Espectrofotometria de

absorção molecular- UV-Visível

O QUE É ENERGIA
ELETROMAGNÉTICA

• Forma de energia que se propaga no espaço

a enormes velocidades, normalmente em
linha reta

• Características ondulatórias e corpusculares

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3

2
 PARÂMETROS ONDULATÓRIOS

• PERÍODO (p, 1/ν)  tempo requerido, em segundos, para a

passagem de máximos ou mínimos sucessivos por um ponto
fixo no espaço.

• FREQÜÊNCIA (ν)  número de oscilações do campo que

ocorrem por segundo  1/p  depende da fonte  Hz ou
ciclos/s ou s-1

• VELOCIDADE (vi)  velocidade com que a onda se move no

meio  depende da freqüência e do meio  vi = ν λ

• no vácuo e no ar c=3,00x108 m/s

PARÂMETROS ONDULATÓRIOS

• COMPRIMENTO DE ONDA (λ)

distância linear entre dois máximos ou mínimos
sucessivos de uma onda  cm, µm, nm

• NÚMERO DE ONDA (ν, σ)

número de ondas por centímetro de percurso no vácuo
 cm-1

3
 PARÂMETROS ONDULATÓRIOS

FEIXE MONOCROMÁTICO
feixe de radiação cujos raios têm comprimentos de onda
idênticos (um único comprimento de onda)

FEIXE POLICROMÁTICO
feixe de radiação constituído de raios de comprimentos
de onda diferentes (mais de um comprimento de onda)

PARÂMETROS CORPUSCULARES

A radiação eletromagnética é um conjunto de

partículas (fótons) de determinada freqüência

A energia deste fóton é dada pela equação

E=hν
E = energia (unidade = erg)
h = 6,624x10-24 erg.s
ν = freqüência

4
 O QUE É O ESPECTRO
ELETROMAGNÉTICO

É o arranjo ordenado das radiações conforme

seus comprimentos de onda

O espectro foi dividido em várias regiões

conforme a origem das radiações, as fontes e os
instrumentos

ESPECTRO
ELETROMAGNÉTICO

300 Visível 800

Raios
Raios cósmicos gama Raios X UV IR Microondas Ondas de rádio

10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1 1 10 102 103 104 105 106 107 108 109 1010 1011 1012

Energia Comprimento de onda

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5
 ESPECTRO
ELETROMAGNÉTICO

Região Comprimento de Onda (nm)

Ultra-Violeta Afastado 10 - 200

Ultra-Violeta Próximo 200 - 380
Visível 380 - 780
Infravermelho Próximo 780 - 3000
Infravermelho Médio 3000 - 30000
Infravermelho Afastado 30000 - 300000
Microondas 300000 - 1000000000

Joint Committee on Nomenclature in Applied Spectroscopy

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ESPECTRO VISÍVEL

• As radiações de 800 nm até 300 nm são detectadas

pelo olho humano

• Essas radiações também são chamadas de LUZ

BRANCA

300 nm 800 nm

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6
Interação da Radiação Eletromagnética com
a Matéria

Não Quantizada

Reflexão
Refração
Dispersão
Espalhamento

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Interação da Radiação Eletromagnética com

a Matéria

Quantizada

ABSORÇÃO DE RADIAÇÃO
processo no qual energia eletromagnética é transferida para
átomos, íons ou moléculas que compõem a amostra

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7
 Interação da Radiação Eletromagnética
com a Matéria

• ABSORÇÃO ATÔMICA
Absorção da energia eletromagnética por átomos
espectros de linhas transições eletrônicas de um ou
mais elétrons
• ABSORÇÃO MOLECULAR
Absorção da energia eletromagnética por moléculas
espectros de bandas

Et = Evibracional + Erotacional + Eeletrônica

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ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO MOLECULAR

NO
ULTRAVIOLETA-VISÍVEL

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8
 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO MOLECULAR
NO
ULTRAVIOLETA-VISÍVEL

Método baseado na medida da energia

eletromagnética absorvida por soluções iônicas ou
moleculares

Incidência da radiação monocromática sobre meio

homogêneo b

Io I
 Refletida
 Absorvida
 Transmitida Io = Feixe incidente
I = Feixe transmitido

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Espectrofotômetro UV-Vis

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9
 CONSTRUÇÃO ESQUEMÁTICA DE UM
ESPECTROFOTÔMETRO

19

20

10
 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO
MOLECULAR NO UV-VISÍVEL
A LEI DE LAMBERT
“Quando a luz monocromática passa através de um meio
transparente, a taxa de decréscimo da intensidade com a
espessura do meio é proporcional à intensidade da luz.”

A LEI DE BEER
“A intensidade do feixe de luz monocromática decresce
exponencialmente à medida que a concentração da substância
absorvente aumenta aritmeticamente.”

Log Po/P =abc Lei de Lambert- Beer

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ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO
MOLECULAR NO UV-VISÍVEL

T= transmitância  fração de radiação incidente e

transmitida pela solução
T = P/Po
A= absorvância  logaritmo decimal da razão entre o poder
radiante incidente e o transmitido
Relação entre transmitância e absorvância.

