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INSTITUTO DE QUÍMICA
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ANALÍTICA
QUI B36 - Química Analítica IIA
Espectrofotometria de Absorção
Molecular nas Regiões do
Ultravioleta e Visível (UV-Vis)
Região
IV médio
25 a 2,5mm
Energia crescente ➔
Cores da Luz Visível
A percepção de cor resulta da absorção seletiva de certos comprimentos de onda. Os
demais comprimentos são transmitidos ou refletidos e percebemos como cor do objeto.
• Comprimentos de onda inferiores a 180 nm são altamente energéticos que levam à ruptura de ligações
químicas.
• Acima de 780 nm atinge-se o infravermelho próximo, onde a energia, já relativamente baixa, começa apenas a
promover a vibração molecular e não mais transições eletrônicas.
TEORIA QUÂNTICA
• Átomos, íons ou moléculas têm somente um número
limitado de níveis de energia discretos.
• A energia do fóton deve ser exatamente igual a diferença
de energia entre o estado fundamental e um estado
excitado da espécie absorvedora.
• As diferenças de energias são características para cada
espécie; o estudo da radiação absorvida proporciona
caracterizar os componentes da amostra.
Absorção Molecular
As moléculas sofrem três tipos diferentes de transições quantizadas quando excitadas pela
radiação ultravioleta e visível.
- Eletrônica: energia associada com os elétrons nos vários orbitais externos da molécula
- Vibracional: energia devido às vibrações interatômicas
- Rotacional: energia associada com a rotação da molécula em torno do seu centro de gravidade
Devido ao grande número de estados vibracionais e rotacionais, um espectro de absorção no UV/Vis apresenta um
formato alargado (banda).
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
350 450 550 650 750
Comprimento de onda (nm)
Espectros de absorção
Espectro de Absorção
Absorção Molecular no UV/Vis
• Medidas de absorção da radiação eletromagnética na região do UV/Visível encontram vasta
aplicação para identificação e determinação de milhares de espécies inorgânicas e orgânicas.
• Os métodos de absorção molecular talvez sejam os mais amplamente usados dentre todas as
técnicas de análise quantitativa em laboratórios químicos e clínicos em todo mundo.
• Transmitância
• Absorvância (absorbância)
b
✓ A transmitância T da solução é a razão da radiação incidente e transmitida pela solução:
P
T= portanto, T está entre 0 e 1.
Po
✓ A transmitância percentual é simplesmente 100T e fica entre 0 e 100%.
P
% T= x 100%
Po
O que é medido?
A = log Po = − log T
P
P
A = -log T Po
b
✓ A absorvância (A) de uma solução está relacionada com a transmitância de forma
logarítmica.
✓ Quando a absorvância de uma solução aumenta, a transmitância diminui.
✓Se nenhuma luz é absorvida, P = Po e A = 0.
✓ Se 90% da luz são absorvidos, 10% são transmitidos e A= 1.
Lei de Lambert e de Beer
Lei de Lambert: " A intensidade da luz Lei de Beer: " A intensidade da luz absorvida
absorvida cresce proporcionalmente à medida cresce proporcionalmente à medida que a
que a espessura do meio absorvente aumenta concentração da substância absorvente aumenta
aritmeticamente ". aritmeticamente ".
Relação entre A e T com a concentração
2,0
A = -log T
Absorbância
1,5
1,0
0,5 1,0
0,0 0,8
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0
Transmitância
Concentração
0,6
0,4
0,2
0,0
0 2 4 6 8 10
Concentração
Lei de Lambert-Beer
✓ A absorvância é diretamente proporcional à concentração, c, de espécies absorventes e
ao caminho óptico, b.
A= abc
ou
A= ebc
A = absorvância (adimensional)
a = absortividade (característica de cada espécie absorvente)
b = caminho óptico (cm)
c = concentração da espécie absorvente (g/L ou mol /L)
e = absortividade molar (quando a concentração, c, da espécie é dada
em mol L-1)
Análise Quantitativa
Procedimento
✓ A espécie a ser analisada deve absorver luz em conhecido. Normalmente seleciona-se onde
absorvância é máxima: maior sensibilidade, menor incerteza.
✓ Conhecimento das variáveis que influenciam o espectro de absorção: pH, solvente, interferentes,
quantidade de reagentes, etc.
✓Preparo do “branco”: contém todos os reagentes presentes na solução da espécie a ser analisada,
menos a espécie a ser determinada. Normalmente, subtrai-se a absorbância do branco das
absorbâncias das soluções padrões e da amostra antes de realizar-se os cálculos.
