UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ

CENTRO DE TECNOLOGIA
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUÍMICA
DISCIPLINA PROCESSOS E REATORES BIOQUÍMICOS
Professora Maria Valderez Ponte Rocha

ASSUNTO: Mecanismo e Cinética Enzimática

ATIVIDADE ALUNO (A): MATRÍCULA:
02

1. (Valor 1,0 ponto) Uma determinada reação catalisada pela enzima ligase, de uma
espécie de microalga, a 30 °C e pH 7,4, é acompanhada por 10 min e os dados
experimentais estão apresentados na Tabela 1.
Tabela 1: Dados obtidos durante a reação.
S (mmol/L) Concentração de
Glioxilato formado após
10 min (μmol/L)
0,0318 7,5
0,0464 12,5
0,0593 20,0
0,1185 32,5
0,2222 62,5

A cinética enzimática obedece ao modelo proposto por Michaelis-Menten? Em caso

afirmativo, determine o valor de Km e Vmáx para esta reação.

Observação: Para determinar os parâmetros utilizem dois métodos, sendo um deles

Lineweaver-Burk e o segundo de acordo com o número de matrícula.

Método Eadie-Hanes: Se a média dos dois últimos algarismos da matrícula dos membros
da dupla for PAR. Em caso de um número não inteiro, as regras de arredondamento
devem ser aplicadas.

Método Hofstee: Se a média dos dois últimos algarismos da matrícula dos membros da
dupla for ÍMPAR. Em caso de um número não inteiro, as regras de arredondamento
devem ser aplicadas.

2. (Valor 1,0 ponto) Os dados cinéticos que estão apresentados na Tabela 2 referem-se
a uma reação hidrolítica de vários tripeptídeos nos seus aminoácidos N-terminais, sendo
catalisada pela enzima aminotripeptidase intestinal a pH 7,0 e 37 °C.

1
Tabela 2: Dados cinéticos referentes as reações de hidrólise de quatro substratos pela
aminotripeptidase intestinal.

Substrato k3 (s-1) Km (Mm)

L Pro-Gly-Gly 385 1,3
L Leu-Gly-Gly 190 0,55
L Ala-Gly-Gly 365 1,4
L-Ala L-Ala L-Ala 298 0,52

Qual dos substratos será hidrolisado mais rapidamente nos instantes iniciais da reação,
após a adição de uma preparação aos quatros substratos em concentração equimolar?
Fundamente sua resposta.

3. (Valor 1,0 ponto) Assumindo que têm afinidade igual pela enzima, por que um inibidor
não competitivo é uma droga mais eficaz do que um inibidor competitivo?

4. (Valor 1,0 ponto) Determine o tipo de inibição de uma reação enzimática a partir
dos seguintes dados apresentados na Tabela 3, os quais foram obtidos na presença e
na ausência do inibidor.
Tabela 3: Dados cinéticos obtidos na ausência e na presença do inibidor.
S (mM) Velocidade (mM.min-1) Velocidade na presença
de inibidor (mM.min-1)
1 1,3 0,8
2 2,0 1,2
4 2,8 1,7
8 3,6 2,2
12 4,0 2,4

5. (Valor 1,0 ponto) O Km de certa enzima que obedece a Equação de Michaelis-Menten

é igual a 1x10-5 M. Numa concentração de substrato igual a 0,1 M, a velocidade inicial
experimental foi igual a 37 mmol/min para uma certa concentração da enzima. No
entanto, diminuindo a concentração do substrato para 0,01 M, observou-se que a
velocidade de reação permaneceu sendo igual a 37 mmol/min. Por que uma redução de
dez vezes na concentração do substrato não produziu nenhuma variação perceptível na
velocidade da reação?

6. (Valor 1,0 ponto) Um grupo de pesquisadores descobriu uma nova enzima, que
catalisa a reação abaixo, e que eles nomearam de felicidase:

FELICIDADE ↔ TRISTEZA
Os pesquisadores iniciaram a caracterização da enzima.

(a) No primeiro experimento, com [E]0 de 4 nM, eles observaram que a Vmáx é 1,6 μM.s-
1 Com base nesse experimento, qual é o kcat da felicidase? (Coloque as unidades

apropriadas)

2
(b) Em outro experimento, com [E]0 de 1 nM e concentração do substrato FELICIDADE
de 30μM, os pesquisadores observaram que Vo= 300 nM.s-1. Qual é o valor de Km
medido para a felicidase para o substrato FELICIDADE?
(c) Pesquisas posteriores indicaram que a felicidase isolada no primeiro experimento
estava contaminada com um inibidor reversível, denominado RAIVA. Quando RAIVA foi
totalmente removida da preparação de felicidase e os dois experimentos foram
repetidos, observou-se que a Vmáx não foi alterada, mas o valor de Km passou a 20 μM.
Com base nestas informações, qual o tipo de inibição realizada por RAIVA?

7. (Valor 1,5 pontos) Mostre que:

a) A velocidade de reação para uma enzima que sofre inibição pelo substrato é dada por:
Vmax [ S ]
v
[ S ]2
K m  [S ] 
KS
Dica: proponha um mecanismo e use a hipótese do estado quase-estacionário.

b) O valor ótimo da concentração do substrato com o qual se deve operar é dado por:

S max  K m K S

8. (Valor 1,0 ponto) Um inibidor não-competitivo puro causa 85% de inibição quando
presente numa concentração igual a 4,32 mM. Qual é o valor da constante de inibição
(KI)?

9. (Valor 1,5 pontos) Um farmacêutico, ofereceu dois tipos de remédio para um cliente,
porém esse cliente era engenheiro químico e tinha cursado a disciplina de engenharia
enzimática. Ele comprou as duas drogas e vez um teste em laboratório para selecionar
a melhor droga para ele ingerir. Os dados obtidos encontram-se na Tabela abaixo.

S (µM) Velocidade Velocidade na Velocidade na

(mM.min-1) presença da droga A presença da
SEM DROGA (mM.min-1) droga B
(mM.min-1)
1 2,5 1,17 0,77
2 4,0 2,1 1,25
5 6,3 4,0 2,0
10 7,6 5,7 2,5
20 9,0 7,2 2,86

Com base no tipo de inibição, determine o melhor remédio para ser ingerido para inibir
a enzima que está catalisando essa inflamação.
Assumindo que a quantidade de enzima é a mesma em cada caso, determinar Km e Vmax
para a enzima (na ausência de inibidores) e para cada inibidor determinar KI e o tipo de
inibição. Considere a velocidade máxima igual nos dois processos de inibição.
Excelente Atividade!