VI Workshop de Ps-Graduao e Pesquisa do Centro Paula Souza ISSN: 2175-1897

Atividade Mutagnica em Allium cepa da gua de Irrigao de hortalias na regio de Itapecerica da Serra-SP.
Priscila M. de Maio Lacerda CEETEPS So Paulo Brasil pri2234@yahoo.com.br Cludia Santos Souza FATEC - SO So Paulo Brasil claudiass89@yahoo.com.br Slvia Pierre Irazusta CEETEPS So Paulo Brasil silvia.pierre@hotmail.com Resumo Sabe-se que em quase todas as regies do mundo, a agricultura irrigada o setor que requer maior demanda por gua. Entretanto, no uso da gua para fins agrcolas, alm dos aspectos quantitativos, deve-se considerar os qualitativos. No que diz respeito irrigao de hortalias, preciso tomar cuidado com a qualidade da gua empregada, pois guas superficiais utilizadas para este propsito, principalmente nos cintures verdes dos grandes centros urbanos, apresentam-se muitas vezes, contaminadas por efluentes domsticos e/ou industriais no tratados. Este trabalho teve como objetivo avaliar a mutagenicidade de guas de irrigao de hortalias, numa regio de Mananciais da Grande So Paulo. Para isso foram feitos bioensaios utilizando razes de Allium cepa para avaliar os ndices de aberraes cromossmicas (IAC) e o ndice de Microncleos (IMN) em clulas do meristema e da poro de F1 das razes . Palavras-chave: Mutagenicidade, gua de irrigao, Allium cepa.

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Introduo As hortalias so parte integrante da dieta da populao mundial [1]. A preocupao com a sade e o conhecimento de que muitas espcies so excelentes fontes de vitaminas, sais minerais e substncias antioxidantes, tornam o consumo destes alimentos crescente em nosso meio [2]. Sabe-se que em quase todas as regies do mundo, a agricultura irrigada o setor que requer maior demanda por gua. Entretanto, no uso da gua para fins agrcolas, alm dos aspectos quantitativos, deve-se considerar os qualitativos. No que diz respeito irrigao de hortalias, preciso tomar cuidado com a qualidade da gua empregada, pois guas superficiais utilizadas para este propsito, principalmente nos cintures verdes dos grandes centros urbanos, apresentam-se muitas vezes, contaminadas por efluentes domsticos e/ou industriais no tratados [3]. A necessidade cada vez maior de se obter gua na quantidade e qualidade desejadas para os seus diversos usos leva necessidade de se planejar e coordenar sua utilizao, considerando e analisando suas caractersticas fsico-qumicas, biolgicas, bem como as ecotoxicolgicas. Essas anlises so extremamente importantes, pois so indicadoras de contaminao antrpica proveniente de esgoto domstico, fertilizantes, defensivos agrcolas ou resduos industriais. A utilizao de ensaios de carter ecotoxicolgico, que venham a dar informaes quanto ao efeito txico causado em ecossistemas por substncias qumicas nele presentes, torna-se cada dia mais importante nas avaliaes de impacto ambiental [4]. Deste modo, a realizao de ensaios de toxicidade tem sido includa em programas de monitoramento, constituindo uma das anlises indispensveis no controle de fontes de poluio [5]. Os vegetais superiores apresentam caractersticas que os tornam excelentes modelos genticos para avaliao de poluente ambientais, por isso tm sido utilizados com muita frequncia em estudos de monitoramento. Contudo, este destaque no se deve, apenas, sensibilidade de deteco de mutgenos em diferentes ambientes, mas tambm possibilidade de utilizao de diferentes clulas e rgos como biomarcadores genticos, capazes de detectar desde mutaes pontuais at as aberraes cromossmicas [6]. A anlise de microncleos serve como teste de mutagenecidade e um dos poucos mtodos diretos para mensurar danos em sistemas expostos a agentes mutagnicos ou carcinognicos potenciais e o teste de Allium cepa tem sido amplamente empregado com esse propsito [7]. O ndice mittico e o ndice de replicao so usados como indicadores de proliferao adequada das clulas [8], o que pode ser medido atravs deste sistema. O mtodo de avaliao de alteraes cromossmicas em razes de Allium cepa validado pelo Programa Internacional de Segurana Qumica (IPCS,OMS) e o Programa Ambiental das Naes Unidas (UNEP) como um eficiente teste para anlise e monitoramento in situ da genotoxicidade de substncias ambientais [9]. Este trabalho teve como objetivo avaliar a mutagenicidade de guas de irrigao de hortalias, de trs propriedades agrcolas de pequeno porte na regio de Itapecerica da Serra - SP.

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Metodologia 1. Coletas As amostras de gua foram coletadas em trs pontos de onde so captadas para irrigao de hortalias em uma regio de Mananciais da Grande So Paulo. Foram feitas duas coletas (maro e abril/2011), das quais fazem parte de uma srie de quatro campanhas de amostragem desenhadas para este projeto. No local foram medidos o pH e a temperatura, sendo as demais caractersticas fsico-qumicas, analisadas no Laboratrio de Qumica e Saneamento da Fatec SP. Outra poro das mesmas amostras foi enviada para o Laboratrio de Ecotoxicologia da Fatec Sorocaba. 2. Anlises Fsico-Qumicas A metodologia utilizada para a realizao das anlises a descrita no Standart Methods For The Examination of Water and Wastewater [10], adotada pela CETESB em suas normas tcnicas. As variveis de qualidade da gua foram analisadas frentes aos padres de qualidade estabelecidos na Resoluo CONAMA N. 357 de 2005 [11].Os parmetros analisados foram temperatura, pH, alcalinidade, condutividade, oxignio dissolvido, turbidez, cor e ferro. 3. Testes de Mutagenecidade com Allium cepa Estes testes foram feitos de acordo com o Protocolo proposto por Ma et al.1995 com modificaes [12]. Resumidamente seguem as seguintes etapas: - Germinao do bulbo - Coleta da raiz - Fixao em Carnoy - Hidrlise das razes em HCl 1N, 15a 60C - Repouso na soluo de Base de Shiff - Fixao em Carnoy - Montagem da regio meristemtica e da regio F1 da raiz em lmina com Carmim e leitura das lminas em Microscpio ptico

