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Fsico-Qumica Experimental II

Bacharelado em Qumica
Engenharia Qumica

Prof. Dr. Sergio Pilling


Fs.-Qui. Exp. 2 Prtica 10: Espectrofotometria e Lei de Lambert-Beer 1

Prtica 10 Introduo espectrofotometria e Lei de Lambert-Beer

1) Objetivos da aula
Aprender o os princpios da espectrofotometria e sua utilizao. Conhecer a Lei de Lambert-Beer e
obter espectros de absorbncia de diferentes espcies qumicas na fase liquida (KMnO
4
e K
2
CrO
4
).

2) Introduo
O termo espectroscopia (ou em alguns casos espectrofotometria) a designao para toda tcnica de
levantamento de dados fsico-qumicos atravs da transmisso, absoro ou reflexo da energia radiante
incidente em uma amostra. O resultado grfico obtido, o sinal do detector uma funo do comprimento de onda
- ou mais comumente a frequncia - chamado espectro. Sua impresso grfica pode ser chamada
espectrograma ou, por comodidade, simplesmente espectro.

Originalmente o termo espectroscopia designava o estudo da interao entre radiao e matria como
uma funo do comprimento de onda (). De fato, historicamente, espectroscopia referia-se a ao uso de luz
visvel dispersa de acordo com seu comprimento de onda, e.g. por um prisma.




Figura 1. A) Esquema da disperso da luz solar em um prisma e decomposio da luz em cores distintas e raias escuras
(linhas espectrais). B) Grfico da intensidade da radiao em funo comprimento de onda chamado de espectro.
Fonte http://scope.pari.edu/ e http://www.pbs.org/wgbh/nova/teachers/activities/3113_origins_01.html

O fundamento da espectroscopia a interao de uma radiao eletromagntica e a matria constituinte
da amostra. A energia incidente pode ser refletida, transmitida ou absorvida. Haver interao no somente se
houver ressonncia entre dois entes: a onda eletromagntica e uma partcula (tomo, molcula ou on) mas
tambm se a energia for mais alta que a necessria para ocorrer uma transio eletrnica.
As condies para que haja essa absoro so: i) A freqncia da onda incidente coincidir com uma
freqncia natural de um tipo de oscilao do sistema; ii) Sejam respeitadas as regras de seleo qunticas
atinentes ao sistema e faixa de freqncias particular envolvida.



So trs os principais tipos de processo pelos quais a radiao interage com a amostra e analisada:
i) Espectroscopia de absoro - Correlaciona a quantidade da energia absorvida em funo do
comprimento de onda da radiao incidente.
ii) Espectroscopia de emisso - Analisa a quantidade de energia emitida por uma amostra contra o
comprimento de onda da radiao absorvida. Consiste fundamentalmente na re-emisso de energia
previamente absorvida pela amostra
iii) Espectroscopia de espalhamento (ou de disperso)- Determina a quantidade da energia espalhada
(dispersa) em funo de parmetros tais como o comprimento de onda, ngulo de incidncia e o ngulo de
polarizao da radiao incidente.

O espectro da gua no UV-VIS-IR


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Lembrete prtico:
- Solues que absorvem no VERMELHO apresentam colorao AZUL-VERDE
- Solues que absorvem no AZUL-VERDE apresentam colorao VERMELHO

