cadeias curtas ou aos pares).
Identificao simplificada dos cocos Gram positivo de importncia clnica
Gnero
Catalase
Motilidade
NaCl 5%
Oxidase
Aerbio
estrito
Ttrade
Staphylococcus
neg
neg
no
varivel
Planococcus
neg
varivel
Micrococcus
neg
varivel
varivel
Enterococcus
neg
varivel
neg
no
no
Streptococcus
neg
neg
varivel
neg
no
no
Aerococcus
neg
neg
neg
no
varivel
neg
neg
neg
no
varivel
Stomatococcus *
* aderente ao meio
Cocos Gram positivo, Catalase negativa, Motilidade Negativa

Gnero
1
2
3
NaCl 6,5%
Vancomicina
PYR
Bile Esculina
Ttrade
Enterococcus
varivel
no
Streptococcus
neg
sensvel
neg
Aerococcus
sensvel
varivel
varivel
varivel
Leuconostoc
varivel
resistente
neg
varivel
no
Pediococcus
varivel
resistente
neg
varivel
Gemella
neg
sensvel
neg
no
Stomatococcus
neg
sensvel
varivel
E. casseliflavus e E. gallinarum so positivos

S. pyogenes positivo
alguns S. viridans podem ser positivos
Mod V - 2
neg
no
IDENTIFICAO DE ESTAFILOCOCOS
O teste mais importante na identificao da famlia Micrococcaceae a prova da catalase, e esta
famlia composta de quatro gneros: Planococcus, Micrococcus, Stomatococcus e Staphylococcus. O
gnero Staphylococcus apresenta 32 espcies, 14 subnegespcies, sendo que somente 15 espcies
so encontradas em amostras humanas, e de uma maneira prtica, os estafilococos so divididos em
duas categorias: coagulase positivos e coagulase negativos de acordo com a resposta ao teste da
plasmo coagulase.
Provas diferenciais dos generos Catalase positivos
Gnero
Motilidade
NaCl 5%
Oxidase
Aerbio
estrito
Ttrade
neg
neg
no
varivel
Planococcus
neg
varivel
Micrococcus
neg
Stomatococcus
neg
neg
neg
no
varivel
Staphylococcus
Identificao das espcies de Staphylococcus de maior importncia clnica

Espcie
DNAse
PYR
Novob.
Uria
Polimixina
Outras
S. aureus
neg
sensvel
varivel
resistente
pig. amarelo
S. epidermidis
neg
neg
sensvel
resistente
S. lugdunensis
neg
sensvel
varivel
varivel
omitina +
S. haemolyticus
neg
sensvel
neg
sensvel
omitina neg
S. saprophyticus
neg
neg
resistente
sensvel
isolado em urina
S. schleiferi
neg
sensvel
neg
sensvel
Sacarose neg
S. intermedius
sensvel
sensvel
S. hyicus
neg
sensvel
varivel
resistente
Existem cerca de 31 espcies de Staphylococcus coagulase negativa conhecidas, das quais os mais
freqentes so:
Staphylococcus epidermidis - causador de infeces de cateteres e prteses e o mais freqente

microrganismo encontrado em hemoculturas.
Staphylococcus saprophyticus - causador de infeco urinria em mulheres jovens.
Staphylococcus haemolyticus - importante devido resistncia aumentada aos antimicrobianos, e

por ser comumente confundido com o S. aureus, pois apresenta hemlise na placa de gar sangue
de carneiro.
TESTE DA RESISTNCIA A NOVOBIOCINA

A cepa semeada de maneira semelhante ao antibiograma em placa de Muller Hinton acrescida de
um disco teste de novobiocina contendo 5 g. As amostras resistentes mostram zonas de inibio de 6
a 12 mm, enquanto as susceptveis apresentam halos de 16 mm ou mais. As cepas de Staphylococcus
saprophyticus so resistentes.
Mod V - 3
Testes da Trealose, Urease e Novobiocina

Espcies
Trealose
Urease
Novobiocina
S. epidermidis
Negativa
Positiva
Sensvel
S. haemolyticus
Positiva
Negativa
Sensvel
S. saprophyticus
Positiva
Positiva
Resistente
IDENTIFICAO DOS STAPHYLOCOCCUS AUREUS

A forma mais simples de identifica o Staphylococcus aureus a prova da coagulase que pode ser
efetuada em tubo ou em lamina.
TESTE DA COAGULASE EM LMINA

A maioria das cepas de Staphylococcus aureus possui a coagulase ligada (ou fator aglutinante)
clumping factor na superfcie da parede celular, que reage com o fibrinognio do plasma causando a
coagulao do mesmo.
Colocar 2 gotas de salina em uma lmina;
Emulsionar uma colnia isolada a ser testada;
Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito de plstico ou madeira;
Observar se h aglutinao em 10 segundos;
No se pode executar este teste a partir de um gar com grande concentrao de sal como gar
manitol.
TESTE DA COAGULASE EM TUBO

Este teste baseia-se na presena da coagulase livre que reage com um fator plasmtico formando um
complexo que atua sobre o fibrinognio formando a fibrina. O teste melhor efetuado se:
Adicionar 0,1 ml de caldo BHI, incubado por uma noite, com colnia suspeita a um tubo de ensaio
com 0,5 ml de plasma;
Incubar por 4 horas 35C em estufa ou banho maria;
A formao do cogulo observada pela inclinao suave do tubo de ensaio a 90 graus da

vertical.
Um mtodo alternativo a emulsificao desta mesma colnia suspeita em um 0,5 plasma e incubado
da mesma forma. Qualquer cogulo indica uma prova positiva, porm no confundir com precipitados
ou floculao. O melhor plasma a ser usado o de coelho com EDTA, no devendo ser usado o plasma
humano vindo do banco de sangue.
TESTE DA DNASE
Este teste consiste na inoculao de colnias em meio contendo DNA, (DNAse test agar) obtido
comercialmente.
Adicionar ao meio original azul de ortotoluidina na concentrao de 0,1%; o meio adquire uma
colorao azul intensa;
Incubar a 35C por 24 horas;
Uma colorao rsea caracterstica ao redor das colnias produtoras de DNAse indica a
positividade da prova.
Mod V - 4
O meio adicionado com corante demonstra uma melhor facilidade na leitura, e permite o repique da
amostra positiva para o teste de sensibilidade aos antimicrobianos, evitando que se retorne placa
original onde nem sempre as colnias esto bem isoladas.
TESTE DA ENDONUCLEASE
Teste da endonuclease termoestvel efetuado no mesmo meio de DNA.
Fever o caldo de cultura com a bactria suspeita por 15 minutos;

Colocar ao meio de DNA gotas de caldo de cultura turvo com a colnia suspeita;
Fazer pequenos orifcios no meio (em placa) utilizando canudos de refrigerante;
A leitura do teste semelhante ao da DNAse.
Note que este mtodo pode ser efetuado a partir de caldo de hemocultura em que foi observado o
crescimento de cocos Gram positivos agrupados.
OUTRAS PROVAS QUE DIFERENCIAM O STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Aglutinao em ltex ou em hemcias de carneiro (sorologia). Estes testes geralmente detectam a
coagulase livre e alguns apresentam tambm uma imunoglobulina antiprotena A presente da parede
do Staphylococcus aureus. Como so disponveis comercialmente, deve-se seguir as instrues do
fabricante.
TESTE DO CRESCIMENTO EM GAR MANITOL

O Staphylococcus aureus tem a capacidade de fermentar o manitol em meio contendo 7,5 % de
cloreto de sdio, denominado gar manitol salgado ou Meio de Chapman. O indicador de pH o
vermelho de fenol, que indica uma reao positiva quando o meio ao redor das colnias se torna
amarelo, e negativa quando permanece avermelhado.
IDENTIFICAO DE OUTROS GNEROS

A diferenciao entre Micrococcus sp e os Staphylococcus sp se d pela colorao de Gram, em que os
Micrococcus aparecem em ttrades, ou pela pigmentao de suas colnias (amarelas, rseas ou
alaranjadas). Alguns no apresentam pigmentos e podem ser diferenciados pela sensibilidade a
Bacitracina 0,004 UI, a mesma utilizada na identificao de Streptococcus pyogenes, mas utilizandose a inoculao em gar Mueller Hinton.
IDENTIFICAO DOS ESTREPTOCOCOS
Os estreptococos podem ser diferenciados de acordo com sua aparncia na placa de gar sangue aps
incubao a 35C em presena de 5% de CO2, podendo apresentar: hemlise total (beta), parcial
(alfa, de cor esverdeada) ou nenhuma (gama).
A identificao de espcie de estreptococos beta hemolticos feita atravs de aglutinao com soros
especficos contra os antgenos de Lancefield (A, B, C, D, F e G), que constitui uma prova rpida,
porm no acessvel a todos os laboratrios em virtude do elevado custo.
TESTE DA BACITRACINA
importante notar que as identificaes devem ser feitas em gar sangue sem tenso de CO2 ou os
resultados podem ser conflitantes.
Semear meia placa de gar sangue com o estreptococo a ser identificado, como para um
antibiograma;
Colocar o disco de bacitracina 0,004 u como indicado;
Incubar por uma noite a 35C sem CO2;
Observar qualquer zona de inibio como resultado de sensibilidade.
O Streptococcus pyogenes (grupo A) assim rapidamente identificado.
Mod V - 5
TESTE DO SULFAMETOXAZOL TRIMETOPRIM (SXT)
Adicionar na mesma placa de gar sangue o disco de SXT;

Incubar por uma noite a 35C sem CO2.
A sensibilidade a esta droga significa, em conjunto com as outras leituras, que o estreptococo no
pertence ao grupo A, B ou D de Lancefield.
Colocar um disco de Bacitracina 0,004 UI direita e um de Sulfametoxazol-trimetoprim

esquerda.
Havendo necessidade, pode ser feito o teste de CAMP na mesma placa, conforme desenho abaixo.
1 - Disco de bacitracina
2 - Disco de sulfametoxazol trimetoprim
3 - Camp Test
Linhas verticais
cepas teste
Linha horizontal
estria com cepa beta hemoltica de
Staphylococcus aureus (ATCC 25923)
TESTE DE CAMP (NA MESMA PLACA)
Inocular uma estria nica de uma amostra de Staphylococcus aureus produtor de beta lisina
(ATCC 25923) no centro de uma placa de gar sangue preparada obrigatoriamente com sangue de
carneiro. (Esta linhagem de S. aureus deve ser mantida continuadamente em estoque)
Inocular as amostras a serem testadas em estrias formando um ngulo reto com a linha de
inoculao da amostra teste de estafilococo. As estrias no devem se tocar, ficando a 1 mm de
distncia, e deste modo vrias amostras podem ser testadas em uma mesma placa de gar
sangue. A maneira de inocular fundamental para a observao do efeito esperado.
Incubar a placa a 35-37C durante um perodo de 18-24 horas.
A positividade da prova, Streptococcus agalactiae (grupo B), evidenciada pelo alargamento da

zona de lise, que adquire a forma de ponta de flecha caracterstica, na rea de interseco entre
as duas estrias.
TESTE DO PYR
Este teste determina a atividade do PYR tambm chamado pyrrolidonyl-aminopeptidase, uma enzima
produzida pelo Streptococcus pyogenes e tambm pelo Enterococcus sp. Utilizar somente colnias
puras para o teste, pois podem surgir resultados errneos. Seguir as instrues do fabricante, uma
vez que se encontra disponvel comercialmente.
Esse teste tecnicamente, equivalente prova da hidrlise da bile esculina e crescimento em 6,5%
de NaCl, usados na identificao clssica dos enterococos, e mais especfico que o teste da Bacitracina
na caracterizao presuntiva dos estreptococos beta hemolticos do grupo A, tendo a vantagem de
ser mais rpido.
Em qualquer dos dois casos, o PYR constitui uma alternativa importante para esclarecer testes
duvidosos. Na impossibilidade da realizao de testes sorolgicos de confirmao, reforar o valor dos
testes presuntivos clssicos de identificao do Streptococcus pyogenes.
TESTE DA BILE ESCULINA E DO NACL 6,5%
Semear as provas de Bile Esculina e do caldo de NaCl a 6,5%;

Incubar da mesma forma;
Teste da bile esculina positiva apresenta cor marrom escuro e o do caldo de NaCl a 6,5 % deve
mostrar turvao para ser considerado positivo.
Mod V - 6
Todos os estreptococos do grupo D de Lancefield apresentam a bile esculina positiva, seja

Enterococcus sp ou Streptococcus do grupo D no enterococo (Streptococcus bovis). Quanto ao teste
da tolerncia ao NaCl a 6,5%, somente os enterococos so positivos.
Identificao de estreptococos beta hemolticos
Identificao
Sensibilidade a
Bacitracina
CAMP /Hidrlise
de hipurato
Sensibilidade
a SXT
Bile Esculina e
Tolerncia a
NaCl 6,5%
S. pyogenes
sensvel
negativo
negativo
negativos
S. agalactiae
resistente
positivo
negativo
negativos
Enterococcus sp
resistente
negativo
negativo
positivos
Estreptococo
No A, B ou D.
resistente
negativo
positivo
negativos
TESTE DA HIDRLISE DO HIPURATO

Os Streptococcus agalactiae (grupo B) so tambm capazes de hidrolisar o hipurato em seus
componentes: glicina e cido benzico. Identificao presuntiva dos estreptococos beta hemolticos do
grupo A, B e D.
IDENTIFICAO DOS ESTREPTOCOCOS NO BETA HEMOLTICOS

Somente os estreptococos do grupo B (Streptococcus agalactiae) e D (Enterococcus spp. e
Streptococcus bovis) podem no apresentar nenhuma hemlise, a denominada gama hemlise.
Identificao de estreptococos gama hemolticos ou sem hemlise
Identificao
CAMP /Hidrlise de
hipurato
Bile Esculina
Tolerncia a NaCl
6,5%
Streptococcus agalactiae
positivo
negativo
negativo
Enterococo
negativo
positivo
positivo
S. bovis
negativo
positivo
negativo
IDENTIFICAO DOS ESTREPTOCOCOS ALFA HEMOLTICOS

A identificao deste grupo no deve ser feita por mtodos sorolgicos, pois a maioria no possui os
antgenos de Lancefield.
Identificao dos estreptococos alfa hemolticos
Identificao
Optoquina
e Bile solubilidade
Bile esculina
Tolerncia 6,5% a
NaCl
Pneumococo
positivo
negativo
negativo
Enterococos
negativo
positivo
positivo
Grupo viridans
negativo
negativo
negativo
Streptococcus bovis
negativo
positivo
negativo
Mod V - 7
TESTE DA OPTOQUINA
Semear um quarto de uma placa de gar sangue com a cepa alfa hemoltica a ser testada;
Aplicar um disco de optoquina;
Incubar a 35oC em tenso aumentada de CO2 - mtodo da vela;
Uma zona de inibio de 14 mm ou mais volta de um disco de 6 mm significa sensibilidade e
identifica o Streptococcus pneumoniae.
TESTE DA BILE SOLUBILIDADE

O teste da bile solubilidade tambm identifica o Streptococcus pneumoniae. Pode ser executado em
placa ou em caldo.
Placa:
Tomar um caldo turvo aps 3 horas de incubao a 35C;

Inocular uma suspenso de desoxicolato a 10%;
Clareamento da turbidez reflete a lise bacteriana e confere um resultado positivo prova.
Caldo:
Inocular gotas de desoxicolato de Sdio a 2% sobre as colnias suspeitas;

Incubar a 35C por 30 minutos;
As colnias positivas iro desaparecer por lise bacteriana.
Suspeitar da presena de variante nutricional de Streptococcus destes microrganismos quando o

Gram de amostras positivas de hemocultura obtidas em meios comerciais mostram cocos em cadeias
que no crescem no subcultivo em gar sangue.
Semear o repique em gar sangue;

Fazer estrias perpendiculares ao sentido da semeadura com Staphylococcus aureus, como para a
identificao presuntiva de Haemophilus influenzae;
Incubar a 35C em atmosfera com CO2.
Identificao dos enterococos mais importantes clinicamente

Espcie
Arabinos
Sorbitol
Crescimento
Telurito 0,04%
Motilidade
Pigmento
Vancomicina
E. faecalis
negativo
positivo
positivo
negativa
negativo
varivel (s)
E. faecium
positivo
varivel
negativo
negativa
negativo
varivel
E. casseliflavus
positivo
varivel
negativo
positiva
positivo
resistente
E. gallinarum
positivo
negativo
negativo
positiva
negativo
resistente
Mod V - 8
2. NEISSERIAS
INTRODUO
As espcies de Neisseria tem como caracterstica morfolgica serem diplococos Gram negativos mais
achatadas nas laterais, dando a forma de rins ou dois gros de feijo unidos por uma ponte. Apenas a
espcie N. elongata difere desta morfologia, sendo diplobacilos ou diplococo-bacilo.
Todas neisserias so oxidase positivas e catalase positivas, exceto Neisseria elongata e Kingella
denitrificans. Todas utilizam carboidratos por via oxidativa e no fermentativa, sendo baixa a acidez,
de modo que podem acontecer reaes duvidosas com o meio CTA (Cistyne Tripticase Agar) com
indicador vermelho de fenol, que sempre foi muito utilizado em rotina.
As diferentes espcies de neisseria, incluindo N. meningitidis e N. gonorrhoeae, so analisadas junto
com a Moraxella catarrhalis, Moraxella spp., Acinetobacter spp., Kingella spp e Alcaligenes spp. pelas
caractersticas morfolgicas de serem cocos ou cocides ao Gram e pela possibilidade de haver
confuso na sua identificao.
Quanto a sua importncia clnica, a maioria das neisserias comensal vivendo em mucosas de
humanos e animais.
Diagnstico diferencial entre Neisserias e outros cocobacilos Gram negativo
Bactria
Morfol.
OXI
CAT
OF Gli
CTA
Gli
DNAse
AS
MOT
Neisseria meningitidis
diplococo
no cresce
neg
neg
Neisseria gonorrhoeae
diplococo
no cresce
neg
neg
neg
Neisseria spp.
diplococo/
bacilo
varivel
varivel
(oxidativo)
varivel
neg
neg
Moraxella catharralis
diplococo
inerte
neg
neg
Kingella spp.
cocobacilo
neg
fermentador
neg
varivel
Moraxella spp.
cocobacilo
inerte
neg
neg
neg
Acinetobacter spp.
cocobacilo
neg
varivel
(oxidativo)
varivel
neg
neg
Alcaligenes faecalis
Cocobacilo
/ bacilo
inerte
neg
neg
OXI = oxidase
CAT=catalase
OFGli=OF Glicose CTAGli= utilizao da glicose em base gar cistina tripticase
AS = cescimento em gar Sangue
MOT = motilidade
CARACTERSTICAS DE ALGUMAS ESPCIES DE IMPORTNCIA CLNICA
Neisseria
gonorrhoeae
Neisseria
meningitidis
sempre considerada patognica, de transmisso sexual ou pelo parto e indicativa de

tratamento. No homem causa uretrite, sendo at 50% assintomtica e est relacionada a
complicaes como epididimite, prostatite e estenose uretral. Na mulher causa corrimento
vaginal, endocervicite, uretrite, abscesso vestibular, salpingonegooforite e doena inflamatria
plvica. Pode ser isolada tambm na mucosa oral e anal, e em rcem-nascidos pode causar
uma conjuntivite denominada Oftalmia neonatorum. A doena sistmica disseminada pode
ocorrer em 1 a 3% dos pacientes infectados, principalmente em assintomticos e caracterizada
por febre, tremores, leses cutneas, artrite de extremidades. As leses cutneas so do tipo
mculo-pustulares ou hemorrgicas, com centro de necrose. Raramente ocorre artrite sptica
com 50% de positividade de isolamento. Pode ocorrer meningite e endocardite.
Pode causar meningite, infeco sistmica grave com coagulao intravascular disseminada
(CIVD) e elevada mortalidade, podendo causar em associao outras infeces (conjuntivite,
artrite, sinusite e pneumonia). Em mucosas pode ser isolada em portadores sos em 5 a 15 %
dos indivduos e por perodos de semanas a meses. A transmisso se faz por vias areas.
Mod V - 9
Moraxella
(Branhamella)
catarrhalis
Potencial patgeno de vias areas, principalmente em crianas e adultos jovens. Causa com
maior freqencia otite, sinusite e pneumonia. Mais raramente pode causar endocardite e
meningite. Em idosos, aps o Haemophylus influenzae e o Pneumococo, constitui a terceira
causa de pneumonia em pacientes com doena pulmonar obstrutiva crnica. Em adultos
raramente isolada em pacientes assintomticos. Cerca de 80% das cepas so produtoras de
beta-lactamase, e so detectadas atravs do teste do Nitrocefin (cefalosporina cromognica).
Outras espcies de Neisseria raramente so isoladas em casos de endocardite
ISOLAMENTO
NEISSERIA GONORRHOEAE
Material clnico para isolamento (escolha depende dos sintomas):
Uretral
Endocervical (sexualmente ativas/vaginal em meninas)
Retal (colher secreo mucosa e no fezes, utilizando meio
seletivo tipo Thayer Martin)
Orofaringe
Conjuntiva
Glndula de Bartholin
Trompas
Endomtrio
Lquido sinovial
Leses de pele
Sangue
Recomenda-se:
Utilizar swab com algodo atxico ou swab de Rayon ou Dacron.
Semear o mais rpido possvel nos meios slidos, e usar placas aquecidas prviamente em estufa.
Urina pode ser utilizada, aps centrifugao rpida e semeadura do sedimento.
Em meio seletivo, deve-se, no entanto, preferir outros materiais com maior chance de isolamento.
Usar frascos de hemocultura sem o anticoagulante SPS que inibidor para as N. Gonorrhoeae (Ex:
Caldo BHI com 1% de gelatina).
Em leses de pele preferir a bipsia que o swab.
Incubar em jarra com umidade e vela.
Sempre realizar bacterioscopia pelo Gram.
NEISSERIA MENINGITIDIS
Materiais clnicos para isolamento, de acordo com aspectos clnicos:
LCR
Sangue (usar frascos de hemocultura sem SPS como anticoagulante)
Aspirado de petquias
Sufuses hemorrgicas ou bipsias
Liqudo sinovial
Swab de conjuntiva
Aspirado traqueal, ou transtraqueal
ou escarro
Swab de nasofaringe (prefervel a swab
de orofaringe)
MORAXELLA (BRANHAMELLA) CATARRHALIS

Material clnico adequado para isolamento de acordo com o quadro clnico:
Otite mdia
Timpanocentese (miringotomia) quando indicado. Secreo colhida com

swab em geral revela flora contaminante, exceto se rompimento
expontneo muito recente e sem uso prvio de antimicrobianos.
Sinusite
Aspirado de seios da face comprometidos, quando indicado.
Infeces do
trato respiratrio
inferior/pneumonia
Escarro, aspirado traqueal, transtraqueal podem ser teis ou BAL, quando

indicado e comparados com bacterioscopia.
Mod V - 10
TRANSPORTE E SEMEADURA DO MATERIAL

O ideal semear imediatamente aps a coleta em meio slido, levar para a estufa 36oC em jarra com
vela ou com gerador de CO2 e umidade. O uso de meios de transporte como Stuart ou Amies deve ser
considerada uma alternativa de risco. Para M. catarrhalis, os meios de transporte so adequados.
NEISSERIA GONORRHOEAE
sensvel a variaes de temperatura acima de 37oC ou abaixo de 35oC, de modo que a amostra
no pode ser refrigerada.
Recomenda-se gar chocolate enriquecido com suplemento com l-cistena, NAD e vitaminas
(Isovitalex ou similar), embora seja possvel obter crescimento de algumas cepas em gar sangue.
Incubar em jarra com umidade (bola de algodo e gua estril) e CO2 (jarra com vela ou gerador
de CO2).
Secreo retal, swab de orofaringe, ou outros materiais com maior microbiota contaminante ou
menor expectativa de isolamento, semear, alm do meio rico, em meio seletivo como Thayer
Martin modificado (TMM) ou meio New York City (NYC).
NEISSERIA MENINGITIDIS
um pouco mais tolerante a variaes de temperatura, mas recomenda-se para transporte

ambientes com CO2.
Cresce bem em gar sangue, mas por precauo, deve-se semear tambm em gar chocolate.
Incubar em jarra com umidade (bola de algodo e agua estril) e CO2 (jarra com vela ou gerador
de CO2).
Materiais com maior flora contaminante ou menor expectativa de isolamento, semear, alm do
meio rico, em meio seletivo como Thayer Martin modificado (TMM) ou meio New York City (NYC).
Meios seletivos como TMM inibem crescimento de enterobactrias, a maioria das outras espcies
de Neisserias (7,5 g/ml de colistina), Gram positivos (Vancomicina 3 g/ml) e fungos (13,5 g/ml
de nistatina); e contm suplementos para suportar crescimento das Neisserias meningitidis e N.
gonorrhoeae.
MORAXELLA CATHARRALIS
Tolera temperatura ambiente e cresce bem em gar sangue.

Material estril ou com pouca microbiota (LCR, sinovial, sangue, bipsia, conjuntiva, nasofaringe).
Pode usar meio no seletivo
BACTERIOSCOPIA E IDENTIFICAO
A partir das amostras genitais, LCR, bipsia, etc., deve-se sempre reservar material para a
bacterioscopia, fazendo o esfregao no momento da coleta, ou colhendo dois swabs, ou material
suficiente para a semeadura e bacterioscopia.
Quando o swab nico, no caso das Neisserias d-se preferncia semeadura imediata e
posteriormente:
-
Relatar a bacterioscopia de modo a quantificar no material analisado a presena ou ausncia de

diplococos Gram negativos com caractersticas de neisserias em:
-
Ressuspender o swab em 1 ml de salina;

Agitar no Vortex;
Centrifugar;
Fazer um esfregao do sedimento.
raros (+)
poucos (++)
moderados (+++)
muitos (++++)
Descrever se os microrganismos so extra-celulares ou intra-celulares e quantidade de neutrfilos

e de clulas epiteliais.
Mod V - 11
importante correlacionar a bacterioscopia com achados de cultura e dados do paciente, como

quadro agudo, portador, etc. Em casos de abuso sexual fundamental o isolamento e
identificao completa, considerando que neisserias saprfitas ou mesmo Acinetobacter spp.
podem ser diagnosticados erroneamente como N. gonorrhoeae.
IDENTIFICAO
As N. gonorrhoeae crescem em gar chocolate formando colnias pequenas, sendo em geral menores
que as de neisserias saprfitas. A cor pode variar de cinza a amarelo. A colnia da M. catarrhalis de
cor cinza rseo-acinzentado, sendo comumente frivel, saindo inteira quando removida com a ala
bacteriolgica. As colnias de N. meningitidis A e C capsuladas apresentam mucides.
Testes imunolgicos no substituem a cultura e a bacterioscopia, e para o diagnstico da gonorria
existem no comrcio recursos do tipo ELISA, sondas genticas de acido nuclico, PCR e suas
variantes, de elevado custo e indicado em levantamentos epidemiolgicos, ou quando no se dispe
dos recursos tradicionais.
Para LCR e outros fludos estreis e mesmo urina, a caracterizao de Neisseria meningitidis pode ser
feita pela tcnica de aglutinao com partculas de ltex que rpida, com boa sensibilidade,
especificidade e permite a tipagem dos principais tipos prevalentes em meningites. O teste pode ser
positivo nos casos de cultura negativa por uso prvio de antimicrobianos, sendo, no entanto, de custo
elevado. Para o tipo B alguns produtos oferecem testes para afastar reao cruzada com E. coli. A
reao negativa no exclui o diagnstico que deve ser sempre avaliado juntamente com a
bacterioscopia e a cultura.
BACTERIOLOGIA
A identificao de N. meningitidis e N. gonorrhoeae pode ser feita em dois nveis: presuntivo e
confirmatrio. Em servios de Sade Pblica (DST) onde a prevalncia da gonorria significativa,
para fins prticos de tratamento pode-se fazer o diagnstico utilizando-se aspectos clnicos associados
bacterioscopia positiva (Diplococos Gram negativos intra-celulares) em pacientes de risco. Deve-se,
no entanto, sempre colher material para cultura, possibilitando a confirmao e monitoramento da
resistncia destas bactrias.
Na ocorrncia de surtos de meningite meningoccica, o diagnstico presuntivo para fins de
tratamento, tambm pode basear-se na clnica e na bacterioscopia do LCR ou de leses (petquias e
prpuras). As culturas devem sempre ser colhidas para confirmao, identificao de sorotipo e
sensibilidade aos antimicrobianos atravs dos seguintes procedimentos:
Fazer bacterioscopia das colonias isoladas para confirmar a presena de diplococos Gram
negativos com forma de dois feijes.
Fazer o teste de oxidase das colonias sugestivas.
Deve-se procurar afastar outros gneros de bactrias como Acinetobacter spp., Kingella spp. e
Moraxella spp. que so morfologicamente parecidos. Um recurso prtico para evitar erros de
identificao de Acinetobacter spp. e Kingella spp. como Neisserias :
-
Semear o agente suspeito em gar chocolate.

