Instituto Nacional de Metrologia,

Normalizao e Qualidade Industrial

ORIENTAES SOBRE VALIDAO DE

MTODOS DE ENSAIOS QUMICOS

DOQ-CGCRE-008
Reviso: 01 MARO/2003

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Documento de carter orientativo
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ORIENTAES SOBRE VALIDAO DE MTODOS DE ENSAIOS QUMICOS

S UMRIO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

Objetivo
Campo de Aplicao
Responsabilidade
Documentos de Referncia
Introduo
Definies
Questes relevantes quanto utilizao de mtodos analticos
Validao de mtodos
Planejamento de validao
Documentao de mtodos validados
Caractersticas de desempenho de mtodos
11.1 Especificidade e seletividade
11.2 Faixa de trabalho e faixa linear de trabalho
11.3 Linearidade
11.4 Sensibilidade
11.5 Limite de deteco
11.6 Limite de quantificao
11.7 Exatido e tendncia (bias)
11.7.1 Materiais de referncia certificados (MRC)
11.7.2 Programas interlaboratorias
11.7.3 Comparao de mtodos
11.8 Preciso
11.8.1 Repetitividade
11.8.2 Reprodutibilidade
11.8.3 Preciso intermediria
11.8.4 Comparao da preciso entre mtodos
11.8.5 Recuperao
11.9 Robustez
11.10 Incerteza de medio
12 Itens revisados
ANEXO - Relao dos participantes da elaborao deste Documento

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1. OBJETIVO
Este documento tem como objetivo auxiliar laboratrios na tarefa de demonstrar que um mtodo
de ensaio qumico, nas condies em que praticado, tem as caractersticas necessrias para a
obteno de resultados com a qualidade exigida.
2. CAMPO DE APLICAO
Este documento aplica-se Dicla.
3. RES PONS ABILID ADE
A responsabilidade pela reviso deste documento da Dicla.
4.

DOCUMENTOS DE REFERNCIA

ABNT ISO/IEC Diretiva Parte 3:1995 Redao e apresentao de Normas Brasileiras

ABNT ISO/IEC Guia 2:1998 Normalizao e atividades relacionadas - Vocabulrio geral
ABNT ISO/IEC Guia 43-1:1999. Ensaio de Proficincia por Comparaes Interlaboratoriais.
Parte 1: Desenvolvimento e Operao de Programas de Ensaios de Proficincia.
AM ERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater, 20th ed. Washington, 1998.
ASTM D 5172:1991(1999) Standard Guide for Documenting the Standard Operating
Procedures used for the Analysis of Water.
ASTM E178:1994 Standard Practice for Dealing With Outlying Observations
ASTM E 1169:1989 Standard Guide for Conducting Ruggedness Tests.
Bruce, P., M inkkinen P., Riekkota M .L. Practical Method Validation: Validation Sufficient for
an Analysis Method. M ikrochim. Acta. 128, 93-106. 1998
CFR Title 40 - Part 136 - Guidelines Establishing Test Procedures for the Analysis of Pollutants
Appendix B Definition and Procedure for the Determination of the Method Detection Limit.
Revision 1.11.
INM ETRO DOQ-DQUAL-006, abril 2001 - Orientaes para Adoo da NBR ISO/IEC 17025
Pelos Laboratrios e Credenciados e Postulantes ao Credenciamento
EAL.- P11. Validation of Test Methods - General principles and concepts. EAL European
cooperation for Accreditation of Laboratories. 1997.
EURACHEM . The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A laboratory Guide to Method
Validation and Related Topics. 1ed. 1998
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EURACHEM . Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. 2 ed., 2000

GARFIELD, F.M . Quality Assurance Principles for Analytical Laboratories. AOAC. Arlington.
1997.
GREEN, J.M . A Practical Guide to Analytical Method Validation. Analytical Chemistry. 1996.
(68) 305A-309A
HUBER, Ludwig, Validation and Qualification in Analytical Laboratories. Interpharm Press.
1999.
INM ETRO/ABNT. Guia para a Expresso da Incerteza de Medio, 1998, 2 Ed. Brasileira do
ISO Guide to the Expression of Uncertainty in Measurements.
ISO 3534-1:1993 - Statistics - Vocabulary and Symbols - Part 1:
statistical terms

Probability and general

ISO 3534-2:1993 - Statistics - Vocabulary and Symbols - Part 2: Statistical quality control
ISO 3534-3:1999 - Statistics - Vocabulary and Symbols - Part 3: Design of experiments
ISO 5725-1:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results Part 1: General principles and definitions
ISO 5725-2:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results Part 2: basic method for the Determination of Repeatability and Reprodutibility of a Standard
Measurement Method.
ISO 5725-3:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results Part 3: Intermediate Measures of Precision of a Standard Measurement Method.
ISO 5725-4:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results Part 4: Basic Methods for the Determination of the Trueness of a Standard Measurement
method.
ISO 5725-6:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results Part 6: Use in Practice of Accuracy Values.
ISO 78-2:1999 Chemistry Layout for standards Part 2: Methods of chemical analysis.
NATA. Technical Note 17. Format and Content of Test Methods and Procedures for Validation
and Verification of Chemical Test Methods. 1997.
NBR ISO/IEC 9000:2000 Sistemas de gesto da qualidade - Fundamentos e vocabulrio.
NBR ISO/IEC 17025:2001 Requisitos Gerais para Competncia de laboratrios de Ensaio e
Calibrao.
RELACRE. Guia Relacre 13. Validao de Mtodos Internos de Ensaio em Anlise Qumica.
Portugal. 2000

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TAYLOR, J.K . Quality Assurance of Chemical Measurements. Lewis Publishers, 1987

VIM - Vocabulrio Internacional de Termos Fundamentais e Gerais de Metrologia, 1995.

5. INTRODUO
fundamental que os laboratrios disponham de meios e critrios objetivos para
demonstrar, atravs da validao, que os mtodos de ensaio que executam conduzem a resultados
confiveis e adequados qualidade pretendida. Se um mtodo existente for modificado para
atender aos requisitos especficos, ou um mtodo totalmente novo for desenvolvido, o
laboratrio deve se assegurar de que as caractersticas de desempenho do mtodo atendem aos
requisitos para as operaes analticas pretendidas.
O laboratrio, ao empregar mtodos de ensaios qumicos emitidos por organismos de
normalizao, organizaes reconhecidas na sua rea de atuao ou publicados em livros e/ou
peridicos de grande credibilidade na comunidade cientfica, necessita demonstrar que tem
condies de operar de maneira adequada estes mtodos normalizados, dentro das condies
especficas existentes nas suas instalaes antes de implant-los.

6.

DEFINIES

As definies gerais referentes qualidade so dadas na NBR ISO 9000, enquanto o ABNT ISO
/IEC Guia 2 estabelece definies especificamente relacionadas normalizao, certificao e
credenciamento de laboratrio.

As definies do ABNT ISO/IEC Guia 2 e do VIM so

preferidas quando as definies dadas so diferentes na NBR ISO 9000.