3) Instrumentao
Em geral, espectrmetros ou espectroscpios so equipamentos destinados anlise de radiao,
mormente ondas eletromagnticas (incluindo-se nestas a luz visvel). Desta forma, servem para a anlise fsico-
qumica cujo processo chamado espectroscopia. Os espectrmetros compreendem uma fonte de energia
radiante, um sistema colimador (fenda, lentes...), um local destinado amostra, um sistema monocromador e
um sistema detector.
comum ainda se confundirem estes termos com espectrofotmetro. Entretanto, ao termo
espectrofotmetro reserva-se o sentido de ser um espectrmetro que utiliza radiao na zona da luz, ou seja,
entre o infravermelho e o ultravioleta (inclusive). Neste sentido, existem espectrofotmetros UV-visvel (ou
apenas visvel), de infravermelho e de fluorescncia (ou fluormetros).
Nos equipamentos de espectroscopia basicamente so comuns os seguintes componentes: Fontes de
radiao (ex. lmpada UV, Fonte de IR, luz Sncrotron), Colimadores, Recipientes para amostras,
Monocromadores (prismas ou redes de difrao), Detectores/Transdutores (ex: fotodiodo, fotomultiplicador,
CCD), Processador, Sada (ex: monitor de computador).



3.1) O espectrofotmetro UV-Vsivel
Os espectrofotmetros so instrumentos de anlise que permitem:
i) Selecionar o comprimento de onda (, lmbda) da radiao adequado anlise de um determinado
componente
ii) Medir a intensidade I do feixe emergente que corresponde a um determinado feixe incidente Io,
convertendo o sinal recebido no detector em medida de absorbncia (ou absorvncia) para o comprimento de
onda da anlise.
iii)Determinar a concentrao de uma espcie em soluo a partir do grfico da variao de absorbncia
(ou transmitncia) em funo da concentrao de vrias solues-padro.
IR
UV
visvel


Fonte
de luz

Cmara de amostras

Rede de
difrao
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3.2) Cobertura espectral
Cobertura espectral o nome que se da a faixa de comprimentos de onda de um dado espectro. Este pode
cobrir uma regio grande ou no, por exemplo, se cobrir toda a parte visvel a cobertura espectral ser de 400-
800nm. Outros exemplos de espectros com cobertura espectral so 200-400nm, 175-190nm, 1m- 3.31m,
12eV-40eV, etc.
Obs. ver detalhes sobre a radiao ultravioleta em http://pt.wikipedia.org/wiki/Radiao_ultravioleta

3.3) Resoluo espectral
A resoluo de um espectro pode ser definida como o quociente entre o valor de um dado comprimento de
onda (ex. comprimento de onda mdio, ), e a diferena entre os comprimentos de onda medidos antes e
depois desse valor mdio ( A ).

A
= R

Na figura abaixo vemos dois espectros com diferentes resolues. Como o espectro da direita A e menor a
resoluo R maior e portanto possvel identificar algumas caractersticas espectrais (linhas espectrais) que
no so evidentes no espectro de resoluo menor



Obs. Em um espectro com grande cobertura espectral, se todas as medidas tiverem sido obtidas com o mesmo
espaamento entre comprimentos de onda, iremos ter nas extremidades do espectro duas resolues bem
distintas. Nesse caso a resoluo maior ser na parte dos comprimentos de onda mais longos.

Cubetas
Cubeta com
amostra

Fenda

espectro
Interface com
computador
Absorbncia Absorbncia
A

Comprimento de onda Comprimento de onda


3.4) Sensibilidade
a capacidade do instrumento de detectar (ou medir) uma quantidade mnima de amostra. Na figura abaixo
podemos um exemplo de espectros de absoro de solues com diferentes concentraes de um composto.
Dependendo da sensibilidade da sensibilidade do equipamento este consegue medir mais ou menos
molculas do soluto na soluo (ou da prpria amostra).

