INTRODUÇÃO

Caro leitor, o presente trabalho ilustrará sobre a Fotometria, que é a medição da intensidade ou
a quantidade luminosa da luz que atinge uma superfície a partir de uma fonte luminosa.
Falar-se-aõ também sobre os equipamentos usados para medir essas intensidades; o conceito
sobre a luz e os seus derivados; E ilustrará sobre a Lei de Beer que é uma equação
matemática que afirma que a concentração de uma substância é directamente proporcional à
quantidade de luz absorvida ou é inversamente proporcional ao logaritmo da luz transmitida.

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Índice
INTRODUÇÃO...............................................................................................................................1

Objectivo específico........................................................................................................................2

Objectivos gerais.............................................................................................................................2

Metodologia.....................................................................................................................................2

Fotometria....................................................................................................................................3

Fotometria de refletância.........................................................................................................3

Comprimento de Onda.................................................................................................................5

Transmitância..............................................................................................................................6

Absorvância.................................................................................................................................6

Lei de Beer...................................................................................................................................7

Aplicação da Lei de Beer.........................................................................................................8

Componentes Básicos da Fotometria...........................................................................................9

Conclusão......................................................................................................................................11

Referências Bibliográficas.............................................................................................................12

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Objectivoespecífico
 Compreender essencialmente os conteúdos sobre a fotometria.

Objectivosgerais
 Conceituar a fotometria;
 Indentificar os equipamentos usados para a realização da fotometria;
 Conhecer a finalidade da fotometria.

Metodologia
Segundo LAKATOS (1979, pg. 71) é abordagem que devem impor os diferentes processos
para atingir um dado ou por outro lado é o caminho para chegar a verdade da ciência.
Quanto a abordagem do trabalho, será do tipo pesquisa qualitativa; quanto aos objectivos o
estudo vai se basear na pesquisa exploratória e quanto ao procedimento técnico irá se basear
na pesquisa de revisão bibliográfica.
Segundo (Fonseca, 2012) defende que a pesquisa bibliográfica não é mera repetição do que já
foi dito ou escrito sobre certo assunto, mas propicia exame de um tema sob novo enfoque ou
abordagem, chegando a conclusões inovadoras.

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Fotometria

Conceito.

Fotometria é a medição da intensidade luminosa da luz ou da quantidade de luz luminosa que

atinge uma superfície a partir de uma fonte luminosa.
E a Espectrofotometria é a medição da intensidade da luz em comprimentos de onda
selecionados. Tem como objetivo indentificar compostos desconhecidos através de aspectros
ultravioletas, visíveis ou infravermelhos. Também se indentifica concentração de compostos
medindo a sua observação de luz de comprimentos de onda.
Fotometria de refletância
Na fotometria de refletância, é medida a luz difusa refletida.A luz refletida é nãolinear em
relação à concentração da substância e deve ser convertida a um formato linear.
Luz é uma energia transmitida via ondas eletromagnéticas que são caracterizadas por
frequência e comprimento de onda; a luz écomposta de fótons, cuja energia é inversamente
proporcional ao comprimento de onda.
Dispersão da luz Um fenômeno físico que resulta da interação da luz com partículas em
solução.
Fluorescênciaé a emissão de radiação eletromagnética que ocorre quando uma molécula
absorve luz em um comprimento de onda e reemite luz em um comprimento de onda mais
longo, quando ela retorna ao estado fundamental, sendo o evento de excitação causado por
foto-iluminação. A intensidade da luz (fluorescente) emitida é diretamenteproporcional à
concentração da espécieexcitada
Fluorimetriaé a medição da luz de fluorescência que é emitida quando uma molécula absorve
luz em um comprimento de onda e reemite luz em um comprimento de onda mais longo.
Branco éuma solução usada na fotometria/espectrofotometria que é idêntica às soluções
calibradoras ou desconhecidas, exceto pela substância a ser medida.
É necessário utilizar o Branco de reagentes como referência sempre que a absorbância da
mistura de reagentes no comprimento de onda utilizado for diferente da absorbância da água.
Exemplo: Reação das Proteínas Totais onde o Reagente de Biureto apresenta uma absorbância
em 545 nm em torno de 0,120. Ao utilizarmos o Reagente como Branco, para zerar o
equipamento, estamos eliminando a contribuição desta absorbância nos resultados.

