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4.5 Espectrofotometria de Absoro Atmica

Tcnica: espectrofotometria de absoro atmica Equipamento: espectrofotmetro de absoro atmica Determinao: absoro de luz concentrao em ppm

4.5.1 Introduo: Na espectroscopia molecular, geralmente medimos a absorbncia da luz numa amostra liquida. J na espectroscopia atmica, uma amostra liquida aspirada (sugada) para a chama, cuja temperatura est entre 2.000 e 3.000 C, o liquido evapora e o slido remanescente atomizado (quebrado em tomos) na chama, que substitui a cubeta na espectrofotometria molecular. O caminho tico da chama geralmente de 10 cm. A absoro atmica um mtodo preciso para a determinao da presena e da quantidade de um elemento metlico numa determinada amostra. Na absoro atmica (EAA), medida a absoro de luz proveniente de uma outra fonte de emisso, luz esta que atravessa a chama onde parcialmente absorvida pelos tomos presentes na forma no excitada. A diminuio da intensidade de luz incidente, medida por um fotodetector sensvel, d a medida da concentrao de um certo elemento na soluo que foi vaporizada na chama; esta medida expressa em porcentagem de absoro ou em absorbncia. Uma das caractersticas da fonte de emisso que ela contm o elemento a ser analisado na chama. As lmpadas de ctodo oco contm no ctodo o elemento a ser analisado na chama. Assim, se queremos determinar cobre, a lmpada de ctodo oco deve conter cobre no ctodo; portanto, a amostra vaporizada na chama ser irradiada pela lmpada cujo ctodo contm o elemento a ser analisado. A caracterstica bsica do processo de absoro atmica que os tomos no estado no excitado ou fundamental absorvem o comprimento de onda () emitido pela lmpada cujo ctodo contm o mesmo tipo de tomo a ser analisado na chama. A Absoro Atmica apresenta duas vantagens que favorecem o mtodo: a) Sensvel, uma vez que detecta tomos no estado fundamental, sendo que estes predominam em maior nmero na chama; b) Especfico ou seletivo, que elimina interferncias ticas, pois se utiliza comprimentos de onda do prprio elemento a ser analisado; Atualmente, a absoro atmica pode determinar mais de 65 elementos por mtodos diretos, fornecendo resultados quantitativos em concentraes baixssimas, na ordem de ppm e at ppb.

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4.5.2 O processo da absoro atmica: Em resumo, a espectroscopia atmica abrange tcnicas analticas que possuem os seguintes requisitos: - Baseiam-se no USO DA CHAMA para aquecer e vaporizar a amostra lquida; - Quando uma soluo contendo um sal do metal ou outro composto do metal introduzida na chama, ocorrem os seguintes processos, em rpida sucesso:

RESUMINDO: Quando uma soluo de um sal metlico (ou outro composto metlico) for aspirada por uma chama, forma-se um vapor que contm tomos do metal, e poder ocorrer: a) Alguns TOMOS METLICOS GASOSOS podem ser PROMOVIDOS A UM NVEL DE ENERGIA MAIS ELEVADO (1%), para permitir a EMISSO DE RADIAO CARACTERSTICA DO METAL (ex. a cor amarela da chama do tomo de sdio) - a luz emitida na chama, originada pela excitao trmica dos tomos, que detectada e analisada - essa a base da FOTOMETRIA DE CHAMA; b) Um no muito maior de TOMOS permanecer no ESTADO FUNDAMENTAL (99%), e so capazes de ABSORVER A RADIAO EM SEUS COMPRIMENTOS DE ONDA ESPECFICOS, que o comprimento de onda que os tomos emitiriam se fossem excitados; SE A LUZ DESSE COMPRIMENTO DE ONDA FOR PASSADA ATRAVS DE UMA CHAMA QUE CONTENHA OS TOMOS EM QUESTO, uma parte da luz ser ABSORVIDA, e a extenso da absoro ser proporcional ao no de tomos no estado fundamental, presentes na chama - mede-se a absoro de luz proveniente de uma outra fonte de emisso, luz

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esta que atravessa a chama onde parcialmente absorvida pelos tomos no estado fundamental - essa a base da Espectroscopia de Absoro Atmica (EAA);

Representao esquemtica da absoro e emisso de tomos numa chama. Na absoro atmica, os tomos absorvem parte da luz vinda da fonte e a luz restante alcana o detector. A emisso atmica proveniente de tomos que esto num estado excitado devido alta energia trmica da chama. O tomo pode emitir o mesmo comprimento de onda que foi absorvido ou pode cair para outros estados energticos e emitir outros comprimentos de onda.

Nebulizao da amostra em soluo (aerossol)

Amostra nebulizada misturada com os gases combustvel e oxidante que produzem a chama.

