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Manual Cuidados Com Animais PDF
Manual Cuidados Com Animais PDF
Manual de Cuidados e
Procedimentos com Animais
de Laboratrio do Biotrio de
Produo e Experimentao da
FCF-IQ/USP
Editores
Silvnia M. P. Neves
Jorge Mancini Filho
Elizabete Wenzel de Menezes
So Paulo
FCF-IQ/USP
2013
Universidade de So Paulo
Reitor: Prof. Dr. Joo Grandino Rodas
Vice-Reitor: Prof. Dr. Hlio Nogueira da Cruz
Faculdade de Cincias Farmacuticas
Diretor: Profa. Dra. Terezinha de Jesus Andreoli Pinto
Vice-diretor: Profa. Dra. Bernadette Dora Gombossy de Melo Franco
Instituto de Qumica
Diretor: Prof. Dr. Fernando Reis Ornellas
Vice-diretor: Profa. Dra. Maria Jlia Manso Alves
Autores
Silvnia M. P. Neves
Flavia de Moura Prates Ong
Lvia Duarte Rodrigues
Renata Alves dos Santos
Renata Spalutto Fontes
Roseni de Oliveira Santana
So Paulo
FCF-IQ/USP
2013
aaa
Neves, Silvnia M. P.
Manual de cuidados e procedimentos com animais de laboratrio do
Biotrio de Produo e Experimentao da FCF-IQ/USP / Silvnia M. P. Neves
[et al.]. -- So Paulo : FCF-IQ/USP, 2013.
216 p. il.
1. Animais de Laboratrio. 2. Biotrio. 3. Biossegurana. 4.
Experimentao Animal/tica. 5. Experimentao Animal/normas. I. Ong, Flavia
de Moura Prates. II. Rodrigues, Lvia Duarte. III. Santos, Renata Alves dos. IV.
Fontes, Renata Spalutto. V. Sanatana, Roseni de Oliviera. VI. Universidade
de So Paulo, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Instituto de Qumica,
Biotrio de Produo e Experimentao. VII. Ttulo.
Sobre os editores
aaa
Sobre os autores
Silvnia M. P. Neves
aaa
Apresentao
aaa
Prefcio
Agradecimentos
aaa
Sumrio
Captulo 1
Histrico e Evoluo do Biotrio da FCF-IQ/USP......................................................1
Silvnia M. P. Neves
Captulo2
tica na Experimentao Animal................................................................................9
Flvia de Moura Prates Ong, Silvnia M. P. Neves
Captulo 3
Comportamento e Enriquecimento para Ratos e Camundongos.............................15
Renata Alves dos Santos, Renata Spalutto Fontes
Captulo 4
Seo de Produo de Animais Specified Pathogen Free (SPF)............................43
Renata Spalutto Fontes, Renata Alves dos Santos
Captulo 5
Seo de Higiene e Esterilizao.............................................................................73
Roseni de Oliveira Santana, Lvia Duarte Rodrigues
Captulo 6
Seo de Experimentao........................................................................................91
Flvia de Moura Prates Ong, Lvia Duarte Rodrigues
Captulo 7
Controle Nutricional.................................................................................................155
Silvnia M.P. Neves, Flavia M.P. Ong, Renata Spalutto Fontes
ANEXOS.................................................................................................................161
aaa
Captulo 1
Silvnia M. P. Neves
Histrico
Descrio do Biotrio
Gesto
Informatizao
Referncias
HISTRICO
Captulo 1
DESCRIO DO BIOTRIO
Seo de
Produo
Seo de Higinene
e Experimentao
Seo de
Experimentao
Captulo 1
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
2002
2003
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
2011
2012
GESTO
INFORMATIZAO
Com a informatizao dos registros e a divulgao de conhecimentos na rea da
Cincia em Animais de Laboratrio, a equipe do Biotrio desenvolveu um portal em linguagem
ASP com base HTML e acesso a um banco de dados personalizado (Figura 5)7. Dessa forma,
Captulo 1
Este manual foi elaborado pela equipe do Biotrio com o objetivo de registrar
as principais atividades realizadas e compartilhar com outros profissionais e alunos o
conhecimento adquirido ao longo de vrios anos. Esta primeira edio vai facilitar a contnua
atualizao e os ajustes de procedimentos medida que novos modelos e novas tecnologias
so introduzidos.
Apesar da excelncia conquistada na produo de animais de laboratrio, o
Biotrio apresenta limitaes fsicas, fator impeditivo para a introduo de novos modelos
experimentais, como os geneticamente modificados, tecnologia de ponta essencial para o
desenvolvimento das linhas de pesquisas em expanso nas duas unidades.
Em 2010, por solicitao das Comisses de Biotrio da FCF-IQ/USP, as diretorias das
duas unidades aprovaram uma expanso do Biotrio de 150 m2, rea convenientemente
localizada e anexa ao Biotrio.
O apoio incondicional das diretorias da FCF-IQ/USP, das Comisses de Biotrio e
das assessoras administrativas e financeiras, em conjunto com suas equipes, possibilitou ao
Biotrio operar de forma produtiva e eficiente, cumprindo de maneira satisfatria o objetivo
de dar continuidade aos trabalhos.
REFERNCIAS
1.
Hedrich HJ, Bullock G. The laboratory mouse. North Carolina: Elsevier Academic Press; 2004.
p. 409-33.
2.
Federation of European Laboratory Animal Science Associations (FELASA) [cited 2012 Aug 10].
Available from: http://www.felasa.eu/.
3.
Vidal AR, Torrallardona AV. Organizacin, gestin de recursos y capital humano em investigacin
experimental. In: Ziga JM, Mar JAT, Milocco SN, Pieiro R. Ciencia y tecnologa en proteccin
y experimentacin animal. Madrid: Mcgraw-Hill Interamericana; 2001. p. 643-58.
4.
National Research Council. Guide for the care and use of laboratory animals. 8th ed. Washington:
The National Academies Press; 2011. 248p [cited 2012 July 16]. Available from: http://oacu.od.nih.
gov/regs/guide/guide.pdf.
5.
Norma tcnica ABNT NBR ISO 14001:2004 [citado 16 jul. 2012]. Disponvel em: http://www.
abntcatalogo.com.br/norma.aspx?ID=1547.
6.
Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) [citado 19 set. 2012]. Disponvel em:
http://www.ctnbio.gov.br/.
7.
Captulo 2
Introduo
Treinamentos
Seo de experimentao
Princpio dos 3 Rs
Referncias
INTRODUO
A experimentao animal tornou-se mais frequente na Europa, entre os sculos XVI e
XVIII. Nessa poca, os cientistas baseavam-se em opinies como a do filsofo francs Ren
Descartes (1590-1650)1 e suas ideias sobre o mecanicismo. Para o filsofo, os animais no
tinham a capacidade de sentir dor e eram considerados apenas mquinas complexas.
O avano da tecnologia e dessa nova cincia, denominada Cincia em Animais de
Laboratrio, vem mudando paradigmas e comportamentos de pesquisadores e profissionais
que utilizam animais em pesquisa. Atualmente, temos plena conscincia de que a sensibilidade do animal similar humana no que se refere dor, memria, angstia e instinto de
sobrevivncia (art. 2o Princpios ticos na Experimentao Animal da SBCAL)2, devendo-se utilizar de todos os meios possveis para minimizar a dor e o sofrimento do animal3. Os
experimentos devem ser realizados de maneira tica e justificada, no abusando do direito
do homem sobre os animais e evitando o sofrimento destes4.
A regulamentao brasileira recente, e a lei para uso de animais em experimentao
foi sancionada a partir de outubro de 2008. A Lei Arouca5 no 11.794 regulamenta a criao
e a utilizao de animais em atividade de ensino e pesquisa cientfica em todo o territrio
nacional.
9
Com o advento dessa lei, foram criados o Conselho Nacional de Experimentao Animal (Concea)6, o Sistema de Cadastro das Instituies de Uso Cientfico de Animais (Ciuca)
e as normas para funcionamento das Comisses de ticas em Uso Animal (CEUAS)7,8, cujo
objetivo garantir o atendimento tico e humanitrio do uso de animais para fins cientficos.
Captulo 2
PRINCPIO DOS 3 Rs
11
TREINAMENTOS
O treinamento do pessoal envolvido com a experimentao animal garante o
desenvolvimento de um trabalho tico e de melhor qualidade. O manuseio dos animais de
maneira correta e uma boa conteno refletem na diminuio do estresse do animal e em um
bom andamento do experimento10.
Os CEUAS da FCF-IQ/USP7,8 exigem treinamento dos alunos quanto aos procedimentos
e tcnicas que sero realizados nos animais. O Biotrio realiza agendamentos de treinamento
individual dos alunos e emite certificado, que deve ser entregue Comisso de tica da
instituio, dando, assim, prosseguimento anlise do projeto (Anexo 24).
Anualmente o IQ-USP oferece, em seu curso de ps-graduao, a disciplina Animais
de Laboratrio, ministrada pela equipe do Biotrio, entre outros profissionais, que oferecem
aulas tericas e prticas sobre os procedimentos com os animais, sendo apresentados
tambm vdeos e fotos de procedimentos prticos (Captulo 6).
Para a aula prtica com os alunos desse curso, realizado o agendamento prvio no
Biotrio, que apresenta um cronograma de datas disponveis. Esses treinamentos incluem
tcnicas de manuseio e conteno e tcnicas especficas de acordo com os procedimentos
necessrios em cada tipo de experimento. comum o aluno apresentar certo receio ao
manusear os animais, porm isso minimizado ao longo do treinamento11,12.
SEO DE EXPERIMENTAO
Ao iniciar o experimento no Biotrio, o pesquisador e/ou aluno responsvel pelo
experimento recebe as normas internas de biossegurana e um protocolo que deve ser
preenchido, com questes especficas sobre o experimento a ser realizado (Anexo 22). Ento,
prossegue-se com o treinamento sobre a paramentao correta, fluxo de entrada e sada do
Biotrio, conhecimento das reas comuns e da sala onde o experimento ser realizado.
O responsvel pela seo de experimentao recepciona o pesquisador, sanando todas
as suas dvidas sobre normas internas, como deve ser monitorado o experimento, onde adquirir
materiais de trabalhos de rotina, entre outras questes que surgiro ao longo do experimento.
12
Captulo 2
REFERNCIAS
1. Feij AGS, Braga LMGM, Pitrez PMC. Animais na pesquisa e no ensino: aspectos ticos e tcnicos.
Porto Alegre: EDIPUCRS; 2010. 421p.
2. Sociedade Brasileira de Cincias em Animais de Laboratrio (SBCAL/COBEA) [citado 8 ago. 2012].
Disponvel em: http://www.cobea.org.br.
3. National Research Council. Guide for the care and use of laboratory animals. 8th ed. Washington:
The National Academies Press; 2011. 248p [cited 2012 Aug 22]. Available from: http://oacu.od.nih.
gov/regs/guide/guide.pdf.
4. National Institute of Health [cited 2012 Sep 5]. Available from: http://bioethics.od.nih.gov/animals.
html.
5. Brasil. Planalto. Lei Arouca. Lei n. 11.794, de 8 de outubro de 2008 [citado 12 set. 2012]. Disponvel
em: http://www.planalto.gov.br/ccivil_03/_ato2007-2010/2008/lei/l11794.htm.
6. Brasil. Ministrio da Cincia, Tecnologia e Inovao. Conselho Nacional de Controle de Experimentao Animal (CONCEA) [citado 12 set. 2012]. Disponvel em: http://www.mct.gov.br/index.php/
content/view/310553.html.
7. So Paulo (Estado). Universidade de So Paulo (USP). Comisso de tica em Uso Animal do
Instituto de Qumica da USP [citado 12 set. 2012]. Disponvel em: http://www2.iq.usp.br/bioterio/.
8. So Paulo (Estado). Universidade de So Paulo (USP). Comisso de tica em Uso Animal da
Faculdade de Cincias Farmacuticas da USP [citado 12 set. 2012]. Disponvel em: http://www.fcf.
usp.br/Apresentacao/Colegiados/ANIMAL/Animal.asp.
9. Russel WM, Burch RL. The principles of human experimental technique [cited 2012 Sep 12]. Available from http://altweb.jhsph.edu/publications/humane exp/het-toc.htm.
10. Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM. Cuidados e manejo de animais de laboratrio. So Paulo:
Atheneu; 2009. 708p.
11. Andersen ML, DAlmeida V, Ko GM, Kawakami R, Martins PJF. Princpios ticos e prticos do uso
de animais de experimentao. So Paulo: Universidade Federal de So Paulo (UNIFESP); 2004.
167p.
12. Federation of European Laboratory Animal Science Associations (FELASA). FELASA
Recommendations for the Education and Training of Persons Working with Laboratory Animals:
categories A and C. Laboratory Animal. 1995;29:121-31.
13
bbbb
Captulo 3
Introduo
Comportamento de ratos e camundongos
Comportamento materno
INTRODUO
Um importante conceito de bem-estar dos animais a homeostase, que significa que
o animal est em harmonia com seu ambiente interno (temperatura, contedo hdrico etc.) e
externo (temperatura ambiente, som etc.). A homeostase exige que o animal se adapte e tenha
controle diante de situaes diversas. Quando a homeostase no pode ser mantida, pode
ocorrer desconforto ou estresse, com possvel manifestao de doena ou comportamento
anormal, como estereotipias1,2.
Estereotipias so comportamentos repetidos de padro simples, como movimentos
em crculos ou pulos constantes na gaiola, que parecem no ter sentido e so tpicos de
animais alojados isoladamente1.
15
dever do ser humano promover o bem-estar dos animais, em que, juntos, contribuiro
para o bem-estar de todos2. Segundo a Cincia em Animais de Laboratrio, o bem-estar
dos animais deve ser assegurado tanto na produo como na experimentao, mantendo o
alojamento e as condies ambientais controlados (Captulos 4 e 6).
Fazer um manejo e um transporte cuidadoso, bem como conhecer a importncia,
as necessidades e os comportamentos normais das espcies utilizadas como animais de
laboratrio, tambm so fatores essenciais para que se evite o estresse e possibilite a
promoo do bem-estar animal, obtendo, assim, dados confiveis e pesquisas satisfatrias.
Captulo 3
Figura 2. Limite auditivo dos animais de laboratrio em relao ao dos humanos. (Fonte: Adaptado de
Heffner13)
Os sons produzidos, como o de cortejo, cuidado materno, agresso e defesa, podem ser
afetados pelo nvel de rudo no ambiente. Os animais podem se adaptar aos rudos contnuos
no ambiente, mas os rudos de longa durao e alta intensidade ou agudos so perturbadores,
causando estresse, alteraes metablicas, reduo da fertilidade, canibalismo e danos ao
aparelho auditivo. Alguns equipamentos utilizados nos biotrios e laboratrios emitem sons
que podem estressar os animais sem que tenhamos conhecimento, como da gua corrente
18
Captulo 3
redor, mesmo que estes no tenham odor. Como um animal noturno, as vibrissas permitem
orient-lo na escurido. A sensibilidade olfativa e a sensibilidade tctil (vibrissas) constituem
os principais sentidos desses animais, o que lhes possibilita detectar os alimentos, o sexo
oposto e os predadores. O tato tambm exercido pela superfcie plantar das patas2,3. Quando
estressados, os roedores se aproximam das superfcies, sentindo-se mais seguros. Gaiolas
aramadas impedem o contato com piso slido, alterando seus comportamentos normais15.
Captulo 3
Figura 5. Macho reprodutor da linhagem C57BL/6 com falha de pelo no focinho causada pela fmea
dominante na mesma gaiola
Captulo 3
Comportamento materno
O manuseio dos neonatos deve ser rpido, porm com cautela, para evitar que a me
diminua os seus cuidados e deixe de lamb-los. Nos ratos, muitas vezes, a me os carrega
de um lado para outro durante a troca das caixas sujas ou durante a observao da ninhada
(Figura 7). Quando esse comportamento ocorrer, deve ser mantida distncia da gaiola,
reduzindo o rudo. Geralmente, a me adota esse comportamento para tentar encontrar um
espao onde possa colocar o neonato em segurana. Se ocorrer muitas vezes, porm, isso
pode feri-los8.
Captulo 3
de 11 meses de idade)21, manuseio inadequado, troca muito frequente das gaiolas, presena
de tcnico novo, falta de gua ou comida, movimentos indevidos da gaiola, dieta inadequada
e desnutrio das mes lactantes22, podem induzi-las prtica de canibalismo nos filhotes.
Captulo 3
Enriquecimento social
Enriquecimento social inclui a socializao dos animais, com contato ou no
(denominadas sem contato social) com coespecficos ou contraespecficos, inclusive os
seres humanos34,35.
28
Captulo 3
Enriquecimento fsico
O enriquecimento fsico inclui gaiolas complexas e estmulos sensoriais e nutricionais34.
Complexidade
j que eles a utilizam em comportamentos especficos, do que oferecer uma grande rea,
onde no utilizam todo o espao (exceto em atividades locomotoras)34.
A maioria dos roedores tende a dividir a sua rea em locais para alimentao, repouso
e excreo. Essas divises podem ser facilitadas por estruturas dentro da gaiola (exemplo:
abrigos, caixas para ninho, tubos, materiais para fazer ninhos, plataformas etc.)34.
Existem vrios tipos de enriquecimento para animais de laboratrio que podem ser
improvisados (Figuras 8 a 12) ou que so comercializados (Figuras 13 a 17) e permitem
a autoclavao. Caixas de animais escavadores podem ser facilmente enriquecidas com
artefatos adaptados, como tubos de tamanho apropriado e materiais para a construo de
ninho livres de toxinas28 (como o algodo). Ainda h controvrsias quanto ao uso de tubos
feitos de PVC.
Os ratos, diferentemente dos camundongos, no mostram interesse em construir
ninhos, com exceo de fmeas que acabaram de parir47. Segundo testes de preferncia,
ratos preferem objetos que possam ser mastigados, como um pedao de madeira com furos38.
importante oferecer para os camundongos materiais para a construo de ninhos,
pois isso permite que eles criem microambientes adequados para descanso e reproduo3.