6.1 VALIDA O
Comprovao, atravs do fornecimento de evidncia objetiva, de que os requisitos para uma
aplicao ou uso especficos pretendidos foram atendidos. (NBR ISO 9000).
6.2 MTODO NORMALIZADO
aquele desenvolvido por um organismo de normalizao ou outras organizaes, cujos
mtodos so aceitos pelo setor tcnico em questo (DOQ-DQUAL-006). Por exemplo, ABNT,
ASTM , ANSI, APHA Standard Methods for Examination of Water and Wastewater.
6.3 MTODO NO NORMALIZADO
aquele desenvolvido pelo prprio laboratrio ou outras partes, ou adaptado a partir de mtodos
normalizados e validados (DOQ-DQUAL-006). Por exemplo, mtodos publicados em revistas

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tcnicas, mtodos de fabricantes de equipamentos, mtodos utilizando kits de ensaio e

instrumentos portteis.
7. QUES TES RELEVANTES NA UTILIZAO DE MTODOS ANALTICOS
O laboratrio deve estar ciente dos requisitos da Norma NBR ISO/IEC 17025 para a
seleo de mtodos de ensaios (item 5.4.2), desenvolvimento de mtodos de ensaio pelo
laboratrio (item 5.4.3), utilizao de mtodos no normalizados (item 5.4.4) e validao de
mtodos (item 5.4.5).
Quando o laboratrio utilizar mtodos normalizados ou previamente validados, ser
necessrio verificar se os dados de validao declarados so adequados ao propsito. No caso do
mtodo normalizado no declarar dados de desempenho relevantes para a aplicao em questo,
o laboratrio deve estabelec-los, levando em considerao a adequao ao uso pretendido.
8. VALIDA O DE MTODOS (NBR ISO/IEC 17025)
Com o objetivo de confirmar que os mtodos so apropriados para o uso pretendido, o
laboratrio deve validar:
M todos no normalizados;
M todos criados/desenvolvidos pelo prprio laboratrio;
M todos normalizados usados fora dos escopos para os quais foram concebidos;
Ampliaes e modificaes de mtodos normalizados.
O processo de validao de um mtodo no normalizado deve estar descrito em um
procedimento e os estudos para determinar os parmetros de desempenho devem ser realizados
com equipamentos e instrumentos dentro das especificaes, funcionando corretamente,
adequadamente calibrados e validados. Da mesma forma, o operador que realiza os estudos deve
ser competente na rea de estudo e precisa ter conhecimento suficiente sobre o trabalho e ser
capaz de tomar as decises apropriadas durante a realizao do estudo.
9. PLAN EJAMENTO DA VALIDA O
No planejamento e execuo da validao, sugere-se uma seqncia de trabalho como a
que se segue:

Definir a aplicao, objetivo e escopo do mtodo;

Definir os parmetros de desempenho e critrios de aceitao;

Desenvolver um procedimento operacional para validao;

Definir os experimentos de validao;

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Verificar se as caractersticas de desempenho do equipamento esto compatveis com o

exigido pelo mtodo em estudo;

Qualificar os materiais, por exemplo, padres e reagentes;

Executar os experimentos preliminares de validao;

Ajustar os parmetros do mtodo e/ou critrios de aceitao, se necessrio;

Executar experimentos completos de validao;

Preparar um procedimento operacional para execuo do mtodo, na rotina;

Definir critrios de revalidao (por exemplo, mudanas de pessoal, condies

ambientais, equipamentos, periodicidade, etc), e

Definir tipo e freqncia de verificaes de controle da qualidade analtica para a rotina.

Os experimentos e os resultados devem ser documentados e registrados.

10. DOCUMENTAO DE MTODOS VALIDADOS

Uma vez cumpridas todas as etapas do processo de validao, importante documentar
os procedimentos de forma que o mtodo possa ser implementado de maneira clara e sem
ambigidades. A documentao apropriada auxilia na aplicao consistente do mtodo. Isto
porque durante o processo de validao, assume-se que uma vez implantado o mtodo, ele ser
sempre executado conforme descrito; caso contrrio o desempenho real do mtodo no ir
corresponder quele previsto nos dados de validao. Portanto, a documentao deve minimizar
a introduo de variao acidental no mtodo.

Documentaes que registrem etapas da

validao so necessrias tambm para fins de avaliao e podem ser exigidas por razes
contratuais ou at mesmo por organismos regulamentadores.
prefervel que, ao se escrever um mtodo de ensaio, as informaes sejam descritas,
tanto quanto possvel, na ordem em que o usurio vai precisar delas. No se pode assumir que
todos iro entender como funciona o mtodo com a mesma profundidade do tcnico que o
desenvolveu e documentou. Uma maneira prtica de testar a documentao, pedir a um outro
tcnico competente para ler com ateno o procedimento e executar o ensaio. Se corresponder
ao esperado, ento provvel que o mtodo possa ser utilizado por vrios analistas com
resultados consistentes. Caso contrrio, pode ser necessrio reescrever o procedimento com
mais detalhes para evitar ambigidades.
Os mtodos documentados formam uma parte importante do sistema da qualidade do
laboratrio e devem estar sujeitos a um controle eficaz de documentos, assegurando desse modo
que somente mtodos e procedimentos validados sejam utilizados. O mtodo documentado deve
informar quando foi autorizado para uso e se est completo.
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O procedimento deve ser revisado, de acordo com a periodicidade estabelecida para

reviso dos documentos do sistema da qualidade ou quando ocorrer qualquer modificao
significativa no mtodo.
A sistemtica de controle de documentos do laboratrio deve permitir a retirada de
circulao dos documentos obsoletos e emisso de mtodos revisados. As alteraes devem ser
realizadas somente por pessoas autorizadas.

A Norma NBR ISO/IEC 17025 estabelece

requisitos para o controle de documentos.

10.1 FORMATO DE PROCED IMENTOS
Convm que um procedimento de ensaio seja coerente, claro, correto e to completo
quanto necessrio, dentro dos limites estabelecidos pelo seu campo de aplicao. Um formato
padronizado assegura que nenhum ponto importante foi esquecido, que as informaes a serem
includas no procedimento so fornecidas sempre na mesma ordem e que qualquer assunto
desejado pode ser encontrado rapidamente.
Na padronizao do formato dos mtodos validados, sugere-se utilizar a ABNT ISO/IEC
Diretiva Parte 3, a Norma ISO 78/2, alm das prescries da NBR ISO/IEC 17025.
11. CARACTERS TICAS DE DES EMPENHO DE MTODOS
As caractersticas de desempenho do mtodo (ou parmetros de validao) devem estar
claramente declaradas no procedimento documentado e incluir, quando aplicvel:
-

Especificidade e Seletividade

Faixa de trabalho e Faixa linear de trabalho

Linearidade

Sensibilidade

Limite de deteco

Limite de quantificao

Exatido e tendncia (bias)

Preciso

Robustez

Incerteza de medio

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11.1 ES PECIFIC IDAD E E S ELETIVID ADE