Na chama: vaporizao do solvente evaporao da amostra dissociao das molculas gasosas tomos metlicos gasosos livres

Passagem de radiao do metal na chama (atravs da lmpada de catodo oco) para absoro pelos tomos metlicos gasosos no estado fundamental:

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4.5.3 Instrumentao:

Espectrofotmetros de Absoro Atmica Esquema de um espectrofotmetro de absoro atmica:

FONTE (EAA)

CHAMA

SELETOR DE COMPRIMENTO DE ONDA

DETECTOR

NEBULIZADOR

LEITURA

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Esquemas de um espectrofotmetro de absoro atmica

O espectrofotmetro de absoro atmica constitudo basicamente por: a. FONTE DE EMISSO (LMPADA DE CTODO OCO): emite o do metal que vai ser analisado na amostra. As fontes mais populares e eficientes so as chamadas lmpadas de ctodo oco, um tubo cheio de gs raro cujo ctodo feito com o elemento metlico (ou liga de elementos metlicos) desejado. O ctodo oco emite linhas espectrais bem estreitas e de intensidade estvel. A lmpada de ctodo oco consiste em dois eletrodos onde o ctodo tem a forma de um cilindro de vidro com janela de quartzo, feito com o metal especificado (ou uma liga) e o nodo um fio de tungstnio; a lmpada preenchida com gs nobre a baixa presso; a descarga de corrente eltrica produzir uma descarga luminosa, com a emisso vinda de dentro do ctodo. As radiaes consistem em do metal que sero direcionadas para a amostra na chama. O ctodo dessas lmpadas tem um s elemento, mas pode ter tambm uma liga contendo mais de 2 elementos, permitindo radiao caracterstica de vrios elementos emitidos com intensidade adequada e possibilitando a determinao de dois ou mais elementos. Ex.: liga de Cu, Zn e Pb ou de Cu, Ag, Cd e Zn.

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b. SISTEMA NEBULIZADOR-QUEIMADOR, que provoca uma nvoa fina da soluo amostra e o distribui na chama. A soluo atomizada no queimador (ou combustor), junto com os gases da chama. So os elementos mais importantes do aparelho, devem ser constantes e estveis. No devem estar sujeitos a corroses e devem deixar passar solues relativamente concentradas sem provocar entupimentos. Sua funo converter a soluo amostra num aerossol ou nvoa, introduzindo a soluo na chama em um ritmo estvel e reprodutvel; a formao de gotas menores da amostra chamada nebulizao. Uma fina suspenso de partculas liquidas em um gs chamado aerossol. A abertura do atomizador, essencialmente pequena, pode ser facilmente bloqueada por partculas slidas existentes no ar ou na soluo, como tambm por produtos de corroso do queimador, ou por sais da prpria soluo.

c. A CHAMA PARA ABSORO ATMICA deve produzir temperaturas > 2.000C. Para isso, deve-se queimar um GS COMBUSTVEL NUM GS OXIDANTE. A chama constitui o fator de maior limitao e interferncias. A chama usa oxignio, que complica ainda mais algumas anlises. Outras vezes, a chama no suficientemente quente para certa anlise. Embora haja tcnicas sem chama, ela ainda a fonte de calor mais acessvel e mais econmica. - GS COMBUSTVEL = propano, gs natural (metano), hidrognio, acetileno - GS OXIDANTE = oxignio diludo com nitrognio ou argnio, ar, xido nitroso Para um grande nmero de elementos usa-se chama produzida pela mistura de ar-acetileno ou acetileno-oxignio, que atinge 2300 C. Para os chamados elementos refratrios, que necessitam maiores temperaturas para a decomposio de seus compostos, usa-se o xido nitroso (N2O) acetileno. Esta chama atinge 3000C.

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A temperatura da chama no afeta muito as caractersticas de absoro, uma vez que a temperatura seja suficientemente alta para produzir o vapor atmico do elemento a ser analisado. Porm, preciso considerar que, por outro lado, nestas altas temperaturas ocorrem fenmenos de ionizao ou excitao de alta porcentagem dos tomos presentes, o que diminui o nmero de tomos no estado fundamental. Composio da chama:

acetileno + ar = determina mais de 30 metais propano + ar = determina metais facilmente convertidos vapor atmico acetileno + xido nitroso = determina metais como Al e Ti que formam xidos refratrios. Tabela 1 Temperaturas mximas obtidas com vrias misturas gasosas
Gs combustvel Temperatura C Em ar Em oxignio Gs de iluminao Propano Butano Hidrognio Acetileno Cianognio Hidrognio queimado em flor 1700 1925 1900 2100 2200 2700 2800 2900 2780 3050 4550 4000

Desvantagens da chama: Interferncias (composio da chama) Formao de xidos refratrios (reao na chama) Amostra sob a forma de soluo Requisitos: Presso dos gases e a velocidade de nebulizao da soluo devem ser constantes Chama firme e estvel

d. MONOCROMADOR: colocado depois da chama, ajustado para ler a intensidade do comprimento de onda do metal transmitido pela chama. Seleciona o comprimento de onda na regio UV e Visvel, atravs de um prisma de quartzo ou rede de difrao. Sua funo no espectrofotmetro de absoro atmica isolar qualquer radiao transmitida na chama de comprimento de onda diferente do metal analisado, aps a amostra absorver a radiao da fonte. Por isso, ele colocado aps a chama que contm a amostra.

