UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARINGÁ

CURSO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS

DISCIPLINA: LABORATÓRIO DE BIOENGANHARIA
DOCENTE: Marsilvio Lima de Moraes Filho

CINÉTICA DE CRESCIMENTO CELULAR

Alunos: Adriele Fatima Castanha RA:106579

Joao marcos Azevedo Ra: 106537

Larissa Millena Girotto Ra: 103623

Umuarama- PR

2021
1. INTRODUÇÃO

Atualmente, buscam-se maneiras que facilitem e promovam agilidade na obtenção de

concentração de parâmetros químicos, dos quais são analisados frequentemente em
laboratórios. A construção das curvas de calibração torna-se de essencial importância no
processo dequantificação das concentrações desses compostos. Para obtenção dessa curva é
seguida a Lei de Beer-Lambert, a qual descreve a obrigatoriedade da concentração e a
absorbância seguirem um padrão linear (NECKEL, 2013).
A Saccharomyces cerevisiae é uma levedura amplamente utilizada nos processos de
fermentação em panificações, cervejarias e destilarias devido a sua capacidade de converter
açúcar em etanol, ácidos orgânicos e gás carbônico (ASSIS NETO et al., 2010).
A fermentação alcoólica consiste no consumo de sacarose e componentes nutritivos
pela levedura. Componentes que podem ser natural do alimento ou adicionada artificialmente,
na qual irá ter como produto gás carbônico, etanol e outros compostos (NUNES, 2009).
Segundo o Skoog (2006), a absorbância A de uma solução está relacionada com a
transmitância de forma logarítmica, como mostrado na Equação 1:
(Eq. 1)

2. OBJETIVO DA PRÁTICA

Determinar a curva padrão para a biomassa do crescimento da Saccharomyces

cerevisiae em condições de temperatura e diferentes concentrações, determinas o tempo de
geração para cada condição e a velocidade máxima de cada reação.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1. Materiais

Para este experimento utilizou-se a levedura Saccharomyces cerevisiae, o meio de

cultura com nutrientes, centrifuga, estufa, tubos falcons, agua destilada, extrato de malte,
peptona, balança e espectrofotômetro.

3.2. Métodos

3.2.1 Preparo do inoculo

Para a inoculação da levedura foi preciso de um meio com 10 g/L de glicose, 3 g/L de
extrato de levedura, 3 g/L de extrato de malte e 5 g/L de peptona, seu pH foi ajustado para 5, e
em seguida adicionando 100 ml desse meio e 0,1 g de fermento biológico seco, e levando para
uma estufa e ocontecendo a inoculação por 3 h a temperatura de 30 ºC a 100 rpm. Em outro
erleymeier colocou-se 10% da solução já cultivada e completando ate 300 ml com o meio
novo, porem ocorrendo a inoculação a 300rpm a 30 ºC.

3.2.2 Inoculo da curva padrão de biomassa.

Preparou-se 3 tubos de centrifuga com 10 mL de suspenção de células, e centrifugou-
se por 10 min a 3000 rpm, em seguida retirando o sobrenadante , lavou-se os tubos e levou-se
novamente para a centrifuga por mais 20 min a 3000 rpm, repetiu-se este procedimento de
lavagem.

3.2.3 Curva da biomassa.

Preparou-se diferentes diluições a partir dos sobrenadantes retirados, de 1:2, 1:5, 1:10,
1:25, 1:50. Realizaram-se as leituras da transmitância das amostras, em um comprimento de
onda de 600 nm.

4. RESULTADO E DISCUSSÃO

Com os experimentos realizados obteve-se as seguintes tabelas 1 e 2.

Tabela 1. Transmitância e absorbância das diluições para a curva.
Fator de diluição T(%) suspensão T(%) sobrenadante Abs suspensão Abs sobrenadante
1:2 5 95,1 1,301 0,022
1:5 24,5 98,1 0,608 0,008
1:10 44,6 98,4 0,351 0,007
1:25 70,7 98,8 0,150 0,005
1:50 80,8 98,6 0,093 0,006

E com o resultado da tabela se fez a curvas padrão de suspensão e de sobrenadante,

presente na seguinte figura:
 Curva padrao y = 2,8772x + 0,0355
R² = 0,9966
1,6
1,4
1,2
1
Abs

0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3
concentração(g/L)

Figura 1. Curva padrão da biomassa.