Colocar um disco de penicilina de 10 ui.
Aps 24h fazer um gram das colnias que crescerem prximas a zona de inibio.
Se permanecerem cocides com aspecto de neisserias confirma-se o isolamento; caso tenham
adquirido a forma de bacilos longos, o isolado no de Neisseria.
Outro passo importante verificar a capacidade de crescimento em meios pobres como o gar
nutriente ou a necessidade de crescimento em meio rico (gar chocolate suplementado).
A identificao das espcies de neisseria baseia-se na utilizao de acares: glicose, maltose,

lactose, sacarose e frutose. Como as neisserias utilizam carboidratos por via oxidativa, a base
gar Cistina Tripticase (CTA) adicionada de 1% de cada um dos aucares e com indicador
vermelho de fenol tem sido utilizado. No entanto, reaes duvidosas podem ocorrer, por falha na
deteco da acidez produzida pela bacteria, dificultando a identificao. Recomenda-se enviar a
cepa isolada rapidamente ao Laboratrio de Referncia para confirmao.
Mod V - 12
Provas de rotina para diferenciar Neisserias patognicas

AC 22oC
A. Nut.
35oC
DNAse
GLI
MAL
LAC
SAC
FRU
N. gonorrhoeae
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
N. meningitidis
neg
neg
neg
neg
neg
Outras neisserias
neg
varivel
varivel
varivel
varivel
varivel
M. catharralis
neg
neg
neg
neg
neg
Kingella spp.
neg
neg
neg
neg
Bactria
AC = crescimento em gar chocolate a 22 C

GLI = glicose
MAL = maltose LAC = lactose
neg
o
A. Nut. = crescimento em gar nutriente a 35 C

SAC = sacarose FRU = frutose
Mod V - 13
3. ENTEROBACTRIAS
INTRODUO
a maior e mais heterognea famlia de bactrias Gram negativas de importncia mdica. So
considerados atualmente: 27 gneros / 102 espcies / 08 grupos indefinidos. Independente da
complexidade, mais de 95% das amostras implicadas em caso clnicos so colocadas em 25 espcies,
sendo possivel o isolamento de enterobactrias de qualquer amostra clnica.
CARACTERIZAO DA FAMLIA ENTEROBACTERIACEAE

So bacilos Gram negativos, no esporulados, com motilidade varivel, oxidase negativos, e que
crescem em meios bsicos (caldo peptona), meios ricos (gar sangue, gar chocolate e CLED), meios
seletivos (Mac Conkey, EMB). So anaerbios facultativos (crescem em aerobiose e anaerobiose),
fermentam a glicose com ou sem produo de gs, so catalase positivos, e reduzem nitrato a nitrito.
So divididos atravs de diferentes provas em 11 principais gneros, tendo sido descritos nos ltimos
anos outros 16 gneros e algumas espcies, mas ainda consideradas de pouca ou nenhuma
importncia clnica.
IMPORTNCIA CLNICA
A maioria das enterobactrias encontrada no trato gastrointestinal de humanos, no reino animal,

na gua, solo e vegetais.
Alguns tambm so considerados enteropatgenos por causarem preferencialmente infeces

gastrointestinais como a Salmonella typhi, outras salmonellas, Shigella spp., Yersinia enterocolitica
e vrios sorotipos de Escherichia coli, embora possam tambm causar infeco em outros locais.
As enterobactrias representam 80% ou mais de todos os Gram negativos de importncia clnica

isolados na rotina microbiolgica
So responsveis por de cerca de 70% das infeces urinrias e 50% das septicemias.
INFECES HOSPITALARES E NA COMUNIDADE

Nas infeces hospitalares:
As enterobactrias que atualmente predominam so: Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter
spp.
Principais gneros das enterobactrias (cerca de 99% dos isolamentos de enterobactrias de

importncia clnica): Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Proteus spp., Providencia
spp., Morganella spp., Citrobacter spp., Salmonella spp., Shigella spp., Serratia spp.
As enterobactrias menos isoladas so: Edwarsiella spp., Hafnia spp., Yersinia spp.
Baseado em dados de prevalncia e importncia clnica, considera-se necessrio que os

laboratrios de microbiologia utilizem metodologia que permita discriminar com 80% de acerto os
gneros e espcies considerados abaixo:
-
Escherichia coli
Shigella spp.
Salmonella typhi
Salmonella spp.
Citrobacter freundii
Proteus mirabilis
Citrobacter koseri
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Providencia spp.
Serratia spp.
Proteus vulgaris
Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
Enterobacter agglomerans
Yersinia enterocolitica
Morganella morganii
Nas infeces da comunidade:
Destacam-se: Escherichia coli, Klebsiella spp., Proteus spp., Salmonella spp., Shigella spp.
Mod V - 14
Principais provas para a identificao das enterobactrias de importncia clnica

1. Fermentao da glicose
7.
Produo de gs (CO2)
2. Fermentao da lactose
8.
Oxidase
3. Motilidade
9.
Produo de indol
4. Utilizao de citrato
10. Produo de urease
5. Descarboxilao da lisina
11. Produo de fenilalanina desaminase ou opo

triptofanase
6. Produo de sulfeto de hidrognio (H2S)
12. Produo de gelatinase ou opo DNAse
Provas complementares de Identificao
Fermentao de outros carboidratos: sacarose, maltose, arabinose, salicina, dulcitol, manitol, etc.
Utilizao de aminocidos: arginina e ornitina
Hidrlise da esculina, etc.
ONPG
Utilizao de acetato
Provas teis, mas pouco utilizadas: vermelho de metila, voges-proskauer, crescimento em KCN,
tartarato de jordan e lipase.
Os esquemas de identificao baseiam-se na determinao dos gneros e espcies mais isolados na

clnica, e nas provas mais caractersticas de cada gnero e espcie, baseado em alguns critrios
como: facilidade de execuo, facilidade de interpretao, custo, rapidez para leitura, etc.
TIPOS DE TESTES UTILIZADOS PARA IDENTIFICAO
Podem ser utilizados testes preparados no laboratrio, desde que submetidos a controle de
qualidade.
Adquiridos no comrcio em testes isolados ou em kits acompanhados dos respectivos esquemas

de identificao.
Mtodos automatizados em geral utilizam estas mesmas provas e ampliam o nmero de testes
podendo caracterizar com maior segurana e melhor poder de discriminao de gneros e espcies
no comuns.
Mtodos rpidos em geral utilizam substratos cromognicos para deteco de enzimas produzidas
pelas bactrias e que se revelam aps 4 a 6 horas de incubao.
Na rotina bacteriolgica, existem vrias alternativas e, com base em conjuntos ou sistemas

simplificados de provas bioqumicas, possvel realizar a triagem e identificao presuntiva dos
principais gneros de interesse clnico. Desse modo, das enterobactrias isoladas de amostras clnicas,
cerca de 90%, podem ser perfeitamente identificadas atravs desses esquemas, podendo o resultado
ser entregue dentro de um espao de tempo relativamente curto, geralmente, entre 48 a 72 horas.
MEIO IAL (INSTITUTO ADOLFO LUTZ)

Este meio foi elaborado para triagem de enterobactrias e consiste de 9 provas em apenas um tubo
de ensaio, que consistem em: indol (tampa), fermentao da sacarose e glicose e produo de gs,
fenilalanina, uria, H2S, Lisina, Motilidade.
Baseado nestas provas possvel identificar as seguintes bactrias:
-
E. coli
Salmonella typhi
Shigella (indol positiva)
Providencia spp. (uria positiva) ou

Morganella morganii
Providencia spp. (uria negativa)
Serratia marcescens (provas

complementares)
Proteus mirabilis
Vibrio cholerae
Shigella (indol negativa)
Klebsiella spp. (sacarose

negativa)
Proteus vulgaris
Vibrio spp.
Salmonella spp.
bactrias no fermentadoras
Mod V - 15
Vantagens e limitaes
O meio IAL tem a vantagem de ser prtico para inoculao e de baixo custo. Sua desvantagem a
dificuldade de interpretao de tantas provas, exigindo muita experincia prvia com o meio. Este
meio identifica os principais gneros de enterobactrias, indicando a presena de bactrias no
fermentadoras e Vibrios.
Para caracterizar corretamente as espcies de Enterobacter, gnero Serratia, gnero e espcies de
Pseudomonas h necessidade de realizar provas complementares.
Pelas limitaes do poder discriminatrio de gneros e espcies de enterobactrias no se recomenda
este meio, como nica opo, na identificao de bactrias envolvidas em infeces hospitalares. Uma
alternativa seria utilizar os resultados obtidos do meio IAL como triagem e adicionar os testes
complementares, como Citrato e a fermentao da lactose verificada no crescimento em gar Mac
Conkey.
Variantes do meio IAL
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
1
2
3
4
5
meio de Rugai sem sacarose provas: fenilalanina, fermentao da glicose, gs, H2S, uria
MIO (Motilidade Indol Ornitina)
lisina
citrato
rhamnose
CONJUNTO EPM / MILI / CITRATO

Trata-se praticamente da mesma combinao de reaes do meio IAL ou Rugai & Arajo (modificado
por Pessoa & Silva), separados em 2 tubos, passando a verificao do indol da tampa do IAL, para o
meio MILi aps adio do reativo de Kovacs.
Tubo EPM
- inocular picando at o fundo

- semear na superfcie
- incubar com a tampa frouxa 24hs/35oC
Tubo MILI
- fazer picada central apenas

- incubar 24hs/35oC
- adicionar 3 gotas de reativo de Kovacs aps a leitura da lisina para o teste de
indol
Citrato
Fermentao da glicose, produo de gs, H2S, uria, fenilalanina.
Motilidade: as imveis crescem apenas na linha de picada.

Descarboxilao da lisina: lisina positiva o meio torna-se roxo, na prova
negativa o meio permanece amarelado nos 2/3 inferiores.
Indol: a formao de um anel rosa na superfcie do meio indica positividade
para o indol.
- inocular a superfcie
- incubar 24hs/35oC
A prova positiva evidenciada pelo aparecimento de colorao azul na

superfcie.
Interpretao do Meio EPM
Base
Superfcie
Produo de gs
Formao de bolhas ou rachaduras no meio
Produo de H2S
Presena de pigmento negro de qualquer

intensidade
Hidrlise da Uria
Colorao azul esverdeada (fraca) na base indica

prova positiva
Desaminao do Triptofano
Reao positiva verde escuro ou acastanhado

Reao negativa superfcie inalterada
Mod V - 16
MEIO TRPLICE AUCAR FERRO (TSI)

Considerado o mais clssico dos sistemas de identificao, necessita de provas adicionais, mas tem a
vantagem de ser de mais fcil interpretao. Abaixo ser descrito em detalhes e ser a base da
identificao de enterobactrias.
Acurcia da identificao - qualquer sistema de testes existentes no comrcio, com leitura manual ou
automatizada, tem limitaes no nmero de provas e de discriminao dos diferentes gneros e
espcies de enterobactrias, de modo que a maioria dos esquemas trabalha com um mximo de 80%
de acerto. Os esquemas de identificao de enterobactrias podem utilizar uma ampla gama de
recursos, variando desde nove reaes como meio IAL ou Rugai & Arajo modificado por Pessoa &
Silva, at dez testes propostos neste manual, ou sistemas como API 32E que pode identificar
enterobactrias e alguns no fermentadores, utilizando 32 testes. importante destacar que nenhum
sistema oferece 100% de acerto para a caracterizao das espcies de enterobactrias, mas analisam
o principal comportamento descrito na literatura.
A fonte de informao mais utilizada baseia-se na tabela organizada por Farmer (1991) contando com
47 provas, e os respectivos percentuais de positividade para 28 diferentes gneros e 121 espcies de
enterobactrias. Os principais gneros e espcies de importncia clnica podem ser caracterizados com
>95% de acerto com poucas provas. Entretanto para as espcies dos gneros Citrobacter,
Enterobacter, Klebsiella e Serratia os testes mais utilizados apresentam baixo poder de discriminao,
sendo a identificao feita pelo maior percentual de probabilidade.
necessrio destacar que padres no usuais podem ocorrer e que o microbiologista deve estar
atento para analisar cepas que possam ter importncia clnica e epidemiolgica ou encaminh-las a
Laboratrios de Referncia. Antes, no entanto, deve certificar-se que a anlise no esta sendo feita
com cultura mista de bactrias.
O meio de TSI inclinado em bico de flauta, de cor vermelho-cereja e deve ser inoculado por picada
central at o fundo, seguido de espalhamento na superfcie e incubao durante 18-24h a 35oC.
Provas do Meio de TSI
a) Prpura/amarelo (pice
prpuro e base amarela)
fermentao apenas da glicose (lactose e

sacarose negativas)
b) Amarelo/amarelo (pice e
base amarelos)
fermentao da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou

3 acares)
c) Presena de gs (CO2)
bolhas ou meio fragmentado
d) H2S positivo
presena de precipitado negro
Interpretao do resultado das reaes encontradas no TSI

pice
Base
H2S
Gs
Interpretao mais provvel
Vermelho
Vermelho
neg
neg
Sem crescimento = bactria exigente
Vermelho
Vermelho
neg
neg
Crescimento na superfcie = No Fermentador ou

Gram (+)
Amarelo
Vermelho
neg
neg
Crescimento na superfcie = Gram (+)
Vermelho
Amarelo
neg
varivel
Enterobactria ou Aeromonas lactose e sacarose

negativas
Amarelo
Amarelo
neg
varivel
Enterobactria
Amarelo
Amarelo
varivel
Salmonella, Proteus/Morganella/Providencia e
Citrobacter
Obs. A presena de H2S em bactrias lactose e sacarose negativas pode ser menos evidente, pois a precipitao de
sais de ferro pelo sulfeto de hidrognio depende de meio acido (Ex: Salmonella typhi)
Mod V - 17
ETAPAS DA IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS
ANLISE DO CRESCIMENTO NOS MEIOS RICOS E SELETIVOS

A identificao de uma enterobactria comea com a anlise do material semeado. Em geral temos os
seguintes meios para interpretar:
Secrees: gar sangue e Mac Conkey

Lquidos nobres e bipsias: gar Chocolate e Mac Conkey
Fezes: Mac Conkey e Salmonella-Shigella
Urina: CLED ou gar sangue e Mac Conkey, etc.
Devemos considerar que:
A enterobactria sempre cresce nos meios ricos (gar sangue, chocolate e CLED), bem como nos
meios seletivos: gar Mac Conkey e Salmonella-Shigella.
Os Gram positivos como regra no crescem em gar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, exceto os
enterococos que podem crescer.
No gar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, alm das enterobactrias e dos enterococos, podem
crescer bactrias no fermentadoras e Candida.
Portanto caracteriza-se uma enterobactria quando ela esta presente em todos os meios semeados,
mas ainda necessrio diferenciar de outros microrganismos no muito exigentes como no
fermentadores, enterococos e Candida spp.
Recomenda-se realizar:
Gram da colnia isolada sempre fazer o Gram para evitar enganos de interpretao (diferenciar
cocos de bacilos, Gram positivos de Gram negativoe e leveduras).
Prova da oxidase indicada para detectar e/ou diferenciar o grupo Aeromonas, Plesiomonas,
Vibrio que tambm so fermentadores.
Prova do metabolismo fermentador triagem utilizando os meios de OF glicose (quando suspeitar
de no fermentador), TSI (Trplice Aucar Ferro) ou EPM (Rugai sem sacarose), para
enterobactrias.
Srie bioqumica complementar sempre necessria para caracterizar gnero e espcie. O
nmero de provas vai permitir maior ou menor discriminao (vide a seguir o nvel de
complexidade de provas).
As Enterobactrias caracterizam-se por se apresentarem como: bacilos Gram negativos,

fermentadores da glicose, com ou sem produo de gs, oxidase negativas, reduzem nitrato a nitrito e
que crescem bem no meio de Mc Conkey ou EMB.
Como modelo de triagem na identificao bacteriana tem sido utilizado o meio de TSI (Triplice Aucar
Ferro), que permite avaliar a fermentao da glicose, produo de gs, fermentao de lactose e/ou
sacarose e produo de H2S.
O TSI constitui o meio de identificao preliminar mais utilizado no mundo, sendo necessrio, no
entanto, necessrio adicionar algumas provas, para completar a identificao e classificadas em dois
nveis de complexidade:
Nvel de complexidade 1
motilidade, indol, lisina, uria,

fenilalanina, DNAse e oxidase.
Nvel de complexidade 2
provas do nvel 1 e ornitina, arginina, sacarose, arabinose, malonato,

esculina e PYR.
Mod V - 18
citrato,
lactose
(Mac
Conkey),
DESCRIO DAS PRINCIPAIS PROVAS BIOQUMICAS

- Semear por picada at o fundo, e incubar 24h/35oC
- Aps 24h de incubao, pingar 3-4 gotas de Kovacs na superfcie do
meio
- Meios Motilidade/indol com resazurina (motilidade); SIM (motilidade,
indol e H2S) e Mili (Motilidade, Indol e Lisina)
Motilidade, H2S e
Indol
crescimento apenas na linha de picada = motilidade negativa

crescimento difuso em todo o meio = motilidade positiva
H2S positivo = meio enegrecido

H2S negativo = cor inalterada do meio Indol
cor prpura = indol positivo

cor do reagente = indol negativo
- Inocular apenas na superfcie e incubar 24h/35oC

Uria de Christensen
Urease positivo = cor vermelha (Proteus: reao mais intensa)

Urease negativo = mantm cor amarelada do meio
- Inocular na superfcie e incubar 24h/35oC

Citrato de Simmons
Fenilalanina
Citrato positivo = azul e/ou crescimento no meio

Citrato negativo = cor verde (inalterado)
- Inocular a superfcie do meio (inclinado) e incubar 24h/35oC

- Aps crescimento pingar na superfcie 5 gotas do reagente cloreto
frrico a 10%
FA positivo = cor verde escuro na superfcie

FA negativo = mantm a cor do meio inalterada
IDENTIFICAO DAS ENTEROBACTRIAS DE IMPORTNCIA CLNICA
CONSIDERAES
Valores positivos ou negativos referem-se a 80% ou mais de definio; para saber o real
percentual de provas positivas ou negativas consultar a tabela geral.
PB (padro bioqumico) = probabilidade terica da bactria em questo; apresentar o padro

bioqumico analisado (os testes considerados so indicados pelo sinal #).
Exemplo: PB para Proteus vulgaris em relao s provas, H2S +(98%) FA +(95%) Indol + (98%)
(multiplicar os percentuais de ocorrncia)= 92%.
PB baixo significa ter outro padro mais frequente.
Os padres bioqumicos pouco freqentes tero menor probabilidade de isolamento.
No aplicado quando se considera gnero, pois envolve vrias espcies com diferentes padres
de testes (ex: Salmonella spp.).
Valores seguidos do sinal positivo (+) ou negativo (neg) significa o percentual de cepas com
resultado do teste positivo ou negativo. Ex: Lisina 75%+ = 75% das cepas so lisina positiva.
V = valores >20% e <80% de reaes positivas ou negativas; estas provas podem ser teis para
diferenciar duas espcies ou dois gneros quando a reao s ocorre para uma delas. Ex.: uria
em relao a E. coli e Citrobacter. E. coli negativa e Citrobacter varivel. Se a reao encontrada
for positiva, exclui-se E. coli.
Pela importncia clnica e epidemiolgica, padres no comuns de Yersinia e Salmonella spp.

foram considerados, pois na prtica a motilidade pode ser duvidosa e o H2S pode ser falsonegativo.
As provas destacadas com fundo cinza tm a finalidade de facilitar a busca de provas-chave na

diferenciao bacteriana.
Recomenda-se de rotina utilizar as provas do nvel 1 que, para a maioria das bactrias da rotina,
permite uma caracterizao adequada. Quando houver necessidade usar as de nvel 2.
Mod V - 19
IDENTIFICAO BIOQUMICA SIMPLIFICADA DAS PRINCIPAIS ENTEROBACTRIAS NVEL DE COMPLEXIDADE 1

H2S (gs sulfdrico) positivo, FA (fenilalanina) positivo
Bactrias
PB#
Indol +
Proteus vulgaris
92%
Indol neg
Proteus mirabilis
94%
H2S negativo , FA positivo

Bactrias
Indol +
Indol neg
Citrato
Uria
PB#
varivel
88%
Morganella morganii
neg
72%
P. penneri
neg
69%
varivel
neg
<16%
Providencia spp.
Enterobacter spp.
H2S positivo, FA negativo, Indol positivo

Bactrias
Citrato
Motilidade
Urease
Lisina
Lac MC
PB#
78%+
89%+
varivel
neg
25%
neg
neg
neg
99%
Edwarsiella tarda
Lac MC = lactose em Mac Conkey
H2S positivo, FA negativo, Indol negativo

Bactrias
Urease
Citrato
Lisina
Motilidade
Gs
Sorotipagem
Salmonella spp.
neg
S. typhi
neg
neg
neg
97%
S. gallinarum/
S. pullorum
neg
neg
neg
varivel
90%
varivel
neg
neg
52%
C. freundii
PB#
H2S negativo , FA negativo , Indol positivo, motilidade negativa

Bactrias
Y. enterocolitica
Shigella spp.
Klebsiella oxytoca
E.coli inativa (rara)
1
2
Citrato
Urease
Lisina
Latose
Gs
Sorotipagem
PB#
neg
75%+
neg
neg
neg
+ Yersinia
50%
neg
neg
neg
neg
neg
+ Shigella
50%
no
99%
neg
neg
varivel
75% neg
neg
- positivo temperatura ambiente e negativa 37 C

- em coprocultura testar p/ E. coli invasora
Mod V - 20
Invasora
80%
H2S negativo, FA negativo, Indol positivo, Motilidade positiva

Bactrias
Citrato
Urease
Lisina
Lactose
Gs
PB#
neg
neg
97%
varivel
neg
varivel
varivel
neg
E. coli
Citrobacter spp.
Aeromonas spp.
1
neg
varivel
- oxidase positiva (verificar Aeromonas, Plesiomonas e Vibrio)

Aeromonas Dnase positiva e Plesiomonas Dnase negativa
- Aeromonas caviae: lisina negativa e lactose positiva
H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade negativa

Bactrias
Shigella spp.
(colnia pequena)
E. agglomerans
Urease
Citrato
Lisina
Gs
Lactose
Comentrio
PB#
neg
neg
neg
neg
neg
sorotipagem
50%
Colnia mucide
100%
75%+
neg
neg
neg
neg
sorotipagem
50%
neg
varivel
neg
neg
varivel
15% mot neg
9,6%
1
- cepas isoladas do trato respiratrio superior, especialmente nariz podem ser uria negativas e bioquimicamente
pouco ativas (citrato varivel, lisina varivel), denominadas K. ozaenae e K. rhinoscleromatis
2
- motilidade positiva temperatura ambiente
3
- pode ocorrer falsa motilidade negativa em meio semi-solido e positiva em caldo
H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade positiva, Citrato negativo

Bactrias
Lisina
Lactose
Sorotipagem
PB#
Hafnia alvei
neg
negativa
76%
Salmonella choleraesuis
neg
37%
Salmonella paratyphi A
neg
neg
90%
E. agglomerans
neg
varivel
negativa
25%
H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade positiva, Citrato positivo, DNAse e
gelatinase negativas
Bactrias
Salmonellla typhi
Lisina
Urease
Lactose
Gs
Sorotipagem
PB#
neg
++
neg
95%
neg
++
neg
95%
neg
neg
neg
12%
Mod V - 21
H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade positiva, Citrato positivo, DNAse e
gelatinase positivas, Serratia spp.
Bactrias
Lisina
Urease
Lactose
Gs
Pigmento
vermelho
PB#
Serratia marcescens
85% neg
neg
55% +
varivel
95%
Serratia liquefaciens
neg
90% neg
75% pos
neg
76%
55% +
neg
70% neg
varivel
85%
Serratia rubidae
1
- raramente isolada
IDENTIFICAO BIOQUMICA SIMPLIFICADA DAS PRINCIPAIS ENTEROBACTRIAS NVEL DE COMPLEXIDADE 2

H2S positivo, FA positivo
Bactrias
Indol positivos
Ornitina
Sacarose
PB#
neg
92%
neg
20%
Ornitina
Citrato
PB#
Proteus mirabilis
varivel
(65%+)
94%
Proteus penneri
neg
neg
30%
Urease
Citrato
Sacarose
Ornitina
Proteus penneri
neg
neg
Morganella morganii
neg
neg
neg
75%+
neg
Enterobacter sakazaki
neg
Proteus vulgaris
Morganella morganii
Bactrias
Indol negativos
H2S negativo, FA positivo

Bactrias
Indol negativos
Bactrias
Indol positivos
Citrato
Morganella morganii
neg
Providencia spp.
H2S positivo, FA negativo, Indol positivo

Bactrias
Edwarsiella tarda
Citrato
Urease
Lisina
Ornitina
Lactose
Sacarose
78%+
44%+
neg
neg
78%+
89%+
neg
neg
neg
neg
Mod V - 22
H2S positivo, FA negativo, Indol negativo

Bactrias
Uria
Citrato
Lisina
Ornitina
Motibil.
Arabinos
Gs
Sorotip.
Salmonella spp.
neg
S. typhi
neg
neg
neg
neg
neg
S. choleraesuis
neg
25%+
neg
S. paratyphi A
neg
neg
neg
S. gallinarum
neg
neg
neg
neg
neg
S. pullorum
neg
neg
neg
Outras
Salmonellas
neg
44%+
78%+
neg
neg
89%+
89%+
neg
C. freundii
Triagem rpida para principais bactrias H2S positivas

Bactrias
PYR
Fenilalanina
Salmonella spp.
neg
neg
Citrobacter spp.
neg
neg
Proteus spp.
H2S negativo, FA negativo, Indol positivo, Motilidade negativa

Bactrias
Y. enterocolitica
Citrato
Urease
Lisina
Ornitina
Lactose
Gs
Sorotip.
PB#
neg
75%+
neg
neg
neg
50%
neg
neg
neg
neg
neg
neg
50%
neg
++
NI
99%
neg
neg
40%+
20%+
25%+
neg
Shigella spp.
Klebsiella oxytoca
E. coli inativa (rara)
1
invasora
80%
- positiva temperatura ambiente e negativa a 37 C

- em coprocultura testar para E. coli invasora
H2S negativo, FA negativo, Indol positivo, Motilidade positiva

Bactrias
E. coli
C. diversus (koseri)
Citrobacter amalonaticus
Aeromonas spp.
1
2
Citrato
Urease
Lisina
Ornitina
Lactose
Gs
PB#
neg
neg
90%+
65% +
97%
75% +
neg
50%+
97%
85%+
neg
35%+
97%
neg
75%+
neg
neg
neg
50%+
20%+
neg
neg
40%+
20%+
varivel
neg
neg
varivel
- C. koseri = malonato positivo C. amalonaticus = malonato negativo

- motilidade negativa a 35oC e positiva temperatura ambiente
Mod V - 23
16%
3
4
- oxidase positiva: Aeromonas Dnase positiva e Plesiomonas shigelloides Dnase negativa

- Aeromonas caviae lisina negativa e lactose positiva
H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade negativa

Bactrias
Shigella spp.
(colnia pequena)
Urease
Citrato
Lisina
Gs
Lactose
Comentrio
PB#
neg
neg
neg
neg
neg
Sorotipagem +
>50%
Colnia Mucide
100%
neg
varivel
varivel
varivel
varivel
Mucide
78%+
neg
78%+
11% motil. neg
16%
75%+
neg
neg
neg
neg
Sorotipagem +
50%
neg
varivel
neg
neg
varivel
15% motil. neg
9,6%
Klebsiella spp.
Yersinia enterocoltica
E. agglomerans
1
- cepas isoladas do trato respiratrio superior, especialmente nariz podem ser uria negativas e bioquimicamente
pouco ativas (citrato v, lisina v), denominadas K. ozaenae e K. rhinoscleromatis
2
- motilidade + temperatura ambiente
3
- pode ocorrer falsa motilidade (negativa em meio semi-slido e positiva em caldo)
H2S negativo, FA negativa, Indol negativo, Motilidade positiva, Citrato negativo

Bactrias
Lisina
Ornitina
Lactose
Urease
Arabinos
Sorologia
PB#
neg
neg
neg
76%
neg
neg
neg
neg
neg
neg
75%+
S. choleraesuis
neg
neg
neg
S. paratyphi A
neg
neg
neg
E. agglomerans
neg
neg
40%+
20%+
neg
Hafnia alvei
Salmonella typhi
Y. enterocolitica
25%
- H2S pode ser positivo no TSI com 48h

- motilidade negativa 35oC e positiva a 25oC
H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade negativa, Citrato positivo, DNAse e
gelatina negativas
Bactrias
Uria
Fenil.
Lisina
Argin.
Ornit.
Malon.
Gs
Lactose
Escul.
C. freundii
44%+
67%+
11%+
89%+
78%+
2%+
98%+
98%+
95%+
100%+
95%+
98%+
E. cloacae
65%+
97%+
96%+
75%+
100%+
93%+
30%+
E. agglomerans
20%+
20%+
65%+
20%+
40%+
60%+
E. gergoviae
93%+
90%+
100%+
96%+
98%+
55%+
97%+
E. sakazakii
1%+
50%+
99%+
91%+
18%+
98%+
99%+
100%+
E. aerogenes
Mod V - 24
Verso simplificada para interpretao das provas da Lisina negativa

Bactrias
Ornitina negativa
Gs
Esculina
Arginina
neg
varivel
neg
varivel
neg
E.agglomerans
Bactrias
Ornitina positiva
Urease
Fenil.
Malonato
Esculina
Obs.
65%+
neg
75% +
30% +
+ comum
Enterobacter sakazaki
neg
50%+
18% +
raro
Verso simplificada para interpretao das provas da Lisina positiva

Bactrias
E. aerogenes
Urease
Lactose
neg
varivel
Enterobacter gergoviae
H2S negativo, FA negativa, Indol negativo, Motilidade positiva, Citrato positivo, Dnase e
Gelatina positivas
Bactrias
Lisina
Ornitina
L-arabinose
Malonato
Motibilidade
Lactose
Serratia marcescens
99% +
99% +
neg
neg
neg
55% +
65% +
neg
neg
neg
neg
95% +
95% +
neg
neg
Serratia rubidae
55% +
neg
S. marcescens biog
CARACTERIZAO GERAL DAS PRINCIPAIS ENTEROBACTRIAS DE IMPORTNCIA CLNICA (%)

Bactrias
Indol
Citr.
H2S
Uria
Fenil.
Lisina
Argin.
Ornit.
Motil.
33
78
78
44
67
89
Citrobacter diversus (koseri)
99
99
75
80
99
95
100
95
85
85
95
95
99
100
100
100
98
95
98
98
97
100
65
97
96
95
20
50
20
20
85
99
93
90
100
90
Enterobacter sakazakii
11
99
50
99
91
96
Escherichia coli
98
90
17
65
95
Escherichia coli inativa
80
40
20
Edwarsiella tarda
Mod V - 25
Shigella dysenteriae
45
Shigella flexneri
50
Shigella boydii
25
18
Shigella sonnei
98
Hafnia alvei
10
100
98
85
98
95
98
Klebsiella oxytoca
99
95
90
99
Klebsiella ozaenae
30
10
40
Klebsiella rhinoscleromatis
Morganella morganii grupo
95
20
95
95
95
Proteus mirabilis
65
98
98
98
99
95
Proteus vulgaris
98
15
95
95
99
95
Proteus penneri
30
100
99
85
Providencia rettgeri
99
95
98
98
94
Providencia stuartii
98
93
30
95
85
Providencia alcalifaciens
99
98
98
96
Salmonella spp.
95
95
98
70
97
95
Salmonell typhi
97
98
97
Salmonella cholerasuis
25
50
95
55
100
95
10
15
95
95
Salmonella gallinarum
100
90
10
Salmonella pullorum
90
100
10
95
Salmonella outras
90
100
99
70
99
99
Serratia marcescens
98
15
99
99
97
Serratia marcescens bio
30
55
65
17
90
95
95
95
Serratia rubidae
95
55
85
50
75
95
CARACTERIZAO GERAL DAS PRINCIPAIS ENTEROBACTRIAS DE IMPORTNCIA CLNICA (%)

Bactrias
Gelatina
Malon.
Gs
glicose
Lactose
Sacarose
Escul.
DNAase
11
89
78
89
Citrobacter diversus (koseri)
95
98
50
40
97
35
Edwarsiella tarda
100
95
100
95
100
98
75
100
93
97
30
65
20
40
75
60
Mod V - 26
96
98
55
98
97
Enterobacter sakazakii
18
98
99
100
100
Escherichia coli
95
95
50
35
Escherichia coli inativa
25
15
Shigella flexneri
Shigella boydii
Shigella sonnei
Hafnia alvei
50
98
10
93
97
98
99
99
Klebsiella oxytoca
98
97
100
100
100
Klebsiella ozaenae
50
30
20
80
Klebsiella rhinoscleromatis
95
75
30
Morganella morganii grupo
90
Proteus mirabilis
90
96
15
50
Proteus vulgaris
91
85
97
50
80
Proteus penneri
50
45
100
40
Providencia rettgeri
10
15
35
Providencia stuartii
50
10
Providencia alcalifaciens
85
15
Salmonella spp.
96
Salmonell typhi
Salmonella cholerasuis
95
99
Salmonella gallinarum
10
Salmonella pullorum
90
Salmonella outras
100
0 ou 15
Serratia marcescens
90
55
99
95
98
Serratia marcescens bio
30
100
96
82
90
75
10
98
97
85
Serratia rubidae
90
94
30
100
99
94
99
95
25
IDENTIFICAO SOROLGICA
Dentro da famlia Enterobacteriaceae, encontram-se conjuntos de amostras bacterianas
bioquimicamente homogneas e, sorologicamente relacionadas, que constituem os gneros e,
segundo alguns critrios, podem se dividir em espcies.
As amostras relacionadas bioquimicamente so divididas em subgrupos ou tipos, por critrio
sorolgico, de acordo com a presena dos antgenos: somtico (O), flagelar (H) e de envoltrio ou
Mod V - 27
cpsula (K). Desse modo, os sorotipos so divises baseadas no relacionamento antignico, enquanto
os biotipos so amostras do mesmo sorotipo que diferem em caractersticas bioqumicas.
Em atividades de rotina de Bacteriologia Clnica, a identificao ou confirmao sorolgica feita
apenas com germes comprovadamente patognicos e de importncia epidemiolgica como Salmonella
spp., Shigella spp., Escherichia coli Yersina enterocolitica e mesmo assim utilizando-se esquemas
simplificados, atravs do seguinte procedimento tcnico:
Preparar uma suspenso bastante densa (aspecto leitoso), da bactria a ser testada, utilizando
soluo salina a 0,85%. A massa bacteriana proveniente do gar TSI usado na identificao
bioqumica ou, de preferncia, em gar nutriente inclinado aps repique para obteno de massa
de germes.
Colocar a salina sobre o crescimento bacteriano ocorrido na superfcie inclinada do meio;

Agitar o tubo aps alguns minutos de modo a obter a suspenso bacteriana;
Bactrias em fase rugosa tendem a se auto-aglutinar, e no devem ser utilizadas na
classificao sorolgica.
Sobre uma lmina limpa misturar uma gota do anti-soro conhecido e da suspenso bacteriana a
ser testada, e, com movimentos circulares, tornar a mistura bastante homognea continuando o
movimento durante um ou no mximo dois minutos. O aparecimento de aglutinao, nesse
intervalo de tempo, indica positividade da reao.
Algumas vezes, necessrio o aquecimento da suspenso bacteriana em banho-maria fervente,

durante 15 minutos, com finalidade de eliminar estruturas mais externas da clula que tm ao
interferente na reao. Aps o resfriamento da suspenso, repetir o teste. Caso ocorra a
aglutinao, confirmar a prova.
IDENTIFICAO DE SALMONELLA
No gnero Salmonella existe uma grande quantidade de sorotipos, que no so mais considerados
como espcies, e sua identificao sorolgica completa e detalhada uma tarefa restrita aos
denominados Laboratrios de Referncia. Para identificao rotineira no laboratrio clnico utilizam-se
basicamente trs antisoros:
a) Anti-Salmonella polivalente somtico (Grupos A,B,C,D,E)
b) Anti-Salmonella somtico, Grupo D (S. typhi)
c) Anti-Salmonella, anti Vi
Quando o denominado antgeno de virulncia (Vi) est presente, poder bloquear a aglutinao do
antgeno somtico do grupo D (Salmonella typhi). Desse modo, a suspenso dever ser aquecida em
banho-maria fervente e testada novamente com os trs anti-soros citados, dando o resultado abaixo
no caso de Salmonella typhi. A partir de uma reao positiva feita apenas com o antgeno somtico
polivalente, existe condio de confirmar a amostra como sendo do gnero Salmonella, sem
especificar o sorotipo ou sorovar.
Antisoros
Anti-soro poli somtico
Grupo D somtico
Anti Vi
Antgeno vivo
Antgeno aquecido
neg
neg
Aps a identificao bioqumica e aglutinao com soro polivalente, as amostras podero ser testadas
com os soros A,B,C,D,E monovalentes. A bactria pertencer ao sorogrupo em cujo soro houver
aglutinao. Se a reao for negativa deve-se aquecer a metade da suspenso em banho-maria
fervente e repetir o teste. A metade no aquecida dever ser utilizada para determinao de
antgenos flagelares. A identificao at sorotipos poder ser feita com auxlio dos soros flagelares
(a,b,c,d,i,1,2,5), e atravs de sua utilizao possvel identificar as seguintes amostras:
Mod V - 28
Grupo Sorolgico
Espcie Bacteriana
Grupo O2 (A)
Grupo O4 (B)
Salmonella paratyphi B e S. typhimurium
Grupo O7 (C1)
Salmonella paratyphi C e S. cholerae suis
Grupo O5 (D1)
Salmonella typhi
IDENTIFICAO DE SHIGELLA
O gnero Shigella est constitudo de apenas quatro sorogrupos, que so identificados
sorologicamente, de maneira simplificada, com a utilizao de anti-soros polivalentes.
Excepcionalmente, utiliza-se apenas o antisoro monovalente de Shigella dysenteriae tipo 1 (bacilo de
Shiga), por ser o mais patognico.
Grupo Sorolgico
Espcie Bacteriana
Sorotipos
Grupo A
13 sorotipos
Grupo B
Shigella flexneri
06 sorotipos
Grupo C
Shigella boydii
18 sorotipos
Grupo D
Shigella sonnei
01 sorotipo
As culturas suspeitas devero ser testadas primeiramente com os soros contra Shigella flexneri e
Shigella sonnei, que representam mais de 95% das amostras de Shigella isoladas em nosso meio.
Caso no haja aglutinao, prosseguir com os outros soros.
No ocorrendo aglutinao, possvel que a cultura seja rica em antgenos de superfcie que
geralmente impedem o contato do soro com o antgeno somtico O. Estes antgenos devem ser
destrudos pelo aquecimento da suspenso bacteriana por 15 minutos em banho-maria fervente,
procedimento que pode ser adotado como de rotina na sorologia desse gnero.
IDENTIFICAO DE ESCHERICHIA COLI

