INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DE MATO GROSSO CAMPUS CUIAB BELA VISTA CURSO ENGENHARIA DE ALIMENTOS DISCIPLINA:

A: ANLISE INSTRUMENTAL

MTODOS TICOS DE ANLISE

Os mtodos ticos ou fotomtricos, como diz o nome, usa a luz (foto), para medir algo (mtrico), geralmente a concentrao de uma substncia que tem capacidade de interagir com a luz.

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS

Prof Dra. Elaine de Arruda Oliveira Coringa

MTODOS TICOS DE ANLISE

Espectrofotometria = tcnicas baseadas na interao da matria com a radiao eletromagntica, na forma de emisso e absoro. tipos: espectrofotometria no ultravioleta (UV) e visvel (VIS), infravermelho (IR).

Espectro eletromagntico

MTODOS TICOS DE ANLISE

Radiao eletromagntica = luz, forma de energia que tem o comportamento de uma onda e de uma partcula de energia: difrao, refrao = propriedade ondulatria absoro/emisso = propriedade corpuscular

MTODOS TICOS DE ANLISE

Espectrofotometria UV,Vis e de fluorescncia medem a radiao absorvida. Uso em alimentos: anlise de componentes do alimento que absorvem na regio UV ou Vis (corantes, nutrientes inorgnicos, vitaminas); anlise de molculas orgnicas por fluorescncia (deteco de contaminantes como bactrias e alguns resduos de pesticidas).

MTODOS TICOS DE ANLISE

Espectrofotometria de Infravermelho (IR) Uso em alimentos: grupos funcionais moleculares absorvem luz em do IR identificao positiva (protenas, cidos graxos, umidade) Anlise quantitativa (FTIR = infrared transform Fourier)

ESPECTROFOTOMETRIA UV / VIS

Espectrofotometria de Absoro no UV/Vis

SO MTODOS TICOS QUANTITATIVOS BASEADOS NA ABSORO DE LUZ VISVEL (380 A 760 nm) E ULTRAVIOLETA (200 a 380 nm) POR UMA AMOSTRA MATERIAL

EMPREGO EM ANLISE DE ALIMENTOS

determinao

Interao da luz com a matria

de aditivos (nitrito, nitrato, sorbatos)

conservantes

determinao de corantes artificiais anlise de metais, fluoreto, fsforo determinao da vitaminas (A, B, C). cafena, carotenides,

O processo de absoro da luz:

1. 2.

3.

Quando a amostra estimulada pela aplicao de uma fonte de radiao eletromagntica externa, muitos processos so possveis de ocorrer: A radiao pode ser espalhada ou refletida. Uma parte da radiao incidente pode ser absorvida e promover algumas das espcies do analito para um estado excitado, como pode ser visto na Figura 24-5b Na espectroscopia de absoro, medimos a quantidade de luz absorvida em funo do comprimento de onda. Cada espcie molecular capaz de absorver suas prprias frequncias caractersticas da radiao eletromagntica, e esse processo resulta em um decrscimo da intensidade da radiao eletromagntica incidente. Dessa forma, a absoro da radiao atenua o feixe de luz incidente.

PARMETROS DE ANLISE:
amostras

Qual a importncia do comprimento de onda?

Cada substncia qumica presente na amostra interage com a luz de determinados comprimentos de onda parmetro de anlise instrumental Absoro ou emisso de luz ocorre em maior intensidade no comprimento de onda da substncia em anlise preciso e exatido do mtodo Usado no ESPECTROFOTMETRO e COLORMETRO

lquidas e lmpidas

coloridas: absoro visvel incolores: absoro no ultravioleta comprimento de onda de absoro: Visvel 380 760 nm Ultravioleta 200 380 nm

Comprimento de onda x elemento qumico

Elemento Na Li Ca Sr Ba Cor vermelha alaranjada amarela verde azul violeta Comprimento de onda (em nm) 589 671 616 707 624 Intervalo de comprimentos de onda (nm) 780 622 622 597 597 577 577 492 492 455 455 380

Teste de chama emisso de luz de comprimento de onda caracterstico:

ESPECTROFOTOMETRIA MTODOS TICOS DE ABSORO DE LUZ ABSORO X CONCENTRAO LEI DE BEER-LAMBERT

Quando a luz absorvida pela substncia (AMOSTRA) a intensidade do feixe de luz diminui. Essa diminuio proporcional Concentrao da soluo. DETECTOR DE LUZ AMOSTRA ABSORVENTE FONTE DE LUZ

