UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO - CAMPUS MACAÉ

CURSO: Ciencia Biologicas: Bacharelado e Licenciatura

DISCIPLINA: NUP127 - Bioquímica I
PROTOCOLO NO 2: Qualificação de proteínas
PROFESSORES: Elane Ribeiro e Flávia Mury
DATA DE REALIZAÇÃO: 09 de maio de 2023
LOCAL: Laboratório didático II/ NUPEM
NOMES: LEONARDO MAINI TEIXEIRA- DRE 121174108
WANDERSON DE SOUZA FRANCO JUNIOR - 121185280
WEVERTHON LEMOS DE ALMEIDA - 122094474

ROTEIRO DA AULA PRÁTICA DE DOSAGEM DE PROTEÍNAS

I - INTRODUÇÃO:

As proteínas, incluindo a água, são os compostos químicos mais abundantes nos

organismos, com extrema versatilidade de conformações e funções. Portanto, torna-se
importante a existência de métodos adequados de purificação e qualificação destes
compostos. A purificação e caracterização de uma proteína baseiam-se em suas
características físico-químicas. Por serem informadas por aminoácidos e considera-se que os
aminoácidos aromáticos absorvem luz na região ultravioleta, as proteínas, em geral, podem ser
detectadas através de absorção de luz a 280 nm. No entanto, a detecção de proteínas em
materiais biológicos envolve reações específicas com determinados reativos, os quais
originam substâncias coloridas que absorvem luz na região visível, permitindo a sua
qualificação.
O método de Bradford é uma técnica para determinação de proteínas totais que utiliza o
corante "Coomassie brilhant blue" BG-250. Este método é baseado na interação entre o
corante BG-250 e macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais
básicas ou aromáticas. No PH de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e
o corante BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que
absorve fortemente 595 nm.
Normalmente, a medida de intensidade do corante é feita com o uso de um aparelho
chamado de espectrofotômetro. Ele consegue medir a intensidade de cor de uma amostra
baseada na sua capacidade de absorver luz. Quanto mais cor uma amostra apresenta, mais cor
pode ser absorvida. Assim, comparando-se os valores de absorção de luz apresentados pela
amostra com os valores apresentados pela solução padrão é possível determinar o teor de
proteína presente na amostra.

II - OBJETIVO:

● Detectar e qualificar a presença de proteínas em algumas soluções

III - MATERIAL NECESSÁRIO

● Solução padrão de concentração: BSA 1%

● Solução de Bradford
● Amostra desconhecidas A, B e C

● Água destilada
 ● Pipetas
● Tubos de ensaio
● Estantes para os tubos
● Espectrofotometro
● Papel milimetrado

IV - PROCEDIMENTOS

A turma será dividida em grupos, e cada um deles ficará responsavel por dosar uma
amostra (A, B ou C).

IV.1 - Preparando a curva padrão / curva de calibração BSA (Albumina sérica bovina)

Usar 10 tubos de ensaio e adicionar o padrão de albumina e água em cada um deles de

acordo com a tabela abaixo. Fazer com as amostras desconhecidas nos tubos 11 e 13.

IV.2 - Esperar de 10 a 15 minutos para a cor estabilizar.

IV.3 - Observe a intensidade da cor nos tubos e Compare as cores dos tubos referentes
às amostras desconhecidas com os padrões de albumina.

IV.4 - Qualifique a absorbância das amostras no espectrofotômetro, com comprimento

de onda de 595nm. Anote os valores para cada tubo.

IV.5 - Calcule a concentração de BSA em cada tubo da curva padrão.

IV.6 - Construa a Curva de calibração, isto é, um gráfico em papel milimetrado,

relacionado à concentração de BSA X absorbância.

LEI DE LAMBERT-BEER

É possível determinar o valor da concentração das amostras desconhecidas pela relação: ABS
=k.C

Lei de Lambert-Beer: A absorbância é linearmente proporcional à concentração.

Esta equação é associada ao gráfico obtido e correspondente a uma equação da reta reduzida
que passa pela origem, ou seja:

Equação da reta reduzida: y = a . X + b

IV.7 - Trace a reta média e calcule a coeficiente angular.

IV.8 - Determine a concentração de proteínas presente nas amostras desconhecidas.

V - QUESTÕES

1. Por que utilizamos um Branco para dosagem da concentração de proteínas?

É utilizado para medir e corrigir a absorbância de fundo dos reagentes e para corrigir o efeito
de diluição, proporcionando uma medida mais precisa e confiável da concentração de
proteínas na amostra.

2. Qual a concentração de proteínas nas amostras A, B e C?

A 5,32
B 5,32
C 5,32