Camundongos so capazes de modificar o prprio microambiente, pelo fato de poderem
aconchegar-se e manipular seus ninhos, exercendo controle sobre a temperatura, a umidade
e as condies de luminosidade1.
Os materiais utilizados na construo dos ninhos tambm fornecem sombra, alm
de ajudarem a regular a temperatura e servirem de abrigo para os animais se esconderem
dos coespecficos, evitando agressividade e controlando o ambiente28,30,32. Camundongos
alojados em condies laboratoriais padro (temperatura de 222 C) sero impedidos de
manipular o seu microambiente e deix-lo nas condies preferidas se no encontrarem
materiais adequados para a construo de seu ninho48,49.
Os materiais utilizados na construo do ninho precisam estar de acordo com as
necessidades dos camundongos, por isso tm de apresentar as seguintes caractersticas:
no devem ser txicos nem causar danos ao animal; devem ser absorventes, mas no a
ponto de desidratar os neonatos; no devem conter p excessivo; devem ser econmicos;
no devem ser comestveis, para evitar interferncias nos experimentos1; devem ser durveis
ou descartveis; devem ser livres de toxinas ou outros contaminantes35; e devem poder ser
esterilizados ou descontaminados.
30
Captulo 3
Figura 8. A) Rato no tubo de PVC; B) Fmea de rato com filhotes dentro do tubo de PVC
Figura 9. Utilizao de algodo como material para a construo de ninho pelos camundongos
31
Captulo 3
Figura 11. A) Mscara descartvel amarrada na grade das gaiolas de camundongos; B) Vista sob a
grade
33
Captulo 3
Figura 13. A) Iglu para camundongos. Disponvel em: http://www.tecniplast.it/; B) Iglu para camundongos.
Disponvel em: http://www.alesco.ind.br/alesco.html; C) Iglu para camundongos com roda. Disponvel
em: http://www.bio-serv.com. D. Iglu para ratos. Disponvel em: http://www.bio-serv.com
Figura 16. Tubos de papelo para ratos e camundongos comercializados. Disponvel em: http://granjarg.
com.br/insumos.php
36
Captulo 3
Enriquecimento sensorial
Enriquecimento nutricional
REFERNCIAS
1. Baumans V. The laboratory mouse. In: Poole T. The UFAW handbook on the care and management
of laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science; 2006. v.1, p. 282-312.
2. Rivera EAB. Bem-estar na experimentao animal. In: Feij AGS, Braga LMGM, Pitrez PMC.
38
Captulo 3
Animais na pesquisa e no ensino: aspectos ticos e tcnicos. Porto Alegre: EdiPUCRS; 2010. p.
74-88.
3. Koolhaas JM. The laboratory rat. In: Poole T. The UFAW Handbook on the care and management
of laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science; 2006. v.1, p. 313-30.
4. Andersen ML, DAlmeida V, Ko GM, Kawakami R, Martins PJF. Princpios ticos e prticos do uso
de animais de experimentao. So Paulo: UNIFESP Universidade Federal de So Paulo; 2004.
166p.
5. National Research Council. Guide for care and use of laboratory animals. 8th ed. Washington: The
National Academies Press; 2011 [Cited 2012 Feb 01]. Available from: http://oacu.od.nih.gov/regs/
guide/guide.pdf.
6. Souza NL. Comportamento, contenso e sexagem de espcies convencionais de laboratrio. In:
De Luca RR, Alexandre SR, Marques T, Souza NL, Merusse JLB, Neves SP. Manual para tcnicos
em bioterismo. So Paulo: Winner Graph; 1996. p.67-78.
7. Ko GM, De Luca RR. Camundongo. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM. Cuidados e manejo
de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p.137-65.
8. Ebisui L, Fontes RS, Lapchik VBV. Rato. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko, GM. Cuidados e
manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p. 229-50.
9. Hofstetter J, Suckow A, Hickman DL. Morphophysiology. In: Suckow MA, Weisbroth SH, Franklin
CL. The laboratory rat. USA: Elsevier Academic Press; 2006. p.93-125.
10. Hoitinga MR. Nutrition of laboratory mice. In: Hedrich H, Bullock G, Petrusz P. The handbook of
experimental animals: the laboratory mouse. USA: Elsevier Academic Pres; 2004. p.463-79.
11. Neale RJ. Coprophagy in iron-deficient rats. Laboratory Animals. 1982;16:204-7.
12. Manser CE, Morris TH, Broom DM. An investigation into the effects of solid or grid cage flooring on
the welfare of laboratory rats. Laboratory Animals. 1995;29:353-63.
13. Heffner HE, Heffner RS. Hearing ranges of laboratory animals. Journal of the American Association
for Laboratory Animal Science. 2007;46:11-3.
14. Teixeira MA, Filho AFL. Impacto dos fatores ambientais. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko, G.M.
Cuidados e manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p.101-11.
15. Rivera EB. Bem-estar animal. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM. Cuidados e manejo de
animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p.59-69.
16. Housing and Husbandry Guidelines for Laboratory Animals. Research animal resources [cited 2012
Jan 20]. Available from: http://www.ahc.umn.edu/rar/housing.html.
17. Guidelines for pain and distress in laboratory animals: responsibilities, recognition and alleviation
[cited 2012 Jan 18]. Available from: http://oacu.od.nih.gov/ARAC/documents/Pain_and_distress.
pdf.
18. Rivera EAB. Analgesia em animais de experimentao. In: Andrade A, Pinto SC, Oliveira RS.
Animais de laboratrio: criao e experimentao. Rio de Janeiro: Editora Fiocruz; 2002. p.247-53.
39
19. Santos BF. Criao e manejo de camundongos. In: Andrade A, Pinto SC, Oliveira RS. Animais de
laboratrio: criao e experimentao. Rio de Janeiro: Editora Fiocruz; 2002. p.115-8.
20. Santos BF. Criao e manejo de ratos. In: Andrade A, Pinto SC, Oliveira RS. Animais de laboratrio:
criao e experimentao. Rio de Janeiro: Editora Fiocruz; 2002. p.119-21.
21. Mohan C. Age-dependent cannibalism in a colony of albino rats. Laboratory Animals. 1974;8:83-4.
22. Petter WL. Cannibalism in rats and mice. Proceedings of the Royal Society of Medicine.
1968;61(12):1295-6.
23. Hedrich HJ, Mossmann H, Nicklas W. Housing and maintenance. In: Hedrich H, Bullock G, Petrusz
P. The handbook of experimental animals: the laboratory mouse. USA: Elsevier Academic Press;
2004. p.395-408.
24. Van de Weerd HA, Baumans V, Koolhaas JM, Van Zutphen LFM. Strain specific behavioural
response to environmental enrichment in the mouse. Journal of Experimental Animal Science.
1994;36:117-27.
25. Hutchinson E Avery A, Vandewoude S. Environmental enrichment for laboratory rodents. ILAR
Journal. 2005;46(2):148-61.
26. Marques JM, Olsson IAS. The effect of preweaning and postweaning housing on the behaviour of
the laboratory mouse (Mus musculus). Laboratory Animals. 2007;41:92-102.
27. Olsson AS, Dahlborn K. Improving housing conditions for laboratory mice: a review of environmental
enrichment. Laboratory Animals. 2002;36:243-70.
28. Gnadt BJ. Ethical and legal perspectives. In: Suckow MA, Weisbroth ST, Franklin CL. The laboratory
rat. USA: Elsevier Academic Press; 2006. p.53-70.
29. Mattaraia VGM. Enriquecimento ambiental. In: Lapchik, VBV, Mattaraia VGM, Ko GM. Cuidados e
manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p.537-47.
30. Van de Weerd HA, Baumans V. Environmental enrichment in rodents. In: Smith CP, Taylor V.
Environmental enrichment information resources for laboratory animals: birds, cats, dogs, farm
animals, ferrets, rabbits, and rodents. England: AWIC Resource Series; n. 2, setembro 1995. p.145-9.
31. Sherwin CM. The motivation of group-housed laboratory mice to leave an enriched laboratory cage.
Animal Behaviour. 2007;73:29-35.
32. Van de Weerd HA, Van Loo PLP, Van Zutphen LFM, Koolhaas JM, Baumans V. Preferences for
nesting material as environmental for laboratory mice. Laboratory Animals. 1997;31:133-43.
33. Van loo PLP, Blom HJM, Meijer MK, Baumans V. Assessment of the use commercially available
environmental enrichments by laboratory mice by preference testing. Laboratory Animals.
2005;39:58-67.
34. Baumans, V. Environmental enrichment for laboratory rodents and rabbits: requirements of rodents,
rabbits, and research. ILAR Journal. 2005;46(2):162-70.
35. Smith AL, Corrow DJ. Modifications to husbandry and housing conditions of laboratory rodents for
improved well-being. ILAR Journal. 2005;46(2):140-7.
40
Captulo 3
36. Steward K. Development of an environmental enrichment program utilizing simple strategies. Animal
Welfare Information Center Bulletin. 2004;12(1-2):1-40.
37. Poole T, Dawkins MS. Environmental enrichment for vertebrates. In: Poole T. The UFAW handbook
on the care and management of laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science; 2006. v.1,
p.13-20.
38. Chmiel DJ, Noonam M. Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects.
Laboratory Animals. 1996;30:97-101.
39. Van de Weerd HA, Baumans V. Evaluation of environmental enrichment for laboratory mice. AWIC
Bulletin. 1999;9(3-4) [cited 2011 Sep 05]. Available from: http://www.nal.usda.gov/awic/newsletters/
v9n3/9n3weerd.htm#toc1.
40. Neves SP, Fontes RS, Ong FMP, Santos RA, Colli C. Enhancing laboratory rodents well-being by
introducing environmental enrichment. In: Anals of 7th World Congress Rome; 2009 Aug 30 Sept
3; Rome, Italy. Rome: Swiss Society ALTEX Edition; 2009. p.336.
41. Fontes RS, Santos RA, Ong FMP, Neves SMP, Balieiro JCC, Damy SB. Efeito do enriquecimento
ambiental na produo de camundongos C57BL/6 mantidos em diferentes sistemas de alojamento.
RESBCAL - Revista da Sociedade Brasileira de Cincia em Animais de Laboratrio. 2012;1(1):5463.
42. Wrbel H. Ideal homes? Housing effects on rodent brain and behaviour. Trends in Neurosciences.
2001;24:207-11.
43. Augustsson H, Van de Weerd HA, Kruitwagen, CLJJ, Baumans, V. Effect of enrichment on variation
and results in the light/dark test. Laboratory Animals. 2003;37:328-40.
44. Van de Weerd HA, Van Loo PL, Baumans V. Environmental enrichment: room for reduction?
Alternatives to Laboratory Animals. 2004;32(Suppl 2):69-71.
45. Wrbel H. Environmental enrichment does not disrupt standardisation of animal experiments. Altex.
2007;24:70-3.
46. Wrbel H, Garner JP. Refinement of rodent research through environmental enrichment and
systematic randomization. NC3Rs - National Centre for the Replacement, Refinement and
Reduction of Animals in Research. 2007:1-9.
47. Lawlor MM. Comfortable quarters for rats in research institutions. In: Reinhardt, A. Comfortable
quarters for laboratory animals. 9th ed. Washington: Animal Welfare Institute; 2002. p.26-32.
48. Hess SE, Rohr S, Dufour BD, Gaskill BN, Pajor EA, Garner JP. Home improvement: C57BL/6J mice
given more naturalistic nesting materials build better nests. Journal of the American Association for
Laboratory Animal Science. 2008;47(6):25-31.
49. Sherwin CM. Observations on the prevalence of nest-building in non-breeding TO strain mice and
their use of two nesting materials. Laboratory Animals. 1997;31:125-32.
50. Van Loo PLP, Kruitwagen CLJJ, Van Zutphen LFM, Koolhaas JM, Baumans V. Modulation of
aggression in male mice: influence of cage cleaning regime and scent marks. Animal Welfare.
2000;9(3):281-95.
41
bbb
Captulo 4
Introduo
Descrio da seo
Macroambiente
Microambiente
Reproduo
Transporte de animais
Status gentico
Animais de laboratrio
INTRODUO
DESCRIO DA SEO
Captulo 4
para alojamento das gaiolas abertas e uma bancada para apoio no manuseio dos animais
(Captulo 6) e auxlio nas trocas das gaiolas.
As salas para manuteno de animais em sistema Individually Ventilated Cage (IVC)
dispem de racks ventilados e estao de troca para apoio no manuseio dos animais e nas
trocas das gaiolas.
Todas as salas tm duas portas, sendo uma para acesso de material limpo e esterilizado
e outra que permite o acesso ao corredor para fluxo de material sujo. As portas que do
acesso ao corredor limpo apresentam visores, para facilitar a observao dos funcionrios e
evitar que sejam abertas constantemente.
Sala para esterilizao e estoque de material
Essa sala conta com trs autoclaves de barreira (dupla porta), por onde todo o material
esterilizado dever ser introduzido na seo, alm de estantes para estoque de bebedouros
esterilizados, espao para estoque da rao irradiada e para estoque da maravalha
esterilizada por autoclave. Os sacos de rao e de maravalha so dispostos sobre paletes,
para evitar o contato com o cho.
Nessa sala feito o preparo de todo o material que vai ser utilizado nas trocas das
gaiolas (Anexo 9).
Central de registros
Nesse espao esto instalados os computadores utilizados como banco de dados e
armazenamento dos arquivos da produo, com registros de todas as colnias, recebimento
de solicitaes de animais, realizao de pedidos por meio do sistema Mercrio, confeco
de planilhas, bem como relatrios de produo e fornecimento de animais, planilhas para
controle de temperatura e umidade, controle de consumo de insumos e elaborao dos
Procedimentos Operacionais Padro (POPs).
Captulo 4
ventilado); quantidade de animal por gaiola que dever manter at o final do ensaio; previso
de incio e durao total do ensaio, inclusive a adaptao dos animais.
Aps o recebimento das solicitaes com todas essas informaes, as chefias das
sees de produo e experimentao devem fazer um planejamento do fornecimento dos
animais sujeitos a disponibilidade de espao nas salas experimentais, conforme os dados
das solicitaes e a disponibilidade de reprodutores para realizar os acasalamentos.
Terminado esse planejamento, o pesquisador receber uma data de previso de
entrega dos animais para que possa programar o ensaio, providenciar reagentes e, em
alguns casos, dietas especficas (Anexo 1).
TRANSPORTE DE ANIMAIS
Os animais ficam estressados durante o transporte, o que altera sua fisiologia normal.
Os cuidados a seguir devem ser tomados para minimizar esses problemas:
O transporte de uma instalao a outra deve ser planejado com antecedncia,
para ser realizado no menor tempo possvel e para que o animal fique protegido de
condies ambientais extremas e traumas fsicos;
Verificar com antecedncia se ser necessrio trazer gaiolas para buscar os animais;
Confirmar antecipadamente com o Biotrio qual ser o horrio de entrega dos
animais;
Evitar transportar muitos animais simultaneamente;
Segurar a gaiola firmemente entre os braos e carregar uma por vez, para evitar
quedas;
No transporte por perodos prolongados, fornecer alimento e gua de acordo com as
necessidades dos animais;
No transporte de uma sala para outra, devem ser retirados os bebedouros, a fim de
no vazar gua nas gaiolas, evitar trepidaes e assegurar que estas estejam bem
fechadas, para que no ocorram fugas;
O transporte de organismos geneticamente modificados regulamentado pela
Instruo Normativa CTNBio no 4, de 19 de dezembro de 19964;
Os animais transferidos para o novo ambiente devem ser acomodados em gaiola
adequada, com maravalha, gua e rao, observando a densidade adequada de
animais na gaiola;
Por fim, aguardar o perodo de adaptao e aclimatao ao novo ambiente antes de
iniciar qualquer procedimento com os animais.
48
Captulo 4
Autoclave
Todo material a ser introduzido na seo de produo e que no pode ser esterilizado
por autoclave deve ser descontaminado (Captulo 5).
ANIMAIS DE LABORATRIO
A utilizao de animais na pesquisa j era conhecida h mais de 400 anos a.C., quando
cientistas da poca realizavam disseces e necropsias em animais com a finalidade de
constatar semelhanas e diferenas de formao e funcionamento de sistemas6.
Diversos modelos animais so utilizados em pesquisa biomdica, e as espcies
mais utilizadas so classificadas como convencionais. So os roedores: camundongo (Mus
musculus), ratos (Rattus norvegicus), cobaia (Cavia porcellus), hamster (Mesocrisetus
auratus) e o lagomorfo: coelho (Oryctolagus cuniculus).
Caractersticas gerais de camundongos e ratos
Captulo 4
Camundongo
Classe
Mamfera
Mamfera
Ordem
Rodentia
Rodentia
Famlia
Muridae
Muridae
Gnero
Rattus
Mus
Espcie
Rattus norvegicus
Mus musculus
51
Rato
Camundongo
Nmero de cromossomos
42 (diploides)
40 (diploides)
Temperatura corporal
36-37,5 C
35,2-37,9 C
Frmula dentria
14 dias
12 dias
Peso ao nascer
6-7 g
1-2 g
Peso ao desmame
45-60 g
10-15 g
350-500 g
25-50 g
250-350 g
25-45 g
8 semanas
6 semanas
Idade reprodutiva
8-10 semanas
6-8 semanas
10-12 meses
8-10 meses
Ciclo estral
4-5 dias
4-5 dias
Durao do estro
12 horas
10-20 horas
Mecanismo de ovulao
Espontnea
Espontnea
Perodo de gestao
20-22 dias
19-21 dias
Idade do desmame
21 dias
19-28 dias
Mamas
6 pares
5 pares
Camundongo adulto
10 a 20 mL/dia
3 a 7 mL/dia
10 a 20 g/dia
4 a 5 g/dia
Captulo 4
Camundongos
Ratos
Nascimento
Animais
albinos
no
apresentam
colorao e animais black apresentam
colorao mais definida
10
Idem ao dia 9
11
12
12-14
13-14
53
Figura 4. A) Neonatos de ratos com um dia de vida: macho direita e fmea esquerda; B) Ratos
recm-desmamados: macho esquerda e fmea direita
54
Captulo 4
Figura 5. A) Neonatos de camundongos com um dia de vida: macho esquerda e fmea direita; B)
Camundongos recm-desmamados. : macho esquerda e fmea direita
Peso (g)
Altura (cm)
Rato
< 100
109,65
45,15
At 200
148,35
45,15
At 300
187,05
45,15
At 400
258
45,15
At 500
387
45,15
> 500
451,5
45,15
< 10
38,7
32,25
At 15
51,6
32,25
At 25
77,4
32,25
> 25
96,75
32,25
Camundongo
56
Captulo 4
REPRODUO
Status gentico
a) Colnia de fundao
a colnia estabelecida para perpetuar uma linhagem (Anexo 13).
