PESQUISA

Fotos/ilustraes cedidas pelos autores

FLAVONIDES
Farmacologia de flavonides no controle hiperlipidmico em animais experimentais
INTRODUO Desordens coronarianas so uns dos problemas causados pelo acmulo de colesterol, e tm sido causa de alta taxa de mortalidade no Brasil, Japo, Inglaterra, Estados Unidos e outros pases (Truswell, 1984). A aterosclerose e, em particular, a cardiopatia coronria, relaciona vrios fatores de risco, tais como: idade, sexo, obesidade, estresse emocional, baixos nveis de colesterol -HDL, fumo, dietas ricas em gordura saturada e ainda problemas genticos. A importncia de todos esses fatores de risco correlacionada com o aumento dos nveis de colesterol no sangue, assim como as atividades pr-oxidantes de radicais livres sobre as lipoprotenas de baixa densidade (LDL) no nvel endotlio. O consumo de gorduras saturadas aumentam os valores do colesterol na corrente sangnea, impedindo a atividade dos receptores de LDL e, conseqentemente, dificultando a sua eliminao (Leite, 1994). Nveis elevados de colesterol-HDL esto associados com a diminuio de risco da cardiopatia coronariana; seu efeito oposto ao colesterol-LDL, uma vez que este transporta o colesterol para os tecidos, enquanto o HDL atua no transporte do colesterol em excesso para o fgado. O quociente colesterol LDL/colesterolHDL um indicativo confivel de risco aterognico. Nas populaes onde so altas as concentraes tanto do LDL como do HDL, os indivduos com menores nveis de HDL esto mais susceptveis a padecer de cardiopatia coronariana. Ainda que os nveis de HDL possam estar condicionados geneticamente, a alimentao um fator determinante (Feinleb, 1984). As partculas de HDL facilitam o transporte de colesterol dos tecidos perifricos ao fgado, para sua excreo. Os cidos saturados no reduzem os nveis de colesterol-HDL, mas aumentam a concentrao de colesterol-LDL. A maioria das investigaes epidemiolgicas mostram uma correlao positiva entre as concentraes sricas de triacialgliceris e a cardiopatia coronariana (Feinleb, 1984). A reduo nas concentraes plasmticas de lipoprotenas LDL, VLDL podem diminuir o risco do infarto do miocrdio (Lipid Research, 1984). O esquema 1 apresenta a formao de uma placa aterosclertica. Partculas de LDL e plaquetas penetram no endotlio e causam leses (1). Fatores de crescimento liberados pelas plaquetas estimulam as clulas musculares abaixo do endotlio, causando proliferao no stio da leso. Todo processo acompanhado pela migrao de moncitos e outras partculas de LDL (2), conseqentemente, ocorre a formao de clulas espumosas (3). Desenvolve-se, ento uma aglomerao na regio de fosfolipdios, colesterol e clcio e, gradualmente, ocorre o endurecimento deste, formando salincias fibrosas e resistentes que so as placas de ateroma. Como preveno da doena arterial coronariana, comum o uso de frmacos hipolipemiantes como adjuvantes da dietoterapia para pacientes com dislipoproteinemia. A busca de novos frmacos que possam atuar em uma reduo dos nveis de colesterol tem sido motivo de novas pesquisas.

Mestrando do curso de Agroqumica Departamento de Bioqumica e Biologia Molecular Universidade Federal de Viosa renato@tdnet.com.br Doutora, Professora Adjunta do Departamento de Bioqumica e Biologia Molecular da Universidade Federal de Viosa ttoledo@mail.ufv.br PhD, Professor Adjunto do Departamento de Qumica da Universidade Federal de Ouro Preto tjnagen.bh@zaz.com.br Mestre, Professor Assistente do Departamento de Veterinria da Universidade Federal de Viosa aloisio@mail.ufv.br 18 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Renato Matos Lopes

