AMILASE

Kit para determinação da amilase por metodologia cinética-colorimétrica.

Cat. 311 MS 80022230145

MÉTODO Homogeneizar bem e manter o frasco sempre bem vedado.

Cinético-Colorimétrico (Caraway modificado). Estável por 12 meses entre 2-8 ºC.
Para evitar perdas de iodo, o frasco deve ser mantido sempre bem tampado
FINALIDADE e ser aberto, o mínimo possível.
Reagentes para a determinação da atividade enzimática da amilase em
amostras de soro, plasma, urina e outros líquidos biológicos. ESTABILIDADE
Somente para uso diagnóstico in vitro. Os reagentes são estáveis até o vencimento da data de validade impressa no
rótulo do produto e na caixa quando conservados em temperatura entre 15 a
FUNDAMENTO 30 ºC, bem vedados e se evite a contaminação durante o uso.
A amilase hidrolisa o amido liberando moléculas de açúcares e dextrina.
Após a adição da solução de iodo ocorre a formação de cor azul com o MATERIAIS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS
amido não hidrolisado do substrato. · Espectrofotômetro (leitura em 660 nm);
Nesta técnica, a atividade da amilase é inversamente proporcional à · Tubos e pipetas;
intensidade da cor azul formada e é calculada em comparação com um · Banho-maria ou termostatizador na temperatura constante de 37 ºC;
controle de substrato. · Cronômetro.

SIGNIFICADO CLÍNICO PRECAUÇÕES E CUIDADOS ESPECIAIS

A amilase é uma hidrolase normalmente secretada pelas células acinares
do pâncreas para o ducto pancreático e deste para o duodeno. No intestino,
a amilase hidrolisa os carbohidratos em seus componentes, os açúcares.
Quando ocorre uma lesão das células acinares como na pancreatite, ou
ocorrendo uma obstrução no fluxo do ducto pancreático como no
carcinoma pancreático, a amilase fluirá para o sistema linfático
intrapancreático e peritoneo e, por drenagem, atingirá os vasos
sanguíneos em concentração elevada. A amilase alcançará um aumento
anormal dentro de 12 a 24 horas após o início da doença, sendo
rapidamente clareada pelos rins, atingindo os níveis normais em 48 a 72
Aplicar os cuidados habituais de segurança na manipulação dos
reagentes e amostra biológica.
· Recomendamos o uso das Boas Práticas em Laboratório Clínico para a
execução do teste.
· De acordo com as instruções de biossegurança, todas as amostras
devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
· Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resoluções
normativas locais, estaduais e federais de preservação do meio ambiente.
· Recomendamos o uso de equipamentos de proteção individual (EPI)