A colnia de fundao deve ser mantida apenas por meio de acasalamento entre
indivduos no consanguneos. Para garantir a diversidade gentica, utiliza-se um sistema
descrito por Poiley10, que distribui os casais em grupos; assim, os acasalamentos so feitos
entre indivduos de grupos diferentes. Nesse sistema devem ser mantidos no mnimo 25
casais divididos em no mnimo cinco grupos. Para formar os casais, devem-se selecionar um
macho de um grupo e uma fmea de um grupo diferente, sendo que esse casal pertencer a
um novo grupo, conforme descrito na Tabela 613,14. Posteriormente, os novos grupos formados
so acasalados de acordo com o mesmo sistema apresentado na Tabela.
Fmea
Captulo 4
Captulo 4
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
NTacFcfIq:SW
Caractersticas
Camundongo heterognico (outbred) utilizado h dcadas em pesquisas biomdicas,
principalmente em Farmacologia.
Representa populaes naturais, excelente desempenho reprodutivo, com alta fertilidade,
prolificidade e produtividade.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, (www.taconic.com)15.
Origem: Carworth Farm, 1935.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 13 g.
Peso mdio do adulto jovem (6 semanas): macho: 30 g; fmea: 25 g.
Peso mdio do adulto (8 semanas): macho: 40 g; fmea: 30 g.
Sistema de acasalamento: Poiley.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
Swiss Webster
50
peso (g)
40
macho
30
fmea
20
10
0
9 10 11 12 13 14
idade (semanas)
61
Espcie: rato
Nomenclatura:
HanTacFcfIq: WH
Caractersticas
Rato heterognico (outbred) frequentemente utilizado como modelo de toxicologia e em
pesquisas biomdicas em geral e em estudos de comportamento.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Origem: Donaldson, 1906 Wistar Institute, USA.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 45-50 g.
Peso mdio do adulto jovem (8 semanas): macho: 250 g; fmea: 200 g.
Peso mdio do adulto (10 semanas): Macho: 400 g; Fmea: 250 g.
Sistema de acasalamento: Poiley.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
Wistar Hannover
300
peso (gramas)
250
200
Macho
150
Fmea
100
50
0
62
21
28
35
42
49
56
idade (dias)
63
71
Captulo 4
Espcie: rato
Nomenclatura:
NTacFcfIq: SD
Caractersticas
Modelo heterognico (outbred) utilizado principalmente em pesquisas biomdicas relacionadas
toxicologia e farmacologia. Linhagem suscetvel a tumores de mama.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Origem: Worthington Dawley, 1925. Mantido na Sprague Dawley Farm, USA.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 55-60 g.
Peso mdio do adulto jovem (8 semanas): macho: 340 g; fmea: 180 g.
Peso mdio do adulto (10 semanas): macho: 500 g; fmea: 280 g.
Sistema de acasalamento: Poiley.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
Sprague Dawley
350
peso (g)
300
250
200
Macho
150
Fmea
100
50
0
14 21 28 35 42 49 56 63
dade (semanas)
63
Espcie: rato
Nomenclatura:
NTacFcfIq: NIH-Whn
Caractersticas
Modelo heterognico (outbred) imunodeficiente. Mutante espontneo, tambm conhecido
com rato Nude.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Origem: desenvolvido por NIH em 1979-1980 por meio de intercruzamento entre linhagens.
Cor: albino e black.
Os homozigotos tornam-se hairless com 3-4 semanas de idade; logo depois, podem
apresentar pelos curtos na cabea e ocasionalmente no resto do corpo.
Peso mdio ao desmame (28 dias de idade): 45-50 g.
Peso mdio do adulto jovem (8 semanas): macho: 230 g; fmea: 140 g.
Peso mdio do adulto (10 semanas): macho: 300 g; fmea: 180 g.
Sistema de acasalamento: rotacional. So acasalados machos homozigotos com fmeas
heterozigotas.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
N:NIH
250
peso (g)
200
Machos
150
Fmeas
100
50
0
7 14 21 28 35 42 49 56 63 70
Idade (dias)
64
Captulo 4
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
Linhagem: BALB/c
BALB/c/AnNTacFcfIq
Caractersticas
Camundongo isognico (inbred) utilizado principalmente em imunologia, produo de
anticorpos monoclonais, farmacologia e toxicologia.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Origem: Bagg et al., 1923.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 11 g.
Peso mdio do adulto jovem (6 semanas): macho: 21 g; fmea: 17 g.
Peso mdio do adulto (8 semanas): macho: 24 g; fmea: 20 g.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo.
Curva de peso (Biotrio FCF/IQ-USP)
BALB/c
30
peso (g)
25
20
Macho
15
Fmea
10
5
0
14
21
28
35
42
49
56
63
idade (dias)
65
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
Linhagem: C57BL/6
C57BL/6/NTacFcfIq
Caractersticas
Camundongo isognico (inbred) usado em imunologia, oncologia e toxicologia. Tambm
amplamente utilizado como background para camundongos transgnicos e mutantes.
Adquirido em 2001 Taconic, Germantown, USA.
Origem: Little, 1921.
Cor: black.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 9 g.
Peso mdio do adulto jovem (6 semanas): macho: 19 g; fmea: 17 g.
Peso mdio do adulto (8 semanas): macho: 25 g; fmea: 21 g.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo.
Curva de peso (Biotrio FCF-IQ/USP)
C57BL/6
30
peso (g)
25
20
macho
15
fmea
10
5
0
idade (semanas)
66
10
Captulo 4
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
C.Cg-Foxn1nu/AnNTacFcfIq
Caractersticas
Mutante espontneo inbred, deficiente em clulas-T (imunodeficiente).
Backcrossed com BALB/c por nove geraes.
Adquirido em 2001 Taconic,Germantown, USA.
Cor: albino.
Homozigotos: Hairless.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo. So acasalados machos homozigotos com fmeas heterozigotas.
Curva de peso (Biotrio FCF/IQ-USP)
BALB/c Nude
20
peso (g)
15
Macho
10
Fmea
10 11 12
idade (semanas)
67
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
Linhagem: Hairless
HRS-hr/+/J
Caractersticas
Mutante espontneo da linhagem BALB/c mantido como colnia inbred.
Modelo utilizado principalmente em dermatologia e oncologia.
Adquirido em 2002 The Jackson Laboratory (www.criver.com)16.
Origem: London, 1924.
Cor: albino.
Homozigotos: pelagem normal at 10 dias de idade. Tornam-se hairless aps algumas
semanas.
Sistema de acasalamento: acasalamento entre irm e irmo em sistema monogmico
intensivo. So acasalados machos homozigotos com fmeas heterozigotas.
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
Linhagem: KO-Ldl
B6.129S7-Ldlrtm1Her/JFm
Caractersticas
Camundongo homozigoto para a mutao Ldlrtm1Her que apresenta elevado nvel de
colesterol (de 200-400 mg/dl), que bastante alterado (> 2,000 mg/dl) quando os animais
recebem dieta rica em gordura.
Modelo para pesquisa cardiovascular (hipercolesterolemia), de diabetes e obesidade,
metabolismo (lipdios) e genes homlogos em camundongos/humanos.
Linhagem 129 backcrossed com C57BL/6 por dez geraes.
Adquirido em 2005 Faculdade de Medicina/USP.
Cor: Black.
Sistema de acasalamento: so acasalados entre irmos (inbred), uma vez que o gene de
interesse est em homozigose, mantidos em acasalamento monogmico intensivo.
68
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
Linhagem: P2-GFP
Olfr17tm7Mom/MomJ
Captulo 4
Caractersticas
Camundongo knockout que expressa protena GFP no epitlio olfatrio.
Linhagem FVB/N backcrossed com C57BL/6 por quatro geraes.
Adquirido em 2008 The Jackson Laboratory.
Origem: Peter Mombaerts, Max Plank Institute of Biophysics, The Rockefeller University.
Cor: black, agouti, chinchila, marrom e albino.
Sistema de acasalamento: os filhotes podem nascer com trs variaes diferentes do
gene: homozigotos 17 (sem gene modificado animal de controle), heterozigoto (um alelo
mutante e um normal) e homozigoto GFP (dois alelos mutantes). Como no apresentam
fentipo que possa identific-los, necessrio genotipar os animais logo aps o desmame,
com 3-4 semanas de idade.
So acasalados entre irmos (inbred) apenas os animais heterozigotos, mantidos em
acasalamento monogmico intensivo.
Particularidades da linhagem (Anexo 16).
Espcie: camundongo
Nomenclatura:
Linhagem: F8-Kaz
B6;129S4-F8tm1Kaz/J
Caractersticas
Camundongo geneticamente modificado. Modelo para hemofilia A (Fator VIII).
Adquirido em 2009 The Jackson Laboratory.
Origem: Haig Kazazian, Jr., University of Pennsylvania.
Cor: agouti.
Sistema de acasalamento: so acasalados entre irmos (inbred) em sistema de
acasalamento monogmico intensivo, uma vez que o gene de interesse est em
homozigose.
69
Espcie: rato
Nomenclatura
Linhagem: SOD1-ALS
NTacFcfIq:SD-Tg (SOD1G93A)L26H
Caractersticas
Modelo transgnico microinjetado modelo para Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS).
Adquirido em 2007 Taconic,Germantown, USA.
Origem: Desenvolvido por John Kulik at Wyeth.
Cor: albino.
Peso mdio ao desmame (21 dias de idade): 55-60 g.
Peso mdio do adulto jovem (8 semanas): macho: 340 g; fmea: 180 g.
Sistema de acasalamento: mantidos acasalamentos entre machos SOD1 ALS positivos e fmeas
SD wild (selvagens).
Particularidades da linhagem (Anexo 15)
Captulo 4
Controle nutricional
REFERNCIAS
1. Hardy P. Gnotobiology and breeding techniques. In: Hedrich H, Bullock G, Petrusz P. The handbook
of experimental animals: the laboratory mouse. USA: Elsevier Academic Press; 2004. p.409-33.
2. Neves SMP, Chaguri LCAG, Fontes RS, Ong FM. Biossegurana em biotrios. In: Hirata MH, Hirata
RDC, Filho JM. Manual de biossegurana. 2a ed. So Paulo: Manole; 2012. p.193-211.
3. Nascimento N, Neves SP. Procedimentos de biossegurana. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko
GM. Cuidados e manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p.661-73.
4. Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana [citado 20 set. 2012]. Disponvel em: http://www.
ctnbio.gov.br/index.php/content/view/3501.html.
5. Coordenadoria de Defesa Agropecuria do Estado de So Paulo [citado 20 set. 2012]. Disponvel
em: http://www.cda.sp.gov.br/www/servicos/index.php?action=view&cod=21.
6. Canadian Council on Animal Care. Guide to the care and use of experimental animals. Ottawa:
Ontario; 1996. v.1-2.
7. Dixon AK. The social behavior of mice and its sensory control. In: Hedrich H, Bullock G, Petrusz P.
The handbook of experimental animals: the laboratory mouse. USA: Elsevier Academic Press; 2004.
p. 287-99.
8. Koolhaas JM. The laboratory rat. In: Poole T. The UFAW handbook on the care and management of
laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science; 2006. v.1, p. 313-30.
9. Baumans V. The Laboratory mouse. In: Poole T. The UFAW handbook on the care and management
of laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science, 2006. v.1, p.282-312.
10. National Research Council. Guide for care and use of laboratory animals. 8th ed. Washington: The
National Academies Press; 2011. 248p. Available from: http://oacu.od.nih.gov/regs/guide/guide.pdf.
11. Fukamizu A. Transgenic animals in endocrinological investigation. J Endocrinol Invest. 1993;16(6):46173.
12. Hardy P. Gnotobiology and breeding techniques. In: Hedrich H, Bullock G, Petrusz P. The handbook
of experimental animals: the laboratory mouse. USA: Elsevier Academic Press; 2004. p.409-33.
13. Poiley S. A systematic method of breeder rotation for non-inbred laboratory animal colonies. Proc
Anim Care Panel. 1960;10:159-66.
71
14. Lohmiller J, Swing SP. Reproduction and breeding. In: Suckow MA, Weisbroth ST, Franklin CL. The
laboratory rat. USA: Elsevier Academic Press; 2006. p.147-64.
15. Taconic Laboratory. Available from: http://www.taconic.com.
16. Charles River Laboratory. Available from: http//www.criver.com.
72
Captulo 5
Introduo
Procedimentos para acesso seo
Recebimento e processamento de materiais
Caixas (gaiolas)
Bebedouros
Tampas e grades
Uniformes
Resduos
Recebimento de material contaminado da seo de
experimentao
Higienizao de materiais
Esterilizao e desinfeco
Autoclaves e processos de desinfeco
Controles
Sistema de ar condicionado
Manuteno de equipamentos
Autoclaves
Sistema de ar condicionado
Mquina de lavar materiais
Manuteno predial
Salas de estoque
Almoxarifado
Sala de estoque de rao
Continer de estoque de
maravalha
Descarte de resduos
Cmara de CO2 para eutansia
Referncias
73
INTRODUO
A seo de higiene e esterilizao do Biotrio responsvel: pela higienizao,
desinfeco e esterilizao de todo o material sujo produzido no Biotrio; pelo controle do
almoxarifado e pelo abastecimento de materiais para as outras sees; pela lavanderia; pela
eutansia dos animais; pelo descarte dos resduos biolgicos; e pelo acompanhamento das
equipes tcnicas de manuteno dos equipamentos.
A equipe composta de trs auxiliares e uma tcnica que atua como chefe da seo.
Todos so treinados para executar suas funes de acordo com as normas de boas prticas
de laboratrio (BPL)1 e biossegurana2, obedecendo aos documentos de POPs e participando
constantemente de cursos e palestras.
A seo de higiene e esterilizao est localizada no centro do Biotrio, comunicandose com as demais sees atravs das antecmaras e autoclaves de barreira (Captulo 1
Figura 2). A antecmara o local por onde sai todo o material sujo, bem como animais que
sero submetidos a eutansia, entre outros materiais e equipamentos. Atravs das autoclaves,
os materiais higienizados so esterilizados e devolvidos s sees de experimentao e
produo.
Todo o equipamento de apoio, como tanques, mquina de lavar gaiolas, lavadora
ultrassnica e autoclaves, est localizado no centro da seo de higiene e esterilizao,
interligado por dois corredores de acesso s sees de produo e experimentao. Nessa
rea existem as seguintes salas de apoio: almoxarifado, sala de estoque de rao e continer
de estoque de maravalha.
A ventilao do Biotrio realizada pelo sistema de ar condicionado central, que atende
as trs sees (higiene, produo e experimentao).
Captulo 5
Caixas (gaiolas)
Figura 2. A) Gaiola de polipropileno; B) Gaiola de rack ventilado; C) Gaiola metablica para ratos. Fonte:
Disponvel em: http://www.instrulab.com.br/produtos/32.jpg; D) Gaiola para coelhos. Fonte: Disponvel
em: http://www.beira-mar.com/mpead.htm
76
Captulo 5
Bebedouros
Tampas e grades
As gaiolas dos racks ventilados apresentam tampas-filtro e acessrios feitos de
77
Uniformes
Resduos
Os resduos retirados durante a raspagem das gaiolas, o lixo proveniente das salas de
experimentao, das salas de animais, das sees de produo e de higiene e esterilizao,
bem como as carcaas de animais, so considerados resduos de risco biolgico (Figura 4).
Captulo 5
HIGIENIZAO DE MATERIAIS
A higienizao, ou limpeza de materiais, consiste no processo de remoo de sujidades
e matria orgnica dos materiais3 para, posteriormente, serem desinfetados ou esterilizados.
A seo de higiene e esterilizao dispe de uma mquina especfica para lavar esses
materiais, uma lavadora ultrassnica e quatro tanques de alvenaria (500 L/unidade).
O processo de lavagem de materiais na mquina consiste na higienizao a uma
temperatura de 80 oC com jatos de gua quente e detergente neutro prprio (Figura 5).
Normalmente so necessrios dois tcnicos para realizar essa operao (Anexo 3).
A temperatura da gua da lavadora ultrassnica (Figura 3) de aproximadamente 90
C, e os bicos so higienizados por meio de vibraes de ultrassom. O tempo aproximado do
processo de ultrassom de 20 minutos.
o
Nesses casos, utiliza-se outro mtodo de higienizao dos materiais, que consiste no
preparo de duas solues nos tanques, sendo uma de detergente e outra de desinfetante
com hipoclorito de sdio (5%)4.
Aps a retirada dos resduos, os materiais so imersos primeiramente na soluo
detergente por cerca de 20 minutos, para a retirada de resduos orgnicos. Aps o enxgue,
os materiais ficam imersos em soluo desinfetante por no mnimo 1 hora.
Vale ressaltar que, ao trabalhar com agentes qumicos na desinfeco e esterilizao,
o tcnico deve estar atento para a necessidade do uso de EPI, pois esses agentes podem
acarretar efeitos indesejveis sobre a pele, os olhos e o aparelho respiratrio.
