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ISSN 1980-3540

06.01, 04-08 (2011)

www.sbg.org.br

UMA SIMULAO DE TESTE DE PATERNIDADE:

QUEM O PAI DO BEZERRO?
Rogrio Fernandes de Souza1
1 - Departamento de Biologia Geral, Centro de Cincias Biolgicas, Universidade Estadual de Londrina, Caixa Postal 6001, CEP 86051-990,
Londrina, Pr, Brasil. E-mail: rogfs@uel.br

Palavras-chave: exame de paternidade, Reao em Ca-

deia da Polimerase, teste de DNA.

RESUMO
Devido ao fato das mutaes poderem afetar o DNA
de diferentes formas trocando, adicionando ou reti-
rando um ou mais pares de bases possvel encontrar
muita variao no material gentico dos indivduos de
uma espcie. Algumas tcnicas de biologia molecular
atualmente disponveis permitem identificar tal variao,
podendo ser utilizadas, dentre outras coisas, em exames
de paternidade e/ou anlises criminalsticas.

INTRODUO
A reao em cadeia da polimerase, ou simples-mente
PCR (do ingls Polimerase Chain Reaction), uma tc-
nica de biologia molecular muito utilizada atualmente
em diferentes tipos de estudos, que vo desde a caracteri-
zao da diversidade gentica das espcies at os exames
de paternidade e elucidao de crimes.
Basicamente, ela utilizada para amplificar de-ter-
minados trechos do genoma dos organismos a fim de
permitir que esses possam ser mais facilmente analisa-
-dos. Para compreendermos como algum pode ser iden-
tificado via PCR, preciso conhecer um pouco sobre a
fundamentao dessa tcnica. Um esquema simplificado
de uma PCR mostrado na Figura 1.
Figura 1. Os principais passos envolvidos na amplifi-
cao do DNA pela reao em cadeia da polimerase ou
PCR.
De um modo geral, o DNA de amostras biolgicas
(sangue, smen etc) de um indivduo extrado e purifi-
cado, sendo em seguida submetido a ciclos repetidos de
aqueci-mento e resfriamento em um aparelho conhecido
como termociclador. Nesse processo so utilizados, alm
do DNA a ser examinado, uma enzima capaz de sinteti-
zar novas molculas de DNA (chamada Taq polimerase),
iniciadores ou primers (pequenas molculas de cidos
nucleicos com cerca de 10 a 20 nucleotdeos de compri-
mento que demarcam o trecho a ser amplificado), bem