horas. Nos casos de pancreatite persistente, obstrução dos ductos como avental, óculos de segurança, luvas descartáveis e outros que se
pancreáticos e pseudocisto pancreático, os níveis de amilase no soro fizerem necessários para a realização do teste.
estarão persistentemente aumentados. · Não deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes, amostra ou
Muito embora a dosagem da amilase seja um teste sensível para qualquer outra substância.
diagnóstico de doenças pancreáticas, ela não é específica. Outras · O Iodo-Estoque contém ácido clorídrico que é uma substância irritante.
doenças não pancreáticas podem elevar os níveis de amilase no soro como · O Tampão contém azida sódica como conservante. Não ingerir ou
na perfuração do intestino, na úlcera péptica penetrante para o pâncreas, aspirar. Evitar contato com a pele e mucosa.
na obstrução duodenal e nas parotidites (caxumba) devido à amilase · Em caso de acidentes tomar as medidas cabíveis de primeiros socorros.
salivar. Casos de cetoacidose diabética e de gravidez ectópica podem
apresentar também níveis altos de amilase no soro. Atenção
A determinação da amilase na urina, assim como a dosagem no soro, Saliva e suor contêm amilase. Para evitar possível contaminação não
também não é específica para as doenças pancreáticas. Outras doenças, pipetar com a boca, não soprar pipetas e evitar o contato do reagente e
tais como parotidite (caxumba), colecistite, perfuração de intestino, úlcera pipetas com a pele.
péptica penetrante, gravidez ectópica e infarto renal podem apresentar
amilase urinária elevada. Contudo, nas pancreatites a taxa de amilase na AMOSTRA
urina estará sempre elevada. Algumas drogas como etanol, narcóticos e SORO, PLASMA (heparina), URINA e outros LÍQUIDOS BIOLÓGICOS.
colinérgicos aumentam a amilase por efeito fisiológico. Outras como A enzima no soro ou plasma é estável por um mês entre 2-8 ºC.
citrato, oxalato e fluoreto diminuem a amilase por interferência química. Na urina, a estabilidade é também de um mês, desde que o pH seja
Para um diagnóstico mais seguro de pancreatite é importante, juntamente ajustado para 7,0.
com a dosagem da amilase sérica e urinária, determinar a Relação entre o Não usar amostras com sinais de contaminação bacteriana.
Clareamento da Amilase e o Clareamento da Creatinina. Quando a
Relação Clareamento Amilase/Clareamento Creatinina é igual a 5% ou URINA
mais, o diagnóstico de pancreatite pode ser feito com segurança. Quando a Colher a amostra com intervalos determinados de 2 ou até 24 horas.
Relação é menor do que 5% em um paciente apresentando níveis elevados
As amostras de urina devem ser armazenadas entre 2-8 ºC.
de amilase no soro e na urina, indica uma condição patológica não
pancreática (macroamilasemia, perfuração de intestino, etc). Não adicionar conservante.
Valores elevados
As patologias que mais comumente apresentam valores altos de amilase NOTA
são: pancreatite aguda primária, pancreatite crônica recidivante, úlcera Recomendamos que a coleta, preparação, armazenamento e descarte das
péptica perfurada, perfuração de intestino, parotidite (caxumba), amostras biológicas sejam realizadas seguindo as recomendações das
cetoacidose diabética, obstrução duodenal, colecistite aguda, gravidez Boas Práticas em Laboratórios Clínicos.
ectópica e insuficiência renal. Enfatizamos que os erros provenientes da amostra podem ser muito
maiores do que os erros ocorridos durante o procedimento analítico.
QUALIFICAÇÕES DO MÉTODO
· Metodologia cinética de tempo fixo, simples, rápida para dosagem da PROCEDIMENTO DO TESTE
amilase nos diversos tipos de líquidos biológicos. A- Condições de Reação
· O substrato de amido utilizado contém um preservativo potente para
Equipamento: Espectrofotômetro
impedir a contaminação bacteriana ou fúngica e propicía excelentes Leitura: Comprimento de onda 660 nm (620 a 700)
condições para a ação da atividade da enzima. Medida: Contra água destilada ou deionizada
· A metodologia permite obter resultados precisos e exatos se for B- Técnica de Análise