Tnia Toledo de Oliveira

Tanus Jorge Nagem

Alosio da Silva Pinto

FLAVONIDES Os flavonides compem uma ampla classe de substncias de origem natural, cuja sntese no ocorre na espcie humana. Entretanto, tais compostos possuem uma srie de propriedades farmacolgicas que os fazem atuar sobre sistemas biolgicos. Conseqentemente, muitas dessas propriedades atuam de forma benfica para a sade humana. Atualmente, j foram identificadas mais de quatro mil substncias pertencentes ao grupo dos flavonides (Peterson & Dwyer, 1998). Estruturalmente, os flavonides constituem substncias aromticas com 15 tomos de carbono (C15) no seu esqueleto bsico, sendo compostos fenlicos, que possuem nessa estrutura anis aromticos C6-C3C6. O esqueleto C15 dos flavonides biogeneticamente derivado do fenilpropano (C6-C3) e trs unidades de acetato (C 6). Portanto, flavonides so derivados de benzo-gama-pirona de origem vegetal (Yokozawa et al, 1997), podendo haver facilmente interconverso entre eles (vide figura 1). A explicao para a existncia de uma grande diversidade estrutural dos flavonides explicada pelas modificaes que tais compostos podem sofrer, tais como: hidroxilao, metilao, acilao, glicosilao, entre outras (Koes et al, 1994). Consumidos em grandes propores dentro de uma dieta humana regular, os flavonides so encontrados em vegetais, legumes, frutas, chs de ervas, mel, entre outros produtos de consumo cotidiano. Apesar do termo flavonide derivar do latim flavus, que significa amarelo, observa-se que os grupos flavonis e flavonas so incolores e que a classe das antocianinas possuem substncias que variam no seu espectro de colorao do verde ao azul. A tabela 1 apresenta algumas das principais classes de flavonides, assim como alguns dos seus principais representantes e caractersticas.

Esquema 1: Formao da placa aterosclertica

Propriedades farmacolgicas dos flavonides Diversos ensaios in vivo e in vitro vm comprovando e determinando a ampla variedade das atividades biolgicas dos compostos flavonodicos. Segundo Ratty & Das (1998), algumas dessas propriedades farmacolgicas j foram observadas por Szent-Gyorgi em 1936. Destacam-se, dentre outros, os seguintes efeitos dos flavonides sobre os sistemas biolgicos: capacidade antioxidativa (esta constitui a atividade mais elucidada pelos estudos at agora desenvolvidos); atividades antiinflamatria e de efeito vasodilatador; ao antialrgica; atividade contra o desenvolvimento de tumores, anti - hepatotxica, antiulcerognica; atuao antiplaquetria, bem como aes antimicrobianas e antivirais. Pesquisas recentes demonstraram que alguns flavonides atuam na inibio da replicao viral do agente causador da Sndrome da Imunodeficincia Hu-

mana HIV (Lin et al. 1997). Sabe-se que os flavonides podem inibir vrios estgios dos processos que esto diretamente relacionados com o incio da aterosclerose, como ativao de leuccitos, adeso, agregao e secreo de plaquetas (Hladovec, 1986b), alm de atividades hipolipidmicas (Lin et al, 1986) e aumento de atividades de receptores de LDL (Kirk et al, 1998). Segundo Anton & Beretz (1990), as propriedades farmacolgicas dos flavonides ainda no haviam sido totalmente avaliadas. Aps uma dcada de avanos nessa linha de pesquisa, pode-se afirmar que novos estudos toxicolgicos e farmacolgicos devem ser realizados, uma vez que a ampla diversidade estrutural desses compostos - bem como a capacidade de interao com outras substncias - nos reporta a imaginar que novas descobertas ainda podem e devem ser realizadas. Com o objetivo de se avaliar a ao hipolipidmica de flavonides e de corantes naturais em animais experimentais com hiperlipidemia induzida, o laboratrio de Biofrmacos da Universidade Federal de Viosa vem desenvolvendo uma srie de estudos para conhecer o potencial farmacolgico desses compostos. A seguir, so descritas algumas metodologias empregadas pelo laboratrio de Biofrmacos da Universidade Federal de Viosa, utilizando-se coelhos com hiperlipidemia induzida a partir de uma dieta rica em cido clico e colesterol ou aplicao de Triton: METODOLOGIA GERAL. Considerando-se um nmero determinado de coelhos machos, albinos, adultos, da Raa Nova Zelndia (com peso mdio de 2500 200g), dispostos em gaiolas individuais com temperatura local que varia entre 22 3 0 C, e taxa de umidade relativa do ar situada na faixa de 70%. Esses animais so submetidos a uma dieta com rao comercial SOCIL, na proporo de 130 g ao dia e gua potvel ad libitum ( figura 2). Aps o perodo de adaptao s condies locais, os animais so orBiotecnologia Cincia & Desenvolvimento 19