80
Captulo 5
ESTERILIZAO E DESINFECO
Autoclaves e processos de desinfeco
Esterilizao o processo que destri ou elimina todos os microrganismos, inclusive
microrganismos esporulados e vrus3. Desinfeco o processo que destri microrganismos,
patognicos ou no, porm no elimina todas as formas microbianas (por exemplo, fungos e
esporos bacterianos2,5).
Os mtodos de esterilizao e desinfeco so variados. No Biotrio utilizam-se as
autoclaves para processo de esterilizao, e produtos qumicos como hipoclorito de sdio,
cloreto de benzalcnio e lcool 70%, como agentes desinfetantes. Para garantir a eficcia
desses processos5, todo material a ser desinfetado ou esterilizado precisa passar previamente
por higienizao para a retirada de resduos biolgicos.
A autoclave produz esterilizao mediante calor sob presso (121 oC) ou vapor fluente
(100 oC), sendo este o equipamento mais utilizado na esterilizao de materiais e insumos em
biotrios4 (Anexo 4). um dos mtodos mais seguros e confiveis, pois penetra em materiais
porosos, esterilizando-os6,7.
O Biotrio conta com quatro autoclaves de barreira dupla porta (560 L/unidade) (Figura
6), sendo uma para a seo de experimentao e trs para a seo de produo. A estrutura
de dupla porta no permite a contaminao entre as sees limpa e suja.
Mdia de
ciclos/
semana
por
autoclave
Temperatura
Prvcuo
Esterilizao
Secagem
Tipo de
esterilizao
Bebedouros
100 oC
------
20
10
Vapor fluente
10
Caixas,
tampas e
acessrios
de rack
ventilado
121 oC
20
10
Vapor sob
presso
32
Maravalha
121 oC
20
30
Vapor sob
presso
Instrumental
cirrgico
e de
necropsia
100 oC
20
10
Vapor fluente
EPI
121 oC
20
10
Papis em
geral
121 oC
20
30
Uniformes e
toalhas
121 oC
20
10
Material
82
Vapor sob
presso
Vapor sob
presso
Vapor sob
presso
1
1
5
Captulo 5
Controles
SISTEMA DE AR CONDICIONADO
A insuflao do ar realizada pelo teto atravs de dutos ligados ao faincoil, com vazo
e presso adequadas para cada seo e taxa de renovao do ar de 20 trocas/h. O sistema
tem um pr-filtro de entrada que substitudo mensalmente, um filtro-bolsa com eficincia de
filtragem de 85% das partculas, que deve ser substitudo semestralmente, e um filtro HEPA
com filtragem absoluta do ar, que deve ser substitudo com frequncia de no mximo dois
anos e que retm partculas de 3 mcrons, com eficincia de 99,97% para vrus e bactrias.
O sistema que atende a seo de experimentao tem filtragem HEPA tambm na sada do
ar. A exausto feita atravs de dutos nas paredes em dois planos (superior e inferior). A
refrigerao das trs sees feita por dois chillers automatizados.
O gerador de energia acionado automaticamente na falta de energia e atende ao
sistema de ventilao e iluminao da seo de produo, bem como fornece iluminao
de emergncia seo de experimentao. O sistema de ar condicionado retorna ao seu
funcionamento normal automaticamente assim que o sistema da rede pblica for restabelecido.
MANUTENO DE EQUIPAMENTOS
Captulo 5
Autoclaves
Sistema de ar condicionado
Manuteno predial
SALAS DE ESTOQUE
Almoxarifado
Captulo 5
DESCARTE DE RESDUOS
Captulo 5
REFERNCIAS
1. Brasil. Ministrio da Sade. Anvisa. Critrios para a habilitao de laboratrios segundo os princpios
das boas prticas de laboratrio (BPL). Braslia; 2001 [citado 7 mar. 2012]. Disponvel em: http://
www.anvisa.gov.br.
2. Neves SMP, Chaguri LCAG, Fontes RSF, Ong FMP. Biossegurana em biotrios. In: Hirata MH,
Hirata RDC, Mancini, Filho JM. Manual de biossegurana. 2a ed. Barueri: Manole; 2012. p.193-211.
3. Mezadri TJ, Tomz VA, Amaral VLL. Biossegurana em laboratrios de experimentao animal.
In: Mezadri TJ, Tomz VA, Amaral VLL. Animais de laboratrio: cuidados na iniciao experimental.
Florianpolis: Editora da UFSC; 2004. p. 53-68.
4. De Luca RR, Damy SB. Higiene, desinfeco e esterilizao. In: De Lucca RR, Alexandre SR,
Marques T, Souza NL, Merusse JLB, Neves SP. Manual para tcnicos em bioterismo. 2a ed. So
Paulo: Winner Graph; 1996. p. 41-56.
5. USA. Healthcare Infection Control Practices Advisory Committee (hicpac). Centers for Disease
Control (CDC). Guideline for disinfection and sterilization in healthcare facilities. Atlanta; 2008 [2012
March 07]. Available from: http://www.cdc.gov/hicpac.
6. Majerowicz J. Boas prticas em biotrios e biossegurana. Rio de Janeiro: Intercincia; 2008. 175p.
7. Smith MW. Safety and hygiene. In: Poole T. The UFAW handbook on the care and management of
laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science; 2006. v. 1, p.141-70
8. Brasil. Ministrio do Meio Ambiente. Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). Resoluo
no358 de 2005 [citado 24 set. 2012]. Disponvel em: http://www.mma.gov.br/port/conama/res/res05/
res35805.pdf.
9. Lapchik VBV, Mattaraia VGM. Finalizao humanitria. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM.
Cuidados e manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p.603-15.
10. Brasil. Conselho Federal de Medicina Veterinria (CFMV). Resoluo no 1000. Braslia, 11 de maio
de 2012 [citado 7 mar. 2012]. Disponvel em: http://www.cfmv.org.br.
89
bbb
Captulo 6
Seo de Experimentao
Flvia de Moura Prates Ong
Lvia Duarte Rodrigues
Introduo
Descrio da seo
Biossegurana na seo de experimentao
Padronizao da experimentao animal
Protocolos e procedimentos operacionais
padro
Equipamentos de Proteo Individual (EPIs)
Equipamentos de Proteo Coletiva (EPCs)
Descarte de materiais biolgicos
Riscos ocupacionais
Vias de administrao e coleta de sangue
Imobilizao dos animais
Principais vias de administrao de
substncias
Coleta de sangue
Mtodos qumicos
profunda
Mtodos fsicos
Coelhos
Inoculao
Coleta de sangue
91
INTRODUO
Rato
Camundongo
Temperatura
222
222
Umidade relativa
5510%
5510%
Trocas de ar
15-20 trocas/hora
15-20 trocas/hora
Ciclo claro/escuro
12C/12E
12C/12E
0,1 a 65
0,75 a 85
Seo de Experimentao
Captulo 6
Descrio da seo
Salas de experimentao
Um total de 14 salas experimentais (Figura 1) destinado a experimentos, com a
utilizao de diversos modelos animais, como heterognicos, isognicos, mutantes
(imunodeficientes) e geneticamente modificados, de acordo com as espcies de ratos e
camundongos.
As salas de experimentao so mantidas com barreiras sanitrias: sistema de presso
negativa com relao ao corredor; filtros seletivos HEPA na entrada e sada do ar; autoclave
de barreira; fluxo laminar; e racks ventilados.
A iluminao das salas controlada com temporizadores de iluminao, sendo um
para cada sala. Geralmente, so mantidos os ciclos de 12 h claro/12 h escuro. Caso seja
necessria a mudana de ciclo, os animais devem passar por um perodo de adaptao de
duas semanas2 (Captulo 3).
93
As salas so identificadas nas portas com os nomes dos pesquisadores, seus ramais
e telefones de emergncias.
Para atender demanda dos pesquisadores, as salas so compartilhadas. Procurase selecionar os experimentos que ficaro na mesma sala de acordo com alguns critrios,
como, por exemplo, por espcie animal e por experimentos que apresentem necessidades
semelhantes. As linhagens geneticamente modificadas permanecem juntas em racks
ventilados (sistema IVC) ou em gaiolas convencionais (sistema open cage) com identificao
diferenciada das outras linhagens. J os trabalhos com imunodeficientes so colocados
geralmente na mesma sala.
Os trabalhos que necessitam de aparelhos e gaioleiros especficos, como esteira
ergomtrica, aparelho de natao, cmara para gases e gaiolas metablicas, permanecem
em salas apropriadas para tais fins.
Sala de procedimentos
Seo de Experimentao
Captulo 6
Essa sala conta com uma autoclave de dupla porta para a esterilizao de materiais
provenientes da seo de higiene e esterilizao para a seo de experimentao. So
esterilizados os seguintes materiais nessa sala: gaiolas, grades, maravalha e bebedouros
completos com gua.
Se houver necessidade de descontaminar gaiolas sujas contaminadas ou animais
mortos contaminados, provenientes da seo de experimentao, a descontaminao
deve ser realizada seguindo o fluxo da seo de experimentao para a seo de higiene e
esterilizao. As gaiolas potencialmente contaminadas so embaladas e identificadas com o
smbolo de risco biolgico, este procedimento realizado dentro do fluxo laminar (Figura 4).
Posteriormente, esse material colocado na autoclave (Anexo 5).
Encontram-se tambm nessa sala materiais de limpeza, sacos de lixo hospitalar, sacos
autoclavveis e fichas para identificao de gaiolas.
Seo de Experimentao
Captulo 6
97
Seo de Experimentao
Captulo 6
Descrio
Grupo de
risco I
Baixo risco individual e baixo risco para a comunidade. Trata-se de OGM que
contm sequncias de ADN/ARN de organismo doador e receptor que no causem
agravos sade humana e animal e efeitos adversos aos vegetais e ao meio
ambiente
Grupo de risco
II
Moderado risco individual e baixo risco para a comunidade. Trata-se de OGM que
contm sequncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor com moderado
risco de agravo sade humana e animal, que tenha baixo risco de disseminao
e de causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente
Grupo de risco
III
Grupo de
Risco IV
Alto risco individual e risco moderado para a coletividade. Trata-se de OGM que
contm sequncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor, com alto
risco de agravo sade humana e animal, que tenha baixo ou moderado risco
de disseminao e de causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente
Alto risco individual e alto risco para a coletividade. Trata-se de OGM que contm
sequncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor com alto risco de
agravo sade humana e animal, que tenha elevado risco de disseminao e de
causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente
Protocolos
Os protocolos de biossegurana do Biotrio preveem a garantia da qualidade do animal,
bem como a segurana no seu uso. Esses protocolos foram elaborados de acordo com leis
nacionais e internacionais. Sendo assim, os aspectos abordados incluem: padronizao dos
protocolos; treinamento dos funcionrios do Biotrio e dos usurios (pesquisadores, tcnicos,
alunos de graduao e ps-graduao); uso de equipamentos de segurana individual e
coletiva; validao e manuteno dos equipamentos; adequado descarte de material
biolgico, sendo os procedimentos criteriosamente organizados em manuais operacionais e
continuamente revisados.
Todos os pesquisadores e usurios recebem, ao iniciar seus experimentos na seo de
experimentao, as normas internas de biossegurana, que contm recomendaes gerais
de tcnicas e procedimentos com os animais e um protocolo de experimentao animal a ser
preenchido pelo pesquisador, com os devidos termos de responsabilidade.
Seo de Experimentao
Captulo 6
Protocolo experimental
Rotinas e procedimentos
Seo de Experimentao
Captulo 6
Os EPCs s podem ser manuseados por pessoas habilitadas, devendo ter suas
instrues de uso afixadas em local de fcil visualizao.
Equipamentos como ar-condicionado central, gerador de energia eltrica, autoclaves,
mquinas de lavar gaiolas, estufas, fluxo laminar, entre outros, devem ser rigorosamente
inspecionados e registrados nas devidas fichas de controle de manuteno de equipamentos14.
103
104
Seo de Experimentao
Captulo 6
Riscos ocupacionais
Os biotrios apresentam problemas nicos, que podem atingir funcionrios e
pesquisadores, como riscos ergonmicos, qumicos, biolgicos, mecnicos, alm de
mordeduras e arranhes de animais e reaes alrgicas12.
Com relao ao ambiente de trabalho, existem alguns odores animais que podem ser
agressivos aos seres humanos. Esses odores so produzidos pela decomposio bacteriana
dos excrementos. Contudo no se devem utilizar produtos que mascarem esses odores, pois
podem ser nocivos para os animais e atrapalhar o comportamento normal da espcie14. Nessa
seo, tais odores so controlados por procedimentos rotineiros de limpeza, com produtos de
baixa toxicidade aos animais, e pela manuteno da ventilao adequada.
Para controlar acidentes, a FCF e IQ contam com uma Comisso Interna de Preveno
de Acidentes (CIPA), que tem funo educativa e de conscientizao quanto aos riscos de
acidentes no trabalho.
O pesquisador ou o responsvel pela experimentao animal devem assegurar que
todas as pessoas que tenham contato com animais de laboratrio e/ou com materiais de
descarte sejam avisadas do risco potencial. de responsabilidade do pesquisador comunicar
direo do Biotrio quanto necessidade de alguma medida profiltica para a realizao de
seu experimento, como, por exemplo, imunizaes com vacinas apropriadas5.
Zoonoses
Zoonoses so infeces transmitidas dos animais para os homens e vice-versa,
105
Alergias
Seo de Experimentao
Captulo 6
Quanto ao manuseio dos animais, os alunos so orientados para que estes sejam
abordados, manipulados e contidos com cuidado e profundo respeito, devendo ser tomadas
todas as precaues possveis com o intuito de garantir o mnimo de estresse durante a
manipulao17,18.
A administrao de drogas, anticorpos, clulas ou outros agentes representa uma
etapa fundamental no processo de avaliao da atividade biolgica em animais. Tais
procedimentos so amplamente utilizados na seo de experimentao. Na escolha da
melhor via de administrao, deve-se ter conhecimento das caractersticas qumicas e
fsicas da substncia, pois a via de administrao depende da propriedade da substncia
e do objetivo de estudo. Ateno especial tambm deve ser dada concentrao, ao pH,
viscosidade, esterilidade, pirogenicidade e toxicidade das substncias, bem como
existncia de elementos potencialmente perigosos19, 20, 21.
O conhecimento de mtodos e tcnicas disponveis para a administrao de
substncias, bem como das caractersticas de seu metabolismo de distribuio tecidual,
possibilita ao pesquisador selecionar a rota mais adequada para a finalidade de seu estudo.
Entre as vrias possibilidades para a administrao de substncias aos roedores, as rotas
mais comuns so: via oral (VO) e gavagem, injees subcutnea (SC), intramuscular (IM),
endovenosa (EV) e intraperitoneal (IP). A rota deve ser selecionada e treinada antes do incio
de qualquer experimento19,20,21.
A partir do momento em que os animais solicitados pelo pesquisador so entregues na
sala experimental em uso, recomendado um perodo de adaptao de uma a duas semanas.
A adaptao proporciona aos animais a oportunidade de se recuperarem do transporte e de
se aclimatizarem em seu novo ambiente2.
Nesse perodo, o operador deve manuse-los para que se adaptem ao seu cheiro
e rotina do manuseio e para introduzir o treinamento das tcnicas e procedimentos que
sero realizados. Um exemplo de treinamento de tcnicas o uso da guilhotina. Esse tipo
de equipamento introduzido nas gaiolas dias antes da eutansia, para que os animais se
acostumem com o objeto novo e, no momento da eutansia, no fiquem muito estressados22,23.
O conhecimento das tcnicas que sero realizadas nos animais e os treinamentos
prvios garantem a maior qualidade do resultado dos procedimentos.
Seo de Experimentao
Captulo 6
Figura 9. A) Conteno de rato segurando-lhe o pescoo com os dedos indicador e mdio; B) Conteno
de rato envolvendo-lhe o dorso abaixo dos membros anteriores
Figura 10. Conteno manual para ratos puxando-lhe toda a pele do dorso
Seo de Experimentao
Captulo 6
apreendida com os outros dedos19, 26. importante prender bem a pele solta do pescoo,
para que o animal no consiga virar e morder o operador. Ao girar a mo, o camundongo fica
com sua face ventral virada para cima, e sua cauda ento presa entre o dedo anular e a
ponta do dedo mnimo.
A conteno no deve ser muito apertada, pois pode dificultar a respirao do animal,
os olhos ficam saltados e a frequncia cardaca aumenta. Tambm no pode ser muito
solta, pois podem ocorrer acidentes: por exemplo, o animal pode girar e morder ou arranhar
o operador. Deve-se atentar tambm para a aplicao incorreta de injees. Portanto, a
perfeita conteno reduz o estresse do animal (Figura 11).
Dispositivos artificiais
Dispositivos artificiais esto sendo continuamente desenvolvidos por empresas
especializadas. Os contensores possibilitam que o operador fique com as mos livres para a
execuo dos procedimentos19,23.
Alguns exemplos de contensores artificiais so demonstrados na Figura 12.
A
Figura 12. A) Contensor artificial para camundongo; B) Contensor artificial para rato
111
Subcutnea
Intramuscular
Intraperitoneal
Endovenosa
Volume (mL)
5-10
0,3
5-10
0,5
Agulha (mm)
13 x 25 ou 25 x 5
20 x 5,5 ou 25 x 6
25 x 6 ou 20 x 5,5
25 x 5
Volume (mL)
2-3
0,03
2-3
0,2
Agulha (mm)
13 x 4,5 ou 25 x 5
13 x 4,5 ou 25 x 5
13 x 4,5 ou 25 x 5
13 x 4,5 ou 25 x 5
Rato
Camundongo
Via oral
Gavagem
Seo de Experimentao
Captulo 6
no incio do perodo claro. O volume indicado de 1 mL de soluo para cada 100 g de peso
corporal. Se a soluo for aquosa, esse volume pode subir para 2 mL para cada 100 g de
animal17.
Administrao subcutnea
A administrao subcutnea fcil e raramente dolorosa. A velocidade de absoro
inferior em comparao s vias intraperitoneais e intramusculares. Essa administrao
geralmente realizada na pele solta das reas dorsolaterais do pescoo, do ombro e dos
flancos.