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Branco - Absorbância do Reagente (Branco da Reação) lida contra branco de água;
Padrão - Absorbância do Padrão lida contra branco de água;
Padrão corrigido - Absorbância da Reação do Padrão (usando o Reagente como Branco).
Ao falarmos em fotometria pensamos instintivamente em luz. Na realidade a porção visível do
espectro eletromagnético (EMR) é uma pequena porção e aquela que excita a retina
produzindo nosso mais importante sentido, a visão. Esta relação fotometria-luz é desvantajosa
porque encaramos o EMR em termos de luz e cor, quando deveria ser considerado em termos
de energia, o que é a realidade.
Esta energia é propagada sob forma de ondas que poderiam ser esquematicamente
consideradas como uma união de vales e elevações que partem do ponto de emissão da
energia.
A distância entre dois pontos mais altos de duas elevações contínuas é denominada
comprimento de onda. uma característica da radiação eletromagnética; a distância entre duas
cristas de onda, que é medida em nanômetros.
Os comprimentos de onda variam de menores que 1 angstrom ou 0,1 nm (raios gama) a
maiores que 25 cm (ondas de rádio)

Comprimento de Onda

Representação esquemática da propagação da energia radiante.

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Quando usamos a espectrofotometria como processo de medida, basicamente estamos
empregando as propriedades dos átomos e moléculas de absorver e emitir energia
eletromagnética em uma das muitas áreas do espectro eletromagnético.

Características de Cor dos Espectros Ultravioleta, Visível e Infravermelho Curto:

InfravermelhoMédio Nome da Região Observado

<380 Ultravioleta+ Invisível

380-440 Visível Violeta

440-500 Visível Azul

500-580 Visível Verde

580-600 Visível Amarelo

600-620 Visível Laranja

620-750 Visível Vermelho

750-2500 Infravermelhopróximo Nãovisível

2500-15,000 Infravermelhomédio Nãovisível

15,000-1,000,000 Infravermelhodistante Nãovisível

Devido à natureza subjetiva da cor, os intervalos de comprimento de onda mostrados são

apenas aproximações.

Um nanômetro (nm) é igual a 10-9 metros, sendo a unidade empregada para medida do
comprimento de onda. A quantidade de energia é inversamente proporcional ao comprimento
de onda e, portanto os menores comprimentos de onda fornecem os maiores níveis de
energia.Instrumentos modernos isolam uma faixa estreita do comprimento de onda do
espectro.

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 Aqueles que utilizam filtros são denominados fotômetros e aqueles que utilizam prismas ou
grades de difração são denominados espectrofotômetros.
Transmitância
Quando um raio de luz monocromatica de intensidade inicial definida (I0)incide sobre uma
solucção colorida, a intensidade da luz emêrgente (I1) é menor que a luz incidente (I0), ou
seja, parte da luz foi absorvida: O quociente I1/I0 édenominado transmitância (T). Se 10 for
igual a 100%, a intensidade de luz emergente podera ser medida como percentagem de
transmitancia (% T):%T =T X 100
Absorbância
É a quantidade de luz absorvida à medida que a luz incidente passa por uma amostra, que é
equivalente a log (1/T), ou −log (T), onde T é a transmitância.
Mede-se a intensidade de luz absorvida por uma solução corada pela redução da medida da
intensidade de luz transmitida. A medida de absorçãoe a absorvancia (A).
Tem-se que:
A - Quantidade de luz absorvida;
T - Fracção total da luz transmitida.
Desse modo, A e T estão inversamente relacionadas.

Como a absorçao da luz e uma funcção logaritmica, a relacção basica entre A e T é a seguinte:

A= -log % T/1 00
A= -(log %T -log 100)
A = -(log % T + 2)
A= -log %T + 2
A= 2 -log %T

A Absorbância não é uma quantidade medida directamente, mas e obtida por meio docálculo
matemático a partir dos valores da transmitância.