denados em grupos, de acordo com o tratamento a ser aplicado: a) Grupo controle; b) Controle + substncias indutoras de hipercolesterolemia; c) Controle + substncias indutoras de hipercolesterolemia + substncias teste (flavonides ou medicamentos). Os tratamentos so efetuados durante perodos predeterminados de tempo e, normalmente o tratamento dos animais realizado por via oral atravs de cpsulas (figura 3). Amostras de sangue so retiradas antes, durante e aps o tratamento desses animais para verificao e acompanhamento dos efeitos dos tratamentos sobre os constituintes lipdicos, o sangue retirado centrifugado a 7100 G por 15, para obteno do soro. As dosagens sorolgicas so realizadas e os resultados do colesterol, do colesterol-HDL e dos triacilgliceris so obtidos por meio de Kits Biolab no equipamento multiparamtrico Aliz (figura 4). As substncias utilizadas como indutores das hiperlipidemias so: colesterol a 1% e cido clico 0,1% misturados rao, assim como a aplicao intraperitonial de Triton WR 1339 na dose de 300mg/kg de peso corporal do animal, utilizando como veculo NaCl 0,9%. Triton tambm conhecido como tyloxapol, um detergente no aninico de estrutura polimrica da Sigma, cuja utilizao vem sendo amplamente empregada para promover hiperlipidemia em cobaias (Mathur et al., 1964; Sharma, 1979; Choi et al., 1991). RESULTADOS OBTIDOS Nossos trabalhos demonstram que naringenina e chitosan tm efeitos sobre lipdios no soro de coelhos com hiperlipidemia induzida por Triton. Certificou-se, inclusive, que a associao entre naringenina e chistosan foram mais eficazes no controle do metabolismo lipdico. Os resultados obtidos demonstram que, em um efeito sinrgico das duas substnciasteste, promovem uma reduo de 71,42% de triacilgliceris, em comparao com o grupo de animais que apresentaram hiperlipidemia induzida pelo Triton ( Lopes, 2000).
20 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Figura 1: Interconverso dos principais grupos de flavonides. Adaptado de Domingues (1973)

O flavonide Naringina associado antocianina e ao carmim (corantes naturais utilizados na indstria de alimentos) reduziram em at 70,21% os triacilgliceris e em 63,01% os nveis de colesterol em ratos hiperli-

FIGURA 2: Coelho da Raa Nova Zelndia confinado em gaiola individual durante o tratamento com a substncia-teste pidmicos, atravs de Triton. Naringina e antocianinas foram tambm as responsveis pelo acrscimo de 15,27% de colesterol HDL, quando comparado aos animais tratados apenas com a rao e o indutor ( Nagem

et al., 1999). Dessa forma, a associaes entre naringina/antocianina e naringina/carmim demonstraram alta eficincia na reduo dos nveis de colesterol e triacilglicerol. Os flavonides quercetina, morina e o medicamento cido nicotnico, empregados de forma isolada e associada, apresentaram ao no metabolismo lipdico em ratos machos hiperlipidmicos (Santos et al. 1999a). Os resultados mostraram uma reduo de 83,77% de triacilgliceris e 76,89% de colesterol, quando se empregou um tratamento conjunto de morina e cido nicotnico. Quercetina e cido nicotnico promoveram uma variao positiva em 21,96% para o colesterol-HDL. O cido nicotnico um medicamento empregado de forma usual no controle de nveis de lipdios no organismo. Aes hipolipidmicas desse medicamento decorrem da inibio da liplise do tecido adiposo, mobilizao dos cidos graxos, reduo da esterificao dos triacilgliceris no fgado e aumento da lipase