executada conforme descrita na Instrução de Uso. Dosagem no Soro ou Plasma
1- Identificar dois tubos de ensaio como Teste e Controle e proceder:
IDENTIFICAÇÃO DOS REAGENTES
Conservar em temperatura ambiente (15-30 ºC). Tubos Controle Teste
Substrato (1) 250 µL 250 µL
1- Substrato- Contém ácido benzóico 20 mmol/L e amido solúvel 0,8 g/L. Tampão (2) 250 µL 250 µL
2- Tampão- Contém ácido benzóico 0,25%; fosfato monobásico de sódio 2- Homogeneizar bem e incubar a 37 °C por 2 minutos.
750 mmol/L e azida sódica 7,7 mmol/L. Em baixas temperaturas o Tampão (2)
Soro ------ 10 µL
pode apresentar cristalização. Colocá-lo em banho-maria a 37 ºC e agitar
levemente. A cristalização não interfere na qualidade do reagente. 3- Homogeneizar bem e incubar a 37 °C por exatamente 7 minutos e 30
segundos cronometrados.
3- Iodo-Estoque- Contém iodato de potássio 16,7 mmol/L; iodeto de potássio
271 mmol/L; ácido clorídrico 110 mmol/L e fluoreto de sódio 83 mmol/L. Irritante Iodo de Uso 500 µL 500 µL
Água deionizada 4,0 mL 4,0 mL
PREPARO DA SOLUÇÃO DE USO DE IODO
4- Homogeneizar bem. Determinar as absorbâncias do Teste e Controle em
Ver Observações 1, 2 e 3.
660 nm ou filtro vermelho (620 a 700), acertando o Zero com água
Transferir quantitativamente o conteúdo da ampola do Iodo-Estoque (3)
deionizada. A reação de cor é estável por 120 minutos.
para um frasco âmbar. Adicionar 45 mL de água destilada ou deionizada.
 8
C. Cálculos CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO
AC = Absorbância do controle Linearidade
AT = Absorbância do Teste A reação é linear até 400 U/dL. Para valores maiores diluir a amostra com
AC  A T NaCl 150 mmol/L (0,85%) e repetir a medição. Multiplicar o resultado obtido
Unidades de Amilase / dL  x 800 pelo fator de diluição.
AC
Repetitividade
Exemplo
A imprecisão intra-ensaio foi calculada com 20 determinações, utilizando 2
Unidades de Amilase/dL = U/dL amostras com valores de 326 e 157 U/L. As médias dos coeficientes de
AC = Absorbância do controle = 0,456 variação obtidas foram de 1,0 e 3,5%, respectivamente.
AT = Absorbância do teste = 0,377
Reprodutibilidade
0,456  0,377 A imprecisão inter-ensaio foi calculada com 20 determinações, utilizando 2
U / dL  x 800  139 Unidades / dL amostras com valores de 65 e 59 U/L. As médias dos coeficientes de
0,456 variação obtidas foram de 0,9 e 3,1%, respectivamente.
Dosagem na Urina Limite de Detecção
A. Preparo da Amostra LD = 4 U/dL.
Medir e anotar o volume urinário em mL. Anotar também o tempo de coleta O intervalo de medida é de 4 até 400 U/dL.
da amostra. Medir o pH da urina e ajustá-lo entre 6,9 a 7,4 do seguinte
Comparação de Métodos
modo:
O produto foi comparado com outro similar disponível no mercado através
1- Urina ácida: adicionar carbonato de sódio (Na2CO3).
da análise de 58 amostras de soro humano com valores desconhecidos.
2- Urina alcalina: adicionar fosfato biácido de sódio (NaH2PO4). Os resultados analisados por modelos estatísticos demonstraram que não
há diferença significativa em um intervalo de confiança de 95% com uma
B. Dosagem equação de regressão linear onde y = 0,94x + 5,54.
Seguir o mesmo procedimento do soro/plasma.
Interferências
C. Cálculos Halogênios, especialmente cloretos ativam a amilase, assim como os íons
Unidades de Amilase Urinária/hora = U/h cálcio. Oxalatos, citratos e fluoretos inibem a atividade amilásica.
Unidades d / L x V
U/h  OBSERVAÇÕES
H x 100
1-A observação minuciosa da limpeza e secagem da vidraria, da
V = volume da urina em mL estabilidade dos reagentes, da pipetagem, da temperatura e do tempo de
H = número de horas em que foi coletada a urina reação é de extrema importância para se obter resultados precisos e
exatos.
Exemplo 2- Na limpeza da vidraria pode-se empregar um detergente neutro ou uma
Unidades de Amilase Urinária/hora = U/h solução ácida. A última lavagem deve ser feita com água destilada ou
Amilase urinária (valor encontrado na dosagem) = 86 U/dL deionizada.