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e. FOTODETECTOR: transforma o sinal luminoso em sinal eltrico. Utilizam-se tubos fotomultiplicadores, que medem radiao no intervalo de 2100 a 6800 ngstrons, cujo resultado em absorbncia e/ou concentrao.

4.5.4 Otimizao do espectrofotmetro de absoro atmica: Ao se realizar uma analise por absoro atmica, deve-se seguir os procedimentos de otimizao (ajuste) do aparelho: Alinhar a fenda do queimador com o caminho tico da fonte de emisso (L.C.O.) Verificar a composio da chama para o elemento a ser analisado Acender a chama, aspirar a soluo e calibrar para o de mxima absoro. Devem-se observar os seguintes itens quando se opera um espectrofotmetro de absoro atmica: O aparelho deve estar em local ventilado, com sistema de exausto, pois alguns solventes orgnicos, especialmente os clorados, produzem gs txico na chama. Manter os cilindros de gs amarrados num compartimento ventilado, longe de qualquer fonte de calor ou chama, devidamente identificados. Fechar adequadamente a vlvula do cilindro de gs combustvel, depois de usar o equipamento. Verificar periodicamente vazamentos. Tomar cuidado ao usar na chama solventes orgnicos volteis e inflamveis. Nunca olhar diretamente para a chama ou para a lmpada de ctodo oco.

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4.5.5 Interferncias em absoro atmica: Espectral: observada quando a medida da radiao absorvida erroneamente mais alta devido absoro de uma espcie que no seja o metal de interesse. Ex.: determinao do Hg (=253,652 nm) com interferncia do Co (=253,649 nm) em [Hg] > 200 mg/L. Ex.: determinao do Fe (=352,43 nm) com interferncia do Ni (=352,45 nm). Leitura: maior Controle: usar a menor largura de fenda do monocromador ou remover o interferente da amostra. Absoro de fundo ou background: causada por espalhamento da luz por partculas na chama ou por absoro da radiao provenientes da lmpada (fonte) por molculas presentes na chama. Ocorre em < 300 nm Leitura: maior Controle: aspirar soluo branco antes das medidas De matriz: causada pela viscosidade ou natureza do solvente da amostra. Ex.: solventes orgnicos aumentam 2 a 4x a absoro numa dada concentrao em comparao com o meio aquoso. Controle: preparar solues padres com o mesmo solvente da amostra.

Qumica: resulta da incompleta dissociao dos compostos do elemento em estudo na chama ou de uma reao qumica com a formao de xidos ou hidrxidos termicamente estveis do metal de interesse com outros compostos presentes na chama (interferentes). Afeta a dissociao da amostra na chama durante a formao dos tomos no estado fundamental e o n de tomos passveis de absoro atmica. Leitura: menor Controle: aumento da energia da chama, usando-se uma composio de gases que resulte numa chama mais quente ou adio de um outro elemento que forme compostos termicamente estveis com o interferente. De ionizao: o nmero de tomos excitados termicamente na chama depende da temperatura e o nmero de tomos restantes no estado fundamental quase no afetado pela variao de temperatura. Para chamas de temperaturas suficientemente elevadas maior nmero de tomos ser excitado, diminuindo, pois o nmero de tomos no estado fundamental e prejudicando a absoro. Este efeito notvel no caso de elementos alcalinos e alguns alcalino-terrosos, que apresentam potenciais de ionizao relativamente baixos e, portanto, so ionizados nas chamas mais quentes. Os compostos dos metais alcalinos j esto completamente dissociados em seus vapores atmicos em temperaturas de 2000 a 3000 C, encontrando-se alguns tomos ionizados. Potssio a 2000C est mais de 80% ionizado, deixando apenas 20% de tomos disponveis para a absoro atmica. Em chama fria de ar/gs de iluminao, apenas alguns tomos de K esto ionizados. Causada por chamas de temperaturas elevadas, onde parte dos tomos no estado fundamental passar ao estado excitado e da para o ionizado.

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Mais comum em metais alcalinos e alcalinos terrosos. Leitura: menor Controle: Adio de um reagente supressor de ionizao.

