PONTIFCIA UNIVERSIDADE CATLICA DE GOIS PUCGO

DISCIPLINA: INSTRUMENTAO DE BIOLOGIA MOLECULAR

CLCULOS PARA REAGENTES DE PCR

REAGENTES CONCENTRAO CONCENTRAO VOLUME Mix para
INCIAI FINAL INICIAL 07(Sete)
(INDSTRIA) reaes
Tampo TBE 10X 1X

Cloreto de 50milimolar 2milimolar

Magnsio
dNTPs 2millimolar 0,2milimolar
Primer 1 2,5micromolar 0,05micromolar
Primer 2 2,5micromolar 0,05micromolar
DNA molde 25nanograna/ 2nanograma/
microlitro microlitro
Taq- 5unidades/ 0,2unidades/
polimerase microlitros microlitro
gua mili-Q Qsp 25 l
TOTAL 25 l

VOLUME PARA UMA REAO: C1.V1=C2.V2, onde C1(Concentrao inicial), V1 (Volume inicial), C2
(Concentrao final) e V2(Volume final).

O Mix realizado com o intuito de no ocorrer desperdcio de material/reagentes, sendo realizado

anteriormente ao procedimento de PCR(custo elevado). Calcula-se o volume de uma reao e
posteriormente multiplica-se pelo nmero de reaes que ser realizado no dia.

Neste caso, voc ir calcular para 07 reaes, onde temos 05 DNAs moldes, um controle positivo e um
negativo, totalizando 07 reaes. Lembrar que a gua mili-Q servir como complementao de volume e
que cada DNA no poder ser misturado no MIX. como se fosse fazer empadas com recheios
diferentes, os recheios so os DNAs que devem estar em cada empada (diferente uma da outra) e o mix
a nossa massa, que tem que ter o mesmo sabor e consistncia em todas as forminhas.

Favor realizar a tabela acima e me enviar, ok?