Uma amostra, de maneira geral, consiste dos analitos a serem medidos, da matriz e de
outros componentes que podem ter algum efeito na medio, mas que no se quer quantificar. A
especificidade e a seletividade esto relacionadas ao evento da deteco. Um mtodo que produz
resposta para apenas um analito chamado especfico. Um mtodo que produz respostas para
vrios analitos, mas que pode distinguir a resposta de um analito da de outros, chamado
seletivo. Entretanto, os termos especificidade e seletividade so freqentemente utilizados
indistintamente ou com diferentes interpretaes.
Na prtica, diferentes testes de especificidade e seletividade tentam abordar o mesmo
problema: o que ns medimos o que pensamos que medimos? Entender os diferentes
mecanismos que causam interferncias pode ajudar na estruturao dos testes e achar solues
para os problemas encontrados. A medio pode ser alterada porque os reagentes, matriz da
amostra ou outros componentes alteram a sensibilidade do detector que mede o analito de
interesse ou porque estes compostos afetam diretamente a resposta. O efeito de erros constantes
(interferncias) e erros proporcionais (efeito de matriz) podem ocorrer ao mesmo tempo. Uma
vez conhecidos, estes problemas podem ser superados atravs de adio-padro, anlise de
mltiplos componentes ou por uma mudana no pr-tratamento, separao, ou deteco.
Dependendo da tcnica analtica utilizada, a quantidade relativa da matriz pode diminuir
conforme a amostra processada durante as etapas do ensaio. A matriz est presente nas fases de
amostragem, no pr-tratamento da amostra e nas etapas de preparao. Alguma poro da matriz
entra no sistema de separao e alguns componentes podem ainda estar presentes na fase de
deteco. Os possveis problemas encontrados durante as fases de preparao da amostra afetam
a exatido do mtodo e isto ser abordado neste documento.

11.1.1 Testes de Especificidade

Testes de especificidade necessitam de uma pesquisa cuidadosa do conhecimento
disponvel na rea de aplicao, para que se encontre todos os componentes que precisam ser
testados. Assim sendo, o analito, a matriz com ou sem analito, matrias-primas do processo,
impurezas dos materiais iniciais ou do processo, subprodutos e produtos de degradao ou
metablitos e reagentes em branco devem todos ser analisados. s vezes se faz necessrio expor
todos os componentes e a matriz a condies extremas (calor, cido, lcali, oxidao, radiao
UV/Visvel, luz fluorescente) para determinar possveis produtos de degradao.
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M uito esforo foi dedicado para resolver os problemas de especificidade freqentemente

encontrados com as tcnicas mais comuns de espectrofotometria de UV/Visvel

ou de

cromatografia lquida. Comparaes de resultados, variando as condies de medio e anlise

de pureza de sinal, podem ser usados para verificar que nenhum outro componente conhecido ou
desconhecido esteja sendo determinado junto com o analito. Algumas vezes deve-se usar
tcnicas adicionais, como cromatografia de camada fina (CCF) ou espectroscopia de massa
(EM ), aps a separao e a coleta do analito. Em particular, isso necessrio em mtodos
usados para avaliar estabilidade. Para este propsito, as amostras utilizadas nos ensaios de
condies extremas, so estudadas cuidadosamente para provar que nenhum produto de
degradao conhecido ou desconhecido possa perturbar o sinal do analito.
Como exemplo, para tcnicas cromatogrficas, alm das comparaes visuais de
cromatogramas, diferentes parmetros devem ser calculados nos cromatogramas para descrever a
especificidade do mtodo. Os parmetros mais importantes so: resoluo, reteno relativa
(fator de separao), fator de capacidade (fator de reteno), fator de simetria e nmero de pratos
tericos.
11.1.2 Testes de Seletividade
A matriz da amostra pode conter componentes que interferem no desempenho da
medio pelo detector selecionado, sem causar um sinal visvel no teste de especificidade. Os
interferentes podem aumentar ou reduzir o sinal, e a magnitude do efeito tambm pode depender
da concentrao.
Vrios testes e suas estatsticas correspondentes podem ser utilizados para o estudo da
seletividade dependendo da disponibilidade do analito, da matriz sem o analito e de amostras de
referncia nas concentraes de interesse. Se a matriz da amostra sem analito ou um grupo
satisfatrio de amostras de referncia esto disponveis, podem ser aplicados os testes F
(Snedecor) de homogeneidade de varincias e o teste t (Student) de comparao de mdias, ou
ento realizada a anlise dos desvios em relao aos valores de referncia. Normalmente, partese da hiptese em que a matriz no afeta o sinal do analito em nveis de concentraes elevados
ou acima da faixa. Preparam-se dois grupos de amostras de teste, um com a matriz e o outro
sem, ambos os grupos com a concentrao do analito idntica em cada nvel de concentrao de
interesse. O nmero de amostras paralelas em cada nvel de concentrao deve ser maior ou
igual a 7 (sete) para permitir o uso adequado dos modelos estatsticos e proporcionar uma
comparao vlida. Primeiro, faz-se o teste F para verificar se as varincias das amostras podem
ser consideradas iguais, calculando-se:

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F=

s12
s22

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(1)

2
2
onde s1 e s2 so as varincias de cada amostra, com a maior varincia no numerador. Ao

mesmo tempo, obtm-se o valor de Ftabelado, com (n1-1) graus de liberdade no numerador e (n2-1)
graus de liberdade no denominador; usualmente, adota-se um nvel de confiana de 95%. Temse dois casos:
(I) se o teste F no significante, isto , se F calculado for menor que o F tabelado, a
matriz no tem um efeito importante sobre a preciso do mtodo na faixa de concentrao em
estudo. Neste caso, os desvios-padro dos grupos de testes podem ser agrupados e a significncia
das diferenas das mdias dos dois conjuntos de amostras pode ser testado com a distribuio t
de Student. Neste caso, calculam-se:
x 1 e x 2 = mdias das respostas dos analitos em amostras com matriz e sem matriz na
mesma faixa de concentraes,

s1 e s2 = desvios-padro das respostas dos analitos dos dois grupos de amostras, bem
como o valor

t calculado =

onde s 2 =

( n1 1) s 21 + ( n2 1) s22
(n1 + n2 2)

x1 x2
1
1

s 2 +
n
n
1
2

(2)

e n1 e n2 so os tamanhos das amostras 1 e 2.

O valor de ttabelado obtido a partir da tabela da distribuio de Student para (n1 + n2 2) graus de
liberdade e a confiana desejada.

(II) Se o teste F significante, a matriz tem um efeito importante sobre a preciso do

mtodo na faixa de concentrao em estudo, as varincias podem ser consideradas desiguais e o
t calculado calculado por:

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t calculado =

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x1 x2
2
s1

n1

(3)

2
s2

n2

Neste caso, para a obteno do t tabelado, o nmero de graus de liberdade () igual a:

(s12

2
)
=
-2
2
2
2
2
(s1 n1) + (s 2 n2 )

(4)

n1 + s22 n 2

n1 + 1

n2 + 1

No caso de somente uma faixa relativamente estreita de concentraes interessar, ou se o

erro analtico devido a uma possvel dependncia com a concentrao for desprezvel, o teste t
com dados pareados pode ser utilizado para verificar efeitos de matriz. O clculo neste caso :

x n
t calculado = d
sd

(5)

onde:

[(d
n

xd =
i =1

(d i1 d i 2 )
n

(6) e

sd =

i1

di 2 ) x d

i=1

n 1

....... (7)

Nas equaes, x d = mdia das diferenas entre as respostas dos pares de analitos;
d i1 , d i 2 = respostas do analito para o par de amostras com matriz e sem matriz; sd = desvio
padro das diferenas e n = nmero de pares. O valor de t tabelado obtido da distribuio t de
Student com (n-1) graus de liberdade e a confiana desejada.
Se o valor de t calculado for menor que o t tabelado, pode-se concluir que a matriz no
afeta o ensaio. Se o valor de t for maior que o esperado, pode-se concluir que a matriz tem um
efeito estatisticamente significante sobre o resultado do ensaio.