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como os deoxinucleosdeos trifosfatados ou DNTPs (os
precursores das novas molculas de DNA a serem pro-
duzidas), dentre outros componentes. Depois de uns 30
ciclos de aquecimento e resfriamento, que dura poucas
horas, um determinado trecho da molcula de DNA pode
ser duplicado mais de um bilho de vezes.
Para podermos comparar o DNA de diferentes indiv-
duos da populao, ou dos progenitores e de seus respec-
tivos descendentes, necessrio que, depois da PCR, ele
seja submetido a uma separao eletrofortica, conforme
exemplificado na Figura 2. Findada a eletroforese, o meio
que serviu de suporte para a separao do DNA, que nesse
tipo de experimento normalmente um gel de poliacrila-
mida, colocado em uma soluo de brometo de etdio ou
de nitrato de prata para corar os fragmentos amplificados.
Por que essa tcnica pode ser utilizada na identifi-
cao de indivduos?
Determinadas mutaes que afetam o DNA podem
alterar o tamanho dos fragmentos amplificados pela PCR.
Diferentes indivduos da populao podem apresentar frag-
mentos com diferentes comprimentos e, nesse caso, como
so herdveis, eles podem ser passados para a prole seguin-
do os princpios convencionais da herana mendeliana.
Sendo assim, nesses tipos de estudos so comumente
escolhidas para amplificao aquelas regies do genoma
que apresentam grande variao de tamanho. Quando di-
ferentes regies do genoma de um mesmo indivduo so
submetidas PCR e separao eletrofortica, possvel
gerar um perfil de amplificao praticamente exclusivo,
algo que se assemelha a uma impresso digital.
Figura 2. Esquema demonstrando a eletroforese de
DNA. Cada ponto corado, tambm chamado de banda,
representa um trecho de DNA de mesmo tamanho que foi
amplificado via PCR.
OBJETIVO DA PRTICA
O objetivo dessa prtica mostrar como a tcnica de
PCR pode ser utilizada na identificao dos indivduos
de uma determinada populao e, de uma maneira mais
especfica, como isso pode ser utilizado, por exemplo,
em exames de paternidade.
CONTEXTUALIZANDO A SITUAO
Devido a problemas de manejo, a vaca campe em
produo de leite do seu Osvaldo, acabou cruzando, de
maneira no programada, com um dos touros de seu re-
banho. Deste cruzamento, nasceu um bezerro que pode
combinar os genes campees da sua me com os genes
de um timo touro, ou ento, de um outro animal no to
bem qualificado.
Nesse rebanho existem trs touros suspeitos de terem
cruzado com a vaca. O laboratrio onde voc trabalha
foi convocado para definir qual deles pode ou no t-la
fecundado. Para tanto, amostras de sangue da vaca, do
bezerro e dos trs supostos progenitores foram coletadas
e purificadas separadamente por voc. Cabe agora reali-
zar a PCR e a eletroforese dos fragmentos amplificados.
PROCEDIMENTO
1. Os primers utilizados para amplificar um trecho do
DNA desses animais so mostrados na Figura 4,
juntamente com a regio do DNA de cada animal
por eles reconhecida;
2. Recorte os primers e procure identificar nos dois
cromossomos de cada animal o local em que eles
conseguem se ligar; preste ateno regra de am-
plificao do DNA que determina que: a) o primer
deve reconhecer um trecho onde todas as suas ba-
ses se pareiem corretamente com as bases do DNA
(seguindo a regra A=T e C=G); b) as polaridades do
primer e da molcula de DNA a qual ele se liga de-
vem ser invertidas (por exemplo, se a molcula de
DNA segue no sentido 5 3, o primer que se ligar
a ela dever seguir o sentido 3 5, e vice-versa); c)
a nova fita de DNA sintetizada somente no sentido
5 3 a partir de uma extremidade 3 livre (a do
primer);
3. Determine o tamanho dos trechos amplificados em
cada um desses indivduos, considerando desde onde
comea o primer 1 at onde termina o primer 2;
4. Em seguida, simule a separao desses fragmentos
pela eletroforese de DNA, de acordo com os seus
tamanhos, utilizando o esquema da Figura 3 (por
exemplo, um fragmento de 55 pares de bases deve-
5
 r ficar na posio 55, marcada a esquerda da Figu-
ra 3);
5. Lembre-se de que o fragmento presente no bezerro
e que no for encontrado na vaca deve ter sido her-
dado de seu pai;
6. Procure ento ver qual dos touros possui um frag-
mento de igual tamanho ao do bezerro; os que no
tiverem, devero ser automaticamente descarta-dos
da suposio de paternidade desse filhote.
ENTENDENDO ESTA ATIVIDADE
1. Quais foram os tamanhos dos diferentes fragmentos
amplificados nesses animais? Cada um desses frag-
mentos poderia ser considerado um alelo?
2. Depois de realizar a separao dos fragmentos de
acordo com os seus tamanhos, qual touro no pode
ser excludo da paternidade do bezerro?
3. Por que o touro 1 no pode ser o pai, tendo em vista
que este possui um alelo igual ao do bezerro?
4. Em que se baseiam os testes reais de paternidade a
partir do exame do DNA?
5. Qual seria o grau de exatido dos testes de paterni-
dade baseados no exame de DNA?
6. Os testes de paternidade ou identificao de amos-
tras de suspeitos de crimes so realizados dessa
mesma maneira?
RESPOSTAS S QUESTES
1. O tamanho dos fragmentos variou de 56 a 74 pa-
res de nucleotdeos. Considerando que representam
uma determinada regio do genoma, possuindo
apenas diferenas no seu comprimento, e que so Figura 3. Eletroforese dos diferentes fragmentos am-
herdados de maneira mendeliana, cada um deles plificados (canaletas onde devem ser colocados o DNA
pode ser chamado de alelo. do(a): V = vaca; B = bezerro; SP = supostos pais 1, 2
2. O alelo que o bezerro no compartilha com a me e, e 3).
portanto, foi herdado do pai, no encontrado nos
touros 1 e 2. J, um dos alelos do touro 3 igual ao 4. Tais testes partem da premissa de que herdamos
do bezerro. Logo, nesse caso, somente a paternida- um conjunto completo de molculas de DNA de
de desse touro no pode ser excluda. cada um de nossos progenitores. Contudo, embora
3. O bezerro possui um alelo de igual tamanho ao en- contenham praticamente as mesmas informaes
contrado tanto na vaca como no touro 1. Acontece genticas, podem haver diferenas sutis nas sequ-
que esse alelo s pode ter vindo da vaca, pois o ou- ncias de bases que herdamos de cada um deles.
tro alelo do bezerro no encontrado em sua me. So justamente essas pequenas diferenas que nos
Alm disso, se o touro tambm tivesse passado esse fazem geneticamente diferentes uns dos outros. Ao
mesmo alelo para o bezerro, este seria homozigoto longo do nosso genoma possvel encontrar regi-
e produziria uma nica banda no gel, ao invs de es que apresentam grande variao de tamanho
duas. entre os indivduos. Isso ocorre devido a mutaes