E utilizando a curva padrão calculou-se o numero de células (g/mL) desta reação
que resultou na tabela 2:

Tabela 2. Absorbância corrigida, numero de células e velocidade máxima de reação, com

100rpm

Tempo (h) Abs T celulas g/mL diluiçao μmax μmax medio

0 0,18381 0,076223493 0,22867048 -
2 0,169471 0,071239794 0,213719383 -0,03381
4 0,316961 0,12250125 0,490005002 0,414876
5 0,295544 0,115057729 0,575288645 -
6 0,371828 0,14157084 0,849425042 0,389688
7 0,518606 0,192585139 1,155510832 0,307738
0,176795
8 0,494965 0,184368501 1,106211007 -
10 0,58052 0,214104099 1,284624594 -
12 0,543113 0,201102635 2,011026347 0,224089
14 0,435769 0,163794395 2,293121523 0,065634
16 0,438424 0,16471713 2,470756956 0,037305
20 0,397716 0,150568438 2,559663442 0,008838
Tabela 3. Absorbância corrigida, numero de células e velocidade máxima de reação, com
300rpm

Tempo (h) Abs total celulas g/mL Diluição μmax μmax médio
0 0,18381 0,076223493 0,22867 -
2 0,211578 0,085874389 0,257623 0,059608
4 0,316961 0,12250125 0,490005 -
5 0,30012 0,116648296 0,466593 -
6 0,387638 0,147066008 1,029462 0,791334
7 0,532639 0,197462318 1,579699 0,428198
0,209764
8 0,579511 0,21375344 2,137534 0,302419
10 0,687263 0,251203686 3,014444 0,171881
12 0,715564 0,261039744 3,654556 0,09628
14 0,541847 0,200662653 4,013253 0,046814
16 0,531479 0,197059265 3,941185 -0,00906
20 0,53239 0,19737604 3,947521 0,000402

E com as tabelas construíram-se os gráficos a seguir:

100
0,45
0,4
0,35
0,3
μmax

0,25
0,2
0,15 100
0,1
0,05
0
0 5 10 15 20 25
tempo (h)

Figura 2. Gráfico da curva de crescimento das células em 100 rmp

 300
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
μmax

0,4
300
0,3
0,2
0,1
0
-0,1 0 5 10 15 20
tempo (h)

Figura 3. Curva de crescimento das células pelo tempo em 300 rpm

Com estes valores das tabelas se calculou-se os tempos de geração e o numero de

células.

Para 100 rpm

Para 300 rpm

E calculou-se o tempo de geração com os valores de n obtidos:

Para 100 rpm

Para 300 rpm

 Pode-se notar que no processo a 100 rpm teve maior geração de células com o tempo do
que o de 300 rpm, porem a velocidade máxima em 300 rpm foi maior que de 100 rpm.

5. Conclusão.
Concluiu-se que o melhor tratamento para as células depende do que se deseja pois o de
100 rpm obteve-se um alto numero de geração de células do que 300 rpm, porem a velocidade
máxima da reação de 300 rpm foi maior. Se for maior produto em menos tempo seria melhor
100 rpm e se fosse maior tempo para chegar na velocidade máxima o melhor seria a 300 rpm.

6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

ASSIS NETO, E. F.; CRUZ, J. M. P.; BRAGA, A. C. C.; SOUZA, J. H. P. Elaboração de

bebida alcoólica fermentada de jaca (Artocarpus heterophyllus Lam.). Revista Brasileira de
Tecnologia Agroindustrial, Ponta Grossa, v. 4, n. 2, p. 186-197, 2010.

NECKEL E. V. P. ZAMBAO P. H. PESCADOR A. Ajuste linear simples para curva de

calibração do fósforo e nitrogênio. Revista eletrônica de alto vale do Itajaí. v. 2. n.1. 2013.

NUNES, G. D. G.; TOMÉ, P. H. F.; FRAGIORGE, E. J. Elaboração e análise sensorial do

vinho de caqui (Diospyrus kaki L.). cv. Fuyu. FAZU em Revista, v. 6, n. 1, p. 44-49, 2009.

SKOOG D.A. WEST D. M. HOLLER F. J. CROUCH S.R. Fundamentos de Química

Analítica. ed. 8ª. cap. 24. pg.670-702. Thomson, São Paulo-SP. 2006.