4.5.6 Aplicaes da Absoro Atmica:

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4.6 FOTOMETRIA DE C HAMA Tcnica: fotometria de chama Equipamento: fotmetro de chama Determinao: emisso de luz (E) concentrao 4.6.1 Introduo: Na espectrofotometria de absoro UV/Vis, a amostra era submetida a um feixe de radiao (luz) proveniente de uma lmpada de dentro do espectrofotmetro, que emitia uma radiao no comprimento de onda especfico para que a substncia absorva. A quantidade de luz que ela absorvia naquele comprimento de onda era proporcional sua concentrao na amostra. O que voc viu at agora, foram os mtodos de absoro de luz! Entretanto, existem outros mtodos ticos que tratam da luz emitida pela substancia na amostra: eles so chamados mtodos de emisso de luz, porque captam a luz que a substancia emite ao ser submetida a uma forma de energia (calor de uma chama) que ir decompor a amostra em tomos no estado gasoso. Estes tomos no estado gasoso, iro emitir radiao (luz) em determinados comprimentos de onda especficos, que sero medidos e quantificados, proporcionalmente concentrao na amostra. Dentre os mtodos ticos de emisso mais comuns est a FOTOMETRIA DE CHAMA (tambm chamada de Espectrofotometria de Emisso de Chama). 4.6.2 O processo de emisso de luz: A amostra liquida decomposta em tomos no estado gasoso pelo calor de uma chama, e em seguida, esses tomos iro emitir luz, cuja intensidade proporcional concentrao na amostra. Em temperatura bastante alta, a maioria dos compostos se decompe em tomos na fase gasosa. A principal vantagem desse tipo de tcnica instrumental que podemos determinar substancias em uma concentrao muito menor na amostra, da ordem de mg/L (ou ppm = partes por milho), pois quantificado a emisso de luz por cada tomo da substancia no estado gasoso, e no de molculas no estado liquido, como na espectrofotometria de absoro UV/Vis. Assim, podemos resumir as diferenas entre as espectrofotometrias de absoro e de emisso na tabela abaixo:

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4.6.3 Princpio do mtodo: Na espectrofotometria de absoro UV/VIS, geralmente medimos a absorbncia da luz numa amostra liquida, que colocada em uma cubeta. J na fotometria de chama, uma amostra liquida aspirada (sugada) para dentro da chama, cuja temperatura muito alta (1.700 a 3.000C), o liquido evapora e os tomos gasosos assim formados vo emitir luz, de acordo com a sua concentrao na amostra. Por isso, podemos definir a fotometria de chama como uma tcnica de medida da concentrao de um determinado produto qumico, alcalino e alcalino terroso, quando este introduzido em uma chama na forma de aerossol. Mas esta tcnica tem uma limitao: ela s empregada para anlise de metais alcalinos Na e K (mais freqente) e alguns alcalino-terroso como Ca e Li (menos freqente), em amostras liquidas. 4.6.4 Instrumentao Fotmetro de Chama: O instrumento utilizado o fotmetro de chama, que contm os seguintes componentes: 1- capilar para sugar a amostra 2- atomizador: forma uma nvoa (spray) da soluo amostra para ser enviada chama 3- chama: converte os tomos no estado liquido para gasoso, e da emitirem luz 4- detector: converte a radiao emitida em leitura de Intensidade de Emisso de luz (E)

Mais especificamente, o fotmetro de chama pode ser assim esquematizado:

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Mecanismo de funcionamento:

A soluo amostra sugada pelo tubo capilar (5 a 25 mL/minuto) para o atomizador, onde h a misturao com a corrente de ar, e forma uma nvoa fina A nvoa produzida da amostra entra no combustor (chama) e ocorre a queima. A chama produzida pela combusto do gs GLP (gs de cozinha) A radiao produzida na chama passa atravs de uma lente e de um filtro tico que s d passagem radiao de comprimento de onda especfico do elemento a ser analisado (no caso, sdio ou potssio) Esta radiao atinge o detector e converte em leitura atravs de um sistema eletrnico apropriado, com um painel digital, na forma de uma leitura da quantidade de luz emitida (emisso = E), proporcional concentrao do elemento na soluo amostra. Cuidados no manuseio do fotmetro de chama:

Certos cuidados e detalhes devem ser observados para o perfeito funcionamento desse sistema, tais como: Acmulo de sujeira na cmara de mistura, obstruindo a passagem da amostra provoca oscilaes na medida. Aps muitas amostragens, o nebulizador acumula resduos de elementos que podem influir na leitura. Ento deixe o aparelho aspirar gua deionizada por algum tempo Obstruo do tubo capilar, impede a entrada da amostra; Se a amostra no estiver sendo aspirada, o cateter pode estar entupido. Limpe-o introduzindo em seu interior um fio fino de ao ou equivalente Vlvulas de ar e/ou gs travadas, no permitem o correto ajuste da chama; Se a chama estiver mal regulada, regule-a atravs da vlvula de controle de fluxo de gs at obter uma chama em forma de cones pequenos de colorao azul clara. A maior parte dos aparelhos de emisso de chama, destinados a anlises de rotinas em determinao de Na, K, Li e Ca (sdio, potssio, ltio e clcio), utiliza como combustvel o gs liqefeito de petrleo (GLP), fornecido em botijes de fcil reposio, observando apenas se no h vazamentos, com auxilio de espuma, em suas conexes; ou registros. Quando o gs est se esgotando, o resduo final do botijo provoca oscilaes no fluxo com conseqente instabilidade da chama. Nesse caso troque o botijo. Se a amostra no estiver sendo aspirada, o cateter pode estar entupido. Limpe-o introduzindo em seu interior um fio fino de ao ou equivalente. Aps muitas amostragens, o nebulizador acumula resduos de elementos que podem influir na leitura. Ento deixe o aparelho aspirar gua deionizada por algum tempo. Se isso no resolver, faa o aparelho aspirar uma soluo de cido diludo a 1% (ntrico ou clordrico)
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Quando a amostra a ser analisada esta muito concentrada, a soluo deve ser diluda para que sua concentrao esteja dentro da faixa de linearidade do mtodo. 4.6.5 Calibrao: A primeira calibrao que se faz com o BRANCO, geralmente gua destilada: aspira-se uma quantidade suficiente de gua destilada e zera a emisso (leitura) do aparelho. A segunda calibrao serve para determinarmos a concentrao de sdio e potssio na amostra, utilizando a CURVA DE CALIBRAAO. O mtodo segue a lei de Beer Quantidade de luz emitida proporcional concentrao do elemento na amostra. Por isso, a concentrao do elemento calculada utilizando-se a CURVA DE CALIBRAO, construda da mesma forma que na espectrofotometria UV/VIS, com no mnimo 5 solues padres, cujas leituras e concentraes so colocadas em grfico de disperso (xy), e a equao da reta dever ser encontrada. S que agora a leitura em emisso, e no em transmitncia ou absorbncia.