Lei de Beer
Lei de Beer é uma equação matemática que afirma que a concentração de uma substância é
diretamente proporcional à quantidade de luz absorvida ou é inversamente proporcional ao
logaritmo da luz transmitida; matematicamente expressa como A = A/bc

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Onde:
A- Absorbância
B- Absortividade ‘constante que depende do comprimento de onda’
C- Caminho luminoso em centímetros
D- Concentração da solução. Geralmente expressa em gramas por litro.

Relação entre absorbância e T%.

Aplicação da Lei de Beer

Na prática, a proporcionalidade direta entre a absorbância e a concentração deve ser
estabelecida experimentalmente para um dado instrumento em condições especificadas.
Frequentemente, uma relação linear existe até certa concentração ou absorbância. Quando essa
relação ocorre, diz-se que a solução obedece à lei de Beer até aquele ponto. Com essa
limitação, uma constante de calibração (K) pode ser derivada e usada para calcular a
concentração de uma solução desconhecida por comparação a uma solução de calibração.
Rearranjando a equação (1) teremos:
A= A/Ab ––– A1/b1c1 = A2/b2c2

Como a espessura da solução (b) é constante no instrumento (b1 = b2), teremos:

A1/c1 = A2/c2 ––– Ac/cc = Au/cu
Onde:
Ac e cc - são absorbância e concentração do calibrador;
Au e cu- são absorbância e concentração do desconhecido.

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Demonstrando a equação para a concentração do desconhecido:

Cu=Au/Ac x Cc ou Cu=Au x Cc/Ac como Cc/Ac=K---cu = Au x K

O valor de k é determinado pela medição da absorbância do calibrador (Ac) de valor
conhecido (cc).
Denominamos k como sendo o Fator de Calibração (FC). O FC somente deve ser utilizado
quando a reação obedece à Lei de Beer no intervalo proposto.
A lei de Beer só é seguida se as seguintes condições forem cumpridas:
 A radiação incidente sobre a substância de interesse seja monocromática.
 A absorção do solvente seja insignificante, comparada à absorbância do soluto.
 A concentração do soluto esteja dentro de certos limites.
 Um interferente óptico não esteja presente.
 Não ocorra reação química entre a molécula de interesse e outra molécula de soluto ou
solvente.

Componentes Básicos da Fotometria

A transmitância e a absorvância das soluções coloridas são medidas por meio de instrumentos
denominados Fotômeros. Estes instrurnentos empregam como fonte luminosa uma lampada
incandescente produtora de luz branca.

 Fonte de energia elétrica – fornecedora de energia regulada, constante e apropriada

para a operação do instrumento ou seja, para que um instrumento fotométrico opere
corretamente é necessário que receba energia elétrica adequadamente regulada.

 Fonte de energia radiante – capaz de medir uma mistura de comprimentos de onda. É

o tipo de fonte de luz, usada em espectrofotometria que incluem lâmpadas
incandescentes e lasers. A lâmpada de Tungstênio á a mais utilizada fonte de energia
radiante para o ultravioleta próximo e para o visível
 Monocromador– utilizado para isolamento da porção desejada. Os monocromadores
podem ser filtros, prismas ou grades de difração.
 Fenda de saída da luz.
 Cubeta - recipiente que recebe o líquido da reação a ser medido.
 Detector – utilizado para receber a energia radiante transmitida através da solução e
transformá-la em energia elétrica.
 Circuito medidor – recebe a energia elétrica emitida pelo detector apresentando-a ao
operador sob uma forma útil de medida: absorbância ou concentração.

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Esquema dos compostos basicos da fotometria

Conclusão

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Referências Bibliográficas

ELICKER, K.; MONTE DAROCHA, R. Introdu\;ao a amilise espectral. Porto Alegre:

EMMA, 1973.

RICHETERICH, R. Clinical chemistry, teory and practice. 2 ed. New York: Academic
Press, 1969.

Tietz Fundamentos deQUÍMICACLÍNICAEDIAGNÓSTICOMOLECULAR. Carl A.

Burtis. David E. Burts. 7 edição. Elsevier

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Tietz Textbook of Clinicals Chemistry, Burtis CA, Ashood ER, 4ª edição, Elsevier Saunders
Inc., 2006.

Carlos Basques.J. Fotometria e Padronização. ed. 20/04/2010. revisão.23/11/16

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