Departamento

de Química e Bioquímica
QUÍMICA BIOLÓGICA (Q3002) – Aulas Teórico-Práticas

PARTE B: CINÉTICA ENZIMÁTICA - Problemas

1. O valor de KM para a lisozima é 6.0 x 10-6 M sendo a hexa-N-acetilglucosamina o substrato. Efetuaram-se

ensaios cinéticos para as seguintes concentrações de substrato:
(a) 1.5 x 10-7 M; (b) 6.8 x 10-5 M; (c) 2.4 x 10-4 M; (d) 1.9 x 10-3 M; (e) 6.1 x 10-2 M.
A velocidade inicial da reação medida para 6.1 x 10-2 M é de 3.2 µM min-1. Calcule as velocidades iniciais
para as restantes concentrações de substrato.

R:a) 7.8 x 10-8 M min-1; b) 2.9 x 10-6 M min-1; c) 3.1 x 10-6 M min-1; d) 3.2 x 10-6 M min-1; e) 3.2 x 10-6 M min-1

2. Efetuou-se o estudo cinético de uma reação enzimática envolvendo um único substrato e que segue o
mecanismo de Michaelis-Menten. Com base nos resultados obtidos efetuou-se a representação gráfica que
se apresenta a seguir.

2,50

2,00
(1/v o)x10 /mol dm s
3

1,50
-1

1,00
-6

0,50

0,00
-0,50 -0,30 -0,10 0,10 0,30 0,50 0,70 0,90
-3 -1 3
(1/ISIo)x10 / mol dm

a) Mostre que os resultados confirmam que a reação segue o mecanismo de Michaelis-Menten.

b) Determine os parâmetros cinéticos da reação, vmax e KM.
3
R: b) vmax = 1.82 x 10-6 mol dm-3 s-1; KM = 2.73 x 10-3 mol dm-

3. Determinou-se a velocidade inicial para várias concentrações de substrato, para uma reação catalisada por
uma enzima, tendo-se obtido os seguintes resultados:
|S|o x 105 / mol dm-3 vo x 105 / mol dm-3 min-1
2.50 3.80
4.00 5.34
6.00 6.86
8.00 8.00
16.0 10.7
20.0 11.4

1 / 6
 Departamento de Química e Bioquímica
QUÍMICA BIOLÓGICA (Q3002) – Aulas Teórico-Práticas

a) Mostre que a reação segue uma cinética de Michaelis-Menten.

b) Calcule o valor de vmax e KM da reação.
-5 -3 -1 -3
c) Calcule a velocidade inicial para |S|o = 5.00 x 10 mol dm e |S|o = 3.00 x 10 mol dm .
-5 -3
d) Determine a concentração de produto formado ao fim de 90 s para |S|o = 7.2 x 10 mol dm ?

. b) vmax = 1.61 x 10-4 mol dm-3 min-1; KM = 8.05 x 10-5 mol dm-3.
c) vo = 6.17 x 10-5 mol dm-3 min-1; vo = vmax = 1.61 x 10-4 mol dm-3 min-1.
d) |P| ≈ 7.2 x 10-5 mol dm-3.

4. Partindo da equação de Michaelis-Menten, deduza a seguinte equação

𝑣𝑜 𝑣𝑚𝑎𝑥 − 𝑣𝑜
=
[𝑆] 𝐾𝑀
e mostre como obteria graficamente vmax e KM a partir desta equação.

5. Estudou-se a cinética da reação de hidrólise de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilina (GNPA), catalisada

pela enzima α-quimotripsina. Obteve-se a seguinte tabela de dados (em que S = GNPA):

|S|o x 104 / M 2.5 5.0 10.0 15.0

vo x 106 / M.min-1 2.2 3.8 5.9 7.1

a) Assumindo que a enzima segue uma cinética de Michaelis-Menten, calcule os valores de vmax, KM e k2
usando uma representação de Lineweaver-Burk.
b) Calcule os parâmetros cinéticos da alínea anterior usando um tratamento de Headie-Hofstee, sabendo que
|E|o = 4.0 x 10-6 M.

R a) vmax = 1.31 x 10-5 M min-1; KM = 1.22 x 10-3 M; k2 = 3.28 min-1.

6. Efetuou-se o estudo cinético, a 0.5 oC e a pH = 7.1, da reação química representada pela equação:

CO2 (aq) + H2O(l) <-> H CO3- (aq) + H+ (aq)

na presença da enzima anidráse carbónica. Para uma concentração da enzima de 2.8 x 10-9 mol dm-3, os
resultados obtidos conduziram aos seguintes valores para os parâmetros cinéticos da reação: vmax = 2.9 x
10-5 mol dm-3 s-1 e KM = 2.4 x 10-2 mol dm-3.

a) Suponha que a reação era estudada utilizando uma concentração da enzima dupla da considerada. Qual o
efeito sobre os valores dos parâmetros cinéticos da reação?
b) Calcule a fração de dióxido de carbono que é convertida em hidrogenocarbonato, ao fim de 2 min, para
uma concentração de dióxido de carbono de 3.00 x 10-3 mol dm-3.
R. b) f = 13 %

2 / 6
 Departamento de Química e Bioquímica
QUÍMICA BIOLÓGICA (Q3002) – Aulas Teórico-Práticas

7. Realizou-se o estudo cinético de uma reação enzimática, para um único substrato, S, e que segue a lei de
velocidade de Michaelis-Menten, na presença e na ausência de um dado inibidor, I, para concentração
constante de enzima, E. Realizaram-se ensaios para duas concentrações iniciais de S, medindo-se, para cada
uma, a variação da concentração de produto, P, ao fim de um intervalo de tempo de 30 s. Os resultados obtidos
encontram-se na tabela abaixo apresentada.

