INTERAO

ANTGENO-ANTICORPO

Dayse Locateli
2005

 Interao reversvel Complementariedade Especificidade Ligaes no covalentes: Pontes de Hidrognio Ligaes inicas Interaes hidrofbicas Interaes de Van der Waals

 Afinidade Fora de interao entre um nico stio de ligao Ag-Ac (em um nico eptopo). Avidez Fora de interaes total entre Ac e Ag. Soma das afinidades de todos eptopos envolvidos

Reao cruzada
Dois Ag diferentes apresentam um eptopo idntico Ac especficos para um eptopo se ligam a um eptopo no relacionado, mas com propriedades qumicas similares.

Aplicaes
Pesquisa

Diagnstico
Soroepidemiolgia

Mtodos: Precipitao Aglutinao Imunoensaios

Metodologias que utilizam:

1) Reagentes no marcados Reao de precipitao Reao de aglutinao

2)

Reagentes marcados RIA ELISA Imunofluorescncia Western Blot

Reagentes no marcados
Detectam / quantificam as conseqncias da ligao Ag Ac

Reao de Precipitao
Interao: ac - ag solvel forma uma rede que pode desenvolver um precipitado visvel. Anticorpos bivalentes + Antgenos multivalentes

PRECIPITADO

1- Reao de precipitao em solues

Reao quantitativa: Qtidade cte Ac Qtidade cresc. Ag

Qtidade precipitina

2 - Reao de Precipitao em gel Utiliza uma matriz de gar

Ag + Ac = linha de precipitao visvel a) Imunodifuso radial
(Mtodo de Mancini)

Ag ou Ac fixos Dosagem de protenas sricas

b) Imunodifuso dupla

Identidade de Ags = Ac de reatividade conhecida

Reaes de Aglutinao
Ac + Ag particulado aglutininas

Agregao visvel de partculas

Eritrcitos Bactrias Fungos ltex

Efeito pr-zona

Aglutinao Direta
Clulas ou partculas insolveis + Ac = Aglutinao
Deteco Acs especficos Quantificao

Tipagem ABO
Testes confirmatrios para sfilis

Aglutinao bacteriana Presena de infeco Diferenciao de espcies

Aglutinao passiva
Ag solveis associados a outras superfcies
(Partculas de ltex ou superfcie de hemcias)

Inibio da Aglutinao

Reagentes Marcados

Detectam / quantificam diretamente a ligao Ag - Ac

Ensaio Imunoadsorvente Ligado Enzima - ELISA

Ac marcados
com Enzimas

+ Ag +

substrato = COR (incolor)

Fosfatase alcalina Peroxidase B-galactosidase

Direto = Ag Indireto = Ac

Qualitativos Quantitativos

ELISA Indireto

ELISA Direto ou Sanduche

ELISA Competitivo

Aplicaes do ELISA: Testes de rotina em Laboratrios Clnicos e de Pesquisa Vantagens: Teste de alta sensibilidade Permite quantificar Ag ou Ac das amostras Seguros e de baixo custo

Imunofluorescncia

luz

Ac + fluorocromo

Ac + Fluorocromo

r ght

IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA

IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA

Reagentes secundrios:

Anticorpo secundrio marcado com fluorocromo protena A marcada com fluorocromo = poro Fc das IgGs

Isotiocianato de fluorescena (FITC) Ficoeritrina (FE)

VERDE VERMELHA

Fc

Aplicaes: Identificar subpopulaes de linfcitos

Identificar espcies bacterianas localizao de hormnios Deteco complexos ag-ac em doenas auto-imunes Deteco anticorpos anti-DNA Teste qualitativo

Citometria de Fluxo
Separao de clulas ativadas por fluorescncia Anticorpos contra molculas de membrana ou Antgenos do Conjunto de Diferenciao (CD) Cada Ac marcado com um fluorocromo diferente Teste qualitativo e quantitativo

CD 18 CD 4 CD 125

CD 147

 Tamanho Granulosidade Fluorescncia

Aplicaes:
Determinar o tipo e no de cls. sanguneas brancas CD4

isolar populaes celulares

distribuio de cls de acordo com a densidade dos Ag

CD8

o tamanho celular.

CD20
Uso de mltiplos anticorpos fluorescentes

HIV , Leucemias

Western Blotting

Eletroforese de protenas Diferena de tamanho (PM) Mobilidade da protena Deteco Ag ou Ac

Western Blotting
Gel membrana de transferncia papel filtro preenchimento tela de suporte Gel/ membrana/ filtro

Separao e deteco de protenas Tampo Identificao de Ac especfico ( +) Ac radiomarcado ou (-) Ac sec. ligado a enzima

Radioimunoensaio RIA
Hormnio protenas sricas drogas vitaminas Ac

Molculas marcadas com ISTOPO

0,0001 microgramas/ mL

 Marcaes: I125: emite raios gama H3: raios beta Aplicaes: Testes que necessitem de alta sensibilidade Triagem vrus da hepatite B em doadores de sangue Pesquisa

Desvantagem:
No um teste seguro!