Nesse procedimento, o animal contido manualmente e, ento, apoiado sobre uma
toalha ou superfcie limpa, a agulha inserida sob a pele solta, apreendida com o polegar e
o indicado, e, em seguida, injeta-se a substncia19,26,28 (Figura 14).
Figura 14. A) Inoculao subcutnea na regio da pele do pescoo; B) Inoculao subcutnea na regio
do flanco
113
Administrao intramuscular
Essa via usada para pequenos volumes, pois o msculo dos ratos e camundongos
de pequeno porte. A substncia injetada no msculo da poro posterior das patas
traseiras, devendo ser direcionada para longe do fmur e nervo citico. Quando o animal
est anestesiado ou manualmente contido, a ponta da agulha inserida atravs da pele e no
msculo. Aspirar brevemente com a seringa antes de injetar a substncia, para certificar-se
de que no retorne sangue, caso a agulha penetre um vaso19,26,28(Figura 15).
Administrao endovenosa
Seo de Experimentao
Captulo 6
Artria
Veia
Lateral da cauda
Cauda
Administrao intraperitoneal
O animal deve ser contido pelo dorso, como descrito no item Conteno manual.
Com a conteno, o animal posicionado com a sua face ventral voltada para cima.
Normalmente, a injeo aplicada no quadrante posterior do abdome, do lado direito do
animal e do esquerdo do operador. A substncia injetada na cavidade peritoneal entre os
rgos abdomnais.
Algumas limitaes da via intraperitoneal so a sensibilidade do tecido a substncias
irritantes e menos tolerncia a solues de pH no fisiolgicos, contudo uma via que suporta
grandes volumes19,26,28 (Figura 17).
115
Figura 17. A) O quadrante inferior esquerdo (3) a melhor rea para aplicar a injeo intraperitoneal; B)
Injeo intraperitoneal em rato; C) Injeo intraperitoneal em camundongo
Administrao intradrmica
Geralmente, essa via no recomendada e deve ser restrita aos casos de absoluta
necessidade.
O animal deve ser anestesiado e, posteriormente, realiza-se a tricotomia do local da
administrao, que pode ser uma pequena rea sobre as costas, o abdome ventral ou as
patas traseiras; estas devem ser limpas com lcool 70% em gaze ou haste de algodo29.
A pele do animal esticada com o dedo polegar ou indicador, e a agulha inserida logo
abaixo da camada superficial da epiderme. A aplicao da injeo pode ser constatada pela
formao de uma bolha na pele do animal. O volume a ser administrado de 0,05 mL por
local de administrao19,26,28 (Figura 18).
116
Seo de Experimentao
Captulo 6
Administrao intracerebral
O animal anestesiado e, em seguida, contido manualmente sobre uma superfcie
slida. O local da administrao a metade da distncia entre o olho e a orelha do animal. A
agulha perfura diretamente o crnio do animal. O volume a ser administrado de at 0,03 mL
por local de administrao19,26,28.
Administrao intranasal
O animal deve ser levemente anestesiado e manualmente contido, permanecendo com
a cabea elevada. A ponta da pipeta colocada nas narinas externas e, ento, a soluo
passada lentamente para as narinas. O volume a ser administrado de 0,02 mL por local de
administrao19,26,28 (Figura 19).
Coleta de sangue
Existem variadas tcnicas de coleta de sangue, tanto para ratos como para
camundongos. Porm para a melhor escolha da tcnica, deve-se ter conhecimento de alguns
parmetros relacionados aos animais, como espcie, tamanho do animal, tipo de amostra
necessria (soro, plasma, clulas inteiras), qualidade da amostra necessria (esterilidade,
contaminao de fludos, tecidos), quantidade de sangue necessria, frequncia de
amostragem, estado de sade do animal, formao e experincia do operador e efeito da
conteno ou anestesia sobre o parmetro arterial medido27.
A frequncia e o volume aceitveis de coleta de sangue dependem do volume total
de sangue circulante dos animais e da quantidade de glbulos vermelhos (RBC). Como
representativo do volume de sangue total, calcula-se 10% do peso dos ratos e 6% a 8% do
peso dos camundongos,.
Do volume de sangue circulante, cerca de 10% do volume total pode ser removido com
segurana a cada duas a quatro semanas; 7,5% desse volume pode ser removido a cada
sete dias; e 1% a cada 24 horas17,20,25, como descrito na Tabela 1.
Para a coleta de volumes maiores que o recomendado, deve-se apresentar uma
justificativa e fazer a reposio de lquidos e substitutos celulares. importante salientar
que o volume de sangue recuperado em 24 horas, mas os eritrcitos retornam aos nveis
normais somente em duas semanas.
Tabela 1. Volume de sangue aproximado e intervalos entre coletas
Peso do animal (g)
Volume de sangue
circulante (mL)
10% (mL)
A cada duas semanas
20
1,10-1,40
0,011-0,014
0,11-0,14
25
1,37-1,75
0,014-0,018
0,14-0,18
30
1,65-2,10
0,017-0,021
0,17-0,21
35
1,93-2,45
0,019-0,025
0,19-0,25
40
2,20-2,80
0,022-0,028
0,22-0,28
125
6,88-8,75
0,069-0,088
0,69-0,88
150
8,25-10,50
0,082-0,105
0,82-1,0
200
11,00-14,00
0,11-0,14
1,1-1,4
250
13,75-17,50
0,14-0,18
1,4-1,8
300
16,50-21,00
0,17-0,21
1,7-2,1
350
19,25-24,50
0,19-0,25
1,9-2,5
1% (mL)
A cada 24 h
Seo de Experimentao
Captulo 6
Figura 20. A) Anestsico oftlmico; B) Coleta de sangue via retro-orbitral (Fonte: Disponvel em: http://
www.theodora.com/rodent_laboratory/blood_collection.html)
Para finalizar o procedimento, utiliza-se uma gaze estril para estancar o sangramento19,20
(Figura 21).
Veia safena
Pode ser utilizado tanto para ratos como para camundongos, perfurando-se a veia
safena com uma agulha. O volume de sangue obtido de pequeno a mdio, e a qualidade
da amostra varivel.
Deve haver uma conteno efetiva do animal, no necessitando da utilizao de
anestsicos.
A veia safena encontrada na superfcie externa da coxa. Para melhor visualizao,
devem-se remover os pelos da regio da coxa do animal.
O camundongo pode ser contido em um tubo de 50 mL, cortando-se a ponta do tubo,
para que o animal respire. O camundongo inserido nesse tubo com a cabea para dentro,
o que favorece o manuseio de suas patas traseiras.
Para visualizar a veia, prende-se a parte logo acima da coxa do animal como se fosse
um garrote ; em seguida, pode-se aplicar um lubrificante para facilitar a coleta. Introduzir a
agulha e coletar as gotas de sangue que surgem19,30 (Figura 22).
Seo de Experimentao
Captulo 6
Veia da cauda
Essa coleta pode ser realizada tanto em ratos como em camundongos. A qualidade
da amostra varivel, podendo estar contaminada com tecido ou pele, e diminuda
proporcionalmente ao tempo prolongado do sangramento e da ordenha da cauda.
Podem ser utilizadas agulhas de pequeno calibre ou realizar a canulao das veias31.
O primeiro passo colocar o animal em um contensor ou anestesi-lo. Em seguida,
passa-se uma gaze com lcool 70%. A cauda deve ser aquecida, para que ocorra uma
vasodilatao. Esse aquecimento pode ser feito com uma lmpada quente ou at mesmo
mergulhado-se a cauda em gua quente (em torno de 35 C). Localiza-se uma das veias
laterais da cauda e, com o bisel virado para cima, quase paralelo veia, introduz a agulha
cerca de 2 mm na veia (Figura 23).
Para pequenos volumes, pode-se proceder amputao da cauda de cerca de 1 mm
em camundongos e de 2 mm em ratos. Para medir a glicemia, na qual necessria apenas
uma gota de sangue, pode-se dar um pique com uma agulha (de insulina ou 22G), como
feito no dedo indicador de humanos17,19.
Veia jugular
Essa via limitada a ratos, sendo o volume obtido de mdio a grande com uma boa
qualidade da amostra.
O animal deve ser primeiramente anestesiado e contido de forma que permanea com
121
a cabea para cima. O pelo do pescoo (local da puno) pode ser retirado ou molhado com
lcool 70%.
Com o pescoo distendido, localiza-se a veia jugular e retira-se o sangue com uma
seringa de 1 mL, inserindo a agulha de 1 mm a 3 mm de profundidade19,20.
Figura 24. A) Puno cardaca em rato; B) Localizao do corao no rato (Fonte: Disponvel em: http://
www.theodora.com/rodent_laboratory/blood_collection.html)
122
Seo de Experimentao
Captulo 6
Aorta abdominal
Aps a anestesia profunda, coloca-se o animal em decbito dorsal, prendendo suas
patas com agulhas, como nos procedimentos cirrgicos. Descontamina-se toda a extenso
do trax e do abdome do animal com lcool 70%. Em seguida, procede-se abertura da
pele e, depois, do peritnio, prendendo-o com agulhas. Os rgos da regio do abdome so
afastados para o lado, para ser possvel localizar a veia. Coloca-se a agulha com delicadeza
na veia, para no estourar, puxando-a devagar19,20 (Figura 25).
COELHOS
Inoculao
A via de inoculao utilizada a subcutnea, e o antgeno a ser inoculado deve ser
purificado, estar livre de toxicidade21, ter pH fisiolgico, estar estril e estar na concentrao
adequada (Figura 26).
Figura 26. A) Conteno manual para transporte de coelho (Fonte: Disponvel em: http://research.
uiowa.edu/animal/print.php?get=rabbit>); B e C) Tcnicas de conteno para procedimentos de coleta
ou inoculao endovenosa (Fontes: http://www.ahwla.org.uk/site/tutorials/BVA/BVA08-Rabbit/Rabbit.
html e http://ehs.uc.edu/lams/data/Rabbits/9004/images/lg/04_27.jpg)
124
Seo de Experimentao
Captulo 6
Coleta de sangue
A via de escolha so os vasos auriculares, e a quantidade de sangue coletada para
o pr-imune e a posterior checagem da quantidade de anticorpos de 3 mL a 5 mL. Para a
coleta de sangue final, so retirados de 15 mL a 30 mL, tambm pela via auricular (Figura 27).
No final do experimento, os animais so eutanasiados por mtodo qumico de overdose
por anestsicos injetveis (Anexo 6).
Seo de Experimentao
Captulo 6
Terminologia bsica29,37,48
Planejamento e cuidados
Em todas as situaes em que seja necessrio anestesiar um animal, muito
importante que o pesquisador planeje e efetivamente coloque em prtica os cuidados
adequados antes, durante e depois de cada procedimento. O uso de agentes anestsicos
altera significativamente a fisiologia do animal e, sem os cuidados necessrios e o devido
planejamento, o resultado pode ser desastroso.
O grau das alteraes causadas varia, porm todo agente anestsico gera hipotermia17
e diminuio das atividades cardiovascular (bradicardia) e respiratria (bradipneia). Aps
o procedimento, essas alteraes persistem at a recuperao do animal, e por isso
necessrio o cuidado com o animal imediatamente aps o procedimento e, em alguns casos,
por mais alguns dias depois. O tempo de recuperao do animal varia conforme o agente
utilizado.
Pr-procedimento
Seo de Experimentao
Captulo 6
ambiente (Captulo 3), mesmo que o animal tenha apenas mudado de uma seo para outra
dentro do mesmo biotrio.
Em roedores e coelhos, a restrio alimentar no necessria39, pois a anatomia do
estmago dessas espcies impede que eles vomitem37. A restrio alimentar deve ocorrer
somente se for realmente necessria e estiver especificada no protocolo de pesquisa
aprovado na Ceua da instituio. No caso da oferta de gua, a restrio deve ocorrer pelo
menos 60 minutos antes da induo anestsica29,37.
Nos casos em que seja necessria a restrio de alimentos, deve-se considerar que
os roedores realizam a coprofagia (ingesto de fezes). Mesmo adotando-se medidas para
evit-la durante o perodo de restrio, como a utilizao de gaiolas metablicas, o animal
capaz de retirar as fezes diretamente do nus44 (Captulo 3).
Se possvel, deve-se pesar o animal antes do procedimento anestsico, no apenas
para a garantia do clculo correto da dosagem dos agentes, mas tambm para acompanhar
a perda de peso que ocorre inevitavelmente no perodo ps-cirrgico. No caso de perda de
10% a 15% do peso corporal do animal em poucos dias, recomenda-se a eutansia, indicada
tambm quando a perda total chegar a 20% do peso corporal.
Avaliar o status corporal uma boa maneira de avaliar as condies de sade do
animal no ps-cirrgico e em outras situaes experimentais na definio do endpoint. Para
realizar essa avaliao, deve-se pegar o camundongo ou rato e coloc-lo em cima da tampa
da gaiola. Ao passar os dedos pelos ossos plvicos (quadril), a condio corporal pode ser
ento avaliada em uma escala de 1 a 545,46.
Descrio dos valores referentes avaliao:
5: O animal est obeso, e os ossos no podem ser sentidos;
4: O animal est acima das condies normais, e os ossos so pouco sentidos;
3: O animal est em timas condies. Os ossos so palpveis, mas no esto
proeminentes;
2: O animal est ficando magro, e os ossos esto proeminentes. Divide-se essa
categoria em +2, 2 e -2, sendo a eutansia recomendada no ltimo caso (-2);
1: A perda de massa muscular est avanada, no h deposio de gordura, e os
ossos esto muito proeminentes. A eutansia obrigatria nesse caso.
129
Durante o procedimento
Durante o procedimento experimental, deve-se atentar para os seguintes cuidados:
Manter a esterilidade do ambiente;
Manejar os tecidos com cuidado, pois, dessa forma, a dor aps o procedimento
cirrgico reduzida, assim como o risco de desenvolvimento de infeces;
Repor a perda de fluidos (administrar o fluido aquecido, para prevenir uma queda
brusca na temperatura do animal Tabela 2);
Manter o animal aquecido (usando placas aquecedoras, bolsa trmica, lmpada,
plstico-bolha etc.), pois, como tem o corpo pequeno, perde calor com mais
facilidade. Tambm se deve atentar para que o animal no fique com hipertermia17;
Levar em considerao as particularidades anatmicas e as indicaes e
contraindicaes de anestsicos de acordo com a espcie;
Evitar o ressecamento dos olhos pelo contato excessivo com o ar, aplicando um
gel/pomada protetor estril durante o perodo em que o animal estiver anestesiado.
Subcutnea (mL)
Intraperitoneal (mL)
Rato (200 g)
1-2
Camundongo (30 g)
Fonte: Adaptado de Flecknell .
29
Cuidados ps-procedimento
Ao trmino do procedimento, necessria uma monitoria para o adequado suporte
ps-operatrio dos animais:
Procurar manter o animal aquecido, para, assim ajud-lo em sua recuperao. Ratos
e camundongos so espcies bastante suscetveis a hipotermia. A temperatura do
130
Seo de Experimentao
Captulo 6
Os animais devem ser monitorados pelo menos uma vez ao dia, para avaliar a
presena de dor no ps-procedimento36;
Considerar que, aps a cirurgia, o animal diminuir o consumo de gua e rao. Isso
pode ser resolvido facilitando seu acesso alimentao e hidratao, bem como
providenciando analgesia adequada.
Como a ingesto de gua nesse perodo diminui, ocorre facilmente a desidratao
do animal. A administrao de fluido estril e aquecido por via subcutnea um meio de
melhorar a recuperao do animal. Pode ser utilizada soluo fisiolgica ou glicofisiolgica
pelas vias oral, subcutnea ou intraperitoneal (Tabela 2)29,39.
Caso o animal demore a retornar da anestesia, recomendado reaplicar a pomada
oftlmica, para evitar o ressecamento dos olhos.
Finalmente, deve-se sempre considerar o controle da dor por meio da administrao
de analgsicos17.
Medicao pr-anestsica
Dosagem
Observaes
Acepromazina
Sedao
Atropina
Parassimpatoltico
Diazepan
Sedao
Cetamina
Sedao/imobilizao
Medetomidine
Sedao/analgesia leve
Midazolan
5 mg/kg IP
Sedao
Xilazina
Sedao/analgesia leve
Seo de Experimentao
Captulo 6
Dosagem
Observaes
Acepromazina
Sedao leve
Atropina
0,04 mg/kg SC
Anticolinrgico
Diazepan
Sedao leve
Cetamina
100-200 mg/kg IM
Medetomidine
Midazolan
5 mg/kg IP/IM
Xilazina
5-10 mg/kg IP
Anestesia
O objetivo da utilizao de anestsicos nos ratos e camundongos de laboratrio
garantir uma conteno qumica humanitria e prevenir a dor, obtendo adequado relaxamento
muscular e analgesia para a realizao dos diferentes procedimentos experimentais
conduzidos no Biotrio44. Assim, a anestesia deve ser realizada, em animais de laboratrio,
sempre que o procedimento lhes cause dor ou desconforto. Para minimizar a dor e o
desconforto, devem ser utilizadas drogas anestsicas, analgsicas, tranquilizantes e, ainda,
a eutansia.
O plano anestsico a ser induzido depende do procedimento e da necessidade de
supresso da dor percebida pelo animal. Assim, em procedimentos menos invasivos, que
incluem a administrao de fluidos, imunizao, medicao oral, suficiente apenas a
conteno do animal, realizada por pessoa treinada e experiente, ou, se necessrio, anestesia
local. J no caso de um procedimento mais invasivo (cirurgias, agentes que envolvem
inflamao excessiva e necrose, bem como coleta de sangue via puno cardaca, retroorbitral e aorta abdominal), necessrio suprimir completamente a percepo dos estmulos
dolorosos utilizando-se agentes analgsicos29 e anestsicos.