Tabela de resultados
104 x |S|o / mol.dm-3 inibidor I 103 x ∆|P| / mol.dm-3
ausente 1.81
2.00
presente 1.22
ausente 2.60
4.00
presente 1.43

a) Determine os valores da velocidade inicial da reação enzimática (no intervalo de tempo considerado), na
presença e na ausência de inibidor, para todos os ensaios realizados.
b) Calcule o grau de inibição enzimática, i, para cada valor de |S|o e conclua, justificando, sobre o tipo de
inibidor presente.
c) Indique um mecanismo possível que permita explicar a ação de um inibidor competitivo, IC, e a de um
inibidor anticompetitivo, IAC. Com base na resposta, compare, qualitativamente, o efeito de aumento de |S|o
em i para os dois casos.
R. a) ausência de I: ensaio 1, vo = 6.03 x 10-5 M s-1; ensaio 2, vo = 8.67 x 10-5 M s-1;
presença de I: ensaio 1, vo = 4.07 x 10-5 M s-1; ensaio 2, vo = 4.77 x 10-5 M s-1;
b) ensaio 1: i = 32.5 %; ensaio 2: i = 45.0 %

8. Para uma reação enzimática envolvendo um único substrato X e que segue o mecanismo de Michaelis-
Menten, efetuaram-se estudos cinéticos, a dada temperatura e concentração de enzima, na ausência de inibidor
e na presença de dois inibidores A e B. Com os resultados obtidos nos três estudos independentes, efetuou-se
a representação gráfica de Lineweawer-Burke apresentada abaixo:

3 / 6
 Departamento de Química e Bioquímica
QUÍMICA BIOLÓGICA (Q3002) – Aulas Teórico-Práticas

a) Considerando o estudo realizado na ausência de inibidor, determine o valor de KM e vmax.

b) Calcule os valores dos parâmetros cinéticos (constante de Michaelis Menten e velocidade máxima) para a
reação catalisada
(i) na presença de inibidor A.
(ii) na presença de inibidor B.
c) Indique, justificando, qual o tipo de inibição enzimática causada por A e por B.

R: a) KM = 1.7 x 10-4 M e vmax = 6.7 x 10-6 M s-1

b) (i) KM (A) = KM = 1.7 x 10-4 M e vmax (A) = 5.0 x 10-6 M s-1 ;
(ii) KM (B) = 4.2 x 10-5 M e vmax (B) = 1.8 x 10-6 M s-1 .

9. Considere uma reação enzimática envolvendo um único substrato e que segue o mecanismo de Michaelis-
Menten. Para uma dada temperatura e para a mesma concentração de enzima, estabeleça a expressão que
relaciona os valores da velocidade máxima da reação quando realizada na ausência e na presença de um
inibidor anticompetitivo.

10. Considere uma enzima que catalisa uma reação envolvendo um único substrato e que segue o mecanismo
de Michaelis-Menten, e admita que essa enzima dispõe de dois grupos ionizáveis no centro ativo, caraterizado
pelas constantes de protólise Ka1=4.0 x 10-5 e Ka2=5.0 x 10-8. Admitindo que a forma ativa da enzima é a forma
parcialmente desprotonada, a velocidade da reação é dada por:

Mostre que se |S|o<<KM, a atividade enzimática é óptima para a gama de pH = 4.4-7.4, e esboce o respectivo
gráfico log vo=f(pH).

11. Considere uma reação enzimática envolvendo um único substrato e que segue o mecanismo de Michaelis-
Menten. Realizaram-se estudos, para elevada concentração de substrato, da influência da temperatura na
velocidade da reação que conduziram à representação gráfica abaixo apresentada

a) Explique o comportamento observado.

b) Deduza a expressão que traduz a variação da velocidade da reação com a temperatura, vo = f(T),
nas condições consideradas.
4 / 6
 Departamento de Química e Bioquímica
QUÍMICA BIOLÓGICA (Q3002) – Aulas Teórico-Práticas

12. Suponha uma reação enzimática envolvendo um único substrato e que segue o mecanismo de Michaelis –
Menten, estudada na ausência e na presença de um inibidor não competitivo I. Com base nos resultados
obtidos efetuou-se a seguinte representação gráfica:

a)Determine os valores da velocidade máxima da reação, quando realizada na ausência e na presença do

inibidor I.
b)Sabendo que para o inibidor I, KI = 2,20 x 10-5 (supondo as concentrações expressas em mol.dm-3),
determine o valor da concentração de inibidor utiliza
R: a) ausência de inibidor I: vmax = 1.82 x 10-6 M s-1 ; presença de inibidor I: vmax (I) = 1.00 x 10-6 M s-1 ; b) | I | = 1.87 x 10-5 M

5 / 6