Absorbncia

M1


M2


Nmero de molculas do soluto na soluo
M3
M1 > M2 > M3 > M4 > M5

M4

Fs.-Qui. Exp. 2 Prtica 10: Espectrofotometria e Lei de Lam 4 bert-Beer


M5


Comprimento de onda

3.5) Lei de Lambert-Beer
A lei de Lambert-Beer (tambem conhecida como lei de Beer-lambert, Lei de Beer ou ainda lei de Beer
LambertBouguer) relaciona a absoro da luz (radiao eletromagntica em geral) com as propriedades do
material pela qual a luz esta passando.
Essa lei diz que existe uma dependncia logartmica entre a transmisso (ou transmissividade), T, da
luz atravs de uma substancia e o produto da entre o coeficiente de absoro da substancia, o, a distancia que a
luz percorre dentro de substancia (caminho percorrido), l. O coeficiente de absoro pode ser escrito como um
produto entre uma grandeza chamada de absortividade molar dos absorvedores, , e a concentrao, c. A
absortividade molar esta associado com transies eletrnicas, rotacionais ou vibracionais de cada espcie
considerada podendo ser considerada como uma impresso digital de cada espcie qumica. O coeficiente de
absoro pode ser definido tambm como um produto entro uma seo de choque de absoro, , e a densidade
numrica N de absorvedores.

Para lquidos, estas relaes podem so mais comumente escritas como

Enquanto que para gases e slidos, e em particular, para estudos fsicos, fsicos-quimicos e
espectroscpicos elas tambm podem ser escritas como

onde I
0
e I so a intensidade da radiao incidente e transmitida, respectivamente. a seo de choque de
absoro da lus por uma nica partcula (ou molcula) e N a densidade numrica (partculas por unidade de
volume) de absorvedores. A diferena entre a utilizao de base 10 ou base e (no logaritmo) puramente
convencional, exigindo a multiplicao de uma constante pare converter uma na outra. A figura abaixo mostra
ilustra as variveis no calculo da lei de Lambert-Beer para amostras liquidas dentro de cubetas especiais para
medies espectroscpicas.

Cubeta
Feixe
transmitido
Feixe
incidente
Amostra (o, , c) ou (, N)

l
A transmisso (ou transmissividade) pode ser expressa em termos da absorbncia que para lquidos
definida como:

= - log
10
T
enquanto para gases ou slidos usualmente definida como:

= - ln T
Isto implica que a absorbncia varia linearmente com a concentrao da amostra (ou densidade
numrica de absorvedores) de acordo com as relaes
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Lei de Beer na sua forma mais usual
e

para cada um dos casos, respectivamente. Dessa forma, se o comprimento l e a absortividade molar (ou a
seo de choque de absoro, ) so conhecidos e a absorbncia medida e, conseqentemente, a concentrao
da substancia, c, (ou o nmero de absorvedores, N) pode ser deduzido. Na figura abaixo temos um exemplo de
um grfico A versus l c obtido em um certo comprimento de onda. O ajuste linear aos pontos experimentais
nesse tipo de grfico nos da diretamente o valor da absortividade molar no comprimento de onda estudado.

l c (cm mg/L)

3.6) Unidades
Se a concentrao, c, expressa em termos da frao molar, i.e., um frao dimensional, a
absortividade molar, , assume a mesma dimenso do coeficiente de absoro, ou seja, 1/m. Entretanto, se a
concentrao for expressa em moles por unidade de volume, a absortividade molar , ser expressa por
cm
-1
L mol
-1
ou m
2
/mol (no sistema internacional).
De forma sinttica podemos escrever as equaes anteriores para transmitncia e absorbncia como:


e

3.7) Relacionando Absorbncia com a Transmitncia.
As equaes a seguir mostram como relacionar Absorbncia com a Transmitncia:

A = log
10
1 / T
A = log
10
100 / T(%)
A = 2 - log
10
T(%)
A ltima das equaes acima, A = 2 - log
10
T(%) , importante pois permite calcular fcilmente a
absorbncia a partir da transmitncia percentual.A relao entre Absorbncia e transmitncia ilustrada no
diagrama seguinte, onde colocamos as escalas de cada uma:

Ento, se a luz passa atravs de uma soluo sem absoro nenhuma, a absorbncia zero, e a
transmitncia percentual 100%. No caso em que toda a luz absorvida, a transmitncia percentual zero e a
absorbncia infinita.