V = volume da urina em mL = 1320 mL 3- A água utilizada nos laboratórios clínicos deve ser purificada utilizando-
H = n° de horas em que foi coletada a urina = 24 h se métodos adequados para as finalidades de uso. Colunas deionizadoras
86 x 1320 saturadas liberam diversos íons, aminas e agentes oxidantes que
Amilase Urinária (U / h)   47 Unidades / hora deterioram os reativos.
24 x 100
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Dosagem em outros Líquidos Biológicos 1- Annino JS . Clinical Chemistry. Principles and Procedures, 4ª ed.Little,
Seguir o mesmo procedimento do soro/plasma. Verificar a necessidade de Brown and Company.
diluição da amostra. 2- Caraway WT. Am J Clin Path 1959; 32: 97.
3- Henry, R.J.; Clin. Chem. 6, 434, 1960.
Relação Amilase/Creatinina na Urina (U/g) 4- Henry, R.J.: Clinical Chemistry - Principles and Technics, 2ª ed. Harper
Amilase (U / dL ) x 100 and Row, 1974.
U/ g  5- Lopes HJJ. Enzimas no Laboratório Clínico - Aplicações Diagnósticas.
Creatinina (mg / dL ) Belo Horizonte - Analisa Diagnóstica, 2000.
6- Mendes MQ, Lopes HJJ. Atualização em Bioquímica Clínica: Técnicas,
RELAÇÃO DE CLAREAMENTO DA AMILASE POR CLAREAMENTO Fundamentos e Interpretação de Resultados. Belo Horizonte, MAI Editora,
DA CREATININA 1973: 39-41.
Na maioria dos casos de pancreatite aguda ocorrem elevações 7- Mota VT. Bioquímica Clínica: Métodos e Interpretações. Porto Alegre, Ed.
concomitantes da amilase sérica e urinária, mas em certos casos, a Médica Missau. 1999: 147-152.
elevação da amilase urinária não é acompanhada por uma elevação 8- GOLD ANALISA: Informe Técnico do Produto.
paralela da amilase sérica.
Portanto, a relação entre a depuração ou clareamento da amilase e a APRESENTAÇÃO
depuração ou clareamento da creatinina, expressa em porcentagem, Cat. Embalagem N° de Testes Reagentes Volume
proporciona maior valor diagnóstico nos casos de pancreatite aguda e Substrato 1 x 25 mL
pancreatite recorrente. 311 Normal 100 Tampão 1 x 25 mL
Para calcular essa relação, determinar a atividade da amilase e a Iodo Estoque 1 x 5 mL
concentração da creatinina nas amostras de soro e urina analisadas e
aplicar os resultados na seguinte fórmula: TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO
Lei n° 8.078 de 11-9-90 - Código de Defesa do Consumidor
AmU (U / dL) x CrS (mg / dL) A Gold Analisa garante a substituição, sem ônus para o consumidor, de
Re lação (%)  x 100 todos os produtos que comprovadamente apresentarem problemas
Ams (U / dL) x CrU (mg / dL)
técnicos, desde que o usuário utilize equipamentos e materiais em boas
AmU = Amilase na Urina em U/dL AmS = Amilase no Soro em U/dL condições técnicas, siga rigorosamente o procedimento técnico e as
CrS = Creatinina no Soro em mg/dL CrU = Creatinina na Urina em mg/dL recomendações estabelecidas nas Instruções de Uso.
Nº do lote e data de validade: Vide Rótulos do Produto
VALORES DE REFERÊNCIA Gold Analisa Diagnóstica Ltda - CNPJ: 03.142.794/0001-16
Soro ou Plasma: 60 a 160 U/dL AF MS Nº 800222-3 - Reg. MS - Nº 80022230145
Urina: 50 a 140 U/h Farm. Resp. Homero Jackson de Jesus Lopes - CRF- MG -2010
Estes valores devem ser usados como uma orientação. É recomendado Av. Nossa Senhora de Fátima, 2363 - Carlos Prates - Fone: (31) 3272-1888
que cada laboratório estabeleça seus próprios valores de referência. Belo Horizonte MG Brasil CEP: 30710-020
Home page: www.goldanalisa.com.br
CONTROLE DA QUALIDADE E-mail: goldanalisa@goldanalisa.com.br
O laboratório clínico deve ter implementado um Programa de Garantia da Setor de Apoio ao Cliente (SAC): 0800 703 1888
Qualidade para assegurar que todos os procedimentos laboratoriais sejam
realizados de acordo com os princípios das Boas Práticas de Laboratório Analisa é marca registrada da Gold Analisa Diagnóstica Ltda
Clínico (BPLC).
Para controle e verificação do desempenho do kit podem ser utilizadas Edição: 09/09
amostras controle com valores estabelecidos pelos fabricantes.
É importante que cada laboratório estabeleça os seus próprios valores
médios e os respectivos limites de variação.