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 ao acaso que acrescentam ou retiram trechos re-
petidos de nucleotdeos (como a sequncia GAC/
CTG mostrada nessa simulao). Tais mutaes
normalmente no afetam de forma negativa os seus
portadores, podendo se acumular ao longo das ge-
raes. Isso garante a manuteno de uma grande
quantidade de alelos na populao. Tecnicamente,
tais regies repetidas so conhecidas como micros-
satlites ou repeties curtas em tandem (STRs, de
Short Tandem Repeat), pelo fato das sequncias que
se repetem serem pequenas em comprimento, sen-
do normalmente compostas por dois at nove pares
de bases. Alm disso, o nmero de vezes que essas
sequncias se repetem, numa dada regio, variam
frequentemente de 7 a 40 vezes;
5. Para um nico loco, existiro na populao em ge-
ral indivduos com alelos de tamanhos iguais e di-
ferentes. O fato de dois indivduos possurem alelos
idnticos no significa que eles sejam aparentados.
Afinal, as mutaes que os originam so fortuitas.
Portanto, por uma questo de puro acaso, possvel
que uma criana e um suposto pai com-partilhem
um ou mais alelos em comum sem que tenham al-
guma relao de parentesco (o fato de voc ter san-
gue do tipo A e o seu vizinho tambm, no significa
que ele seja o seu pai). Entretanto, os exames de pa-
ternidade so executados com muitos locos diferen-
tes, normalmente entre 12 a 20, e os resultados so
submetidos a testes estatsticos. Se um suspeito de
paternidade possui todos os alelos paternos presen-
tes na criana, a chance disso acontecer, por puro
acaso, muito baixa e ele no pode ser excludo
da paternidade. No entanto, se existem trs ou mais
alelos na criana que no esto presentes no DNA
do suposto pai, este automaticamente excludo da
paternidade1. Atualmente, a acurcia destes testes
ultrapassa 99,99%. Ou seja, o risco de um indiv-
duo ser falsamente identificado como pai de uma
criana muito baixo.
6. A identificao de criminosos pelo teste do DNA
funciona de maneira semelhante. Nesse caso, se um
criminoso deixa uma pequena amostra de sangue,
pele, esperma ou outro tecido que contenha DNA,
este colhido, purificado e amplificado para uma
srie de locos. A diferena que todos os alelos
amplificados de todos os locos sero utilizados na
identificao do suspeito. Nos Estados Unidos da
Amrica, existe um banco nacional de dados conhe-
cido pela sigla CODIS (de Combined DNA Index
System ou Sistema ndice de DNA Combinado).
Este concentra os dados de perfis genticos de in-
fratores condenados, evidncias de cenas de crimes
no resolvidos e de pessoas desaparecidas. Esse sis-
tema foi cedido ao governo brasileiro, estando em
fase de implantao pela Polcia Federal.
1
Existem casos raros de paternidade legtima nos quais nem to-
dos os alelos presentes na criana foram identificados nos seus
progenitores masculinos. Por isso, hoje se recomenda que a
excluso somente ocorra a partir da deteco de trs ou mais
incompatibilidades.
REFERNCIAS
PIERCE, B. (2004). Gentica. Um enfoque conceitual.
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Figura 4. Sequncias de DNA a serem amplificadas.