Resultados Os resultados das anlises realizadas nas duas primeiras campanhas so descritos: A amostragem da primeira campanha no ponto 2 foi inadequada para este ensaio e portanto, os resultados obtidos no foram conclusivos. Os dados obtidos da segunda campanha para os trs pontos selecionados so mostrados nas figuras 1 e 2. O ndice de Aberraes Cromossmicas (IAC) ou a atividade genotxica das amostras no foi estatisticamente diferente do controle negativo (Figura 1), realizado com gua destilada ou da torneira. J quando se considerou a atividade mutagnica, representada pelo ndice de Microncleo (IMN), observou-se atividade significantemente diferente do controle negativo nas amostras dos pontos 2, em todas as diluies e no ponto 3, nas diluies de

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100 e 50 %, mas no 25%.(Figura 2).

Figura 1 ndice de Aberraes cromossmicas (IAC) em Allium cepa

Figura 2 ndice de Microncelo (IMN) em Allium cepa *p<0,05

Discusso As freqncias de AC observadas nas clulas meristemticas de Allium cepa, aps exposio nas guas coletadas, em geral, no se mostraram superiores s encontradas para o controle negativo. Porm, se considerarmos P2 nas concentraes de 25% e P3 (50 e 25%), os resultados ultrapassaram ligeiramente ao controle negativo, entretanto no apresentaram diferenas estaticamente significativas. J em relao aos testes de mutagenicidade, em P2 nas concentraes (100, 50 e 25%) e P3 (100 e 50%) podemos verificar diferenas estatisticamente significativas em relao ao controle negativo, indicando portanto, que a gua nestes pontos apresenta atividade mutagnica. Quando analisadas as freqncias de MN das clulas meristemticas expostas s amostras de gua coletadas, em dois dos trs pontos amostrados,
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foram observados valores significativamente maiores do que o obtido para o controle negativo. As freqncias de MN observadas em P2 apresentaram um comportamento dose/resposta, isto a freqncia de MN foi proporcional s concentraes. Em P3, as concentraes de 100% (amostra bruta) e 50%, apresentaram valores significativamente maiores que o controle, enquanto que a diluio adicional (25%) atenuou o efeito. Esses resultados indicam a provvel presena de poluentes de natureza qumica nestas guas, j que no foram observadas alteraes nos parmetros fsico-qumicos (dados no apresentados) analisados. Segundo os trabalhos de Leme e Morales [13] os testes com A. cepa tem sido usados para detectar uma grande variedade de poluentes ambientais tais como metais pesados, agrotxicos, derivados de petrleos, corantes txteis, misturas complexas, entre outros agentes. Utilizando esta mesma metodologia, em um estudo anterior El-Shahaby et.al. [14], analisaram uma rea de Sandub, distrito de Mansoura, Paquisto, amostrando quatro stios ao longo de 6 quilmetros do rio receptor de efluentes industriais, em stios a montante e a jusante das descargas. Seus resultados apresentaram provas de que as amostras de gua eram altamente mutagnicas, correlacionando-se parcialmente com as determinaes de metais pesados nestas amostras. Nossos dados preliminares nos conduzem a novas campanhas de amostragem e a redirecionar o estudo para pesquisa de compostos qumicos, por exemplo, metais pesados, que so reconhecidamente relacionados a mutagenicidade em efluentes e guas superficiais. Em um estudo realizado por Silva et al. [15], foi observada significante reduo da atividade mutagnica do efluente industrial de uma indstria metalrgica, aps tratamento com EDTA, conforme recomendao do procedimento TIE (Toxicity Identity Evaluation/USEPA). Este resultado permite concluir que a atividade mutagnica do efluente industrial era decorrente, pelo menos em parte, presena de metais pesados.

Concluso Os pontos 2 e 3 nas maiores concentraes apresentaram altos valores de IMN quando comparados ao controle. Para o ponto 2 observou-se que a atividade obedeceu uma relao dose-resposta. Tendo em vista que os parmetros fsico-qumicos no apresentaram discrepncias em relao aos valores de referncia, os dados preliminares sugerem a presena de contaminantes qumicos desconhecidos que, nestes pontos, podem estar contribuindo para estes efeitos. Desta forma, o estudo deve prosseguir, continuando-se as coletas e focando as anlises na pesquisa destes contaminantes, comeando pelos metais pesados.

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Referncias

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[14] El-SHAHABY, A.O.; ABDEL M.H.M.; SOLIMAN, M.I; MASHALY, I.A. Genotoxicity screenig of industrial wastewater using the Allium cepa chromosome aberration assay. Pakistan Journal of Biological Sciences, v. 6, p. 23-28, 2003. [15] SILVA, L. F., BREGAGNOLO, L., SOUZA, C.C.; IRAZUSTA, S.P. Mutagenicidade do efluente de uma indstria metalrgica Sorocaba Aplicao do TIE (Fase 1). XI Simpsio de Iniciao Cientfica da Faculdade de Tecnologia de So Paulo (FATEC), So Paulo, 2009.

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