UNIVERSIDADE METODISTA DE ANGOLA

FACULDADE DE CIÊNCIAS DE SAÚDE E BEM-ESTAR

LICENCIATURA EM ANÁLISES CLÍNICAS E SAÚDE PÚBLICA

ESPECTROFOTOMETRIA

Luanda, 2022
 UNIVERSIDADE METODISTA DE ANGOLA

FACULDADE DE CIÊNCIAS DE SAÚDE E BEM-ESTAR

LICENCIATURA EM ANÁLISES CLÍNICAS E SAÚDE PÚBLICA

Grupo: 06

Turma: E

Período: Diurno

2º Ano

Unidade Curricular: Tecnologia Instrumental

Integrantes do grupo n⁰07

Angélica Solene Cahete Rodrino_____________________ 34704

Luejy Domingas Raimundo___________________________ 45070

Rosa Rita Francisco da Silva_________________________ 40802

Rosa Tiago da Silva Ferreira Manuel____________________42832

Paula Auria Sebastião Agostinho______________________ 43559

Docente

___________________
 ÍNDICE
1. INTRODUÇÃO ............................................................................................. 1

2. REFERENCIAL TEÓRICO ............................................................................. 2

2.1 Absorvância .............................................................................................. 2

2.2 Transmitância............................................................................................ 3

2.3 Espectrofotometro ..................................................................................... 4

2.4 Tipos de espectrofotômetros ..................................................................... 6

3. CONCLUSÃO................................................................................................. 7

4. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................ 8

RESUMO

A espectrofotometria é um procedimento analítico através do qual se determina

as concentrações de amostras químicas mediante a absorção de luz. Uma
solução quando iluminada por luz branca, apresenta uma cor que é resultante
da absorção relativa dos vários comprimentos de onda que a compõem. Esta
absorção, em cada comprimento de onda, depende da natureza da substância,
de sua concentração e da espessura da mesma que é atravessada pela luz. A
espectrofotometria é amplamente utilizada nas análises clínicas para a
determinação de biomoléculas das quais permitem chegar a um diagnóstico
clínico. Depois das evoluções do espectrofotômetro, o procedimento trouxe o
diagnóstico mais consistente e assertivo, possibilitando assim um
encaminhamento terapêutico eficaz. Neste presente trabalho trata-se de uma
revisão de literatura baseada em artigos científicos e livros didácticos, onde o
objectivo é de descrever o procedimento de espectrofotometria, o procedimento
da técnica de espectrofotometria é: a luz emitida passa através das cubetas,
onde se encontra a amostra a ser analisada, as medições são feitas seguindo a
ordem branco-amostras. Essa intensidade de luz que atravessou as amostras é
medida, nos permitindo saber os valores de absorbância calculados pelo
detector, que é um instrumento sensível à radiação e servirá para reflectir uma
medida da mesma intensidade.
 1. INTRODUÇÃO

O conhecimento da absorção de luz pela matéria é a forma mais usual de

determinar a concentração de compostos presentes em solução. A maioria dos
métodos utilizados em bioquímica clínica envolve a determinação
espectrofotométrica de compostos corados (cromóforo) obtidos pela reacção
entre o composto a ser analisado e o reagente (reagente cromogénico),
originando um produto colorido. Os métodos que se baseiam nesse princípio
são denominados métodos calorimétricos, os quais geralmente são específicos
e muito sensíveis. A grande vantagem em utilizar compostos coloridos deve-se
ao fato de eles absorverem luz visível (região visível do espectro
electromagnético).

Neste trabalho temos como objectivo descrever sobre a análise de

Espectrofometria, que é um método utilizado para medir o quanto uma
substância química absorve a luz, medindo a intensidade quando um feixe de
luz passa através da solução da amostra.

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 2. REFERENCIAL TEÓRICO

A espectrofotometria é muito utilizada para análises biológicas e físico-

químicas, sendo amplamente empregada em laboratórios de controlo de
qualidade, de análises clínicas e criminalísticas. Essas análises são efectuadas
por equipamentos denominados espectrofotômetros.

Esse método baseia-se no princípio básico de que cada composto absorve,

transmite ou reflecte luz (radiação electromagnética) em uma determinada
amplitude de comprimento de onda. A partir disto, pode-se também determinar
não apenas ao composto, mas também a sua concentração.

Por meio da espectrofotometria é realizada a medição da intensidade da luz em

comprimentos de onda, sendo que os compostos químicos podem ser
identificados por seus espectros característicos em diferentes regiões do
espectro electromagnético (ultravioleta, visível e infravermelho).

A técnica utiliza da propriedade que os compostos químicos possuem de

absorver e transmitir luz, ou seja, na prática, a concentração destes compostos
pode ser determinada de acordo com a quantidade de luz que foi absorvida ou
transmitida.

Desta forma, quanto mais concentrada for uma solução, maior será a sua
absorção de luz (absorbância). Já a cor da solução é determinada pela cor da
luz transmitida (transmitância).

2.1 Absorvância

É a capacidade de absorver a luz, ou seja, é a fracção de energia luminosa que

é absorvida por uma determinada espécie química.

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2.2 Transmitância

É a capacidade de transmitir luz, ou seja, é a fracção da energia luminosa que

consegue atravessar a amostra, sem ser absorvida.

A absorbância e transmitância de uma solução estão relacionadas uma com a

outra, quando uma aumenta, a outra diminui. Tratam-se então de grandezas
complementares, ou seja, sua soma é igual a 1 (100%). Se 25% da luz é
transmitida, quer dizer que 75% foi absorvida.

Os diferentes elementos absorvem energia em comprimentos de onda

específicos, possuindo cores características. A luz é uma forma de radiação
electromagnética e ao incidi-la em uma amostra, vamos ter excitações em
diferentes comprimentos de onda, nos permitindo assim identificar os
compostos de acordo com seus respectivos espectros emitidos.

No entanto, são visíveis ao olho humano apenas as radiações

electromagnéticas com comprimento de onda (λ) entre 380 e 750 nm, ou seja,
a luz visível constitui uma parcela muito pequena no espectro
electromagnético.

Abaixo dos 380 nm, temos a radiação ultravioleta (UV) e acima dos 750 nm,
encontramos a região do infravermelho (IV), que também são utilizadas em
análises químicas.

O tipo e a forma de interacção de um composto com a luz depende da

concentração da matéria contida na amostra e da espessura da solução. A
radiação pode interagir com um composto de três formas. São elas:

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 1. Espectrofotometria de absorção

Esse tipo de espectrofotometria, relaciona a energia absorvida com o

comprimento de onda da luz incidente.

2. Espectrofotometria de emissão

Nela é analisada a quantidade de energia transmitida por um material com

relação ao comprimento de onda da radiação absorvida.

3. Espectrofotometria de espalhamento

Determina a energia dispersa em função do comprimento de onda, ângulo de

incidência e de polarização da luz incidente.

2.3 Espectrofotometro

É um equipamento utilizado para medir a energia absorvida por uma amostra e

compará-la com uma medida padrão. Dessa forma, é capaz de quantificar a
concentração de diversas soluções, sendo aplicado em áreas distintas como
bioquímica, análises clínicas, biologia molecular, química e física.

O espectrofotômetro demonstra de maneira quantitativa o quanto uma solução

está mais concentrada que outra por meio de sua interação com a luz. Nesse
sentido, a intensidade da cor se refere à concentração de moléculas
absorventes da luz.

Componentes do espectrofotometro:

a) Fonte de luz, responsável pela luz incidente sobre a amostra.

b) Lente Colimadora,

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 c) Prisma ou Rede de difracção, responsável por transformar a luz incida
em vários comprimentos de onda, em um só comprimento.

d) Fenda seletora,

e) Cubeta (vidro, quartzo), recipiente utilizado para armazenar o material

durante a análise. Basicamente, o funcionamento de um
espectrofotômetro consiste em utilizar uma luz incidente e torná-la em
um único comprimento de onda que incide sobre uma amostra,
identificando posteriormente a quantidade luminosa que passa pelo
material durante a leitura.

f) Detector, é um dispositivo que detecta a fração de luz que passou pela

amostra e transfere para o visor e/ou para o computador acoplado ao
aparelho.

g) Leitor, responsável por fazer a leitura da informação obtida durante a

análise.

Como funciona um espectrofotometro?

A luz é uma forma de radiação electromagnética que apresenta características

de onda e partícula. Quando há um aumento da radiação incidida, ocorre a
ampliação da energia no composto químico que recebe a luz. Parte da luz
lançada sobre a amostra é absorvida e outra é transmitida.

A lei de Lambert-Beer afirma que a absorbância é proporcional à concentração

de soluto em uma amostra desde que o material apresente baixas
concentrações, não ocorra reacções durante a análise e o experimento seja
feito através de um único comprimento de onda.

Com isso, um espectrofotômetro precisa produzir uma luz monocromática, com

um único comprimento de onda, e necessita ser capaz de detectar de forma
sensível à quantidade de luz absorvida nesse comprimento de onda. O valor
detectado deverá ser passado para um computador ou leitor digital através de
números.

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2.4 Tipos de espectrofotômetros

Há outros tipos que são utilizados em aplicações específicas. Veja abaixo

quais são os principais.

1. Espectrofotômetro UV-Visível

Como já citado, mede a intensidade de absorção de luz ultravioleta e visível

que atravessa uma determinada amostra. É o mais popularmente encontrado
em laboratório e, em geral, supre as necessidades desses ambientes.

2. Espectrofotômetro Infravermelho

Esse instrumento é capaz de quantificar a absorção de luz infravermelha em

um material de análise. Necessita de uma fonte de luz infravermelha contínua e
um transdutor infravermelho sensível.

É aplicado na determinação quantitativa e qualitativa de espécies moleculares

e também está envolvido na análise da estrutura de espécies orgânicas e
bioquímicas.

3. Espectrofotômetro de absorção atómica

É usado para analisar quantitativamente elementos metálicos em solução e

envolve a medida da absorção da intensidade da radiação electromagnética de
uma luz primária, por átomos no estado fundamental. É composto por uma
fonte de atomização e um conjunto monocromador, detector e processador. A
atomização pode ser feita em chama, através de vapor a frio e em forno de
grafite.

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 3. CONCLUSÃO

De acordo com o conteúdo exposto apresentado acima, concluímos que a

espectrofotometria é uma ferramenta que depende da análise quantitativa de
moléculas, dependendo de quanta luz é absorvida por compostos coloridos.
Características importantes dos espectrofotômetros são a largura de banda
espectral (a faixa de cores que ele pode transmitir através da amostra de
teste),

Desta feita, o grupo pude concluir veementemente que a Espectrofotometria é

crucial para as Análises Clínicas, pois auxilia no diagnóstico de diversas
patologias.

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 4. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

https://www.lojaroster.com.br/blog/espectrofotometria-espectrofotometrofuncao-
tipos/

https://kasvi.com.br/espectrofotometria-analise-concentracao-solucoes/

https://www.ufrgs.br/leo/site_espec/index.html

https://cienciaemacao.com.br/introducao-a-espectrofotometria/

https://www.sinergiacientifica.com.br/espectrofotometro-para-que-serve-como-
funciona-quais-sao-seus-componentes/