Rotina

Microbiologia
Farmacêutica

Prof. Plínio Naves

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Microbiologia farmacêutica
Determinação dos pontos importantes em primeiro plano
« métodos de contagem
« amostragem asséptica
« conhecimento dos micro-organismos especificados

Fundamentação
dos testes
empregados na rotina
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Contagem de micro-organismos

●
Necessária para avaliar a qualidade microbiana da água,
amostras de carga biológica em processo, de matérias-primas
e assim por diante
●
O método usado para contar micro-organismos depende do tipo
de informação requerida, do número de micro-organismos
presentes e da natureza física da amostra
– contagem total de células
– contagem de células viáveis
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Contagem total de células
●
Exame microscópico direto
●
Medida da turbidez de uma suspensão (usando um nefelômetro
ou um espectrofotômetro)
●
Determinação do peso de uma cultura seca (avaliação de
biomassa)
●
Medições de adenosina trifosfato (ATP)
– luciferase - luz na hidrólise
– coloração fluorescente
– impedância elétrica
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 1,7x107 céls/mL

Exame microscópico direto 5 / 34

 Transmitância

Absorvância

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Medida da turbidez de uma suspensão
Contagem de células viáveis

●
Espalhamento na superfície
●
Pour plate
●
Plaqueamento em espiral
●
Filtração por membrana

DILUIÇÃO

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Petrifilm

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Número Mais Provável

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Número Mais Provável

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Número Mais Provável

●
Etapas
1) Presuntiva (NMP)
2) Confirmatória
3) Completa

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https://youtu.be/ez4OZGZivrY

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Amostragem

●
Um aspecto importante é assegurar que as amostras coletadas
tenham sido feitas de maneira asséptica e que os recipientes e as
condições de armazenamento da amostra não tenham sido
afetados até chegar ao laboratório
●
Os recipientes selecionados devem ser estéreis (de plástico
descartável ou de vidro autoclavado)
●
Cuidado com produtos químicos que possam ter propriedades
antimicrobianas e, assim, dar um resultado falso negativo

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Amostragem

●
Técnica asséptica - Isso requer que a pessoa que está tomando a
amostra tenha sido adequadamente treinada
●
Transporte e armazenamento sob condições apropriadas
(amostras em processo e de água normalmente devem ser
colocadas a 2–8 ° C em 1 ou 2 h de amostragem)

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Amostragem
●
A amostra deve ser representativa (número de amostras colhidas
ou quantidade coletada)
●
Deve ser de volume suficiente (como 200 mL de água de grau
farmacêutico) ou
●
Número representativo de amostras (quantas amostras de um
determinado número de recipientes de uma matéria-prima dará
um resultado representativo)
●
Ferramentas estatísticas usadas para este fim - a mais simples a
raiz quadrada do número de recipientes

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Amostragem
●
A amostra deve ser representativa:
– Água coletada para análise microbiológica deve ser feita da
maneira que um agente de produção a usaria
– Matéria-prima retirada de um recipiente deve ser da amostra
mista, de modo que seja homogênea e assim por diante

Os micro-organismos raramente seguem distribuição normal e mais de

uma amostra é necessária para que um resultado final fique mais
próximo da "verdadeira" carga biológica.
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https://www.youtube.com/watch?v=tXXkSHbL8DE
Micro-organismos detectados em
ambientes de fabricação farmacêutica

O estudo da variedade, tipos e padrões de micro-organismos

encontrados em salas limpas fornece informações essenciais para
microbiologistas e pessoal de qualidade no entendimento de
ambientes de salas limpas e para auxiliar no controle de
contaminação

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Micro-organismos detectados em
ambientes de fabricação farmacêutica
●
Tais estudos revelam-se muito úteis para os microbiologistas
●
Na avaliação comparativa dos tipos e frequência de incidência
dos micro-organismos mais comuns que podem ocorrer em
salas limpas
●
Esta é uma característica importante para garantir um bom
controle microbiológico

