Automação em Bioquímica e

os Materiais Usados no
Laboratório
DISCIPLINA: BIOQUÍMICA CLÍNICA
PROF.: RANIERE FAGUNDES
 Identificação dos Métodos Ópticos

Tipo Exemplo
Absorção Absorção Atômica, densitometria, espectroscopia de luz
infravermelha com transformação de Fourier, fotometria,
espectrofotometria, fotometria de reflexão, espectroscopia de raio X
Emissão Espectrofotometria de emissão de chama, espectroscopia de
correlação de fluorescência (fcs), espectroscopia de transferência
de energia de fluorescência (fret), fluorimetria, luminometria (luz
emetida de luminescência, quimioluminescência ou reação de
eletroquimioluminescência), fosforimetria, fluorimetria com resolução
temporal
Polarização Espectroscopia de polarização de fluorescência, polarimetria
Dispersão Nefelometria, turbidimetria
Princípios dos principais métodos

 Espectrofotometria
 Turbidimetria e Nefelometria
 Espectrofotometria
 Definição:
 Medida da Intensidade da luz em comprimentos de onda selecionados

Instrumentos modernos isolam uma faixa

de comprimento de onda
Fotômetros: Utilizam filtros
Espectrofotômetros: Prismas ou grades
Espectrofotometria
 Relação entre Absorbância e Transmitância

Transmitância é a fração Absorbância é

da luz incidente com um capacidade intrínseca
comprimento de onda dos materiais em
específico, que atravessa absorver radiações em
uma amostra de matéria frequência específica

 Transmitância e absorbância tendem a ser grandezas

complementares. Assim, a soma dessas grandezas (para a mesma
energia e comprimento de onda incidente) é aproximadamente igual
a 1, ou 100%. Então, se 90% da luz é absorvida, então 10% é
transmitida.
Espectrofotometria
 Transmitância:
 Quando um feixe de luz incidente com intensidade I0 passa através de uma
solução contendo um determinado composto (que abosorve luz em um
determinado comprimento de onda), a intensidade de luz transmitida I é
inferior a I0 , e a luz transmitida é definida como:

Intensidade de
luz transmitida
Transmitância

Intensidade da luz
incidente (I0)
Espectrofotometria
Em escpectroscopia, a absorbância (A) é definida como:

Intensidade da luz com

Absorbância em comprimento de onda
determinado específico que passa pela
comprimento de amostra (intensidade da
onda (λ) luz transmitida)

Intensidade da luz antes

de passar pela amostra
(intensidade de luz
incidente)
Lei de
Lambert-
Beer
Lei de Lambert-Beer
 Absorção de Luz por
moléculas: Lei de
Lambert-Beer
 Estabelece que a
concentração de uma
substância é diretamente
proporcional à
quantidade de luz
absorvida ou
inversamente
proporcional ao
logaritmo da luz
transmitida.
Como medir a
concentração na prática?
 Valores padrões
 Amostra com concentração conhecida para
determinado analíto serve como referência para o
método utilizado.

Ex.:
Espectrofotômetro
Espectrofotômetro
Principais componentes de um
espectrofotômetro de feixe simples

Medidor

Fonte de Monocromador Detector

Luz Fenda de Fenda
Cubeta
Entrada de Saída
 TURBIDIMETRIA E NEFELOMETRIA
 Conceitos Básicos
A dispersão de luz ocorre quando a energia
radiante atravessando uma solução colide
elasticamente com uma molécula, o que resulta no
espalhamento da luz por todas as direções.
TURBIDIMETRIA E NEFELOMETRIA
 Fatores que influenciam na dispersão da
luz incluem:
 1) Efeito do tamanho da partícula;
 2) Dependência do comprimento da onda;
 3) Distância de observação
 4) Efeito da polarização da luz incidente
 5) Concentração das partículas
 6) Massa molecular das partículas
Turbidimetria
 Conceito:
A turbidez diminui a intensidade do feixe de
luz incidente enquando este passa por uma
solução contendo partículas. A medida
desta diminuição de intensidade é chamada
de turbidimetria.
 Utilizada para medir a intensidade da luz
dispersa.
Nefelometria
 Conceito:
 Definidacomo a detecção de energia de
luz dispersa ou refletida em direção a um
detector que não se encontra na trajetória
direta da luz transmitida.
 Nefelômetroscomumente medem luz
dispersa em ângulo reto em relação a luz
incidente.
Turbidimetria

Nefelometria