4.6.6 Aplicaes: A fotometria de chama se restringe aos metais alcalinos e alcalinos terrosos (Na, K. Ca, Li) porque a energia trmica da chama no suficientemente elevada para atomizar, ou seja quebrar em tomos gasosos os outros elementos de configurao eletrnica mais complexa, como o Fe, Hg, Al, Cu e outros. Da, para esses elementos se utiliza outra tcnica instrumental mais precisa e sensvel. As caractersticas tcnicas do fotmetro de chama, sua construo simples, baixo custo e facilidade de manuteno tornaram a fotometria de chama um dos mtodos mais importantes em laboratrios de indstrias, anlises clnicas e pesquisa. Pode ser aplicada na determinao de metais alcalinos e alcalino terrosos em solos, cimento, minrios, guas, alimentos diversos como frutas e vinhos, sucos, solues energticas, amostras de origem biolgica como urina, em vegetais, etc., determinao de Na, K, Ca, Li em solos, cimento, gua, minrios, alimentos, bebidas, sucos frutas, solues energticas, urina, vegetais.

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4.7 CROMATOGRAFIA GASOSA Tcnica: cromatogrfica a gs Equipamento: cromatgrafo gasoso (CG) Determinao: picos normalizados concentrao 4.7.1 Introduo: A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. A grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilizao atribuda a um botnico russo ao descrever suas experincias na separao dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de ter de petrleo (fase mvel) atravs de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de clcio (fase estacionria), qual se adicionou o extrato, levou separao dos componentes em faixas coloridas. Este provavelmente o motivo pelo qual a tcnica conhecida como cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar errnea idia de que o processo seja dependente da cor. Apesar deste estudo e de outros anteriores, que tambm poderiam ser considerados precursores do uso dessa tcnica, a cromatografia foi praticamente ignorada at a dcada de 30, quando foi redescoberta. A partir da, diversos trabalhos na rea possibilitaram seu aperfeioamento e, em conjunto com os avanos tecnolgicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticao, o qual resultou no seu grande potencial de aplicao em muitas reas. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura. Segundo a Internacional Union of Pure and Applied Chemistryu (IUPAC), a cromatografia uma tcnica usada para separao dos componentes de uma amostra, os quais se distribuem em duas fases, uma estacionria e outra mvel. A fase estacionria pode ser um slido, um lquido retido sobre um slido ou gel. A fase mvel pode ser lquida ou gasosa.
FASE MVEL lquido ou gs que, ao passar por sobre a fase estacionria, arrasta consigo alguns componentes da amostra que lhe tenham afinidade. FASE ESTACIONRIA slido ou lquido (embebido em um suporte slido), que retm consigo outros componentes da amostra que lhe tenham afinidade.

Cromatografia Gasosa: tipo de cromatografia que utiliza como Fase Mvel um gs, denominada Gs de Arraste, cuja finalidade transportar as molculas dos componentes atravs da coluna, baseando-se na diferente distribuio desses componentes da amostra

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entre as Fases Estacionria (slida ou lquida) e a Fase Mvel (gs) utiliza para isto um aparelho denominado Cromatgrafo Gs. A cromatografia gasosa uma das tcnicas analticas mais utilizadas. Alm de possuir um alto poder de resoluo, muito atrativa devido possibilidade de deteco em escala de nano a picogramas (109-10-12 g). A grande limitao deste mtodo a necessidade de que a amostra seja voltil ou estvel termicamente, embora amostras no volteis ou instveis possam ser derivadas quimicamente. Pode ser utilizada para separaes preparativas apenas na faixa de microgramas a miligramas, no sendo muito empregada para esse fim. 4.7.2 Classificao: Cromatografia Gs-Slido (CGS) - a fase estacionria um slido com grande rea superficial (adsorvente). A separao baseia-se em mecanismos de adsoro das substncias neste slido. Usada principalmente na anlise de gases permanentes e compostos apolares de baixa massa molecular. Cromatografia Gs-Lquido (CGL) - a fase estacionria um lquido pouco voltil, recobrindo um suporte slido. A separao baseia-se em mecanismos de partio das substncias entre as fases lquida e gasosa. Devido ao grande nmero de fases estacionrias lquidas disponveis no mercado, a utilizao da cromatografia gs-lquido corresponde a cerca de 95% do total de aplicaes. 4.7.3 O mecanismo da eluio: Uma amostra liquida voltil ou gasosa injetada numa cmara aquecida dentro do aparelho cromatgrafo, na qual ela se evapora rapidamente; o vapor arrastado por uma corrente de gs que passa continuamente pela coluna cromatogrfica (gs de arraste He, N2 ou H2) dentro do aparelho As substncias presentes na amostra, depois de separadas, chegam ao detector do aparelho, que gera um sinal para o registrador (impressora), que imprime o cromatograma em forma de picos:

4.7.4 Fase estacionria: Chamada de RECHEIO da coluna. Pode ser slida (adsorvente) ou lquida (recobrindo um suporte slido inerte). Na CG existe um grande nmero de fases estacionrias lquidas e slidas disponveis comercialmente, de modo que a natureza da FE a varivel mais importante na otimizao da seletividade.
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Tem se empregado um grande nmero de substncias como fase estacionria. Para a seleo desta fase, deve-se conhecer a natureza da substncia que se deseja determinar. Geralmente se segue a conhecida regra: a fase liquida deve ter caractersticas de polaridade semelhantes da substncia a se analisar. Assim, para separar hidrocarbonetos saturados escolhe-se, por exemplo, um hidrocarboneto saturado como fase estacionaria e um polister para um ster orgnico. Fases estacionrias polares contem grupos funcionais como: -CN; -CO; -OH. Fases estacionrias do tipo hidrocarbonetos e siloxanos no so polares, enquanto que fases de polisteres so altamente polares. Solutos polares incluem: lcoois, cidos e aminas. Solutos de polaridade mdia incluem teres, cetonas e aldedos. Hidrocarbonetos saturados so apolares. Geralmente a polaridade da fase estacionaria deve combinar com a dos componentes da amostra. Tipos de Fase Estacionria Slida:

Fase estacionria slida Polmeros porosos (estireno e divinilbenzeno Porapak e Chromosorb) Carvo ativo e slica Alumina

Mecanismo da adsoro das substncias na FE slida

Tipos de Fase Estacionria Lquida:

Fase estacionria lquida Carbowax 20M Carbowax 1540 Aplicao lcoois, teres, glicis, solventes cidos livres, lcoois, aldedos, acrilatos, nitrilos, cetonas 100% dimetilpolisiloxano (goma) Apolar Fenis, hidrocarbonetos, aminas, compostos sulfurados, pesticidas. 100% dimetilpolisiloxano (fluido) Apolar leos e derivados de aminocidos. 14% cianopropil 86% fenil Intermediria Drogas, esteroides, pesticidas polisiloxano Polaridade Polar Polar

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Mecanismo de absoro das substncias na FE liquida

As FE lquidas so as mais empregadas em CG, enquanto que as FE slidas (carvo ativo, slica, peneiras moleculares e polmeros porosos) so aplicadas para separao de gases e compostos de baixa massa molar. Em princpio, para um lquido ser usado como FE em CG ele deve ser pouco voltil (presso de vapor at 0,1 mmHg ou 13,332 Pa na temperatura de trabalho) e termicamente estvel. Para esta fase ser empregada em uma separao em particular, ela precisa: - ser um bom solvente para os componentes da amostra, caso contrrio o efeito ser o mesmo de temperaturas de coluna excessivamente altas (os compostos ficaro quase que o tempo todo no gs de arraste, sendo eluidos muito rapidamente e sem separao); - ser um bom solvente diferencial, isto , alm de dissolver bem todos os constituintes da amostra, faz-lo com solubilidades suficientemente diferentes para que eles possam ser separados; - ser quimicamente inerte em relao amostra.

4.7.5 A fase mvel: O gs de arraste (FM) tem a funo de levar as substncias presentes na amostra para fora da coluna, quando elas no estiverem interagindo com a FE. Gases mais utilizados: nitrognio, hlio, hidrognio e argnio. Requisitos da Fase Mvel: no deve interagir com o recheio da coluna (FE) ser compatvel com o detector usado no cromatgrafo ser disponvel comercialmente ter custo baixo (grande volume) Ter alta pureza

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4.7.6 O Sistema Cromatogrfico: Hoje, mais de 30 fabricantes de instrumentos oferecem cerca de 130 modelos diferentes de equipamentos para cromatografia gasosa, a custos variando de 1.500 a 40.000 dlares. O esquema bsico de um cromatgrafo gs mostrado na figura abaixo:

Cromatgrafo gasoso

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Fonte do gs de arraste (fase mvel):

Um cilindro contendo o gs sob alta presso serve como fonte do gs (FM). aconselhvel um filtro de slica-gel ou peneira molecular acoplado entre o cilindro e o cromatgrafo, na entrada do gs no equipamento, para eliminar traos de gua ou hidrocarbonetos (filtro = traps). A escolha do gs de arraste independe da amostra a ser separada. O parmetro mais importante a sua compatibilidade com o detector (alguns detectores trabalham melhor quando se usam determinados gases). Os gases mais empregados so H2, He e N2 e a vazo do gs de arraste, que deve ser controlada, constante durante a anlise. Controladores de vazo e reguladores de presso do gs:

A vazo da FM deve ser constante durante a anlise, para que haja reprodutibilidade. As vlvulas dos cilindros de gs servem como reguladores de presso. Mantendo-se constante a temperatura, a queda de presso na coluna cromatogrfica tambm o ser.

Controles de vazo de gs no cromatgrafo. 1 - Cilindro de Gs 2 - Reguladores de Presso Primrios 3 - Traps para eliminar impurezas do gs 4 - Regulador de Presso Secundrio 5 - Regulador de Vazo (Controlador Diferencial de Fluxo) 6 - Medidor de Vazo (Rotmetro)

Sistema de injeo da amostra:

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Permite a introduo de amostras lquidas, gasosas ou slidas no aparelho. Na CG, a seo do cromatgrafo gasoso onde feita a introduo da amostra o injetor (ou vaporizador). Na verso mais simples, trata-se de um bloco de metal conectado coluna cromatogrfica e alimentao de gs de arraste. Este bloco contm um orifcio com um septo, geralmente de borracha de silicone, pelo qual amostras lquidas ou gasosas podem ser injetadas com microseringas hipodrmicas de 0,1 a 10L.

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Amostras slidas podem ser dissolvidas em um solvente adequado.

Microsseringa de 10L

A amostra lquida vaporizada instantaneamente e arrastada em forma de vapor at a coluna. Alm da injeo com microsseringa, existem outros tipos de injetores para amostras lquidas: o injetor direto, o spliter e o on-column. Os parmetros a serem verificados durante a injeo da amostra so: - Quantidade de amostra injetada: no deve ultrapassar a capacidade da coluna, determinada pela quantidade de FE. A quantidade de amostra injetada depende da coluna e do detector empregado. Para colunas empacotadas, volumes de 0,1 l a 3,0 l de amostra lquida so tpicos. Volumes altos prejudicam a qualidade de injeo (alargamento dos picos) ou saturam a coluna cromatogrfica. Um menor volume possvel desejvel, na faixa de 0,1 a 10 L de amostra, a fim de evitar problemas de saturao, excesso de amostra na coluna ou volatilizao imcompleta da amostra. - Temperatura do sistema de injeo: o sistema de injeo deve ser aquecido para que ocorra vaporizao total da amostra. Se a temperatura do injetor estiver muito baixa, ocorre vaporizao incompleta. Para evitar isso, deve-se trabalhar numa temperatura acima da temperatura de ebulio do composto menos voltil da amostra. J as temperaturas muito elevadas podero causar decomposio ou modificaes na amostra. - Velocidade de injeo: a introduo da amostra no aparelho deve ser completa e o mais rapidamente possvel, injetando com a mesma velocidade e firmemente. Coluna cromatogrfica:

onde fica a Fase Estacionria (slida ou lquida) e se d a separao dos componentes da amostra, pela passagem da Fase Mvel (Gs de Arraste). um tubo longo, contendo a fase estacionria. Pode ser de cobre, ao inox, alumnio, vidro, slica fundida, teflon, etc. idealmente, o material de construo da coluna no deve interagir com o recheio (Fase Estacionria). Depois de injetada e vaporizada, a amostra introduzida na coluna cromatogrfica, onde efetuada a separao. A coluna cromatogrfica pode ser classificada em: Coluna Empacotada (recheada analtica e preparativa): - construda em ao inox (na maioria) ou vidro (para anlise de substncias biolgicas instveis como esterides e na de pesticidas). - Seu formato varia com o aparelho; geralmente so espirais para ocupar menor espao. - Dimenses: 1-3 m de comprimento 1-100 mm de dimetro interno.

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- mais usadas com Fase Estacionria Slida adsorvente (recheio). - Necessita de um volume maior da amostra (1-20 microlitros) Coluna Capilar: - Construdas em nquel, ao inox, vidro ou, preferivelmente, slica fundida, por ser altamente pura e produzir colunas flexveis. - mais finas e maiores que a coluna recheada. - Dimenses: 30-150 m de comprimento 0,01-0,75 mm de dimetro interno - mais usadas com Fase Estacionria Lquida (recobrindo um suporte slido interno ou como filme). - Mais eficiente que a coluna recheada: anlises mais rpidas, alta resoluo, inrcia qumica - Desvantagens: preo elevado e fragilidade. - Utiliza volumes menores de amostra (0,001-0,5 microlitros)

Coluna recheada

Coluna capilar

Tipos de coluna cromatogrfica

Influncia da temperatura na eficincia da coluna: Se a temperatura da coluna for excessivamente baixa, todos os constituintes da amostra tero presses de vapor muito baixas e ficaro quase que todo o tempo dissolvidos na FE, fazendo com que a sua migrao pela coluna ser muito lenta. O resultado pode ser um tempo excessivo de anlise e picos muito largos e baixos (quanto mais tempo a substncia passa na coluna, mais ela se espalha). Eventualmente, o composto pode nem sair da coluna. Por outro lado, uma temperatura muito alta implica presses de vapor tambm muito grandes e os compostos quase no passam tempo nenhum dissolvido na FE, saindo muito rapidamente da coluna sem serem separados. Assim, a temperatura da coluna uma condio que deve ser ajustada para se obter uma determinada separao. Alm de consideraes sobre a separao, a temperatura empregada deve ser compatvel com a FE empregada, pois as FE lquidas se volatilizam ou se degradam com temperaturas excessivas. A temperatura da coluna deve ser rigorosamente controlada, para assegurar a reprodutibilidade das anlises.