Para a obteno dos diversos planos de anestesia, h diferentes tcnicas, utilizando-se
um ou mais agentes anestsicos29,44. No Biotrio da FCF-IQ/USP, as tcnicas mais utilizadas
so a anestesia injetvel dissociativa com cetamina associada com xilazina e a anestesia
inalatria com isoflurano. Entre elas, a inalatria considerada a tcnica mais segura, por ter
maior margem de segurana e proporcionar um plano cirrgico de anestesia mais estvel37.
133
Anestesia injetvel
No caso de ratos e camundongos, a via mais utilizada para anestesia injetvel a
intraperitoneal, pois a via endovenosa de difcil acesso nessas espcies em razo do
tamanho. Com a utilizao dessa via, contudo, no possvel administrar o anestsico
gradualmente como no acesso endovenoso. Portanto, ao utilizar essa via, administra-se uma
dose nica mais alta44, calculada previamente. Como as variaes entre as linhagens e at
mesmo entre os gneros resultam em respostas diferentes aos anestsicos, recomendase optar por agentes ou pela combinao de agentes que apresentem maior margem de
segurana29,44.
Quando a anestesia a ser utilizada injetvel, h alguns fatores a serem considerados,
como o local de administrao, o mtodo, o volume, se o composto irritante e a necessidade
de diluio.A cetamina ou quetamina um anestsico injetvel que induz a um estado de
anestesia dissociativa. Na anestesia dissociativa, ocorre a dissociao com o crtex cerebral,
na qual o animal fica em estado de analgesia e desligamento sem, contudo, perder os
reflexos protetores29.
Os efeitos esperados da administrao de cetamina em ratos e camundongos envolvem:
imobilidade com aumento de tnus muscular; estabilidade de funo respiratria; analgesia
varivel, porm no adequada para cirurgia em camundongos; estmulo de parmetros
cardiovasculares; aumento do fluxo sanguneo cerebral; aumento da presso intracraniana;
e aumento da presso intraocular. O agente utilizado isoladamente no produz um efeito
anestsico adequado em ratos e camundongos17.
Para relaxar a musculatura em razo do aumento do tnus muscular e aumentar a
durao da anestesia, pode-se utilizar a cetamina associada com agentes sedativos, como
diazepan ou acepromazina. Nesse caso, a analgesia gerada leve, no sendo suficiente
para um procedimento cirrgico, mas adequada para procedimentos menos invasivos e
dolorosos29.
134
Seo de Experimentao
Captulo 6
Cetamina
Xilazina
Durao da anestesia
Rato
Camundongo
Efeito
75-100 mg/kg IP
10 mg/kg IP
20-30 min
Anestesia cirrgica
80-100 mg/kg IP
10 mg/kg IP
20-30 min
Anestesia cirrgica
Anestesia inalatria
Seo de Experimentao
Captulo 6
Fase da anestesia
Induo
3-4%
Manuteno
1-2%
Dor
Acreditava-se no passado que os animais no eram capazes de sentir dor. Hoje, sabese que eles sentem dor, porm difcil reconhecer essa dor e saber o grau de dor que o animal
137
Camundongos
Ratos
Coelhos
Perda de peso
Isolamento social
Respirao acelerada
Respirao abdominal
Ranger de dentes
Mordidas/agresso
Aumento/diminuio de movimentos
Postura anormal
Sono agitado
Pupilas dilatadas
X
X
Desidratao/olhos fundos
Espasmos/tremores
Vocalizao (raro)
Aumento da salivao
138
Seo de Experimentao
Captulo 6
Estresse
O estresse foi definido como o efeito de fatores fsicos, fisiolgicos ou emocionais
que induzem a uma alterao na homeostase do animal32,38. A homeostase o equilbrio
fisiolgico normal do corpo47. O estresse e suas consequncias podem ser divididos em trs
tipos32:
eustresse o estresse bom, benfico para o animal. Ocorre quando o animal
sofre um estmulo no doloroso e a partir da tem incio uma resposta adaptativa a
esse estmulo;
estresse neutro aquele em que ocorre um estmulo causador de estresse que
no nem prejudicial nem benfico para o animal 38;
distresse ocorre quando o animal sofre um estmulo que prejudica seu bem-estar.
Para a avaliao do estresse, devem-se utilizar de preferncia mtodos no invasivos.
Os parmetros utilizados na avaliao do estresse incluem alteraes comportamentais,
sintomas clnicos, aspectos fisiolgicos, indicadores bioqumicos, achados patolgicos e
indicadores imunolgicos.
Vale destacar que, ao se avaliar o estresse, prefervel utilizar sempre mais de um
desses parmetros32.
Analgesia
sofre alteraes patofisiolgicas que podem influenciar os resultados dos experimentos. Alm
disso, ao promover o alvio da dor trabalha-se de acordo com a legislao e com princpios
ticos e humanitrios35,36.
H muitos agentes analgsicos disponveis para realizar o devido cuidado psoperatrio com o animal, considerando-se que existem procedimentos experimentais mais
invasivos que outros, causando diferentes graus de dor no animal. O Quadro 10 classifica a
dor ps-procedimento como leve, moderada ou severa, de acordo com o tipo de procedimento
realizado. J o Conselho Nacional de Controle de Experimentao Animal (CONCEA)
classifica os experimentos em grau de invasividade 1 a 4 (Resoluo Normativa no 4).
Quadro 10. Potencial de dor no ps-procedimento
Mnima a leve
Leve a moderada
Moderada a severa
Implantao de cateter
Laparotomia (pequenas
incises)
Corte da cauda
Tireoidectomia
Toracotomia
Marcao na orelha
Orquidectomia
Transplante de rgos
Colocao de transponder
subcutneo
Cesariana
Procedimentos vertebrais
Hipofisectomia
Procedimentos de queimadura
Timectomia
Modelos de trauma
Transferncia de embries em
roedores
Transferncia de embries
em no roedores
Procedimentos ortopdicos
Mltiplas injees
Procedimento ocular na
crnea
Implante de eletrodos
intracerebrais
Vasectomia
Implantao de via de acesso
vascular
Craniotomia (dor periosteal)
Linfadenectomia superficial
Fonte: Adaptado de National Institute Health36
140
Seo de Experimentao
Captulo 6
Agente
Dosagem
Durao da
analgesia
Indicao
Opioides
Buprenorfina
6-12 h
Dor moderada a
severa
Opioides
Butorfanol
2-4 h
Dor moderada a
severa
Opioides
Meperidina
2-3 h
Dor moderada a
severa
Opioides
Morfina
2-5 mg/kg SC
2-4 h
Dor moderada a
severa
AINES
Aspirina (cido
acetilsaliclico)
100 mg/kg VO
4-8 h
AINES
Flunixin meglumine
12 h
AINES
Carprofeno
1,5 mg/kg VO
12 h
AINES
Ibuprofeno
10-30 mg/kg VO
4h
AINES
Acetaminofeno
(paracetamol)
AINES
Cetoprofeno
5 mg/kg VO/IM
Agente
Dosagem
Durao da
analgesia
Indicao
Opioides
Buprenorfina
6-12 h
Dor moderada a
severa
Opioides
Butorfanol
2-4 h
Dor moderada a
severa
Opioides
Meperidina
2-3 h
Dor moderada a
severa
Opioides
Morfina
2-5 mg/kg SC
2-4 h
Dor moderada a
severa
AINES
Aspirina (cido
acetilsaliclico)
120 mg/kg VO
4h
Dor leve a
moderada
AINES
Flunixin
Meglumine
12-24 h
Dor leve a
moderada
AINES
Carprofeno
5 mg/kg SC
24 h
Dor leve a
moderada
AINES
Ibuprofeno
7-15 mg/kg VO
4h
Dor leve a
moderada
AINES
Acetaminofeno
(paracetamol)
Dor leve a
moderada
EUTANSIA
O termo eutansia derivado do grego (eu = bom, thanatos = morte) e significa boa
morte, ou seja, uma morte sem sofrimento. Uma boa morte aquela em que o animal no
sente dor nem angstia53,54.
Na realizao de experimentos cientficos com animais, a eutansia faz-se necessria
no final do experimento ou nas seguintes ocorrncias: ameaa ao bem-estar animal;
impossibilidade de utilizao de medicamentos para aliviar o distresse ou o sofrimento;
ou, ainda, quando o animal constituir ameaa sade pblica ou animal; ou for objeto de
ensino36,51. Na maioria das vezes, a coleta de material biolgico dos animais para anlise
ocorre antes ou aps a eutansia35.
Como os pesquisadores so os responsveis pela eutansia do animal em
142
Seo de Experimentao
Captulo 6
experimentao, seu dever assegurar que estes sejam tratados em todos os momentos
com o mximo de respeito, evitando que tenham uma morte dolorosa e que sejam tomados
por angstia em momentos anteriores morte, antes da perda de conscincia.
As tcnicas de eutansia devem resultar em rpida perda de conscincia, seguida por
parada cardaca ou respiratria e pela perda definitiva da funo cerebral32.
Alm dos cuidados com o bem-estar do animal, devem-se levar em considerao os
efeitos emocionais causados ao operador. As reaes envolvem a dor pela perda de uma
vida, mal-estar, distresse e desconforto. Devem ser buscadas solues para amenizar esse
problema, como rodzio de pessoal, treinamento dos pesquisadores e da equipe tcnica
quanto aos mtodos humanitrios de manejo e eutansia e aos efeitos esperados do mtodo
utilizado, bem como quanto ao motivo pelo qual est sendo realizada a eutansia. Se
necessrio, deve-se fazer acompanhamento psicolgico dos envolvidos, pois a eutansia
de um animal pode fazer a pessoa entrar em conflito com seus princpios ticos e morais35.
Independentemente das circunstncias, o mtodo de eutansia sempre deve ser
selecionado com base em princpios ticos e valores sociais e morais. Esse tema deve
ser sempre revisto e estudado, a fim de buscar as melhores tcnicas e equipamentos para
realizar esse procedimento de forma eficiente e humanitria (Quadro 13).
A regulamentao dos procedimentos de eutansia animal no Brasil se d por meio
da Resoluo do CFMV no 1.000, de 11 de maio de 201251. Essa resoluo determina como
obrigatria a superviso por mdico veterinrio dos procedimentos de eutansia em todas
as pesquisas que envolvam animais. Outra fonte sobre eutansia o AVMA Guidelines on
Euthanasia (Disponvel em: http://www.avma.org).
Quadro 13. Critrios para um mtodo humanitrio de eutansia35,52
Ausncia de sinais de medo, dor ou distresse
Perodo de tempo mnimo para que o animal fique inconsciente
O mtodo deve ser confivel e passvel de reproduo
O mtodo deve ser seguro para o pessoal envolvido
Deve causar o mnimo de efeitos psicolgicos e fisiolgicos ao animal
Deve ser compatvel com as necessidades da pesquisa
No deve causar efeitos emocionais ao operador, ou causar o mnimo de efeitos
Deve trazer o mnimo de impacto sobre o meio ambiente
A manuteno dos equipamentos utilizados deve ser fcil e peridica
Deve ser realizado longe das salas de animais
O operador deve ser experiente na correta conteno e no manejo dos animais
143
Seo de Experimentao
Captulo 6
circunstncia. Entre eles esto tambm os mtodos que envolvem um grande risco
ocupacional para o operador (Quadro 16).
Mtodos adjuvantes: produzem a morte humanitria quando em combinao com
outras tcnicas. Se utilizados isoladamente, so considerados inaceitveis32.
Mtodos aceitos
Ratos e
camundongos
Fonte: Brasil .
51
Mtodos qumicos
Agentes inalantes
Em se tratando de agentes inalantes, h algumas consideraes em comum a serem
observadas, como descrito no Quadro 17. Os agentes inalantes utilizados para eutansia
incluem os gases anestsicos (halotano, enflurano, sevoflurano e isoflurano) e gases no
anestsicos (dixido de carbono, nitrognio, argnio e monxido de carbono). Em ambos
os casos, a eutansia se d com a administrao excessiva do gs escolhido32,52. Quanto
sua utilizao, cada agente apresenta vantagens e desvantagens. Os agentes clorofrmio e
o ter no so mais aceitos como mtodos de eutansia, por causa no somente de seus
riscos potenciais carcinognicos, hepatotxicos e nefrotxicos, no caso do clorofrmio, de
efeitos cumulativos para o funcionrio, mas tambm por suas caractersticas inflamveis e
explosivas, como o caso do ter35.
No Biotrio, utilizado como mtodo qumico com agente inalante o gs dixido de
carbono, ou CO2 (Anexo 6). A inalao de uma concentrao de CO2 a 7,5% aumenta o
limiar de dor, e as concentraes maiores tm efeito anestsico32. A eutansia em cmara
de CO2 um procedimento de eutansia aceito sob restrio em ratos e camundongos51.
o mtodo de eutansia mais comum realizado pelo National Institutes of Health (NIH) em
camundongos, ratos, cobaias e hamsters50.
Quadro 17. Critrios quanto ao uso de agentes inalantes para eutansia
146
Seo de Experimentao
Captulo 6
Agentes no inalantes
A utilizao de agentes farmacuticos injetveis a maneira mais confivel e rpida
para a realizao da eutansia32. A maioria dos agentes anestsicos injetveis aceita
para a eutansia por overdose (administrao do dobro ou triplo da dose anestsica
recomendada)35,52. Entre eles os barbitricos so os mais utilizados, levando primeiro a uma
depresso do sistema respiratrio e depois a parada cardaca, que ocorre quando se atinge
um plano profundo de anestesia35,55.
Se a espcie animal dificulta o acesso venoso para a administrao do agente, pode
ser utilizada a via intraperitoneal, porm com a utilizao de substncia no irritante e que
no tenha ao de bloqueio neuromuscular32.
Na administrao do agente por via intraperitoneal, pode demorar para que o animal
alcance os planos mais profundos de anestesia, assim, deve-se coloc-lo dentro de uma
caixa limpa e em ambiente calmo e silencioso, para minimizar excitao e traumas32.
Mtodos fsicos
Os mtodos fsicos de eutansia aceitveis sob restrio em roedores so o de
deslocamento cervical (ratos com menos de 200 g) e o de decapitao por meio de
guilhotina51. Comparados a outros mtodos de eutansia, so bastante eficientes, porm
esteticamente desagradveis35,53. No entanto, devero ser praticados por tcnicos altamente
capacitados e treinados e com equipamentos adequados, para que o procedimento seja
rpido e humanitrio53,55. Em geral, os mtodos fsicos de eutansia so utilizados quando a
realizao do mtodo qumico interferir de alguma forma nos dados da pesquisa35,52,53.
Deslocamento cervical
Nessa tcnica a morte do animal ocorre ao se aplicar presso na base do seu crnio,
deslocando-lhe a coluna e separando o crnio da medula espinhal35,52,55. Aparentemente, se
praticado por pessoa treinada e com habilidade, um mtodo humanitrio. No entanto, h
poucas referncias na literatura que sustentem essa afirmao32.
Seo de Experimentao
Captulo 6
Para avaliar qual o melhor mtodo de eutansia, deve-se identificar a idade do feto ou
neonato e verificar se os animais sero necessrios ao estudo49 (Quadro 18).
Os animais neonatos so relativamente resistentes hipxia; por isso, antes de levlos eutansia, preciso considerar esse fator, j que os agentes inalantes como o CO2
demoram mais para produzir inconscincia nos neonatos do que nos animais adultos32,35.
Deve-se confirmar a eutansia com um mtodo secundrio fsico49.
No caso dos fetos at o 15o dia de gestao, ainda no h percepo da dor. A partir
do 15o dia da gestao at o nascimento, porm, ocorre o desenvolvimento neural, havendo
a probabilidade de os sinais de dor serem processados bioqumica e neurofisiologicamente49.
No entanto, evidncias recentes implicam que os fetos nessa fase no so sensveis nem
conscientes, sendo, portanto, incapazes de perceber a dor de fato32.
Nessa fase, se os fetos no so necessrios para o estudo, a eutansia da me deve
assegurar a rpida anxia cerebral dos fetos. O mtodo recomendado de eutansia da me
o de exposio ao CO2, seguido de deslocamento cervical, decapitao ou pneumotrax
bilateral. Se os fetos so necessrios ao estudo, no caso de fixao de tecidos e eutansia
por congelamento, o feto deve ser previamente anestesiado49.
Para mais informaes a respeito de eutansia de fetos e neonatos, consultar
Guidelines for the Euthanasia of Rodent Feti and Neonates. Disponvel em: http://oacu.od.nih.
gov/ARAC/documents/Rodent_Euthanasia_Pup.pdf.
149
15 dias at o
nascimento
Neonatos
At 10 dias de
idade
Mais de 10 dias de
idade
150
Seo de Experimentao
Captulo 6
REFERNCIAS
1. Brasil. Ministrio da Cincia e Tecnologia. Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio).
Instruo Normativa n7, Normas para o trabalho em conteno com organismos geneticamente
modificados-OGMs. Dirio Oficial da Repblica Federativa do Brasil. Braslia, 9 jun. 1997, seo 3,
p. 11833.
2. Marques N, Menna-Barreto L. Cronobiologia: princpios e aplicaes. 3a ed. So Paulo: Editora da
Universidade de So Paulo; 1999. 448p.
3. Clough G. The animal house: design, equipment and environmental control. In: Poole T. The UFAW
handbook on the care and management of laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science;
2006. v.1, p.97-136.
4. Brasil. Conselho Nacional de Sade. Resoluo no 1 de 1988, art. 64. Disponvel em: http://conselho.
saude.gov.br/resolucoes/reso_88.htm.
5. National Research Council. Guide for the care and use of laboratory animals. 7th ed. Washington:
The National Academies Press; 2010.
6. Brasil. Ministrio do Meio Ambiente. Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). Resoluo
no 358 de 2005 [citado 24 set. 2012]. Disponvel em: http://www.mma.gov.br/port/conama/res/res05/
res35805.pdf.
7. Federation of European Laboratory Animal Science Associations (FELASA). Felasa recommendations
for the education and training of persons working with laboratory animals: categories A and C. Lab
Anim. 1995:29:121-31.
8. Brasil. Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio). Resoluo Normativa no 2, de 27
de novembro de 2006. Disponvel em: http://www.ctnbio.gov.br/index.php/content/view/3913.html.