• Fator de calibração
O fator de calibração (FC) é um artifício utilizado rotineiramente e seu cálculo é feito de acordo com
o que se segue:
De posse do fator de calibração (FC), é possível obter-se a concentração
da amostra:
Exemplo
Complete a tabela a seguir, calculando os valores que faltam.
Espectrofotometria de Absorção
Molecular nas Regiões do
Ultravioleta e Visível (UV-Vis)
Continuação...
A = -log T T = 10-A
Lei de Lambert-Beer
1,0
ou
P 0,8
Po A= abc
Transmitância
0,6
b ou 0,4
A= ebc 0,2
0,0
0 2 4 6 8 10
Concentração
Absorbância
1,5
1,0
Sim será, pois a lei de Beer prevê uma relação linear entre a absorbância e a
0,5
concentração. Portanto, aumento a concentração por um fator de 10 a
0,0
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0
absorbância também será alterada por este fator Concentração
Desvios da Lei de Beer
Desvios notáveis da proporcionalidade linear entre a absorvância e a concentração
são encontrados na lei de Beer.
Desvio
positivo
Absorvância
Desvio
negativo
CONSIDERAÇÕES:
1- É válida para baixas concentrações
concentração
do analito, abaixo de 0,01 mol L-1.
A distância entre os analitos individuais torna-se pequenas o que faz com que
a absorção da luz seja dificultada à medida que a concentração aumenta
2- A lei de Beer é válida para uma radiação monocromática, ou seja, para um único
λ.
✓Equilíbrio ácido-base
• ⇩ pH → ⇧ [HIn] e vice-versa ➔ ⇧ A ou ⇩ A.
Instrumentação
SELETOR DO
FONTE COMPRIMENTO AMOSTRA DETECTOR REGISTRADOR
DE ONDAS
Processador e
leitor de saída do
sinal ou
Registrador
Espectrofotômetro
SELETOR DO
FONTE COMPRIMENTO AMOSTRA DETECTOR REGISTRADOR
DE ONDAS
• São constituídas por filamentos de materiais que são excitados por descargas
elétricas com elevada voltagem ou aquecimento elétrico.
Fontes de Radiação
- Lâmpada de tungstênio: fonte de radiação visível e infravermelho próximo. Opera
numa temperatura de 3000 K e produz radiação útil na faixa de 320 a 2500 nm.
Os vários comprimentos de onda terão diferentes direções após a incidência no prisma. Se for
realizado um ajuste rigorosamente controlado da fenda de saída, pode-se selecionar o
comprimento de onda desejado
Monocromadores – Redes de difração
Fenda
Rede de
difração
Detector
• Para compensar esses efeitos, a potência do feixe, transmitida através de uma célula com a solução
do analito, é comparada com a potência que atravessa uma célula idêntica contendo somente o
solvente ou o branco dos reagentes.
Espectrofotômetro
SELETOR DO
FONTE COMPRIMENTO AMOSTRA DETECTOR REGISTRADOR
DE ONDAS
SELETOR DO
FONTE COMPRIMENTO AMOSTRA DETECTOR REGISTRADOR
DE ONDAS
Processador de dados
Absorvância
- Cada centro atua de modo independente sobre a radiação.
- A lei de Beer pode ser estendida a mistura de vários componentes.
- Cada espécie possui absortividade diferente e as absorvâncias se adicionam.
- Para uma mistura de dois componentes I e II em certo : 1 2
Os valores do quadro abaixo são pertinentes a um determinado cromóforo. Complete as
lacunas em branco, admitindo que o sistema obedece a lei de Lambert-Beer. Se for impossível
calcular, assinale a lacuna correspondente com um “X”. Demonstre todos os cálculos
e a Massa C C b A %T
(nm) (L/mol.cm) (L/g.cm) molar (g/L) (mol/L) (cm)
(g/mol)
640 4000 40,0 1,5 x 10-5 50,0
500 2000 2,5 x 10-5 2,0
20,0 168 1,5 0,600
Os valores do quadro abaixo são pertinentes a um determinado cromóforo. Complete as
lacunas em branco, admitindo que o sistema obedece a lei de Lambert-Beer. Se for impossível
calcular, assinale a lacuna correspondente com um “X”. Demonstre todos os cálculos
Massa
e a C C b
molar A %T
(nm) (L/mol.cm) (L/g.cm) (g/L) (mol/L) (cm)
(g/mol)
640 4000 40,0 100 1,5 x 10-3 1,5 x 10-5 5,0 0,301 50,0
X 3333 20,0 168 2,0 x 10-2 1,2 x 10-4 1,5 0,600 25,1