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Se a matriz sem o analito no estiver disponvel, a seletividade pode ser testada

comparando-se as inclinaes das curvas de adio padro. Isto feito preparando-se dois
grupos de amostras que contenham a mesma adio de analito para cada nvel de concentrao.
Um grupo inclui a matriz da amostra (contendo um nvel bsico do analito) e o outro grupo no
inclui a matriz de amostra. Os resultados destas amostras podem ser representados em um
mesmo grfico em funo da concentrao de analito adicionado. Se as inclinaes destas duas
curvas de regresso linear forem as mesmas, o nico efeito de matriz presente a interferncia
natural causada pelo nvel bsico do analito.

11.2 FAIXA D E TRABALHO E FAIXA LIN EAR D E TRABALHO

Para qualquer mtodo quantitativo, existe uma faixa de concentraes do analito ou
valores da propriedade no qual o mtodo pode ser aplicado.
No limite inferior da faixa de concentrao, os fatores limitantes so os valores dos
limites de deteco e de quantificao. No limite superior, os fatores limitantes dependem do
sistema de resposta do equipamento de medio.
Dentro da faixa de trabalho pode existir uma faixa de resposta linear e dentro desta, a
resposta do sinal ter uma relao linear com o analito ou valor da propriedade. A extenso
dessa faixa pode ser estabelecida durante a avaliao da faixa de trabalho.
A faixa linear de trabalho de um mtodo de ensaio o intervalo entre os nveis inferior e
superior de concentrao do analito no qual foi demonstrado ser possvel a determinao com a
preciso, exatido e linearidade exigidas, sob as condies especificadas para o ensaio. A faixa
linear definida como a faixa de concentraes na qual a sensibilidade pode ser considerada
constante e normalmente expressa nas mesmas unidades do resultado obtido pelo mtodo
analtico.

11.2.1 Escolha da faixa de trabalho

Todo experimento de determinao da faixa de trabalho iniciado pela escolha de uma
faixa preliminar. A faixa de trabalho deve cobrir a faixa de aplicao para a qual o ensaio vai ser
usado. A concentrao mais esperada da amostra deve, sempre que possvel, se situar no centro
da faixa de trabalho. Os valores medidos obtidos tm que estar linearmente correlacionados s
concentraes. Isto requer que os valores medidos prximos ao limite inferior da faixa de
trabalho possam ser distinguidos dos brancos dos mtodos. Esse limite inferior deve, portanto,
ser igual ou maior do que o limite de deteco do mtodo. As etapas de diluio e concentrao
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devem ser praticadas sem o risco de introduzir erros sistemticos (bias). A varincia dos valores
informados deve ser independente da concentrao. Esta independncia deve ser verificada por
um teste estatstico para a linearidade.
Em geral, sero necessrios vrios pontos de calibrao, de preferncia mais que seis,
para determinar a faixa de trabalho. Na Tabela 1 so apresentadas as metodologias para
determinao das faixas de trabalho e linear.
A relao da resposta do instrumento para a concentrao no tem que ser perfeitamente
linear para um mtodo ser efetivo mas, neste caso, a curva de calibrao deve ser preparada
diariamente.
A faixa de trabalho e a faixa linear podem ser diferentes para cada tipo de amostra,
devido ao efeito das interferncias provenientes da matriz.

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Tabela 1 - M todos para determinao da Faixa de Trabalho e Faixa Linear.

N

Matriz

Procedimento

Replicatas
Etapa (1):
7 (sete)

- Branco com adio de

concentraes variadas do
analito ou

Objetivo: identificar inicialmente, por

observao visual, a faixa linear aproximada e os
limites superior e inferior da faixa de trabalho

- Branco da amostra com

adio de concentraes
variadas do analito

- Colocar no eixo x as concentraes do analito e

no eixo do y as respostas das medies.
- Ir para a etapa (2)

Obs.: preparar diferentes

concentraes de forma
independente e no alquotas
da mesma soluo me
Etapa (2)
7 (sete) na
faixa linear

- M ateriais de referncia
(diferentes concentraes),
na faixa linear
ou
- Branco da amostra com
adio de concentraes
variadas do analito, na faixa
linear

Objetivo: determinar a faixa de trabalho e

confirmar a linearidade.
- Colocar no eixo x as concentraes do analito e
no eixo do y as respostas das medies. .
- Verificar visualmente a existncia de dispersos
que possam interferir na regresso (antes de
remover os dispersos fazer determinaes nas
proximidades das concentraes).
- Calcular o coeficiente de regresso linear
- Calcular e fazer o grfico dos valores dos
resduos (resduo a diferena entre o valor
observado e o valor calculado pela equao da
reta de regresso para cada valor de x).
- A distribuio aleatria em torno da linha reta
confirma a linearidade.
- Tendncias sistemticas indicam a no
linearidade.
- Ir para a etapa (3)

Etapa (3)
7 (sete)

- Branco da amostra com

adio de concentraes
variadas do analito,
prximas ao LD

Objetivo: determinar o Limite de Quantificao

(LQ), que efetivamente forma o limite mais
baixo da faixa de trabalho
- Expressar o LQ como a concentrao mais
baixa do analito que pode ser determinada com
um nvel aceitvel de incerteza.

Observaes:
Branco = gua reagente
Branco da amostra = matriz da amostra sem o analito de interesse
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11.3 LINEARID ADE

Linearidade a habilidade de um mtodo analtico em produzir resultados que sejam
diretamente proporcionais concentrao do analito em amostras, em uma dada faixa de
concentrao. A quantificao requer que se conhea a dependncia entre a resposta medida e a
concentrao do analito. A linearidade obtida por padronizao interna ou externa e formulada
como expresso matemtica usada para o clculo da concentrao do analito a ser determinado
na amostra real.
A equao da reta que relaciona as duas variveis :

y = ax + b

(8)

Onde:
y = resposta medida (absorbncia, altura ou rea do pico, etc.);
x = concentrao;
a = inclinao da curva de calibrao = sensibilidade;
b = interseo com o eixo y, quando x=0.
A linearidade de um mtodo pode ser observada pelo grfico dos resultados dos ensaios
em funo da concentrao do analito ou ento calculados a partir da equao da regresso
linear, determinada pelo mtodo dos mnimos quadrados.
O coeficiente de correlao linear (r) freqentemente usado para indicar o quanto pode
ser considerada adequada a reta como modelo matemtico. Um valor maior que 0,90 ,
usualmente, requerido. O mtodo pode ser considerado como livre de tendncias (unbiased) se o
corredor de confiana da reta de regresso linear contiver a origem.
Como os desvios da linearidade so muitas vezes difceis de serem detectados
visualmente, pode-se verificar a sua adequao por meio do clculo dos resduos entre os
valores medidos e os valores calculados a partir da equao de regresso. Calcula-se o valor de t
por

t calculado =

resduo
sr n

(9)

onde:

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resduo = |xmedido xcalculado|

sr = desvio padro dos resduos
n = nmero de pontos

Se o valor de t calculado para um ponto duvidoso de uma curva de calibrao for menor ou igual
ao valor de t unilateral, para a confiana desejada e (n-1) graus de liberdade, considera-se que o
ponto pertence curva e a faixa at ele linear:
A maioria dos equipamentos de deteco existentes estabelece a sua faixa dinmica
linear. necessrio, entretanto, verificar at que ponto a faixa de concentrao do analito
coincide com a faixa dinmica linear e assegurar que nenhum outro fenmeno tenha impacto
indesejvel na resposta.
Alguns procedimentos analticos no demonstram linearidade mesmo aps qualquer
transformao. Nesses casos, a resposta analtica pode ser descrita por uma funo adequada da
concentrao do analito na amostra.

11.4 S ENS IBILIDAD E

Sensibilidade um parmetro que demonstra a variao da resposta em funo da
concentrao do analito. Pode ser expressa pela inclinao da curva de regresso linear de
calibrao, conforme a equao abaixo e determinada simultaneamente aos testes de
linearidade. A sensibilidade depende da natureza do analito e da tcnica de deteco utilizada.

S=

dx
dc

(10)

Onde:
S = sensibilidade;
dx = variao da resposta;
dc = variao da concentrao.

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11.5 LIMITE DE D ETECO

Quando so realizadas medidas em amostras com baixos nveis do analito ou de uma
propriedade, como por exemplo anlise de traos, importante saber qual o menor valor de
concentrao do analito ou da propriedade que pode ser detectado pelo mtodo.
A importncia desta determinao e os problemas associados a ela advm do fato de que
a probabilidade de deteco no muda rapidamente de zero para um quando seu limiar
ultrapassado. Os problemas tm sido investigados estatisticamente e diversos critrios de deciso
tm sido propostos. Muitas controvrsias so originadas devido ao fato de no haver atualmente
uma concordncia da terminologia aplicvel. O termo limite de deteco no aceito por
todos, apesar de ser usado em alguns documentos setoriais.
O limite de deteco do equipamento (LDE) definido como a concentrao do analito
que produz um sinal de trs a cinco vezes a razo rudo/sinal do equipamento.
O limite de deteco do mtodo (LDM) definido como a concentrao mnima de uma
substncia medida e declarada com 95% ou 99% de confiana de que a concentrao do analito
maior que zero.

O LDM determinado atravs de anlise completa de uma dada matriz

contendo o analito.
O procedimento de determinao do LDM aplicado a uma grande variedade de tipos de
amostras, desde a gua reagente (branco) at guas residurias, todas contendo o analito. O
LDM para um procedimento analtico pode variar em funo do tipo da amostra. fundamental
assegurar-se de que todas as etapas de processamento do mtodo analtico sejam includas na
determinao desse limite de deteco.
Para a validao de um mtodo analtico, normalmente suficiente fornecer uma
indicao do nvel em que a deteco do analito comea a ficar problemtica., ou seja, Branco
+ 3s e 0 + 3s , considerando anlise de sete ou mais amostras de branco e de brancos com
adio, respectivamente.
Na tabela 2 so apresentadas as metodologias para as medies quantitativas do limite de
deteco.

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Tabela 2 - Determinao de Limite de Deteco (LD)

Matriz

Clculos

Observaes

Replicatas
7

Branco
amostra

da LD = X + ts onde:
X = M dia dos valores dos
brancos da amostra; e,
s = Desvio padro dos
brancos da amostra.

A mdia e o desvio padro

dos brancos da amostra
so
dependentes
da
matriz..
Vlido somente quando os
valores
dos
brancos
apresentarem um desvio
padro diferente de zero.

ou
7

Branco da
amostra com
adio da menor
concentrao
aceitvel do
analito

LD = 0 + ts
onde: s = desvio padro dos
brancos da amostra, com
adio.

A menor concentrao
aceitvel aquela tida
como a concentrao mais
baixa para a qual um grau
aceitvel de incerteza pode
ser alcanado.

Calcular a varincia (s2 ) e o desvio padro (s) das medies em replicata e calcular o LDM
como a seguir:

LDM = t ( n1, 1 ) . ( s)

(11)

onde:
LDM = Limite de deteco do mtodo
t(n-1,1-) = valor da abscissa t (Student) para ( 1 - ) x 100% nvel de confiana e (n-1)
graus de liberdade.
s = desvio padro das anlises em replicata
Por exemplo, no caso de se analisar 7 alquotas, temos 7-1 = 6 graus de liberdade. O
valor de t unilateral, para 99% de confiana 3,143. O LDM ser igual a 3,143 vezes o desvio
padro.
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O mtodo analtico deve ser especificado e o LDM para cada analito deve ser expresso
nas unidades apropriadas, de acordo com o preconizado no mtodo analtico.

A matriz da

amostra usada para determinar o LDM deve ser identificada.

11.6 LIMITE DE QUANTIFIC AO

O Limite de Quantificao a menor concentrao do analito que pode ser determinada
com um nvel aceitvel de preciso e veracidade (trueness). Pode ser considerado como sendo a
concentrao do analito correspondente ao valor da mdia do branco mais 5, 6 ou 10 desviospadro.

Algumas vezes tambm denominado Limite de Determinao.

Na prtica,

corresponde normalmente ao padro de calibrao de menor concentrao (excluindo o branco).

Este limite, aps ter sido determinado, deve ser testado para averiguar se as exatido e preciso
conseguidas so satisfatrias. A Tabela 3 apresenta um resumo do mtodo de determinao do
Limite de Quantificao. A diferena entre os Limites de Deteco e de Quantificao a ordem
de grandeza das incertezas associadas

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Tabela 3 Determinao do Limite de Quantificao (LQ)

N
Replicatas
7

Matriz
Branco da
amostra

Determinao
LQ = X + 5s ou LQ = X + 6s
ou LQ = X + 10s, onde:
X = M dia dos valores dos

Observao
Pode ser difcil a
obteno do branco
verdadeiro.

brancos
s = Desvio padro dos brancos
7

Branco com

- M edir, uma vez cada, 7 replicatas Normalmente o LQ faz

adio de

independentes a cada nvel de

parte do estudo para

concentraes

concentrao.

determinao da faixa

variadas do

- Calcular o desvio padro s do

de trabalho.

analito, prximas valor do analito, para cada

ao LD
concentrao.
- Fazer o grfico s versus
concentrao e atribuir um valor
para o LQ, por inspeo.
- Expressar o LQ como a
concentrao mais baixa do analito
que pode ser determinada com um
nvel aceitvel de incerteza.