9. Torrallardona AV. Armonizacin y estandarizacin. Buenas prcticas de laboratrio (BPL). In: Ziga
JM, Mar JAT, Milocco SN, Pieiro R. Ciencia y tecnologa en proteccin y experimentacin animal.
Madrid: Mcgraw - Hill Interamericana; 2001. p.629-42.
10. Brasil. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Critrios para a habilitao de
laboratrios segundo os princpios das boas prticas de laboratrio (BPL). Braslia; 2001. Disponvel
em: http://www.anvisa.gov.br/reblas/procedimentos/GGLAS_02_bpl.pdf.
11. Brasil. Decreto no 5.591 de 22 de novembro de 2005. Disponvel em: https://legislacao.planalto.gov.
br/LEGISLA/Legislacao.nsf.
12. Neves SMP, Chaguri LCAG, Fontes RSF, Ong FMP. Biossegurana em biotrios. In: Hirata MH,
Hirata RDC, Mancini, Filho JM.Manual de biossegurana.2a ed. Barueri: Manole; 2012. p.193-211.
13. Brasil. Ministrio do Trabalho. Portaria no 25 (NR-6). Disponvel em: http://portal.mte.gov.br/
legislacao/portaria-n-25-de-15-10-2001.htm.
14. Molinaro EM, Majerowicz J, Valle S. Biossegurana em biotrios. Rio de Janeiro: Intercincia; 2007.
236p.
151
15. Botahm PA, Davies GE, Teasdale EL. Allergy to laboratory animals: a prospective study of its
incidence and of the influence of atopy on its development. Brit J Ind Med.1987;44:627-32.
16. Carissimi, AS, Chaguri LACG, Teixeira MA, Mori CMC, Macchione, M, Anna ETYGS, Saldiva, PHN,
Souza, NL, Merusse JB. Effects of two ventilation systems and bedding change frequency on cage
environmental factors in rats (Rattus norvegicus). Animal Technol. 2000;51(3):161.
17. Andersen ML, DAlmeida V, Ko GM, Kawakami R, Martins PJF. Procedimentos experimentais. In:
Andersen ML, DAlmeida V, Ko GM, Kawakami R, Martins PJF. Princpios ticos e prticos do uso
de animais de experimentao. So Paulo: UNIFESP Universidade Federal de So Paulo; 2004.
p. 45-70.
18. National Research Council. Guide for the care and use of laboratory animals. 8th ed. Washington:
The National Academies Press; 2011. 248p. Disponvel em: http://oacu.od.nih.gov/regs/guide/
guide.pdf.
19. Diehl HR, Morton D, Pfister R, Rabemampianema Y, Smith D, Vidal JM, Van de Vorstenbosch CA.
A Good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routs
and volumes. J Appl Toxical. 2001;21:15-23.
Seo de Experimentao
Captulo 6
31. FELASA. Recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit
breeding colonies. 1999.
32. American Veterinary Medical Association (AVMA). Report of the AVMA Panel on euthanasia. JAVMA.
2007;218(5).
33. Rivera EAB. Analgesia em animais de experimentao. In: Andrade A, Pinto SC, Oliveira RS.
Animais de laboratrio: criao e experimentao. Rio de Janeiro: Fiocruz; 2002. p. 247-53.
34. Ness RD. Rodents. In: Carpenter JW. Exotic animal formulary. 3rd ed. United States of America:
Elsevier Saunders; 2005. p. 377-408.
35. Rivera EAB. Analgesia, anestesia e eutansia em roedores, lagomorfos, ces e sunos. In: Feij
AGS, Braga LMGM, Pitrez PMC. Animais na pesquisa e no ensino: aspectos ticos e tcnicos. Porto
Alegre: EdiPUCRS; 2010. p. 198-216.
36. National Institute of Health (NIH). Guidelines for Pain and Distress in Laboratory Animals:
Responsibilities, Recognition and Alleviation. Issuing Office: OACU; 2010. Available from: http://
oacu.od.nih.gov/ARAC/documents/Pain_and_distress.pdf.
37. University of South Florida. Division of Comparative Medicine. Guidelines on anesthesia and
analgesia in laboratory animals. Available from: http://www3.research.usf.edu/cm/references.asp
38. Andersen ML, Souza MC. Estresse e suas interferncias. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM.
Cuidados e manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p. 517-36.
39. Medrazi TJ; Tomz VA; Amaral VLL. Anestesia e analgesia em animais de laboratrio. In: Medrazi TJ;
Tomz VA; Amaral VLL. Animais de laboratrio: Cuidados na iniciao experimental. Florianpolis:
Editora da UFSC; 2004. p. 101-30.
40. Pritchett-Corning KR, Mulder GB, Luo Y, White WJ. Principles of rodent surgery for the new surgeon.
J Vis Exp. 2011;(47):e2586. DOI: 10.3791/2586.
41. Sharp PE, La Regina MC. Veterinary care. The laboratory rat. Florida: Crc Press LLC; 1998. p. 75137.
42. Suckow MA, Danneman P, Brayton C. Veterinary care. The laboratory mouse. Florida: Crc Press
LLC; 2011. p. 51-120.
43. Koolhaas JM. The laboratory rat. In: Poole T. The UFAW handbook on the care and management of
laboratory animals. 7th ed. British: Blackwell Science; 2006. v.1, p. 313-30.
44. Rivera EAB. Anestesia em animais de laboratrio. In: Andrade A, Pinto SC, Oliveira RS. Animais de
laboratrio: criao e experimentao. Rio de Janeiro: Fiocruz, 2002. p. 255-62.
45. Hickman DL, Swan M. Use of a body condition score technique to assess health status in a rat
model of polycystic kidney disease. J Am Assoc Lab Animal Sci, Indiana. 2010;49(2):155-9
[cited 2010 May 1]. Available from: http://aalas.publisher.ingentaconnect.com/content/aalas/
jaalas/2010/00000049/00000002.
46. Ullman-Culler MH, Foltz CJ. Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing
health status in mice. Lab Animal Sci, Massachusetts. 1999;49(3):319-23.
153
47. Rivera EAB. Estresse em animais de laboratrio. In: Andrade A, Pinto SC, Oliveira RS. Animais de
laboratrio: criao e experimentao. Rio de Janeiro: Fiocruz; 2002. p. 263-273.
48. Pompeu E. Analgesia e anestesia. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM. Cuidados e manejo de
animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p. 561-74.
49. National Institute of Health (NIH). Guidelines for the euthanasia of rodent feti and neonates. Issuing
Office: OACU, 2011. Available from http://oacu.od.nih.gov/ARAC/documents/Rodent_Euthanasia_
Pup.pdf
50. National Institute of Health (NIH). Guidelines for euthanasia of rodents using carbon dioxide. Issuing
Office: OACU, 2010. Available from: http://oacu.od.nih.gov/ARAC/documents/Rodent_Euthanasia_
Adult.pdf.
51. Brasil. Conselho Federal de Medicina Veterinria (CFMV). Resoluo no 1000. Braslia, 11 de maio
de 2012. Disponvel em: http://www.cfmv.org.br.
52. Andersen ML, DAlmeida V, Ko GM, Kawakami R, Martins PJF.Eutansia. In: Andersen ML,
DAlmeida V, Ko GM, Kawakami R, Martins PJF. Princpios ticos e prticos do uso de animais de
experimentao. So Paulo: UNIFESP Universidade Federal de So Paulo; 2004. p. 71-9.
53. Lapchik VBV, Mattaraia VGM. Finalizao humanitria. In: Lapchik VBV, Mattaraia VGM, Ko GM.
Cuidados e manejo de animais de laboratrio. So Paulo: Atheneu; 2009. p. 603-15.
54. Majerowicz J. Boas prticas em biotrios procedimentos operacionais em biotrios. Boas prticas
em biotrios e biossegurana. Rio de Janeiro: Intercincia; 2008. 175p.
55. Drazi TJ, Tomz VA, Amaral VLL. Eutansia animal. In: Medrazi TJ, Tomz VA, Amaral VLL. Animais
de laboratrio: cuidados na iniciao experimental. Florianpolis: Editora da UFSC; 2004. P. 131139.
154
Captulo 7
Controle Nutricional
Silvnia M. P. Neves
Flavia M. P. Ong
Introduo
Avaliao nutricional das raes comerciais
Referncias
INTRODUO
O estado nutricional do animal de laboratrio influencia sua capacidade para atingir seu
potencial gentico de crescimento, de longevidade, de reproduo, bem como sua resposta
a patgenos e a outros tipos de estresse ambiental. Uma dieta balanceada, de formulao
conhecida e reprodutvel, garante no s o bem-estar dos animais, mas tambm a qualidade
dos resultados dos experimentos conduzidos com esses animais1.
A dieta de animais de laboratrio deve ter cerca de 50 nutrientes em concentrao
adequada, que atendam s necessidades nutricionais do animal, alm de ser livre de
substncias txicas ou microrganismos patognicos2.
As formulaes das dietas so classificadas de acordo com o grau de refinamento
de seus ingredientes, em dietas quimicamente definidas ou puras, dietas purificadas e dietas
com ingredientes naturais (rao comercial)1,2.
A dieta quimicamente definida formulada diretamente base de nutrientes essenciais,
como aminocidos, steres de cidos graxos, glicose, vitaminas e sais minerais. Na seleo
155
Captulo 7
Controle Nutricional
o que afeta a qualidade dos experimentos. Dessa forma, o Biotrio, em conjunto com o
Laboratrio de Nutrio e Minerais da FCF-USP, realiza a avaliao nutricional das raes
comerciais utilizadas, com o objetivo de definir o padro de identidade e qualidade, por meio
de estudos comparativos das diferentes marcas de raes comerciais (A, B e C), disponveis
para ratos e camundongos, utilizando como controle uma dieta base de casena (P). So
realizadas anlises de composio centesimal (Tabela 1), minerais (Tabela 2) e de vitaminas,
estas ltimas feitas no Instituto Adolfo Lutz e no Instituto de Tecnologia de Alimentos (Ital)
(Tabela 3). Os ensaios biolgicos envolvem a avaliao da qualidade da protena in vivo, pela
determinao do coeficiente de digestibilidade (Tabela 4), que indica a proporo de alimento
ingerido que digerido e absorvido pelo organismo do animal.
Tabela 1. Anlise da composio centesimal (%) de raes comerciais para ratos e camundongos de
diferentes marcas existentes no mercado nacional
Rao
Umidade
Protenas
Lipdios
Fibras
111,05
190,50
40,13
19
120,35
220,57
40,17
20
110,99
220,82
40,23
32
P(*)
120,04
190,5
70,1
19,3
20
AIN 93G(ref.)
NRC (ref.)
(*) Dieta-padro AIN 93G.
Tabela 2. Anlise da composio de minerais (mg/kg) de raes comerciais para ratos e camundongos
de diferentes marcas existentes no mercado nacional
Rao
Fe
Zn
Cu
101335
154 8
260,86
98931
991,2
351,00
92818
103 2,1
190,78
P(*)
450,3
380,4
6,00,9
AIN 93G(ref.)
35
30
NRC (ref.)
35
30
157
Tabela 3. Anlise de vitaminas de raes comerciais para ratos e camundongos, esterilizadas pelos
processos de calor mido (autoclave) e irradiao gama
A
B1
B2
B3
B12
(UI/kg)
(UI/kg)
(mg/kg)
(mg/kg)
(mg/kg)
(g/kg)
949
153
5,9
13,5
33
66
A1
1.030
213
3,6
15,2
44
60
2.333
255
7,2
15,2
33
79
P(*)
4.000
75
5,0
6,0
30
25
Rao
Tabela 4. Avaliao nutricional de diferentes marcas de raes comerciais para ratos e camundongos
Rao
Protenas (%)
Coeficiente de digestibilidade
(%)
230,61
801,7
230,57
752,8
211,20
721,1
P(*)
240,5
950,3
Controle Nutricional
Captulo 7
Protena bruta
4% (mn.) a 5% (mx.)
5% (mn.) a 8% (mx.)
Umidade
Mxima 12,5%
Ferro
Zinco
Cobre
Clcio
Fsforo
Vitamina A
Aditivos
Antioxidantes 100,00 mg
159
REFERNCIAS
1. NRC. National Research Council. Board on Agriculture. Committee on Animal Nutrition.
Subcommittee on Laboratory Animals. Nutriente requeriments of laboratory animals. 4th ed. rev.
1995.
2. Coates ME, editor. ICLAS guidelines on the selection and formulation of diets for animals in
biomedical research. London: Institute of Biology; 1987.
3. Reeves PG, Nielsen FH, Fahey GC Jr. AIN 93 purified diets for laboratory rodents: final report of
the American Institute of Nutrition ad hoc writing committee on the reformulation of the AIN 76A
rodent diet. J Nutr. 1993;123:1939-51.
4. Knapka JJ. Nutrition. In: Foster HL, Small JD, Fox JG, editors. The biomedical reserch. New York:
Academic Press; 1983. v.3, p.51-67.
5. Neves SP, Damy SB, Coli C, Tolosa EMC. Esterilizao de rao para animais de laboratrio por
irradiao gama. Controle de Contaminao. 2005; fev. 36-8.
160
Anexos
Anexos
Smbolo
Significado
Smbolo
Significado
Smbolo
Significado
Processo; Execuo de
operaes
Ponto de deciso
Operao manual
Operao
163
Smbolo
164
Significado
Smbolo
Significado
Smbolo
Significado
Processo; Execuo
de operaes
Ponto de deciso
Operao manual
Operao
Anexos
Objetivo:
Esse POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas na seo de higienizao e esterilizao do Biotrio de Experimentao da Faculdade
de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se operao da mquina de lavar gaiolas, presente na seo de higienizao e
esterilizao do BPE FCF-IQ/USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
1 Seo de higiene e esterilizao
165
166
Anexos
Objetivo:
Esse POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas
na seo de higiene e esterilizao do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se operao das autoclaves, presentes na seo de higiene e esterilizao do BPE
FCF-IQ/USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
1 Seo de higiene e esterilizao
password (*****);
2. No visor, selecionar a funo menu;
3. Selecionar a funo partida;
4. Selecionar no visor o ciclo a ser realizado (GUA, TAMPA, CAIXAS ou MARAVALHA)
e confirmar selecionando a seta verde para a direita;
5. Conferir no visor os parmetros do ciclo selecionado e pressionar OK;
6. Selecionar a seta verde para a direita;
7. Selecionar a opo OK;
8. Aguardar a execuo do ciclo de esterilizao.
1.2.3 Procedimentos para desligar a mquina:
1. Aps a finalizao do ciclo, pressionar no visor a opo OK;
2. Aguardar aproximadamente 15 segundos para o destravamento da porta;
3. Girar, no painel da autoclave, a chave geral na posio 0, desligando a autoclave;
4. No fim do expediente, aps o ltimo ciclo de esterilizao, arquivar no caderno de
registro de esterilizao os registros impressos dos ciclos realizados;
5. Desligar o sistema de osmose reversa apertando os dois botes vermelhos para
baixo;
6. Desligar os dois compressores posicionando as chaves vermelhas para cima.
Maravalha e roupas
Caixas, roupas
gua, luvas
Tampas
168
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas
no Biotrio da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao descarte de resduos biolgicos gerados pelo BPE FCF/IQ USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
1- Seo de higiene e esterilizao
169
170
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas
na seo de higiene e esterilizao do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo
(BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se aos procedimentos de eutansia de camundongos, ratos e coelhos. Os procedimentos de eutansia so realizados na seo de higiene e esterilizao do BPE FCF-IQ/
USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
1 Seo de higiene e esterilizao
Cetamina 10%
(35mg/kg)
Xilazina 2%
(5mg/kg)
2,5 kg
0,88 mL
0,63 mL
3,0 kg
1,05 mL
0,75 mL
3,5 kg
1,23 mL
0,88 mL
4,0 kg
1,40 mL
1,00 mL
4,5 kg
1,58 mL
1,13 mL
5,0 kg
1,75 mL
1,25 mL
172
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades de rotina executadas na seo de higienizao e esterilizao do Biotrio de Produo e Experimentao da
Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So
Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se introduo dos sacos de rao para roedores de laboratrio na seo de
Produo do BPE FCF-IQ/USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
1 Seo de higiene e esterilizao
174
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas pelos funcionrios antes de iniciar as atividades de rotina na seo de
produo de ratos e camundongos.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos para acesso seo de produo do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto
de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
SPF Specified Pathogen Free
2- Seo de produo
1.1 Banho:
1. Retirar o avental e coloc-lo no cabide da antecmara (fora do vestirio);
2. Retirar os sapatos e guard-los na sapateira (fora do vestirio);
3. Colocar o chinelo que se encontra na sapateira;
4. Ao entrar no vestirio, despir-se e guardar a roupa no armrio;
5. Retirar todos os pertences como: joias, relgios, celular e outros objetos;
6. Tomar o banho com touca e utilizar o sabonete lquido fixado na parede do boxe;
7. No caso das mulheres, retirar toda a maquiagem durante o banho.
8. Sair do outro lado do boxe e utilizar uma toalha limpa e esterilizada.
175
176
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina na sala de preparo
de material.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina realizados na sala de preparo de
material na seo de produo do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade
de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
SPF Specified Pathogen Free
178
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina em salas de
produo de ratos e camundongos.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina na seo de produo do Biotrio
de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de
Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
SPF Specified Pathogen Free
2.5 Troca das gaiolas sujas de animais:
1. Transportar as gaiolas limpas da sala de estoque de material para a sala de animais
atravs do corredor para fluxo de material limpo;
2. Colocar uma gaiola limpa em cima do carrinho auxiliar;
3. Retirar da estante a gaiola suja a ser trocada e coloc-la no carrinho auxiliar, ao lado
da gaiola limpa;
4. Verificar a ficha de registro da gaiola, observando nascimentos, desmames e
quantidade de animais na gaiola;
5. Retirar o bebedouro e coloc-lo em carrinho para bebedouros usados que sero
encaminhados para a seo de higiene e esterilizao;
6. Retirar a grade da gaiola suja e apoi-la na gaiola limpa que vai substitu-la;
7. Transportar os animais cuidadosamente para a gaiola limpa, manuseando-os
individualmente.