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Micro-organismos detectados em
ambientes de fabricação farmacêutica
●
Dois aspectos da triagem da microbiota são a observação de
possíveis cepas resistentes e de micro-organismos especificados
●
Quando há ocorrência repetida de micro-organismos no
ambiente, particularmente bacilos Gram-positivos formadores de
esporos e certos bacilos Gram-negativos – indicativo de falhas no
regime de limpeza e desinfecção

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Micro-organismos detectados em
ambientes de fabricação farmacêutica
●
Existe uma variedade de desinfetantes usados dependendo dos
tipos de micro-organismos
●
Validação interna para confirmar a eficácia de novos desinfetantes
– Cepas padrão preconizadas
– Micro-organismos ambientais “internos” (coleção – bacterioteca)

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Micro-organismos detectados em
ambientes de fabricação farmacêutica
●
Micro-organismos indesejáveis estão descritos nas Farmacopeias
●
Quando estes micro-organismos são isolados o recomendável é
realizar uma avaliação de risco

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Critérios para avaliação de riscos

(a) Número absoluto de organismos isolados

Números elevados podem afetar a eficácia do produto e / ou a
estabilidade química.
Pode indicar problemas durante o processo de fabricação, ou com
uma matéria-prima.
Também podem indicar proliferação de micro-organismos no
produto.
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Critérios para avaliação de riscos

(b) O tipo e características de micro-organismo isolados

Indicam a provável origem e o risco potencial que pode representar
para o produto ou para o meio ambiente

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Critérios para avaliação de riscos

(c) Sobrevivência do micro-organismo no ambiente

Baseada nos seguintes fatores:
● pH
● Concentração salina
● Concentração de açúcar
● Água disponível
● Temperatura
● Tempo 27 / 34
Condições que interferem na sobrevivência microbiana

● pH baixo ou alto
● Alta concentração salina
● Altas concentrações de açúcar
● Baixa disponibilidade de água
● Temperaturas acima de 45 °C (exceto esporos termofílicos)
● Temperaturas abaixo de 10 °C (embora isso possa apenas inibir o
crescimento)
● Congelamento
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Critérios para avaliação de riscos

(d) Características do produto

É importante considerar a forma da dosagem do produto
particularmente se o material é anidro ou à base de água
Isso pode afetar a capacidade de proliferação de micro-organismos
Se o produto contém água livre suficiente para suportar o
crescimento microbiano é um fator chave

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Critérios para avaliação de riscos

(e) Impacto potencial nos pacientes

Avaliar o risco para os pacientes da presença de micro-organismos
viáveis ou de toxinas (aspecto da avaliação de risco que é a
consideração mais importante)

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Micro-organismos especificados vs análise de riscos

a) Toxinas e outros subprodutos microbianos

b) Micro-organismos diminutos que podem representar um desafio
para os filtros de grau de esterilização
c) Carga biológica microbiana das matérias-primas recebidas
(quando avaliada em relação ao teste de limites microbianos)
d) Como organismos indicadores que podem sinalizar preocupação
com contaminação fecal na água

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Micro-organismos especificados vs análise de riscos
e) Potencial para afetar a integridade do sistema de contenção /
fechamento
f) Sinalizam preocupação com o pessoal (como falta de higiene
pessoal)
g) Incomuns que podem sinalizar mudanças na microbiota
estabelecida no ambiente
h) Possíveis falhas no sistema de identificação microbiana
i) Conhecimento dos tipos de micro-organismos pode fornecer
indicação da origem da contaminação
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Estratégia para controle de contaminação

●
A definição dos testes e a conscientização das áreas de risco
durante todo o processo de fabricação devem ser inseridas na
estratégia de controle de contaminação
●
Produzir um documento formal de alto nível com uma
contribuição importante dos microbiologistas
●
A principal consideração é que os medicamentos devem ser
fabricados para serem seguros e eficazes

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