3.8) Desvios da Lei de Lambert-Beer:

Desvios Reais: So desvios que ocorrem devido s interaes dos centros absorventes e a variao do
ndice de refrao.
Na derivao da Lei de Beer admitimos que os centros absorventes no tem interaes entre si ou com
outras espcies presentes na soluo isso faz com que a Lei de Beer tenha caracter de uma lei limite aplica
rincipalmente para solues muito diludas. Essa interao altera a distribuio de cargas na espcie
absorvente, modificando a energia necessria para sua excitao, portanto a posio, a forma e a altura da
banda de absoro podem sofrer alteraes.
Outro Desvio Real da Lei de Beer a possibilidade de haver uma variao do ndice de refrao "n" da
soluo com a concentrao. Isso decorre do fato de depender do ndice de refrao da soluo. Para solues
de baixas concentraes "n" constante, porm pode variar consideravelmente para solues com
concentraes mais altas.

Desvios Aparentes: podem ser classificados em:
1-Desvios Qumicos: aqueles que ocorrem devido a associao ou dissociao da espcie absorvente ou
ento o constituinte no completamente convertido em uma nica espcie absorvente
2-Desvios Instrumentais: i) so desvios que ocorrem devido ao instrumento utilizado na medio da
absorbncia. ii)Largura finita da faixa espectral escolhida; iii) Radiao estranha refletida dentro do
equipamento que alcanou o detector; iv) Variao da resposta do detector; v) Flutuao da intensidade da
fonte.

















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4) Parte experimental:

Dicas importantes:
- A cubeta tem dois lados que so foscos, os quais devem ser utilizados para segur-la e para
colocar no compartimento de amostra do espectrofotmetro. Evite tocar nos lados transparentes da
cubeta, pois constituem o caminho tico. A oleosidade dos dedos influencia na medida da absorbncia.
- Devido presena de radiao na faixa do ultravioleta, prejudicial aos olhos, mantenha a tampa
da cmara de amostras do espectrofotmetro sempre fechada e evite olhar para seu interior enquanto
aberta.
- Feche a tampa da cmara de amostras do espectrofotmetro antes de iniciar a leitura.
- Lembre-se. No toque na parte transparente das cubetas!

Materiais:
12 bales volumtricos de 100 mL

01 bquer de 250 mL
01 pipeta graduada (5 mL)
02 Bqueres 500 mL (descarte)
03 cubetas de vidro (uma somente para gua destilada)
02 tubos de ensaios
gua destilada
K
2
CrO
4
0,02 mol/L (250 mL)
KMnO
4
0,02 mol/L (250 mL)
Papel macio para limpeza das cubetas



EXPERIMENTO 1) Determinao do espectro de absoro de solues aquosas de
permanganato de potssio (KMnO
4
) e de cromato de potssio (K
2
CrO
4
).

Para cada uma das solues fazer o seguinte procedimento.
a) Antes das medidas das solues calibrar o espectrmetro (=definir o ponto zero da absorbncia) com uma
cubeta contendo apenas gua .

Obs. Alguns espectrmetros permitem medir ao mesmo tempo a absorbncia de duas cubetas, uma
delas com o intuito de calibrao. Outros espectrmetros necessitam que se mea a absorbncia do solvente
puro (A
solvente
) antes ou depois de se medir a absorbncia da soluo a ser estudada (A
soluo
). Por fim, a
absorbncia corrigida da soluo(A
c
) obtida por: A
c
= A
soluo
-A
solvente.
Com esse procedimentos
subtramos o efeito do solvente e da prpria cubeta na absoro da radiao.
Outros espectrofotmetros feito uma calibrao interna considerando a absorbncia do solvente.
Nesse caso o valor medido j direto a absorbncia do solvente.
Preste ateno ainda se o valor medido for em transmitncia percentual T(0-100%) nesse caso para
determinar absorbncia fazer o calculo A = 2 - log
10
T(%).