179
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina em salas de
produo de camundongos mantidos em racks ventilados.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina na seo de produo do Biotrio
de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de
Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2 Seo de produo
SPF Specified Pathogen Free
IVC Individually Ventilated Cage
2.8 Procedimentos com a estao de troca:
1. Ligar a estao de troca e aguardar 15 minutos para a estabilizao da rea de trabalho;
2. Aguardar a finalizao do indicativo sonoro, emitido durante a estabilizao do campo,
para iniciar as atividades na estao de troca;
3. Realizar a descontaminao da rea de trabalho com lcool 70%;
4. Ligar a iluminao da estao de troca;
5. Realizar todo o procedimento dentro da rea de trabalho;
181
6. Caso algum objeto ou animal seja manuseado fora da rea de trabalho, ser emitido
o indicativo sonoro.
2.9 Troca das gaiolas sujas de animais:
1. Transportar as gaiolas limpas da sala de estoque de material para a sala de animais
atravs do corredor para fluxo de material limpo;
2. Colocar uma gaiola limpa na estao de troca;
3. Retirar uma gaiola suja a ser trocada do rack ventilado e coloc-la na estao de troca;
4. Retirar a tampa-filtro da gaiola limpa, sem tocar na parte interna da tampa, e apoi-la
dentro da estao de troca com o fundo virado para cima;
5. Retirar a tampa-filtro da gaiola suja sem tocar na parte interna da tampa;
6. Descontaminar as luvas com lcool 70%;
7. Abrir a grade da gaiola suja mantendo-a apoiada na caixa;
8. Retirar o bebedouro e coloc-lo em carrinho para bebedouros usados que sero
encaminhados para a seo de higiene e esterilizao;
9. Abrir a grade da gaiola limpa mantendo-a apoiada na caixa;
10. Descontaminar as luvas com lcool 70%;
11. Transportar os animais cuidadosamente para a gaiola limpa, manuseando-os
individualmente, sem tocar na parte externa das gaiolas;
12. Verificar a ficha de registro da gaiola, observando nascimentos, desmames e
quantidade de animais na gaiola;
13. Visualizar os animais durante o manuseio, verificando se apresentam sinais de doena
ou qualquer alterao que possa comprometer a sua reproduo ou causar-lhes dor
e desconforto;
14. Identificar o sexo dos neonatos se houver nascimentos e registrar na ficha da gaiola
a data do parto, o nmero de filhotes nascidos e a quantidade de machos e fmeas;
15. Descontaminar as luvas com lcool 70%;
16. Fechar a grade da gaiola limpa;
17. Abastecer a gaiola com gua e rao;
18. Fechar a gaiola com a tampa-filtro;
19. Retirar a gaiola suja da estao de troca;
20. Retornar a gaiola limpa com os animais ao local de onde foi retirada da estante
ventilada;
21. Registrar qualquer ocorrncia no relatrio de ocorrncias da colnia que se encontra
em cada sala de produo;
22. Repetir os procedimentos acima para todas as gaiolas existentes na sala;
23. Descontaminar as luvas antes de manusear qualquer material limpo aps ter
manipulado material sujo ou a parte externa das gaiolas;
24. Aps o trmino da troca das gaiolas, verificar se todas as gaiolas esto abastecidas
com gua e rao;
182
Anexos
25. Transportar, pelo corredor de fluxo de material sujo, o carrinho com bebedouros
usados e as gaiolas sujas at o air-lock, de onde sero transferidas para a seo de
higiene e esterilizao por um funcionrio dessa seo;
26. Verificar se as vlvulas das gaiolas esto conectadas corretamente nos difusores da
estante;
27. Observar a saturao dos filtros do rack ventilado pelo indicativo luminoso no painel.
2.10 Limpeza da sala:
1. Materiais:
Rodo
Caixa de polipropileno
Pano prprio para o rodo
Pano para limpeza de carrinhos auxiliares
Soluo de hipoclorito de sdio a 0,5%
lcool 70%
2. Procedimentos para a limpeza das salas:
a) Realizar a limpeza com cuidado, evitando rudos e procedimentos que possam
causar estresse aos animais;
b) Descontaminar o carrinho auxiliar com lcool 70%;
c) Limpar e descontaminar o piso da sala com o auxlio de um rodo e pano apropriado
embebido na soluo de hipoclorito de sdio a 0,5%, realizando uma varredura
mida.
183
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados por todos os funcionrios responsveis por colnias isognicas na seo de
produo do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se manuteno de colnia de ratos e camundongos isognicos, a fim de garantir o
padro gentico.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
184
Anexos
185
186
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados por todos os funcionrios responsveis por colnia heterognica na seo de
produo do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se manuteno de colnia de ratos e camundongos heterognicos, a fim de garantir o padro gentico.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
2.16 Sistema de acasalamento para a colnia de fundao:
1. A colnia fundadora deve ser mantida apenas mediante acasalamentos entre
indivduos no aparentados;
2. Utilizar o sistema descrito por Poiley (1960), que distribui os casais em grupo e, assim,
os acasalamentos so feitos entre indivduos de grupos diferentes;
3. Utilizar o sistema de acasalamento monogmico intensivo;Devem ser mantidos no
mnimo 25 casais divididos em no mnimo 5 grupos;
4. Manter os casais juntos at o fim da vida reprodutiva;
5. Aps seis meses da data de acasalamento, os casais devem ser renovados;
6. Reservar os filhotes de todos os casais para perpetuao da linhagem. Estes sero
os futuros reprodutores da colnia de fundao.
187
Grupo a formar
Machos
Fmeas
188
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados por todos os funcionrios responsveis por colnias de ratos que necessitem da
realizao de acasalamentos programados na seo de produo do Biotrio de Produo
e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da
Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao sistema de acasalamento programado utilizado na expanso de colnia de ratos
para a entrega programada de lotes de animais com exigncia de peso e data definida.
Siglas:
So usadas no texto deste Pop as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
190
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados para a manuteno da colnia de ratos SOD1 na Seo de produo do Biotrio
de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de
Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se colnia de ratos SOD1, modelo geneticamente modificado, com a finalidade de
garantir as caractersticas do modelo animal.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
Anexos
animal;
e) Armazenar os eppendorfs com as amostras de tecido em gelo seco e envi-los para
o laboratrio onde ser realizada a genotipagem.
3. Recebimento do resultado da genotipagem
a) Selecionar os filhotes de acordo com o gentipo: ALS positivos e negativos, mantendo
a numerao e a origem (nmero dos pais);
b) Separar os filhotes selecionados para reproduo e fornecimento conforme solicitao
dos pesquisadores, mantendo a ateno para no agrupar animais com a mesma
marcao em uma mesma gaiola.
2.24 Renovao da colnia:
1. Utilizar dez machos ALS positivos e dez fmeas SD wild nascidos na mesma poca.
As datas dos nascimentos dos filhotes de SOD1 com filhotes de SD precisam coincidir,
para posteriormente serem acasalados entre si, programando as duas colnias em
paralelo.
2. Seleo dos futuros reprodutores (2.19).
3. As fmeas e os machos que no sero futuros reprodutores, ALS positivos e negativos,
sero destinados a pesquisa.
2.25 Procedimentos para a realizao do acasalamento:
1. Separar o material necessrio para o acasalamento (caixas, grades, fichas de
registro);
2. Realizar acasalamentos na proporo de uma fmea para um macho;
3. Colocar primeiramente o macho na gaiola;
4. Colocar a fmea na gaiola com o macho;
5. Registrar na ficha de identificao de cada gaiola: o tipo de colnia, a linhagem, a
data de nascimento do macho e das fmeas, a data do acasalamento e a proporo
de fmeas por macho;
6. Aps o nascimento das ninhadas, realizar a sexagem dos filhotes e registrar na ficha
da gaiola a data de nascimento e o nmero de machos e fmeas nascidos;
7. Aos 21 dias de idade, desmamar os filhotes e separ-los por sexo, mantendo cinco
animais/gaiola (ver seo 2.19 item 8);
8. Fornecer os animais assim que o grupo de pesquisadores obtiver o resultado da
genotipagem e/ou os animais atingirem a idade solicitada.
193
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece procedimentos que devem ser
aplicados para a manuteno da colnia de camundongos P2-GFP na seo de produo
do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do
Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se colnia de camundongos P2-GFP, modelo geneticamente modificado, com a
finalidade de garantir as caractersticas do modelo animal.
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
2.26 Manuteno da colnia de fundao:
1. Manter a colnia por meio de acasalamentos entre machos heterozigotos com
fmeas heterozigotas;
2. Manter a colnia seguindo os procedimentos para camundongos isognicos (seo
2.8 a 2.12);
3. O desmame dos filhotes deve ser feito pelo nmero dos pais individualmente, e todos
os animais devem ser identificados com o auxlio de um furador de orelha, seguindo
a numerao da ltima gerao;
4. Genotipar todos os filhotes para identificar a expresso do gene (homozigoto GFP;
homozigoto 17 ou heterozigoto);
194
Anexos
195
Seo: 2.29
Data:
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem
ser aplicadas pelos funcionrios envolvidos em atividades de rotina em salas de produo de
ratos e camundongos.
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de higienizao de salas de produo, estoque, corredores e air-locks do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade de
Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da USP (BPE FCF-IQ/USP).
Siglas:
So usadas no texto deste POP as seguintes siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
2- Seo de produo
Anexos
197
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todo o pessoal (funcionrios, pesquisadores e alunos) envolvidos
em atividades de rotina dos animais que necessitem ser executadas nas dependncias
da seo de experimentao do Biotrio de Produo e Experimentao da Faculdade
de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE
FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de rotina do setor de experimentao do
BPE da FCF-IQ/USP.
Siglas:
POP - Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
3- Seo de experimentao
Anexos
200
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem ser aplicadas por todos os funcionrios envolvidos em atividades que necessitem ser
executadas na seo para animais holoxnicos (coelhos).
Aplicao:
Aplica-se manuteno de experimentos com coelhos.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
3- Seo de experimentao
201
3.6 Antgeno:
1 Deve ser o mais purificado possvel, contendo apenas os eptopos desejados, para
produzir anticorpos de maior especificidade;
2 Deve estar livre de toxicidade para o animal (lipopolissacardeos e resduos qumicos);
3 Deve ter pH fisiolgico e estar estril;
4 Deve estar nas concentraes adequadas. Para coelhos, a concentrao correta de
50-1.000 ug.
3.7 Adjuvante:
1 O Adjuvante Completo de Freund (ACF), composto de uma emulso de gua em leo
adicionada de Mycobacterium SP, deve ser evitado. Caso seja necessrio, deve ser
utilizado apenas na primeira imunizao, e o Adjuvante Incompleto de Freund (AIF),
nas imunizaes subsequentes.
2 Aps o uso do adjuvante de Freund, recomendado:
- Limitar a concentrao de Mycobacterium para 0,05 a 0,1mg/mL;
- Adicionar antgeno concentrado ao adjuvante e, desse modo, reduzir o volume de
emulso a ser inoculada;
- Manter a esterilidade da soluo antignica.
3 Alternativas ao ACF devem ser consideradas, por produzirem respostas inflamatrias
menos intensas e apresentarem resposta imunolgica equivalente com menor
destruio de tecidos e granulomas. Veja alguns exemplos a seguir:
- TiterMax ou TiterMax Gold (CytRx, Norcross, GA);
- Ribi Adjuvant System (RAS Corixa Corporation, Seattle, WA);
- Syntex Adjuvant Formulation (SAF, SAF-1, SAF-m Charion Corporation, Emeryville,
CA);
- Gerbu Adjuvants (GERBU Biochemicals GmbH, Gaiberg, Germany);
- Immune-Stimulating Complexes (ISCOMs);
- Aluminum Salt Adjuvants.
3.8 Coleta de sangue pela veia auricular:
1. Com o animal imobilizado na caixa de conteno, realiza-se a dilatao do vaso com
uma luz infravermelha. Aps a dilatao, fazer assepsia com lcool 70% e introduzir a
agulha no vaso central ou no vaso marginal;
2. Para o pr-imune e nas coletas somente para verificao das quantidades de
anticorpos, so coletados de 3 mL a 5 mL;
202
Anexos
3. Para a coleta final em que o coelho ser submetido a eutansia, coloca-se o animal na
caixa de conteno e realiza-se a dilatao do vaso com uma luz infravermelha. Aps
a dilatao, fazer assepsia com lcool 70% e introduzir a agulha no vaso central ou
no vaso marginal; so coletados de 30 mL a 40 mL. Aps a coleta de sangue final, o
animal ser submetido a eutansia, como descrito no item 3.12.
203
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que devem ser aplicadas por todos os funcionrios e pesquisadores envolvidos em atividades de
rotina executadas na seo de experimentao do Biotrio de Produo e Experimentao
da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So
Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se aos procedimentos de anestesia inalatria com isoflurano em camundongos e
ratos realizados na seo de experimentao do BPE FCF/IQ USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
3- Seo de experimentao
Anexos
Captulo 8
Anexos
Captulo 8
3.16 Recuperao da anestesia (o perodo vai variar de acordo com o grau de invasividade
do procedimento realizado e a durao da anestesia):
1. Colocar o animal em uma gaiola individual com papel limpo e sem maravalha (para
prevenir danos por aspirao ou morte);
2. Manter o animal aquecido (usando uma lmpada de infravermelho, bolsa de gua
quente ou plstico-bolha);
3. Monitorar o animal at que fique consciente, sendo capaz de manter a postura corporal
normal e realizar suas funes fisiolgicas normais (beber gua, comer, defecar etc.);
4. Aps procedimentos cirrgicos invasivos, se necessrio repor as perdas hdricas
(conforme item 1.9) e continuar com o protocolo analgsico indicado para o caso
(deve ser iniciado antes da realizao da cirurgia quando a anestesia inalatria);
5. Facilitar o acesso do animal aos pellets de rao e ao bebedouro com gua;
6. Colocar o animal de volta sua gaiola original e retorn-lo sala de animais;
7. Monitorar o animal nos dias subsequentes at quando for necessrio quanto a peso,
temperatura corporal, postura e comportamento indicativo de dor, ingesto de gua e
alimento, lambedura no local cirrgico etc., avaliando a recuperao e determinando
at quando administrar o analgsico de escolha.
3.17 Fluidoterapia:
1. Calcular a quantidade de fluido a ser reposta (aproximadamente 10 mL/kg/hora);
2. Administrar fluidos aquecidos (exemplo: soluo salina estril) por via subcutnea ou
intraperitoneal. Se o animal j estiver totalmente consciente, administrar por via oral;
3. Estimar o grau de desidratao, monitorando o peso do animal antes e aps o
procedimento.
208
Anexos
Objetivo:
Este POP fixa condies, padroniza, define e estabelece regras e recomendaes que
devem ser aplicadas por todo o pessoal (funcionrios, pesquisadores e alunos) envolvido
em atividades de coleta de sangue de ratos, via puno cardaca, que necessitem ser
executadas nas dependncias da seo de experimentao do Biotrio de Experimentao
e Produo da Faculdade de Cincias Farmacuticas e do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (BPE FCF-IQ/USP).
Aplicao:
Aplica-se ao conhecimento dos procedimentos de coleta de sangue via puno cardaca em
ratos da seo de experimentao do BPE da FCF-IQ/USP.
Siglas:
POP Procedimento Operacional Padronizado
BPE Biotrio de Produo e Experimentao
3- Seo de experimentao
3.18 Utilizao da tcnica:
1- Uso da puno cardaca como coleta de sangue terminal, realizada no animal sob
anestesia profunda;
2- Realizada quando for necessrio retirar grandes volumes de sangue (cerca de 10 mL
de um rato de 150 g);
3- Utilizada na obteno de amostra de sangue arterial e venoso (misto).
3.19 Procedimentos para anestesia profunda dos animais:
1- Conteno para a administrao da anestesia injetvel via intraperitoneal (IP):
a- Apoiar a mo delicadamente sobre o dorso do animal e envolv-la abaixo dos
membros anteriores do animal. Se necessrio, segurar os membros posteriores.
Essa tcnica pode ser realizada tanto dentro da gaiola como em cima da grade;
209
Anexos
PROTOCOLO EXPERIMENTAL
1. Identificao do experimento
1.1.
Ttulo do projeto:
_________________________________________________________________________
1.2 Finalidade acadmica:
Pesquisa ( )
Ensino ( )
2. Equipe
Pesquisador responsvel: ____________________________________________________
Aluno responsvel: _________________________________________________________
Colaboradores: ____________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Unidade/bloco:_____________________________________________________________
Ramal/USP:_______________________________________________________________
Tel. emergncia:____________________________________________________________
E-mail: ___________________________________________________________________
2.1 Qualificao da equipe quanto a experincia e treinamentos anteriores:
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
2.1.1 O pesquisador (alunos envolvidos) necessita de treinamento?
_________________________________________________________________________
2.2 Perodo do experimento:
Incio ____/___/_____
Trmino ____/___/____
( ) Camundongo
( ) Fmea
3. Procedimentos experimentais
Jejum: ( ) Sim ( ) No ____________________________________________________
Perodo de restrio_________________________________________________________
211
212
Anexos
PROTOCOLO EXPERIMENTAL
1. Identificao do experimento
1.1. Ttulo do projeto:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
1.2 Finalidade acadmica:
Pesquisa ( )
Ensino ( )
2. Equipe
Pesquisador responsvel: ____________________________________________________
Aluno responsvel: _________________________________________________________
Colaboradores: ____________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Unidade/bloco:______________________________________________________________
Ramal USP:_______________________________________________________________
Tel. emergncia: ____________________________________________________________
E-mail: ___________________________________________________________________
2.1 Perodo do experimento:
Incio ____/___/_____
Trmino ____/___/____
213
214
Anexos
Aluno(a):
Orientador(a):
Laboratrio/departamento:
Projeto:
E-mail:
216