Tabela 1: Principais classes de flavonides e descrio de suas caractersticas bsicas CLASSES Antocianinas COLORAO Azul, vermelha e violeta EXEMPLOS Cianidina; Delfinidina; Peonidina. Catequina; Epicatequina Luteoforol; Procianidina. Theaflavina Hesperidina; Naringenina. Apigenina; Luteolina; Diosmetina; Tangeretina; Nobiletina Quercetina; Rutina; Mircetina; Kaempherol Daidzena; Genistena. COMENTRIOS Antocianinas esto predominantemente em frutas e flores e provavelmente foram os primeiros flavonides a serem isolados provenientes de pigmentos florais, conforme indicam seus prprios nomes. So usadas como corantes. Flavanas so encontradas em frutas e chs (verdes ou pretos). Biflavanas so encontradas em frutas, lpulo, nozes e bebidas como chs e gua de coco. O sabor peculiar de algumas bebidas, frutas, chs e vinhos devido, principalmente, presena das biflavanas. Flavanonas so encontradas quase que exclusivamente em frutas ctricas. Flavonas so encontradas quase que exclusivamente em frutas ctricas. Mas tambm em cereais, frutas, ervas e vegetais. Conferem o pigmento amarelo em flores. Os compostos mais comuns so a apigenina e a luteolina. Os flavonis esto presentes em diversas fontes, sendo predominantes em vegetais e frutas. A quercetina o principal representante da classe. Isoflavonides so encontrados quase que exclusivamente em legumes, particularmente na soja. Fonte: Adaptado de Peterson & Dwyer, 1998 Nagem et al, 1995; Santos et al, 1999c). CONCLUSES Os resultados obtidos demonstram redues estatisticamente significativas para os nveis de colesterol e de triacilgliceris, assim como aumento dos valores de colesterol-HDL, destacando-se, inclusive, efeitos sinrgicos dos compostos flavonodicos testados. Dessa forma, fundamental o desenvolvimento de novas pesquisas sobre o potencial dos flavonides no tratamento e na preveno das hiperlipidemias, uma vez que a obteno de novos resultados serviro de instrumentos para a utilizao desses produtos na preveno de doenas cardiovasculares. As interaes com outros ncleos de pesquisas para o desenvolvimento de novas metodologias de anlises permitiro aprofundar os conhecimentos sobre os

Flavanas (mono, Incolor bi e triflavans)

Flavanonas Flavonas

Incolor para um amarelo plido. Amarelo plido

Flavonis

Amarelo plido

Isoflavonides

Incolor

FIGURA 3: Recipiente lacrado e identificado contendo as cpsulas com a substncia-teste a ser utilizada durante o ensaio biolgico lipoprotica ( Goodman & Gilmans, 1996). Diversos compostos flavonodicos de diferentes plantas, que foram extrados, isolados, identificados e quantificados, foram transformados quimicamente e empregados em ensaios biolgicos para avaliaes dos seus potenciais farmacolgicos sobre lipdios em ratos (Santos et al, 1999b;

FIGURA 4: Equipamento Aliz (Analisador Automtico de Bioqumica), capaz de realizar anlises de concentraes de constituintes sangneos, aproximadamente 180 testes/hora mecanismos de aes desses compostos naturais, assim como obter novas avaliaes de suas propriedades farmacolgicas. Evidencia-se tambm a importncia e a aplicabilidade de avaliaes de toxicidade de flavonides sobre sistemas biolgicos. Essa afirmao reside no fato de que ensaios toxicolgicos permitiro o emprego de doses
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 21

seguras dos flavonides como frmacos. O laboratrio de biofrmacos da Universidade Federal de Viosa possui interesse em interagir com outros ncleos de pesquisa, que, porventura, tenha como objetivo estudos farmacolgicos e toxicolgicos de flavonides, corantes naturais ou outros produtos de origem natural.