A= log Po/P= log 1/T

A= - Log T

22

11
 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO
MOLECULAR NO UV-VISÍVEL

Relação entre absorvância e concentração

A = abc = εbc

a= absortividade (dependente de b e c)

b= comprimento do caminho ótico

c= concentração das espécies absorventes

ε = absortividade molar unidades de c e b são,

respectivamente, moles/litro e cm

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LEI DE BEER

• A radiação incidente é monocromática

• As espécies absorventes comportam-se independentemente em

relação ao processo de absorção

• A absorção ocorre em um volume uniforme de secção

transversal

• índice de refração da solução independe da concentração

• Concentração menor que 10-2 M ( < 10-2 M )

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12
25

REPRESENTAÇÃO GRÁFICA DA LEI DE

BEER

Curva analítica

y = 0,0476x + 0,0016
Absorbância( A)

0,300
R2 = 0,9999
0,200

0,100

0,000
0 2 4 6
Concentração ( c )

26

13
 DESVIOS DA LEI DE BEER

• Não constância na relação A/C

• feitas para dedução da lei não podem ser

rigorosamente seguidas na prática

• Índice de refração não permanece constante quando

as concentrações são altas

• Radiação não monocromática

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DESVIOS DA LEI DE BEER

REAIS
• Manifestam-se principalmente para valores elevados
de concentração (C > 10-2 M )
• Interação entre os centros absorvente
• Indice de refração

APARENTES
Químicos
Instrumentais

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29

FONTE DE RADIAÇÃO( CARACTERÍSTICAS)

Radiação na faixa espectral desejada (emissão)

Emissão estável
Potência suficiente ( maior potência < amplificação
do sinal)
Filamento de tungstênio (375 a 2000 nm)
Deutério (200 a 400 nm)
Arco de xenônio (200 a 1000 nm)

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15
 FILTROS E MONOCROMADORES

Filtros de absorção (Isolam uma banda espectral ),

largura espectral de 30 a 50 nm e transmitância
máxima de 5 a 20 % . Vidros coloridos ou peliculas
de gelatina contendo corantes.
Filtros de interferência ( isolam faixa espectral mais
estreita) Baseiam-se nos fenômenos de interferência
para isolar uma faixa espectral desejada.

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MONOCROMADORES

Componentes: fenda de entrada, fenda de saída e

sistema de dispersão ( Prisma ou rede)

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16
 Monocromadores
Componentes: fenda de entrada, fenda de saída e
sistema de dispersão ( Prisma ou rede)

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PORTA AMOSTRA- CUBETAS

Cubetas- recipiente que contem a amostra

Quartzo, silica fundida- Região UV-Vis
Vidro a base de borosilicatos- Região Vis
Forma e tamanho
Retangulares (1,2 ,5 cm )
Cilíndricas ( usadas em instrumentos simples,
devem ser colocadas sempre na mesma posição)

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 CUBETAS

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Detectores - Célula fotovoltaica

Características- baixo custo, sem fonte externa de

alimentação, sujeito a fadiga ( resposta decresce
quando exposta a iluminação continua)

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 Detectores - Celula fototubo

Características- Corrente gerada é diretamente

proporcional ao poder radiante .Amplificação do sinal
de resposta é facil

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Detectores - Celula fotomultiplicadora

Características- poder de amplificação alto implica

que o poder radiante pode ser pequeno (potência
radiante pode ser 200 vezes menor do que o do foto
tubo)

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 APLICAÇÕES
Visível
• Substâncias naturalmente coloridas
• Substâncias que possam reagem com algum
composto formando um produto colorido.

UV
• Substância que possuam em sua estrutura química
duplas ou triplas ligações
• Substâncias que tenham grupos aromáticos.

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Espectros de Absorção

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20
 Espectro de absorção de AA aromáticos

41

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 VANTAGENS

• Aplicação extensiva a muitos elementos

químicos
• Instrumentação relativamente barata
• As amostras podem ser de natureza
inorgânica ou orgânica
• Disponibilidade de métodos simultâneos e
contínuos
• Intervalo de aplicação :10-3 a 10 -6 M
• Tempo gasto por análise: moderado
• Custo : relativamente baixo
• Tipo de amostras: sólidas liquidas e gasosas

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Enzimáticos: Altamente específicos

Método da Glicose Oxidase: Ex. Tiras reagentes para glicose

* *
(1) β-D-Glicose + O2 → gluconolactona → ac. Glucônico + H2O2

* = Glicose Oxidase * = H2O2 e O2

(2) H2O2 + aceptor de O2 cromogênico →* Cor (cromógeno) + H2O
( orto-dianisidina ou
Fenilamina-fenazona) *
Peroxidase Espectrofotômetro

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 Método da Hexoquinase

*
(1) Glicose + ATP → Glicose-6-Fosfato + ADP
* Hexoquinase + Mg+2

(2) Glicocose-6-Fosfato + NADP →

* 6- fosfogluconolactona + NADPH +
H+
* G6PD = Glicose-6-P-desidrogenase

Método baseado na quantificação de NADPH por espectrofotômetro (340nm)

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Referências bibliográficas

•SKOOG.D.A,HOLLER,F.J.,NIEMAN,T. A .-Princípios de Análise

Instrumental, 5a ed. Bookman,2002
•SKOOG.D., WEST,D.M.&HOLLER,F.J. Fundamentals of
Analytical Chemistry, Saunders College Publ.t th Ed.NY,1996
•Harris,D.C. Análise Quimicas Quantitativa, 5a ed. LTC
editora,RJ,Brasil, 2001
•Cienfuegos,F.Vaitsman,D.Análise Instrumental, Editora
Interciência, RJ,2000.

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