As
amostras de Escherichia coli que causam diarria pertencem a trs grupos principais:
Enteropatognicas (EPEC)
Enterotoxignicas (ETEC)
Enteroinvasoras (EIEC)
No existe nenhuma prova bioqumica que possa, seguramente, distingu-las entre si ou de outros
tipos de E. coli pertencentes flora normal do intestino. As amostras EPEC e EIEC so identificadas
por provas de sorotipificao rotineira, enquanto as amostras ETEC so identificadas apenas mediante
provas especiais de produo de toxinas, realizadas somente em laboratrios de referncia ou de
pesquisa.
Soro Anti E. coli Enteropatognica Clssica (EPEC)
Polivalente A
anti 026, 055, 0111, 0119
Polivalente B
anti 0114, 0125, 0142,0158
Polivalente C
anti 086, 0126, 0127, 0128
A sorotipificao pode ser feita, utilizando-se a mesma tcnica descrita para outras enterobactrias.
Um melhor resultado obtido, repicando cerca de cinco colnias caractersticas a partir do gar BEM
ou Mac Conkey, para um tubo contendo gar Nutriente Inclinado, com finalidade de obter massa de
Mod V - 29
germes. feita ento uma suspenso bacteriana em soluo salina, a qual ser testada utilizando
anti-soros polivalentes, abrangendo os sorotipos mais prevalentes na populao.
Soro Anti E. coli Enteroinvasora (EIEC)
Polivalente A
anti 028ac, 029, 0136, 0144, 0152
Polivalente B
anti 0112ac, 0124, 0143, 0164, 0167
Soro Anti E. coli O 157 (EHEC)

Utilizar o soro para O157:H7
Observaes importantes:
Bactrias isoladas com o mesmo padro de provas de materiais nobres em surtos de infeco
hospitalar, ou isoladas de infeces da comunidade que possam suspeitar de um surto, ou pela
gravidade da doena, ou por um padro no esperado de resistncia, devem ser remetidas ao
Laboratrio de Referncia (LACEN/Adolfo Lutz) para melhor caracterizao.
Bactrias que no se enquadram nos padres definidos acima, recorrer a testes suplementares ou
usar kits com maior nmero de provas ou em caso de importncia clnica (descritos acima) enviar
ao Laboratrio de Referncia.
Mod V - 30
4. BASTONETES NO FERMENTADORES
INTRODUO
Os bacilos Gram negativos classificados como no fermentadores (BNFs) so microrganismos
aerbios, no esporulados, que se caracterizam pelo fato de serem incapazes de utilizar carboidratos
como fonte de energia atravs de fermentao, degradando-os pela via oxidativa.
A identificao dos BNFs sempre foi um desafio para os laboratrios de rotina em microbiologia,
considerando que a maioria deles no realiza este tipo de identificao, ou o faz de maneira elementar
em virtude da pouca incidncia em amostras ambulatoriais, assim como pela complexidade e elevado
custo dos esquemas completos de identificao.
A caracterizao deste grupo de bactrias de grande importncia nos casos de infeco hospitalar.
Embora a sua incidncia, mesmo em hospitais, seja pequena quando comparada a outros agentes
etiolgicos, geralmente eles apresentam resistncia elevada a vrios antibiticos e so capazes de
causar infeces graves. Estas bactrias colonizam e causam infeces, em especial, em pacientes
graves oriundos de CTI e submetidos procedimentos invasivos, sendo importante classific-los at o
nvel de gnero e espcie.
O nmero de bactrias no fermentadoras conhecidas muito grande. Foram selecionadas aquelas
consideradas na atualidade de maior importncia clnica (*) e as demais para diagnstico diferencial
entre si.
BNFs de importncia clnica consideradas neste captulo*:
Acinetobacter spp.*
Achromobacter spp.
Burkholderia cepacia *
Methylobacterium spp.
Pseudomonas aeruginosa *
Pseudomonas luteola
Pseudomanas putida
Pseudomanas pseudomallei *
Stenotrophomonas spp.*
Sphingobacterium spp.
Alcaligenes spp.*
Bordetella bronchyseptica
Chryseobacterium (Flavobacterium) spp.*
Moraxella spp.*
Pseudomanas fluorescens
Pseudomanas oryzihabitans
Pseudomonas stutzeri
Roseomonas spp.
Shewanella spp.
Sphingomonas paucimobilis
Testes necessrios para a identificao de rotina dos BNFs
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
de OFglicose (com vaselina)

de OFglicose (sem vaselina)
com lisina
controle de aminocidos
gar citrato
gar uria
com gar esculina
com TSI
com gelatina
com caldo NaCl 6,5%
Disco de oxidase
Disco de PYR
Tubo com arginina
Caldo TSB para motilidade em lmina
Caldo TSB crescimento 42oc
Tubo de caldo indol
Disco de polimixina
Placa de Mac Conkey
Placa de DNAse
SEMEADURA, LEITURA E INTERPRETAO DAS PROVAS DE IDENTIFICAO

A partir de colnias isoladas em cultura pura com 24 horas de crescimento, nos meios de inoculao
primria, deve-se proceder a realizao das tcnicas de identificao e diferenciao dos BNFs:
PROVAS
Disco de oxidase
SEMEADURAS
LEITURA E INTERPRETAO
- Retirar 2-3 colnias com ala.

- Esfregar sobre a fita ou disco
teste; pode umedecer o papel
com 1 gota de salina estril.
- A leitura feita em 15 a 20 segundos.

- A cor violeta forte aparece rapidamente. Aps este
intervalo, cores violeta-plido so falso positivos. A
Burkholderia cepacia pode dar reao fraca.
Mod V - 31
- Picar com agulha at o fundo

do tubo.
- Fermentador: dois tubos ficam amarelos (cido)

- Oxidativo: tubo sem vaselina amarelo
tubo com vaselina verde
- Inerte ou alcalino: dois tubos no mudam de cor
(inerte) ou o tubo sem vaselina fica azulado
(alcalino). Aguardar, no mnimo, 72h para definir
como inerte, pois pode ocorre a oxidao tardia ou
lenta.
- Inocular 2-3 colnias na salina.

- Deixar o fragmento imerso.
- Incubar 30oC, se negativo, aguardar no mnimo

72h. Se positivo, ocorre precipitado cinza no fundo
do tubo.
Placa de DNAse
- Semear 2 a 3 colnias em
spot (crculo de 1 cm de
dimetro).
- Adicionar cido clordrico e aguardar 5 minutos.

- Observar a presena de halo transparente em
volta do inoculo positivo enquanto o restante do
meio fica leitoso.
- Se negativo, repetir o teste com leitura em 72h.
Tubo com lisina,

arginina, controle
de aminocidos
- Usar inculo denso; pode

adicionar 2 ml de vaselina
lquida no tubo com lisina.
- Comparar os tubos testes dos aminocidos com o

controle negativo.
- tubo controle negativo deve ficar azul esverdeado
plido e as provas positivas ficam de cor prpura.
- Se negativo, aguardar at 5 dias.
- Semear com agulha inculo

denso na superfcie do meio.
- A cor rosa forte aparece em todo o meio aps 24 a

72 h de incubao; uma ligeira mudana de cor
rsea no pice, que no progride com maior tempo
de incubao, considerado negativo.
- Bordetella bronchiseptica: reao positiva em 4 h.
- Semear com agulha na

superfcie do meio.
- A cor azul forte aparece no pico, e com maior

incubao estende-se a todo o meio.
- Semear 2 colnias no caldo.
- Ocorre turbidez no meio ou ntido o aumento da

densidade bacteriana.
- Ideal comparar com controle mantido a
temperatura ambiente.
- Semear 2 colnias no caldo.
- Agitar o tubo e com uma pipeta com ponteira

estril ou ala bacteriolgica estril.
- retirar uma gota e depositar sobre uma lmina.
- Cobrir a gota com uma lamnula e levar ao
microscpio. Observar com aumento de 400 vezes
(ocular 10x e objetiva 40).
- A presena de bactrias cruzando o campo em
diferentes direes significativo de motilidade
positiva; movimentos vibratrios fracos = negativo
(movimento browniano). Quando o movimento de
todas as bactrias numa mesma direo,
provavelmente o movimento do lquido entre a
lmina e a lamnula.
- Verificar a motilidade em temperaturas de 37oC e
20oC (ambiente).
Tubo com caldo

NaCl 6,5%
- Semear 2 a 3 colnias no caldo.
- A presena de turbidez e mudana de cor indicam

crescimento
Tubo com gar

esculina
- Semear 2 a 3 colnias na
superfcie do meio.
- Ocorre precipitado negro intenso nas provas

positivas a partir de 6 horas de incubao at 48 h
- Cor castanho escuro prova negativa.
Tubo de caldo
indol
- Inocular 2 colnias no caldo.
- Colocar 5 gotas de xilol e agitar bem o tubo.

- Adicionar 5 gotas do reagente de Erlich ou Kovacs.
- Observar a presena de anel prpura-plido ou
intenso que revelam prova positiva.
- Fazer antibiograma em Mueller

Hinton.
- Colocar o disco.
- Qualquer halo em torno do disco significa

sensibilidade.
Tubo de OF
glicose (com e
sem vaselina)
Tubo com pedao

de filme e
gelatina
Uria
Citrato
Caldo TSB
crescimento 42oC
Caldo TSB
motilidade
Disco de
polimixina
Mod V - 32
Disco de PYR
- Colocar o disco sobre colnias

de crescimento recente ou fazer
suspenso densa.
- Depositar 3 a 4 gotas sobre o
disco de PYR.
- Incubar durante 4 horas numa
placa vazia com umidade.
- Colocar o disco teste em contato com o

crescimento bacteriano.
- Coloc-lo sobre uma lmina.
- Depositar uma gota do reagente que acompanha o
teste.
- A presena de cor alaranjada prova positiva;
mantendo a cor amarela prova negativa.
- Recomenda-se testar controles positivo e negativo.
Placa de Mac
Conkey
- Semear com ala 1 colnia

isolada.
- Crescimento deve ocorrer entre 1 a 3 dias.
- Semear com agulha picando

at o fundo do tubo e na
superfcie do gar inclinado.
- Fermentador: presena de cor amarela apenas na

base ou no pice e na base
- Com ou sem H2S e gs: precipitado preto e bolhas.
- No fermentador: permanece vermelho (alcalino)
no pice e na base.
TSI
PROCEDIMENTOS PARA A IDENTIFICAO

No caso de isolar uma bactria que no foi ainda comprovada como no fermentadora da glicose,
seguir as seguintes etapas com a colnia isolada:
Gram e Oxidase: observar se h pigmento da colnia crescida (amarelo, rseo, cor metlica).
RESULTADO DO GRAM E OXIDASE

Gram Positivo:
Procurar a identificao de cocos e bacilos Gram positivos

Gram negativo:
Coco Gram negativo, oxidase positivo, identificar como Neisseria spp. ou seguir para a Tabela 2
Coco Gram negativo, oxidase negativo, seguir para Tabela 1

Bacilo Gram negativo, oxidase negativo:
Semear Fenilalanina, Citrato, Uria (ou EPM MILI ou IAL)
Semear OF glicose e Caldo motilidade seguir Resultado OF 1

Bacilo Gram negativo, oxidase positivo:
Semear OF Glicose e Caldo motilidade seguir Resultado OF 2
RESULTADO DO OF
1. Bacilo (cocobacilo) Gram negativo oxidase negativo
OF Glicose fermentador:
Fazer a identificao com as provas realizadas, visto ser uma enterobactria.
Vide captulo enterobactrias para interpretao dos resultados.

OF no fermentador:
motilidade negativa: Tabela 1
motilidade positiva: Tabela 3

2. Bacilo Gram negativo oxidase positiva:
OF Glicose fermentador: pesquisar Pasteurella, Aeromonas, Plesiomonas e Vibrio

OF Glicose no fermentador:
se pigmento rosa, seguir Tabela 7
motilidade negativa e pigmento amarelo, seguir Tabela 4
motilidade positiva: se TSI com H2S segue Tabela 5a e 5b; se OF glicose Oxidativo segue
Tabela 5; se OF glicose Inerte, seguir Tabela 6
Mod V - 33
TABELAS DE IDENTIFICAO DOS BNFS
Tabela 1. Coco-bacilos ou cocos Gram negativo, Oxidase negativa e Motilidade negativa

Microrganismos
OF-glicose
Cresc. 42C
Citrato
Gelatina
A. baumannii
neg
A. calcoaceticus
neg
neg
A. haemolyticus
Inerte/oxidativo
neg
inerte
neg
neg
neg
A. lwoffii
Prova opcional
Microrganismos
Hemlise *
A. baumannii
neg
A. calcoaceticus
neg
A. haemolyticus
A. lwoffii
neg
* hemlise em gar sangue
Tabela 2. Cocos Gram negativo, Oxidase positivo, Motilidade negativa, OF-Gli inerte
Microrganismos
Urease
Gelatina
DNAse
Mac Conkey
Moraxella(B) catarrhalis
neg
neg
neg
Moraxella canis
neg
neg
neg
neg
Moraxella lacunata
neg
neg
neg
Moraxella spp. *
neg
neg
neg
varivel
M. fenilpiruvica/ureolytica
* Moraxella spp.: nonliquefaciens, lincolnii, osloensis, atlantae e Oligella urethralis
Tabela 3. Bacilos Gram negativo, Oxidase negativa, Motilidade positiva, OF-Gli oxidativo ou
inerte
Microrganismos
Arginina
DNAse
Lisina
Polimixina *
Pseudomonas luteola
neg
neg
sensvel
Pseudomonas oryzihabitans
neg (14+)
neg
neg
sensvel
B. cepacia
neg
neg
80%+
resistente
S. maltophilia
neg
93%+
resistente
* Fazer antibiograma com polimixina
Mod V - 34
Provas opcionais
Microrganismos
Esculina
PYR
Imipenem *
sensvel
neg
sensvel
B. cepacia
varivel
neg
varivel
S. maltophilia
varivel
neg
resistente
Pseudomonas luteola
Pseudomonas oryzihabitans
* Fazer antibiograma com Imipenem
Tabela 4. Oxidase positiva, Motilidade negativa e OFG Oxidativo, Bacilos com

pigmento amarelo e Crescimento em MC varivel
Microrganismos
Indol
DNAse
Polimixina
Uria
Chryseobacterium meningosepticum
resistente
neg
C. indologenes
neg
resistente
neg
Sphingomonas paucimobilis
neg
neg
sensvel
neg
Sphingobacterium spp. *
neg
varivel
resistente
* S. multivorum, S. spiritivorum
Tabela 5a. Bacilos Gram negativo, Oxidase positiva, Motilidade positiva, OF GLI oxidativo vide fluxograma para facilitar interpretao
Microrganismos
Polimixina
Lisina
Arginina
NaCl
6,5%
Gelatina
42C
A. xilosoxidans
sensvel
neg
neg
neg
neg
+ 86
P. aeruginosa
sensvel
neg
82
P. fluorescens
sensvel
neg
neg
P. putida
sensvel
neg
neg
neg
P. stutzeri
sensvel
neg
neg
neg
varivel
B. pseudomallei
resitente
neg
+79%
B. cepacia
resistente
80%+
neg
20%+
83%+
S. paucimobilis *
sensvel
neg
neg
neg
Shewanella spp.
sensvel
neg
neg
varivel
varivel
varivel
Caracterstica
pigmento
seca
pigm. amarelo
* Mot positiva = Temperatura ambiente
Provas complementares
Microrganismos
1, 2
Esculina *
PYR *
A. xilosoxidans
neg
P. aeruginosa
neg
P. fluorescens
Microrganismos
Esculina *
PYR *
B. pseudomallei
varivel
neg
varivel
B. cepacia
varivel
neg
neg
varivel
S. paucimobilis*
25+
P. putida
neg
neg
Shewanella spp.
neg
P. stutzeri
neg
neg
* provas da esculina e PYR teis apenas para diferenciar as bactrias lisina e arginina negativas
Mod V - 35
Tabela 5b. Bacilos Gram negativos no fermentadores, Oxidase positiva,

Motilidade positiva, com H2S no TSI, OF Glicose varivel, DNAse positiva
Bactria
Cresc. 42oC
NaCl 6,5%
neg
neg
Shewanella putrefaciens
Shewanella alga
Fluxograma Auxiliar para Tabela 5
Lisina
positiva
Burkholderia cepacia
Polimixina R
negativa
negativa
arginina
positiva
polimixina
polimixina
B. cepacia
esculina
positiva
B. pseudomallei
negativa
S. paucimobilis
DNAse
positivo
S. putrefaciens
crescimento a 42oC
positivo
NaCl 6,5%
positivo
negativo
gelatina
P. aeruginosa
negativo
P.stutzeri
negativo
A. Xylosoxidans
Mod V - 36
positiva
P. putida
negativa
P. fluorescens
Tabela 6. Bacilos Oxidase positiva, Motilidade positivo, OF-Gli alcalino - incubar 72 h.

Microrganismos
Uria
NaCl 6,5%
DNAse
varivel
neg
neg
neg
neg
B. bronchiseptica
++
neg
neg
S. malthophilia *
neg
78% neg
A. denitrificans
*raramente pode ser oxidase positiva

Prova complementar 2
Microrganismos
PYR
A. denitrificans
neg
B. bronchiseptica
neg
S. malthophilia
neg
Tabela 7. Bacilos e coco-bacilos Gram negativos no fermentadores, Oxidase positiva, OF

Glicose varivel, com pigmento rseo (1)
Microrganismos
Motilidade
Morfologia
Urease
Mac
Conkey
Cresc.
42oC
Obs.
bacilos
neg
neg
colnia seca
coral
varivel
Coco-bacilos
colnias mucides
rosadas
Roseomonas spp.
TABELAS DE CONSULTA PARA IDENTIFICAO DE NO FERMENTADORES
Oxidase e motilidade negativos

Microrganismos
OXI
MOT
Morf.
OF-G
Cresc.
a 42C
CIT
MAL
GEL
HEM
A. baumannii
neg
neg
coco
neg
neg
A. calcoaceticus
neg
neg
coco
neg
neg
neg
A. haemolyticus
neg
neg
coco
Inerte/
oxidativo
neg
neg
A. lwoffii
neg
neg
coco
inerte
neg
neg
neg
neg
neg
Acinetobacter spp.
neg
neg
coco
Inerte/
oxidativo
neg
varivel
varivel
varivel
OXI = oxidase
MOT = motilidade
Morf = morfologia
OFG = meio de oxidao fermentao da glicose de Leifson
CIT = citrato
MALO = malonato
HEM = hemlise em gar sangue
Mod V - 37
GEL = gelatina
Oxidase negativo e Motilidade positiva

Microrganismos
Oxidase
Motilidade
Morfologia
OF-Glicose
Imipenem
P. luteola
neg
bacilo
oxidativo
sensvel
P.oryzihabitans
neg
bacilo
oxidativo
sensvel
S. maltophilia
neg
bacilo
85% oxid.
resistente
B. cepacia
14% neg
bacilo
oxidativo
resistente
Microrganismos
Esculina
Dnase
Lisina
Argina
Mac Conkey
42oC
neg
neg
94%+
neg
neg
neg
14%+
33%+
S. maltophilia
39%+
neg
48%+
B. cepacia
63%+
neg
80%+
neg
83%+
P. luteola
P.oryzihabitans
Oxidase positiva, Motilidade negativa, OF-Glicose oxidativo

Microrganismos
OXI
MOT
Morf
OF-G
Uria
Indol
DNAse
MC
Poli
C. meningosepticum
neg
bacilo
oxidativo
lento
neg
varivel
resistente
C. indologenes
neg
bacilo
oxidativo
lento
neg
neg
varivel
resistente
Neg
bacilo
oxidativo
neg
neg
neg
varivel
sensvel
neg
bacilo
oxidativo
var
neg
varivel
varivel
resistente
S. paucimobilis
Sphingobacterium spp.
OXI = oxidase
MOT = motilidade
Morf = morfologia
1
pode ser motilidade positiva a 20oC
2
a 37oC
MC = Mac Conkey
Poli = polimixina
Oxidase positiva, Motilidade negativa, OF-Glicose inerte e cocide

Microrganismos
OXI
MOT
Morf
OF-G
Uria
GEL
DNAse
MC
M. catarrhalis
neg
coco
inerte
neg
neg
neg
M. canis
neg
coco
inerte
neg
neg
M. fenilpiruvica / ureolytica
neg
coco
inerte
neg
neg
M. lacunata
neg
coco
inerte
neg
neg
neg
Moraxella spp. * raras
neg
coco
inerte
neg
neg
neg
varivel
OXI = oxidase
MOT = motilidade
Morf = morfologia
MC = Mac Conkey
GEL = gelatina
* Moraxella spp.: nonliquefaciens, lincolnii, osloensis, atlantae e Oligella urethralis
Mod V - 38
Oxidase positiva, Motilidade positiva e OF-Glicose inerte ou alcalino

Microrganismos
OXI
MOT
Morf
OF-G
MC
Uria
A. denitrificans
bacilo
alcalina
A. piechaudii
bacilo
alcalina
bacilo
B. bronchiseptica
Comamonas spp.
P.pseudoalcaligenes
P. alcaligenes
Nat\
ito
Nit\
gs
nt
neg
neg
alcalina
neg
neg
cocobacilo
alcalina
++
neg
bacilo
inerte
neg
neg
varivel
bacilo
inerte
neg
varivel
neg
bacilo
inerte
neg
varivel
54+
neg
neg
OXI = oxidase
MOT = motilidade
Morf = morfologia
nt= no testado (no citado na literatura)
CIT
MC = Mac Conkey
Cresc.
42oC
CIT = citrato
Oxidase positiva, Motilidade positiva e OF-Glicose oxidativo

Oxidase
Motilidade
Morfologia
OF-Gli
Cresc. 42oC
A. xilosoxidans
bacilo
oxidativo
nt
P. aeruginosa
bacilo
oxidativo
P. fluorescens
bacilo
oxidativo
neg
P. mendocina (rara)
bacilo
oxidativo
P. putida
bacilo
oxidativo
neg
P. stutzeri
bacilo
oxidativo
69
S. paucimobilis
bacilo
oxidativo
nt
86% +
bacilo
oxidativo
83% +
B pseudomallei
bacilo
oxidativo
S. putrefaciens
bacilo
oxidativo
Microrganismos
B. cepacia

Microrganismos
Gelatina
Esculina
Polimixina
Mac Conkey
Lisina
Arginina
nt
neg
sensvel
nt
varivel
P. aeruginosa
82% +
neg
sensvel
neg
P. fluorescens
neg
sensvel
neg
P. mendocina (rara)
neg
neg
sensvel
neg
P. putida
neg
neg
sensvel
neg
P. stutzeri
neg
neg
sensvel
neg
neg
nt
sensvel
varivel
nt
neg
B. cepacia
20% +
63% +
resistente
80% +
neg
B pseudomallei
79% +
59% +
resistente
neg
S. putrefaciens
varivel
neg
sensvel
neg
neg
A. xilosoxidans
S. paucimobilis
Mod V - 39
Bactrias no fermentadoras com pigmento rosa

Microrganismos
OXI
MOT
Morf
OF-Gli
Uria
Mac
Conkey
Cresc.
42oC
Obs.
bacilo
varivel
neg
neg
Colnia seca
coral, bacilos
com
vacolos
Roseomonas spp.
varivel
cocobacilo
varivel
Colnias
mucides
rosadas
cocobacilos
OXI = oxidase
MOT = motilidade
Morf = morfologia
Mod V - 40
5. BACILOS CURVOS OU ESPIRALADOS

INTRODUO
Este captulo apresenta os principais bacilos curvos ou espiralados de importncia clnica, relacionados
s principais patologias, fontes de infeco e recursos diagnsticos para sua caracterizao. Por se
tratar de agentes raros, com exceo dos Campylobacter spp., no sero abordados em profundidade,
devendo o microbiologista encaminhar a cepa isolada para Laboratrio de Referncia ou consult-lo
sobre recursos disponveis para tentativa de isolamento.
PRINCIPAIS BACTRIAS CURVAS OU ESPIRALADAS

Agente
Doena
Reservatrio
Transmisso
Arcobacter spp.
Bacteremia gastroenterite
Gado, humanos
Alimentos
Borrelia burgdoferi
Doena de Lime
Roedores
Carrapatos
Borrelia recurrentis
Febre recorrente
epidmica
Humanos
Sarna (P.humanus)
Campylobacter coli/
jejuni
Gastroenterite
Alimentos contaminados
Alimentos
Campylobacter fetus
Bacteremia, infeco
extranegintestinal
Humanos
Fecal-oral
Helicobacter pylori
Gastrite, lcera pptica
Humanos, macacos, gatos
Fecal-oral
Helicobacter spp.
Gastroenterite,
bacteremia, etc.
Animais domsticos
Fecal-oral, alimentos
Leptospira spp.
Leptospirose
Ces, gatos, porcos, ratos
Alimentos-gua
Treponema pallidum
Sfilis
Humanos
Sexual
Vibrio spp.
Gastroenterite
Alimentos, gua
Alimentos
- Ingesto de alimentos e gua contaminados

- Alimentos ou gua contaminados com urina de animal infectado
RECURSOS DIAGNSTICOS
Agente
Arcobacter spp.
Testes *
-
Borrelia burgdorferi
(doena de Lyme)
Microscopia: bacilos Gram negativos curvos ou helicoidais

Cultura: cresce entre 15 a 30oC em ambiente especfico de combinao de gases
em CAMPY-CVA.
Sorologia: No disponvel
Microscopia: espiroquetas coradas por colorao de prata de Warthinneg Starry

ou anticorpos marcados por fluorescena em tecidos
Cultura: meio BSK II em microaerofilia entre 30-37oC por 6 semanas
Sorologia; Imunofluorescncia e ELISA
Borrelia spp.
Microscopia: espiroquetas coradas pelo Giemsa, Wright de amostras de sangue

Cultura igual de B. burgdorferi
Campylobacter coli
e C. jejuni
Microscopia: bacilo fino e curvo, Gram negativo, mas mal corado pelo Gram.
Cultura: cresce a 37 e 42oC em em ambiente especfico de cambinao de gases
em Campy-CVA
Campylobacter fetus
Microscopia:bacilo fino e curvo, Gram negativo, mas mal corado pelo Gram
Cultura: cresce em gar sangue a 37oC, mas no a 42oC em ambiente especfico
de cambinao de gases
Mod V - 41
Helicobacter pylori
Leptospira spp.
Treponema pallidum
Microscopia: bipsia gstrica corada por H&E, Giemsa ou colorao pela prata de
Warthin-Starry.
Recurso rpido; teste da urease em bipsia gstrica (sensibilidade>90%)
Cultura: cresce em meios seletivos ou no em microaerofilia a 37oC por 5-7dias
Sorologia: til para determinar doena ativa por Enzima-Imunoensaio
Pesquisa no sangue, LCR e urina:microscopia em campo escuro (baixa
sensibilidade) ou por imunofluorescncia direta
Cultura: primeiros 10 dias de doena - LCR e sangue colhido com heparina em
meio de Fletcher incubado temperatura ambiente por 2 a 16 semanas. Cultura
do sedimento urinrio alcalinizado aps a 1 semana da doena.
Sorologia: aglutinao ou ELISA so sensveis e especficos
Linfa de leses observadas em campo escuro ou colorao pela prata (Fontana);

presena de espiroquetas. Imunofluorescncia direta mais sensvel
Sorologia: VDRL ou FTA-abs so muito teis para diagnstico
* Recursos no citados: no teis ou no disponveis
BSK II = meio de Barbour Stoenner-Kelly
Campy-CVA= Meio seletivo para Campylobacter com cefoperazona, vancomicina e anfotericina.
-
CAMPYLOBACTER
MATERIAL
Em caso de gastroenterite colher fezes e enviar rapidamente ao laboratrio ou em meio de transporte
de Cary-Blair semi-slido. Em amostras de sangue colhidas em meios convencionais, estas podem
suportar o crescimento do C. fetus que a espcie que causa com maior freqncia infeces extraintestinais.
MICROSCOPIA
A colorao de Gram deve usar no lugar da safranina a carbol-fucsina ou fucsina bsica a 0,1%
durante 2 minutos. Exame de fezes costuma revelar presena de leuccitos, mas a ausncia no
contra-indica a cultura ou a suspeita diagnstica. O Gram das fezes tem sensibilidade entre 70 a 90%
e elevada especificidade.
Principais espcies de Campylobacter e Arcobacter
Bactria
Catalase
H2S-TSI
Cresc.
15oC
Cresc.
25oC
Cresc.
42oC
Mac
Conkey
cido
Nalidixico
Cefalotina
C. jejuni
neg
neg
neg
sensvel ou
resistente
resistente
C. coli
neg
neg
neg
sensvel
resistente
C. fetus
neg
neg
neg
sensvel ou
resistente
sensvel
varivel
neg
neg
varivel
sensvel ou
resistente
sensvel *
neg
varivel
varivel
sensvel
varivel
Campylobacter
spp.
Arcobacter
* C. lari = resistente
ISOLAMENTO
A maioria das espcies de Campilobacter exige microaerofilia contendo cerca de 5% de CO2, 10% de
CO2 e 85% de N2 (microaerofilia), obtidos com geradores especficos e no apenas com vela. Para
aumentar a chance de isolamento em fezes recomenda-se a filtrao das fezes em filtro de acetato de
celulose >0,45 m. Vrios so os meios de cultura especficos para coprocultura por serem seletivos,
sendo na atualidade os mais recomendados o gar carvo desoxicolato cefoperazona, o meio Campy
CVA (Cefoperazona , Vancomicina e Anfotericina) e o meio de Karmali (base de Columbia gar, carvo
ativado e suplemento de antibiticos).
Mod V - 42
Amostras de hemocultura devem ser repicadas em meios no seletivos com geradores para
microaerofilia. Fazer o teste de crescimento a 25, 37 e 42oC (todos crescem a 37oC). No exame direto
em gota direto no microscpio entre lmina e lamnula pode-se observar a motilidade tipo hlice em
movimento.
As provas de crescimento devem ser feitas em gar Mueller Hinton com 5% de sangue de carneiro em
microaerofilia. O teste de sensibilidade ao cido nalidxico e cefalotina pode ser feito em qualquer
meio no seletivo e ser considerado sensvel a presena de qualquer tamanho de halo.
VIBRIOS, AEROMONAS E PLESIOMONAS
A suspeita da presena de Vibrio, Aeromonas e Plesiomonas evidenciada pelo:
Isolamento de bactria Gram negativa fermentadora da glicose (TSI fermentador) e oxidase

positiva.
Materiais clnicos que podem, eventualmente, ser associados com maior frequncia de isolamentos
de Vibrios, Aeromonas e Plesiomonas.
Principais bactrias fermentadoras da glicose, oxidase positiva e sua associao com

diferentes quadros clnicos:
Bactria
Diarria
Infeces partes
moles
Sepse
Outros
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
freqente
pouco comum
raro
raro
Plesiomonas shigeloides
freqente
raro
freqente *
raro
Aeromonas hydrophila
freqente
frequente
freqente
freqente
Aeromaonas caviae
freqente
raro
freqente
freqente
Aeromonas veronii
freqente
raro
freqente
freqente
* associado meningite em recm-nascidos
VIBRIO
As espcies do Gnero Vibrio so bacilos curvos ou s vezes retos, longos, anaerbios facultativos,
mveis, fermentadores da glicose, em geral sem produzir gs, e oxidase positivas. Alm do Vibrio
cholerae, existem mais de 10 espcies patognicas para o ser humano. Algumas espcies podem
causar gastroenterite, outras infeces cutneas e bacteremias.
A clera, causada pelo V. cholerae produtor de toxina (dois biotipos: clssica e El Tor), responsvel
por diarria secretria disseminada por via fecal-oral (gua e alimentos contaminados) em surtos e
epidemias associadas falta de condies sanitrias adequadas. O quadro clnico pode variar de
assintomtico a diarria aguda com morte em 5 horas por desidratao e distrbio eletroltico. Casos
espordicos podem ocorrer por ingesto de ostras e outros pescados crus ou mal cozidos.
A coleta do material quando for fecal dever ser feita utilizando o meio de transporte de Cary & Blair,
e as cepas suspeitas ou confirmadas de Vibrio devero ser encaminhadas a Laboratrio de Referncia,
para registro epidemiolgico.
Algumas outras espcies de Vibrios alm do V. cholerae necessitam de NaCl para crescimento. gar
sangue e Mac Conkey permitem o crescimento da maioria das espcies, e neste ltimo meio as
colnias so semelhantes a de bastonetes no fermentadores. A diferena que no TSI, EPM ou IAL
h fermentao da glicose, como ocorre tambm com Aeromonas e Plesiomonas. So oxidase
positivas, a maioria esculina negativa, DNAse positivo e quase todos crescem em caldo com NaCl
6%.
Mod V - 43
AEROMONAS E PLESIOMONAS
Vivem em ambientes aquticos em todas as partes do mundo. Podem ser encontradas em gua de
fonte, gua de lagos, guas poludas, etc. Plesiomonas preferem guas tropicais e no marinhas,
sendo a Aeromonas mais tolerante s diferentes condies. Aeromonas tm sido isoladas em carnes,
meio ambiente aqutico e produtos do mar, e suas diferentes espcies causam doenas no s no
homem como em animais, peixes, rpteis, cobras e pssaros.
Em nossa experincia comum o isolamento de Aeromonas em abscesso ps-picada de cobra, lquido
biliar em pacientes com colicistite, diarria, sepse (em pacientes com doena heptica crnica) e
abscessos cutneos ps-acidentes (corto-contusos) em lagos, tanques, etc. A chance de detectar
Aeromonas e Plesiomonas depende da adoo do procedimento em se fazer o teste da oxidase em
bactrias com caractersticas de Escherichia coli lactose negativa.
As principais caractersticas das Aeromonas so: lactose negativa, H2S negativo, fenilalanina negativa,
indol positivo, motilidade positiva, e crescem bem em meios ricos e seletivos (Mac Conkey e
Salmonella-Shigella).
Principais provas diferenciais entre Aeromonas spp., E.coli e Citrobacter spp.
Bactrias
Citrato
Uria
Lisina
H2S
Lactose
Gs
neg
neg
neg
Citrobacter spp.
varivel
neg
varivel
varivel
Aeromonas spp.
varivel
neg
neg
E. coli
neg
varivel
- Aeromonas caviae: lisina negativa e lactose positiva
Provas diferenciais para bactrias fermentadoras da glicose, oxidase positiva: Aeromonas,