flavonoid biosynthetic pathway in plants: function and evolution. Bioessays, vol.16 (12):123-132. Leite, P.F. (1994). Risco cardiovascular: Fatores metablicos e nutricionais, diagnstico e tratamento. Editora Acta Mdica Ltda. 175p. Lin, B.B.; Chen, H.L & Huang, P.C. (1986). Effects on instant Pauchong Tea, Cathecin, and Caffeine os serum cholesterol and serum low-density-lipoprotein in mice. Nutr. Rep. Int. 34:821-829. Lin, M.; Anderson, H.; Flavin, M.T.; Pai, Y.S. (1997). In vitro antiHIV activity of bioflavonoids isolated from rhus sucedanea and garciania multiflora. Journal Natural Products, vol. 60 884-8. Lipid Research Clinics Coronary Primary Prevention Trial Results. (1984). Reduction in incidence of coronary heart disease to cholesterol lowering. Ibid. 251:365-374. Lopes, R.M.; Oliveira, T.T.; Nagem, T.J.; Pinto, A.S; Camini, N.A. & Leo, M.A.(2000). Efeitos do chitosan e naringenina sobre lipdeos no soro de coelhos com hiperlipidemia induzida por Triton. RBAC, vol.32(2): 69-71. Mathur, K.S.; Singhal, S.S.; Sharma, R.D. (1964). Effect of bengal gram on experimentally induced high levels of cholesterol in tissues and serum in albino rats. Journal Nutrition 84:201-204. Nagem, T.J.; Oliveira, T.T.; Silva, M. C.; Miranda, L.C.G. (1995). Efeito de derivados flavonodicos sobre lipdeos em ratos. Arq. Biol. Tecnol. 38(3):859-868. Nagem, T.J.; Pereira, W.L.; Oliveira, T.T.; Pinto, A.S.; Oliveira, M. G.& Stringheta, P. C. (1999). Efeitos de naringina e dos corantes

naturais antocianina e carmim no metabolismo lipdico. Rev. Bras. Farm., 80(1/2):25-28. Peterson, J & Dwyer J. (1998) Flavonoids: Dietary occurence anb biochemical activity. Nutrition Research, 18(12):19952018. Ratty, A., K. and Das, P. N.(1998) Effects of Flavonoids on Nonenzymatic Lipid Peroxidation: Structure-Activity Relationship. Biochemical Medicinea and Metabolic Biology 39, 69-79. Santos, K.F.R.; Oliveira, T.T.; Nagem, T.J.; Pinto, A.S; Oliveira, M.A. & Soares,J.F (1999a). Efeitos das associaes de morina-cido nicotnico e quercetina cidonicotnico no controle de lipdeos. RBCA, 31(1):5-7. Santos, K.F.R.; Oliveira, T.T.; Nagem, T.J.; Pinto, A.S; Oliveira, M.G.A. (1999b). Hypolipidemic effects of naringenin, rutin, nicotinic acid and their associations. Pharmacological Research, Vol 40(6): 493-496. Santos, K.F.R.; Oliveira, T.T.; Nagem, T.J.; Pinto, A.S; Stringheta, P.C. (1999c). Associations of flavonoids and natural dyes in the control of lipidic metabolism. Acta Farma. Bonaerense 18(2): 127-30. Sharma, R.D. (1979). Effects of various isoflavones on lipid levels in triton treated rats. Atherosclerosis, 33:371-375. Truswell, A.S. (1984). End of static decade for coronary disease. British Medical Journal. 289(64): 509-510. Yokozawa, T.; Dong, E.; Liu, Z.W. & Shimizu, M. (1997). Antioxidant activy of flavones and flavonols in vitro. Phytotherapy Research. Vol.11:446-450.

REFERNCIAS Anton, R ; Beretz, A.(1990). Flavonoids: antithrombotic agents or nutrientes? Bull. Acad. Natle. Md. , 174:6 - 709-14. Choi, J.S.; Yokosawa, T.; Oura, H. (1991). Antihyperlipidemic effect of flavonoids from prunus davidiana. Jour. Nat. Prod. 54(1):218-224. Domingues, X.A. Mtodos de Investigacin Fitoqumica. 1a Ed. Editorial Limusa. Mxico (1973). Feinleb, M.(1984). The magnitude and nature of the decrease in coronary artery disease mortality rate. American Journal of Cardiology. Vol.54:2c-6c. Goodmans, J.G.; Gilman, A.G.; Limbird, L.E. The pharmacological basis of therapeutics 9a Ed. The McGrawHill Company,. pp. 1843, 1996. Hladovec, J (1986b). The effect of antithrombotics in a new model of arterial thrombosis. Thromb. Res., 41:665-670. Kirk, E.A.; Sutherland, P.; Wang, S.A.; Shait, A. & Leboeuf, R.C. (1998). Dietary isoflavones reduce plasma cholesterol and atherosclerosis in C57BL/6 mice but not LDL-receptor-deficient Mice. J. Nutr. 128:954-954. Koes, R. E.; Quattrocchio, F.; Mol, J. N. M. (1994). The
22 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento