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Ouro Preto
2019
Fotometria
Espectrofotometria
Coletesterol
Potássio Triglicerídeos
total
Radiação Eletromagnética
Ondas que se propagam no ar ou no vácuo.
Comprimento de onda
Comprimento de Onda
= comprimento de onda em nm (caracteriza a energia radiante)
1nm = 10-9 m
Maior o
A
Menor a
energia
Espectro Eletromagnético
Espectro Ultravioleta
Ação
Propriedades Relacionada a
potencialmente
bactericidas: danos oculares
carcinogênica
Espectro Infravermelho
Retorno ao
Ação em
Vibram e estado
Energia ligações Medida
deformam original libera
covalentes
energia
Espectro Infravermelho
Espectro Infravermelho
Espectro Visível
Cores Fundamentais
-.
Azul 440 – 500
Verde 500 – 570
Amarelo 570 – 590
Alaranjado 590 – 620
Vermelho 620 – 780
Cores Complementares
Princípio
Propriedades Absorver e
Processo de
Espectrometria dos átomos e emitir energia
medida
moléculas eletromagnética
Leis da Fotometria
Ar e a parede da cubeta
Parede da cubeta e a solução
Aumento da
concentração ou Aumento da
intensidade de cor espessura da solução
da solução
Lei de Lambert-Beer
Lei de Lambert-Beer
a = absortividade constante
A = a.b.c b = caminho óptico
c = concentração da solução
Absorbância x Transmitância
Io = I
T=1 100%
Absorbância x Transmitância
log T%= -A + 2
log T%= 2 – A
A= 2 – log T%
Interesse
Equipamentos
Isolar uma faixa estreita do comprimento de onda do espectro.
Fotômetros Espectrofotômetros
Utilizam prismas
Aparelhos que
ou grades de
utilizam filtros
difração
Espectrofotômetros
Instrumentos capazes de registrar dados de absorbância ou
transmitância em função do comprimento de onda.
Excitação de
Descargas elétricas filamentos de Energia radiante
diferentes
Incandescentes Laser
Gerar radiação
Baixo custo
continua
H ou Quartzo-
Tungstênio Mercúrio
Deutério iodo
Mais utilizada para Usada para
Invólucro de Mais usada em
UV próximo e emissão de
quartzo fluorimetria
visível radiação UV
Exemplos
Óxido de alumínio e óxido de cromo (690nm), argônio (568nm),
dióxido de carbono (337nm).
3 – Monocromador
Elemento de
Fenda de
dispersão da Fenda de saída
entrada
radiação
FILTROS
Filtros de Vidro
Não!!!
Transmite uma
Não isola um λ faixa muito
ampla de λ
Filtros de Interferência
Sílica
Vidro Plástico
(quartzo)
Redondas
É um receptor de fótons.
Elétron Fóton
(energia (energia
elétrica) luminosa)
Tubo
Fotodetectores Fotodiodos
fotomultiplicador
6 - Circuito Medidor
Enviado a um
Sinal de saída Apresentação
Processamento dispositivo de
do detector do resultado
saída
Analógico
Digital (display numérico)
Os espectrofotômetros podem ser de dois tipos
Mono-feixe
Duplo-feixe
Branco
O uso do Branco em fotometria é necessário para estabelecer a
absorbância zero do reagente utilizado
Exemplo
Elimina a
Zera o contribuição da
Branco
equipamento A dos reagentes
nos resultados
Branco da Reação
Branco da Amostra
Amostra sem adição de reagentes para a formação de cor;
Usado em algumas reações para eliminação de interferentes;
Hemólise, triglicerídeos e bilirrubina em excesso.
Padrão
Substância que está sendo investigada em uma concentração
conhecida.
Exemplo
Qual λ?
Objetivo
Solução VERDE
Sensibilidade
Obter linearização
Aumentar a faixa de trabalho Hemoglobina
Eliminação interferentes Bilirrubina
Lipemia
Como definir o comprimento de onda?
Relação entre A e λ
Faixa Útil de Trabalho
Para obter uma exatidão máxima nas leituras fotométricas é
necessário conhecer a faixa útil do colorímetro ou
espectrofotômetro.