Plesiomonas e Vibrio
Provas
Cresce sem NaCl
V. cholerae
Outros
vibrios
Aeromonas spp.
Plesiomonas spp.
neg
neg
neg
Oxidase
DNAse
neg
Cresce com 6% NaCl
- crescimento em caldo nutriente

- exceto V. mimicus
Provas para diferenciar as principais espcies de Aeromonas e Plesiomonas

Bactrias
Indol
LIS
ARG
ORN
ARA
LAC
SAC
ESC
HEM *
A. hydrophila
neg
neg
A. caviae
neg
neg
neg
A. sobria
neg
neg
neg
neg
A. veronii
neg
neg
neg
A. jandaei
neg
neg
neg
neg
neg
A. schubertii
neg
neg
neg
neg
neg
neg
Varivel
Plesiomonas
shigelloides
neg
neg
neg
neg
neg
LIS = lisina ARG = arginina ORN = orninina ARA = arabinose

ESC = esculina HEM * = hemlise / sangue carneiro
Mod V - 44
LAC = lactose
SAC = sacarose
6. BACILOS GRAM POSITIVOS

INTRODUO
Este captulo aborda os aspectos prticos para identificao dos principais bacilos Gram positivos de
importncia clnica.
Bactrias consideradas:
Corineformes
Arcanobacterium spp., Corynebacterium spp., G. vaginalis, Oerskovia

spp., Rhotia spp.
Bacilos Gram
positivos regulares
Erisipelotrix spp., Listeria spp., Kurthia spp.
Esporulados
Bacillus spp.
Bacilos ramificados
(Actinomycetos)
Nocardia spp., Rhodococcus spp., Streptomyces spp.
Bactrias Gram positivas que so citadas no texto para fins de diagnstico diferencial, mas que foram
abordadas em outros captulos so:
Outros anaerbios:
Mobiluncus spp.
Actinomyces spp. (anaerbios)
Propionibacterium spp.
Clostridium spp. (anaerbios)
Eubacterium
Lactobacillus spp. (anaerbios)
Bifidobacterium spp.
Mycobacterium spp. (micobactrias)

Os Actinomyces spp. e alguns Propionibacterium spp. embora anaerbios, podem ser aerotolerantes, e
crescer em aerobiose.
ORIENTAO GERAL NA IDENTIFICAO DE BGPS
Para triagem inicial dos Bacilos/cocobacilos Gram positivos, algumas observaes e provas so
fundamentais:
Colher material com antissepsia rigorosa para evitar contaminao.
Mesmo em lquidos estreis h risco de contaminao, por isso pede-se a coleta de no mnimo
duas hemoculturas. No LCR o resultado do Gram do sedimento e a presena de neutrofilia
reforam a hiptese de ser agente infeccioso.
Valorizar o achado em pacientes imunocomprometidos.
Procurar sempre ter bacterioscopia do material clnico onde foi isolado o Bacilo Gram Positivo
(BGP) e verificar se h predomnio do agente em questo; relevante o achado dentro de
macrfagos / neutrfilos.
Valorizar materiais nobres (sangue, LCR, pericrdico, etc.), bipsias, aspirados de abscessos, LBA,
etc., desde que a bacterioscopia e o quadro clnico sejam compatveis.
Cuidado com contaminao por bactrias da flora de mucosas.
Em caso de abscessos interessante fazer semeadura quantitativa (com ala calibrada), sendo
sugestivo o isolamento de >104 UFC/ml.
Em urina sugestivo quando isolado como nico agente, bacterioscopia concordante, leucocitria,
sintomas de infeco urinria e contagem >105 UFC/ml.
Observar caractersticas da colnia: cor, tamanho, cheiro, consistncia, hemlise, etc.
Testar em quais meios cresce o BGP e suas condies de incubao.
Para observar esporos e hifas areas algumas vezes necessrio deixar a colnia envelhecer ou
crescer em meios pobres.
Mod V - 45
sempre interessante semear em meio slido e em caldo para observar variao morfolgica;
observar ramificaes em diferentes condies e meios de cultivo.
Fazer colorao de Ziehl ou de Kinyoum para pesquisa de lcool-cido resistente.
Lembrar que este grupo de bactrias pode variar muito nas caractersticas morfolgicas quando
observado no material clnico culturas jovens, culturas velhas, meios slido ou lquido, meio rico
ou pobre, etc., sem que represente contaminao ou cultura mista. No entanto, algumas destas
bactrias so habitantes de mucosas e podem causar infeco mista associada ou no com
anaerbios estritos.
CORINEFORMES
So classificados como corineformes as seguintes bactrias:
Corynebacterium spp.
Arthrobacter spp.
Brevibacterium spp.
Curtobacterium spp.
Exiguobacterium spp.
Arcanobacterium spp.
Microbacterium spp.
Aureobacterium spp.
Turicella spp.
Dermabacter spp.
Gardnerella spp.
Rothia spp.
Cellulomonas spp.
Entre os corineformes foram selecionados aqueles de maior importncia clnica, sendo recomendvel a
caracterizao e provas diferenciais apenas dos gneros:
Corynebacterium spp.
Gardnerella spp.
Rothia spp.
PRINCIPAIS DOENAS ASSOCIADAS AOS BACILOS GRAM POSITIVOS

Bactria
Quadro clnico
Actinomyces spp., A. israelii, A. naeslundii,

A. viscosus, A. odontolyticus e outros
Actinomicose, doena granulomatosa predominante

cervico-facial
Arcanobacterium spp., A. nhaemolyticum
faringite, infeco de partes moles, endocardite, etc
Bacillus sp, B. anthracis, B. cereus
Antraz, intoxio alimentar, sepse e pneumonia em

imunossuprimidos e neutropnicos
C. diphtheriae, C. ulcerans
difteria
C. jeikeium
endocardite, bacteremia
C. pseudotuberculosis
Zoonose, linfadenite e abscessos
Erysipelotrix sp
celulite em veterinrios e zona rural
Gardnerella spp.
vaginose, endometrite, ps-parto
Lactobacillus spp.
flora oro-intestinal e vaginal, rarssimo patgeno
Listeria spp.
meningite, sepses, aborto
Nocardia spp.
abscesso cerebral, abscesso pulmonar, etc. em

imunocomprometidos
Oerskovia spp.
bacteremia, infeco associada a corpo estranho
Rhodococcus spp.
pneumonia, abscessos, etc. em imunocomprometidos
Rothia spp., R. dentocariosa
endocardite, bacteremia, infeces respiratrias
Streptomyces spp.
Oportunista, infeces de partes moles, etc.
Mod V - 46
Triagem inicial para Bacilos e Cocobacilos Gram positivos

Bactria
Esporo
Anaer.
AAR *
Ramif.
Hemlise
Catalase
Obs.
Actinomyces spp.
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
raro /curto
beta
neg
Bacillus spp.
neg
neg
neg
varivel
Clostridium spp.
neg
neg
varivel
neg
Corinebacterium spp.
neg
neg
neg
neg
neg
varivel
paliada
Erisipelotrix
rhustiopathie
neg
neg
neg
neg
alfa
neg
H2S +
Gardnerella vaginalis
neg
neg
neg
neg
beta /coelho
neg
Gram lbil
Lactobacillus spp.
neg
neg
neg
neg
varivel
Mobiluncus spp.
neg
neg
neg
neg
neg
mvel
Listeria spp.
neg
neg
neg
neg
beta
mvel
Mycobacterium spp.
neg
neg
varivel
neg
cresc. lento
Nocardia spp.
neg
neg
neg
col. laranja
Oerskovia spp.
neg
neg
neg
varivel
neg
col. amarela
Ppropionibacterium
spp.
neg
neg
neg
varivel
Rhodococcus spp.
neg
neg
varivel
varivel
neg
col. coral
Rhotia dentocariosa
neg
neg
neg
neg
Pleomrfico
Streptomyces spp.
neg
neg
neg
neg
raro, hifas
Pleomrfico
* AAR = alcool-cido resistente
importante destacar que os corineformes correspondem a um grupo no homogneo de bactrias

com poucas caractersticas em comum sendo tambm morfologicamente muito distintos:
CORYNEBACTERIUM SPP
O gnero Corynebacterium compreende cerca de 50 espcies, sendo cerca de 30 de algum interesse
mdico.
Estas espcies podem ser diferenciadas por
provas como:
OF glicose
reduo de nitrato
urease
utilizao de diferentes carboidratos
reao de CAMP
Principais caractersticas:
no se ramificam
no so alcool-cido resistentes
catalase positivas
imveis
esculina e gelatina negativas
MORFOLOGIA
Variam muito na morfologia das diferentes espcies, e mesmo mesmas culturas em diferentes
condies de cultivo. So bacilos Gram positivos, retos ou ligeiramente curvos, com extremidades em
geral arredondadas, com a forma de clava, podendo apresentar arranjos caractersticos em paliada
ou letras chinesas, podendo ou no apresentar grnulos metacromticos, que so melhores
visualizados atravs da colorao de Albert-Laybourn, e que caracterizam as bactrias conhecidas
como difterides. As corinebactrias de maior importncia clnica so catalase positivas, imveis
podendo ser fermentadoras ou no.
So muitas as corinebactrias que se pode isolar em material clnico, entretanto, de pouco interesse
aprofundar na caracterizao destas espcies, exceto para fins de pesquisa ou epidemiolgicos.
Mod V - 47
CORINEBACTRIAS DE IMPORTNCIA CLNICA

Considera-se fundamental o laboratrio de microbiologia poder caracterizar ou afastar a possibilidade
de isolamento das espcies de C. diphtheriae e C. ulcerans que podem pproduzir a toxina diftrica.
Outra espcie de importncia em infeces hospitalares e frequentemente isolada em material clnico
a C. jeikeium.
Difteria
Em virtude da vainao compulsria, a difteria na atualidade uma doena rara em pacientes
imunizados, mas de importncia epidemiolgica quando detectada. A infeco caracteriza-se por
processo infeccioso localizado no trato respiratrio e manifestaes txicas no corao e nervos
perifricos.
Quadro clnico
Coleta de material
Processamento do
material
Ocorre dor de garganta,

dificuldade de deglutio,
presena de
pseudomembrana
purulenta, dor no corpo,
cefalia, nuseas e febre.
O material de orofaringe
ou nasofaringe deve ser
colhido das bordas, abaixo
da pseudomembrana
purulenta.
Semear em meios no
especficos como gar
sangue e gar chocolate
para pesquisa do
Streptococcus pyogenes e
outros patgenos
eventuais, e encaminhar
outro swab em meio de
transporte para o
laboratrio de referncia.
A morte pode ocorrer por

obstruo respiratria ou
por miocardite. Pode
ocorrer difteria cutnea
com leses necrticas e,
eventualmente, presena
de pseudomembrana.
Os meios especficos para

a pesquisa de bacilo
diftrico so os meios de
enriquecimento de
Loeffler e o meio seletivo
e diferencial gar sanguecistina-telurito.
Bacterioscopia
A bacterioscopia do
esfregado do material,
bem como do
crescimento no meio de
Loeffler, aps colorao
de Gram pode ser
sugestiva caso sejam
visualizados bacilos
difterides, melhor
caracterizados pela
colorao de AlbertLaybourn.
A identificao
bioqumica das
Corynebactrias
potencialmente
produtoras de toxina
difcil em laboratrio no
especializado.
Recomenda-se, nestes
casos, encaminhar o
material ou contactar o
Laboratrio de
Referncia para
orientao.
PROVAS DIFERENCIAIS PARA OS CORINEFORMES

Bactria
Motilidade
Uria
Esculina
CAMP
Reverso
Hemlise
neg
neg
neg
beta
C. diphteriae
neg
neg
neg
neg
neg
C. jeikeium
neg
neg
neg
neg
neg
C.ulcerans
/Pseudotuberculosis
neg
neg
neg
Corinebacterium spp.
varivel
varivel
neg
neg
neg
Gardnerella vaginalis
neg
neg
neg
neg
neg
beta
varivel
neg
neg
neg
varivel
neg
neg
neg
neg
Rhotia spp.
2
O/F
neg
Oerskovia spp.
Catalase
Base CTA (cystine tripticase gar) O = oxidativo e F = fermentador

gar sangue de coelho
Mod V - 48
C. PSEUDOTUBERCULOSIS
Importncia
clnica
Deve ser lembrado nos casos de veterinrios ou trabalhadores de zona rural com quadro de
linfadenite, linfangite ulcerativa ou abscesso relacionado a manuseio de aborto de gado. Esta
espcie pode ser produtora de toxina diftrica.
Isolamento e
Identificao
As colnias so pequenas, branco-amareladas, urease positiva, CAMP reverso positivo (inibe

a beta-hemlise do S. aureus em gar sangue com hemcias de carneiro).
C. JEIKEIUM
Caractersticas
gerais
Colnia pequena cinza ou translcida, a bacterioscopia um pequeno coco-bacilo gram

positivo, resistente a vrios antibiticos (beta-lactmicos, gentamicina, etc).
Importncia
clnica
Associada a septicemia, endocardite, infeces de pele e tecido subcutneo. Infeces mais

severas podem ocorrer em imunossuprimidos, como meningite, pneumonia e peritonite ou
associada a prteses e procedimentos invasivos.
Isolamento e
Identificao
Cresce em BHI com 1% de Tween 80, sendo lipoflica e no em caldo BHI sem Tween 80.
Apresenta metabolismo oxidativo na base CTA, enquanto a maioria das Corynebacterium
spp. de importncia clnica so fermentadoras. Oxida a glicose, uria negativa, esculina
negativa, PYR positiva.
ROTHIA * DENTICARIOSA
Caractersticas
gerais
So bacilos Gram positivo retos, sendo alguns ramificados.
Importncia
clnica
Pertence microbiota da cavidade oral, e est raramente associada endocardite.
Isolamento e
Identificao
As colnias so brancas salientes e s vezes rugosas. So fermentadores da glicose e

esculina positiva.
* Rhotia spp.: So pleomrficos podendo apresentar-se tanto na forma cocide como de bacilos. So catalase
positiva, imvel e fermentador.
ARCANOBACTERIUM SPP.
Caractersticas
gerais
So bacilos delicados e curvos e alguns apresentam dilatao terminal e ramificaes

rudimentares.
Importncia
clnica
Arcanobacterium haemolyticum tem sido considerado juntamente com S. pyogenes como

agentes patognicos em orofaringe, identificados e relatados com a finalidade de tratamento.
Est associado com infeces de partes moles, faringite em jovens e raros casos de
septicemia, endocardite e osteomielite.
Isolamento e
Identificao
Crescem em 24-48h como colnias pequenas e hemolticas. Colnias mais velhas tendem a
adquirir a forma de coco-bacilo, que pode ser confundido com estreptococos. Em caldo
tendem a formar ramificaes e em anaerobiose filamentos.
So bacilos Gram positivos irregulares, catalase negativa, imveis e fermentadores.
Espcies A. haemolyticum, A. pyogenes e A. bernardiae so hemolticas, tm a hemlise
melhor visualizada em sangue de coelho, e crescem melhores em CO2. Pode se apresentar
como dois tipos de colnias no mesmo cultivo: lisas, mucides e brancas ou secas e cinza.
Produz a prova de CAMP reverso (inibio da hemlise).
GARDNERELLA SPP.
Mod V - 49
Caractersticas
gerais
So pequenos bacilos ou coco-bacilos irregulares, que se coram irregularmente pela violeta.

A principal espcie a Gardnerella vaginalis, que tem uma classificao taxonmica incerta,
e portanto para fins didticos, estudada com os coryneformes.
Importncia
clnica
Faz parte da microbiota vaginal de cerca de 70% das mulheres em idade reprodutiva, mas
est associada vaginose bacteriana, quando predomina na flora vaginal em substituio ao
Lactobacillus de Doderlein. A vaginose bacteriana e a presena de Gardnerella esto
associadas tambm ao parto prematuro, ruptura prematura de membranas e corioamnionite.
Esta bactria comumente isolada em hemoculturas de pacientes com febre puerperal e
ps-aborto. Pode causar sepse em recm-nascidos e raramente infeco urinria em adultos.
Isolamento e
Identificao
Crescem no gar sangue humano e de coelho produzindo hemlise beta, mas sem hemlise
no gar sangue de carneiro.
So visualizadas e caracterizadas no exame citolgico e/ou no Gram pela presena das clue
cells, que so clulas epiteliais abarrotadas de pequenos bacilos Gram lbeis, de modo a
perder sua definio morfolgica.
pleomrfica, Gram varivel (ora Gram negativa ora parcialmente e fracamente Gram
positiva), imvel, sem cpsula. um anaerbio facultativo, fermentador lento, catalase e
oxidase negativas.
OERSKOVIA SPP.
Caractersticas
gerais
So microrganismos cocides ou na forma de bacilos resultantes da quebra de miclios,

apresentam ramificao, hifas vegetativas, sem hifas areas e penetrao no gar.
Oerskovia turbata e O. xanthineolytica so bactrias do meio ambiente ou solo, com pouca
importncia clinica, com raros casos de bacteremia e infeces em implantes de prteses.
Isolamento e
Identificao
Cresce bem em gar sangue de carneiro e no gar chocolate. Cresce mal no meio de
Sabouraud dextrose. O crescimento, quando ocorre, visvel aps 24-48h em anaerobiose
ou 5% CO2.
Apresentam colnias amareladas, catalase positiva em aerobiose, oxidase negativa.
Fermentador da glicose, sacarose e lactose, hidrolisa gelatina, amido e esculina; motilidade
varivel.
BACILOS GRAM POSITIVO
LISTERIA
Caractersticas
gerais
So bacilos uniformes, no ramificados, apresentando-se s ou em pequenas cadeias. A

nica espcie importante para o homem entre as sete espcies conhecidas a L.
monocytogenes. Mvel a temperatura ambiente (25 a 28oC) e imvel a 37oC. Encontrada na
natureza no solo, em matria orgnica em decomposio, gua, leite e derivados, carne, etc.
Sendo encontrada como microbiota de diversos mamferos, aves, peixes, e insetos.
Importncia
clnica
Tem importncia clnica particularmente para idosos e imunocomprometidos causando

meningite, encefalite ou septicemia. Na grvida a infeco pode causar amnionite, infeco
do feto com aborto, parto prematuro, meningite neonatal e sepse neonatal. Pode ocorrer em
surtos, em geral relacionados a contaminao de alimentos.
Isolamento e
Identificao
Crescem em gar sangue, gar Chocolate, CLED, gar nutriente, TSA e gar Mueller Hinton,
mas no em Mac Conkey. As colnias so pequenas, crescendo melhor entre 30 a 37oC, e
crescem tambm temperatura ambiente e a 4oC em trs a quatro dias.
A partir de hemoculturas, LCR, placenta, alimentos, gua, etc., semear em gar sangue de
carneiro, coelho ou cavalo, com base TSA, embora cresa tambm com outras bases (Mueller
Hinton, Columbia, Brucella, BHIA, etc). Existem meios seletivos indicados em investigaes
epidemiolgicas.
Bacilo Gram positivo anaerbio facultativo, catalase positiva, oxidase negativa, que produz
cido de glicose. Hemlise beta em gar sangue de carneiro, CAMP positivo, motilidade
positiva temperatura ambiente, hidrlise da esculina positiva e NaCl 6,5% positiva. Alm
disso, verificada prova da esculina rapidamente positiva, assim como uria, gelatina, indol
e H2S negativas.
Mod V - 50
ERYSIPELOTRIX RHUSIOPATHIAE
Caractersticas
gerais
Bacilo Gram positivo curto, de extremidades arredondadas, anaerbio facultativo, no

esporulado, no alcool-cido resistente, ocorre s em cadeias curtas ou longas, sem
ramificar. Existe na natureza, em matria orgnica, urina, fezes e carcaa de animais. Vive
em animais, peixes e pssaros e causa erisipela em porcos. No homem causa uma zoonose
(doena ocupacional de veterinrios e manuseadores de carne e animais) caracterizada por
celulite que aparece no local da inoculao aps 2 a 7 dias.
Importncia
clnica
A leso costuma ser violcea e com muita dor, acompanhada de edema endurado, sem
supurao e bem delineado nas bordas. Ocorre linfangite regional e artrite adjacente.
Disseminao
da
doena
e
endocardite
podem
ocorrer,
particularmente
em
imunossuprimidos, cujo prognstico grave. Cicatrizao pode ocorrer em 2 a 4 semanas ou
mses, com possibilidade de recada.
Coleta do
material
Material ideal para isolamento a bipsia colhida de maneira assptica. Swab da leso em
geral negativa, pois o agente encontra-se na profundidade da borda endurecida.
Isolamento e
Identificao
Cresce em gar sangue, gar chocolate, caldo tripticase soja, a 35oC aerobiose ou 5% de
CO2. Cresce entre 5 a 42oC e em caldo NaCL 6,5%. No gar sangue cresce em 24 a 72h,
como colnias minsculas, lisas e transparentes, mas o outro tipo de colnia, maior, rugosa e
chata pode aparecer, bem como uma hemlise esverdeada em baixo da colnia no gar
sangue. As colnias lisas so bacilos ou coco-bacilos Gram positivos, s vezes corando-se
mal pelo Gram
Catalase negativa, imvel, esculina negativa, fermenta lentamente a glicose sem produzir
gs, uria e indol negativos, mas caracteriza-se por crescer no TSI produzindo H2S; lactose
positiva e sacarose negativa.
KURTHIA
Caractersticas
gerais
So bacilos Gram positivos grandes em cadeias ou em paralelo, ou filamentos no

ramificados e em culturas velhas tendem a ficar cocides ou bacilos curtos. Vivem no meio
ambiente, na gua, solo, animais, sua carne e seus derivados.
Importncia
clnica
Seu papel clnico questionado, pois no h relatos recentes de isolamento em casos

significativos.
Isolamento e
Identificao
Crescem em gar sangue como colnias de cor creme no hemolticas, podendo ser
confundidas com Bacillus spp.
So aerbios estritos, no esporulados, no lcool-cido resistentes; so mveis, catalase
positiva e no fermentadores.
Principais diferenas entre bacilos e coco-bacilos Gram positivos

Bactria
Listeria
monocytogenes
Enterococcus spp.
Streptococcus
beta hemolticos
Lactobacillus spp.
Kurthia spp.
Corynebacterium
spp.
Erysipelotrix
rhusiopathiae
1
Gram
Catalase
Motil.
25oC
Hemlise
CAMP
test
NaCl 6,5%
Esculina
bacilo curto ou coco-bacilo

regular e largo
beta
+/+
cocos ou coco-bacilos em
cadeias
neg
neg
Alfa, beta
gama
neg
+/+
cocos em cadeias
neg
neg
beta
coco-bacilos e cadeias
longas
neg
neg
no
neg
neg / neg
bacilo grande, cadeias,

cocide em cultura velha
no
neg
neg / neg
bacilos e coco-bacilos
pleomrficos
neg
varivel
neg
varivel /
neg
coco-bacilo ou filamentos
longos
neg
neg
alfa
neg
neg / neg
- S S. agalactiae (beta do grupo B) positiva
- No usa glicose
Mod V - 51
neg
- H2S positivo
neg / neg
Bacilos Gram positivos anaerbios que devem ser diferenciados:
Lactobacillus spp. - flora da boca, intestino e flora vaginal (Bacilo de Doderlein). So anerbios
estritos mas crescem em gar sangue e gar chocolate como colnias muito pequenas. So
imveis e catalase negativa. Sem valor patognico.
Mobilluncus - bacilos Gram positivos anaerbios estritos, curvos, mveis que vivem na trato
genital humano e reto. Encontra-se aumentado nos casos de vaginose, juntamente com a
Gardnerella.
Propionibacterium spp., Eubacterium spp. e Bifidobacterium spp. anaerbios estritos que

so analisados juntamente com os demais anaerbios.
BACILOS ESPORULADOS AERBIOS E ANAERBIOS FACULTATIVOS

Gnero Bacillus compreende cerca de 50 espcies de bacilos anaerbios facultativos que podem
exibir a forma esporulada, corando-se mal pela violeta, quando em colnia mais velhas. As formas
vegetativas so retas largas, podendo ser grandes, isolados ou em cadeias. A forma e localizao dos
endosporos so teis para sua classificao:
podem ser cilndricos, ovais, redondos, e eventualmente com forma de feijo

posio central, sub-terminal, terminal
dilatando ou no a clula me
Todos so mveis, exceto o B. anthracis e B. mycoides e a maioria catalase positiva. Na presena de

on bicarbonato (HCO3 -) e em anaerobiose ou CO2 os B. anthracis, B. subtilis, B. licheniformis e B.
megaterium apresentam cpsula polipeptdica.
Habitat e importncia clnica - Os Bacillus spp. encontram-se basicamente no solo, gua, matria
orgnica animal e vegetal nas condies mais variadas de temperatura, umidade, pH, etc. As duas
espcies mais importantes e que devem ser reconhecidas pelo laboratrio de microbiologia so o B.
antrhacis e B. cereus.
Principais espcies de Bacillus relacionadas infeco
Espcie de Bacillus
Quadro clnico
Frequncia de relatos
Antrhax cutneo
Bastante frequente
Necrose ou gangrena em partes moles
Bastante frequente
Infeces de partes moles, abscessos,

bacteremia e sepse
Frequente
Licheniformis
Bacteremia e sepse
Pouco frequente
Subtilis
Intoxicao alimentar
Muito frequente
Antrhacis
Cereus
Circulans
Anthrax intestinal
Anthrax pulmonar
Bacteremia e sepse
Intoxicao alimentar
Infeces pulmonares, endocardite, meningite,
osteomielite e endoftalmite
Intoxicao alimentar
Bacteremia, sepse, endocardite e infeces

respiratrias
Bacillus cereus
Pode apresentar dois tipos de intoxicao:
Mod V - 52
Raro
Raro
Frequente
Muito frequente
Frequente
Frequente
Raro
Caracterizado por diarria, dor abdominal, que aparecem 8 a 16 h aps a ingesto do alimento
contaminado (carnes, vegetais, leite, molhos, massas, doces, bolos).
Caracterizado por nuseas e vmitos que aparecem 1 a 5 horas aps a ingesto do alimento
contaminado, principalmente arroz, mas pode ser os mesmos alimentos acima.
Bacillus anthracis
Caractersticas
gerais
No passado era causa importante de mortalidade no gado, sendo os herbvoros altamente

suscetveis, sendo reduzida pela vacinao e melhores condies de higiene. O homem pode
adquirir a doena em contato com animais doentes (trabalhadores rea rural e veterinrios),
no manuseio industrial de ossos, l, crina, e outros produtos animais e de forma eventual,
sendo a forma cutnea quase a totalidade dos casos, com raros episdios intestinais pela
ingesto de carne contaminada. Potencial risco elevado na comunidade quando usado como
arma biolgica.
Quadro clnico
A forma cutnea no tratada pode ser fatal (menos de 20% dos casos), principalmente
quando a leso prxima a cabea ou pescoo. As formas pulmonares e intestinais so mais
graves pela dificuldade de diagnstico. No local de inoculao da forma cutnea aparece aps
2 a 3 dias uma pequena mancha ou ppula, seguida no dia seguinte de um anel de vesculas
em torno da ppula, que ulcera, seca, escurece formando uma escara caracterstica que
cresce, fica mais espessa e aderente aos planos profundos. O edema pode ser importante,
mas tem a caracterstica de ser indolor e sem pus.
A forma intestinal semelhante forma cutnea atingindo a mucosa com leses e
eventualmente gastroenterite.
No antraz pulmonar o esporo inalado transportado pelos macrfagos do pulmo para o
sistema linftico onde os esporos germinam e causam septicemia que fatal. Ateno ao fato
de que evoluo nos casos fatais inicialmente caracterizada por sintomas leves como
fadiga, mal-estar e febre baixa, ou s vezes at sem sintomas, quando repentinamente se
instala dispnia, cianose, febre elevada, desorientao, falncia circulatria, choque, coma e
morte em poucas horas. Em geral a bacteremia importante.
Coleta de
material
Swab do exudato de leses podem ser teis; na escara, remover a crosta e colher material
com swab ou com tubo capilar, usando luvas. Na forma intestinal, fezes podem ser colhidas.
Ps-mortem, sangue venoso ou de sangramento de mucosas (sangue no coagula) pode
evidenciar o bacilo na bacterioscopia. No antraz pulmonar a hemocultura til nos casos
graves, mas o material pulmonar oferece menor chance de isolamento.
Isolamento e
Identificao
Em casos clnicos os Bacillus esto na forma vegetativa, mas em alimentos, produtos secos
de animais (ossos, crina, pelo) o Bacillus dever estar em forma esporulada e haver
necessidade de ativ-los a 62,5oC por 15 minutos (choque trmico).
Os Bacillus crescem com facilidade em meios pobres ou ricos. Dependendo do material (ex:
fezes) poder haver necessidade de usar meio seletivo com adio de polimixina
(100.000U/L). Colnias grandes de cor creme crescem no gar sangue.
Diferenas entre Bacillus spp. e Clostridium spp.