LEI DE BEER-LAMBERT
Luz incidente I0 SOLUO AMOSTRA C (mol/L) Luz emergente I1

LEI DE BEER-LAMBERT
A Figura mostra a atenuao de um feixe paralelo de radiao monocromtica quando este passa por uma soluo absorvente de espessura de l cm e de concentrao igual a c mols por litro. Em virtude das interaes entre os ftons e as partculas absorventes, a potncia radiante do feixe decresce de Io a I1. I1 = luz transmitida = TRANSMITNCIA Inverso da Transmitncia = ABSORBNCIA (luz absorvida pela amostra)

Lei de Beer-Lambert
TRANSMITNCIA = qtde. de luz que passou pela amostra (%T) escala porcentual (0-100%) ABSORBNCIA = qtde. de luz absorvida pela amostra (A) escala logartmica (0 2)

LEI DE BEER-LAMBERT

C A T

C A T

A = - log (T/100)

LEI DE BEER: padres de Fe+2 para anlise espectrofotomtrica, com concentraes variando de 1 mg/L (esquerda) a 10 mg/L (direita). A absorbncia da soluo evidenciada pela intensidade da cor, que proporcional concentrao do ferro em soluo.

Proporcionalidade Cor x Concentrao

Importncia da Transmitncia: como percebemos a cor de uma soluo

Por que uma Soluo Vermelha Vermelha?

Porque transmite a radiao vermelha:

Em geral, a radiao empregada em uma anlise colorimtrica deve ser a cor complementar da soluo do analito

Desvios da Lei de Beer:

Limitaes da Lei de Beer:

Desvios qumicos:

A lei de Beer descreve o comportamento da absoro somente para solues diludas (at 0,01 mol/L); desvios da lei de Beer aparecem quando a espcie absorvente sofre associao, dissociao ou reao com o solvente para gerar produtos que absorvem de forma diferente do analito.

Limitaes da Lei de Beer:

Desvios instrumentais:

INSTRUMENTAO

Radiao policromtica: A lei de Beer se aplica estritamente somente quando as medidas forem feitas com a radiao monocromtica. Correo: instrumentos com maior preciso na seleo do comprimento de onda.

LEITURA INSTRUMENTAL
ESPECTROFOTMETRO / COLORMETRO: Aparelho usado para medir absoro de luz por uma soluo na regio do Visvel e Ultravioleta; ESCALAS DE LEITURA: % Transmitncia (T) - 0 a 100% Absorbncia (A) - 0 a 2 (adimensional)

Espectrofotmetro de Absoro UV/Vis:

Muitos instrumentos espectroscpicos para uso nas regies do UV/visvel e IV apresentam cinco componentes: 1. uma fonte estvel de energia radiante; 2. um seletor de comprimento de onda que isola uma regio limitada do espectro para a medida; 3. um ou mais recipientes para a amostra; 4. um detector de radiao, o qual converte a energia radiante para um sinal eltrico mensurvel; 5. uma unidade de processamento e de leitura do sinal, geralmente constituda por um circuito eletrnico e, nos instrumentos modernos, por um computador.

Detector

Monocromador cubeta

lmpada

Espectrofotmetro de Absoro UV/Vis:

MODO DE OPERAO:
A luz vinda de uma fonte contnua passa por um monocromador que seleciona uma estreita faixa de comprimento de onda, passa pela amostra contida na cubeta de comprimento b e a intensidade de luz transmitida medida num detector.

1. Fonte de radiao lmpadas:

Fontes so lmpadas que emitem feixes de luz na regio do espectro visvel, ultravioleta e infravermelho. Tipos: Fonte de radiao UV: lmpada de H2 D2 Xe2. Emitem radiao na faixa de 180 a 350 nm. Fonte de radiao VIS: lmpada de W. Emitem radiao na faixa de 350 a 2.500 nm.

1. Fonte de radiao lmpadas:

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2. Seletor de comprimento de onda monocromador:

Monocromador: Selecionam bandas mais estreitas de comprimentos onda atravs da disperso da luz por um elemento de disperso da luz: prisma tico rede (grade) de difrao.