Observao: Branco = mdia dos valores do branco da amostra.

11.7 EXATIDO E TENDNCIA (Bias)

Exatido do mtodo definida como sendo a concordncia entre o resultado de um
ensaio e o valor de referncia aceito como convencionalmente verdadeiro. A exatido, quando
aplicada a uma srie de resultados de ensaio, implica numa combinao de componentes de erros
aleatrios e sistemticos (tendncia).

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A determinao da tendncia total com relao aos valores de referncia apropriados

importante no estabelecimento da rastreabilidade aos padres reconhecidos. A tendncia pode
ser expressa como recuperao analtica (valor observado / valor esperado). A tendncia deve ser
corrigida ou demonstrada ser desprezvel, mas em ambos os casos, a incerteza associada com a
determinao da tendncia permanece como um componente essencial da incerteza global.
Os processos normalmente utilizados para avaliar a exatido de um mtodo so, entre
outros: uso de materiais de referncia, participao em comparaes interlaboratoriais e
realizao de ensaios de recuperao.

11.7.1 Materiais de referncia certificados (MRC)

Sempre que possvel, os materiais de referncia certificados devem ser utilizados no
processo de validao de um mtodo de ensaio. Um M RC possui um valor de concentrao, ou
outra grandeza, para cada parmetro e uma incerteza associada. muito importante, portanto,
que o fornecimento desses M RC seja realizado por organismos reconhecidos e confiveis (como
por exemplo: NIST, LGC, etc).
O uso correto dos M RC consiste na sua anlise para avaliar o desempenho do laboratrio.
Quando o valor obtido no estiver dentro do intervalo da incerteza indicado para o valor
certificado, o laboratrio deve procurar as causas desse desvio e tentar elimin-las ou aceit-las,
dependendo do rigor definido para os resultados.
Na avaliao da exatido utilizando um material de referncia, os valores obtidos pelo
laboratrio mdia e o desvio padro de uma srie de ensaios em replicata devem ser
comparados com os valores certificados do material de referncia. Para esta comparao podem
ser utilizados, entre outros:

erro relativo;

teste de hipteses;

ndice z (z Score), e

erro normalizado.

Nos processos de comparao, caso no se alcance as condies satisfatrias, deve ser

efetuado um plano de aes corretivas para verificar as causas e reavaliar o ensaio.

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11.7.1.1 Erro relativo

Uma forma de avaliar a exatido do mtodo atravs do clculo do erro relativo (ER),
expresso em percentagem, atravs da expresso:

ER =

X lab X v
. 100
Xv

(12)

Onde:
Xlab = valor obtido experimentalmente ou mdia aritmtica de valores obtidos
Xv = valor aceito como verdadeiro (valor certificado do M RC)

11.7.1.2 Teste de hiptese

O laboratrio pode verificar a existncia de erros sistemticos associados metodologia,
por meio de teste de hipteses. Vide descrio do teste no item 11.1.2 deste guia.

11.7.1.3 ndice Z (Z score)

O ndice Z tambm um modo de avaliar o desempenho do laboratrio, utilizando M RC.

Z=

( X lab X v )
s

(13)

Onde:
Xlab = valor obtido pelo laboratrio
Xv = valor aceito como verdadeiro (valor certificado do M RC)
s = unidade de desvio (incerteza do M RC)

A avaliao pode ser feita (ISO Guia 43) de acordo com a seguinte escala de pontuao:
IZI 2 = satisfatrio;
2 < IZI 3 = questionvel;
IZI > 3 = insatisfatrio.

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11.7.1.4 Erro normalizado

Caso o laboratrio calcule a incerteza do seu resultado (Ulab), o valor verdadeiro (Xv )
deve estar dentro do intervalo de incerteza Xlab. Quando isso no acontece, esse intervalo pode
estar subestimado. Nesses casos empregado o conceito de erro normalizado (En), para avaliar o
desempenho.

En =

( X lab X v )
2
2
U lab
+ U ref

(14)

Onde:
Uref incerteza associada ao valor verdadeiro
Se I EnI 1, ento pode-se considerar Ulab adequada.

11.7.2 Comparaes interlaboratoriais

O

ABNT ISO/IEC Guia 43-Parte 1 faz distino entre o uso de comparaes

interlaboratoriais para ensaios de proficincia, para a determinao do desempenho do

laboratrio, e para outros propsitos tais como: estabelecer a eficcia e a comparabilidade de
novos mtodos de ensaio ou de medio, monitorar mtodos estabelecidos e determinar as
caractersticas de desempenho de um mtodo, geralmente conhecidas como processos
colaborativos.
O processo colaborativo uma forma especial de ensaio para avaliar o desempenho de
um mtodo nas condies normais de trabalho em vrios laboratrios, atravs de ensaio de
amostras homogneas preparadas cuidadosamente.

11.7.3 Comparao de mtodos

Consiste na comparao dos resultados obtidos utilizando um mtodo interno com os
resultados conseguidos atravs de um mtodo de referncia. O objetivo de estudar o grau de
proximidade dos resultados obtidos pelos dois mtodos de ensaio, ou seja, de avaliar a exatido
do mtodo interno relativamente ao de referncia.

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As anlises so efetuadas em replicata, utilizando os dois mtodos de ensaio, em

separado, sobre as mesmas amostras, numa faixa restrita de concentraes ou em toda faixa de
concentraes em que se pretende validar o mtodo.
Existem vrias tcnicas para comparar os resultados obtidos por dois mtodos de ensaio,
entre as quais Testes de Hiptese, Teste de Regresso Linear entre os dois mtodos e Projeto de
Experimentos.

11.8 PRECIS O
Preciso um termo geral para avaliar a disperso de resultados entre ensaios
independentes, repetidos de uma mesma amostra, amostras semelhantes ou padres, em
condies definidas. normalmente determinada para circunstncias especficas de medio e as
duas formas mais comuns de express-la so por meio da repetitividade e a reprodutibilidade,
sendo usualmente expressa pelo desvio padro.
A preciso geralmente expressa como desvio padro ou desvio padro relativo. Ambas
repetitividade e reprodutibilidade, so geralmente dependentes da concentrao do analito e,
deste modo, devem ser determinadas para um diferente nmero de concentraes e, em casos
relevantes, a relao entre preciso e a concentrao do analito deve ser estabelecida. O desvio
padro relativo pode ser mais til neste caso, pois foi normalizado com base na concentrao e
deste modo ele praticamente constante ao longo da faixa de interesse, contanto que esta no
seja muito grande.

11.8.1 Repetitividade
o grau de concordncia entre os resultados de medies sucessivas de um mesmo
mensurando, efetuadas sob as mesmas condies de medio, chamadas de condies de
repetitividade (VIM ), a seguir:
M esmo procedimento de medio;
M esmo observador;
M esmo instrumento usado sob mesmas condies;
M esmo local, e
Repeties em curto espao de tempo.

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A repetitividade pode ser expressa quantitativamente em termos da caracterstica da

disperso dos resultados e pode ser determinada por meio da anlise de padres, material de
referncia ou adio a branco em vrias concentraes na faixa de trabalho. Sugere-se 7 ou
mais repeties para o clculo do desvio padro para cada concentrao, chamado desvio padro
de repetitividade.