Bacillus spp.
Clostridium spp.
Endosporos em aerobiose
Catalase positivos
Endosporos em anaerobiose
Catalase negativos
Diferenas entre B. cereus, B. anthracis e espcies relacionadas

Espcies
Colnia no AS *
Motilidade
Hemlise
Penicilina
Citrato
Lecitinase
B. cereus
esverdeado claro
resistente
branco acinzentado
neg
neg
sem
varivel
fraco +
esverdeado claro
resistente
varivel
rizides / espalhando
neg
fraco +
resistente
B. anthracis
B. thurigiensis
B. cereus subsp.
mycoides
* gar sangue de carneiro
Mod V - 53
O B. antrhacis virulento pode ser testado para produo de cpsula semeando-se em gar nutriente
com 0,7% de bicarbonato de sdio em jarra com vela. O crescimento ser mucide e a cpsula poder
ser evidenciada com a tinta da china.
ACTINOMICETOS
Grupo de bactrias Gram positivo que apresentam como caractersticas em comum a produo de
filamentos ou hifas vegetativas, sendo que alguns tambm apresentam hifas areas, semelhanas de
composio de parede e padro de cidos graxos celulares.
Neste grupo sero abordados os seguintes gneros:
Nocardia spp.
Rhodococcus spp.
Streptomyces spp.
O gnero Oerskovia, embora apresente hifas vegetativas, analisado juntamente com os

corineformes. Outros actinomicetos raros ou de menor importncia clnica no considerados so:
Gordona spp., Tsukamurella spp., Actinomadura spp., Nocardiopsis spp.
Informaes importantes sobre Actinomicetos
Para a adequada caracterizao dos Actinomicetos, que apresentam alguma semelhana morfolgica
com os fungos, importante considerar:
A origem do material, valorizando os abscessos.
A quantidade de microrganismos isolados e correlao com a bacterioscopia do material.
Possibilidade de contaminao com bactrias da mucosa oral.
Pigmento da colnia.
Anlise morfolgica da bactria pelo microcultivo em lmina idntico ao utilizado na seco de

Micologia, empregando gar fub sem dextrose a 25oC.
Identificao presuntiva de actinomicetos

Gnero
Miclio areo
Nocardia
Condio
Metabolismo glicose
oxidativo
Rhodococcus
neg
neg
oxidativo
Oerskovia
neg
neg
fermentativo
Rhotia
neg
neg
fermentativo
NOCARDIA SPP.
Caractersticas
gerais
So bacilos Gram positivo ramificados e filamentosos, aerbios estritos, catalase positivo,

imveis, que se fragmenta em bacilos e cocos irregulares.
Produz hifas areas medida que o cultivo envelhece. Existem 12 espcies sendo as mais
importantes N. asteroides e N. brasiliensis.
Importncia
clnica
Est associada ao solo e vegetais. As formas clnicas podem ser bem distintas: pulmonar
(abscessos), extra-pulmonar localizada, sistmica, sistema nervoso central (abscessos),
partes moles e micetoma. considerada uma bactria oportunista, pois a maioria dos casos
no cutneos e micetomas ocorrem em pacientes imunocomprometidos.
Coleta de
material
Quando colhido o material por puno, bipsia ou mesmo swab da leso profunda, deve ser
processado rapidamente; existe uma caracterstica do material descrita como grnulos de
enxofre, especialmente nos micetomas.
Mod V - 54
Isolamento e
Identificao
No bactria exigente, crescendo em gar sangue, gar chocolate, gar Sabouraud

dextrose, gar seletivo para Legionella e Lowenstein Jensen. Cresce entre 72h a 14 dias.
Com exceo da N. asteroides, a maioria das nocardias apresentam beta-hemlise em gar
sangue de carneiro. Crescem em meio de parafina (como fonte nica de carbono),
juntamente com Rhodococcus e algumas micobactrias.
Em microcultivo possvel visualizar as hifas ramificando-se em angulo reto, podendo
apresentar ramificaes secundrias, bem como hifas areas. Em cultura mais velhas em
gar tornam-se visveis as hifas areas nas colnias rugosas. As micobactrias de
crescimento rpido podem apresentar ramificaes bem curtas em ngulo agudo e sem
ramificaes secundrias.
Uma caracterstica importante a cor das colnias em Sabourad dextrose gar ou mesmo
em outros meios:
-
salmo ou laranja claro N. asteroides

laranja escuro N. brasiliensis
A Nocardia brasiliensis uria positivo, citrato positivo e gelatina positiva.

A Nocardia asteroides uria positivo, citrato varivel e gelatina negativa.
Bacterioscopia
e Histologia
A bacterioscopia pode revelar bacilos irregulares com ramificaes e parcialmente ou

fracamente lcool-cido resistentes pelo Ziehl ou colorao de Kinyoun. Cortes histolgicos
corados pela hematoxilina-eosina caracterizam os grnulos, mas no os filamentos da
bactria. O Gram ou a colorao de metenamina prata de Gomori so teis.
RHODOCOCCUS SPP.
Caractersticas
gerais
O R. equi uma bactria oportunista, causando pneumonia em imunocomprometidos,

apresentando uma evoluo lenta e granulomatosa, com infiltrados que evoluem para
cavitao. Pode causar tambm abscessos no sistema nervoso central, tecido subcutneo,
linfadenite, etc.
Diagnstico clnico diferencial deve ser feito com micobactrias, fungos, nocardia e
actinomyces. Hemoculturas com elevada frequncia podem ser positivas.
Coleta de
Material
Lavado bronco-alveolar (LBA), bipsias, hemocultura e mesmo escarro. Em material clnico o

Rhodococcus pode ser visualizado no interior de macrfagos e extra-celular, na forma de
cocos ou coco-bacilos. Em hemoculturas, LBA e escarro eventualmente pode ser observado
na forma filamentosa.
Isolamento e
Identificao
Em microcultivo o R. equi cresce de forma tpica como coco-bacilo ou bacilo em zig-zag. Em

Heart Infusion gar (HIA) cresce em 6 horas a 35oC como bacilo Gram positivo e em 24
horas apresenta-se cocide. A forma de ramificaes rudimentares a partir dos filamentos
pode ocorrer em culturas jovens em meio lquido.
Em HIA cresce entre 28 e 35oC, entre 2 a 4 dias, mas no a 45oC. Pode crescer na forma de
colnias rugosas (com hifas areas) ou lisas ou mucides. Pode apresentar a cor coral ou
rosa plido que so mais freqentes, mas pode ser amarela ou incolor.
A colorao pelo Ziehl ou Kinyoun pode revelar a fraca alcool-cido resistncia.
STREPTOMYCES SPP.
Caractersticas
gerais
Alguns milhares de espcies de Streptomyces j foram caracterizados, sendo na quase

totalidade saprfitas. O Streptomyces somaliensis responsvel pelo micetoma de cabea e
pescoo. Outras espcies foram identificadas em casos de pericardite crnica e infeces de
partes moles ps-traumticas (S. griseus).
Isolamento e
Identificao
O abscesso pode revelar a presena de grnulos duros. O Gram vai revelar uma massa de
bacilos Gram positivo finos.
No fastidioso, cresce em Sabouraud dextrose melhor incubado a temperatura ambiente
entre 4 a 10 dias. Pode-se visualizar no microcultivo hifas finas e longas com ramificaes,
hifas areas e condios (via assexuada de propagao com forma arredondada).
No alcool-cido resistente, e apenas os condios podem apresentar esta propriedade;
metaboliza a glicose por oxidao e cresce a 50oC. As colnias so mais secas com, diferentes
pigmentos (creme, marron, preto, etc) e presena ou no de hifas areas. Uma caracterstica
importante das colnias o cheiro de terra molhada.
Mod V - 55
7. FASTIDIOSOS
INTRODUO
CARACTERSTICAS GERAIS DOS FASTIDIOSOS
Este grupo heterogneo de bactrias apresenta como caracterstica comum exigncias especiais de
condies de cultivo, em relao as enterobactrias e a maioria dos no fermentadores. Estas
condies variam para cada microrganismo, podendo ser a necessidade de CO2, crescimento lento
com a necessidade de at 30 dias de incubao (Brucella), adio de fatores especiais de crescimento,
etc.
Pontos-chave para classificao
So bactrias Gram negativas ou Gram lbeis (coram-se de forma tnue pela safranina).
Muitos, mas no todos so coco-bacilos e oxidase positivos; no crescem em Mac Conkey.
Para teste de fermentao de carboidratos exigem uma base mais rica como o CTA (vide captulo
meios de cultura). O inculo deve ser bem denso e muitas vezes necessrio a adio de 2 ou 3
gotas de soro de coelho ou cavalo para permitir o crescimento nos meios utilizados para provas
bioqumicos.
Exceto as Capnocytophaga spp. que crescem formando colnias grandes e com aparncia de vu
em torno da colnia, os demais fastidiosos crescem lentamente e exigem 48 a 72 horas para as
colnias ficarem bem visveis, embora diminutas.
Alguns destes potenciais patgenos esto associados a sndromes clnicas bem definidas, embora
no frequentes como a brucelose, tularemia, etc. importante nestes casos obter informaes
adicionais com o mdico assistente ou o paciente/familiares para facilitar o processo de
identificao microbiolgica.
Sempre valorizar isolados de hemocultura, principalmente se ocorrer em mais de uma amostra, ou

materiais de bom valor preditivo de infeco como o LCR, lquido pleural, pericrdico, sinovial,
BAL, etc.
Cabe destacar que alguns fastidiosos podem positivar sistemas automatizados de hemoculturas e
a bacterioscopia pode ser aparentemente negativa tanto pelo pequeno tamanho da bactria como
pela m colorao pela safranina.
A topografia da fonte de isolamento uma pista importante, pois diferentes espcies de Neisseria,
Haemophilus, Bordetella, Capnocytophaga, Actinobacillus, Eikenella, Kingella, Cardiobacterium
podem ser encontrados em pele e mucosas, a Gardnerella e Cardiobacterium no trato genital, etc.
Como a alguns exigem tratamento com drogas no habituais, extremamente importante chegar
a definio de gnero ou encaminhar a Laboratrio de Referncia. Outro motivo relevante para a
correta identificao a importncia epidemiolgica que o agente possa ter em surtos ou mesmo
em casos isolados, como o caso da brucelose, legionelose e Bordetella pertussis.
A Pasteurella spp. embora includa neste grupo, cresce com facilidade em gar Sangue, gar
Chocolate, comportando-se no TSI como fermentador, mas no cresce em Mac Conkey . oxidase
positiva.
Alguns dos fastidiosos esto relacionados a contato com saliva, sangue, fezes, atravs de acidente
perfuro-cortante ou mordida de animais domsticos ou silvestres (Pasteurella, Bartonella,
Francisella e Brucella).
Destaca-se ainda a necessidade de precaues especiais no manuseio de alguns destes agentes

pelo potencial patognico (Brucella e Francisella).
Com base na importncia clnica e epidemiolgica, este grupo de bactrias ser dividido em dois
grupos:
Grupo A: maior interesse clnico e epidemiolgico
Grupo B: casos clnicos espordicos / microbiota oral humana
Mod V - 56
GRUPO A - MAIOR INTERESSE CLNICO E EPIDEMIOLGICO

Bactria
Hospedeiro principal
Via de transmisso
Bordetella pertussis
/parapertussis
Homem
Secrees de vias areas
Bartonella spp.
Gatos, humanos infectados,

outros desconhecidos
Mordida ou arranho de gato;

picada de piolho infectado
Brucella spp.
Mamferos domsticos
Leite e derivados, carne, sangue,

secrees de animais doentes
Francisella spp.
Animais silvestres
Picada de carrapato ou mosquito

infectado em zona endmica
Haemophilus spp.
Homem
Secrees de vias areas
Legionella spp.
Meio ambiente/gua
Inalao de gua contaminada
Pasteurella spp.
Animais domsticos/silvestres
Mordida e secrees de animais

domsticos e silvestres
GRUPO B - CASOS CLNICOS ESPORDICOS

Bactria
Fonte
Actinobacillus actinomycetemcomitans
Cavidade Oral humana
Cardiobacterium hominis
Cavidade oral humana
Capnocytophaga spp.
Chromobacterium violaceum
gua e solo
Eikenella corrodens
Kingella spp.
Streptobacillus spp.
Boca de roedores
As caractersticas deste grupo heterogeneo so:
Dificuldade ou ausncia de crescimento em meios ricos como gar Sangue e gar Chocolate.
Exigncia de incubao em diferentes tenses de CO2.
Dificuldade em caracteriz-los, pois exigem meios enriquecidos.
Crescimento lento e pouca importncia clnica, talvez pela dificuldade do seu isolamento e
caracterizao.
Os gneros Actinobacillus, Capnocytophaga e Eikenella tem em comum o fato de pertencerem

microbiota da cavidade oral humana e estarem relacionados doenas gengivais e, a partir deste
foco, doenas sistmicas.
Kingella e Cardiobacterium esto associadas ao trato respiratrio humano.
Diferem deste grupo a Chromobacterium que encontrada na natureza em gua e solo e

Streptobacillus na orofaringe e nasofaringe de camundongos selvagens e de laboratrio.
Mod V - 57
PRINCIPAIS FASTIDIOSOS E DIAGNSTICO

Bactria
Material clnico
Meio especfico
Incubao
Swab nasofaringe
Meio de Bordet & Gengou
7 dias
Bartonella spp.
Sangue, gnglios, bipsias
gar chocolate, gar sangue

carneiro
5 a 15 dias
Brucella spp.
Sangue, aspirado de
medula
Rotina de hemocultura ou
meio de Castaeda
At 30 dias
Francisella spp.
Gnglios, bipsias
gar chocolate enriquecido
7 dias
Haemophilus spp.
Sangue, LCR, etc.
gar chocolate de cavalo
48-72 h at 7 dias
Legionella spp.
Secrees ou aspirados de
trato respiratrio inferior
Meio especfico BCYE *
7 a 14 dias
Pasteurella spp.
Sangue, LCR, leses
gar sangue, gar chocolate
24 a 72 h
* gar extrato de levedura, carvo, com pirofosfato frrico e alfa-cetoglutarato.
PRINCIPAIS PROVAS DIFERENCIAIS ENTRE OS FASTIDIOSOS

Bactrias
Oxidase
Catalase
Motilidade
gar Sangue
gar Chocolate
neg /+ fraco
neg
neg
neg
varivel
varivel
neg
neg
neg
Brucella spp.
neg
neg
neg
neg
neg
neg
Chromobacterium spp.
Eikenella corrodens
neg
neg
neg
+ fraco
neg
neg
+ fraco
neg
neg
neg
neg
Legionella spp.
+ fraco
+ fraco
+ fraco
neg
neg
Pasteurella spp.
neg
neg
neg
neg
Actinobacillus
actinomycetemcomitans
Bartonella spp.
Capnocytophaga spp.
Francisella tularensis
Haemophylus influenzae
Kingella spp.
Streptobacillus spp.
BARTONELLA
A classificao taxonmica dos membros do gnero Bartonella ainda no definitiva e agrupa as
espcies B. bacilliformis, B. quintana, B. henselea, B. elizabethae e Afipia felis.
Mod V - 58
B. bacilliformis - o agente etiolgico da verruga peruana (febre de Oroya), doena restrita aos
Andes, caracterizada por profunda anemia, trombocitopenia, adenopatia, mialgia, delrio, coma e alta
mortalidade.
B quintana - causa de doena febril que atacou soldados na I Guerra Mundial, conhecida como
febre das trincheiras e relacionado a picada de piolhos e baixa higiene. Caracterizada por febre e
bacteremia com durao varivel e ainda no bem conhecida. Casos associados infeco por HIV
foram relatados.
B. henselea - pode apresentar quadro de bacteremia principalmente em imunossuprimidos bem
como relacionada doena da arranhadura do gato. O quadro de bacteremia caracteriza-se de forma
insidiosa por fadiga, dores no corpo, perda de peso e com febre progressiva. A doena da arranhadura
do gato manifesta-se inicialmente com uma ppula ou pstula cerca de uma semana no local de
contato com animal (gato ou co novo que arranha ou morde). Aps 1 a 7 semanas aparece
adenopatia regional e 1/3 dos pacientes apresentam febre e em 1/6 ocorre supurao do gnglio,
sendo que a maioria evolui sem outros sintomas. A cura espontnea ocorre entre 2 a 4 meses. B.
quintanae e B. henselae podem causar quadro de angiomatose bacilar caracterizado por proliferao
neovascular envolvendo pele, gnglios e fgado. B. elizabethae ainda pouco conhecida.
Afipia felis - foi considerada h alguns anos como o agente etiolgico da doena da arranhadura do
gato, que hoje atribuida B. henselae. Seu papel patognico no est bem esclarecido.
Isolamento
As bartonellas podem ser isoladas de hemoculturas, leses cutneas bipsias e gnglios.

O SPS (polianetol sulfonato) que o anticoagulante usado nas hemoculturas inibidor
das bartonellas, por sso deve-se usar outro anticoagulante.
Quando h suspeita clinica, deve-se incubar por pelo menos sete dias, at 40 dias. Vrios
meios enriquecidos podem permitir o crescimento das bartonellas. O caldo infuso
corao de preparo recente, com 5-10% de sangue desfibrinado de coelho ou cavalo so
adequados, como tambm o gar chocolate.
No Bactec pode crescer, mas no aciona o alarme de CO2. Exigem umidade a 35-37oC por
3 a 4 semanas. B. bacilliformis e Afipia fellis crescem melhor entre 25 a 30oC.
Identificao
Colnias podem crescer rugosas ou lisas, de um mesmo material. So bacilos Gram

negativos pequenos, s vezes curvos.
As espcies quintana e henselae, que so mais isoladas, so caracterizados pelas
seguintes provas: catalase e oxidase negativas, motilidade em lmina presente e que no
devida a flagelos (no tem), mas a fmbrias, percebendo-se a agitao da clula. O
perodo de incubao longo (> que sete dias) e a B. henselae bem aderente ao meio.
Provas para diferenciao de espcies de Bartonella e de A. felis

Espcies
Catalase
Oxidase
Uria
Flagelo
Motilidade
neg
neg
neg
neg
+*
neg
neg
neg
+*
neg
neg
neg
neg
B. baciliformis
B. quitanae
neg
B. henselae
B. elizabetae
neg
A. felis
* Motilidade por fmbrias
BORDETELLA
Caractersticas
gerais
O gnero Bordetella compreende as espcies B. pertussis, responsvel pela coqueluche ou

tosse comprida, e B. parapertussis, com quadro clnico semelhante a coqueluche, mas em
geral menos severo. Ambas so patgenos exclusivos dos humanos. A B. bronchiseptica e B.
avium so bactrias comensais de mamferos e aves, causando infeces em ces (tosse dos
Mod V - 59
canis) e a B. avium rinotraquete em perus. So patgenos oportunistas para humanos que

entram em contato com estes animais. Foram classificadas mais recentemente para o gnero
bordetella as espcies holmesii e hinzii.
Importncia
clnica
A Bordetella pertussis causa a coqueluche em crianas no vacinadas, com clnica bastante

caracterstica: Perodo prodrmico, que inicia 5 a 10 dias aps a aquisio do agente, com
sintomas semelhantes a um resfriado ou gripe. Fase altamente contagiosa e com sintomas
inespecficos. Segue-se o perodo paroxstico com quadro de tosse convulsiva, persistente e
caracterstica seguida de inspirao ruidosa. Podem ser acompanhadas de cianose e vmito e
vrias complicaes como convulses, insuficincia respiratria, encefalopatia, infeces
secundrias, etc. A convalescena ocorre cerca de quatro semanas aps inicio dos primeiros
sintomas.
Material
clnico e
Semeadura
So adequados o swab ou aspirado de nasofaringe e semeadura imediata em meios

especficos e em gar sangue para afastar B. pertussis. Na atualidade no se justifica dispor
de meio de Bordet & Gengou ou outro, mas em caso de suspeita solicitar auxlio de
Laboratrio de Referncia. Para frmula de meios de cultura vide manuais de fabricantes de
meios de cultura. A prova de imunofluorescncia deve ser utilizada em material de
nasofaringe juntamente com a cultura que mais especfica.
Isolamento e
Identificao
So, cocobacilos Gram negativos pequenos e aerbios estritos. A safranina deve ser corada
pelo Gram durante 2 minutos para melhorar a colorao. Para B. pertussis e parapertussis os
Laboratrios de Referncia devem dispor de identificao sorolgica para acelerar a
identificao.
Provas diferenciais para espcies de Bordetella

Espcies
Oxidase
Motilidade
Uria
B. pertussis 1
+
neg
neg
B. para pertussis
neg
neg
+ em 24h
B. bronchiseptica
+
+
+ em 4h
B. avium
+
+2
neg
B. holmesii
neg
neg
neg
B. hinzii
+
+
varivel
1
- necessita de meio especfico: Bordet & Gengou (infuso de
Lowe.
2
- mais evidente a 25oC
gar Sangue
B & G ou
Salmonella
e Chocolate
Regan-Lowe
-Shigella
neg
+ 3-6 dias
neg
+
+ 2-3 dias
neg
+
+ 1-2 dias
+
+
+ 1-2 dias
+
+
+ 1-2 dias
+
+
+ 1-2 dias
+
batata + glicerol + sangue de carneiro) ou Regan
BRUCELLA
A brucelose uma doena de sintomas vagos, que cursa de forma insidiosa com febre baixa, calafrios,
sudorese noturna, cefalia, mialgia e artralgia. Pode ser acompanhada na forma crnica de alteraes
hematolgicas importantes como leucopenia, pancitopenia, trombocitopenia, anemia hemoltica, etc.
Importncia
clnica
Est associado ingesto de leite e derivados e carne de mamferos, veterinrios,

aougueiros ou trabalhadores rurais que manipulam carne e sangue destes animais e
acidentes em laboratrios. A hemocultura exige tempo superior de 5-7 dias de incubao.
importante a informao mdica de suspeita clnica para orientar o laboratrio na pesquisa e
caracterizao do agente.
Material
clnico e
Semeadura
Sangue, aspirado de medula, aspirado e bipsia de gnglios, fgado, bao, LCR, etc. A partir
do segundo dia de febre as hemoculturas podem ser positivas, ocorrendo tambm
hemoculturas positivas em pacientes afebris. Outro recurso utilizado para facilitar o
isolamento o mtodo de lise-centrifugao:
-
Colher 5 a 10mL de sangue em tubo de 50mL com 1,5mL de citrato de sdio a 4%

Adicionar cerca de 40mL de gua destilada estril
Centrifugar 2.000g por 30 minutos
Transferir 0,5mL do sedimento para uma placa de gar sangue e semear. Pode-se fazer o
mesmo com LCR e aspirado de medula.
- Incubar 35oC em estufa entre 5 a 10% de CO2 (com gerador de CO2 ou estufa apropriada).
Isolamento e
Identificao
As brucellas crescem bem em gar sangue, gar chocolate, Tripticase Soy gar e Brucella
gar. O crescimento visvel com 48 a 72 horas. Colnias so pequenas, brancas a creme, e
ao Gram visualizam-se coco-bacilos bem finos e pequenos. So aerbios OF oxidativos,
crescem nos frascos de hemocultura, meio de Thayer Martin, gar sangue, gar chocolate,
Mod V - 60
mas no no Mc Conkey.
Espcies mais importantes so:
- melitensis, abortus, suis e canis.
- Uria positivos: B. suis (1 a 30 minutos), B. canis (1 a 30 minutos) e B. abortus (1 a 2 h)
no meio uria de Christensen.
- H2S com tira de acetato positivo: B.abortus e de B.suis (biotipo 1).
- CO2 para crescimento: biotipos de B. abortus e B. ovis.
Provas diferenciais entre coco-bacilos Gram negativos

Bactria
Oxidase
Motilidade
Uria
gar Sangue
Mac Conkey
Brucella spp.
neg
neg
Bordetella bronchiseptica
neg
neg
neg
varivel
Moraxella phenylpyruvica
neg
Pasteurella spp. *
neg
varivel
neg
Haemophilus influenzae
neg
varivel
neg
neg
Acinetobacter spp.
* cresce no TSI como fermentador acidificando pice e base sem gs.
Considerando que a Brucella de dificil caracterizao em laboratrio no especializado, encaminhar a

laboratrio de referncia para confirmao. Suspeitar quando houver quadro clnico sugestivo,
obtendo-se isolado de sangue ou medula, crescimento de coco-bacilos finos pouco corados, oxidase e
catalase positivas, que crescem lentamente em gar sangue ou chocolate. Soroaglutinao til como
elemento da caracterizao.
FRANCISELLA TULARENSIS
um coco-bacilo pequeno, Gram negativo, imvel e pleomrfico, aerbio estrito e capsulado.
Apresenta grande resistncia no meio ambiente, sobrevivendo semanas em meios midos, carcaas
de animais, gua, lama, etc. Constitui o agente da tularemia, uma doena de animais selvagens e com
vrios vetores hematfagos. transmitida principalmente por carrapatos, mas tambm por
mosquitos.
Nos Estados Unidos prevalece o biovar A, mais grave, enquanto que no hemisfrio sul prevalece o
biovar B que apresenta a forma clnica mais leve, sendo pouco diagnosticada principalmente por
desconhecimento do agente.
Fontes de
transmisso
Centenas de animais silvestres, incluindo alguns domsticos (incluindo ces, gatos e

pssaros), podem ser portadores deste agente. Cerca de uma dezena de diferentes insetos
servem de vetores. A transmisso pode ocorrer tambm em contato direto com animais pela
mordida, sangue, carne contaminada e eventualmente gua e inalao de aerossis.
Quadro clnico
extremamente infectante, devendo ser manipulado em cabine de segurana nivel 2 para

material clnico e nvel 3 para culturas positivas. Bastam 10 microrganismos injetados por via
subcutnea ou 25 inaladas para causar a doena.
Logo aps a penetrao do agente, em geral pela pele, aparecem sintomas semelhantes da
gripe: febre, tremores, cefalia e dor generalizada. Aps perodo de incubao de 2 a 10 dias
forma-se uma lcera no local de penetrao, que pode durar meses. Os gnglios regionais
aumentam e ocorre necrose. Se ocorrer invaso sangunea, o quadro de endotoxemia tpico
se manifesta. Estes casos so pouco frequentes e ocorrem quando h grande inoculao ou
paciente imunocomprometido. A mortalidade alcana 60%, ocorrendo toxemia, cefalia
intensa, febre elevada e contnua, com delrios, prostrao e choque.
A forma lcero-ganglionar ocorre em cerca de 80% dos casos relatados. A lcera endurada,
eritematosa, que no cicatriza. Outras formas relatadas so oculo-ganglionar, em orofaringe,
ganglionar sem lcera, pleuropulmonar e gastrointestinal.
Mod V - 61
Material
clnico e
Semeadura
Os materiais que oferecem maior chance de positividade so a partir de raspados de lceras,

biopsias e escarro. A Francisella cresce em gar chocolate suplementado com Isovitalex .
Laboratrio de Referncia deve ser consultado sobre recursos disponveis ou
encaminhamento de cepas suspeitas.
Isolamento e
Identificao
A bacterioscopia de material clnico de leses ou bipsias raramente ajuda, pois o

microrganismo muito pequeno e cora mal pelo mtodo de Gram. Este agente deve ser
lembrado sempre que houver doena associada a picada de carrapato e formao de lcera
com comprometimento ganglionar. Entretanto, o diagnstico microbiolgico difcil, sendo
na maioria das vezes feito com base em testes de aglutinao em amostras pareadas
colhidas com intervalo de 2 a 3 semanas e congeladas a - 20oC.
HAEMOPHYLUS
Diferentes espcies pertencentes ao gnero Haemophilus podem ser encontradas como flora normal
da nasofaringe e orofaringe, chegando a 50% da populao, geralmente cepas no capsuladas,
embora tambm cepas do H. influenzae b possam apenas representar colonizao (rara nos adultos e
cerca de 5% nas crianas).
Para considerar o isolamento de Haemophilus fundamental associar o papel patognico ao da clnica.
Vrias so as infeces causadas por H. influenzae, sendo H. influenzae do tipo b as cepas mais
virulentas. Entretanto a partir da dcada passada, com a disponibilidade de vacinao, houve uma
drstica reduo na importncia desta bactria nas populaes vacinadas.
Doenas causadas pelo H. influenzae b principalmente na infncia: Meningite, Epiglotite,

Pericardite, Pneumonia, Artrite sptica, Osteomielite, Celulite facial.
Mais raramente: peritonite e infeco urinria em crianas menores que cinco anos.
Doenas causadas por cepas no b e no tipveis (em maiores de 9 anos e adultos associados a
doena de base predisponente como neoplasia, AIDS, alcoolismo, DPOC, etc.): Traqueobronquite e
pneumonia, Bacteremia, Conjuntivite, Ootite (segunda causa depois do pneumococo), Sinusite.
HAEMOPHILUS APHROPHILUS
Microbiota do trato respiratrio superior, especialmente em placas dentrias e sulco gengival;
endocardite e abscesso cerebral e mais raramente meningite, pneumonia e bacteremia esto
associados a este agente, particularmente em pacientes com comprometimento imunolgico. A
endocardite no est necessariamente relacionada leso valvular prvia, mas a associao com
embolia arterial freqente nestes casos. Existem relatos tambm de isolamento em otites, sinusites
e epiglotites, etc.
Crescem bem em gar chocolate no isolamento primrio e em gar sangue de carneiro nos subcultivos
sem exigncia de fatores X e V, mas as colnias so muito pequenas de cor amarelada, cheiro de cola
e necessitam de 48 a 72h para boa visualizao. Em caldo tem a caracterstica de aderir as paredes
do tubo, como o Actinobacillus actinomycetemcomitans. No crescem em Mac Conkey. Para todos os
hemfilos fazer o teste da beta-lactamase para verificar a resistncia penicilina
HAEMOPHILUS DUCREY
o agente do cancro mole, sendo na atualidade raramente isolado, pela menor incidncia da doena,
da contaminao das leses com flora genital e pelo frequente uso prvio de antibiticos.
Colhido de lceras genitais removendo-se previamente a secreo superficial ou lavando com salina
estril e utilizando um swab. Recomenda-se semear imediatamente e fazer esfregao a ser corado
pelo Gram. Em geral de difcil cultivo.
Emprega-se gar chocolate de cavalo com base GC ou Mueller Hinton. A colocao de um disco de
vancomicina pode ajudar a inibir bactrias Gram positivas. Na bacterioscopia aparecem coco-bacilos
Gram lbeis agrupados e em cadeias como cardumes.
ISOLAMENTO
Mod V - 62
No isolamento primrio no gar chocolate as colnias costumam ser pequenas de cor beje claro, com
odor caracterstico. No gar sangue ocasionalmente pode-se detectar o crescimento em torno de
colnias de Staphylococcus aureus , que produz o fator V e utilizada como prova alternativa
utilizao dos discos e denominada prova do satelitismo.
IDENTIFICAO DE ESPCIES DE HAEMOPHILUS
Anaerbio facultativo.
No crescem no TSI e no OF-glicose.
Melhor meio de cultura para haemophilus influenzae o gar chocolate com sangue de cavalo. A
base GC usada para Neisserias indicada, embora os hemfilos cresam com outras bases como
Columbia e Mueller Hinton. H necessidade de umidade e CO2 entre 3 a 5% para o H. influenzae e
H. aphrophilus. O gar chocolate suporta muito bem o crescimento dos haemophilus, mas para
outros fastidiosos recomenda-se adicionar suplemento de crescimento (vitox, isovitalex ).
As diferentes espcies de haemfilos podem dar reao de oxidase positiva fraca e demorada
(cerca de 25 a 20 segundos).
Em amostras de LCR pode ser til a aglutinao com partculas de ltex, mas a confirmao
bioqumica e sorolgica em laboratrio de referncia necessria.
Antibiograma realizado em meio padronizado HTM (vide cap. meios de cultura).
PRINCIPAIS PROVAS PARA DIFERENCIAR ALGUMAS ESPCIES DE HAEMOPHILUS

Espcies
Fator
X
Fator
V
Hemlise *
Uria
Indol
GLI
SAC
LAC
Catalase
H. influenzae
neg
varivel
varivel
neg
neg
neg
H. haemolyticus
varivel
neg
neg
neg
neg
varivel
varivel
neg
varivel
neg
fraca
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
H. parainfluenzae
H. ducrey
H. aphrophilus
* Verificar hemlise em gar sangue de cavalo

GLI = glicose
SAC = sacarose
LAC = lactose
Obs.: Fermentao de aucares com base CTA e 1% de acar adicionado de fator X e V (vide cap. meios de
cultura); vide leitura de fatores X e V
Tcnica para testar fatores X e V:
Usar meio gar tripticase soja ou BHI gar.

Discos comerciais impregnados com os fatores X=hemina/hematina e V=NAD ou coenzima I.
Semear a bactria como se fosse fazer um antibiograma e colocar os discos com pina a uma
distncia de 1,5 cm um disco do outro. Flambar a pina antes e aps a retirada de cada disco.
Aps 24h de incubao em jarra com vela e umidade a 35oC, verificar crescimento prximo aos
discos:
Haemophilus influenzae: Crescimento entre os discos (exige X e V)
Mod V - 63
Prova do satelitismo
Semear com swab uma suspenso em salina cerca de 1 a 2 da escala Mac Farland no centro de
uma placa de gar sangue de carneiro.
Semear em uma nica estria um repique de S. aureus hemoltico (ATCC 23922).
Incubar 18 a 24h em jarra com vela e umidade ou CO2.
Verificar crescimento de colnias pequenas prximas a zona de hemlise do estafilococo.
Encaminhar cepas isoladas de lquidos nobres (sangue, LCR, pleural, pericrdico) a Laboratrios de
Referncia para confirmao e sorotipagem.
LEGIONELLA
IMPORTNCIA CLNICA
Pneumonia com ou sem sepsis a manifestao clinica mais importante, podendo ocorrer infeces de
partes moles e sinusite. Est em geral associada a surtos cuja fonte a gua contaminada com este
agente. Largamente distribuda na natureza em ambiente mido e gua potvel e ocasionalmente em
chuveiros. Est associada a presena de outras bactrias e amebas de vida livre na gua. A presena
de bactrias do gnero Legionella em material clnico humano est invariavelmente associada
doena clnica.
ESPCIES E MANIFESTAES CLNICAS

Existem algumas dezenas de espcies de Legionella sendo a espcie mais importante a L.
pneumophila, sorogrupos 1 e 6. A doena pode ser sub-clnica, forma no pulmonar, pneumonia e
doena extra-pulmonar. A forma no pulmonar tem perodo de incubao curto (horas a dias), sendo
auto-limitada e sem evidncias radiolgicas de comprometimento pulmonar.
Os sintomas so febre, mal-estar, mialgia e tosse. A pneumonia a forma mais frequente de
manifestao da doena, acompanhada dos mesmos sintomas acima descritos para a forma no
pulmonar e em geral com tosse no produtiva. A doena apresenta rpida progresso e nos casos
graves, a formao de abscessos so sugestivos da legionelose. Bacteremia comum e o
comprometimento dos mais variados orgos e tecidos j foi descrito.
MATERIAIS RECOMENDADOS
Escarro
Aspirado traqueal e outros que neste caso especfico esto indicados como teis
Lavado/escovado bronco-alveolar.
Bipsia pulmonar ou outros tecidos e aqueles obtidos em autpsia.
LCR e outros lquidos de derrame.
Urina (pesquisa de antgenos) conservar a - 20oC.
Para transporte: usar frasco estril com gua destilada estril, mas no salina que pode inibir o
cultivo. Sempre que possvel concentrar os materiais por centrifugao, evitando formar aerossis.
RECURSOS DIAGNSTICOS MAIS UTILIZADOS

Sensibilidade e especificidade de recursos diagnsticos para legionelose
Teste
Sensibilidade
Especificidade
Observao
70%
100%
Mtodo de escolha
Aglutinao pelo ltex
55-90%
85-99%
Imunofluorescncia indireta
70-80%
>95%
Cultura
Mod V - 64
til com cultura ou fins

epidemiolgicos
Cultura em meio
enriquecido
Cresce em meio suplementado com extrato de levedura, l-cisteina, sais de ferro e alfacetoglutarato em meio denominado BCYEa ou BCYE, e seu crescimento favorecido pela
incubao em 5% de CO2. Para materiais com microbiota, como para secreo traqueal e
escarro, acidificar o meio por 15 minutos a pH 2,0 com tampo cido (0,2M HCl e 0,2M KCl)
e em seguida neutralizao a pH 7,0 com KOH 0,1N.
Cultura em meio
seletivo
Recomenda-se uso de meio seletivo, adicionando ao meio BCYE os antibiticos: polimixina B,

cefamandol e anisomicina ou vancomicina, polimixina B e anfotericina B. Colnias azuladas
ou esverdeadas
Cultura em meio
diferencial BCYE
Adicionado de glicina, vancomicina, prpura de bromocresol e azul de bromotimol apresenta

as seguintes caractersticas: L. pneumophila (branco esverdeado), L. micdadei (colnias azul
claro ou acinzentadas), outras legionelas (colnias verde bem claro). Crescem bem no frasco
utilizado pelo BACTEC.
IDENTIFICAO
So bacilos Gram negativos finos que se coram fracamente pela fucsina e safranina do Gram. Em
repiques tornam-se filamentosos.
PROVAS
Aerbio estrito
No primo isolamento a l-cystena imprescindvel.
No meio BCYEa o crescimento pode ser observado a partir do 3 ao 5 dia a 35oC.
Semear o material em gar sangue como controle, pois a Legionella no dever crescer.
Aguardar 14 dias para descartar as culturas quando negativas.
CARACTERSTICAS DA L. PNEUMOPHILA
oxidase positiva fraca
gelatinase positiva
catalase positiva
hidrlise do hipurato positivo
no sacaroltico (no oxida nem fermenta

os acares)
sensvel a macroldeos, rifampicina, sulfatrim e

quinolonas
motilidade positiva
A identificao com base em testes difcil. O suspeita deve ser baseada na clnica, no aspecto da
colnia, crescimento em meio BCYEa, dependncia da l-cysteina, ausncia de crescimento em gar
sangue e gar chocolate no suplementados.
A imunofluorescncia direta, com amostras clnicas utilizadas para cultura, um mtodo
complementar para diagnstico da legionelose. Encaminhar cepas suspeitas a Laboratrio de
referncia para confirmao.
PASTEURELLA
A infeco pela Pasteurella constitui uma zoonose, pois se trata de bactria microbiota de boca e trato
respiratrio superior de mamferos e aves. As diferentes espcies esto associadas a infeces
humanas relacionadas a mordida dos animais descritos abaixo ou outros tipos de contato com sangue,
carne, carcaa, etc.
A P. multocida a espcie mais comumente isolada em material clnico humano, em geral associada a
mordida ou arranhadura de ces e gatos. Caracteriza-se pela formao de abscessos ou celulite e
eventualmente osteomielite. Infeces respiratrias podem ocorrer, incluindo pneumonia lobar, com
ou sem derrame e empiema. Em pacientes imunocomprometidos, com cirrose, neoplasias, podem
apresentar bacteremia e septicemia.
Mod V - 65
Principais espcies de Pasteurella e doenas relacionadas

Bactria
Doenas Relacionadas
P. multocida
Microbiota do trato respiratrio de mamferos e aves (domsticos e silvestres,

encontrado na boca de cerca de 50% dos ces e gatos).
Pode causar infeces em mamferos e diarria em aves.
P. pneumotropica
Trato respiratrio de roedores, ces, gatos, etc
P. haemolytica
Infeces pulmonares em bovinos, mastite em ovelhas, sepse em ovinos e caprinos.
P. aerogenes
Microbiota do trato intestinal de sunos
P. dagmatis (n. sp1)
Trato respiratrio de ces e gatos
DIAGNSTICO DE ZOONOSES
Para facilitar o isolamento e identificao da Pasteurella muito importante a descrio clnica, pois na
suspeita de zoonoses importante lembrar de: brucelose, pasteurella, micobacterioses, tularemia,
leptospirose, yersiniose, etc.
Caracterizao microbiolgica
Coco-bacilo Gram negativo ou bacilos podem ser capsulados

Anaerbio facultativo (fermentador) TSI cido/cido
Oxidase positiva em colnias isoladas em gar sangue ou gar chocolate
Catalase positiva
Motilidade negativa
Indol positivo
Sacarose positiva
Muitas espcies so ornitina positivas
Provas diferenciais das espcies de Pasteurella spp. de importncia clnica

Espcie *
Hemlise
Mac Conkey
Indol
Uria
Ornitina
OF Glicose
P. multocida
neg
neg
neg
F sem gs
P. pneumotropica
neg
varivel
F gs
varivel
P. haemolitica
+ 72%
varivel
neg
neg
varivel
F sem gs
P. aerogenes
neg
neg
varivel
F sem gs
P. dagmatis
neg
neg
F com gs
* Todas so oxidase positiva, catalase positiva e fermentadoras da glicose

Obs.: a P. multocida cresce bem em gar sangue de carneiro e gar chocolate, formando pequenas
colnias acinzentadas. No cresce em gar Mac Conkey. Tem odor forte caracterstico e podem ser
diferenciadas entre si por poucas provas (vide tabela acima), mas dependendo do animal-fonte,
outras espcies menos frequentes podem estar envolvidas.
ACTINOBACILLUS
So habitantes das mucosas do trato respiratrio e urinrio de humanos e animais. As trs espcies
mais importantes so: A. actinomycetemcomitans, A. urea e A. hominis.
Mod V - 66
O primeiro est relacionado doena periodontal e particularmente periodontite juvenil localizada,

bem como com endocardite e abscesso cerebral, oriundos da boca. A doena periodontal est
associada endocardite pelos seguintes agentes:
A. actinomycetemcomitans
E. corrodens
Kingella spp.
As outras espcies de Actinobacillus so patgenos oportunistas e causam raramente infeces do

trato respiratrio e bacteremia.
PRINCIPAIS CARACTERSTICAS PARA DIAGNSTICO

So coco-bacilos Gram negativos ou pequenos bacilos que crescem em aerobiose, umidade e 5 a 10%
de CO2 ou anaerobiose em gar sangue e gar chocolate. Recomenda-se adicionar suplementos com
vitaminas e sangue lisado de carneiro ou cavalo ao gar chocolate. As colnias ficam bem visveis com
48 a 72 h de incubao, so brancas acinzentadas, com um pregueamento no centro, fortemente
aderentes ao meio e pegajosas no primo isolamento.
Principais caractersticas das bactrias fastidiosas analisadas
Bactrias
Caractersticas Principais
Actinobacilus
Cocobacilus a bacilos longos, anaerbios facultativos, colnias cinza,

aderentes ao meio, com centro da colnia enrugado
Cardiobacterium
Bacilos que podem apresentar formas semelhantes gota dgua
Eikenella
Cocobacilos com extremidades arredondadas, cheiro de gua clorada,

colnias podem corroer o meio
Kingella
Pequenos cocobacilos
Capnocytophaga
Fusiforme e curvo, colnias crescem espalhadas
Streptobacillus
Filamentos longos
Chromobacterium
Pode ter forte pigmento violeta, cresce em Mac Conkey
Provas diferenciais entre os principais fastidiosos

Bactrias
Oxidase
Catalase
CO2
Mac
Conkey
Uria
Indol
Glic.
TSI
Motil.
neg ou
+ fraco
varivel
neg
neg
ac / ac
neg
Cardiobacterium
neg
neg
neg
ac / ac
neg
Eikenella
neg
neg
neg
neg
neg
alcalino
neg
Kingella
neg
neg
neg
neg
alcalino
neg
neg
neg
neg
n cresc.
Actinobacilus
Capnocytophaga
Streptobacillus
Chromobacterium
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
n cresce
neg
varivel
neg
neg
neg
alc / ac
positivo ou neg = 80% ou mais das provas positivas ou negativas ac= cido
1
- A. actinomycetemcomitans
2
- origem humana. As de origem animal so oxidade e catalase positivas.
3
- pode acidificar lentamente
Mod V - 67
alc = alcalino
CAPNOCYTOPHAGA
As espcies de Capnocytophaga gingivalis, granulosa, haemolitica, ochracea e sputigena fazem parte
da microbiota da cavidade oral humana, enquanto outras espcies podem ser encontradas na boca de
animais domsticos. O isolamento de Capnocytophaga ocorre com maior freqncia em bacteremias
nos pacientes neutropnicos com mucosite, mas esto tambm implicadas na doena periodontal
juvenil (gengivalis e ochracea), periodontite em adultos (sputigena) e isoladas em placas dentais
supragengivais em adultos (granulosa e haemolytica). As doenas localizadas (ceratites, abscessos e
endoftalmites), bem como doenas sistmicas (septicemia, endocardite, osteomielite, etc.) ocorrem
em pacientes imunocomprometidos ou no.
MORFOLOGIA E CULTIVO
A morfologia da Capnocytophaga bem caracterstica, facilitando a sua suspeita, pois lembra um
Fusobacterium aerotolerante. Tem as extremidades afiladas e o centro mais largo, podendo ser
encurvada e eventualmente cocide.
Para cultivo, crescem melhores com 5 a 10% de CO2 e em anaerobiose, o que pode confundir com o
anaerbio estrito, se no for feita a prova de crescimento em aerobiose com CO2. Chama a ateno o
fato de crescer melhor em gar sangue de carneiro que no gar chocolate sem suplemento de
vitaminas. No crescem em Mac Conkey. O crescimento pode ocorrer com 24 a 72 h. A colnia chata
e sua borda irregular; com maior incubao nota-se o espalhamento em torno da colnia,
semelhante ao Proteus, mas em escala muito reduzida, cerca de 2 a 4 mm de dimetro. A espcie
haemolytica apresenta hemlise discreta, e a espcie ochracea tem cheiro de amndoas.
IDENTIFICAO
Capnocytophaga de origem humana so oxidase e catalase negativas, produzem cido a partir da
glicose em caldo enriquecido com soro de coelho e inculo denso. Motilidade negativa; indol negativo;
lisina, ornitina e arginina negativas. A maioria esculina positiva (gengivalis varivel e granulosa
negativa). A diferenciao das espcies dificil. As amostras de origem animal (C. canimorsus e
cynodegmi) so oxidase, catalase e arginina positivas.
EIKENELLA
Tambm bactria da microbiota da cavidade oral humana e atribuinegse participao em infeces
periodontais, sendo encontrada na placa bacteriana subgengival em adultos com periodontite. Isolada
em material de trato respiratrio inferior, abscessos de partes moles, sangue e fludos estreis
infectados em casos de infeces pleuronegpulmonares, infeces psnegcirrgicas de parede, artrite,
meningite, endocardite e septicemia.
CULTIVO, BACTERIOSCOPIA E IDENTIFICAO

anaerbio facultativo, mas cresce melhor com 5% de CO2, em gar sangue e chocolate, mas no em
Mac Conkey. O crescimento lento, necessitando de 2 a 4 dias para boa visualizao das colnias. Em
cerca da metade das cepas pode-se observar a corroso do gar, que sua caracterstica marcante.
Produz um pigmento amarelo claro e tem odor de hipoclorito no gar sangue e gar chocolate.
Na bacterioscopia so observados bacilos delgados ou coco-bacilos gram negativos com extremidades
arredondadas. E, bioquimicamente, caracteriza-se por ser oxidase positiva, catalase negativa,
motilidade negativa e ornitina positiva; provas negativas de utilizao de carboidratos, uria, indol e
esculina.
KINGELLA
Espcies de Kingella fazem parte do trato respiratrio e genito-urinrio humanos. K. kingae a
espcie mais importante e um patgeno oportunista responsvel por casos graves de endocardite,
osteomielite, septicemia, com provvel porta de entrada em leses da mucosa da orofaringe. A
doena valvular pode estar ou no associada a doena cardaca prvia. A osteomielite ocorre com
Mod V - 68
maior frequncia em crianas menores de 5 anos. Os quadros spticos podem ser semelhantes
doena meningoccica.

A K. kingae cresce em gar sangue
incubao, mas no em Mac Conkey.
carneiro, mas sem hemlise intensa.
lisas e convexas ou fazendo corroso,
e gar chocolate com 5% de CO2, aps pelo menos 48 h de

Tem como caracterstica ser beta-hemoltica no gar sangue de
Pode crescer numa mesma placa de isolamento como colnias
ou colnias espalhadas como se fossem mveis.
So coco-bacilos que ocorrem aos pares ou cadeias curtas, podendo ser confundida com Neisseria
spp. e, bioquimicamente, so oxidase positiva, motilidade e catalase negativas, e acidificam a glicose
lentamente.
Provas diferenciais entre os fastidiosos oxidase positivas e catalase negativas:
Fastidiosos oxidase positivas e catalase, uria e esculina negativas
Bactrias
Hemlise
Indol
Ornitina
Glicose
C. hominis
neg
neg
E. corrodens
neg
neg
neg
neg
neg
K. kingae
CARDIOBACTERIUM HOMINIS
Cardiobacterium flora do trato respiratrio humano e ocasionalmente do trato urogenital. Est
associado quase exclusivamente a quadros de endocardite, precedidos de manipulao dentria.

Cresce em 3 a 5 dias em hemoculturas, mas no causa alteraes no meio (turvao, hemlise,
pelcula, grumos, etc.). Cresce em 3 a 5 dias em 5 a 7% de CO2, em gar sangue e gar chocolate,
mas no em Mac Conkey. As colnias so branco-amareladas e podem manifestar um pequeno
espraiamento da colnia simulando motilidade no gar como o Proteus e eventualmente a corroso do
gar.
So bacilos Gram negativos, podendo apresentar pleomorfismo com extremidades dilatadas como
bulbos que podem reter corante violeta e com arranjos caractersticos em agrupamentos de rosetas e
formas isoladas como gota dgua ou alteres. Deve-se observar estas caractersticas para no
confundir com bacilos Gram positivos.
Uma prova fundamental a produo de indol, que deve ser feita em caldo triptona, com inculo
denso, incubao de 48 h, e extrao com xilol e uso do reagente de Ehrlich.
CHROMOBACTERIUM VIOLACEUM
Encontrada na natureza no solo e na gua, a infeco em geral est relacionada a leses cutneas
com estes elementos. Leses localizadas ou formas septicmicas graves com mltiplos abscessos tm
sido esporadicamente relatadas. Mais raramente diarria e infeco urinria.
CULTIVO E BACTERIOSCOPIA
Bacilo Gram negativo anaerbio facultativo, reto ou ligeiramente curvo, com extremidades
arredondadas, isolados ou em arranjos aos pares ou em cadeias curtas.
Diferente da maioria dos fastidiosos, cresce alm do gar sangue e chocolate, tambm em Mac
Conkey. Caracterstica de colnia convexa, lisa e de cor violeta forte, embora algumas variantes sem
cor possam ocorrer. Algumas cepas podem ser levemente hemolticas no gar sangue.
Mod V - 69
STREPTOBACILLUS MONILIFORMIS
Encontrado na nasofaringe e orofaringe de ratos, camundongos e outros roedores domsticos como a
cobaia. As infeces esto relacionadas a mordida destes roedores ou ingesto de leite ou alimentos
contaminados. A febre por mordedura do rato apresenta quadro clnico bem definido com perodo de
incubao de cerca de 10 dias, incio abrupto com febre elevada, tremores, cefalia intensa, vmitos e
artralgia migratria.
Rash semelhante ao sarampo com erupes maculopapulares podendo ser pustulosa, com petquias
ou prpuras nas extremidades, incluindo regio palmar e plantar. Complicaes graves podem ocorrer
como endocardite, pericardite, septicemia, abscesso cerebral, etc. Sem tratamento pode evoluir
favoravelmente em 2 semanas ou pode se tornar crnica; a mortalidade chega a 10%.

um bacilo Gram negativo muito pleomrfico, podendo ter em culturas mais velhas de 1 a 150 m de
comprimento (habitualmente bactrias tem de 1 a 3 m), com eventuais dilataes como um colar de
prolas, sem apresentar ramificaes, quebrando em formas coco-bacilares. Em culturas jovens pode
ter morfologia mais uniforme. O isolamento feito de hemocultura, aspirado de derrames (devem ser
centrifugados para concentr-los) e abscessos.
Meios de cultivo
Colher sangue para hemocultura com citrato. No se deve usar hemoculturas com SPS que
inibidor do S. moniliformis.
Cultivar em meio bifsico TSA/TSB ou gar infuso corao ou caldo infuso corao,
suplementados com 10% de soro de cavalo ou 15% de soro de coelho, e 0,5% de extrato de
levedura.
Incubar em jarra de anaerobiose ou 10% CO2 a 35-36oC e umidade.
Aps cerca de trs dias crescem colnias cinzas de 1-2 mm de dimetro, consistncia butirosa
podendo surgir colnias variantes com aparncia de ovo frito como micoplasmas. Em caldo de cultura
crescem em 2 a 3 dias com aparncia de bolas de plo.
As provas bioqumicas exigem a adio de soro de cavalo ou coelho para suportar o crescimento. So
oxidase, catalase, indol e uria negativos; e positivos para esculina, H2S com a prova da tira de
acetato de chumbo e hidrlise da arginina. Acidificam lentamente a glicose em base CTA com 0,5% de
soro de cavalo.
Mod V - 70
8. BACTRIAS ANAERBIAS ESTRITAS

INTRODUO
Existe um grupo de bactrias, que produz patologia no ser humano, e que no tem capacidade de
multiplicar-se em presena do oxignio atmosfrico. E mais, para muitas espcies destas bactrias o
oxignio deletrio. Estas bactrias so chamadas de anaerbios estritos, para diferenciar dos
chamados anaerbios facultativos, que tm a capacidade de desenvolver seus processos metablicos,
tanto em presena como na ausncia do oxignio. A maior parte das bactrias patognicas do ser
humano
so
anaerbios
facultativos
e
as
famlias
Micrococaceae,
Streptococaceae,
Corynebacteriaceae, Enterobacteriaceae, so exemplos destes microrganismos.
Os anaerbios estritos esto constitudos por numerosas famlias, gneros e espcies com caracteres
morfolgicos como H2O2 que se formam em presena de oxignio e que podem ser txicos,
bioqumicos e antignicos muito diferentes. So estudados em captulo separado porque a
metodologia para seu isolamento e identificao laboratorial prpria deste grupo, e porque
produzem alguns tipos especiais de processos patolgicos no ser humano.
Existem vrias teorias que tentam explicar esta susceptibilidade dos anaerbios estritos ao oxignio.
Entre elas, as seguintes:
Oxignio seria um txico direto para a bactria anaerbia.
As bactrias anaerbias estritas no tm a enzima catalase que impede a formao de grandes

quantidades de perxidos.
Oxignio altera enzimas bacterianas importantes no metabolismo (oxida, por exemplo, enzimas
que contm sh).
As bactrias anaerbias estritas no possuem a enzima superxido dismutase, capaz de

transformar o radical, o que altamente txico para a bactria.
Existem vrios argumentos a favor ou contra estas teorias. Provavelmente mais de um destes fatores
seja importante para explicar a ao deletria do oxignio nestas bactrias.
Esta labilidade dos anaerbios estritos ao oxignio explica a dificuldade existente nos laboratrios para
seu isolamento e estudo. Por este motivo tambm, boa parte das infeces provocadas por estes
microrganismos no eram diagnosticadas at a dcada de 1970, quando foram desenvolvidos
procedimentos prticos de laboratrios para criar atmosferas de anaerobiose. Assim, as infeces
provocadas pelos microrganismos mais resistentes dentro deste grupo, os esporulados do gnero
Clostridium, eram diagnosticadas com maior freqncia. Hoje sabemos que as infeces por
Clostridium so menos freqentes que as infeces provocadas por outros gneros de bactrias
anaerbias.
Um fato que tambm merece ser destacado, para explicar a freqncia com que estas bactrias
provocam infeco, que os anaerbios estritos so habitantes normais do organismo humano,
ultrapassando em nmero os aerbios e anaerbios facultativos. Assim, os anaerbios estritos esto
em propores 5 a 1000 vezes maiores que os anaerbios facultativos na microbiota normal do tubo
digestivo, pele, trato respiratrio superior e genital feminino.
Quando existem fatores predisponentes estas bactrias provocam processos patolgicos em diferentes
rgos e sistemas. Por este motivo, a maior parte das infeces provocadas pelas bactrias
anaerbias estritas so infeces chamadas endgenas. a prpria microbiota bacteriana do doente
que em determinado momento provoca o processo infeccioso, sendo este tipo de infeco pouco ou
no contagioso. As infeces provocadas pelo gnero Clostridium so fundamentalmente adquiridas a
partir do meio ambiente externo e por este motivo so chamadas de infeces exgenas.
Nas mucosas, onde os anaerbios estritos formam parte da flora normal, existem condies locais de
anaerobiose. Estas condies so provocadas por compostos orgnicos, enzimas, restos celulares e
bactrias anaerbias facultativas que baixam o potencial redox nestes locais. Neste sentido devemos
assinalar que estas bactrias toleram pequenas quantidades de oxignio. As mais estritas crescem em
atmosferas com 0,5% de oxignio, muitas crescem em atmosferas ao redor de 3% e algumas podem
crescer ainda em concentraes de at 8% de oxignio.
Mod V - 71
Como as bactrias anaerbias facultativas e aerbias favorecem a mutiplicao dos anaerbios, por
consumirem o oxignio existente no local e talvez por produzirem alguns fatores de crescimento como
substncias secundrias do seu metabolismo, a maior parte das infeces por bactrias anaerbias
estritas so infeces mistas. Assim, so freqentes as infeces conjuntas com Enterobactrias,
Pseudomonas e Staphylococcus aureus.
Alguns aspectos clnicos fazem suspeitar uma infeco com envolvimento de bactrias anaerbias,
sendo os principais estes abaixo relacionados:
Secreo ftida
Infeco nas proximidades de superfcie mucosa
Tecido necrtico
Presena de gs em tecidos ou secrees
Tromboflebite sptica
Colorao negra em secreo com sangue
Infeco decorrente de mordida humana ou de animal
Presena de grnulos de enxofre nas secrees
Teraputica prvia com aminoglicosdeos
Gangrena gasosa
Uma leso com aspecto de um micetoma e a observao de grnulos de enxofre no pus obtido so
caracterstica de uma infeco por Actinomyces. A infeco por anaerbios secundria a uma mordida
de animal ou do ser humano explicada pela existncia de um grande nmero destas bactrias na
cavidade oral destes hospedeiros. Associados a estes elementos clnicos, existem alguns outros,
laboratoriais, que sedimentam ainda mais a suspeita de uma infeco por anaerbios estritos:
Ocorrncia de formas pleomrficas na colorao de Gram (como regra geral, os anaerbios so

mais pleomrficos que os aerbios e anaerbios facultativos).
Observao no material, de bacilos gram positivos esporulados que fazem pensar em Clostridium.
Presena de bactrias no Gram direto, que no crescem nos meios mantidos em atmosferas de
aerobiose.
Crescimento de bactrias somente na parte inferior de tubos com meios de cultura lquido ou
semi-slido.
FATORES PREDISPONENTES
Uma variedade de condies predispe um indivduo a desenvolver infeco por anaerbios. Podemos
generalizar dizendo que todos os fatores que fazem diminuir a quantidade de oxignio nos tecidos, e,
portanto, o potencial de oxi-reduo dos mesmos, favorecem a infeco por anaerbios estritos. Entre
estes fatores podemos assinalar como mais frequentes os seguintes:
Diminuio do fluxo sangneo.
Presena de reas necrticas.
Corpos estranhos.
Acmulo de sais endgenos (por exemplo, pontos de calcificao).
Infeco por bactrias aerbias ou anaerbias facultativas.
Manipulaes cirrgicas.
Esterilizao intestinal pr-operatria.
Tumores, processos orgnicos ou caseosos.
Um baixo potencial de oxi-reduo facilita o crescimento de bactrias anaerbias e a causa clnica

mais comum de diminuio do potencial redox a anxia dos tecidos resultante de leso vascular,
compresso, hipotermia, choque, edema e outras condies levando m perfuso.
Quanto s doenas sistmicas ou condies gerais como corticoterapia, teraputica de tumores,
leucopenia, hipergamaglobulinemia, colagenoses, diabetes, esplenectomias, embora relacionadas
Mod V - 72
como predisponentes, no h evidncia concreta de que realmente estejam associadas maior

incidncia de infeco por anaerbios.
COLETA DE MATERIAL
As amostras devem ser colhidas de forma que no entrem em contato com oxignio e no se
contaminem com bactrias anaerbias da flora normal. Por este motivo devem ser aspiradas com
seringa, da qual eliminado o ar imediatamente aps a obteno da amostra.
O material no pode ser colhido com zaragatoa (swab). Para evitar a contaminao pelos anaerbios
da flora normal, no devem ser semeados escarro, secreo farngea ou nasal, secrees vaginais,
fezes ou material de colostomia, pois estes materiais sempre tm bactrias anaerbias. Idealmente,
as bactrias anaerbias estritas so pesquisadas em lquidos aspirados de cavidades fechadas,
material obtido por aspirao profunda de feridas, puno de traquia ou pulmonar e sangue para
hemocultura.
Em resumo, serve qualquer material que no esteja normalmente contaminado com as bactrias
anaerbias da flora normal.
TRANSPORTE DO MATERIAL
O transporte pode ser feito com a mesma seringa com que foi colhido o material. Obviamente que
este transporte deve ser o mais rpido possvel. O melhor que a mesmo profissional que colheu leve
imediatamente a seringa ao laboratrio.
Tambm pode ser empregado, com este fim, um vidro do tipo de penicilina, que contm meio de
tioglicolato de sdio ( 7 ml). O tioglicolato um sal redutor, de forma que no interior do meio
existem condies de anaerobiose. A este meio lquido pode acrescentar uma pequena quantidade de
gar (0,5%) para transform-lo em um meio mais espesso, o que dificulta a difuso de oxignio. O
meio tem um indicador de oxigenao que a rezarsurina, de modo que se por algum motivo existe
oxigenao do mesmo, o indicador adquire cor rosa.
O material aspirado inoculado no interior do meio de cultura, atravs da tampa de borracha.
Especial cuidado deve ter-se para no agitar o meio, antes e depois da inoculao, para evitar sua
oxigenao.
As amostras colhidas neste meio podem ser encaminhadas ao laboratrio vrias horas aps sua
inoculao (at 24 horas).
PROCESSAMENTO DO MATERIAL
Sempre feita uma colorao de Gram e de esporos, quando necessrio, da amostra recebida, o que
pode orientar o clnico para o diagnstico e a teraputica precoce. Por exemplo, a observao num
processo com aspecto de gangrena gasosa de bacilos gram positivos, grandes esporulados, quase
confirmao do diagnstico de Clostridium e de gangrena gasosa.
A existncia de poucas ou muitas bactrias na amostra permite orientar o bacteriologista se ele deve
enriquecer previamente a amostra em um caldo ou fazer diretamente a semeadura em placa. Quando
o material vem numa seringa, a semeadura feita em tioglicolato e em placa. Quando o material j
vem no meio de tioglicolato, feita, a partir deste, a semeadura em placa, e incubados ambos os
meios.
PRODUO DE ANAEROBIOSE
Existem vrios procedimentos para conseguir no laboratrio uma atmosfera de anaerobiose adequada
multiplicao das bactrias anaerbias produtoras de patologia no ser humano. Por exemplo:
Uso de tubos com meios slidos pr-reduzidos.
Mod V - 73
Cmaras anaerbias (glove box), nas quais o manipulador introduz somente as mos, sendo o ar
eliminado, colocando-se uma mistura de gazes (H2, CO2, N2); nestas cmaras existem todos os
elementos necessrios para o trabalho bacteriolgico, incluindo estufas de incubao.
Sistema mais empregado o sistema das jarras de anaerobiose com geradores qumicos que
permitem obter uma atmosfera adequada para a multiplicao destas bactrias. Existem diversos
tipos de geradores. Os mais utilizados so os que provocam um consumo do oxignio com
substncias redutoras como ferro reduzido ou cido ascrbico.
Dentro da jarra colocado, alm dos geradores qumicos, uma fita de papel filtro
impregnada de azul de metileno, que um indicador de anaerobiose. Quando a atmosfera
do interior da jarra tem condies adequadas de anaerobiose, o azul de metileno altera
para uma cor branca.
Numa jarra de tamanho mdio 2,5 litros, coloca-se aproximadamente 10 placas e muitos
tubos. Com estes sistemas o contedo de O2 da jarra cai a 0.4%, em aproximadamente 1
hora e meia, de forma que as condies anaerbias esto presentes bem antes da
transformao do azul de metileno, que acontece por volta de 4-6 horas.
Observar uma jarra com placas semeadas, um gerador de anaerobiose sobre a ltima
placa, e o indicador de anaerobiose reduzido de cor branca. Comparar esta cor com a cor
azul do indicador nos geradores localizados fora da jarra em sua parte inferior.
Os mtodos citados acima do resultados semelhantes quanto eficcia do isolamento de bactrias

anaerbias em amostras clnicas, porm, o sistema das jarras o mais prtico e menos complicado.
SEMEADURA EM PLACA
As amostras so semeadas em trs placas de gar sangue preparadas com gar Brucella, adicionadas
com 10% de sangue de carneiro. Uma das placas incubada a 37C em atmosfera aerbia, e uma
segunda incubada a 37C em uma atmosfera com 5% de CO2 para bactrias microaerfilas. Para
este fim colocamos a placa em uma jarra com um gerador de CO2, produzindo aproximadamente 5%
de CO2. A terceira placa a que se inocula em atmosfera de anaerobiose. O meio de cultura desta
terceira placa enriquecido com hemina (5mg/ml), vitamina K (10 mg/ml) e extrato de levedura
(0,5%). Neste meio acrescenta-se tambm um antibitico aminoglicosdeo (geralmente amicacina,
100 mcg/ml).
A adio do antibitico cria um meio seletivo porque os anaerbios estritos so resistentes a estes
antimicrobianos e a maior parte das cepas de aerbios e anaerbios facultativos sensvel. Como a
maior parte das infeces provocadas pelos anaerbios estritos so infeces mistas, este meio
seletivo ajuda o isolamento bacteriano. No se justifica o uso de mais uma placa sem antibitico
porque aumentam os custos sem aumentar o isolamento de anaerbios.
Estas placas so incubadas dentro da jarra a 37C de temperatura durante 48 horas. Quando se
suspeita, pelo quadro clnico ou pela colorao de Gram da amostra, que estamos em presena de
uma infeco por Clostridium, que so de crescimento mais rpido, as jarras podem ser abertas aps
18 a 24 horas de incubao.
Por outro lado, bactrias de crescimento mais lento, como os actinomices, podem demorar sete dias
ou mais para formar colnias visveis.
IDENTIFICAO BACTERIANA
COMPROVAO DE ANAEROBIOSE ESTRITA
Aps a incubao, as placas so examinadas e agora o passo mais importante a comprovao de

que as bactrias desenvolvidas nas placas de anaerobiose so anaerbios estritos.
Para este fim, so feitas coloraes de Gram, de todos os diferentes tipos de colnias observadas nas
trs placas e comparada a morfologia bacteriana. Ao mesmo tempo, semea-se as diversas bactrias
obtidas, novamente em anaerobiose e aerobiose.
Mod V - 74
S feito o diagnstico de anaerbio estrito quando, aps 24 a 48 horas da nova incubao, a

bactria apenas crescer na placa de anaerobiose. O Gram das colnias j orienta para uma
identificao preliminar do grupo de anaerbio isolado.
Agrupamento das bactrias anaerbias estritas, de importncia em patologia humana de
acordo com sua morfologia na colorao de Gram
Cocos Gram
positivos
Staphylococcus
Peptostreptococcus
Streptococcus
Cocos Gram
negativos
Veillonella
Acidaminococcus
Megasphaera
Bacilos Gram
positivos
no esporulados
Propionibacterium
Bifidobacterium
Actinomyces
Eubacterium
Lactobacillus
Bacilos Gram
positivos
esporulados
Clostridium
Bacilos Gram
negativos
Bacterides
Fusobacterium
Prevotella
Porphyromonas
IDENTIFICAO BACTERIANA PRESUNTIVA

Das colnias de anaerbios estritos, deve ser feita colorao de Gram. J nesta etapa o laboratrio
presta uma grande ajuda ao clnico, informando que o paciente tem uma infeco por uma bactria
anaerbia estrita que pertence a determinado grupo morfolgico.
O diagnstico de gnero e espcie feito utilizando:
Provas bioqumicas: utilizao de acares, produo de indol, reduo de nitratos, urease,

crescimento em presena de bile, liquefao da gelatina, hidrlise de esculina etc.
Produo de pigmentos
Hemlise
Aprofundamento no gar
Susceptibilidade a antimicrobianos
Formao de cidos detectados por cromatografia lquida
Inoculao experimental
Sorologia
As seguintes consideraes prticas so teis para a orientao do clnico para uma conduta
adequada, sem a necessidade de aparelhos ou metodologias caras por parte do laboratrio:
Na presena de cocos Gram positivos, o laboratrio deve fazer o diagnstico presuntivo de

Peptostreptococcus que so os mais freqentemente isolados neste grupo morfolgico.
Diagnstico diferencial com Streptococcus e Staphylococcus anaerbios como das espcies de

Peptostreptococcus deve ser feita com ajuda da cromatografia para detectar a produo de
diferentes cidos graxos.
Na presena de cocos Gram negativos, o laboratrio deve fazer o diagnstico presuntivo de

Veillonella, gnero mais freqente neste grupo. Para o diagnstico diferencial com os outros
gneros de cocos Gram negativos tambm recomendada a cromatografia lquida, para pesquisar
cidos graxos.
Na presena de bacilos Gram positivos esporulados, o laboratrio deve fazer o diagnstico de

Clostridium.
Na dvida no diagnstico de bacilo esporulado, recomenda-se o tratamento com lcool etlico a

95%, durante 1 hora temperatura ambiente e ressemeadura posterior. Alm disso, a suspenso
bacteriana pode ser aquecida a 80C durante 10 minutos, esfriada e feita resemeadura. Aps um
ou outro destes procedimentos, s sobrevivem bactrias esporuladas.
Se o Clostridium produzir um duplo halo de hemlise pode ser feito o diagnstico presuntivo de
Clostridium perfringens. Esta espcie a mais freqentemente isolada dentro deste grupo
bacteriano.
Mod V - 75
Para o diagnstico diferencial das outras espcies de Clostridium devem ser feitas provas
bioqumicas como hidrlise da gelatina, fermentao da glicose, lecitinase, lipase, produo de
indol, uria, nitratos, e motilidade.
Na presena de bacilos Gram positivos no esporulados recomendamos fazer a prova de catalase,

reduo de nitratos, hidrlise de esculina, urease, e produo de pigmento. Para o diagnstico
definitivo, deve ser feita a pesquisa da produo de cidos graxos.
Se a colorao de Gram mostrar bacilos Gram negativos, recomendamos semear a colnia em

gar sangue (Brucella gar), colocando um disco de Rifampicina (15 mcg) e um disco de
Kanamicina (1.000 mcg); a bactria deve tambm ser semeada num meio que contm bile a 20%,
e num meio rico em triptofano para determinar a produo de indol, com as placas incubadas por
48 horas a 37C.
Estas provas junto com a produo de pigmento permitem fazer o diagnstico presuntivo de
Bacteroides, Prevotella, Porphyromonas e Fusobacterium.
Frente aos discos de antibiticos, a bactria considerada sensvel se o halo de inibio de 12

mm ou maior; considerada resistente com halos menores de 12 mm.
Como inculo para a semeadura utiliza-se uma suspenso com turvao semelhante ao nmero 3
de escala de MC Farland ou uma turvao semelhante aps incubao em meio de tioglicolato.
A prova da bile considerada positiva, se existir crescimento bacteriano no quadrante respectivo.

Para a produo de pigmento, recomendamos a observao direta das colnias, e, em caso de no
existir pigmento evidente, iluminar a placa com luz ultravioleta ( 360 nm de comprimento de
onda). Colnias de Prevotella melaninogenicus aparecem de cor tijolo avermelhado.
Para a prova de indol, recomendamos passar uma colnia, a partir do meio com triptofano, com
ajuda
de
uma
ala
de
platina
num
papel
filtro
impregnado
em
1%
de
paradimetilaminocinamaldeido (em cido clordrico 10%). Uma reao positiva produz
imediatamente uma cor azul.
O diagnstico presuntivo feito de acordo seguinte tabela:

Bacilos Gram negativos anaerbios estritos
Bactrias
Rifampicin
a 15 mcg
Kanamicin
a 1.000 mcg
Bile 20%
Indol
Pigmento
Bacteroides grupo fragilis
sensvel
resistente
+/neg
neg
Prevotella sp
sensvel
resistente
neg
+/neg
Porphyromonas sp
sensvel
resistente
neg
Bacterides sp
sensvel
sensvelresistente
neg
neg
neg
F.mortiferum
resistente
sensvel
neg
neg
F.varium
resistente
sensvel
neg
sensvel
sensvel
neg
neg
Fusobacterium spp.
Para Rifampicina e Kanamicina:

Sensvel = halo de inibio com 12 mm ou mais de dimetro
Resistente = ausncia de halo ou menor que 12 mm de dimetro.
A diferenciao dos gneros Prevotella e Porphyromonas realizada atravs da capacidade de

fermentar glicose que positiva para o primeiro gnero e negativa para o segundo.
Alguns sistemas comerciais manuais ou automatizados permitem fazer o diagnstico das

diferentes espcies de anaerbios utilizando numerosas provas bioqumicas.
Algns utilizando a ao de enzimas bacterianas pr-formadas podem fazer este diagnstico aps
4 horas de incubao. Destes os mais freqentemente utilizados so:
API, Vitek e Microscan. Estes sistemas mais caros no so fundamentais para o

diagnstico dos grupos bacterianos e para uma orientao teraputica adequada.
Mod V - 76
Em algumas infeces importante, para o diagnstico, determinar a presena de toxinas como

acontece nas infeces intestinais por Clostridium difficile. Esta determinao feita com provas
sorolgicas disponveis comercialmente.
PROVAS DE SENSIBILIDADE A ANTIMICROBIANOS

O estudo da sensibilidade destas bactrias importante pelo aumento permanente de sua resistncia
frente aos diferentes antimicrobianos. Esta resistncia mais comum nos gneros Bacteroides e
Prevotella, mas pode estar presente tambm nos gneros Clostridium, Porphyromonas e
Fusobacterium.
Mtodo do Disco
O mtodo do disco difuso no adequado para estudar a sensibilidade das bactrias anaerbias
estritas. O NCCLS (National Committee for Clinical Laboratories Standards) dos EUA recomenda um
mtodo de diluio em gar: as concentraes de antimicrobianos so incorporadas no meio de
Wilkins-Chalgren. Cada placa tem uma concentrao de um antimicrobiano. As bactrias so
semeadas utilizando o inoculador mltiplo de Steers e as placas colocadas em jarras com gerador de
anaerobiose. A leitura feita aps 48 horas de incubao na estufa, determinando-se a CIM
(concentrao inibitria mnima).
Mtodo da Fita
Um mtodo alternativo mais prtico a determinao da sensibilidade utilizando fitas de plstico
impregnadas com um gradiente de concentrao de antimicrobianos como no mtodo do E test. As
bactrias so semeadas em forma similar empregada no mtodo do disco para aerbios. So
colocados duas fitas cada uma com um antibitico diferente em cada placa de 9 cm de dimetro. Em
geral necessrio testar 6 antibiticos (3 placas). Os antimicrobianos com maior atividade in vitro e in
vivo frente aos anaerbios estritos so: cloranfenicol, clindamicina, cefoxitina, metronidazol, penicilina
e amoxicilinanegcido clavulnico. As placas so incubadas dentro de jarra com gerador a 37 graus de
temperatura. A leitura feita aps 48 horas de incubao, e a sensibilidade interpretada nos dois
mtodos seguindo as tabelas publicadas pelo NCCLS.
Salientamos que existe uma boa correlao nos resultados obtidos com as duas metodologias
descritas.
Mod V - 77
9. INTERPRETAO DE RESULTADOS E LAUDOS

INTRODUO
O microbiologista ao elaborar
possibilidade do clnico no
determinado nome de bactria,
associadas disponibilidade do
de antimicrobianos.
os relatrios de exames microbiolgicos deve ter em mente a

saber interpret-lo adequadamente, tanto por desconhecer um
como seu potencial patognico e porque muitas vezes estas dvidas
antibiograma possam ser um fator determinante do uso inadequado
Cabe ao microbiologista elaborar um laudo claro e objetivo, facilitando a comunicao:
Diretamente (telefone ou pessoalmente), indo ao encontro do clnico ou encorajando-o a procurar

o laboratrio para discutir casos ou participar de reunies, visitas de enfermaria, etc.
Elaborando manuais de coleta, informes sobre perfil de bactrias mais isoladas e padres de
sensibilidade (por exemplo em hemoculturas, em urina, ferida cirrgica por especialidade, etc.).
Esclarecendo novos padres de relatrios, novos agentes, seu potencial patognico, mudanas de
padres (p. Ex. de antibiograma), disponibilidade de recursos diagnstico e orientao teraputica
(ex. E-test, testes rpidos com ltex para pesquisa de antgenos, etc.).
Microbiologista deve ter em mente os principais agentes etiolgicos correspondentes a cada material
enviado, bem como da respectiva flora normal, para adequada interpretao do resultado.
Cabe ao microbiologista como membro nato da Comisso de controle de infeco hospitalar:
Tomar iniciativa de procurar o mdico ou o paciente para esclarecer dvidas sobre exames e
materiais.
Estimular e envolver a enfermeira e o infectologista da CCIH ou clnico para a comunicao rpida

dos resultados de bactrias resistentes, dos exames relacionados com diagnstico de infeco
hospitalar, dos exames de urgncia como de LCR, hemocultura, etc., do diagnstico de doenas de
notificao compulsria ou que exijam isolamento, etc.
Em resumo, mais do que um retrato do crescimento nas placas de Petri, o laudo microbiolgico deve
ser o resultado de uma leitura interpretativa e crtica utilizado como um instrumento de comunicao
e interao entre o laboratrio de microbiologia e o mdico.
ANLISE MICROBIOLGICA
O microbiologista na sua rotina diria para decidir a importncia das bactrias ou fungos isolados deve
considerar o potencial patognico do agente, a bacterioscopia e o pedido mdico.
Bactrias como S. pyogenes, Neisseria gonorrhoeae e Mycobacterium tuberculosis, independente do
material que foram isoladas so de importncia clinica e epidemiolgica. Bactrias como Neisseria
meningitidis e Haemophilus influenzae, se forem isolado no LCR ou sangue so de importncia
indiscutvel, mas quando isolados em mucosas costumam representar flora e seu relato discutvel.
ALGUMAS SUGESTES IMPORTANTES

Como norma, no se deve identificar e fazer antibiograma de bactrias da microbiota de pele e
mucosas. No entanto, sempre conveniente entender as sugestes que se seguem como sujeitas a
revises conceituais e atualizaes:
Conversar com o mdico do paciente ou com o mdico da CCIH ou mesmo com o paciente se
indicado.
Quando no for possvel a comunicao, relatar os achados da bacterioscopia, se realizada, com

identificao sumria (bacilos ou coco-bacilos no fermentadores), ou ao nvel de gnero
(enterobactrias e alguns Gram positivos), se o estafilococo aureus ou coagulase negativo, etc.
Conservar a bactria por um prazo de 7 a 10 dias deixando a possibilidade de prosseguir nos

testes caso necessrio.
Mod V - 78
Estudos quantitativos so sempre que possvel mais teis que exames qualitativos, usando ou
diluio do material ou semeando com ala calibrada
Relatrio quantitativo de bacterioscopia: nmero mdio de bactrias anotadas no mnimo em 10

campos observados.
Relatrio qualitativo de bacterioscopia

quantificando a presena de:
do
esfregao
corado
pelo
Gram,
descrevendo
grupos morfolgicos de bactrias (cocos/bacilos/ Gram positivos ou negativos) e predomnio;

quando o microbiologista for experiente recomenda-se adicionar o comentrio sugestivo de
pneumococo ou haemophilus, etc.
bactrias intracelulares (neutrfilos ou fagcitos)

fungos leveduriformes em brotamento e hifas, etc.
Finalmente a discusso sobre os materiais provenientes de tecido cutneo-mucosos, o que

devemos relatar com antibiograma e o que entender como flora so muito relativos, no havendo
unnimidade para padres definitivos de relatrios.
sempre conveniente entender que as sugestes que se seguem esto sujeitas a revises
conceituais, atualizaes e pequenas adaptaes locais.
Como microbiologia uma soma de evidncias (microbiolgicas, clnicas, epidemiolgicas), torna-se
impossvel esgotar todas as possibilidades. O que pode e deve ser feito buscar traar linhas mestras
para a orientao do raciocnio, deixando que cada caso seja analisado como um exerccio constante
do bom senso e cientificamente embasado.
Relatrio quantitativo de exame microscpico pela colorao de Gram
Descritivo
Classificao
nmerica
Nr. mdio de bactrias, clulas epiteliais,

leveduras, neutrfilos /campo 1.000x
Ausente
Raros
1-5
Frequentes
++
6-15
Numerosos
+++
16-30
Incontveis
++++
>30
LAUDO PARA O TRATO RESPIRATRIO SUPERIOR
OROFARINGE
importante relatar os achados de bacterioscopia do esfregao corado pelo Gram, descrevendo e
quantificando a presena de:
Clulas epiteliais
Polimorfonucleares (neutrfilos) e/ou mononucleares (linfcitos)
Principais grupos morfolgicos de bactrias
Presena de bactrias intracelulares (neutrfilos ou fagcitos)
Presena de fungos leveduriformes / hifas
Associao fuso-espirilar, quando presente
Patgenos a serem relatados em isolados de cultura:
Streptococcus pyogenes (beta hemoltico do grupo A)

Arcanobacterium haemolyticum
Corynebacterium diphtheriae
Mod V - 79
No caso da Corynebacterium diphtheriae quando solicitado, realizar ou encaminhar para Laboratrio

de Referncia:
Resultado sem patgenos: Presena de bactrias da microbiota da orofaringe
No caso de paciente imunossuprimido, quando solicitado, cultura de vigilncia e se houver
predominncia de bactria ou fungo, relatar predomnio de: P. aerginosa, Candida spp., S. aureus,
Enterococcus spp., etc.; nestes casos o antibiograma ser feito apenas quando solicitado pela
CCIH.
Obs: Embora seja um tema polmico na literatura e na prtica microbiolgica, relatar o isolamento de
pneumococo, Haemophilus, N. meningitidis, Moraxella catarrhalis em orofaringe, nos casos em que:
a bacterioscopia revelar predomnio de neutrfilos (ressalva em imunossuprimidos), presena do
agente em neutrfilos/macrfagos e crescimento abundante (ntido predomnio) em relao ao
restante da microbiota.
a pedido mdico, colocar a seguinte observao: A(s) bactria(s) isolada(s) fazem parte da
microbita da orofaringe, no sendo recomendvel uso de antimicrobianos. Consultar
infectologista para orientao.
SWAB NASAL
O swab nasal ou de nasofaringe no tem valor diagnstico para sinusite, otite ou infeces do trato
respiratrio inferior, no devendo ser processada para estes fins. Pode ser til apenas para pesquisar
portadores de S. aureus e Streptococcus pyogenes (beta hemolitico do grupo A).
EPIGLOTE/NASOFARINGE
No caso de epiglotite, no material de nasofaringe ou do local, podem ser isolados o Haemophilus
influenzae, o pneumococo e o Streptococcus pyogenes e mais raramente o S. aureus como agente
etiolgico. No caso de coqueluche deve-se pesquisar a Bordetella pertussis.
Relatar o resultado positivo ou negativo para Haemophilus influenzae, pneumococo, Streptococcus
pyogenes, S. aureus e Bordetella pertussis quando pesquisados.
SEIOS DA FACE
Culturas de aspirados intra-operatrios ou obtidas por puno devem ser relatadas:
Bacterioscopia - relato quantitativo de bactrias, fungos, neutrfilos e clulas epiteliais.
Cultura dos agentes isolados e se houver predomnio de algum (so esperados o pneumococo, H.
influenzae, M. catarrhalis, Streptococcus pyogenes e mais raramente o S. aureus).
Caso seja sugestivo de contaminao com secreo de nasofaringe (muitas clulas epiteliais,
poucos neutrfilos) relatar: sugestivo de contaminao com microbiota de nasofaringe.
aconselhavel em sinusite subaguda e crnica a cultura para anaerbios. Quando realizada relatar
o resultado. Quando no realizada, comparar a bacterioscopia com o resultado da cultura e relatar
sobre a possibilidade de participao de bactrias anaerbias (observadas no Gram, mas que no
crescem em aerobiose).
A rino-sinusite infecciosa aguda e no complicada na maioria das vezes de etiologia viral.

Ressaltando-se os seguintes casos:
Em imunossuprimidos e diabticos valorizar o achado de fungos filamentosos do tipo Aspergillus
spp.
Em pacientes com entubao nasotraqueal ou nasogstrica > que 48h, o material pode revelar
presena de enterobactrias, bactrias no fermentadoras, S. aureus, leveduras e polimicrobiana.
Devem ser relatados, mas para serem valorizados deve haver clnica ou evidncia radiolgica e
material representativo.
OUVIDO
Otite externa:
relatar o resultado da bacterioscopia e fazer identificao e antibiograma caso a bacterioscopia de

respaldo (abundantes neutrfilos e predomnio do tipo morfolgico isolado na cultura de potencial
patgeno) ao isolamento de uma enterobactria ou Pseudomonas ou eventualmente fungo.
Mod V - 80
Otite mdia:
Culturas de materiais obtidos por timpanocentese (miringotomia) so ideais, mas raros e devem
ser relatados os achados de bacterioscopia e cultura.
Swabs, ou aspirados de conduto auditivo em membranas previamente rompidas tem pouco ou
nenhum valor diagnstico. Sugerir no coletar este tipo de material.
Quando realizada a cultura, havendo crescimento de bactrias da microbiota (Gram positivos,
Neisserias, enterobactrias, etc.) relatar: presena de bactrias da flora do conduto externo.
No caso da bacterioscopia revelar predomnio de um tipo morfolgico, com abundantes neutrfilos
e predomnio na cultura de um agente, relatar: microscopia do esfregao corado pelo Gram com
relatrio quantitativo dos elementos celulares (clulas, bactrias e neutrfilos) e qualitativa.
Resultado da cultura, quando o agente isolado for Haemophilus, Pneumococo ou M. catarrhalis,
relatar o agente isolado e o antibiograma
Quando o agente for uma enterobacteria ou Pseudomonas relatar que a bactria isolada
sugestiva de contaminao, exceto se for em paciente com entubao nasotraqueal h mais de
48h. A pedido mdico fazer antibiograma.
No caso de mastoidite a indicao obteno cirrgica de fragmentos sseos para cultivo e no
cultura de secreo de ouvido externo/mdio. Poder se relatado o cultivo deste material quando
a bacterioscopia for concordante e a bactria isolada for:
Aguda: Haemophilus, pneumococo, S. pyogenes e S. aureus fazer antibiograma
Crnica: Enterobactrias, Pseudomonas, S. aureus.
Quando isolar Staphylococus coagulase negativa, S. viridans, Corynebactrias, etc, em flora
mista, relatar: presena de bactrias da flora do conduto auditivo externo e no fazer
antibiograma.
LAUDO PARA ESCARRO

O escarro til para diagnstico de tuberculose e para os agentes de algumas micoses pulmonares
(blastomicose sul-americana, histoplasmose, criptococose). Pode ser valorizado o agente isolado
quando houver correspondncia na bacterioscopia e quando houver poucas clulas epiteliais e
numerosos leuccitos.
Quando a bacterioscopia revelar mais de 10 clulas epiteliais por campo de pequeno aumento
(objetiva de 10x), havendo predomnio sobre leuccitos e sem um tipo morfolgico predominante,
relatar: material com sugestiva contaminao de flora de orofaringe. Exame de valor diagnstico
prejudicado. No processar o material e solicitar nova amostra.
Processar o material que revele menos de 10 clulas epiteliais, quando houver predomnio de
leuccitos e predomnio de um tipo morfolgico de bactria. Este critrio mais rigoroso, pois o
anterior, para mais de 25 clulas epiteliais, revelou ser mais fidedigno.
Os agentes bacterianos esperados em pneumonia aguda da comunidade so: S. pneumoniae, M.
catarrhalis, H. influenzae e S. aureus.
LAUDO PARA SECREO ENDOTRAQUEAL, LAVADO TRAQUEAL, E LAVADO BRNQUICO
ROTINA PARA LAVADO BRNQUICO, ESCARRO E SECREO TRAQUEAL
Homogeneizar muito bem a amostra, por pelo menos 1 minuto.
Fluidificar as secrees traqueais muito espessas com 1,0 ml de soluo salina estril ou com Nacetil-cistena.
Pode-se tambm utilizar prolas de vidro estreis na homogeneizao do material.
Confeccionar lmina para colorao de Gram.
Centrifugar 7 ml e corar o sedimento, quando processar lavado brnquico.
Corar o material direto, sem centrifugar, quando processar escarro e secreo traqueal.
Fixar cuidadosamente o esfregao seco sobre a chama.
Mod V - 81
Observar ao Gram (imerso) a presena de bactrias intracelulares que devem ser reportadas
caso ultrapassem 7%.
Verificar a presena de clulas estratificadas epiteliais. Mais de 1 clula para cada 10 leuccitos ou
mais de 10 clulas em campo de pequeno aumento contra indicam a realizao de cultura, e
portanto reportar como Material Inadequado.
Confeccionar tambm lminas para colorao de BAAR e pesquisa de fungos, quando necessrio.
Plaquear volume de 1 l (ala calibrada) em meios de Mac Conkey, MN, gar Sangue e gar
Chocolate (atmosfera CO2).
Incubar todas as placas por 24 horas a 35 + 1 C e realizar a primeira leitura quantitativa.
Reincubar por mais 24 horas nos casos de difcil diferenciao macroscpica entre colnias.
Multiplicar o nmero de cada tipo de colnia identificada pelo fator 103.
Interpretar como significativo as contagens > 105 UFC do lavado brnquico, escarro ou secreo
traqueal.
Realizar antibiograma somente para as colnias com contagens significativas.
Liberar apenas a identificao, sem TSA, para microrganismos em contagens inferiores a 105 UFC.
RELATRIO
Quando usar tcnica qualitativa:
Quando o material for adequado, mas mais de trs bactrias isoladas, sem predomnio, relatar
microbiota mista, presena de (nmero) Gram positivos e (nmero) de Gram negativos. No fazer
antibiograma e guardar a placa por sete dias.
Quando houver predomnio de uma bactria relatar: predomnio do agente e antibiograma.

Presena de outros microrganismos: Gram positivos e/ou Gram negativos, no mximo
identificados a nvel de gnero, sem antibiograma.
Quando usar tcnica quantitativa:
Se houver contagem significativa, com predomnio de um microrganismo e eventualmente 2,

relatar o(s) agente(s) isolado(s) e fazer antibiograma.
Se a contagem no for significativa ou vrias bactrias da microbiota do trato respiratrio superior

foram isoladas relatar: presena de bactrias da flora do trato respiratrio superior sem valor
diagnstico. No identificar nem fazer antibiograma.
LAUDO PARA LAVADO BROCOALVEOLAR OU ESCOVADO BRNQUICO

So considerados junto com a bipsia pulmonar os materiais de melhor valor preditivo de isolamento
do agente patognico. imprescindvel a semeadura quantitativa para posterior contagem do nmero
de colnias.
ROTINA DE SEMEADURA E INTERPRETAO PARA ESCOVADO PROTEGIDO E BAL
Passar assepticamente a escova para um tubo contendo 1,0ml de soluo salina estril.
Homogeneizar muito bem em vrtex por pelo menos 1 minuto.
Confeccionar lmina para Gram com pipetor de 10 l ou ala calibrada de mesmo volume.
Deixar a lmina secar por 30 minutos dentro da estufa.
Completar a fixao do esfregao cuidadosamente sobre a chama.
Confeccionar tambm lminas para colorao de BAAR e pesquisa de fungos, quando necessrio.
Plaquear 10 l (ala calibrada ou pipetor) em Mac Conkey, MN, gar Sangue e gar Chocolate
(CO2).
Plaquear 1 l (ala calibrada) em Mac Conkey, MN, gar Sangue e gar Chocolate (CO2)
Incubar todas as placas por 24 horas a 35 + 1 C e realizar a primeira leitura quantitativa.

Mod V - 82
Reincubar por mais 24 horas nos casos de difcil diferenciao macroscpica entre colnias.
Multiplicar a contagem dos tipos de colnias identificadas pelo fator, de acordo com o volume
plaqueado.
Multiplicar pelo fator 102 quando o volume plaqueado foi 10 l.
Multiplicar pelo fator 103 quando o volume plaqueado foi 1l.
Quando for conhecido o valor de soluo fisiolgica utilizado na tcnica do BAL, deve-se consideralo como mais um fator de correo. Por exemplo: se forem utilizados 10, 20 ou 100 ml; multiplicar
por 10, 20 ou 100, respectivamente.
Interpretar como significativo para o diagnstico de pneumonia contagens:

103 UFC para Escovado Brnquico Protegido
104 UFC para BAL
Realizar antibiograma somente para as colnias com contagens significativas.
Liberar apenas a identificao, sem TSA, para os microrganismos em contagens inferiores

significativa.
Exemplo de clculo:
Cultura quantitativa de BAL, colhido com 10 ml de soluo fisiolgica estril, apresentou crescimento
de 80 colonias de Pseudomonas aeruginosa com a ala de 10 L e 8 com a ala de 1 L, alm de 5
colonias de Streptococcus viridans apenas na semeadura com 10 L.
Clculo:
Pseudomonas aeruginosa
10 (sol. Fisiolgica) x 80 (no de colnias) x 100 (ala de 10L) = 80.000 (ou 8.104 UFC/ml)
10 (sol. Fisiolgica) x 8 (no de col.) x 1000 (ala de 1L)= 80.000 (ou 8.104 UFC/ml)
Streptococcus viridans
10 (sol. Fisiolgica) x 5 (no de col.) x 100 (ala de 10 L) = 5.000 (ou 5.103 UFC/ml)
Relatar:
Pseudomonas aeruginosa - 8.104 UFC/ml / com antibiograma
Streptococcus viridans - 5.103 UFC/ml / sem antibiograma
RELATRIO DA BACTERIOSCOPIA
Descrever os achados da bacterioscopia do centrifugado, lembrando que ser melhor quando feita em
citocentrfuga.
Relatar:
Relao clulas epiteliais/neutrfilos.

Descrever presena de bactrias e, particularmente, se houver presena de microrganismos
fagocitados, quanto ao seu padro morfo-tintorial (forma e reao ao gram) e se h predomnio de
algum tipo.
RELATRIO DA CULTURA
Culturas quantitativas de amostras do trato respiratrio inferior, relatar:
Contagem final do(s) microrganismo(s) isolado(s)
Quando isolar um ou at dois microrganismos em contagens significativas (vide parmetros), fazer

antibiograma
Comentar: contagem bacteriana significativa bom valor preditivo de infeco se a clnica for
concordante.
Mod V - 83
Quando as contagens no forem significativas ou mais de dois microrganismos isolados e

bacterioscopia com predomnio de clulas epiteliais sobre os leuccitos, relatar: Presena de bactrias
do trato respiratrio superior - sem valor diagnstico.
Contagens bacterianas consideradas significativas
Escarro, aspirado endotraqueal, lavado brnquico
105 106 Ufc/ml
Escovado brnquico protegido
103 Ufc/ml
Lavado broncoalveolar (BAL)
104 Ufc/ml
CANDIDA EM SECREES RESPIRATRIAS

A Pneumonia causada por Candida spp. considerada uma raridade e o diagnstico s pode ser
definido por bipsia pulmonar que revele invaso tecidual e no por cultura. muito freqente a
presena qualitativa de Candida spp. em todos os materiais obtidos de pacientes com cnula orotraqueal ou traqueostomia.
O relato de isolamento de Candida costuma induzir a teraputica desnecessria, com custo elevado,
com efeitos colaterais e seleo de cepas resistentes. Mesmo contagens significativas de leveduras
devem ser consideradas com cautela, pois pode apenas representar colonizao. Exceo deve ser
feita aos recm-natos pr-termo e de baixo peso. Nestes, a mortalidade por candida apresenta nveis
bastante elevados e a possibilidade de infeco invasiva deve ser considerada. Outros fungos como
Histoplasma, Cryptococcus spp. e mesmo Aspergillus spp. (particularmente em imunossuprimidos)
devem ser identificados e relatados.
LAUDO PARA PLEURAL
Todo o cuidado deve ser tomado para evitar contaminao deste material. A bacterioscopia do
sedimento centrifugado muito til para avaliar a presena de bactrias, micobactria e
eventualmente fungos, bem como as caractersticas da celularidade.
Alguns patgenos encontram-se em pequena concentrao (Haemophilus, pneumococo, Streptococcus
pyogenes, S. aureus) ou mais raramente podem ser Anaerbios , fastidiosos ou fungos. Relatar o
isolamento de bactrias potencialmente patognicas (acima relacionadas). No caso de Staphylococcus
coagulase negativo, Corynebacterium spp., Streptococcus viridans e outras bactrias da flora cutneomucosa, conveniente comparar com os achados da bacterioscopia e na dvida contatar o clnico e
solicitar nova coleta com anti-sepsia rigorosa.
LAUDO PARA ABSCESSO PULMONAR
Os mesmos potenciais patgenos do derrame pleural podem estar presentes, incluindo os anaerbios
e fungos e somados s Nocardias, Micobactrias, Bacillus anthracis, etc.
O exame microscpico da amostra do material deve ser processado pela microbiologia e pelas tcnicas
histolgicas. As coloraes de Gram e Ziehl, exame direto com azul de algodo e se possvel o Giemsa
sero muito teis na busca do agente etiolgico e na sugesto de meios de cultura para semeadura,
para orientar tempo de incubao, etc. Relatar o isolado se potencialmente patognico.
Cautela na liberao de resultados de cultura se exames microscpicos forem negativos e a cultura
revelar bactrias potenciais contaminantes de pele. Outras causas de abscesso devem ser
consideradas (neoplasia, infarto, etc.).
LAUDO PARA OCULAR
Os potenciais patgenos devem ser distinguidos dos potenciais contaminantes de mucosas, sendo
o recurso mais simples a bacterioscopia do material, quando necessrio concentrado fazendo-se
Mod V - 84
uma suspenso do swab em salina e centrifugado em cito-centrfuga. No entanto comum a

bacterioscopia ser inconclusiva, tanto pela dificuldade de caracterizar a bactria como pelas outras
etiologias (viral, Chlamydia trachomatis, alrgica, qumica, uso prvio de colrios com antibiticos,
etc.).
Infeces de glndula lacrimal, ordolo e blefarite podem involver amostras de S. aureus.