2. Seletor de comprimento de onda monocromador:

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3. Recipiente para amostras:

CUBETA DE ABSORO:
Recipientes para conter a amostra, os quais so geralmente denominados clulas ou cubetas, devem ter janelas que sejam transparentes na regio espectral de interesse

Tipos: De vidro para operar nos comprimentos de onda de 340 a 1.000 nm (visvel); De quartzo para operar em comprimentos de onda mais baixos (at 185 nm, UV)

b = caminho tico

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4. Detector:

Para a obteno da informao espectroscpica, a potncia radiante transmitida, fluorescente ou emitida deve ser detectada de alguma forma e convertida em uma quantidade mensurvel. Um detector um dispositivo que indica a existncia de algum fenmeno fsico e o transforma em um sinal eltrico (leitura).

CALIBRAO

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CALIBRAO
ABSORO COM O BRANCO 1 CALIBRAO - Com gua destilada:

Operao do instrumento:

leitura em A

= zero

leitura em %T = 100
CURVA DE CALIBRAO da substncia 2 CALIBRAO - Com no mnimo 5 solues padro da substncia -Construo da curva de calibrao no EXCEL o obteno da equao da reta -Uso da equao da reta para determinao da Ca (x)

Operao do instrumento:

INTERFERENTES NA ANLISE ESPECTROFOTOMTRICA Quanto ao mtodo:

Proporcionalidade entre COR e CONCENTRAO (visvel) Estabilidade da cor Limpidez da soluo Diluio adequada (amostra = padro) fator de diluio (f = Vsolvente/Vsoluo)

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INTERFERENTES NA ANLISE ESPECTROFOTOMTRICA Quanto ao instrumento:

Vida til da fonte de luz Comprimento de onda ajustado Calibrao correta (1 - soluo branco e 2 padro) Curva de calibrao pr-preparada para cada tipo de anlise Cubetas impecveis -

DETERMINAO DA CONCENTRAO DA AMOSTRA

1. Comparao com uma soluo padro, usando a equao (Fator de Calibrao): Ca = Aa . Cp Ap
Ca = concentrao da amostra (?) Aa = absorbncia da amostra Cp = concentrao da soluo padro Ap = absorbncia da soluo padro

Exemplo Fator de calibrao:

2. Pela Curva de Calibrao: mnimo 5 solues padro uso da EQUAO DA RETA obtida pelo EXCEL (y = ax+b)

Determine a concentrao de uma substncia na amostra (Aamostra = 0,90) atravs do uso de uma soluo padro, cujos dados foram:

Apadro = 0,73 Cpadro = 0,00046 mol/L

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Exemplo Curva de calibrao:

Espectrofotometria de Absoro no IR

Absoro no IR:

Absoro no IR:

A poro do espectro percebida pelo olho humano (regio visvel) est compreendida entre comprimentos de onda de 380 nm e 780 nm e, acima desse limite, at cerca de 50.000 nm (faixa entre as regies do visvel e das microondas), a radiao chamada infravermelha (IV). dividida em infravermelho prximo (1-25mm), infravermelho mdio (25-50mm) e infravermelho afastado (> 25mm).

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Absoro no IR:

O objetivo da espectroscopia de absoro no IV a determinao dos grupos funcionais de um dado material. Cada grupo absorve em frequncia caracterstica de radiao na regio do IV. Assim, um grfico de intensidade de radiao versus frequncia, o espectrograma de IV, permite caracterizar os grupos funcionais de um padro ou de um material desconhecido. A posio de absoro de uma banda no espectro pode ser expressa em nmero de onda (cm-1) = 1/

Absoro no IR:

A absoro no IR varia com o comprimento de onda selecionado, e geralmente apresentada na forma de um ESPECTRO DE ABSORO.

Absoro no IR x Absoro UV/Vis

Absoro no IR em alimentos:

Absoro no IR resulta de transies energticas vibracionais enquanto que a absoro no UV/Vis so transies eletrnicas; IR analisa gases e substncias slidas, alm de solues; UV/Vis s solues. IR no usa cubetas, mas sim clulas amostradoras de lquidos, de comprimento tico muito pequeno (mm), fabricadas com sais inorgnicos cristalinos;

O Infravermelho prximo (FT-NIR) e o mdio (FT-IR) aliado utilizao da anlise multivariada, foram usados para determinar a autenticidade de alimentos e mostraram ser teis para detectar problemas de adulteraes em pur de framboesa, fiambre, azeite, leos vegetais, presena de gordura de porco em mistura de gorduras animais, outras gorduras vegetais em manteiga de cacau, caf, mel, sumo de laranja, leite, carne, e outros produtos. Com um Espectrmetro de Infravermelho Prximo, conhecido como NIR (Near Infrared Reflectance), possvel saber em apenas seis segundos, o nvel de protena, fibra, gordura, matria seca e matria mineral, elementos que conferem qualidade aos gros como soja, milho e trigo.

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Espectrofotmetros IR:

Espectrofotmetros IR:
Os componentes dos instrumentos IV diferem significativamente daqueles dos instrumentos UV/visvel. As fontes de IV so constitudas por slidos aquecidos e os detectores IV respondem ao calor em vez de ftons. Os componentes pticos dos instrumentos IV so construdos de cristais polidos de sais, tais como o cloreto de sdio e o brometo de potssio.

Esquema do espectrofotmetro IR:

Componentes do espectrofotmetro IR:

a) Fonte de radiao: a radiao IV produzida por uma fonte aquecida eletricamente, que emitem radiao na regio do IR: Fonte de Nernst (400 20.000 nm); Fio de nquel-crmio (75020.000 nm); Globar (1.20040.000 nm) b) rea de amostras: composta por uma variedade de acessrios para a medida de gases, lquidos e slidos.

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Esquema do espectrofotmetro IR:

c) Monocromador: dispersa a luz proveniente da fonte por um elemento de disperso, que pode ser um prisma ou uma rede de difrao; d) Detector: utiliza o efeito trmico da radiao para quantific-la. Um detector trmico apresenta uma superfcie pequena enegrecida que absorve radiao infravermelha, aumentando a sua temperatura. O aumento de temperatura convertido em um sinal eltrico que amplificado e medido. Os dois tipos comuns de detectores no seletivos so o termopar e o bolmetro.

Aplicaes na Espectrofotometria IR
A espectroscopia no infravermelho tem sido usada nas anlises de acares em alimentos nas ltimas dcadas. Esta tcnica s no mais utilizada na anlise de alimentos e seus produtos pelas seguintes razes: a. Os espectros no infravermelho so complexos. Cada grupo funcional contribui para o espectro e isto resulta em sobreposio das bandas de absoro dificultando a interpretao.

b. A gua, que a principal constituinte de produtos biolgicos, tem forte absoro no infravermelho. c. A radiao no infravermelho penetra fracamente nas amostras e, dessa maneira, somente a superfcie da amostra pode ser estudada.

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Aplicaes na Espectrofotometria IR

Aplicaes na Espectrofotometria IR

a tcnica de espectroscopia no infravermelho mdio vem sendo cada vez mais empregada para a anlise qualitativa e quantitativa de alimentos; Anlise de leite, carne, leos, gorduras, manteiga, margarina, leite condensado e frutas, avaliando tanto aspectos quantitativos quanto qualitativos, como a certificao da qualidade. O emprego das tcnicas multivariadas para discriminar ingredientes alimentares por meio de dados de espectroscopia por reflexo difusa no infravermelho com transformada de Fourier (DRIFTS). Evita-se o emprego de reagentes agressivos ou a gerao de resduos danosos ao ambiente, pois requer pouco ou nenhum tratamento das amostras.

Caracterizao fsico-qumica de queijo prato por espectroscopia no infravermelho

Aplicaes na Espectrofotometria IR

Aplicaes na Espectrofotometria IR

Anlise exploratria de adoantes de mesa via espectroscopia no infravermelho (FTIR)

Espectroscopia no infravermelho mdio e anlise sensorial aplicada deteco de adulterao de caf torrado por adio de cascas de caf

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Material de referncia

Apostila Instrumental cap. 4 Fundamentos de Qumica Analtica SKOOG Cap. 24: Introduo aos Mtodos Espectroqumicos Cap. 25: Instrumentos para a Espectrometria ptica Anlise Instrumental SKOOG: Cap. 6: Introduo aos mtodos espectromtricos Cap. 7: Componentes dos instrumentos ticos Cap. 13: Espectrometria de Absoro molecular UV/vis Cap. 16: Introduo espectrometria no IV Anlise Instrumental CIENTIFUEGOS E VAITSMAN: Cap. 1: Introduo ao UV e Vis. Cap. 2: Infravermelho

Guia de Estudos 03
Espectrofotometrias de Absoro UV/Vis/IR Entrega: 08/10/12

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