b) Pipetar 2 mL de cada soluo estoque de concentrao 2,0.10
-2
mol/L, e transferir para um balo
volumtrico de 100 mL. Completar o volume com gua destilada at o menisco e homogeneizar a soluo.

c) Complete a tabela da prxima pagina com os valores das absorbncias medidas. Se necessrio calcule a
absorbncia corrigida das solues (A
c
) usando a Eq. do item 1.

d) Construir um nico grfico, exibindo a absorbncia (A
c
) em funo do comprimento de onda, mostrando os
dois conjuntos de pontos experimentais. Utilize bolinhas e tringulos para marcar os pontos referentes ao
KMnO
4
e K
2
CrO
4
, respectivamente. Ligue os pontos referentes a cada espcie qumica de forma a ficar mais
fcil a visualizao do espectro.


Comprimento
de onda (nm)
Absorbncia
gua
Absorbncia
Soluo de
KMnO
4

Absorbncia
Soluo de
KMnO
4
(corrigida)

Absorbncia
Soluo de
K
2
CrO
4

Absorbncia
Soluo de
K
2
CrO
4
(corrigida)

200
250
300
350
355
360
365
370
375
390
400
415
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570
580
590
600
650
700
750
800
850
900
950











































Obs. Lembre-se de utilizar a expresso A
c
= A
soluo
-A
solvente
para calcular a absorbncia corrigida das
solues se necessrio. Caso o espectrofotmetro permita a determinao direta da absorbncia corrigida
desconsidere as colunas 2, 3 e 4 da tabela acima.


e) Calcule a resoluo dos espectros em torno dos comprimentos de onda 415nm e 850nm.




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EXPERIMENTO 2) Determinao do coeficiente de absortividade molar de solues
aquosas de permanganato de potssio (KMnO
4
) e de cromato de potssio (K
2
CrO
4
) em 3
comprimentos de onda fixos.

Para cada uma das solues fazer o seguinte procedimento.
a) A partir da soluo estoque de concentrao 2,0.10
-2
mol/L, preparar solues padro, utilizando uma pipeta
graduada, pipetando os volumes de, 1mL, 2 mL, 4 mL, 8 mL e 10mL, em bales volumtricos de 100 mL.
Completar o volume com gua destilada at o menisco e homogeneizar a soluo.

b) Com base no espectro obtido anteriormente escolher dois comprimentos de onda para cada espcie qumica.
Um referente a onde ocorreu o mximo de absoro de cada composto e outro em fixo em 500 nm. Complete
as tabelas abaixo com os valores obtidos para os dois compostos.

Obs. Antes de efetuar as medidas de absoro das solues verificar se o espectrofotmetro j esta calibrado
para absorbncia igual a zero atravs de uma medida feita em uma cubeta contendo apenas gua destilada. Se
necessrio calcule a concentrao das solues usando as informaes do item a e faa as medidas de
absorbncia. Obs. A
c
= A
soluo
-A
solvente


Soluo de KMnO4
Comprimento de onda (Abs. Max.):______nm Comprimento de onda:_500__nm
A
solvente
=_________ A
solvente
=_________

Volume inicial
pipetado (mL)
Concentrao
Molar (Mol/L)
Absorbncia
Corrigida
1
2
4
8
10
Volume inicial
pipetado (mL)
Concentrao
Molar (Mol/L)
Absorbncia
Corrigida
1
2
4
8
10









Soluo de K
2
CrO
4

Comprimento de onda (Abs. Max.):______nm Comprimento de onda:_500__nm
A
solvente
=_________ A
solvente
=_________

Volume inicial
pipetado (mL)
Concentrao
Molar (Mol/L)
Absorbncia
Corrigida
1
2
4
8
10
Volume inicial
pipetado (mL)
Concentrao
Molar (Mol/L)
Absorbncia
Corrigida
1
2
4
8
10









e) Para cada composto construa um grfico da absorbncia versus lc e
ajuste uma reta aos pontos experimentais. Tendo em mente a lei de Beer,
Ex.

c=Ay/Ax


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onde l a distancia que a luz percorre dentro da soluo (o comprimento
da cubeta), absortividade molar e c a concentrao molar, determine
pelo coeficiente angular do grfico o coeficiente de absortividade molar
das espcies estudadas nos 3 comprimentos de onda selecionados neste
experimento.