11.8.1.1 Limite de repetitividade r

A partir do desvio padro dos resultados dos ensaios sob condio de repetitividade
aconselhvel calcular o limite de repetitividade r que capacita o analista a decidir se a
diferena entre anlises duplicatas de uma amostra, determinada sob condies de repetitividade,
significante.
Para um nvel de confiana de 95%, o limite de repetitividade (r) avaliado por:
r = 2,8 . S r

(15)

sendo:
S r - desvio-padro de repetitividade associada aos resultados considerados;

Caso o laboratrio obtenha mais de dois resultados, o limite de repetitividade (r)

calculado de acordo com a Norma ISO 5725-6.

11.8.2 Reprodutibilidade
o grau de concordncia entre os resultados das medies de um mesmo mensurando,
efetuadas sob condies variadas de medio. (VIM )
Embora a reprodutibilidade no seja um componente de validao de mtodo executado
por um nico laboratrio, considerada importante quando um laboratrio busca a verificao
do desempenho dos seus mtodos em relao aos dados de validao obtidos atravs de
comparao interlaboratorial.
Preciso sob condies de reprodutibilidade, por exemplo, onde resultados dos ensaios
so obtidos com o mesmo mtodo, variando-se laboratrios, operadores ou equipamentos
denominada preciso intermediria (ver 11.8.3).

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A partir do desvio padro obtido sob condies de reprodutibilidade possvel calcular o

limite de reprodutibilidade R, o qual permite ao analista decidir se a diferena entre os valores
da duplicata das amostras analisadas sob condies de reprodutibilidade significante.

11.8.2.1 Limite de reprodutibilidade R

Do mesmo modo que para repetitividade, o limite de reprodutibilidade (R), para um nvel
de confiana de 95%, dado por:

R = 2,8 . S R2

(16)

sendo:
S R2 - varincia de reprodutibilidade associada aos resultados considerados, para cada
laboratrio;
O clculo da reprodutibilidade efetuado para cada nvel, separadamente, aps
eliminao dos valores dispersos (ISO 5725-2, ASTM E178).

11.8.3 Preciso intermediria

A preciso intermediria refere-se preciso avaliada sobre a mesma amostra, amostras
idnticas ou padres, utilizando o mesmo mtodo, no mesmo laboratrio ou em laboratrios
diferentes, mas definindo exatamente quais as condies a variar (uma ou mais), tais como:

diferentes analistas;

diferentes equipamentos;

diferentes tempos.

Esta medida de preciso reconhecida como a mais representativa da variabilidade dos

resultados em um laboratrio e, como tal, mais aconselhvel de usar.
Para determinar a preciso intermediria de um mtodo, efetuam-se n medies em
replicata, ou em ensaio nico, sobre a amostra, nas condies pr-definidas, pois existem vrios
mtodos de estudar este tipo de preciso. Quando aplicvel, este procedimento repetido sobre
outras amostras, abrangendo outros nveis de concentrao.

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Na maioria dos casos, o valor de preciso intermediria funo do nvel de

concentrao do ensaio e o seu clculo efetuado, preferencialmente, a partir dos resultados
obtidos, aps eliminao dos resultados dispersos. A visualizao grfica dos valores tambm
pode ser til para identificar a existncia de valores dispersos (ver Documentos de referncia).
Dependendo do ensaio e do tipo de aplicao do estudo da preciso intermdia, existem
vrios mtodos para determinao e controle desse parmetro de qualidade, tais como:

por meio de grfico de controle de amplitude, que podero ser aplicados para
replicatas de amostra e para padres estveis ao longo do tempo;

por meio da expresso:

Si ( ) =

1
t ( n 1)

(y
t

j =1 k =1

jk

yj

(17)

Onde:
Si ( ) - desvio padro de preciso intermediria (onde os smbolos relativos s condies
intermedirias de preciso podem aparecer entre parnteses, ex: Si

(T.O.)

significa tempo e

operadores diferentes)
t total de amostras ensaiadas (no confundir com o t de Student);
n total de ensaios efetuados por amostra;
j n da amostra, j = 1, t
k n do ensaio da amostra j, k = 1, n
yjk valor do resultado k para a amostra j
y j - representa a mdia aritmtica dos resultados da amostra j.

Nesse caso, a determinao da preciso feita atravs de t valores de n ensaios de

amostras ou padres.

A preciso intermediria baseia-se na disperso entre ensaios.

recomendado que o valor t (n-1), seja, pelo menos, igual a 15.

Quando n = 2 a equao (17) toma a forma:

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Si ( ) =

1 t
. ( y j1 y j 2 ) 2
2.t j =1

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(18)

Onde:
y j1 - primeiro resultado obtido para a amostra j;
y j 2 - segundo resultado obtido para a amostra j
Um mtodo simplificado para estimar a preciso intermediria baseia-se na execuo de
n medies (n 15), em condies pr-definidas, sobre:

uma mesma amostra;

amostras supostamente idnticas;

padres.

A estimativa da preciso internediria Si ( ), neste caso, dada por:

Si ( ) =

1 n
( yk
n 1
k =1

y )2

(19)

em que Si ( ) o desvio padro de preciso intermediria relativo a esse grupo, onde os smbolos
relativos s condies intermedirias de preciso podem aparecer entre parntesis (Ex: Si

(T.O)

significa tempo e Operadores diferentes). Este mtodo revela-se menos eficiente quando
comparado com os anteriores.

Onde:
n n de amostras / padres;
y k - cada resultado obtido;
y - representa a mdia aritmtica de cada resultado obtido.
Recomenda-se a leitura da Norma ISO 5725-3 para aprofundar conhecimento nesta rea.
Na Norma ISO 5725-6 so expostos vrios exemplos prticos de estimativa e controle da
preciso intermediria, atravs de grficos de controle.
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Na tabela 4, est apresentado um resumo da determinao da repetitividade,

reprodutibilidade e preciso intermediria.

11.8.4 Comparao da preciso entre mtodos

Quando se pretende avaliar se dois mtodos (A e B) tem diferenas significativas entre
si, em termos de preciso, pode-se recorrer ao teste F. Este baseia-se no clculo da razo entre as
2
2
varincias dos dois mtodos (Fcalc = SA /SB ), colocando-se a maior no numerador, de modo que

a razo seja maior ou igual a um. Em seguida, compara-se este valor obtido com o valor tabelado
de F. Se Fcalculado Ftabelaado, os dois mtodos no apresentam diferenas significativas entre si,
relativamente s suas precises.

11.8.5 Recuperao
A recuperao do analito pode ser estimada pela anlise de amostras adicionadas com
quantidades conhecidas do mesmo (spike). As amostras podem ser adicionadas com o analito em
pelo menos trs diferentes concentraes, por exemplo, prximo ao limite de deteco, prximo
concentrao mxima permissvel e em uma concentrao prxima mdia da faixa de uso do
mtodo. A limitao deste procedimento a de que o analito adicionado no est
necessariamente na mesma forma que a presente na amostra. A presena de analitos adicionados
em uma forma mais facilmente detectvel pode ocasionar avaliaes excessivamente otimistas
da recuperao.
A recuperao calculada segundo:

C C2
100
Recuperao (%) = 1
C
3

(20)

onde: C1 = concentrao determinada na amostra adicionada,

C2 = concentrao determinada na amostra no adicionada,
C3 = concentrao adicionada.