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Sistema de deteco:

As substncias presentes na amostra passam atravs da coluna, onde so separadas, e chegam ao sistema de deteco. Os detectores indicam em medem a quantidade dos componentes individuais separados na coluna cromatogrfica. Assim como o sistema de injeo, os detectores devem ser operados com temperatura de 50C acima da temperatura final da coluna, para evitar condensao da amostra, gua ou outras substncias formadas. Mecanismo geral da deteco: os detectores medem a variao da composio do gs de arraste (FM) que sai da coluna.

4.7.7 Aplicaes Da Cromatografia Gasosa: A cromatografia gasosa uma das tcnicas de maior uso. utilizada para a separao e quantificao de produtos diversos, podendo tambm ser usada como tcnica de identificao, em casos especiais, principalmente quando acoplada a um espectrmetro de massas ou outro detector qualitativo. Assim, a cromatografia gasosa est sendo usada nas mais diversas reas, como na anlise ambiental, nas indstrias qumicas e farmacuticas, na anlise de alimentos e de produtos petroqumicos, na medicina, na pesquisa e outras. Na anlise ambiental, podemos citar como exemplo, a utilizao da cromatografia gasosa no controle da poluio do ar, gua, solos, na determinao de vrios poluentes como aldedos, cetonas, hidrocarbonetos, compostos aromticos, etc. Outros exemplos interessantes esto ligados anlise de resduos de pesticidas, herbicidas e fungicidas em gua, solos, alimentos. As indstrias qumicas e farmacuticas podem utilizar a cromatografia gasosa, desde a anlise da matria-prima at o produto acabado. Exemplo: anlise de vitaminas. Na indstria alimentcia pode-se usar a cromatografia gasosa para anlise de alguns constituintes dos alimentos, como lipdeos e carboidratos. Em alguns casos, com tcnicas adequadas de concentrao da amostra, podem ser detectados constituintes alimentcios em nvel de traos, como por exemplo, esterides e vitaminas. Alm disso, a cromatografia gasosa frequentemente usada, em conjunto com a cromatografia em camada delgada, para estudar a adulterao, contaminao e decomposio dos alimentos. A rea mdica e anlises clnicas tambm encontram na cromatografia gasosa uma ferramenta poderosa, tanto no estudo de substncias endgenas, como no controle teraputico de certas drogas, ou em casos de intoxicao. Porm, como toda tcnica analtica, a cromatografia gasosa tem suas limitaes:

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- a amostra deve ter uma presso de vapor aprecivel temperatura da coluna (deve ser voltil). - O cromatgrafo proporciona um nmero de dados limitado (tempo de reteno e tamanho e forma do pico), comparado com a grande quantidade que se obtm das diversas formas de espectroscopia. Atualmente, cerca de 95% dos cromatgrafos vendidos so equipados com colunas capilares. As colunas esto cada vez mais sofisticadas, e os fabricantes sintetizam fases estacionarias para determinadas aplicaes ou mtodos. Praticamente a totalidade dos cromatgrafos comercializados esto acoplados a um microcomputador, para controle e processamento dos dados, usando softwares e amostradores automticos, que permitem o trabalho sem a presena constante do analista, e realizando, alem disso, clculos estatsticos. Tambm, do ponto de vista analtico, o cromatgrafo gasoso pode ser acoplado a detectores de varredura como o espectrmetro de massas, o espectrofotmetro de infravermelho e ultravioleta/visvel, o espectrofotmetro de emisso atmica, que facilitam a anlise estrutural dos componentes separados Projees para o futuro: as colunas no sero mais visveis ou manuseadas diretamente. A injeo manual ser substituda por injetores capazes de introduzir diretamente na coluna nanolitros de gs ou picolitros de lquidos, com preciso e sem contaminao. No haver mais microsseringas e os amostradores automticos tero carrossel de 500 a 1000 amostras. Os cromatgrafos sero compactos, pequenos e programveis a distancia.

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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

1. CIENTIFUEGOS, F.; VAITSMAN, D. Anlise Instrumental. Rio de Janeiro: Intercincia, 2000, 606p. 2. SKOOG, D.; HOLLER, F. J.; NIEMAN, T. A. Princpios de anlise instrumental. 5 ed. Porto Alegre: Bookman, 2002, 628 p. 3. HARRIS, D. C. Anlise qumica quantitativa. 5 ed. Rio de Janeiro: LTC, 2001, 860p. 4. VOGEL, A. Anlise qumica quantitativa. 5 ed. Rio de Janeiro: LTC, 1992.

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