Ay
Ax
f) Qual dos dois compostos apresentou o maior o coeficiente de absortividade molar em 500 nm?



EXPERIMENTO 3) Clculo da concentrao molar de solues aquosas de permanganato
de potssio (KMnO
4
) e de cromato de potssio (K
2
CrO
4
) a partir de medidas de
absorbncia.

Procedimento:
a) Separe dois tubos de ensaio e identifique-os como A para a soluo de KMnO
4
e B para a soluo de
K
2
CrO
4
.

b) Coloque o equivalente a 2 dedos de gua destilada em cada tubo e depois adicione 3 gotas das solues
estoque de KMnO
4
e K
2
CrO
4
(concentrao 2,0.10
-2
mol/L) no tudo. Objetivo dessa etapa preparar solues
cujas concentraes sejam desconhecidas. Posteriormente, faa movimentos circulares para homogeneizar a
soluo dentro do tubo de ensaio.

c) Encha uma cubeta como a soluo de cada um dos tubos de ensaio e obtenha a absorbncia A
c
de cada
cubeta no comprimento de onda mximo de absoro da respectiva substancia (ver item 2 acima).

d) Sabendo o comprimento da cubeta l, o valor da absorbncia A
c
e absortividade molar c (ver item e do
experimento 2) de cada substncia no comprimento de onda em questo, calcule a concentrao molar das
solues dentro dos tubos de ensaio A e B.





5. Bibliografia e literatura adicional.
- Constantino, M.G., da Silva G. V. J., Donate P. M. 2004, "Fundamentos de Qumica experimental",
Editora EdUsp, So Paulo
- Castellan G., 1986, "Fundamentos de Fsico-Qumica"; Editora LTC, 1a ed..
- Atkins P., de Paula J., 1008, "Fsico-Qumica"; 8a ed., vol 1; Editora LTC.
- Russel J, Qumica geral vol. 1 e 2., ed. Makron Books.

Funcionamento de um espectrofotmetro: http://www.youtube.com/watch?v=R4ZT3g2-Ryg
http://www.youtube.com/watch?v=0n-dbLzj_HM

Espectroscopia: http://astro.if.ufrgs.br/rad/espec/espec.htm

NIST database: http://webbook.nist.gov/chemistry/name-ser.html

UV-Vis Hand book: http://bit.ly/a0MPJ7

K2CrO4: http://pt.wikipedia.org/wiki/Cromato_de_potssio

KMnO4: http://pt.wikipedia.org/wiki/Permanganato_de_potssio





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Apndice A. Informaes adicionais sobre espectros no UV-VIS

Na presena de radiao eletromagntica, eltrons de camada de valncia so excitados e promovidos a orbitais
de maior energia.

Na faixa do UV-Vis, os ftons fornecem energia suficiente para mover os eltrons dos orbitais ligados de
Valencia.




Em geral as em molculas orgnicas as seguintes transies acontecem:

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AZUL

VERDE

VERMELHO



OBS. Na presena de solvente as caractersticas espectrais apresentam-se mais alargadas













ons inorgnicos:
A maioria dos ons de metais de transio so coloridos (absorvem no UV-VIS) devido a transies eletrnicas
entre orbitais dd.



Lembrete:
- Solues que absorvem no VERMELHO mostram-se AZUL-VERDE
- Solues que absorvem no AZUL-VERDE mostram-se VERMELHO

Ref: http://www.cem.msu.edu/~cem333/index.html

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