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11.9 ROBUS TEZ

A robustez de um mtodo de ensaio mede a sensibilidade que este apresenta face a
pequenas variaes. Um mtodo diz-se robusto se revelar praticamente insensvel a pequenas
variaes que possam ocorrer quando esse est sendo executado.
Para determinar a robustez de um mtodo de ensaio, pode-se recorrer ao teste de Youden.
Trata-se de um teste que permite no s avaliar a robustez do mtodo, como tambm ordenar a
influncia de cada uma das variaes nos resultados finais, indicando qual o tipo de influncia de
cada uma dessas variaes. Convm salientar que quanto maior for a robustez de um mtodo,
maior ser a confiana desse relacionamento sua preciso.
Nesse mtodo so realizados 8 ensaios, separados para determinar os efeitos da variao
das 7 diferentes etapas, no procedimento analtico. As oito medies podem ser realizadas numa
ordem aleatria. Para ilustrar, a tabela 5 mostra um exemplo dos efeitos das alteraes nos
fatores a serem determinados.

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Tabela 4 Repetitividade e Reprodutibilidade

Repeties

Analisar:
Padres,

materiais

referncia ou
branco

O qu calcular a

Comentrios

de (inde pendentes) partir dos dados ?

amostras

fortificadas

vrias concentraes ao
longo da faixa de trabalho
a) M esmo analista,

Determinar o

Determinar o desvio-padro

equipamento, laboratrio,

desvio-padro (s) de da repetitividade de cada

perodo curto

cada concentrao

concentrao.

Determinar o

Determinar o desvio-padro

b) Analistas e

equipamentos diferentes,

desvio-padro (s) de da reprodutibilidade

mesmo laboratrio,

cada concentrao

perodo estendido

intralaboratorial de cada
concentrao.

(preciso intermediria)
c) Analistas,

Determinar o

Determinar o desvio-padro

equipamentos e

desvio-padro (s) de da reprodutibilidade

laboratrios diferentes,

cada concentrao

perodo estendido

interlaboratorial de cada
concentrao.
Requer estudo colaborativo

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Tabela 5. Exemplo de variao nos fatores para a determinao da robustez

Fator

Nominal

Variao

Tempo de agitao

10 min.

12 min.

Tamanho da amostra

5g

10g

Concentrao cida

1M

1,1M

Temperatura de aquecimento

100C

95C

Tempo de aquecimento

5 min.

10 min.

Agitao

sim

No

pH

6,0

6,5

Fonte: APHA, AWWA, WEF. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20 th
Edition, 1998

Para a determinao da robustez, denominar os fatores nominais por letras maisculas, de

A a G e a variao, por letra minsculas correspondentes. Preparar uma tabela idntica Tabela
6.
Tabela 6. Matriz dos fatores para determinao da robustez do mtodo

Valor do fator

Combinao ensaiada
1

A ou a

B ou b

C ou c

D ou d

E ou e

F ou f

G ou g

Resultado

z
th

Fonte: APHA, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20 Edition, 1998

Se a combinao 1 for ensaiada, o resultado ser s. Se a combinao 2 for ensaiada ser t

e assim sucessivamente at que todas as 8 combinaes tenham sido ensaiadas. Para determinar
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a variao de um fator, encontrar os 4 valores correspondentes s letras maisculas e as 4

minsculas e comparar as mdias dos dois grupos. Por exemplo, ao calcular as alteraes de C
para c, usar os resultados:

s +u + w+ y
t +v+x+z
e
.
4
4

No caso acima, o efeito do fator C/c ser:

Efeito C/c =

s +u + w+ y t + v + x + z
4
4

Calcular todos os 7 pares para obter 7 diferenas, que podem ser ordenados para revelar
aqueles com efeito significante no resultado.
Se forem investigados menos que sete fatores, eliminar simplesmente as colunas
excedentes. Entretanto, para cada situao, consultar um estatstico para avaliar a variabilidade
da medio.
Aps crtica dos resultados obtidos, fazer um controle mais rigoroso dos fatores de maior
influncia.
Se no houver diferena significativa, calcular a mdia e o desvio padro dos 8
resultados, de s at z. O desvio padro uma estimativa realista da preciso do mtodo.
Outros documentos utilizados para verificao da robustez esto citados nos Documentos
de referncia.

11.10 INCERTEZA D E MED IO

Os estudos de validao produzem dados de desempenho global do mtodo e fatores
de influncia individuais que podem ser aplicados estimativa da incerteza associada aos
resultados do mtodo em rotina.
Informaes

detalhadas

sobre incerteza de medio podem ser

encontradas nos

documentos listados nos Documentos de referncia.

12 ITENS REVIS ADOS :

Includo texto complementando o item 11.1.2 e introduzindo os itens 11.2 e 11.2.1 (incio),
que foram inadvertidamente suprimidos na edio da reviso anterior.

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AN EXO
A publicao deste Documento Orientativo de grande importncia para os laboratrios
qumicos que tm a necessidade de validar os mtodos por eles desenvolvidos.
De forma a auxiliar os laboratrios iniciantes nessa tarefa, a Diviso de Credenciamento de
Laboratrios (Dicla) da Cgcre/Inmetro reuniu a sua Comisso Tcnica de Laboratrios de
Ensaio Qumica (CTLE-05), congregando especialistas, abaixo listados, que dedicaram o seu
tempo de trabalho preparao deste Documento.
A Dicla agradece pela contribuio prestada no apoio ao fortalecimento da atividade de
credenciamento de laboratrios.
Snia Elisa Pereira - Coordenadora da CTLE-05
Instituto Nacional de Tecnologia - INT
Suzana Saboia de Moura
INM ETRO / Diviso de Credenciamento de Laboratrios
Eduardo Castello Branco T. Guimares
CEPUERJ / UERJ
Margareth Westin D. de Azevedo
CETEC - Fundao Centro Tecnolgico de M inas Gerais
Lina Yamachita Oliveras
CIENTEC/RS
Tnia Simes
EM BRAPA / CTAA
Alfredo Rodrigues de Oliveira
Hidroqumica
Vanderla de Souza
INM ETRO / Diviso de M etrologia Qumica
Albert Hartmann
M illennium Chemicals
Lcia Helena Noanta de Souza
PETROBRAS / CENPES
Vera Harcar
Rede de Tecnologia do Rio de Janeiro
Srgio Motta
SENAI / CETIND

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Hlio Lionel
Especialista em Qumica do Petrleo
Kikue Higashi
Especialista em Qumica Ambiental
Paulo Afonso Lopes da Silva
Ph. D. em Engenharia de Produo e Estatstica
Reginaldo Ramos
Especialista em Qumica Ambiental
Walderez Bindilatti
Qumica
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