1) Considerando os dados abaixo para a descarboxilação de um β ácido,

calcule:

Concentração de
Velocidade (mmol/L.min)
Substrato (mol/L)
2,500 0,588
1,000 0,500
0,714 0,417
0,526 0,370
0,250 0,256

a. Os valores de KM e Vmáx. (1,0 ponto)

X= 1/[S] Y= 1/v
0,4 1,70068
1 2
1,40056 2,398082
1,901141 2,702703
4 3,90625

4,5
4
3,5
3
y = 0,6173x + 1,4673
2,5 R² = 0,9943
1/V

2
1,5
1
0,5
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5
1/[S]

Com o gráfico e os valores de a e b consegue-se calcular Km e Vmax.

b. O número de renovação enzimática pressupondo o uso de 1x10-4 mol de
enzima. (1,0 ponto)

2) Você espera que a estrutura do inibidor não competitivo de determinada

enzima seja semelhante à de seu substrato? Explique. (1,0 pontos)

R: Não, pois o inibidor não compete com o substrato, porem o inibidor irá se
ligar em outra região, sendo assim o sitio ativo sempre estará disponível para o
substrato.

3) Para reação da aspartase, na presença do inibidor hidrocimetilaspartase

(Quadro 1), determine os parâmetros cinéticos e o tipo de inibição. Essa
inibição pode ser revertida se aumentarmos a concentração de substrato? Por
que? (1,0 ponto)

Com inibidor
[S] mol/L Sem inibidor (Vmol/L.min)
(Vmol/L.min)
1.10-4 0,026 0,010
5.10-4 0,092 0,040
1,5.10-3 0,136 0,086
2,5.10-3 0,150 0,120
5.10-3 0,165 0,142

Sem Inibidor Com Inibidor

X=1/[S] Y=1/V X=1/[S] Y=1/V
10.000 38,46154 10.000 100
2.000 10,86957 2.000 25
666,6667 7,352941 666,6667 11,62791
400 6,666667 400 8,333333
200 6,060606 200 7,042254
 y = 0,0033x + 5,0575
Sem inibidor R² = 0,9988
45
40
35
30
25
1/V

20
15
10
5
0
0 2000 4000 6000 8000 10000 12000
1/[S]

Com inibidor y = 0,0095x + 5,2145

R² = 0,9998
120

100

80
1/V

60

40

20

0
0 2000 4000 6000 8000 10000 12000
1/[S]

Para o sem inibidor

Para o com inibidor:

Como o km aumenta e o vmax é igual então o tipo de inibição é competitiva.

A inibição é competitiva. Sim, pois os inibidores se assemelham com o

substrato e se ligam com a enzima no sítio ativo inibindo a atividade
enzimática, concluindo assim que a inibição competitiva pode ser revertida com
o aumento de substrato.

5) Enzimas que catalisam a reação X↔Y são isoladas de 2 espécies de

bactérias. As enzimas possuem a mesma Vmáx, mas diferentes valores de KM.
A enzima A tem KM =2 μM e a enzima B tem K KM =0,5 μM. Qual destas
enzimas possui maior afinidade pelo substrato? Explique. (1,0 ponto)

R: A enzima B tem maior afinidade pelo substrato em questão, por que quanto
menor o valor de Km maior será sua afinidade com o substrato.

6) Um grupo de pesquisadores descobriu uma nova enzima, que catalisa a

reação abaixo, X↔ Y. Os pesquisadores iniciaram a caracterização da enzima

(a) No primeiro experimento, com [Et] de 4 nM, eles observaram que a Vmáx é
1,6 μM.s-1 Com base nesse experimento, qual é o kcat da enzima? (1,0 ponto)
(b) Em outro experimento, com [Et] de 1 nM e concentração do substrato (X) de
30 μM, os pesquisadores observaram que Vo= 300 nM.s-1. Qual é o valor de
KM medido para a enzima para o substrato X? (1,0 ponto)

( )

(c) Pesquisas posteriores indicaram que a enzima isolada no primeiro

experimento estava contaminada com um inibidor reversível. Quando o inibidor
foi totalmente removida da preparação de enzima e os dois experimentos foram
repetidos, observou-se que a Vmáx não foi alterada, mas o valor de Km passou
a 20 μM. Com base nestas informações, qual o tipo de inibição realizada pelo
inibidor? (1,0 ponto)

É um inibidor competitivo.

7) Considerando as características de termoestabilidade das duas enzimas a

50 ºC , responda.

Velocidade Enzima A Velocidade Enzima B

Tempo (min)
(mol/L.min) (mol/L.min)
0 60 100
20 40 75
30 30 70
40 25 60
50 20 55
60 15 40
70 10 35
 Enzima A Enzima B
X (tempo) Ln(E/Eo) X (tempo) Ln(E/Eo)
0 0 0 0
20 -0,40547 20 -0,28768
30 -0,69315 30 -0,35667
40 -0,87547 40 -0,51083
50 -1,09861 50 -0,59784
60 -1,38629 60 -0,91629
70 -1,79176 70 -1,04982

a) Calcule Kd, t1/2 e valor D? (1,0 ponto)

Para a enzima A:

y = -0,0236x
Enzima A R² = 0,9832

0
-0,2 0 10 20 30 40 50 60 70 80

-0,4
-0,6
-0,8
ln(e/e0)

-1
-1,2
-1,4
-1,6
-1,8
-2
Tempo

( ) ( )
 Título do Gráfico
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
-0,2

-0,4
y = -0,014x
R² = 0,9653
-0,6

-0,8

-1

-1,2

( ) ( )

b) Qual destas enzimas é mais estável a 50 ºC? (1,0 ponto)

A enzima mais estável em 50ºC é a B, por conta do valor de K d menor sendo

assim a desnaturação será menor nesta temperatura.