20/04/2019

Eletroforese

Definição:

Separação de moléculas em um campo elétrico

de acordo com o tamanho, forma ou a carga
elétrica.

Tem aplicações nas áreas de análises clínicas,

moleculares e genéticas.

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Aplicações da eletroforese

1 – detectar a presença de um gene no DNA de um indivíduo

2 – testes de paternidade
3 – diagnóstico de anemias (exemplo: anemia falciforme)
4 – diagnóstico de deficiências de anticorpos
(imunoglobulinas)
5 – controle da qualidade do DNA e RNA que serão
analisados

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Etapas da eletroforese
• Extração e purificação do material;
• Aplicação do material em um suporte: gel de
agarose, acrilamida, acetato de celulose;
• Imersão deste suporte em uma solução tampão
que permita a transmissão da corrente elétrica;
• Aplicação da corrente elétrica em intensidade e
tempo adequados,
• Visualização dos resultados.

Cuba e fonte para eletroforese

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Tipos de gel: Agarose

Usados para separar moléculas de DNA e RNA
de acordo com seu tamanho. Podem ser usadas
diferentes concentrações de agarose.
Normalmente utiliza-se a 2%

Eletroforese de DNA

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Tipos de gel: Poliacrilamida

Usados para separar pedaços de DNA de

tamanhos muito pequenos e proteínas.

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Acetato de celulose
Utilizado para separar diferentes tipos de
hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.

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Esquema da eletroforese de hemoglobina

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Corrente elétrica
As amostras de DNA, RNA e proteína
migram para o pólo positivo, pois são
carregadas negativamente.

Certifique-se da posição do gel e a direção

da eletroforese!

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Tampão de corrida
• Para amostras de DNA e RNA o tampão
deve ser o mesmo utilizado para diluir a
agarose (TAE ou TBE).

• Para amostras de hemoglobina utiliza-se o

tampão Tris em pH 8,5 (alcalino) ou
tampão agarose pH 6,5 (ácido).

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Análise dos resultados

A visualização das diferentes bandas depende de

coloração específica.
DNA e RNA = brometo de etídeo ou SYBR green
Proteínas = azul de coomassie e prata

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DNA e RNA
• Marcadores de tamanho para DNA e RNA

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DNA corado com SYBR green

Marcador de tamanho (100 pares de base)

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Proteínas

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