Princípios das Técnicas Analíticas

Fotometria Espectrometria

Prof. Jefferson Ferraz

1- PRINCÍPIOS:

 Métodos: baseados medida

quantitativa da absorção luz pelas soluções.

C (subst absorv): proporcional qtde luz absorvida

Medidas: em fotocolorímetros / espectrofotômetros

Radiações eletromagnéticas de λ entre 380 – 750 nm -
visível olho humano
- Luz solar prisma decomposição
- Cor luz: comprimento de onda
 Intervalos de Comprimento de Onda no
Espectro Eletromagnético

Obs: soluções coloridas ao olho humano absorve toda a

luz incidente exceto intervalo deλ observado pela visão.
 Espectro Eletromagnético UV

O espectro UV está dividido em 3 partes:

UVC (< 280nm), UVB (280–315nm), UVA (315–400nm).
UVA – Luz Negra – 315 a 400 nm
- Bronzeado;
- Formação da catarata;

UVB – Região do eritema – 280 a 315nm

- Região potencialmente carcinogênica;
- Protetores solares;

UVC – Bactericida e Germicida - < 280 nm

- Protegidos pela camada de ozônio;
- Lâmpadas de vidro bloqueiam completamente esses
raios.
 2- ESPECTROFOTOMETRIA
 Baseia-se na absorção da radiação deλentre UV e IF.

Luz monocromática incide em uma amostra

I0 I1

 Quantidade de luz absorvida = diferença entre radiação

incidente (I0) e a radiação transmitida (I1).
 Quantidade de luz absorvida expressa como transmitância
ou absorbância.
2.1- TRANSMITÂNCIA E ABSORVÂNCIA

Se a luz passa em uma solução onde não há absorção

nenhuma, a absorbância será zero e a transmitância
será 100.
2.1- TRANSMITÂNCIA E ABSORVÂNCIA

- Lei de Bouguer-Lambert

- Lei de Lambert-Beer
LEIS DA FOTOMETRIA

A absorção da
luz é tanto
maior quanto
mais
Feixe de luz de
concentrada for
intensidade Io
a solução por
ela atravessada
(Lei de Beer)

A absorção da
luz é tanto
maior quanto
maior for a
distância
Feixe de luz de percorrida pelo
intensidade Io feixe luminoso
através das
amostras
(Lei de Lambert)
3- APLICAÇÃO LEI DE BEER NA PRÁTICA
LABORATORIAL

Leitura Abs da solução teste x solução padrão (C conhec.)

𝑪𝒐𝒏𝒄 𝑷 𝑪𝒐𝒏𝒄 𝑻
=
𝑨𝒃𝒔 𝑷 𝑨𝒃𝒔 𝑻

𝑪𝒐𝒏𝒄 𝑷 𝒙 𝑨𝒃𝒔 𝑻
Conc T =
𝑨𝒃𝒔 𝑷
CONCLUSÃO:

 Fotometria - componente indispensável para a

aplicação das técnicas bioquímicas no laboratório

clínico.