Conjuntivite bacteriana pode ser atribuda N. gonorrhoeae em recm-nascidos. A presena de S.
pneumoniae, H. influenzae, S. aureus so outras possibilidades etiolgicas.
Isolamento de bactrias como S. aureus ou os outros agentes relacionados, concordantes ou no

com a bacterioscopia, desde que no descrito como rarssimas colnias, deve ser relatado e
realizado o antibiograma.
lcera de crnea pode envolver P. aeruginosa e outros oportunistas inclusive protozorios

(Acanthamoeba). Cautela no caso de isolamento de Neisserias saprofitas, Staphylococcus
coagulase negativa, Streptococcus viridans, Corynebacterium spp. e outros potenciais habitantes
de mucosas. Comparar sempre o resultado da bacterioscopia, com a quantidade de bactrias
isoladas, se houve crescimento puro ou quase puro.
Relatar: cultura positiva para bactria da microbiota de mucosas sem valor diagnstico. Sugerir
nova coleta.
Endoftalmite envolve bactrias potencialmente patognicas como S. aureus, P. aeruginosa,

pneumococo, Haemophilus spp., N. meningitidis, e outros agentes relacionados a fatores
predisponentes como imunossupresso, diabetes, trauma, cirurgia, endocardite, bacteremia, etc.
O material dever ser obtido por puno e evitar contaminao. Eventualmente anaerbios e
fungos podem estar presentes. O exame microscpico poder ajudar a evidenciar o agente e
orientar o meio de cultura mais adequado ou apenas o resultado da cultura poder revelar o
agente, que poder ser um dos listados acima.
No caso de potenciais contaminantes que crescem em pequena quantidade, sem respaldo da

bacterioscopia, identificar o agente e relatar: bacteria da flora de mucosas, papel patognico
duvidoso. Guardar a bactria por sete dias para eventual teste de sensibilidade.
LAUDO PARA LQUIDO CFALO RAQUIDIANO (LCR)
Os agentes clssicos das meningites devem ser relatados bem o antibiograma.
A bacterioscopia pode ser relatada sem resultado positivo de cultura quando o microbiologista
sentir confiana no diagnstico.
No caso de isolamento na cultura de potenciais contaminantes de pele, em caso de meningite

bacteriana sem fator predisponente (imunossupresso, cirurgia, etc) e bacterioscopia discordante
ou negativa, relatar: O agente isolado com o comentrio: potencial contaminante de coleta. O
antibiograma ser realizado apenas a pedido mdico.
No cultivar LCR em caldo de cultura, pois aumenta muito a chance de isolamento de

contaminantes.
LCR obtido pelo shunt: a maioria das infeces em pacientes com shunts, ou derivaes so
bactrias da flora cutnea como Staphylococcus coagulase negativa, Streptococcus viridans,
Corynebacterium spp. , Neisserias saprofitas e Acinetobacter spp. Neste caso devem ser
considerados e relatados. Eventualmente Propionibacterium spp. podem estar envolvidos. Na
dvida solicitar novo material para confirmao. Bactria que cresce no caldo e no cresce no
gar, se no for fastidioso ou anaerbio em geral contaminante.
LAUDO PARA FEZES
Os potenciais agentes de diarria so muitos.
laboratrio deve listar apenas os agentes pesquisados na sua rotina ou quando especificado pelo
clnico relatar o resultado sobre os agentes solicitados.
Relatar: Cultura negativa para os seguintes enteropatgenos pesquisados: E. coli clssica, E. coli
invasora, E. coli O 147 EHEC, Shigella spp., Salmonella spp., Yersinia enterocolitica, Aeromonas
spp. (opcional), Plesiomonas shigelloides (opcional).
Mod V - 85
Relatar pesquisa de leuccitos quando realizada pois d suporte a infeces por Salmonella,
Shigella e Campylobacter.
No caso de realizar cultura para Campylobacter de rotina, inclu-lo no relatrio. Lembrar que
diarria/enterocolite em pacientes com mais de 3 dias de hospitalizao e fazendo uso de
antimicrobianos pode ser Clostridium difficile, devendo pesquisar a toxina com kits especficos.
Diarria com mais de 7 dias de durao em imunocomprometidos pode ser por parasitas (Giardia,
Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora belli e em paciente com HIV, complexo do Mycobacterium
avium.
LAUDO PARA PELE, ABSCESSOS E FERIDAS
Abscesso tecido subcutneo

Abscesso cerebral
Abscesso intranegabdominal
Embora sejam os trs materiais abscesso, o microbiologista deve ter em mente expectativa de
isolamento de diferentes agentes.
Os abscessos fechado e puncionados com tcnica assptica so considerados materiais de bom

valor preditivo diagnstico quando revelam bactrias ou fungos.
Deve-se, portanto, orientar o mdico para obter material nas melhores condies de assepsia
possvel.
Encaminhar rapidamente o material para o laboratrio.
Para abscessos considerar a possvel participao de anaerbios estritos ou microaerfilos. Quando

disponvel fornecer meio de transporte adequado ou orientar para enviar o material na seringa
sem agulha.
Fazer lmina para bacterioscopia, e, se indicado, exame direto com KOH 10% para pesquisa de
fungos, asssim como pesquisa de BAAR para micobactrias.
Nos abscessos de tecido subcutneo e cerebral a bacterioscopia pode dar orientao til para
escolha dos meios de semeadura ou ajudar no resultado. S. aureus a causa mais importante em
abcesso subcutneo, mas em caso de associao com mordida, os fastidiosos devem ser
lembrados.
No caso de abscesso cerebral, o diagnstico correto e rpido de extrema valia. O exame

microscpico pode ser muito til se revelar algum agente. Pode haver participao dos mais
variados agentes como bactrias comuns, fastidiosos, fungos, nocardia, micobactrias, etc. Devese procurar semear no maior nmero de meios diferentes, inclusive em caldo tioglicolato.
No caso de abscesso abdominal a associao de enterobactrias com anaerbios esperada.

Dependendo da histria clnica lembrar de Salmonella e Yersinia.
No caso de abscesso de tecido subcutneo o resultado ideal quando concordante com a

bacterioscopia e revelando agente potencialmente patognico. O S. aureus e Streptococcus beta
hemolticos causam mais celulite, mas podem ser isolados em abscessos, sendo as enterobactrias
raras.
No caso da cultura revelar bactrias da microbiota, mas concordante com a bacterioscopia (S.
viridans, Staphylococcus coagulase negativo, Coryneformes, etc,); liberar o resultado com o
antibiograma.
No caso de bacterioscopia negativa ou discordante e, principalmente em abscesso drenando h

alguns dias, liberar o resultado fazendo restries sobre a possibilidade de contaminao; a
bactria isolada possivelmente representa contaminao pela microbiota da pele, assim, guardar a
bactria por sete dias e no fazer o antibiograma.
No caso de abscesso cerebral se o exame microscpico revelar possvel agente, o clnico deve ser
imediatamente comunicado e informado do andamento dos exames de cultura.
Tanto bactrias potencialmente patognicas como possveis contaminantes de pele ou mucosas

podem ser isoladas, mas o clnico deve estar informado e o teste de sensibilidade poder ser feito
de qualquer destas bactrias.
Mod V - 86
Os abscessos abdominais polimicrobianos da comunidade em geral respondem teraputica

emprica e no exigem a identificao de todas as bactrias anerbias facultativas e anaerbias
estritas. Importante relatar quando isolar enterococcus ou enteropatgenos ou bactrias no
comuns ou nos casos de insucesso teraputico; indica-se identificar os agentes isolados e fazer o
antibiograma.
FERIDA / LESO CUTNEA

Em geral estes materiais so feridas de origem na comunidade. O relatrio de cultura de ferida aberta
ou leso depende muito de saber se a coleta foi adequada removendo secrees superficiais ou no.
Relatar quando isolar S. pyogenes, S. aureus e fastidiosos em condies clnicas concordantes
(mordida, acidente com gua, terra, etc).
Enterobactrias e Pseudomonas podem ser contaminantes ou patognicos. Deve-se relatar o

achado, mas colocar como ressalva a possibilidade de contaminao.
Streptococcus
contaminao
viridans,
Staphylococcus
coagulase
negativo,
Coryneformes,
etc.,
sugerem
D respaldo a possibilidade de isolamento de agente patognico quando so atendidos os seguintes

requisitos:
Coleta bem feita.
Bacterioscopia concordante com a cultura e
Ocorrem muitas colnias de uma mesma bactria, isoladas em cultura pura ou em ntido
predomnio.
FERIDA CIRRGICA
So esperadas bactrias endgenas ou tipicamente de origem hospitalar (Enterobacterias, S. aureus,
Pseudomonas, etc). Para o relatrio de cultura e indicao de antibiograma deve-se contar com coleta
bem feita, e os resultados devem ser comunicados a CCIH.
Neste caso infeces polimicrobianas so comuns, devendo-se considerar os gneros predominantes.
Deve-se guardar as cepas isoladas por perodo maior (mnimo 30 dias) para eventual investigao de
surto e fazer antibiograma com ateno para pesquisa de bactrias multiresistentes.
DRENO / FSTULA
So materiais que no deveriam ser coletados, pois na maioria das vezes representam colonizao
dos drenos. Mesmo fstulas de osteomielite no so adequadas.
Nos casos em que a bactria encontrada j tenha sido isolada de procedimento com menor risco de
contaminao (bipsia, puno, etc.) e persiste, relatar o achado e fazer antibiograma. Para os
demais casos relatar os gneros que predominaram na cultura, sem antibiograma e que representam
possvel contaminao. Guardar as bactrias por sete dias. Considerar que fstulas expontneas
podem revelar presena de micobacteriose, micoses, actinomicose, etc.
BIPSIA
As bipsias devem seguir critrios cirrgicos de antissepsia. Assim representam material de bom valor
preditivo diagnstico. O material dever em condies asspticas ser triturado em gral e semeado
qualitativa e quantitativamente para posterior clculo aproximado do contedo bacteriano por grama
de material. Utilizam-se as seguintes amostras: tecido, material de queimadura, material sseo.
Condies que do segurana para liberao do resultado e antibiograma:
Condies adequadas de coleta, transporte e processamento preliminar.

Bacterioscopia concordante com achados de cultura.
Cultura pura ou predomnio de algum germe em particular.
Contagens >104 UFC/g tecido
Para os demais casos:
Bacterioscopia negativa ou discordante
Mod V - 87
Culturas polimicrobianas
Isolamento de bactrias da flora cutneo-mucosa (Streptococcus viridans, Staphylococcus
coagulase negativo, corineformes, Neisseria spp., etc)
Baixas contagens < 104 UFC/g de tecido; relatar o(s) agente(s) isolado(s), sua contagem sem
antibiograma e guardar a(s) bactria(s) por sete dias.
GNGLIO
O gnglio quando infectado pode revelar agentes importantes de doenas localizadas ou sistmicas,
de origem: bacteriana (incluindo os fastidiosos), raramente anaerbios; e micobacteriose, fungos,
protozorios e vrus.
Cabe ao laboratrio aproveitar ao mximo. Uma parte ser enviada para estudo histolgico e o
restante do material dever ser triturado e realizado exame microscpico (Gram, direto com KOH
10%, Giemsa) e culturas para bactrias (em meios ricos), fungos e micobactrias; caldo BHI com
suplemento (pode ser o balo de hemocultura) e tioglicolato com suplemento.
Procurar identificar o gnero e espcie com segurana e na dvida encaminhar a laboratrio de
referncia. No caso de isolamento de bactrias da flora cutneo-mucosa e sem correlao com a
bacterioscopia relatar o achado sem antibiograma e guardar a bactria por sete dias.
Contactar o clnico e o patologista, e se persistir a suspeita de etiologia bacteriana, quando possvel,
solicitar nova amostra.
LAUDO PARA GENITAL
URETRAL
Os principais agentes etiolgicos das uretrites esto bem estabelecidos:
Neisseria gonorrhoeae
Chlamydia trachomatis
Mycoplasma spp.
Ureaplasma spp.
Herpes simplex (vrus)
Mais raramente:
Trichomonas vaginalis
Haemophilus spp.
outros
Colher sempre lmina para bacterioscopia:
Trichomonas: colher urina e centrifugar para fazer pesquisa no sedimento imediatamente aps a
coleta.
Chlamydia: o diagnstico melhor imunolgico (Imunofluorescncia)
Mycoplasma e Ureaplasma: existem meios especficos e kits muito prticos com cultura semiquantitativa por avaliao visual de mudana de cor.
No resultado da cultura importante comparar com a bacterioscopia e estar alerta para no dar falsos
resultados de N. gonorrhoeae confundindo com Neisserias saprfitas e Acinetobacter.
Quando isolar Staphylococcus coagulase negativo ou outras bactrias da flora genital relatar:
Presena de bactrias da flora genital, no fazer antibiograma. Sugerir, quando no realizado, a
pesquisa de Chlamydia e Micoplasma.
Quando isolar enterobactrias, Enterococcus em cultura pura ou em grande quantidade e for
concordante com a bacterioscopia, relatar o isolamento com antibiograma e concluir: Bacteria
raramente isolada como agente de uretrite; sugerimos investigar outras causas como Chlamydia,
Micoplasmas, Trichomonas etc.
VAGINAL
As principais causas de vaginite so: vaginose, Candida spp. e Trichomonas vaginalis. Em meninas e
pacientes na menopausa ou deficientes hormonais, enterobactrias, S. aureus e mesmo bactrias da
flora podem eventualmente estar relacionadas com a sintomatologia.
A bacterioscopia sempre til para observar:
Mod V - 88
presena de leveduras
presena e quantidade de neutrfilos
presena e predomnio de bactrias
presena de Gardnerella spp. e Mobiluncus spp., e outros anaerbios que caracterizam a vaginose,
associados s clue cells (clulas caractersticas do epitlio vaginal abarrotadas de bactrias).
A bacterioscopia tambm til:
Quando isolar Candida spp. e for caso de doena recidivante interessante (quando disponvel) a
identificao de espcie, podendo ser necessrio tambm o teste de sensibilidade (mais fidedigno
e prtico)
Quando isolar Streptococcus beta hemoltico do grupo A, Streptococcus agalactiae , enterococos,

Listeria spp.
Quando a bacterioscopia for normal, com raros neutrfilos, presena de clulas epitelias e bacilos de
Doderlein, e houver crescimento de raros Gram positivos e/ou raras enterobactria, relatar: Presena
de bactrias da flora vaginal normal
Se isolar numerosas colnias de enterobactrias ou S. aureus e a bacteriocopia sugerir alterao de
flora, relatar: Presena de bactrias da flora vaginal com predomnio de: por exemplo, E. coli,
Enterococcus spp, S. aureus, etc.
ENDOCERVICAL
A cultura de secreo endocervical pode ser til para isolamento de N. gonorrhoeae quando houver
suspeita. Deve-se recomendar a pesquisa de Chlamydia trachomatis nos casos de cervicite.
O isolamento de enterobactrias, enterococcus, etc. pode significar alterao de microbiota por
diferentes causas, mas o achado deve ser relatado, para considerao do mdico. No caso da
bacterioscopia revelar presena de freqentes, numerosos ou incontveis neutrfilos (++ a ++++) e
presena de bactrias com a morfologia e Gram concordantes com as bactrias encontradas na
cultura, relatar: Alterao da flora endocervical/vaginal com a presena das bactrias isoladas com
antibiograma - lembrando que outras causas devem ser investigadas e/ou afastadas antes de iniciar
o tratamento especfico
No caso de material endometrial e amnitico, fazer cultura para anaerbios e bacterioscopia. No caso
de no realizar cultura para anaerbios, relatar a bacterioscopia e o resultado da cultura. Destacar a
possibilidade de anaerbios se visualizar bactrias no Gram sem correspondente crescimento.
ESPERMA E/OU FLUDO PROSTTICO

aconselhavel para elaborar um laudo adequado :
Fazer bacterioscopia do esperma e da secreo prosttica

Verificar contagem de leuccitos
Semear com ala calibrada de 10 L e fazer contagem de colnias
Relatar os achados de bacterioscopia, contagem de leuccitos e bactria isolada em contagens =
103 Ufc/ml. No caso de enterobactrias, enterococos e Pseudomonas fazer antibiograma.
No caso de isolamento de estafilococos, Streptococcus spp., Corynebacterium spp. e outras bactrias

da flora uretral, principalmente em prostatite crnica, sugerir a pesquisa de outros agentes
(Chlamydia, Micoplasma, Trichomonas, virus, etc.), sem liberar antibiograma.
LAUDO PARA URINA
Para a interpretao da urocultura, algumas informaes so consideradas teis:
Se o paciente apresenta sintomas de infeco urinaria, Leucocitria

Gestante, Idade/sexo
Tipo de coleta: jato mdio, coletor, puno de sonda vesical em sistema fechado, puno
supranegpbica, etc.
Uso prvio de antibiticos coleta da presente amostra, etc.
Mod V - 89
URINAS COLETADAS POR JATO MDIO

Quando estas urinas so submetidas a cultura sem informao clnica especfica sugere-se que
contagens de colnias < 105 UFC/ml possam tambm causar infeco, somente se um nico
microrganismo e potencial patgeno for isolado. Provveis contaminantes so: difterides,
Streptococcus viridans, Lactobacilos, estafilococos coagulase negativa e outros que no sejam
classificados como Staphylococcus saprophyticus.
Contagem de colnias 105 UFC/ml:
Um provvel patgeno
Definitivamente identificar ao nvel de espcie e realizar o teste de

sensibilidade (antibiograma).
No caso de paciente assintomtico solicitar nova amostra, pois se trata
de provvel bacteriria assintomtica.
No caso da presena de outras espcies em contagens < 104 UFC/ml,
relatar nmero de microrganismo(s) presente.
Um provvel contaminante
(difterides, S. viridans,
lactobacilos, estafilococos
coagulase negativa e outros que
no sejam Staphylococcus
saprophyticus.)
Realizar uma identificao limitada: por exemplo distinguir entre S.

saprophyticus de outros estafilococos coagulase negativa, ou
Streptococcus agalactiae (grupo B) de Streptococcus viridans . No fazer
antibiograma e sugerir nova coleta.
raro, mas no impossvel, ocorrer infeco urinria por bactrias da
microbiota da uretra ou vagina. Para caracterizar ITU h necessidade de
confirmar o achado com nova urocultura, e que esteja associada a
sintomas. Sintomas e leucocitria podem tornar muito provvel o
diagnstico. Sem sintomas pode ser bacteriria assintomtica ou falha
grosseira na coleta.
Enumerar outras espcies eventualmente presentes em < 104 UFC/ml.
Dois provveis patgenos
Definitivamente identificar ao nvel de espcie.
(com um diagnstico deinfeco

do trato urinrio crnica ou
recorrente)
Realizar o teste de sensibilidade (antibiograma).
Dois provveis patgenos
Identificar ao nvel de espcie.
(com sintomas de ITU)
Realizar o teste de sensibilidade (antibiograma).

Solicitar nova amostra para confirmao.
Mais que dois microrganismos
Reportar: Mltiplos microrganismos presentes; provvel contaminao,

repetir a cultura.

Um provvel
patgeno
Para pacientes sob antibioticoterapia, grvidas, recm-nascidos, com infeco urinria de

repetio, realizar identificao e teste de sensibilidade.
Um potencial patgeno presente em > 102 UFC/ml em mulheres sintomticas e >103
UFC/ml em homens sintomticos, fazer identificao e antibiograma.
Um provvel
contaminante
Leuccitos normais: descritivamente identifique o isolado.
Mais que dois

microrganismos
Relatar: Mltiplos microrganismos presentes; provvel contaminao, repetir a cultura.
Sem informao
clnica
Descreva o microrganismo presente entre 104 e 105 UFC/ml, com base na morfologia.
Leuccitos aumentados: solicite nova amostra.
Entre em contato com o paciente e/ou mdico. Solicite informaes e/ou a coleta de nova
amostra.
Caso o contato no seja possvel, mantenha a cultura a temperatura ambiente por 3 dias
para possvel retomada de identificao, se requerido pelo mdico do paciente.
Mod V - 90
URINAS COLETADAS POR CATETERIZAO

Dois ou mais
provveis
patgenos
Realize a identificao e teste de sensibilidade de ambos os isolados.
Um ou dois
provveis
contaminantes
Reportar o(s) microrganismo(s) presente(s) com descrio do tipo(s) morfolgico(s),

exemplo, difterides, Streptococcus do grupo viridans.
Um provvel
patgeno e um
provvel
contaminante
Identificar o provvel patgeno e fazer antibiograma.
Trs ou mais
microrganismos
Fornecer uma descrio dos tipos morfolgicos.
Descritivamente identifique as espcies presentes em <104 UFC/ml.
Reportar: Mltiplos microrganismos presentes; provvel contaminao, repetir a

cultura.
Fornecer o tipo morfolgico do provvel contaminante.
Reportar: Mltiplos microrganismos presentes; provvel contaminao, repetir a

cultura.
Contagem de colnias <104 UFC/ml:
Para pacientes sob antibioticoterapia, mulheres sintomticas, homens sintomticos, realizar

identificao e teste de sensibilidade.
Para todos os outros pacientes, fornea uma descrio do(s) tipo(s) morfolgico(s) presente(s) e
requeira nova amostra.
Mantenha a cultura a temperatura ambiente por 3 dias para se necessrio retomar o

processamento de identificao se requerido pelo mdico do paciente.
Obs.: Uroculturas com candida provenientes de pacientes sondados so utilizadas como critrio para
a troca da sonda. Sugere-se nova coleta de urocultura aps 24 horas. Caso o isolamento de Candida
seja mantido, deve-se relatar, pois poder haver necessidade de instituir terapia especfica.
URINAS COLETADAS POR PUNO SUPRAPBICA

Um ou dois
patgenos
presentes
Identifique ao nvel de espcie.
Trs ou mais
patgenos
presentes
Identifique.
Sem
crescimento
Realize o teste de sensibilidade do provvel agente patognico.
Mantenha a cultura por trs dias para possvel consulta.

Examine em at 48 horas de incubao.
Reporte Sem crescimento, teste com sensibilidade de > 102 UFC/ml em 48 h - (para
semeadura de 10l).
OBSERVAES
No realizar cultura de ponta de sonda vesical.
Critrio de positividade pode ser aplicado sempre que isolar 105 UFC/ml de um s agente,
devendo a presena de sintomas caracterizar a infeco do trato urinrio e a ausncia como
bacteriria assintomtica.
Realize pesquisa para anaerbios somente em punes supra-pbicas, quando solicitado.
No realize de rotina o teste de sensibilidade diretamente da amostra de urina, embora em

situaes de urgncia da disponibilidade do antibiograma isto possa ser feito.
Em caso de dvida na interpretao da urocultura, se possvel, entre em contato com o paciente

e/ou mdico para maiores informaes, conferindo as condies de coleta. Isto no sendo
possvel, relate o numero de diferentes microrganismos encontrados e sua contagem e solicite
nova amostra.
Mod V - 91
LAUDO PARA SANGUE

Em caso de bacteremia, septicemia, ou febre a esclarecer, deve-se sempre que possvel colher duas
amostras de sangue venoso (perifrico) de locais diferentes. Se o paciente tiver cateter, colher mais
uma amostra obtida do cateter.
Bactrias isoladas no sangue perifrico do tipo S. aureus, Streptococcus pneumoniae, enterobactrias,
P. aeruginosa e Candida albicans, tem elevado valor preditivo de infeco.
Enterococos tem significncia clnica em 80% dos casos
Streptococcus viridans entre 40 a 60%:
Staphylococcus coagulase negativa entre 20 a 40%:
1 cultura positiva em duas obtidas muito provvel uma contaminao

2 ou mais culturas positivas muito provvel a infeco
1 colhida e positiva. Colher nova amostra
2 amostras colhidas e positivas verificar se so da mesma espcie ou se tem mesmo
antibiograma. Se diferirem na espcie e/ou nitidamente no antibiograma provvel que houve
contaminao de coleta. No liberar antibiograma.
2 amostras colhidas e 1 positiva solicitar nova amostra provvel contaminao. No fazer
antibiograma.
2 amostras colhidas e identificadas como da mesma espcie e com mesmo antibiograma
Liberar resultado da cultura e antibiograma e destacar: Bactria da flora cutnea. Instituir
tratamento especfico se evidncias clnicas de infeco. Se o paciente estiver com cateter,
possvel colonizao.
Outras bactrias isoladas de em uma nica amostra e sugestivas de contaminao: Micrococcus

spp., corineformes, Propionibacterium spp., Bacillus spp.
Hemoculturas positivas e repetidas para bactrias potencialmente contaminantes podem ser

consideradas patognicas quando afastada a contaminao por cateter. Considerar a hiptese de
endocardite. Quando houver suspeita de fastidiosos ou fungos ou micobactrias conservar as
hemoculturas por 30 a 40 dias.
Relao entre idade e volume ideal de sangue a ser coletado
Idade
volume
< 1 ms
1-2 ml
1 ms a 2 anos
2-3 ml
> 2 anos a 10 anos
3-5 ml
Adolescente
10-20 ml
Adulto
40 ml
PONTA DE CATETER
Fazer cultura qualitativa no se justifica para diagnstico de bacteremia. Deve-se relatar o nmero
de colnias isoladas e a(s) bactrias isolada(s) pela tcnica semi-quantitativa de Maki.
Quando maior que 15 colnias, identificar, mas no fazer antibiograma. Se a hemocultura for
positiva fazer antibiograma da hemocultura.
No caso de bacteremia, a remoo do cateter e envio da ponta para cultura se justifica quando a
amostra de hemocultura for colhida no prazo de 24 h.
Considerando que a colonizao de cateter muito comum, se no houver bacteremia no se se

justifica identificar bactrias do cateter e fazer antibiograma, exceto se houver indicao de
monitoramento dos cateteres pela CCIH. Caso a hemocultura seja negativa, no se justifica
trabalhar com bactrias do cateter. As tcnicas de investigao de contaminao da luz do cateter
justificam-se quando se deseja descobrir fonte de bacteremia, fungemia, abscessos em mltiplos
orgos, etc.
Mod V - 92
10. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1.
Barenfanger, J. Improving the clinical utility of microbiology data: an update. Clin

Microbiol Newsl, 25(1): 1-8, 2003.
2.
Baron, E.J. and Finegold, S.M. Bailey & Scotts diagnostic microbiology. 8th Ed., CV Mosby,
St. Louis, 1990.
3.
Laffeneur, K., Janssens, M., Charlier, J., Avesani, V., Wauters, G., and Delme, M. Biochemical
and susceptibility tests useful for identification of nonfermenting Gram-negative rods. J
Clin Microbiol, 40(3):1085-1087, 2002.
4.
Christensen, W.B. Urea decomposition as means of differentiating Proteus and paracolon

cultures from each other and from Salmonella and Shigella types. J Bacteriol, 52:461466, 1946.
5.
Eschenbach, D.A., Pollock, H.M. and Schachter, J. Laboratory diagnosis of female genital
tract infection. CUMITECH. Coord. Ed. S.J. Rubin, ASM, Washington, DC, 1983.
6.
Evangelista, E.T. and Beilstein, H.R. Laboratory diagnosis of gonorrhoea. CUMITECH. Coord.
Ed. C. Abramson. American Society for Microbiology, Washington, DC, 1993.
7.
Balows A., Hausler, W.J. Jr., Herrmann, K.L., Isenberg, H.D. and Shadomy, H.J. Manual of
clinical microbiology. 5th Ed., American Society for Microbiology, Washington, DC, 1991.
8.
Forbes, B.A., Sahm, D.S. and Weissfeld, A.S. Bailey & Scotts diagnostic microbiology. 10th
Ed., CV Mosby, St. Louis, 1998.
9.
Isenberg, H.D. Clinical microbiology procedures. ASM Microbiology, Washington, DC, 1992.
10. Isenberg, H.D. Essential procedures for clinical microbiology, American Society for
Microbiology, Washington, DC, 1998.
11. Koneman, E.W., Allen, D.S., Janda, M.W., Schreckenberger C.P. and Winn Jr., C.W. Color atlas
and textbook of diagnostic microbiology, 5th ed., Lippincot, Philadelphia, 1997.
12. Mayhall, C.G. Hospital epidemiology and infection Control. Williams & Williams, 1996.
13. Mc Faddin, J.F. Biochemical tests for identification of medical bacteria. Ed. William &
Wilkins Co., Baltimore, 1980.
14. Mc Neil, M.M. and Brown, J.M. Actinomycetes: epidemiology and microbiology. Clin
Microbiol Rev, 7(3): 357-417, 1994.
15. Murray, P.R., Baron, J.E., Pfaller, A.M., Tenover, C.F. and Yolken, H.R. Manual of clinical
microbiology. American Society for Microbiology, 7th ed., Washington. DC, 1999.
16. NCCLS. Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria. Approved
standard, v.17, no. 2, National Committee for Clinical Laboratories Standards, Villanova, 1997.
17. Oplustil, C.P., Zoccoli, C.M., Tobouti, N.R., e Sinto, S.I. Procedimentos Bsicos em
Microbiologia Clnica, Sarvier, So Paulo, 2000.
18. Rhoden, R.A. and Hermann, G.J. Isolation and identification of Enterobacteriaceae in the
clinical laboratory. U.S, DHEW, Center for Disease Control, Atlanta, 1974.
19. Sack, R.B., Tilton, R.C. and Weisfeld, A.S. Laboratory diagnosis of bacterial diarrhea.
CUMITECH 12, Coord. Ed. S.J. Rubin, American Society for Microbiology, Washington, DC, 1980.
20. Schreckenberger, P.C. Questioning dogmas: proposed new rules and guidelines for the
clinical microbiology laboratory. American Society for Microbiology News, 67: 388-89, 2001.
21. Schrenkenberger, P.C. Practical approach to the identification of glucose nonfermenting
Gram-negative bacilii: a guide to identification. 2nd. Ed., University of Illinois, College of
Medicine at Chicago, CACMLE, 1996.
22. Thayer, J.D. and Martin Jr., J.E. A seletive medium for the cultivation of Neisseria
gonorrhoeae and Neisseria meningitidis. Public Health Rep, 79:49-57, 1964.
23. Toledo. M.R.F., Fontes, C.F. and Trabulsi, L.R. EPM: modificao do meio de Rugai e Arajo
para a realizao simultnea dos testes de produo de gs a partir da glicose, H2S,
urease e triptofano desaminase. Rev Microbiol, 13(04): 309-315, 1982.
24. Toledo. M.R.F., Fontes, C.F. and Trabulsi, L.R. MILi: um meio para a realizao dos testes de
motilidade, indol e lisina descarboxilase. Rev Microbiol, 13(04):230-235, 1982.
Mod V - 93

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Deteco e Identificao

Estafilococos, estreptococos, enterococos e outros cocos gram positivos ........................................ 1

1. ESTAFILOCOCOS, ESTREPTOCOCOS, ENTEROCOCOS E OUTROS

Diviso dos cocos Gram positivo pela prova da catalase

Gemella spp., Leuconostoc spp.

Cocos Gram positivo, Catalase negativa, Motilidade Negativa

E. casseliflavus e E. gallinarum so positivos

Identificao das espcies de Staphylococcus de maior importncia clnica

Staphylococcus epidermidis - causador de infeces de cateteres e prteses e o mais freqente

Staphylococcus saprophyticus - causador de infeco urinria em mulheres jovens.

Staphylococcus haemolyticus - importante devido resistncia aumentada aos antimicrobianos, e

TESTE DA RESISTNCIA A NOVOBIOCINA

Testes da Trealose, Urease e Novobiocina

IDENTIFICAO DOS STAPHYLOCOCCUS AUREUS

TESTE DA COAGULASE EM LMINA

Colocar 2 gotas de salina em uma lmina;

Emulsionar uma colnia isolada a ser testada;

Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito de plstico ou madeira;

Observar se h aglutinao em 10 segundos;

TESTE DA COAGULASE EM TUBO

Incubar por 4 horas 35C em estufa ou banho maria;

A formao do cogulo observada pela inclinao suave do tubo de ensaio a 90 graus da

Incubar a 35C por 24 horas;

Fever o caldo de cultura com a bactria suspeita por 15 minutos;

OUTRAS PROVAS QUE DIFERENCIAM O STAPHYLOCOCCUS AUREUS

TESTE DO CRESCIMENTO EM GAR MANITOL

IDENTIFICAO DE OUTROS GNEROS

Colocar o disco de bacitracina 0,004 u como indicado;

Incubar por uma noite a 35C sem CO2;

Observar qualquer zona de inibio como resultado de sensibilidade.

O Streptococcus pyogenes (grupo A) assim rapidamente identificado.

TESTE DO SULFAMETOXAZOL TRIMETOPRIM (SXT)

Adicionar na mesma placa de gar sangue o disco de SXT;

Colocar um disco de Bacitracina 0,004 UI direita e um de Sulfametoxazol-trimetoprim

TESTE DE CAMP (NA MESMA PLACA)

Incubar a placa a 35-37C durante um perodo de 18-24 horas.

A positividade da prova, Streptococcus agalactiae (grupo B), evidenciada pelo alargamento da

TESTE DA BILE ESCULINA E DO NACL 6,5%

Semear as provas de Bile Esculina e do caldo de NaCl a 6,5%;

Todos os estreptococos do grupo D de Lancefield apresentam a bile esculina positiva, seja

TESTE DA HIDRLISE DO HIPURATO

IDENTIFICAO DOS ESTREPTOCOCOS NO BETA HEMOLTICOS

IDENTIFICAO DOS ESTREPTOCOCOS ALFA HEMOLTICOS

TESTE DA BILE SOLUBILIDADE

Tomar um caldo turvo aps 3 horas de incubao a 35C;

Inocular gotas de desoxicolato de Sdio a 2% sobre as colnias suspeitas;

Suspeitar da presena de variante nutricional de Streptococcus destes microrganismos quando o

Semear o repique em gar sangue;

Identificao dos enterococos mais importantes clinicamente

CARACTERSTICAS DE ALGUMAS ESPCIES DE IMPORTNCIA CLNICA

sempre considerada patognica, de transmisso sexual ou pelo parto e indicativa de

Utilizar swab com algodo atxico ou swab de Rayon ou Dacron.

Urina pode ser utilizada, aps centrifugao rpida e semeadura do sedimento.

Em leses de pele preferir a bipsia que o swab.

Incubar em jarra com umidade e vela.

Sempre realizar bacterioscopia pelo Gram.

MORAXELLA (BRANHAMELLA) CATARRHALIS

Timpanocentese (miringotomia) quando indicado. Secreo colhida com

Aspirado de seios da face comprometidos, quando indicado.

Escarro, aspirado traqueal, transtraqueal podem ser teis ou BAL, quando

TRANSPORTE E SEMEADURA DO MATERIAL

um pouco mais tolerante a variaes de temperatura, mas recomenda-se para transporte

Tolera temperatura ambiente e cresce bem em gar sangue.